Анализ и стандартизация хондроитинсульфата натрия тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 15.00.02, кандидат фармацевтических наук Шкарина, Татьяна Николаевна

• Шкарина, Татьяна Николаевна
• кандидат фармацевтических наук
• 2009

Оглавление диссертации кандидат фармацевтических наук Шкарина, Татьяна Николаевна

Сокращения и обозначения.

Введение.

Глава I. Обзор литературы.10

1.1. Гликозаминогликаны, их строение и использование в меди- 10-20 цинской практике.

1.2. Хондроитинсульфат натрия. Методы его анализа.21

Выводы из главы 1.48

Глава II. Объекты исследования, используемое в работе оборудование и анализ требований фармакопей к качеству хондроитин- 50-65 сульфата натрия.

2.1. Объекты исследования.

2.2. Используемое оборудование и методики анализа.

2.2.1. Используемое оборудование.

2.2.2. Используемые методики анализа.

2.3. Сравнительные требования фармакопейных статей к качеству хондроитинсульфата натрия.

Выводы из главы II.

Глава III. Оценка качества хондроитинсульфата натрия по внешнему виду и растворимости.66

Выводы из главы III.

Глава IV. Подтверждение подлинности хондроитинсульфата на- 70трия.

4.1.ИК-спектроскопи я.

4.2. Поляриметрия.

4.3. Вискозиметрия.

4.4. Гравиметрический метод (Определение серы).

4.5. Электрофорез.

4.6. Качественные реакции.

4.6.1. Уроновые кислоты.

4.6.2. Натрий.

Выводы из главы IV.97

Глава V. Показатели чистоты.99

5.1. Азотсодержащие примеси (белок, азот).

5.2. Сульфатная зола.

5.3. Тяжелые металлы.

5.4. рН растворов, Сульфаты, Хлориды.

5.5. Прозрачность и цветность растворов.

5.6. Потеря в массе при высушивании.

5.7. Остаточные органические растворители.

5.8. Посторонние примеси.

Выводы из главы V.

VI. Количественное определение хондроитинсульфата натрия.112

Выводы из главы VI.119

VII. ИК-спектроскопия НПВО в лекарственных формах на 121 основе хондроитинсульфата натрия.

Выводы из главы VII.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Анализ и стандартизация хондроитинсульфата натрия»

Актуальность исследования

Создание качественных, эффективных и безопасных лекарственных средств - основная задача фармации, и в условиях современного развития мировой экономики одним из направлений решения указанной задачи является гармонизация требований фармакопей к качеству субстанций и лекарственных препаратов.

Хондроитинсульфат натрия (ХСН), представитель группы гликозами-ногликанов, широко используется для лечения различных видов остеоартроза и остеохондрозов позвоночника. Его источником являются, хрящевая ткань крупного рогатого^ скота (КРС), свиней, а также куриный и акулий хрящи. В медицинской практике ХСН применяют в виде таблеток, капсул, мазей, линиментов, растворов .и лиофилизированных форм. На территории Российской Федерации зарегистрировано около 65 наименований препаратов на его основе.

Монографии на ХСН включены в ведущие зарубежные фармакопеи (с 2002 г. в USP и с 2006 г. в Eur.Ph., Br.Ph.). В России с 1996-г. осуществляется выпуск ХСН из трахей КРС, контроль его качества проводился по ФС 423741-99, срок действия' которой истёк, и согласно частным НД фирм-производителей. Сравнительный анализ отечественных и зарубежных фармакопейных статей показал, что в них указаны разные источники получения ХСН, и они различаются по показателям качества, методикам анализа, нормам допустимых отклонений и нуждаются в гармонизации.

Таким образом, разработка фармакопейного стандарта качества на субстанцию ХСН, гармонизированного с требованиями зарубежных фармакопей, является актуальной проблемой отечественной фармацевтической науки на современном этапе ее развития.

Цель работы, основные задачи исследования

Целью настоящего исследования является разработка стандарта качества на субстанцию ХСН, гармонизированного с требованиями зарубежных фармакопей. Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

- провести сравнительный анализ уровня требований отечественных и зарубежных нормативных документов к качеству субстанций ХСН;

- изучить требования фармакопей и фактические данные по внешнему виду и растворимости ХСН;

- изучить методы и методики анализа, используемые для подтверждения подлинности, определения чистоты и выбрать оптимальные;

- провести сравнительный анализ фармакопейных методик количественного определения ХСН с помощью процедуры валидации;

- изучить возможность использования ИК спектроскопии нарушенного полного внутреннего отражения (НПВО) в анализе субстанций ХСН и его лекарственных форм.

Научная новизна исследования

Проведено изучение ХСН из разных источников - хрящевой ткани наземных животных и акул с учетом современных требований фармацевтической науки.

Впервые использована ИК-спектроскопия НПВО для идентификации разных типов гликозаминогликанов, в том числе ХСН из разных источников, а также ХСН в ряде его лекарственных форм. Изучены спектральные характеристики ХСН из хрящей КРС, свиней, птиц и акул в ближней ИК-области.

На основе анализа свойств ХСН было предложено для подтверждения его подлинности использовать комплекс методов: анализ функциональных групп и связанных сульфатов (ИК-спектроскопия), натрия (реакция с калия антимонатом), определение молекулярной массы (вискозиметрия), электро-форетической подвижности (электрофорез в геле), оптического вращения (поляриметр ия).

В проект ФС для характеристики чистоты субстанций ХСН введены новые показатели: свободные сульфаты и хлориды, содержание белка и примеси родственных соединений.

С помощью процедуры валидации установлено, что спектрофотомет-рическая методика количественного определения ХСН по методу Дише (ФС), и турбидиметрическая методика титрования раствором цетилпириди-ния хлорида (Br.Ph., Eur.Ph., USP) не являются гармонизированными.

Показана применимость отечественного государственного стандартного образца (ГСО) для количественного определения ХСН методом турбиди-метрического титрования.

Практическая значимость исследования

Показана возможность применения метода ИК-спектроскопии НПВО для подтверждения подлинности ХСН из различных источников и в его лекарственных формах — капсулах и лиофилизатах для приготовления растворов для внутримышечного введения. Разработанные на основе НПВО методики анализа ХСН являются экспрессными, объективными и экономичными по сравнению с используемой в настоящее время методикой ИК-спектроскопии пропускания в дисках калия бромида.

С помощью процедуры валидации проведён выбор метода количественного определения ХСН и установлена применимость отечественного стандартного образца для количественного определения методом турбиди-метрического титрования раствором цетилпиридиния хлорида.

На основании проведенных исследований составлен проект ФС «Хон-дроитинсульфат натрия» для ГФ XII изд., гармонизированный с требованиями зарубежных фармакопей.

Положения, выносимые на защиту:

1. Результаты исследований ХСН из различных источников по внешнему виду и растворимости.

2. Выбор методик подтверждения подлинности ХСН.

3. Результаты исследований по использованию метода НПВО для подтверждения подлинности ХСН в субстанциях и в ряде лекарственных форм на его основе.

-94. Результаты сравнения и выбора* методик определения» чистоты субстанций ХСН, в том числе, результаты исследования примесей родственных гликозаминогликанов в субстанциях ХСН с помощью электрофоретических методов (электрофорез в агарозном геле, на плёнках из ацетата целлюлозы, капиллярный электрофорез) и определения содержания белка в образцах ХСН.

5. Результаты сравнения методик количественного определения ХСН с использованием процедуры валидации.

6. Результаты исследований применимости отечественного ГСО ХСН для количественного определения методом турбидиметрического титрования.

Апробация работы

Основные положения диссертации доложены на научной конференции ПГФА (Пятигорск, 2007 г.), научно-практической' конференции ФГУ «НЦЭСМП» «Современные методы стандартизации и<контроля качества лекарственных средств» (Москва, 2006г.), научной конференции'ИСКЛС ФГУ «НЦЭСМП» (Москва, 2006 г.).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 10 работ, из них 1 - в журнале, рекомендованном ВАК.

Связь исследований с проблемным планом'фармацевтических наук. Диссертация выполнена в соответствии с комплексной темой ИКЛС ФГУ «НЦЭСМП» «Разработка принципов и методов контроля* различных групп биотехнологических препаратов».

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 149 страницах машинописного текста (без приложения), состоит из введения, обзора литературы, 7 глав экспериментальной части, общих выводов, списка литературы, приложения. Диссертационная работа проиллюстрирована 10 таблицами, 1 схемой и 44 рисунками. Список литературы включает 178 источник, в том числе 44 отечественных и 134 на иностранном языке.

Заключение диссертации по теме «Фармацевтическая химия и фармакогнозия», Шкарина, Татьяна Николаевна

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ

1. Установлена необходимость в разработке отечественного фармакопейного стандарта качества на хондроитинсульфат натрия, гармонизированного с требованиями зарубежных фармакопей.

2. Выявлено наличие на фармацевтическом рынке субстанций хондроитинсульфата натрия, различающихся по оттенку цвета, форме и размерам частиц порошка.

3. Установлено, что для подтверждения подлинности хондроитинсульфата натрия следует использовать комплексный подход, учитывающий его сложную структуру: анализ функциональных групп и связанных сульфатов (ИК-спектроскопия), натрия (реакция с калия антимонатом), определение молекулярной массы (вискозиметрия), электрофоретической подвижности (электрофорез в агарозном геле), оптического вращения (поляриметрия).

4. Показана возможность использования метода НПВО для подтверждения подлинности гликозаминогликанов, в том числе хондроитинсульфата натрия, выделенного из разных источников и в ряде его лекарственных форм.

5. Сравнительный анализ требований зарубежных фармакопейных статей и экспериментальные исследования показали необходимость введения в проект ФС дополнительных показателей чистоты хондроитинсульфата натрия: свободные сульфаты и хлориды, содержание белка и родственных соединений. Определено содержание белка методом Лоури в субстанциях хондроитинсульфата натрия и установлены допустимые нормы.

6. С помощью процедуры валидации установлено, что спектрофото-метрическая методика количественного определения хондроитинсульфата натрия по методу Дише (ФС), и турбидиметрическая методика титрования раствором цетилпиридиния хлорида (BR.Ph., Eur.Ph., USP) не являются гармонизированными. Для количественного определения содержания хондроитинсульфата натрия предложено использовать методику турбидиметрическо-го титрования раствором цетилпиридиния хлорида с двумя альтернативными способами регистрации точки эквивалентности: фотометрическим и визуальным. Показана целесообразность использования калибровочной кривой и ограничения скорости титрования при выполнении методики турбидиметриче-ского титрования.

7. Установлена применимость отечественного государственного стандартного образца хондроитинсульфата натрия для количественного определения методом турбидиметрического титрования.

8. На основании проведенных исследований составлен проект ФС «Хондроитинсульфат натрия» для ГФ XII изд., гармонизированный с требованиями зарубежных фармакопей.

Список литературы диссертационного исследования кандидат фармацевтических наук Шкарина, Татьяна Николаевна, 2009 год

1. Алексеева Л.И., Чичасова Н.В., Мендель О.И. / Результаты применения препарата Артра при гонартрозе. // Научно-практическая ревматология. 2004. - № 2. - С. 45-47.

2. Арзамасцев А. П., Садчикова Н. П., Харитонов Ю. Я. / Валидация аналитических методов // Фармация. — 2006. — № 4 . — С. 8-12.

3. Арзамасцев А. П., Садчикова Н. П., Титова А.В. / Современное состояние проблемы применения ИК-спектроскопии в фармацевтическом анализе лекарственных средств // Химико-фармацевтический журнал 2008. — Т. 42.-№ 8.-С. 26-30.

4. Баграташвили Н.В., Игнатьева Н.Ю., Лунин В. В., Свиридов А. П., Харланов А. Н. / Исследование системы хондроитинсульфат-вода методом ИК-фурье-спектроскопии // Вестник Московского Университета. Химия. -2001. Т.42. - № 6. - С. 373-375.

5. Багров С.Н., Ларионов Е.В., Панасюк А.Ф. / Способ выделения сульфатированных гликозаминогликанов из роговицы. // Патент RU 2056851 от 27.03.1996.

6. Беленький А.А., Кузин А.В. / Локальная инъекционная терапия при остеоартрозе // Consilium Medicum 2003. - Т. 5 - № 2. - С. 106-108.

7. Бычков С.М., Кузьмина С.А. / Биологическая роль гиалуроновой кислоты.//Вопросы медицинской химии. — 1986. — Т.32. № 1.— С. 19-32.

8. Васюков С.Е., Кирьянов Н.А., Донецкий И.А., Животова Г.П. / Средство для лечения болезней суставов, обладающее противовоспалительным и обезболивающим действием. // Патент RU 2021811 от 30.10.20041.

9. Васюков С.Е., Нестерова Е.И., Александрова Т.Ю., Маслова О.Ю., Есенкова Н.Е. / Средство для лечения болезней^ суставов. // Патент RU 2282437 от 27/08/2006.

10. Гааль Э:, Медьеши Г., Верецкеи JI. / Электрофорез в разделении биологических макромолекул. // Ml: Мир. 1982. - С. 395-397

11. Голубев Г., Кригштейн О. / Оценка доказательств эффективности средств, претендующих называться структурно-модифицирующими'препаратами. // Международный журнал медицинской практики. 2005. - № 2.- С. 3852.

12. Государственный реестр лекарственных средств. Научный центр экспертизы средств медицинского применения Минздрава России. // 8-е изд. -М. -2004. Т.Н. - С. 1615-1617.

13. Иванкин А.Н., Васюков С.Е., Панов В.П. / Получение, свойства и применение хондроитинсульфатов. // Химико-фармацевтический журнал. — 1985.- №3.- С. 192-202.

14. Младенцев А.Л., Иксанов P.M., Рудько А.И., Ерёмкина С.А. /Твёрдая лекарственная форма хондроитин сульфата. // Патент 2254862 от 24.05.2004.

15. Оганесян О.В., Семёнова Л.А., Хапилин А.П., Косов И.С., Салтыкова В.Г. / Применение препаратов гиалуроновой кислоты для лечения остеоартроза.// Вестник травматологии и ортопедии 2007. - № 2. - С. 41-46.

16. Панасюк А.Ф., Ларионов Е.В. / Хондроитинсульфатьг и их роль в обмене хондроцитов и межклеточного матрикса хрящевой ткани. // Научно-практическая ревматология. 2000. - № 2. - С.46-55.

17. Панасюк А.Ф., Ларионов Е.В. / Способ выделения сульфатирован-ных гликозаминогликанов из биологических тканей. // Патент RU 2273486 от1004.2006.

18. Петренко А.Е., Багров; С.Н.,,Ронкина Т.И., Малышев В.Б. / Ирригационный раствор для офтальмологии;// Патент RU 2 288 702 от 13.07.2005.

19. Полунина Е.Е:, Знаменский Ю.В., Касаткин С.А. / «Способ выделения хондроитин сульфата из животных тканей» // Патент RU 2004104617 от 18.02.2004.

20. Титова A.B*. / Вспомогательные вещества, используемые в производстве лекарственных препаратов^ Стандартизация и методы контроля. // Дис. на соиск. учёной степени доктора фарм.наук. — М. — 2006. 312с.

21. Федоров С.Н.; Багров С.Н.; Ронкина Т.И.; Маклакова И.А.; Золото-ревский А.В./ Способ активации пролиферации эндотелия роговицы с помощью раствора «Глекомен» // Патент RU 2151580 от 28.10.1999.

22. Чичасова Н.В. / Место медленнодействующих препаратов в рациональной терапии деформирующего остеоартроза. // Consilium Medicum. -2005. Т. 7. - № 8 - С. 634-638.

23. Чичасова Н.В'. / Патогенетическое лечение остеоартроза // Consilium Medicum. 2007. - Т. 9. - № 8 - С. 112-117.

24. Шостак Н.А. / Остеоартроз: основы терапии // Consilium Medicum. — 2007-Т. 9.- №8 С. 108-111.

25. Юсупов В.Г., Пушкарев М.А., Зинова М.Д., Петухов В.В., Еремеева Л.И. / Способ получения инъекционной формы препарата хондроитинсульфата "хондролон" // Патент РФ 2080857 от 07.10.1997

26. Adebowale А.О., Сох D.S., Liang Z., Eddington N.D. /Analysis of glucosamine and chondroitin sulfate content in marketed products and the Caco-2 permeability of chondroitin sulfate raw materials. // J. Amer. Nutr. Assoc. 2000. -Vol. 3.-No 1.-P. 37-44.

27. Akiyama H., Sakai S., Linhardt R.J., Goda Y., Toshihiko Toida Т., Mai-tani T. / Chondroitin sulphate structure affects its immunological activities on murine splenocytes sensitized with ovalbumin. // Biochem. J. 2004. - Vol. 382. — P. 269-278.

28. Analysis of chondroitin in supplements/ Statutory analysis government chemist programme Ad Hoc Project 3. 2006. Prepared by B. Stuart. Approved by M. Walker. www.governmentchemist.org.uk/docGallery/69.PDF.

29. Bali J.P., Cousse H, Neuzil E. / Biochemical basis of the pharmacologic action of chondroitin sulfates on the1 osteoarticular system. // Semin Arthritis Rheum.-2001,-Vol. 1. P. 58-68.

30. Barnhill J.G., Fye C.L., Williams D.W., Reda D.J., Harris C.L., Clegg D.O. / Chondroitin product selection' for the glucosamine/chondroitin arthritis intervention trial. J. American Pharmfcists Assoc. - 2006. - Vol. 46. - No 1 - P. 14-24.

31. Barroso В., Didraga M., Bischoff R. / Analysis of proteoglycans derived sulphated disaccharides by liquid chromatography/mass spectrometry // Journal of Chromatography A. 2005. - Vol. 1080. - No 1. - P. 43-48.

32. British Pharmacopoeia 2007. Электронный ресурс. London: 2007. -Электронный оптический диск (CD-ROM).

33. Cappeletti R., Del Rosso M., Chiarugi V.P. A new electrophoretic method for the complete separation of all known animal glycoaminoglicans in a mo-nodimensional run // Anal. Biochemistry. 1979. - Vol. 99 - P. 311-315/

34. Carney S.L. Proteoglycans: / In Carbohydrate analysis. A practical approach. Chaplin M. F., Kennedy J. F. Eds. 1994 - Oxford. Washington. - I.R.L . Press- P. 97-141

35. Cho S.Y., Sim J-S., Jeong C. S., Chang S.Y., Choi D.W.,Toida Т., Kim Y.S. / Effects of low molecular weight chondroitin sulfate on type II collagen-induced arthritis in DBA/1 J Mice // Biol. Phann. Bull. 2004. - Vol. 27. - No 1. -P. 47-51.

36. Choi D.W., Kim M.J., Kim H.S., Chang S.H., Jung G.S., Shin K.Y., Chang S.Y. / A size-exclusion HPLC method for the determination of sodium chondroitin sulfate in pharmaceutical preparations. // J. Pharm. Biomed. Anal. — 2003.-V. 31.-P. 1229-1236.

37. Chondroitin sulfate: structure, role and pharmacological activity. Volpi N. Eds. 2006. - San Diego.: Elsevier. - P.

38. Conte A, de Bernardi M, Palmieri L, Lualdi P, Mautone G, Ronca G. / Metabolic fate of exogenous chondroitin sulfate in man. // Arzneimittelforschung. 1991С-Vol. 41. -No>7. -P. 768-772!

39. Deakin J.A., Lyon M. / A simplified and sensitive fluorescent method for disaccharideanalysis of both heparan sulphate;and chondroitin/dermatan sulphates from biological samples // Glycobiology. 2008. - Vol.18. - No 6. - P.483-491.

40. Dische Z. / A specific color reaction for glucuronic acid. // J.Biol Chemistry. 1947.-Vol. 171.-No 2.-P. 725-730.

41. Dische Z. / A new specific color reaction of hexuronic acids. // J.Biol Chemistry. 1946.-Vol. 167.-P. 189-198.

42. Farndale R.W., Sayers C.A., Barret AJ. / A direct spectrophotometric microassay for sulfated glycosaminoglicans in cartilage cultures .// Connect Tissue Res. 1982. - Vol. 9. - No 6. - P. 247-248.

43. Foot M, Mulholland M. / Classification of chondroitin sulfate A, chon-droitin sulfate C, glucosamine hydrochloride and glucosamine 6 sulfate using chemometric techniques. // J. Pharmaceutical and Biomedical Analysis. — 2005. — Vol. 38.-P. 397-407.

44. Funderburgh J.L. / MINI REVIEW. Keratan sulfate: structure, biosynthesis, and function. // Glycobiology. -2000:- Vol.10. No 10. - P. 951-958.

45. Hamer G.K., Perlin A.S. / A 13C-n.m.r. spectral* study of chondroitin'sulfates А, В and C: evidence of heterogeneity. // Carbohydrate Research 1976 -Vol. 49.-P. 37-48.

46. Glycoprotein and Proteoglycan Techniques. / Beeley J.G. Eds -Amsterdam-N.Y.-Oxford.: Elsevier. 1985. - 462p.

47. Gohel M.D.I., Shumb D.'K.Y., Tame P.C: / Electrophoretic separation and characterization of urinary glycosaminoglycans and their roles in urolithiasis. // Carbohydrate Research. 2007. - Vol. 342. - P. 79-86.

48. Imanari Т., Washio Y., Huang Y., Toyoda H., Suzuki A., Toida T. / Oral absorption and- clearance of partially depolymerized. fucosyl chondroitin sulfate from sea cucumber. // Thromb Res: 1999. - Vol. 93. — P: 129-135.

49. Ishidate Jr.M., Sofuni Т., Yoshikawa K., Hayashi M., Nohmi T, Sawada M. and Matsuoka A. / Primary mutagenicity screening-of food additives currently used in Japan. // Food. Chem. Toxicol. 1984. - Vol. 22. - P. 623-636.

50. IUPAC-IUB Joint Commission on Biochemical Nomenclature (JCBN) Nomenclature of glycoproteins, glycopeptides and peptidoglycans. // Eur. J. Bio-chem. 1986. - Vol. 159. - P. 1-6.

51. Iwafune M., Kakizaki I., Nakazawa H:, Nukatsuka I., Endo M., Takagaki K. / A glycomic approarch to proteoglycan with a two-dimentional polysaccharide chain map. // Analytical Biochemistry. 2004. - Vol. 325. - P. 35-40.

52. Ji D:, Roman M., Zhou J., Hildreth J./ Determination of chondroitin sulfate content in raw materials and dietary supplements by high-performance liquidchromatography with ultraviolet detection after enzymatic hydrolysis: single>

53. Karousou E.G., Viola M., Vigetti D., Genasetti A., Rizzi M., Clerici M., Bartolini В., De Luca G., Passi A. / Analysis of glycosaminoglycans by electro-phoretic approach // Current Pharmaceutical Analysis. — 2008. Vol. 4. — No 2. -P. 78-89.

54. Kelly G.S. / The role of glucosamine sulfate and chondroitin sulfates in the treatment of degenerative joint disease. // Alternative Medicine Review.-1998. -Vol.3. -No 1.-P. 27-39.

55. Lee G.J., Evans J.E., Tieckelmann H. / Rapid and sensitive determination of enzymatic degradation products of isomeric; chondroitin sulfates by high-performance liquid; chromatography. // J. Chromatography. 1978'; - Vol; 146. -No 3. — P. 439-448.

56. Lowry O.H., Rosebrough N.J., Farr A,L., Randall R.J. Protein measurement with the Folin phenol reagent. // Journal of Biological Chemistry. 1951. -Vol. 193.-P. 267-275.

57. Luo X.M., Fosmire G.J., Leach R.M. / Chichen keel cartilage as a source of chondroitin sulfate //Poultry Science 20021 - Vol. 81.-No 7.-P. 1086-1089.

58. Mao W., Thanawiroon C., Linhardt R.J. / Capillary electrophoresis for the analysis of glycosaminoglycans and glycosaminoglycan-derived oligosaccharides // Biomedical Chromatography. 2002. - Vol. 16. - P. 77-94.

59. Mathews M.B. / The molecular* weight of sodium chondroitin sulfate by light scattering // Archives of Biochemistry and Biophysics. — 1956. — V.61. — No 2.-P. 367-377

60. McAlindon Т.Е., LaValley M.P., Gulin J.P., Felson D.T . / Glucosamine and chondroitin for treatment of osteoarthritis: a systematic quality assessment and meta-analysis. // J. Amer. Nutr. Assoc. 2000. - Vol. 283: - P. 1469-1475.

61. Miller M.J., Costello C.E., Malmstrom A., Zaia J. / A tandem mass spectrometry approach to determination of chondroitin/dermatan-sulfate oligosaccharide glycoforms. // Glycobiology. 2006. - V.16. -No.6. -P.502-513.

62. Mucci A., Schenetti L., Volpi N. / lH- and l3C-nuclear magnetic resonance identification and characterization of components of chondroitin sulfates of various origin. // Carbohydrate Polym. 2000. - Vol. 41. - P. 37^5.

63. Murata K, Yokoyama Y. / A high-performance liquid chromatography for constituent disaccharides of chondroitin sulfate and dermatan sulfate isomers. Anal. Biochem.- 1985.-Vol. 146.-No 2.- P. 327-335.

64. Nakano Т., Ikawa N., Ozimek L. / An economical method to extract chondroitin sulphate-peptide from bovine nasal cartilage // Canadian Agricultural Engineering. 2000. - Vol. 42. - No 4. - P. 205-207.

65. NSF International. Methods. Total Chondroitin Sulfate Sodium by Cetyl-pyridinium Chloride Method. INA Method 120.002. http ://www.nsf. org/business/ina/cs. asp?program=INA.

66. Okamoto H., Nakajima Т., Ito Y., Shimada K., Yamato S. / Development of a novel analytical method for determination of chondroitin sulfate using an in-capillary enzyme reaction. // Journal of Chromatography A. 2004. - Vol. 1035 — P. 137-144.

67. Omata Т., Itokazu Y., Inoue N., Segawa Y. / Effects of chondroitin sul-fate-C on articular cartilage destruction in murine collagen-induced arthritis. // Arzneim-Forschung. 2000. - Vol. 50. - P. 148-153.

68. Palmieri L., Conte A., Giovanni L., Lualdi, P. and Ronca, G. / Metabolic fate of exogenous chondroitin sulfate in the experimental animal. // Arzneim-Fosch/Drug. Res. 1990. - Vol. 40. - P. 319-323.

69. Partridge S. M., Davis H. F., Adair G.S. / The chemistry of connective tissues. 6. The constitution of the chondroitin sulphate-protein complex in cartilage. // Biochem. J. 1961. - Vol.79. - No 1. - P. 15-26.

70. Plaas A. H. K., Hascall V.C.,.Midura R.J. / Ion exchange HPLC microanalysis of chondroitin sulfate: quantitative derivatization of chondroitin lyase digestion products with 2-aminopyridine. // Glycobiology — 1996. V.6. - No 8. -P. 823-829.

71. Pospichalt R-., Nesmerak K., Rychlovsl^ P:;, Nemkova I.,/ Determinationt-. of Chondroitin Sulfate by ThiazineDyes using Flow Injection Analysis with Spec-trophotometric Detection. // Analytical Letters. 2007. - Vol. 40. - No 6. - P. 1167-1175.

72. Sandya S., Sudhakaran P.R. / Effect of glycosaminogly cans on matrix metalloproteinases in type II collagen-induced experimental arthritis. // Experimental Biology andMedicine. 2007. - Vol. 232. - P. 629-637.

73. Sarzi-Puttini P., Cimmino MA, Scarpa R, Caporali R, ParazziniF, Zani-nelli A, Atzeni F, Canesi B. / Osteoarthritis: an overview of the disease and its treatment strategies. / Seminars in Arthritis and Rheumatism. 2005. - Vol. 35. -No l.-P. 1-10.

74. Setnicar I., Rovati L.C. / Absorption, distribution, metabolism and excretion of glucosamine sulfate. A review. // Arzneimittel-Forsch. — 2001. — Vol. 51 -P. 699-672.

75. Shinomiya K., Kabasawa Y., Toida Т., ImanariT., Ito Y. /Separation of chondroitin sulfate and hyaluronic acid* fragments by centrifugal precipitation chromatography. // Journal of Chromatography A. 200L - Vol. 922. - P. 365369.

76. Sigma-Aldrich. Sodium chondroitin sulfate. Material Data Sheet. 2004. -Электронный ресурс: http://www. sigma-aldrich/com:.

77. Tanford C., Marler E., Jury E., Davidson E.A. / Determination of the molecular weight distribution of chondroitin sulfate В by sedimentation equilibrium. //J. of Biol. Chemistiy.- 1964.-V. 239. No 12. - P. 4034-4040.

78. Toida Т., Shima M., Azumaya S., Maruyama Т., Toyoda H., Imanari Т., Linhardt J. / Detection-of glycosaminoglycans as a copper(II) complex in high-performance liquid'chromatography // Journal of Chromatography A. — 1997 — Vol. 787. No 1-2.-P. 266-270.

79. Toida Т., Toyoda H., Imanari T. / High-Resolution proton nuclear magnetic resonance studies on chondroitin sulfates. // Analytical Sciences. — 1993 -Vol. 9-P.53-58.

80. Tyler Т., Khandelwal В., Norden D., Rolle F.R. / Determination of chondroitin sulfate in raw materials by liquid chromatography. // J. of AOAC International. 2002. - Vol. 85. - No 3. - P. 567-571.

81. Uebelhart D., Thonar E.J., Delmas P.D., Chantraine A., Vignon E. / Effects of oral chondroitin sulfate on the progression of knee osteoarthritis: a pilot study. // Osteoarthritis Cartilage. 1998. - Vol. 6., Suppl. A. - P. 9-46.-147- ■ i ■ . V ■ : . <

82. Uebelhart D; / Clinical review of chondroitin sulfate in?osteoarthritis.// Osteoarthritis and Cartilage. 2008. - Vol. 16., Suppl. 3. - P. S19-S21. ;

83. United' States Pharmacopeia 30 and National Formulary 25. Электронный ресурс. — Электронный оптический диск (CD-ROM).

84. Validation of analytical procedures: methodology. Q2B. Recommended for Adoption at Step 4 of the ICH Process on 6 November 1996 by the ICH Steering Committee

85. Volpi N. / Disaccharide analysis and; molecular mass determination to microgram level of single sulfated glycosaminoglycan species in mixtures following agarose-gel electrophoresis. // AnaUBiochem; — 19991- Vol: 273. P. 229239. ' '

86. Volpi N. / Oral bioavailability of chondroitin sulfate (Condrosulf®) and its constituents in healthy male volunteers; // Osteoarth. Cartilage. 2002. - Vol. 10.-P. 768-777.

87. Volpi N. / Oral absorption and bioavailability of ichthyic origin chondroitin sulfate in healthy male volunteers. // Osteoarth. Cartilage. 2003. — Vol. 11. -P: 433-441.

88. Volpi N. / Disaccharide mapping'of chondroitin sulfate of different origins by high-performance capillary electrophoresis and high-performance liquid chromatography. // Carbohydr. Polym. 2004. - Vol. 55. - P. 273-281.

89. Volpi N. / Therapeutic applications of glycosaminoglycans. // Curr. Med. Chem. 2006. - Vol. 13.-P. 1799-1810.

90. Volpi N. / Advances in chondroitin sulfate analysis: application in physiological and pathological states of connective tissue and during pharmacological treatment of osteoarthritis. // Curr. Pharm. Des. 2006. - Vol. 12. P. 639-658.

91. Volpi N. / Analytical aspects of pharmaceutical grade chondroitin sulfates. // J. Pharm. Sci. 2007. - Vol. 96. - P. 3168-3180.

92. Volpi N., BolognanLL. / Glycosaminoglycans and proteins: different behaviour in size exclusion-high performance liquid chromatography. // J. Chromatography. 1993. - Vol. 630 - P. 390-396.

93. Volpi N., Maccari F. / Detection of submicrogram quantities of glycosaminoglycans on agarose-gels by sequential staining with toluidine blue and Stains-All. // Electrophoresis. 2002. - Vol. 23. - P. 4060-4066.

94. Volpi N, Maccari F. / Electrophoretic approaches to the analysis of complex polysaccharides. // J. Chromatography B. 2006 - Vol. 834. - P. 1-13.

95. Volpi N., Mucci A. / Stability studies of chondroitin sulfate. // Carbohydrate Res. 1999 - Vol. 315. - P. 345-349.

96. Volpi N, Maccari F., Titze J. / Simultaneous detection of submicrogram quantities of hyaluronic acid and dermatan sulfate on agarose-gel by sequential staining with toluidine blue and Stains-All. // J. Chromatography B. 2005. - Vol. 820.-P. 131-135.

97. Volpi N., Maccari F. / Quantitative and Qualitative Evaluation of Chondroitin Sulfate in Dietary Supplements// Food Anal.Methods, 2008. - Vol. 1-. -No 3. - P. 195-204.

98. Zaia J. / Mass spectrometry of oligosaccharides. // Mass Spectrometry Reviews. 2004. - Vol. 23.-No 3. - P. 161-227.

99. Zaia J. / Principles of Mass Spectrometry of Glycosaminoglycans. // Journal of Biomacromolecular Mass Spectrometry. 2005. - Vol. 1. - P. 3-36.

100. Zebrower M., Kieras F.J., Heaney-Kieras J. / High pressure liquid chromatographic identification of hyaluronic acid and chondroitin sulphate disaccha-rides // Glycobiology. -1991. Vol. 1. - No 3. - . 271-276.

101. МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ И СОЦИАЛЬНОГО РАЗВИТИЯ1. РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

102. ФЕДЕРАЛЬНАЯ СЛУЖБА ПО НАДЗОРУ В СФЕРЕ ЗДРАВООХРАНЕНИЯ И1. СОЦИАЛЬНОГО РАЗВИТИЯ1. ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ

103. Хондроитинсульфат натрия ФС 421. Взамен ФС 42-3741-991. C02Na

104. Хондроитинсульфат А Хондроитинсульфат С1. R1 = SO;jNa R2=Hr!=h1. R = SC>3Na1. C14 Hj9 NO14 SNa2 )„m.m. (503,4) n1. ИЗДАНИЕ ОФИЦИАЛЬНОЕ1. ПЕРЕПЕЧАТКА ВОСПРЕЩЕНА

105. Настоящая Фармакопейная статья распространяется на Хондроитинсульфат натрия, получаемый из хрящей крупного рогатого скота, свиней и птиц, применяемый для приготовления лекарственных форм.

106. Используют сырьё от животных из хозяйств, у которых отсутствуют заболевания вирусной и прионовой этиологии, патогенные для человека.

107. Содержит не менее 90,0 % и не более 115,0 % хондроитинсульфата натрия в пересчете на сухое вещество.

108. Описание. Белый или белый со слегка желтоватым оттенком порошок. Гигроскопичен.

109. Растворимость. Легко растворим или растворим в воде, 0,9 % растворе натрия хлорида, практически нерастворим в ацетоне и спирте 96 %.

110. Подлинность. Инфракрасный спектр субстанции, снятый в диске с калия бромидом в области от 4000 см"1 до 400 см"1 по положению полос поглощения должен соответствовать спектру государственного стандартного образца хондроитинсульфата натрия (ФС 42-0180-06).

111. Цветность раствора. Окраска раствора, полученного в испытании на Прозрачность раствора, должна быть не интенсивнее окраски эталонаy4.рН. От 5,5 до 7,5 (раствор, приготовленный в испытании на Прозрачность раствора, потенциометрически).

112. Удельное вращение. 1,0 г субстанции растворяют в свежепрокипя-ченной и охлажденной воде и разбавляют водой до 100 мл.

113. Характеристическая вязкость. Определение проводят одним из нижеописанных методов.

114. Исходный раствор препарата. 2,500 г (точная навеска в пересчёте на сухое вещество) субстанции помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяют в 50-70 мл 0,2 М раствора натрия хлорида и доводят объем раствора до метки тем же растворителем.

115. При экстраполяции приведённой вязкости к нулевой концентрации находят величину характеристической вязкости.

116. Капиллярный вискозиметр Уббелоде с висячим уровнем.

117. Раствор В. К 15,0 мл раствора А прибавляют 5,0 мл 0,2 М раствора натрия хлорида

118. Раствор С. К 10,0 мл раствора А прибавляют 10,0 мл 0,2 М раствора натрия хлорида

119. Раствор Д. К 5,0 мл раствора А прибавляют 15,0 мл 0,2 М раствора натрия хлорида.

120. Характеристическая вязкость должна быть от 0,01 до 0,15 м /кг.

121. Белок. Не более 3 % в пересчёте на сухое вещество (ОФС 42-001403. Метод Лоури (Метод А.).

122. Потеря в массе при высушивании. Около 0,2 г (точная навеска) субстанции сушат при температуре (100-105) °С в течение 4 часов. Потеря в массе не должна превышать 12,0 %.

123. Сульфатная зола и тяжелые металлы. Сульфатная зола из 1,0 г субстанции (точная навеска) должна быть от 20 % до 30,0 % и выдерживать испытание на тяжелые металлы (не более 0,002 % в субстанции).

124. Посторонние примеси. Испытуемый раствор. 150 мг субстанции помещают в мерную колбу вместимостью 5 мл, растворяют в воде, доводят водой до метки и перемешивают.

125. Стандартный раствор А. 150 мг стандартного образца хондроитинсульфата натрия помещают в мерную колбу вместимостью 5 мл, растворяют в воде, доводят водой до метки и перемешивают.

126. М буферный раствор бария ацетата, рН 5,0. 255,4 г бария ацетата растворяют в 900 мл воды. Доводят рН до 5,0 с помощью ледяной уксусной кислоты и доводят объём раствора водой до 1000 мл.

127. Окрашивающий раствор. 1,0 г толуидинового синего и 2,0 г натрия хлорида растворяют в 1000 мл раствора 0,01 М хлористоводородной кислоты. Фильтруют.

128. Интенсивность любой другой полосы на электрофореграмме испытуемого раствора не должна превышать интенсивность основной полосы стандартного раствора В. Содержание индивидуальной примеси не должно превышать 2 %.

129. Остаточные органические растворители. В соответствии с требованиями ОФС «Остаточные органические растворители».

130. Микробиологическая чистота. В соответствии с требованиями ОФС «Микробиологическая чистота».

131. Количественное определение. Испытуемый раствор. Около 0,100 г (точная навеска) предварительно высушенной до постоянной массы субстанции помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяют в воде и доводят объем раствора до метки.

132. Стандартный раствор 5 мл исходного стандартного раствора хондроитинсульфата натрия помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл и доводят объём до метки водой.

133. Стандартный раствор В. 10 мл исходного стандартного раствора хондроитинсульфата натрия помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл и доводят объём до метки водой.

134. Стандартный раствор С. 15 мл исходного стандартного раствора хондроитинсульфата натрия помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл и доводят объём до метки водой.

135. Количественное определение хондроитинсульфата натрия проводят одним из нижеописанных методов.

136. При приближении к точке эквивалентности скорость титрования должна составлять не более 0,05 мл/мин.

137. Параллельно проводят титрование 20 мл каждого из стандартных растворов А, В и С хондроитинсульфата натрия.

138. Содержание хондроитинсульфата натрия в субстанции в пересчете на сухое вещество определяют, используя калибровочный график, построенный по стандартным растворам хондроитинсульфата натрия.

139. Фотометрический способ регистрации точки эквивалентности.

140. Содержание хондроитинсульфата натрия в субстанции в пересчете на сухое вещество определяют, используя калибровочный график, построенный по стандартным растворам хондроитинсульфата натрия.

141. Пирогенность. Должен быть апирогенным. Тест-доза 20 мг препарата в 1 мл раствора натрия хлорида изотонического 0,9 % для инъекций на 1 кг массы животного.

142. Испытание проводят для субстанции, предназначенной для приготовления растворов для инъекций.

143. Токсичность. Должен быть нетоксичным. Тест-доза 30 мг препарата в 0,5 мл воды для инъекций на мышь.

144. Хранение. В сухом, защищенном от света месте при температуре не выше 20 °С.

145. Руководитель Центра Стандартизации лекарственных средств ФГУ «НЦЭСМП»профессор Багирова B.JI.»200 г.