АЛЛЕЛИ И ГЕНОТИПЫ ГЕНОВ ОСНОВНЫХ ЦИТОКИНОВ И ИХ МЕЖГЕННЫЕ И ВНУТРИГЕННЫЕ СВЯЗИ В АССОЦИАЦИИ С РЕВМАТОИДНЫМ АРТРИТОМ У РУССКОЙ И БАШКИРСКОЙ ПОПУЛЯЦИЙ тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.36, кандидат биологических наук Сташкевич, Дарья Сергеевна

• Сташкевич, Дарья Сергеевна
• кандидат биологических наук
• 2009

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Сташкевич, Дарья Сергеевна

Введение.

Глава 1. Генетический полиморфизм цитокинов и ревматоидный артрит

1.1. Полиморфизм генов цитокинов: понятие, виды, функциональное значение, генетйческий компонент ревматоидного артрита

1.2. Полиморфизм гена Т№а, связь с РА.

1.3. Гены вне кластера шестой хромосомы. Полиморфизм генов 1Ь-1р, 1Ь-1Ка и ревматоидный артрит.

1.4. Гены вне кластера шестой хромосомы. Полиморфизм гена 1Ь-4, влияние на возникновение и клинический полиморфизм РА.

Глава 2. Материалы и методы.

2.1. Обследуемые лица.

2.2. Методы исследования.

2.2.1. Выделение ДНК из клинических образцов.

2.2.2 Определение полиморфизма генов цитокинов.

2.3. Статистическая обработка результатов.

Глава 3. Распределение аллелей, генотипов генов 1Ь-1Яа, 1Ь-1(3,1Ь-4, ТЫРа у представителей русской и башкирской популяций Челябинской области.

Глава 4 Ассоциация полиморфизма генов 1Ь-1Яа, 1Ь-1(3,1Ь-4, ТЫБа с предрасположенностью и клиническими вариантами ревматоидного артрита.

4.1. Распределение аллелей, генотипов генов 1Ь-1Яа, 1Ь-1р, 1Ь-4, Т№а в группе больных РА русской и башкирской популяций Челябинской области.

4.2. Распределение аллелей, генотипов генов ТЬ-Жа, 1Ь-1|3,1Ь-4, ТИР а в группах больных РА русской и башкирской популяций с различным клиническим течением заболевания.

Глава 5. Ассоциация комбинаций генотипов генов 1Ь-1Яа, 1Ь-1(3,1Ь-4,

ЮТа с РА.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «АЛЛЕЛИ И ГЕНОТИПЫ ГЕНОВ ОСНОВНЫХ ЦИТОКИНОВ И ИХ МЕЖГЕННЫЕ И ВНУТРИГЕННЫЕ СВЯЗИ В АССОЦИАЦИИ С РЕВМАТОИДНЫМ АРТРИТОМ У РУССКОЙ И БАШКИРСКОЙ ПОПУЛЯЦИЙ»

Актуальность проблемы

Ревматоидный артрит (РА) - сложнонаследуемое мультифакторное заболевание с неизвестной этиологией [16, 84]. В настоящее время принято считать, что в предрасположенность/устойчивость к этому заболеванию вносят вклад гены иммунного ответа и другие, не установленные на сегодняшний день, а также факторы окружающей среды [11, 16, 82, 84 116, 153]. Возможно, инициацию заболевания вызывают микроорганизмы [9], вступающие в определенные, нередко непредсказуемые отношения с организмом хозяина, несущего особые варианты генов, продукты которых прямо или косвенно участвуют в защите организма хозяина. На сегодня хорошо известно, что РА ассоциирован с носительством определенных аллельных вариантов генов НЬАЛЖВ1 [76, 82], и эти ассоциации имеют этнические различия [5, 35].

Однако гены НЬА обеспечивают только часть общего генетического риска, примерно у 25% больных не обнаружено генов предрасположенности к РА в пределах главного комплекса гистосовместимости, и в то же время здоровые лица являются носителями генов предрасположенности к РА второго класса НЬА [167]. Скрининг генома показал участие в восприимчивости к РА других генов, рассеянных по всему геному [82, 96]. Несмотря на исследования в этой области, вопрос об этиологии заболевания до сих пор остается открытым [90, 116]. Проблема РА рассматривается как приоритетное направление «Декады костей и суставов 2000 — 2010», которая проходит под эгидой ВОЗ во многих странах мира, включая Россию [16, 22].

Территория Челябинской области представлена многонациональным населением, среди которого распространенными являются русская, популяция европеоидного происхождения, и башкирская — микст-популяция [45], с набором комплекса генов иммунного ответа, с высокой частотой встречающихся у монголоидных популяций [36]. В исследованиях И.В. Девальд и Е.Б. Хромовой, проведенных в лаборатории молекулярной иммуногенетики УрО РАН, показано наличие различий в ассоциации РА с генами и гаплотипами HLA IT: DRB1, DQA1, DQB1 между русскими и башкирами: у русских установлены аллельные варианты генов и гаплотипы, предрасполагающие к РА, а у башкир превалируют гены и гаплотипы HLA, определяющие протекцию к PA: DRB1*07,*12,*13 и целый гаплотип - В* 13 - DRB1*07- DQA1*0201- DQB 1*0201. Если у европеоидов аутоиммунные заболевания часто связаны с гаплотипом В* 15- DRB1*04 [35], то у башкир, больных РА, такой гаплотип не был представлен, что может являться их особенностью как популяции монголоидов, а наличие РА ассоциировалось с DRB 1*17(03) [12].

В свете того, что РА является хроническим воспалительным заболеванием, совершенно ясно показано в ряде работ, что развитие воспалительного процесса, его исход будет определяться во многом цитокинами, создающими регуляторную биоактивную сеть сигналов, определяющих не только врожденный иммунный ответ, но и формирование адаптивного иммунного ответа, в том числе его направленность, выраженность, персистенцию [52, 74, 116, 123, 139]. Опубликованы работы, посвященные изучению определения уровней различных цитокинов в циркуляции в физиологических условиях и при патологии [22, 33, 51, 68], и оценка интерлейкин-продуцирующей способности отдельных клеток иммунного ответа in vitro [79, 135], и значительно меньше — генам цитокинов, их рецепторов, транскрипционным регуляторным факторам, посттрансляционной модификации цитокинов [17, 27, 79, 97, 101]. Многие авторы считают, что большую роль в развитии предрасположенности и вариабельности течения мультифакторных заболеваний играют не столько отдельные аллели генов, сколько их сочетания [34, 37, 38, 63], прежде всего в сетевых взаимодействиях клеток воспаления, обеспечивающих «цитокиновый разговор». Накопление данных о распределении аллельных вариантов, генотипов и гаплотипов генов цитокинов среди различных популяций позволит приблизиться к пониманию ряда механизмов развития мультифакторных заболеваний и лечь в основу как профилактической медицины, так и подходов к лечению и созданию технологий получения современных лечебных препаратов [8, 28, 96]. Однако данные, полученные в работах этого направления исследований немногочисленны и чрезвычайно противоречивы, но их можно суммировать по определенным группам:

1. Для генов цитокинов и их рецепторов отмечены популяционные различия [48, 56, 69, 89, 97].

2. Различные аллели генов цитокинов имеют ассоциацию с различным уровнем продукции цитокинов и чувствительностью/устойчивостью к инфекционным и аутоиммунным заболеваниям [41, 72, 101].

3. Группа генов, которые, практически, конститутивно активируются при любом воспалении, составляет широко востребованный «воспалительный/хемотаксический цитокиновый» кластер, который ко-активируется в содружестве с другими кластерами генов, и их продукты взаимозависимо функционируют в клетках, прямо или косвенно определяющих течение иммунного ответа. Активация экспрессии генов различных кластеров контролируется в основном через активацию ТЬЯ-ассоциированных сигнальных путей [29], и профиль транскрипционной программы обеспечивает «общий ответ» клеток хозяина, определяемый как «видовой ответ тревоги». Исходя из сказанного, можно предположить, что кластер «воспаления» состоит из многих генов, их вариабельностей и комбинаций, которые работают в строгом взаимодействии друг с другом, что позволяет говорить о важности межгенных и внутригенных отношений в формировании общих и специфических защитных ответов организма-хозяина, дестабилизация которых может привести к пролонгированной хронической воспалительной реакции и аутоиммунному процессу.

Результаты недавних исследований показали, что развитие воспалительного ответа на встречу с инфекционными агентами определяется цитокиново-хемокиновой сетью, эффективность которой зависит от реализации общей и специфической программы активации транскрипции генов, работающих в тесном содружестве, несмотря на свое расположение на разных хромосомах [29].

Данная работа посвящена исследованию полиморфизма нескольких генов цитокинов про- и противовоспалительного действия у больных РА двух основных популяционных групп: русских и башкир, проживающих на территории Челябинской области.

Цель исследования

Установить особенности распределения аллелей и генотипов генов основных цитокинов у здоровых представителей и больных ревматоидным артритом русской и башкирской популяций и оценить наличие межгенных и внутригенных взаимодействий этих генов в ассоциации с ревматоидным артритом с целью выделения маркеров предрасположенности/устойчивости к данному заболеванию.

Задачи исследования

1. Выявить общие черты и различия в распределении аллельных вариантов и генотипов генов 1Ь-1Яа, 1Ь-4,1Ь-1р, ТИР а. между группами практически здоровых лиц русской и башкирской популяций для формирования контрольных групп.

2. Изучить особенности распределения аллелей и генотипов генов 1Ь-1Яа, ГЬ-4, 1Ь-1р, ТЫРа у больных ревматоидным артритом в сравнении со здоровыми лицами в русской и башкирской популяциях.

3. Определить частоты встречаемости аллелей и генотипов генов 1Ь-1Яа, 1Ь-4, 1Ь-1(3, ТИБсх при различных клинических вариантах ревматоидного артрита у русских и башкир.

4. Оценить ассоциацию межгенных и внутригенных взаимодействий в виде сочетаний генотипов генов цитокинов с предрасположенностью/устойчивостью к ревматоидному артриту русской и башкирской популяций.

Научная новизна

Впервые дана характеристика распределения частот генов основных цитокинов: аллельных вариантов и генотипов, в русской и башкирской популяциях Челябинской области.

Показано наличие межпопуляционных различий в частотах встречаемости аллельных вариантов и генотипов генов цитокинов 1Ь-Ша, 1Ь-1р, 1Ъ-4, Т№а у больных РА русских и башкир.

Новыми являются данные об ассоциации комбинаций конкретных генотипов генов цитокинов 1Ь-1р и 1Ь-4, лежащих на разных хромосомах и характеризующихся альтернативной функцией своих продуктов при воспалении, а также генотипов Т№а, входящих в различные гаплотипы, с устойчивостью/ предрасположенностью к РА башкирской и русской популяций.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Для русской и башкирской популяций Челябинской области характерны межпопуляционные различия в распределении полиморфных генов 1Ь-1Ка, 1Ь-4, -238 в/А ТОТа.

2. В башкирской популяции протекторным к ревматоидному артриту является генотип С/Т +3953 1Ь-1(3, а поздний возраст начала ревматоидного артрита ассоциирован с генотипом 2г/2г УЫТЯ1Ь-4.

3. В русской популяции только у женщин установлен маркер предрасположенности к ревматоидному артриту - 81МР -1031 Т/С Т№а, а клинические варианты — ранний возраст начала ревматоидного артрита и возникновение системных проявлений, соответственно, ассоциированы с генотипами +3953С/Т гена 1Ь-1[3, и -3080/А Т№а.

4. Среди всех изученных межгенных и внутригенных взаимодействий генов цитокинов для формирования предрасположенности/устойчивости к ревматоидному артриту имеют значение следующие комбинации: у башкир с чувствительностью/устойчивостью к ревматоидному артриту ассоциированы различные генотипы комбинации генов цитокинов +3953 1Ь-1(3 и УТчЛИ. 1Ь-4, у русских — чувствительность к ревматоидному артриту ассоциирована с комбинациями генотипов гена Т№а 0/А-308 -С/А -863 и 0/А-308 - Т/С -1031.

Теоретическая и практическая значимость работы

Результаты сравнительного анализа аллелей, генотипов, внутригенных и межгенных связей генов основных цитокинов в ассоциации с РА у русской и башкирской популяционных групп позволили установить наличие межпопуляционных различий и показать значимость конкретных генотипов генов 1Ь-1р, 1Ь-4, Т№а в создании генетических комбинаций, способных выступить в качестве маркеров предрасположенности/устойчивости к РА у русских и башкир. Данные о носительстве определенных генотипов, образованных полиморфными сайтами в генах Т№а и 1Ь-1[3, могут служить теоретической базой в разработке вопросов фармакогеномики и предложены в качестве дополнительных диагностических маркеров РА.

Полученные данные могут быть использованы в популяционньтх исследованиях в рамках научного направления «Генетическое разнообразие человека», а также в работах по разделам экологическая, эволюционная и инфекционная иммуногенетика. Кроме того, обследование двух популяций Челябинской области - русских и башкир, связано с необходимостью получения данных о распределении частот аллелей и генотипов генов цитокинов среди многонационального населения евроазиатской части России и включения полученных сведений в регистр доноров костного мозга.

Анализ полиморфизма генов цитокинов 1Ь-1Ка, 1Ь-4, 1Ь-1 (3, ПЧРа у русских и башкир Южного Урала проводится впервые.

Внедрение результатов исследования. Результаты работы внедрены в учебный процесс: используются при преподавании отдельных тем курса иммунологии на биологическом факультете ГОУ ВПО «Челябинский государственный университет».

Апробация работы и публикации. Материалы диссертационной работы обсуждались на конференциях: «IV конференция Иммунологов Урала» (г. Уфа, 2005), «Новые лабораторные технологии в диагностике и лечении заболеваний человека» (г. Челябинск, 2006), «V конференция Иммунологов Урала» (г. Оренбург, 2006), Конференция молодых ученых, поев, памяти профессора Н.Н. Кеворкого «Иммунитет и аллергия: от эксперимента к клинике» (г. Пермь 2006), XI Всероссийском научном форуме с международным участием имени академика В.И. Иоффе «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге» (г. Санкт-Петербург, 2007), международная конференция «Биотехнология как научно-практический приоритет развития Кировской области» (г. Киров, 2007), «VI конференция Иммунологов Урала» (г. Ижевск, 2007), конференция зональной лаборатории иммунологического типирования тканей «Фундаментальное и прикладное значение оценки генов иммунного ответа» (г. Челябинск, 2008).

По материалам диссертации опубликовано 20 работ.

Заключение диссертации по теме «Аллергология и иммулология», Сташкевич, Дарья Сергеевна

Выводы

1. Между популяциями русских и башкир установлены межпопуляционные различия в распределении аллельных вариантов и генотипов генов IL-IRa, IL-4, -238 G/A TNFa и сходство по частотам аллелей и генотипов полиморфных локусов IL-lp, -1031Т/С, -863 С/А, -308 G/A TNFa.

2. Предрасположенность/устойчивость к ревматоидному артриту в русской и башкирской популяциях определяется различными вариантами генов цитокинов: в русской популяции только у женщин выявлен маркер предрасположенности к ревматоидному артриту — генотип Т/С -1031 TNFa, а у башкир - гетерозиготный генотип С/Т +3953 IL-1(3 - протектор ревматоидного артрита.

3. В русской популяции ранний возраст начала атаки, наличие системных проявлений ревматоидного артрита ассоциированы с конкретными генотипами С/Т +3953 IL-ip, -308 G/A TNFa. У башкир поздний возраст начала ревматоидного артрита ассоциирован с генотипом 2r/2r IL-4.

4. У русских комбинации генотипов внутри гена TNFa «-308 — 863» и «-308 —1031» определяют чувствительность к ревматоидному артриту.

5. Функциональная значимость комбинации различных генов, располагающихся на разных хромосомах, IL-ip — IL-4, в отношении устойчивости/чувствительности к ревматоидному артриту в башкирской и русской популяциях зависит от конкретных генотипов, входящих в эту комбинацию.

Заключение

Наше исследование посвящено анализу вклада аллельных вариантов генов 1Ь-1Яа, 1Ъ-4, 1Ь-1(3, ТОТа, их генотипов и межгенных взаимодействий в предрасположенность и клинические варианты ревматоидного артрита у представителей русской и башкирской популяций Челябинской области. Тема исследования выбрана в связи с тем, что развитие воспалительного процесса, в который вовлечены белковые продукты генов 1Ь-1К.а, 1Ь-4, 1Ь-1(3, ТЫБа, во многом определяет течение РА, предполагается участие этих генов в развитии предрасположенности/ устойчивости к РА. Таким образом, мы изучали, насколько значима ассоциация генов цитокинов с предрасположенностью к РА. В ходе проведенного исследования нами был поставлен ряд задач, в результате решения которых мы пришли к следующему заключению.

1. Первой задачей было установление распределения частот аллельных вариантов, генотипов полиморфных генов 1Ь-1К.а, 1Ь-4,1Ь-1р, Т№а в выборках здоровых лиц русской и башкирской популяций для формирования групп контроля. Необходимость оценки распределения частот аллелей и генотипов генов 1Ь-Жа, 1Ь-4, 1Ь-1р, ПМТа у практически здоровых лиц двух популяций диктуется следующим рядом положений. Группы русских и башкир — самые многочисленные на территории Челябинской области [170], при этом относятся к популяциям различного историко-этнического происхождения. Популяция русских формировалась в течение последних 300 лет миграцией из центральных областей России [19]. Миграционные волны смешивались с проживающими на данной территории различными этносами с монголоидной и финно-угорской составляющей, неоформленными в государства. При метизации этого населения русские, проживающие в Челябинской области, приобретали свои специфические иммуногенетические особенности в распределении генов и антигенов HLA, генов цитокинов [19, 36].

Башкирская популяция - единственная, из проживающих на территории Челябинской области, которая сформировалась именно на этой территории в период 1-2 в. до нашей эры и отличается наибольшим вкладом монголоидных генетических признаков [19, 45, 170].

По данным многих авторов, формирование предрасположенности к РА имеет этнические особенности. В работах И.В. Девальд и Е.Б. Хромовой установлены специфические маркеры предрасположенности к РА у русских и башкир среди генов HLA [5, 12, 35, 48]. Анализ литературы позволил нам прийти к выводу, что и для распределения генов цитокинов характерны межпопуляционные различия [6, 48]. Таким образом, необходимо было провести оценку распределения аллелей и генотипов генов цитокинов среди практически здоровых представителей двух популяций и только после установления наличия или отсутствия особенностей в частотах встречаемости аллелей и генотипов, изучить вклад генов IL-IRa, IL-4, IL-ip, TNFa в развитие предрасположенности к РА.

Анализ показал наличие межпопуляционных различий в распределении аллелей и генотипов генов IL-IRa, IL-4 и полиморфного сайта -238 G/A TNFa среди русских и башкир.

IL-IRa. Из литературных данных также известно наличие межэтнических различий в распределении аллелей и генотипов IL-IRa. Для русских Челябинской области, как и в других европеоидных популяциях (бельгийцы, финны, французы), характерна высокая частота аллеля 2г - на уровне 20% -30%, и сходны частоты его гомозиготных генотипов 2г/2г [70,71, 161].

Так как башкиры являются микст-популяцией с преобладанием монголоидной компоненты, то мы провели сравнение выборки башкир по частотам аллелей и генотипов 1 Яа с монголоидными популяциями. Показано, что для них характерна низкая по сравнению с европеоидами частота аллеля 2г, но выше частота другого распространенного аллеля и его гомозиготного генотипа 4г/4г [ 103, 16В].

1Ь-4. При сравнении частот генотипов 1Ь-4, установленных в нашем исследовании, с распределением в мировых популяциях (литературные данные), мы получили следующие результаты. Распределение генотипов УЫТЯ И-4 у русских сходно с частотами аллелей и генотипов у европеоидных популяций и характеризуется накоплением гомозигот Зг/Зг [70, 88, 160]. У монголоидных популяций в целом повышены частоты генотипов, несущих аллель 2г (Зг/2г, 2 г/2 г), для иллюстрации приведен рисунок 7 [130, 166]. русские собств исс европеоиды французы иведы банкиры собств исс китайцы японцы тнлеугы Кемеровской обл

О 20 40 60 80 100 частота, %

Рис. 7. Распределение генотипов ИЛ-4 у русских и башкир, сравнение с мировыми популяциями

-238 G/A TNFa. При сравнении результатов нашего исследования по распределению аллелей и генотипов SNP -238 TNFa с литературными данными выявить закономерности в распределении аллелей и генотипов между различными популяциями установить не удалось. Для иллюстрации на рисунке 8. приведены частоты генотипов, образованных полиморфным сайтом -238 G/A TNFa.

Рис. 8. Распределение -238 G/A TNFa в различных популяциях

IL-ip. Хотя в литературе указаны межпопуляционные особенности в распределении аллелей, генотипов полиморфного сайта +3953С/Т IL-lp между европеоидными и монголоидными популяциями, в нашем исследовании не установлено различий между русскими и башкирами.

Частоты аллелей и генотипов IL-1(3 у русских сходны с распределением в мировых популяциях европеоидного происхождения. Распределение аллелей и генотипов SNP +3953С/Т IL-ip в выборке башкир было сходно с таковым у русских, но отличалось от частот аллельных вариантов и генотипов у других монголоидных популяций [149, 168]. Вероятно, сходство с европеоидными популяциями в распределении аллелей и генотипов 1Ь-1р является характерной особенностью башкирской популяции, так как подобное распределение получено в исследовании, проведенном на жителях Башкирии [43].

TNFa. Частоты аллелей и генотипов, образованных полиморфными сайтами -3080/А, -863С/А и -1031Т/С гена ЮТа не отличались между выборками русских и башкир. При анализе литературных данных распределение этих полиморфных сайтов между популяциями было сходно.

Таким образом, можно подвести итог: русские Челябинской обладти относятся к типичной популяции европеоидного происхождения, хотя и имеют свои особенности в распределении редких аллелей и генотипов 1Ь-1Яа, частоты которых могут быть маркерами данной популяции.

Башкиры являются микст-популяцией и, хотя имеют черты сходства с типичными монголоидными популяциями, все-таки обладают сходством с популяциями европеоидного происхождения, вероятно, обусловленным метизацией с другими популяциями Челябинской области.

2. Вторая задача посвящена установлению вклада генов 1Ь-1 Яа, 1Ь-1Р, 1Ь-4, Т№а в предрасположенность/устойчивость и клинические варианты РА в двух популяциях - русских и башкир.

РА относят к мультифакторным комплексным заболеваниям, чувствительность к которым определяется генетической составляющей и условиями окружающей среды. Основным генетическим фактором риска для РА являются гены классического иммунного ответа II класса системы НЬА [82, 116]. Однако генами НЬА II класса обеспечивается лишь 30% - 50% общего семейного риска развития РА (по данным разных авторов). Скрининг генома показал наличие и других генов восприимчивости к РА, рассеянных по всему геному [96]. Среди них большое внимание привлекают гены цитокинов и их рецепторов, продукты которых определяют развитие и персистирование воспалительного процесса, при этом они могут действовать совместно, или роль цитокинов может быть независимой от HLA.

В нашем исследовании не удалось установить маркеры предрасположенности к РА у русских среди исследуемых полиморфных сайтов генов IL-IRa, IL-1(3, IL-4. Необходимо отметить, что участие исследуемых генов в развитии предрасположенности к РА показано далеко не во всех исследованиях.

В нашем исследовании показано, что частота генотипа Т/С -1031 TNFa повышена в группе женщин, больных РА русской популяции (45% против 29,8% %"=4,30, р=0,038). Полученные результаты говорят об ассоциации полиморфизма в точке -1031 TNFa с ревматоидным артритом у женщин. Это предполагает, что женщины с генотипом Т/С имеют более высокий риск развития данного заболевания, чем с другими генотипами -1031 TNFa (RR=1,51 95%ДИ=1,02-2,25; OR=l,89 9 5 % ДИ= 1,03-К3,62).

В доступной литературе мало данных о связи этого полиморфизма с РА, [106, 163], он оказался более значимым для других мультифакторных заболеваний [134, 137]. Можно предположить, что влияние этого сайта опосредовано наличием неравновесного сцепления с точкой -308 G/A TNFa.

У больных РА башкирской популяции показана значимость полиморфизма типа SNP +3953 IL-1(3 для предрасположенности к данной патологии: протекторными свойствами обладал генотип С/Т по сравнению с носительством двух других генотипов IL-lp (Т/Т и С/С).

Участие различных аллельных форм и генотипов генов IL-1 р в развитии предрасположенности к РА и вариабельности его течения спорно: в некоторых исследованиях обнаружена связь [62], а в других -нет [69, 103, 107]. Кроме того, некоторые авторы высказывают предположение о том, что аллель +3953*Т в гомозиготном и гетерозиготном состояниях предрасполагает к возникновению РА, другие, наоборот, подчеркивают его протекторную роль, и существует точка зрения о нейтральности данного аллеля к развитию РА.

В работе C-G. You показано повышение частот редкого аллеля Т и гетерозиготного генотипа С/Т SNP +3953 IL-ip у женщин, больных РА, авторами выдвинуто предположение о связи этого полиморфизма и пола при развитии предрасположенности к РА у монголоидов [168]. В работе A. Cantagrel et al. установлено, что редкий аллель +3953*Т связан с повышенным риском эрозивного течения РА в сочетании с генами HLA, кодирующими общий эпитоп [62, 70].

Полученные нами данные о протекторной роли генотипа С/Т +3953 IL-ip у башкир Челябинской области согласуются с результатами работы, проведенной группой российских исследователей, в которой показана связь между носительством редкого аллеля +3953*Т IL-lp в гетерозиготном состоянии и низким уровнем пролактина в сыворотке крови (р=0,03) и редким развитием анемий (р=0,03) у больных РА европеоидного происхождения, проживающих на территории Сибири. Этот частный эффект объясняется ими как протективное действие редкого аллеля +3953*Т IL-lp при РА, поскольку уровень пролактина коррелирует с активностью аутоиммунного воспаления [6].

3. Для установления маркеров вариабельности течения РА среди исследуемых полиморфных генов цитокинов группы больных делились по возрасту начала заболевания, иммунологическому варианту РА (серопозитивный, серонегативный РА), РА с системными проявлениями и без системных проявлений.

При делении на группы по клиническим признакам мы установили ассоциацию 8ЫР+3953 генотипа С/Т 1Ь-1(3 с ранним началом заболевания у русских Челябинской области и генотипа 2г/2г \TNTR в гене 1Ь-4 с поздним возрастом возникновения РА у башкир.

Влияние 8ЫР в точке +3953 гена 1Ь-1р на тяжесть течения РА подтверждается в различных исследованиях, однако данные противоречивы. Например, в исследовании N. ВисЬз еЪ а1. показано, что носительство редкого аллеля +3953 *Т повышено в группе с деструктивным РА [66].

Учитывая спорные данные о влиянии этого БЫР на экспрессию белка 1Ь-1р и различия в связи с предрасположенностью, и клиническими вариантами РА, описанными в литературных источниках, можно предположить, что носительство генотипа С/Т является более благоприятным признаком у больных РА. Считается, что «ранний РА» протекает легче, чем поздний. По данным И.В. Девальд РА [12] у представителей башкирской популяции Челябинской области также протекает легче, чем у европеоидов этого региона. Суммируя полученные результаты, можно сделать следующий вывод: замена С—> Т в точке +3953 1Ь-1Р благоприятствует более легкому течению РА. Очевидно его опосредованное влияние на развитие РА в зависимости от того, с какими полиморфными сайтами 1Ь-1р или какими генами он вступает в неизвестные на сегодняшний день взаимодействия.

Мы установили маркер позднего начала РА у башкир — генотип 2r/2r VNTRIL-4.

По данным литературы, существует связь между VNTR 2R аллелем и возрастом начала и клиническим течением некоторых мультифакторных заболеваний. К примеру, Vandenbroeck К. показал ассоциацию между 2R и поздней атакой множественного склероза [160]. Buchs N. продемонстрировал, что 2R аллель может быть протективным фактором тяжести деструкции суставов при РА: пациенты с недеструктивным артритом имели повышенную частоту 2R аллеля [67].

В то же время, нам не удалось установить ассоциации полиморфизма генов IL-lRa, IL-4, IL-lß, TNFa с иммунологическим вариантом РА (серопозитивный и серонегативный РА) ни у русских, ни у башкир.

В группе больных РА с системными проявлениями, русской популяции показано повышение частоты аллеля -308*А и его гетерозиготного генотипа. Мы предполагаем, что высокопродуктивный аллель -308*А с заменой и его гетерозиготный вариант (G/A) предрасполагают к возникновению системных проявлений у больных PA (OR=3,52; 95% ДИ 1,45-8,5 OR=3,5; 95% ДИ 1,17-10,5), а аллель нормальной продукции -308*G и его гомозиготный генотип являются протекторными для развития системных осложнений (OR=0,28; 95% ДИ 0,12-0,69, OR-0,23; 95% ДИ 0,07-0,7).

Связь полиморфизма гена TNFa с мультифакторной патологией чаще всего изучается для SNP-308. Ряд исследований показывает изменение частот аллелей и генотипов полиморфизма в точке -308 у больных РА по сравнению с контролем, на основании чего делается вывод о предрасполагающей роли аллеля -308*А и его генотипов к развитию РА [75, 78, 80].

В то время как существуют работы, не подтверждающие влияния -308 точки, как и других SNPs, на транскрипционную активность и связь с РА [60, 106, 114], этот полиморфный сайт изучается в России, как один из факторов предрасположенности к РА. В группе больных РА европеоидного происхождения, проживающих на территории Новосибирской области (Россия), выявлено достоверное повышение частоты гетерозиготного генотипа G/A -308 (OR=l,98, 95%ДИ 1,04-3,8; RR=1,68, 95%ДИ 1,05-2,69, р=0,02), а частота генотипа гомозиготного по аллелю нормальной продукции G/G снижена. Авторы предполагают, что этот генотип является протективным фактором для РА (OR=0,52, 95% ДИ 0,27-0,99; RR=0,85, 95% ДИ 0,74-0,98, р=0,03). Влияние замены в сайте -308 сказывается и на клинической картине заболевания: у больных РА до назначения патогенетической терапии генотип G/A -308 ассоциируется с повышенным содержанием клеток с фенотипом CD16+ (р=0,02) и отсутствием в системном кровотоке цитокинов IL-2 и IL-7 (р<0,05) [6].

Полученные нами данные согласуются с данными зарубежной литературы, где описано влияние полиморфизма в точке -308 TNFa на тяжесть течения РА [110], наличие ревматоидных узелков [162].

Вероятнее всего, один цитокиновый ген не является решающим в развитии предрасположенности и клинических признаков заболевания, скорее всего, важно взаимодействие цитокиновых генов, располагающихся на одной и на разных хромосомах, в связи с чем мы проводили анализ «межгенных и внутригенных взаимодействий».

4. Завершающий этап работы был посвящен оценке ассоциации межгенных и внутригенных взаимодействий в предрасположенность/устойчивость к РА.

В нашей работе не удалось установить значимых взаимодействий между УЫТЯ 1Ь-1Ка - 8ЫР+3953 1Ь-1р и предрасположенностью к РА, несмотря на существование работ, в которых показана связь этих полиморфизмов в виде сочетаний генотипов и гаплотипов с мультифакторными заболеваниями [34, 105, 121].

Не получено статистической значимости комбинации двух противовоспалительных цитокинов: УЫТЯ 1Ь-1Ка - УЫТЯ 1Ь-4 и предрасположенностью к РА, и в доступной литературе нет данных о сочетанном влиянии этих генов.

Установлена значимость комбинации УЫТЯ 1Ь-4 - БЫР+3953 1Ь-1Р, при этом различия сильнее в башкирской популяции, у русских — только у женщин.

Мы предполагаем, что аллель +3953 *Т 1Ь-1р в сочетании с аллелем 2К 1Ь-4 чаще встречается у больных РА (для сочетаний совместно «Т/Т - ЗК/2Б1» и «С/Т- 311/211» (Ж=1,79 95%ДИ 1,11-2,89), а с аллелем ЗЯ аллель +3953*Т 1Ь-1р — реже (для сочетаний совместно «Т/Т 1Ь-1Р -ЗК/ЗЯ 1Ь-4», «С/Т 1Ь-1(3 - ЗМЯ 1Ь-4» (Ж=0,43 95%ДИ 0,24-0,77).

Это новые данные, которых нет в доступной нам литературе, дальнейшее их изучение позволит по-новому взглянуть на профилактику и лечение РА.

Анализ комбинаций генотипов, образованных полиморфными сайтами гена ТЫРа, показал значимость следующих комбинаций:

-3080/А--863С/А» и «-3080/А--1031Т/С» для РА только у представителей русской популяции. Согласно литературным данным, эти сочетания содержат гетерозиготные генотипы, в которых редкие аллели связаны с повышенной продукцией ТЫБа [49, 100, 148] — ключевого цитокина, участвующего в патогенезе РА. В доступных нам исследованиях нет данных по сочетанному влиянию этих генотипов на предрасположенность к РА.

Высоко достоверную значимость взаимодействия между генотипами «-1031 -863» и «-1031 -238» в обеих популяциях без влияния на предрасположенность к РА можно объяснить наличием сцепления между этими полиморфными сайтами гена TNFa. Неравновесное сцепление SNPs -1031 и -863 показано в зарубежных источниках [56, 118, 149]. Однако нет литературных данных, описывающих неравновесное сцепление между полиморфными точками -238 и -1031.

У башкир в нашем исследовании не установлено влияния аллелей, генотипов и сочетаний генотипов TNF а на предрасположенность к РА, вероятно, развитие восприимчивости к РА развивается у этой популяции за счет участия других генов.

Таким образом, в основу проведенного исследования по оценке вклада генов цитокинов в формирование предрасположенности к ревматоидному артриту положен комплексный подход, при котором проведен анализ распределения полиморфных вариантов генов IL-lRa, IL-4, IL-lß, TNFa среди практически здоровых лиц двух популяций и изучение частот встречаемости аллельных вариантов, генотипов и сочетаний генотипов среди больных РА.

Установлено, что полиморфные варианты исследуемых генов характеризуются специфичностью распространения в популяциях различного происхождения. Таким образом, различные популяционные группы имеют своеобразный «генетический портрет» по частотам аллельных вариантов и генотипов генов цитокинов.

На сегодняшний день известно, что частота РА, его клинический полиморфизм и тяжесть неодинаковы у разных народов [48, 53, 85], возможно, это связано с межпопуляционными различиями в распределении генов цитокинов, которые наряду с системой НЬА являются одним из факторов, определяющих отличия в распространенности РА.

Важность предварительной оценки полиморфной структуры генов цитокинов в популяциях различного происхождения диктуется необходимостью формирования групп риска мультифакторной патологии, в частности РА, и проведения анализа между особенностями распределения в популяциях мира аллелей генов-кандидатов различных заболеваний и спецификой встречаемости в популяциях мультифакторной патологии.

Исследование распределения аллелей, генотипов внутри группы больных РА и при сравнении с частотами в группе практически здоровых лиц позволило установить маркеры предрасположенности и вариабельности течения РА. Однако вклад исследуемых генов невелик, это означает, что аллельные варианты указанных генов — лишь небольшая часть потенциального наследственного разнообразия, приводящего к возникновению РА.

В то же время, представленные результаты показывают сложность получения однозначных ответов, когда речь идет о генах цитокинов, являющихся древнейшим защитным звеном у многоклеточных эукариот (начиная с беспозвоночных), и, вероятно, поэтому имеющих как эволюционно-устойчивые генные комбинации [37], так и множество вариантов межгенных взаимодействий, в ходе развития физиологических и патологических воспалительных реакций [17], вариабельность которых определяется как генетическим полиморфизмом и различными генными сочетаниями, так и окружающими условиями и стохастическими процессами.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Сташкевич, Дарья Сергеевна, 2009 год

1. Алексеев, Л.П. Клиническая иммуногенетика / Л.П. Алексеев, P.M. Хаитов // Цитокины и воспаление. 2005. — №3. — С. 37-39.

2. Анализ генома. Методы / под ред. К. Дейвиса М.: Мир, 1990.-246 с.

3. Балабанова, P.M. Особенности клинической картины и лечения ревматоидного артрита в пожилом возрасте / P.M. Балабанова, А.К.Каптаева // Consilium medicum. 2006. - Т. 8, №12. - С. 1-8.

4. Герцог, О.А. Полиморфизм генов ILlB(+3953) и TNFA(-308) в патогенезе ревматоидного артрита / О.А. Герцог, С.В. Сенников, Л.П. Коненкова, Е.В. Зонова, М.А. Королев, А.Э. Сизиков, В.А. Козлов // Цитокины и воспаление. — 2005. Т. 4, № 1. — С. 52-57.

5. Гланц, С. Медико-биологическая статистика / С. Гланц. М.: Практика, 1999. - 459 с.

6. Горбунова, В.Н. Введение в молекулярную диагностику и генотерапию наследственных заболеваний / В.Н. Горбунова, B.C. Баранов. — СПб: Специальная литература, 1997. — 287 с.

7. Горячев, Д.В. Роль вирусов в развитии ревматоидного артрита / Д.В. Горячев, О.Н. Егорова, P.M. Балабанова // Терапевтический архив.- 2001. Т. 73, № 2. - С. 72-75.

8. Громова, А.Ю. Полиморфизм генов семейства IL-1 человека / А.Ю. Громова, A.C. Симбирцев //Цитокины и воспаление. 2005. - Т.4, №2.-С. 3-12.

9. Гусева, И.А. Современные иммуногенетические и иммунологические аспекты ревматоидного артрита / И.А. Гусева, E.JI. Насонов // Вестник Российской академии медицинских наук. 2008. -№6. -С.7-13.

10. Девальд, И.В. Иммуногенетическая характеристика ревматоидного артрита и HLA профиль башкирской популяции: дис.канд. мед. наук: 14.00.36, 14.00.05/ И.В. Девальд Челябинск, 2006. - 132 с.

11. Зарецкая, Ю.М. Клиническая иммуногенетика / Ю.М. Зарецкая. М.: Медицина, 1983. - 207 с.

12. Каратеев, Д.Е. О классификации ревматоидного артрита / Д.Е. Каратеев, Ю.А. Олюнин // Научно-практическая ревматология. — 2008. — №1. -С. 5-16.

13. Каратеев, Д.Е. Фармакотерапия раннего ревматоидного артрита / Д.Е. Каратеев //Фарматека. 2006. -№6. - С. 1-6.

14. Коненков, В.И. Структурные основы и функциональная значимость аллельного полиморфизма генов цитокинов человека и их рецепторов / В.И. Коненков, М.В. Смольникова // Медицинская иммунология. 2003. - Т.5., №1-2. - С. 11-28.

15. Коненков, В.И. Полиморфизм гена TNF А и неравновесное сцепление TNF А и HLA-генов II класса (DRB1, DQA1 DQB1) в популяции сибирских европеоидов / В.И. Коненков, О.В. Голованова, В.В. Дортман // Иммунология. 2008. - №1- С6-10.

16. Кузеев Р.Г. Народы Среднего Поволжья и Южного Урала (этногенетический взгляд на историю). / Р.Г. Кузеев. — М.: Наука, 1992. — 347 с.

17. Молекулярная клиническая диагностика. Методы / под ред. С. Херрингтона, Дж. Макги. М.: Мир, 1999. - 558 с.

18. Муравьев, Ю.В. Дискуссионные вопросы отечественной классификации РА / Ю.В. Муравьев // Научно-практическая ревматология. 2007 - №2 - С. 80-83.

19. Насонов, E.JI. Фактор некроза опухолей-а новая мишень для противовоспалительной терапии ревматоидного артрита / E.JL Насонов // Клиническая Фармакологическая Терапия. - 2001. - №1. - С. 64-70.

20. Остапцева, A.B. Молекулярно-генетический анализ полиморфизма гена интерлейкина-4 у телеутов, шорцев и европеоидов Кемеровской области / A.B. Остапцева, A.B. Шабалдин, В.Р. Ахматьянова и др. // Медицинская Иммунология. -2006—Т.8, № 5-6. С. 737-740.

21. Реброва, О.Ю. Статистический анализ медицинских данных. Применение пакета прикладных программ STATISTIC А / О.Ю. Реброва. М.: Медиасфера, 2002. - 312 с.

22. Рыдловская, А.В. Функциональный полиморфизм гена TNFA и патология / А.В. Рыдловская, А.С. Симбирцев // Цитокины и воспаление. 2005. - Т.4, №3. - С.4-10.

23. Рязанцева, Н. В. Аллельный полиморфизм генов IL-4 и IL-10 как один из возможных механизмов, способствующих хронизации вирусных гепатитов / Н.В. Рязанцева, И.О. Наследникова, В. И. Коненков и др. // Иммунология. 2007. - №2. - С. 68-74.

24. Сенников, С.В. Аллельные варианты и изоформы цитокинов в диагностике и патогенезе иммунопатологических состояний / С.В. Сенников, А.Н. Силков, В.А. Козлов // Иммунология. -2002. — №4. -С. 243-248.

25. Сигидин, Я.А. Современная биологическая терапия ревматоидного артрита / Я.А. Сигидин, Г.В. Лукина // Вестник Российской Академии медицинских наук. 2008. -№6. —С. 19-24.

26. Симбирцев, А.С. Функциональный полиморфизм генов регуляторных молекул воспаления / А.С. Симбирцев, А.Ю. Громова // Цитокины и воспаление. — 2005. — Т.4., №5. — С. 3-10.

27. Симбирцев, А.С. Биология семейства IL-1 человека / А.С. Симбирцев // Иммунология. 1998. - №3. - С. 9-16.

28. Смольникова, M.B. Распределение аллельных вариантов генов цитокинов (TNFa и IL-10) у больных ревматоидным артритом европеоидов / М.В. Смольникова, И.Г. Соловьева, Л.П. Коненкова и др. // Медицинская иммунология. 2007. - Т.9. - С. 204.

29. Соколова, В.В. Клинико-иммунологические взаимосвязи при раннем ревматоидном артрите / В.В. Соколова, C.B. Лапин, A.B. Москалев, В.И. Мазуров // Медицинская иммунология. 2007. - Т.9, №6.-С. 635-642.

30. Субботин, A.B. Полиморфизм генов HLA DRB2 и генов IL-lß, IL-lRa и их влияние на возникновение и течение рассеянного склероза / A.B. Субботин, А.Н. Глушков, Е.Г. Арефьева, A.B. Шабалдин// Медицина в Кузбассе. 2004. - №2. - С. 18-22.

31. Суслова, Т.А. Генетическая предрасположенность к ревматоидному артриту: роль генов и гаплотипов HLA класса II / Т.А. Суслова, А.Л. Бурмистрова, Е.Б. Хромова и др. //Иммунология. -2008. T.29, №3. - С. 137-141.

32. Суслова, Т.А. Полиморфизм HLA: А, В, DRB1, DQA1, DQB1 в популяциях русских и башкир Челябинской области / Т.А. Суслова, С.И. Янина, А.Л. Бурмистрова и др.// Успехи современного естествознания. —2006. — №3. -С. 54.

33. Фрейдлин, М.Б. Роль генов интерлейкинов и их рецепторов в формировании предрасположенности к атопической бронхиальной астме: автореф. дис. канд. биол. наук: 03.00.15/ М. Б. Фрейдлин. -Томск: Изд-во ТНЦ СО РАМН, 2001.- 22 с.

34. Фрейдлин, М.Б. Сравнительный анализ структуры наследственной компоненты подверженности туберкулезу у тувинцев и русских / М.Б. Фрейдлин, A.A. Рудко, О.В. Колоколова и др. // Молекулярная биология. 2006. - Т40, №2. - С. 252-262.

35. Фогель, Ф. Генетика человека. Проблемы и подходы. Т2. /Ф. Фогель, А. Мотульски .- М.: Мир, 1990. 378 с.

36. Цитокиновая регуляция биотрансформации ксенобиотиков и эндогенных соединений / C.B. Сибиряк, В.А. Чершнев, A.C. Симбирцев и др. Екатеринбург: Изд-во УрО РАН, 2006. -162 с.

37. Шабалдин, A.B. Ассоциации полиморфных генов интерлейкинов с иммунопатологией у телеутов / A.B. Шабалдин, A.B. Остапцева, А.Н. Глушков и др. // Иммунология. 2007. - №1. - С. 4-7.

38. Шабалдин, A.B. Полиморфизм генов антагониста рецептора интерлейкина 1 и интерлейкина 4 при репродуктивных нарушениях / A.B. Шабалдин, М.Л. Филипенко, E.H. Воронина, А.Н. Глушков, Т.А. Симонова//Иммунология. -2005. — №1. С. 6-10.

39. Шевченко, В.А. Генетика человека / В.А. Шевченко, H.A. Топорнина, Н.С. Стволинская. М.: Владос, 2002. - 240 с.

40. Хуснутдинова, Э.К. Этногеномика и генетическая история народов Восточной Европы / Э.К. Хуснутдинова // Вестник Российской академии наук. 2003. - Т.73, №7. - С. 614-621.

41. Ярилин, A.A. Система цитокинов и принципы ее функционирования в норме и при патологии / A.A. Ярилин// Иммунология. 1997. - №5. - С. 7-14.

42. Agrawal, С. Tumor necrosis factor-alpha microsatellite polymorphism association with rheumatoid arthritis in Indian patients /

43. C. Agrawal, S.K. Raghav, B. Gupta // Archives of medical research. 2005. -Vol. 36.-P. 555-559.

44. Aguillon, J.C. Could single-nucleotide polymorphisms (SNPs) affecting the tumour necrosis factor promoter be considered as part of rheumatoid evolution /J.C. Aguillon, A. Cruzat, O. Aravena et al. // Immunobiology. 2006. - Vol. 211. - P. 75-84.

45. Akman, A. TNF-a gene 1031 T/C polymorphism in Turkish patients with Bel^et's disease / A. Akman, N. Sallakci, M. Coskun et al. // British Journal of Dermatology. 2006. - Vol. 155. - P. 350-356.

46. Arend, W. P. The balance between IL-1 and IL-IRa in disease / W.P. Arend // Cytokine & Growth Factor Reviews. 2002. - Vol. 13. - P. 323-340.

47. Arend, W.P. Interleukin-1 receptor antagonist: role in biology / W.P. Arend, M. Mayak, C. J. Guthridge, C. Gabay // Annual Reviews of Immunology. 1998. - Vol. 16. - P. 27-55.

48. Arend, W.P. Physiology of cytokine pathways in rheumatoid arthritis / W.P. Arend // Arthritis care & research. 2001. - Vol. 45. - P. 101106.

49. Asgar, A. K. Rheumatoid arthritis in the developing world / A.K. Asgar// Best Practice & Researh Clinical Rheumatology. 2003. - Vol. 17, №5.-P. 863-875.

50. Asghar, T. The tumor necrosis factor-a promoter -1031C polymorphism is associated with decreased risk of endometriosis in Japanese population / S. Yoshida, S. Kennedy, K. Negoro // Human reproduction. -2004. Vol. 19. - P. 2509-2514.

51. Ates, O. Tumor necrosis factor-alpha and interleukin-10 gene promoter polymorphisms in Turkish rheumatoid arthritis patients/ O. Ates,

52. G. Hatemi, V. Hamuryudan// Clinical Rheumatology. 2008. - Vol. 27 - P. 1243-1248.

53. Baena, A. TNF-a promoter single nucleotide polymorphisms are markers of human ancestry / A. Baena, J.Y. Leung, A.D. Sullivan et al. // Genes and Immunity. 2002. - Vol. 3. - P. 482-487.

54. Balog, A. Tumour necrosis factor-alpha and heat-shock protein 702 gene polymorphisms in a family with rheumatoid arthritis/ A. Balog, J. Gal, Z. Gyulai, et al. // Acta microbilogica et immunologica Hungarica. — 2004. -Vol. 51.-P. 263-269.

55. Barrera, P. European genetic study on rheumatoid arthritis: is there a linkage of the interleukin-1 (IL-1), IL-10 or IL-4 genes to RA / P. Barrera,

56. S. Faure, J.F. Prud'homme et al. // Clinical Experimental Rheumatology -2001. Vol. 19. - P. 709-714.

57. Bayley, J-P. Is there a future for TNF promoter polymorphisms? / J-P. Bayley, T.H.M. Ottenhoff, C.L. Verweij // Genes and Immunity. 2004. -Vol. 5.-P. 315-329.

58. Bennet, A.M. Association of TNFa serum levels and TNFA promoter polymorphisms with risk of myocardial infarction / A.M. Bennet, M.C. van Maarle, J. Hallqvist et al. // Atherosclerosis. 206. - Vol. 187. - P. 408-414.

59. Bidwell, J. Cytokine gene polymorphism in human disease: online databases / J. Bidwell, L. Keen, et al. // Genes and Immunity. 1999. -Vol. l.-P. 3-19.

60. Brassat, D. Multifactor dimensionality reduction reveals gene-gene interactions associated with multiple sclerosis susceptibility in African Americans/ D. Brassat, A.A. Motsinger, S.J. Caillier et al.// Genes and Immunity. 2006. - Vol. 7. - P. 310-315.

61. Brinkman, B.M.N. Tumor necrosis factor a gene polymorphisms in RA: association with susceptibility to, or severity of, disease? / B.M.N. Brinkman, T.WJ. Huizinga, S.S. Kurban // British Journal of Rheumatology. 1997. - Vol. 36. - P. 516- 521.

62. Brookes, A.J. The essence of SNPs / A.J. Brookes // Gene. 1999. -Vol. 234.-P. 177-186.

63. Buchs, N. IL-lb and IL-IRa gene polymorphisms and disease severity in rheumatoid arthritis: interaction with their plasma levels / N. Buchs, F.S. di Giovine, T. Silvestri et al. // Genes and Immunity. 2001. — Vol. 2.-P. 222-228.

64. Butrimiene, I. Different cytokine profiles in patients with chronic and acute reactive arthritis /1. Butrimiene, S. Jarmalaite, J. Ranceva et al. // Rheumatology. 2004. -Vol. 43, № 10. -P. 1300-1304.

65. Camargo, J.F. Interleukin-ip polymorphisms in Colombian patients with autoimmune rheumatic diseases / J.F. Camargo, P.A. Correa, J. Castiblanco, J-M. Anaya // Genes and Immunity. — 2004. — Vol. 5. P. 609-614.

66. Cantagrel, A. Interleukin-ip, Interleukin-1 receptor antagonist, interleukin-4, and interleukin-10 gene polymorphisms relationship to occurrence and severity of rheumatoid arthritis/ A. Cantagrel, F. Navaux,

67. P. Loubet-Lescoulie et al. // Arthritis & Rheumatism. 1999. - Vol. 42. -P. 1093-1100.

68. Chiche, J-D. Cytokine polymorphisms and susceptibility to severe infectious diceases / J-D. Chiche, S. Siami, J-F. Dhainaut et al. // Sepsis. -2001.-Vol. 4.-P. 209-215.

69. Choy, E.H.S. Cytokine pathways and joint inflammation in rheumatoid arthritis/ E.H.S. Choy //The New England Journal of medicine. -2001.-Vol. 344., № 12.-P. 907-916.

70. Christodoulou, C. Joint inflammation and cytokine inhibition in rheumatoid arthritis / C.Christodoulou, E. H. Choy // Clinical Experimental Medicine 2006. - Vol. 6. - P. 13-19.

71. Correa, P.A. Autoimmunity and tuberculosis. Opposite association with TNF polymorphism / P.A Correa, LM Gomez, J. Cadena, J.M. Anaya // Journal of Rheumatology. 2005. - Vol. 32. - P. 219 -224.

72. Criswell, L.A. Current understanding of the genetic aetiology of rheumatoid arthritis and likely future developments / L.A. Criswell, P.K. Gregersen// Rheumatology. 2005. - Vol. 44. - P. 9-13.

73. Date, Y. Identification of a genetic risk factor for systemic juvenile rheumatoid arthritis in the 5'-flanking region of the TNFa gene and HLA genes/ Y. Date, N. Seki // Arthritis & Rheumatism. 1999. - Vol.42. - P. 2577-2582.

74. Dieude, P. Genetic basis of rheumatoid arthritis. / P. Dieude, F. Cornells // Joint Bone Spine. 2005. - Vol. 9. - P. 3-7.

75. Dominici, R. The interleukin 1(3 Exonic (+3953) polymorphism does not alter in vitro protein secretion / R. Dominici, G. Malferrari, C. Mariani et al. // Experimental and Molecular Pathology. 2002. - Vol. 73. — P. 139-141.

76. Feldmann, M. Pathogenesis of arthritis: recent research progress. / M. Feldmann //Nature immunology. 2001. - Vol.2., №9. - P. 771-773.

77. Ferucci, E. D. Rheumatoid Arthritis in American Indians and Alaska natives: a review of the literature. / E. D. Ferucci, D. W. Templin, A.P. Lanier // Seminars in Arthritis and Rheumatism. 2004. — Vol. 34. — P. 662 - 667.

78. Fonseca, JE. Contribution for new genetic markers of rheumatoid arthritis activity and severity: sequencing of the tumor necrosis factor-alpha gene promoter/ JE. Fonseca, J. Cavaleiro, J. Teles // Arthritis Research &Therapy. 2007. - Vol. 9. - P. 1-10.

79. Fung, H.C. Heat shock protein 70 and tumor necrosis factor alpha in Taiwanese patients with dementia / H.C. Fung, C.M. Chen, Y.R. Wu et al. // Dementia and Geriatric Cognitive Disorders. 2005. - Vol. 20. - P. 1-7.

80. Goldfeld, A.E. Post-genomic and the neutral theory: variation and conservation in the tumor necrosis / A. E. Goldfeld, J.Y. Leung, S. A. Sawyer, D.L. Hartl // Gene. 2000. - Vol. 261. - P. 19-25.

81. Gregersen, P.K. Genetics of autoimmune diseases disorders of immune homeostasis / P.K. Gregersen, T. W. Behrens // Genetics. - 2006. -Vol. 7.-P. 917-927.

82. Grover, S. Interleukin-1 receptor antagonist gene polymorphism in patients with rheumatoid arthritis in India / S. Grover, S. Tandon, R. Misra, A. Aggarwal // Indian Journal of Medical Research. 2006. - Vol. 123. — P. 815-820.

83. Hahn, L.W. Ideal discrimination of discrete clinical endpoints using multilocus genotypes/ L.W. Hahn, J.H. Moore // In Silico Biology. -2004.-Vol. 4.-P. 183-194.

84. Hajeer, A.H. TNF-a gene polymorphism: clinical and biological implications / A.H. Hajeer, I.V. Hutchinson // Microscopy research and technique. 2000. - Vol. 50. - P. 216-228.

85. Hall, S.K. Correlation of polymorphic variation in the promoter region of the interleukin-1 (3 gene with secretion of interleukin-1(3 protein / S.K. Hall, D.G. Perregaux, C.A. Gabel et al. // Arthritis & Rheumatism. -2004. -Vol. 50. P. 1976-1983.

86. Harney, S. Genetic epidemiology of rheumatoid arthritis / S. Harney B. P. Wordsworth // Tissue Antigens. 2002. - Vol. 60. - P. 465473.

87. Haukim, N. Cytokine gene polymorphism in human disease: online databases, Supplement 2./ N. Haukim, J. L. Bidwell, A. J. P. Smith et al.// Genes & Immunity. -2002. Vol. 3. - P. 313-330.

88. Heesen, M. Rapid genotyping for tumor necrosis factor-a (TNF-a) -863C/A promoter polymorphism that determines TNF-a response / M. Heesen, D. Kunz, M. Wessiepe et al. // Clinical Chemistry. 2004. - Vol. 50.-P. 226-228.

89. Higuchi, T. Polymorphism of the 5'-flanking region of the human tumor necrosis factor (TNF)-alpha gene in Japanese / T. Higuchi, N. Seki, S. Kamizono et al. // Tissue Antigens. 1998. - Vol. 51. -P. 605-612.

90. Hoolegaard, M.V. Cytokine gene polymorphism in human disease: on-line databases, Supplement 3 / M.V. Hollegaard, J.L. Bidwell // Genes & Immunity. 2006. - Vol. 7. - P. 269-276.

91. Huang, C.-M. Interleukin-lb and interleukin-1 receptor antagonist gene polymorphisms in rheumatoid arthritis / Huang, C.-M., Tsai F.-J., Wu J.Y., Wu M.-C. // Scandinavian Journal of Rheumatology 2001. - Vol. 30. -P. 225-228.

92. Huang, D.R. No evidence for interleukin-4 gene conferring susceptibility to myasthenia gravis / D.R. Huang, Y.H. Xia, R. Pirskanen, L. Liu, A.K. Lefvert // Journal of Neuroimmunology. — 1998. — Vol. 92. P. 208-211.

93. Hurme, M. II-1 receptor antagonist (IL-IRa) plasma levels are co-ordinately regulated by both IL-IRa and IL-ip genes / M. Hurme, S. Santilla //European Journal of Immunology. 1998. -Vol. 28. - P. 2598-2602.

94. Kang, C.P. The influence of a polymorphism at position -857 of the TNFa gene on clinical response to etanercept therapy in Rheumatoid Arthritis / C.P. Kang, K.W. Lee, D.H. Yoo// Rheumatology. 2005. - Vol. 44. - P.547-552.

95. Karhukorpi, J. IL-1 receptor antagonist gene polymorphism in recurrent spontaneous abortion / J. Karhukorpi, T. Laitinen, H. Kivela, A. Tiilikainen, M. Hurme// Journal of Reproductive Immunology. 2003. - Vol. 58.-P. 61-67.

96. Klein, I. The HLA system first part / I. Klein, A.Sato // The New England Journal of Medicine. 2000. - Vol. 343., №10. - P 702-709.

97. Park, K.S. Association of TNFA promoter region Haplotype in Behcet's disease / K.S. Park, N. Y. Kim //Journal of Korean Medical Science. 2006. - Vol. 21 - P. 596-601.

98. Kwok, P-Y. Methods in Molecular Biology vol. 212, Single Nucleotide Polymorphisms: Methods and Protocols/ P-Y. Kwok. Totowa: Humana Press Inc, 2003. -269 P.

99. Lacki, J.K. TNF-alpha gene polymorphism does not affect the clinical and radiological outcome of rheumatoid arthritis / J.K. Lacki, R. Moser, I. Korczowska, S. Mackiewicz, W. Muller // Rheumatology International. 2000. - Vol. 19. - P. 137-140.

100. Lee, D.M. Rheumatoid arthritis. / D.M. Lee, M.E. Weinblatt // The Lancet.-2001.-Vol. 358.-P. 903-911.

101. Llanos, C. The influence of -238 and -308 TNF alpha polymorphisms on the pathogenesis and response to treatment in rheumatoid arthritis / C. Llanos, L. Soto, F. Sabugo et al. // Revista médica de Chile. — 2005.-Vol. 133.-P. 1089-1095.

102. Ma, S.L. Association between tumor necrosis factor-a promoter polymorphism and Alzheimer's disease/ S.L. Ma, N.L.S. Tang, L.C.W. Lam et al. //Neurology. 2004. - Vol. 62. - P. 307-309.

103. Makhatadze, N.J. Tumor necrosis factor locus: genetic organization and biological implications / N.J. Makhatadze // Human Immunology. 1998. - Vol.59. -P.571-579.

104. Manchanda, P.K. Interleukin-1 p and receptor antagonist (IL-IRa) gene polymorphisms and the prediction of the risk of end-stage renal disease/ P.K. Manchanda, A. Kumar, H.K. Bid, R.D. Mittal // Biomarkers. 2006. -Vol. 11.-P. 164-173.

105. Martin, A.-M. Population frequencies of single nucleotide polymorphisms (SNPs) in immuno-modulatory genes/ A.-M. Martin, G. Athanasiadis, J.D. Greshock et al. // Human heredity. 2003. - Vol. 55. - P. 171-178.

106. McInnes, I.B. Cytokines in the pathogenesis of rheumatoid arthritis / I.B. Mclnnes, G. Schett // Immunology. 2007. - Vol. 7. - P. 429442.

107. Meyer, J.M. Tumour necrosis factor markers show sex-influenced association with rheumatoid arthritis / J.M. Meyer, J. Han, G. Moxley // Arthritis & Rheumatism. 2001. - Vol. 44. -P. 286-295.

108. Miceli-Richard, C. A single tumour necrosis factor Haplotype influences the response to adalimumab in rheumatoid arthritis / C. Miceli-Richard, E. Comets, C. Verstuyft et al.// Annals of the Rheumatic Diseases. — 2008. Vol. 67. - P. 478-484.

109. Moreno, O. Polymorphisms in the IL4 and IL4RA genes in Colombian patients with rheumatoid arthritis / O. Moreno, C. Gonzalez, D. Saaibi et al. // The Journal of Rheumatology. 2007. - Vol. 34. - P. 36-42.

110. Morgan, G.J. Hapoltypes in the tumour necrosis factor region and myeloma / G.J. Morgan, P.J. Adamson, F.K. Monsah // British Journal of Haematology. 2005. -Vol. 129. - P. 358-365.

111. Mout, R. Repeat polymorphisms in the interleukin-4 gene / R. Mout, R. Willemze, J.E. Landegent // Nucleic Acids Research. 1991. — Vol. 19., №13. - P. 3763.

112. Mugnier, B. Polymorphism at position —308 of the tumor necrosis factor gene influences outcome of Infliximab therapy in Rheumatoid Arthritis / B. Mugnier, N. Balandroud, A. Darque // Arthritis & Rheumatism. 2003. — Vol. 48.-P. 1849-1852.

113. Nakashima, H Association between 11-4 genotype and IL-4 production in the Japanese population / H. Nakashima, K. Miyake, Y. Inoue et al. // Genes and Immunity. 2002. - Vol.3 - P. 107-109.

114. Nemec, P. Polymorphism in the tumor necrosis factor-alpha gene promoter is associated with severity of rheumatoid arthritis in the Czech population/ P. Nemec, M. Pavkova-Goldbergova, M. Stouracova // Clinical Rheumatology. 2008. - Vol. 27. - P. 59-65.

115. Newton, J. The effect of HLA-DR on susceptibility to rheumatoid arthritis is influenced by the associated lymphotoxin a — Tumor necrosis factor Haplotype / J. Newton, M. Brown, A. Milicic et al.// Arthritis and Rheumatism. -2003. Vol. 48. - P. 90-96.

116. Nicklin, M.J.H. A physical map of the region encompassing the human interleukin-la, interleukin-1 p and interleukin-1 receptor antagonist genes / M.J.H. Nicklin, A. Weith, G.W. Duff// Genomics. 1994. - Vol. 19.- P.382-384.

117. Park, K.S. Association of TNFA promoter region Haplotype in Behcet's disease / K.S. Park, N. Y. Kim //Journal of Korean Medical Science.- 2006. Vol. 21 - P. 596-601.

118. Pociot, F. A Taq I polymorphism in the human interleukin-lp (II-1P) gene correlates with IL-ip secretion in vitro / F. Pociot, J. Molvig, L. Wogensen, H. Worsaae, J. Nerup // Eur. J. Clin. Invest. 1992. - Vol. 22. -P. 396-402.

119. Pollard, L. Rheumatoid arthritis: non-tumor necrosis factor targets / L. Pollard, E.Choy // Current Opinion in Rheumatology. 2005. Vol. 17. -P. 242-246.

120. Rezaieyazdi, Z. Tumour necrosis factor a -308 promoter polymorphism in patients with rheumatoid arthritis/ Z. Rezaieyazdi, J.T. Afshari, M. Sandooghi, F. Mohajer // Rheumatology international. 2007. -Vol. 28.-P. 189-191.

121. Ricardson, A. Nucleotide diversity of the TNF gene region in an African village / A. Richardson, F. Sisay-Joof, H. Ackerman et al. // Genes and Immunity. 2001. - Vol. 2. - P. 343-348.

122. Rincón, I. HLA-DRB1 alleles associated with susceptibility or resistance to rheumatoid arthritis, articular deformities, and disability in Mexican Americans / I. Rincón, A. Escalante// Arthritis & Rheumatism. -1999. Vol. 42. - P. 1329-1338.

123. Ritchie, M.D. Multifactor dimensionality reduction for detecting gene-gene and gene-environment interaction in pharmacogenomics studies / M.D. Ritchie, A.A. Motsinger // Pharmacogenomics. 2005. - Vol. 6(8). - P. 823-834.

124. Santilla, S. Presence of the IL-IRa allele 2 (IL1RN*2) is associated with enhcanced IL-1J3 production in vitro / S. Santilla, M. Hurme // Scandinavian Journal of Immunology. 1998. - Vol. 47. — P. 195-198.

125. Seki, N Polymorphism in 5'-flanking region of TNF in patients with Rheumatoid Arthritis / N. Seki, S. Kamizono, A. Yamada, et al. // Tissue Antigens. -1999. Vol. 54. - P. 194-197.

126. Shiina, T. An update of HLA genomic region, locus information and disease association: 2004 / T. Shiina, H. Inoko, J.K. Kulski // Tissue Antigens.-2004. -Vol. 64. P. 631-649.

127. Skoog, T. Allele-specific chromatin remodeling of the tumor necrosis factor-a promoter / T. Skoog, A. Hamsten, P. Eriksson // Biocemical and Biophysical Research Communications. 2006. — Vol. 351. — P. 777-783.

128. Sokal, R.R. Biometry: the principles and practice of statistics in biological research / R.R Sokal, F.J. Rolf. N.Y.: Freeman & Co, 1995. -850 p.

129. Song, Y. Haplotyping of TNFa gene promoter using melting temperature analysis: detection of a novel -856 G/A mutation / Y. Song, J. Araki, L. Zhang, et al.// Tissue Antigens. 2005.- Vol. 66. - P. 284-290.

130. Symmons D.P.M. Environmental factors and the outcome of rheumatoid arthritis / D.P.M. Symmons //Best Practice & Research Clinical Rheumatology. 2003. - Vol. 17., № 5. - P. 717-727.

131. Symmons, D.P.M. Classification criteria for rheumatoid arthritis— time to abandon rheumatoid factor?/ D.P.M. Symmons// Rheumatology. — 2007. Vol. 46. - P. 725-726.

132. Tarlow, J.K. Polymorphism in human IL-1 receptor antagonist gene intron is caused by variable numbers of an 86-bp tandem repeat /

133. J.K. Tarlow, A.I. Blakemore, A. Lennard et al. // Human Genetics. 1993. -Vol. 91.-P. 403-404.

134. Tolusso, B. Il-lb and IL-1RN gene polymorphisms in rheumatoid arthritis: relationship with protein plasma levels and response to therapy / B. Tolusso, D. Pietrapertosa, A. Morelli et al. // Pharmacogenomics. — 2006. — Vol. 7.-P 683-685.

135. Udalova, I.A. Highly informative typing of the human TNF locus using six adjacent polymorphic markers / I.A. Udalova, S.A. Nedospasov, G.C. Webb et al. // Genomics. 1993. - Vol. 16. - P. 180-186.

136. Vanderbroeck, K. Occurrence and clinical relevance of an 11-4 gene polymorphism in patients with multiple sclerosis/ K. Vanderbroeck, G. Martino, M.G. Marrosu et al. // Journal of Neuroimmunology. 1997. -Vol. 76.-P. 189-192.

137. Vijgen L. Interleukin-1 receptor antagonist VNTR-polymorphism in imflammatory bowel disease / L.Vijgen, M. Van Gysel, A. Rector et al.// Genes and Immunity. 2002. - Vol. 3.- P. 400-405.

138. Vinasco, J. Polymorphism at the TNF loci in rheumatoid arthritis / J. Vinasco, Y. Beraun, A. Nieto et al. // Tissue Antigens. 1997. — Vol. 49. —1. P. 74-78.

139. Worthington, J. Investigating the genetic basis of susceptibility to rheumatoid arthritis / J. Worthington// Journal of Autoimmunity. 2005. -Vol. 25.-P. 16-20.

140. Wu, M-C. Polymorphisms of the interleukin-4 gene in Chinese patients with systemic lupus erythematosus in Taiwan / M-C. Wu, CM. Huang, J.J.P. Tsai, H-Y. Chen, F-J. Tsai // Lupus. 2003. - Vol. 12. - P. 21-25.

141. Yamamoto, K. Genome-wide single nucleotide polymorphism analyses of rheumatoid arthritis / K. Yamamoto, R. Yamada// Journal of autoimmunity. -2005. Vol. 25. - P. 12-15.