Взаимодействие цитокина ФНО с некультивируемыми и вегетативными формами сальмонелл тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.07, кандидат медицинских наук Томова, Александра Сашова

• Томова, Александра Сашова
• кандидат медицинских наук
• 2006

Оглавление диссертации кандидат медицинских наук Томова, Александра Сашова

Список принятых сокращений.

Введение.

Глава I. Обзор литературы.

1. Некультивируемые формы патогенных бактерии.

2. Рекультивация некультивируемых форм патогенных бактерии в вегетативные форм.

3. Бактерии, цитокины, инфекционный процесс.

3.1. Влияние цитокинов на скорость бактериального роста.

4. Общие аспекты биологии и истории ФНО-а.

4.1. Роль цитокина ФНО-а во взаимодействии макро- и микроорганизма.

Глава II. Материалы и методы.

1. Среды, штаммы бактерии.

2. Лабораторная модель индукции некультивируемого состояния (НС) S.typhimurium.

3. Биологическая модель инфекционного процесса.

4. у-облучение лабораторных животных.

5. Выделение РНК из клеток.

5.1. Выделение суммарной РНК из культуры клеток селезенок лабораторных мышей.

5.2. Выделение РНК суспензии клеток сальмонелл.

5.3. Очистка РНК от ДНК.

5.4. Получение кДНК гена ФНО.

5.5. ПЦР.

5.6. Электрофорез в агарозном геле.

6. Количественное определение ФНО на линии чувствительных клеток L929.

7. Иммобилизация ФНО на ЭСА агарозе.

8. Фингерпринтирование кДНК по РНК

9. Протеомный анализ.

10. Связывание сальмонеллы с рекомбинантным белком ФНО-спейсер-ЦСД, иммобилизированном на целлюлозе.

Глава Ш. Результаты и обсуждение.

1. Взаимодействия ФНО с НФ S. typhimurium in vitro и in vivo.

2. Взаимодействие ФНО с ВФ S. typhimurium in vitro.

3. Взаимодействие ФНО с ВФ S. typhimurium

In vivo.

4. Динамика размножения бактерий в органах инфицированных животных при повышенной продукции.

5. Исключение посреднической роли эукариотических рецепторов при взаимодействии ФНО с клетками сальмонелл in vivo.

6. Доказательство прямого связывания ФНО с бактериальной клеткой in vitro с помощью иммобилизации ФНО.

7. Экспрессия бактериальных генов при добавлении

ФНО в среду инкубации клеток.

8. Экспрессии белков при добавлении ФНО в среду роста бактерий.

9. Доказательство прямого связывания сальмонелл с рекомбинантным белком ФНО-спейсер-ЦСД, иммобилизированном на целлюлозе и идентификация бактериального белка, участвующего в этом взаимодействии.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Взаимодействие цитокина ФНО с некультивируемыми и вегетативными формами сальмонелл»

Хорошо известно, что микроорганизмы, попадая в неблагоприятные для роста и размножения условия, включают все возможные адаптационные механизмы, позволяющие им пережить эти условия и сохранить жизнеспособность до наступления благоприятных условий. Условия, являющиеся стрессовыми для бактерий, известны. Так, для Salmonella enterica serovar typhimurium такими условиями являются резкое ограничение питательных веществ и понижение температуры. При инкубации в «микрокосме», который является средой без питательных веществ, и при комнатной температуре, т.е. при моделировании таких условий в лаборатории, сальмонеллы переходят в некультивируемое состояние (НС). В таком состоянии бактериальные клетки долго остаются жизнеспособными и при смене неблагоприятных условий на благоприятные могут вернуться обратно в активное вегетативное состояние (ВС). Многие факторы, влияющие на переход бактерии разных видов в НС известны. Это и концентрация питательных веществ, солей, температура среды [Гинцбург A.JL, 1999; Литвин В.Ю., 2001]. Исследованы и некоторые условия, приводящие к возврату в активное состояние или рекультивации. Например, показано, что выход из состояния покоя в лабораторных условиях может активироваться сменой температуры, повышением концентрации питательных веществ, действием окислителей, изменением рН. В природных экосистемах реверсия из бактерий НС происходит, например, под действием простейших (инфузории, амеб) и растений водоемов [Бухарин О.В., 2005, стр.175]. Установлена рекультивация бактерий под действием автоиндукторов, производимых микроорганизмами в активном состоянии и участвующих в системе «Quorum Sensing»

Reissbrodt R., 2002].

Однако особый интерес для нас представляет возможность рекультивации НФ патогенных бактерий. Гораздо меньше данных о том, что влияет на реверсию микроорганизмов при попадании из окружающей среды в организм чувствительного хозяина. При проведении рекультивации в системе in vitro не всегда получаются положительные результаты по сравнению с рекультивацией тех же НФ, происходящей in vivo.

При изучении бактерий, находящихся в НС, а точнее, феномена рекультивации НФ бактерий, то есть, их обратного перехода из некультивируемого в активное вегетативное состояние, ранее в нашей лаборатории Генной инженерии патогенных микроорганизмов ННИЭМ им. Н.Ф.Гамалеи РАМН было показано, что введение суспензий НФ патогенных штаммов сальмонелл в организм чувствительных лабораторных животных приводит к их рекультивации, в то время, как при добавлении к аналогичным суспензиям богатых питательных сред разного состава и повышении температуры инкубации зачастую дает отрицательные результаты и не приводит к рекультивация [Романова Ю.М., 2000]. Для реверсии из НС возбудителей чумы, листерии и псевдотуберкулеза, находящихся в почвенной вытяжке, как показано в нашем институте, необходимо в среду инкубации добавлять фетальную сыворотку [Литвин В.Ю., 1998; Пушкарева В.И., 1997].

Т.е., для выхода бактерий из НС необходимо наличие специфических факторов макроорганизма, способствующих активации бактериальных генов, контролирующих восстановление нормального роста и размножения. Но, как известно, при попадании в организм, белки бактерий, являющиеся антигенами способны вызывать иммунный ответ. Хорошо изучена роль многих факторов гуморального иммунитета, направленных на элиминацию попавших в организм инфекционных агентов. Однако, взаимодействие паразит-хозяин имеет двустороннюю направленность. Бактерии тоже выработали механизмы защиты или избегания действия факторов хозяина (НС, споры, антигенная мимикрия, L-формы, экранирование клеточной стенки бактерии, продукция факторов, инактивирующих защиту хозяина). По-видимому, эволюционная адаптация привела к тому, что бактерии для собственного выживания способны регулировать продукцию определенных факторов защиты хозяина или даже использовать некоторые из них, например, цитокины, для собственной выгоды. Многие бактерии синтезируют молекулы, способные подавлять продукцию цитокинов клетками хозяина (холерный токсин, токсин Pseudomonas aeruginosa). Цитокины чувствительны к деградации бактериальными протеазами. Незадолго до начала нашей работы стали появляться данные о том, что некоторые микроорганизмы могут напрямую использовать определенные цитокины как ростовые факторы [Wilson М., 1998]. Так, например, было установлено, что добавление ИЛ-lb в культуральную среду усиливает скорость роста клеток Escherichia coli. Оказалось, что ИЛ-2, ИЛ-3 и ГМ-КСФ являются ростовыми факторами для Leismania sp. in vitro и in vivo. Рекомбинантный ИЛ-6 (рИЛ-6) увеличивает рост Mycobacterium avium. Трансформирующий ростовой фактор pi (TGFpl) и ФНО стимулируют рост Mycobacterium tuberculosis в макрофагах и моноцитах человека. В связи с этим встал вопрос, как такие факторы иммунной системы организма, как цитокны, могут активизировать жизнедеятельность патогенных бактерии? Влияют ли цитокины на бактерии в НС? Почему бактерия, попадая в организм хозяина, в котором огромное количество защитных механизмов, переходит из НС в ВС и способна вызывать инфекционный процесс?

Поэтому, целью данного исследования является изучение феномена и механизмов активации патогенных бактерии на модели S.typhimurium, связанных с действием цитокина ФНО in vitro и in vivo.

В соответствии с поставленной целью в процессе выполнения диссертационной работы предстояло решить следующие основные задачи:

• изучить влияние цитокина ФНО на рекультивацию НФ и на размножение бактериальных клеток in vitro.

• изучить влияние ФНО на рекультивацию НФ и на размножение бактериальных клеток in vivo.

• выявить роль эукариотических рецепторов во взаимодействии ФНО с клетками сальмонелл in vivo.

• изучить влияние ФНО на уровень экспрессии бактериальных генов in vitro.

• изучить влияние ФНО на продукцию белков в клетках сальмонелл при добавлении цитокина ФНО в среду инкубации.

• Выявить механизм взаимодействия цитокина ФНО с бактериальной клеткой in vitro.

Научная новизна.

-Впервые показана способность бактерий S.typhimurium использовать гуморальный фактор иммунной защиты организма -цитокин ФНО в процессе своей жизнедеятельности. Впервые показан феномен рекультивации некультивируемых форм S.typhimurium in vitro и ускорение процесса перехода из некультивируемого состояния в активное вегетативное in vivo при добавлении ФНО в среду роста или при заражении лабораторных животных соответственно.

-Установлено увеличение количества микробных клеток в органах инфицированных животных при повышенном содержании цитокина ФНО, как вследствие его экзогенного добавления, так и при индукции его повышенного синтеза в организме мышей при облучении.

-Установлена повышенная экспрессия определенных бактериальных генов S.typhimurium под действием ФНО in vitro, связанных с транскрипцией, метаболизмом бактерий, с регуляторным механизмом «quorum sensing» и синтезом мембранных белков. При сравнительном протеомном анализе показана дифференциальная продукция белков при инкубации культуры клеток S.typhimurium с и без добавления ФНО in vitro.

-При помощи генетической конструкции, содержащей ген ФНО, доказано прямое взаимодействие цитокина ФНО с бактериальными клетками S.typhimurium и впервые показано участие в этом бактериального белка - фактора элонгации EF-Tu.

Заключение диссертации по теме «Микробиология», Томова, Александра Сашова

ВЫВОДЫ

1. На модели S.typhimurium показано прямое взаимодействие цитокина ФНО и бактериальной клетки in vitro, прводящее к увеличению скорости роста бактериальной культуры.

2. Показано, что при добавлении ФНО происходит рекультивация некультивируемых форм S.typhimurium in vitro и ускорение процесса перехода из некультивируемого состояния в активное вегетативное in vivo.

3. Установлено, что экзогенное добавление цитокина ФНО к суспензии бактериальных клеток при инфицировании и индукция его повышенного синтеза при облучении лабораторных животных до заражения приводят к ускорению размножения микробных клеток в органах инфицированных животных.

4. Установлена повышенная экспрессия определенных бактериальных генов, связанных с репликацией; метаболизмом бактерий, с регуляторным механизмом «quorum sensing» и синтезом возможных мембранных белков- при взаимодействии S:typhimurium с ФНО in vitro.

5. Сравнительный протеомный анализ показал дифференциальную экспрессию белков при инкубации культуры клеток S.typhimurium с и без добавления ФНО in vitro.

6. При помощи генетической конструкции, содержащей ген ФНО доказано непосредственное взаимодействие цитокина ФНО с бактериальными клетками S.typhimurium и участия в этом фактора элонгации Ти.

Благодарности.

Выражаем благодарность Шингаровой JI.H. (ИБХ РАН) за постоянное безвозмездное предоставление нам генно-инженерного препарата ФНО;

Щегловитовой О.Н., за обучение навыкам иммунологических исследований и за совместную работу по определению ФНО на чувствительной линии клеток.

Гривенникову С.И. (ИМБ РАН) за любезное предоставление мышей, нокаутированных по генам-рецепторам к ФНО;

Межинститутскому Центру коллективного пользования «ГЕНОМ» ИМБ РАН (http://www.genome-centre.narod.ru/), за секвенирование ДНК;

Сотрудникам лаборатории генетической регуляции биохимических процессов под руководством Лунина В.Г. за создание белковой конструкции ФНО-ЦСД-целлюлоза.

Сотрудникам протеомного центра при НИИ БМХ им. Ореховича Говоруну В.М., Бодоеву Н.В., Тихоновой О.В, Торопыгину И., за протеомное картирование.

Работа выполнялась при финансовой поддержке РФФИ, Грант № 04-48500.

Заключение.

Теперь хорошо известно, что все живые клетки обладают способностью существовать в нормальном пролиферативном или вегетативном состоянии, а при определенных условиях переходить в альтернативное состояние покоя или, в случае грамотрицательных бактерий, в некультивируемое состояние. Природные популяции бактерий представляют собой динамическую систему, состоящую из активных и неактивных или некультивируемых форм. Покоящиеся или некультивируемые микробы составляют до 60% от всей микробной популяции на Земле и это состояние является естественным способом существования микробов в природе. Среди этих покоящихся микроорганизмов, как теперь выясняется, много еще не описанных представителей микроорганизмов, выявление и изучение которых может способствовать новому взгляду на проблемы эволюции, развития, инфекционной патологии и экологии бактерий. Перестройка генетического аппарата известных патогенных бактерий, возбудителей инфекционных заболеваний, в ответ на изменения условий существования, при попадании в организм хозяина или существовании в окружающей среде, позволяют им не только сохранить жизнеспособность и свой патогенный потенциал будучи в некультивируемом состоянии, но и реверсировать опять в состояние активного роста и размножения и вызывать инфекцию. Как видно из данных литературы и настоящей работы, в ходе совместной эволюции микро- и макроорганизмов, патогенные бактерии выработали механизмы, позволяющие им использовать даже факторы иммунной защиты организма (цитокины) для активации своего роста и размножения. Кроме того, в настоящее время интенсивно изучается также регуляторная система бактерий, получившая название "Quorum sensing", в ходе реализации которой многие представители бактерий сами способны синтезировать вещества, называемые автоиндукторами, которые также способствуют активации и экспрессии определенных генов бактериальных клеток как своего вида, так родственных бактерий как in vitro, так и in vivo. Было показано что автоиндуктор, синтезируемый некоторыми энтеробактериями в присутствии человеческого гормона норепинеприна также обладает способностью индуцировать рекультивацию некультивируемых форм (НФ) E.coli 0157 и Salmonella enterica ser. Typhimurium in vitro. Молекулярные механизмы этой активации неизвестны, но это позволяет провести экстраполяцию полученных экспериментальных данных на взаимодействие бактерий в макроорганизме. Попадание в макроорганизм бактерий, способных синтезировать такие универсальные автоиндукторы, может инициировать переход персистирующих в этом организме в манифестные формы или способствовать активации некультивируемых форм бактерий, попавших в него из окружающей среды. В данной работе мы показали феномен рекультивации некультивируемых форм сальмонелл под действием иммунного фактора макроорганизма, предназначенного для его защиты от патогенов — цитокина фактора некроза опухолей и in vitro и in vivo. Нами в системе in vitro выявлены некоторые гены и белки, экспрессия и накопление которых, соответственно, увеличивается при наличие в среде ФНО. Для моделирования влияния увеличенного, по сравнению с нормой, количества цитокина на рост и размножение бактерий in vivo, в организме хозяина, мы создали условия его повышенного уровня в организме за счет индукции его синтеза под действием облучения. Более того, при создании генетической конструкции, включающей слияния гена, кодирующего целлюлозосвязывающий домен белка и гена, кодирующего ФНО, удалось получить молекулярное доказательство прямого связывания ФНО с бактериальными клетками и идентифицировать бактериальный белок -EFTu, непосредственно участвующий в этом взаимодействии. Таким, образом, в данной работе удалось выявить и расшифровать еще один из адаптационных механизмов, с помощью которого патогенные бактерии реализуют свой патогенный потенциал при взаимодействии с макроорганизмом, что позволяет нам внести свой маленький вклад в решение проблем экологии бактерий и инфекционной патологии

Список литературы диссертационного исследования кандидат медицинских наук Томова, Александра Сашова, 2006 год

1. Аляпкина Ю.С., 2003, Некультивируемые формы бактерии: выявление и изучение экспрессии генов с помощью количественного варианта ПНР, Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук.

2. Бошнаков Р.Х., Романова Ю.М., Зигангирова Н.А., Гинцбург А.Л.,2001, Дифференциальная экспрессия генов в культивируемых и некультивируемых формах Salmonella typhimurium, Молекулярная генетика, микробиология, вирусология, №3, С.8-12.

3. Булыгина Е.Р., Телепнева В.И., Кузовлева О.Б., 1983, Иммобилизация НАД-киназы из сердце голубя на одифиле и доказательство активности мономера, Докл. АН СССР, Т. 269. № 4, С.980-983.

4. Бухарин О.В., Гинцбург А.Л., Романова Ю.М., Эль-Регистан Г.И., 2005, Механизмы выживания бактерий, Москва, Медицина, С.242.

5. Васекина А.В., Ершов П.В., Решетова О.С., Тихонова Т.В., Лунин

6. B.Г., Трофимова М.С., Бабаков А.В., 2005, Вакуолярный Na+/H+-антипортер ячменя: идентификация и реакция на солевой стресс., Биохимия, том 70, вып. 1, с. 123 132.

7. Гинцбург А.Л., Ильина Т.С., Романова Ю.М., 2003, «Quorum sensing», или социальная жизнь бактерий, Журн. Микробиол., №4,1. C.86-93.

8. Гинцбург А.Л., Романова Ю.М., Алексеева Н.В., и др., 1999, Механизм действия и природа факторов, индуцирующих образование некультивируемых форм у Salmonella typhimurium., Журн. Микробиол., N6, С.3-7.

9. Говорун В.М., Мошковский С.А., Тихонова О.В. и др, 2003, Сравнительная характеристика протеомных карт клинических изолятов Helicobacter pylori, Биохимия, т 68, вып 1, С.52-60.

10. Ю.Гривенников С.И., 2003, Биологические функции фактора некроза опухолей, продуцируемого отдельными видами клеток иммунной системы, Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук.

11. П.Гурвич А.Е., Капнер Р.Б., Незлин Р.С., 1959, Выделение чистых антител при помощи фиксированных на целлюлозе антигенов и изучение их свойств. Биохимия, Т. 24, с. 142.

12. Кашкин К.П., 1998, Цитокины иммунной системы: основные свойства и иммунобиологическая активность, Клин лаб диагностика, N11, С. 21-32.

13. Кетлинский С.А., Калинина Н.М., 1995, Цитокины мононуклеарных фагоцитов в регуляции реакции воспаления иммунитета, Иммунология, N3, С. 30-44.

14. Кузовлева О.Б., Пенарт Э.П., Коллист А.П., Труус К.Э., 1989, Свойства аффинных носителей одигозы и одифила (этилсульфоактивированной агарозы), Прикладная биохимия и микробиология, №3, стр. 417-423.

15. Литвин В.Ю., Гинцбург А.Л., Пушкарева В.И., и др., 1998, Эпидемиологические аспекты экологии бактерий, М.

16. Литвин В.Ю., Гинцбург А.Л., Пушкарева В.И., Романова Ю.М., 2000, Обратимый переход патогенных бактерий в покоящееся (некультивируемое) состояние: экологические и генетические механизмы., Вестник РАМН, N1, С. 7-13.

17. Литвин В.Ю., Пушкарева В.И., Солохина JI.B. и др., 2001, Эколого-генетические механизмы перехода Salmonella typhimurium в покоящееся состояние в окружающей среде, Журн.микробиол., N6, С. 32-36.

18. Лящук A.M., 2005, Получение и характеристика рекомбинантного белка TUL4, потенциального компонента генно-инженерной субъединичной противотуляремийной вакцины, Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук.

19. Митов И., Галанос К., Фройденберг М., 1999, Мишки, дефицитни на интерферон -у рецептор (IFNyR-/-), са силно възприемчиви към S.typhimrium, но не са чувствителни към ендотоксина по време на инфекцията, Инфектология, ХХХУ1, 2, С. 34-38.

20. Митов И., Галанос К., Фройденберг М., 1999, Мишки, дефицитни на рецептор 1 за тумор некрозис фактор (TNFR1-/-), са силно чувствителни към S.typhimrium и ендотоксин по време на инфекцията, Infectology, ХХХУ1, 2, 26-2.

21. Мушкамбаров Н.Н., Кузнецов С.Л., 2003, Молекулярная биология, Издательство МИА, Москва, С. 392, 480.

22. Новоселова Е.Г., Макар В.Р., Семилетова Н.В. и др., Продукция фактора некроза опухолей (ФНО) макрофагами и Т-лимфоцитами грызунов в условиях острого у-облучения-Радиационная иммунология., 1998, т.38, С. 690-695.

23. Оганесян Э.Т., Руководство по химии, 1991, С.14.

24. Потапнев М.П., 2002, Апоптоз клеток иммуной системы и его регуляция цитокинами, Иммунология, №4, С. 237-243.

25. Пушкарева В.И., Емельяненко Е.Н., Литвин В.Ю., 1997, Патогенные листерии в почве и в ассоциации с водорослями: обратимый переход в некультивируемое состояние., ЖМЭИ, №3, с.3-7.

26. Пушкарева В.И., Емильяненко Е.Н., Диденко Л.В., и др., 1998, Покоящиеся формы Yersinia pseudotuberculosis при взаимодействии с зелеными водорослями и их экзометаболитами, ЖМЭИ, №5., С.9-13.

27. Романова Ю.М., Алексеева Н.В., Гинцбург А.Д., 1997, Некультивируемое состояние у патогенных бактерии на примере Salmonella typhimurium: феномен и генетический контроль. Журн. Микробиол., №4, С.35-41.

28. Романова Ю.М., Бошнаков Р.Х., Баскакова Т.В., Гинцбург А.Л., 2000, Механизмы активации патогенных бактерий в организме хозяина. Журн микробиол, 4(прил), С. 7-11.

29. Романова Ю.М., Терехов А.А., Гинцбург A.JL, 1995, Выделение и характеристика мутантов Salmonella typhimurium с нарушенным процессом образования некультивируемых форм, Генетика, N31 (8), С. 1073- 1078.

30. Романова Ю.М., Чегаева Е.В., Гинцбург А.Д., 1998, Некультивируемое состояние у патогенных бактерии: известные и возможные факторы индукции обратимого процесса, Молекул. Генетика, №3, С. 3-8.

31. Сингер М., Берг П., 1998, Гены и геномы, в двух томах «Мир»

32. Сучков Ю.Г., Худяков И.В., Емильяненко Е.Н., 1997, О возможности сохранения возбудителя чумы в почве в покоящейся (некультивируемой) форме, ЖМЭИ, №4, С.42-46.

33. Фильченков А.А., Степанов Ю.М., Липкин В.М., Кушлинский Н.Е., 2002, Участие системы Fas/Fas-лиганд в регуляции гомеостаза и функционировании клеток иммунной системы Аллерг. и иммун., 3, №1, С. 24-35.

34. Херрингтон С., Макги Дж., 1999, Молекулярная клиническая диагностика. Методы.-М., Мир, С.558.

35. Щегловитова О.Н., Мамонтова Т.В., Орлова Т.Г., 1990, Продукция интерферона чувствительными и резистентными к фактору некроза опухолей линиями L929, Вопросы вирусологии, 35, 1, 70-71.

36. Ярилин А.А., 1997, Система цитокинов и принципы ее функционирования в норме и при патологии, Иммунология, N5, С. 7-14.

37. Ярилин А.А., 1999, Основы иммунологии, Медицина, 600с.

38. Adam-Klages S., Adam D., Wiegmann К. et al., 1996, FAN, a novel WD-repeat protein, couples the p55 TNF-receptor to neutral sphingomyelinase, Cell, 86, P. 937-947.

39. Aggarwal B.B., Aiyer R.A., Pennica D., Gray P.W., Goeddel D.V., 1987, Human tumor necrosis factors: structure and receptor interactions, Tumour necrosis factor and related cytotoxins. Chichester: J.Wiley & Sons, P. 39-51.

40. Algood H.M., Lin P.L., Yankura D., Jones A., Chan J., Flynn J.L., 2004, TNF Influences Chemokine Expression of Macrophages In Vitro and That of CDllb(+) Cells In Vivo during Mycobacterium tuberculosis Infection, J. Immunol., 172, P. 6846-6857.

41. Ashkenazi A., Dixit V.M., 1998, Death Receptor: Signaling and Modulation, Science, V. 281, P. 1305-08.

42. Baglioni C., Ruggiero V., Latham K., Johnson S.E., 1987, Cytocidal activity of tumour necrosis factor: protection by protease inhibitors., Ciba Found Symp.,V.131, P.52-63.

43. Banner D., D'Arcy A., Janes W., 1993, Crystal Structure of the Soluble Human 55kd TNF Receptor Human TNF3 Complex: Implication for TNF Receptor Activation, Cell, Vol.73, P. 431-445.

44. Banner D.W., D'Arcy, Gruss H.J., Dower S.K., 1995, Tumor necrosis factor ligand superfamily: involvement in the pathology of malignant lymphomas., Blood, Vol. 85, №12, P. 3378-3404.

45. Baud V. and Karin M., 2001, Signal transduction by tumor necrosis factor and its relatives., Trends Cell Biol., 11, P. 372-377

46. Bazzoni F., Regalia E., 2001, Triggering of antitumor activity through melanoma-specific transduction of a constitutively active tumor necrosis factor (TNF) R1 chimeric receptor in the absence of TNF-alpha Cancer Res., 61(3), P. 1050-57.

47. Becker Y., 2005, CpG ODNs Treatments of HIV-l Infected Patients May Cause the Decline of Transmission in High Risk Populations A Review, Hypothesis and Implications., Virus Genes, Mar;30(2), 25166.

48. Benedict C.A., Banks T.A., Ware C.F., 2003, Death and survival: viral regulation of TNF signaling pathways, Curr Opin Immunol, 15(1), P.59-65.

49. Beuscher H.U., Rodel F., Forsberg A. Et al., 1995, Bacterial evasion of host immune defense: yersinia enterocolitica encodes a suppressor for TNF-alpha expression., Inf Imm., V.63,1270-1277.

50. Beutler В., Cerami A., 1986, Cachectin/tumor necrosis factor: an endogenous mediator of shock and inflammation., Immunol Res., 5(4), P. 281-93.

51. Beutler В., Cerami A., 1988, The history, properties, and biological effects of cachectin., Biochemistry., Oct 4, 27(20), P. 7575-82.

52. Byrd J J., Xu H-S., Cowell R.R., 1991, Viable but nonculturable bacteria in drinking water, Appl. Environ. Microbiol, V.57, P.875-878.

53. Cairns A.P., Taggart A.J., 2002, Anti-tumor necrosis factor therapy for severe inflammatory arthritis: two years of experience in Northern Ireland., Ulster Med J, Vol. 71(2), P. 101-105.

54. Camelo S., Lafage M. and Lafon M., 2000, Absence of the p55 Kd TNF-alpha receptor promotes survival in rabies virus acute encephalitis, J. Neurovirol., 6, P. 507-518.

55. Caron E, Gross A, Liautard JP, Dornand J., 1996, Brucella species release a specific, protease-sensitive, inhibitor of TNF-alpha expression, active on human macrophage-like cells., J Immunol, Apr 15, 156(8), P. 2885-93.

56. Chomczynski P., SacchiN., 1987, Single-step method of RNA isolation by acid guanidinum thyocyonate-phenol-chloroformextraction, Anal.Biochem., 162, P. 156-159.

57. Clem R.J., 2001, Baculoviruses and apoptosis: the good, the bad, and the ugly, Cell Death Differ, 8, P. 137-143.

58. Colwell R.R., Brayton P.R., Grimes D.J., 1985, Viable but nonculturable V.cholerae and related pathogens in the environment: implication for the release of genetically engineered microorganisms, Bio Technology, V.3, P.817-820.

59. Colwell R.R., Brayton P.R., Herrington D. Et al., 1996, Viable but nonculturable V.cholerae revert to a culturable state in the human intestine, World J.Microbiol, and Biotechnol., V.12, P.28-31.

60. Dallo, S. F., Kannan T. R, Blaylock M.W., Baseman J.B., 2002., Elongation factor Tu and El В subunit of pyruvate dehydrogenase complex act as fibronectin binding proteins in Mycoplasma pneumoniae. Mol. Microbiol., 46, 1041-1051.

61. Deckert-Schluter M., Bluethmann H., Rang A. et al., 1998, Crucial role of TNF receptor type 1 (p55), but not of TNF receptor type 2 (p75), in murine toxoplasmosis, J. Immunol., 160, P. 3427-3436.

62. Denis M., Campbell D., Gregg E.O., 1991; Interleukin-2 and granulocyte-macrophage colony-stimulating factor stimulate growth of a virulent strain of Escherichia coli., Infect Immun. 59(5): 1853-6.

63. Denis M., 1992, Interleukin-6 is used as a growth factor by virulent Mycobacterium avium: presence of specific receptors. Cell Immunol.,Apr 15, 141(1), P. 182-8.

64. DiDonato J.A., Hayakawa M., Rothwarf D.M. et al., 1997, A cytokine-responsive IkappaB kinase that activates the transcription factor NF-kappaB, Nature, 388, P. 548-554.

65. Donelli G., Matarrese P., Fiorentini С., Dainelli В., Taraborelli Т., Di Campli E., Di Bartolomeo S., Cellini L., 1998, The effect of oxygen on the growth and cell morphology of Helicobacter pylori. FEMS Microbiol Lett. Nov 1; 168(1):9-15.

66. Ezell T.N., Maloney N., Githua J.W., Taylor L.D., 2003, Exposure to the anti-TNF-alpha drug thalidomide induces apoptotic cell death in human T leukemic cells., Cell Mol Biol, Nov, 49(7), P. 1117-24.

67. Filler SG., Yeaman M.R., Sheppard D.C., 2005, Tumor necrosis factor inhibition and invasive fungal infections., Clin Infect Dis, Aug 1,41, Suppl 3, P.208-12.

68. Flynn J.L., Goldstein M.M., Chan J. et al., 1995, Tumor necrosis factor-alpha is required in the protective immune response against Mycobacterium tuberculosis in mice, Immunity, 2, P. 561-572.

69. Freestone P.P., Haigh R.D., Williams P.H., Lyte M., 1999, Stimulation of bacterial growth by heat-stable, norepinephrine-induced autoinducers.,

70. FEMS Microbiol Lett. Mar l;172(l):53-60.

71. Fu Y.C., Chi C.S., Yin S.C. et al., 2004, Norepineprine induces apoptosis in neonatal rat cardiomyocytes through a reactive oxygen species TNF alpha-caspase signaling pathway, Cardiovasc Res, 62(3), P. 558-67.

72. Fuqua W.C., Parsec M.R., Greenberg E.P., 2001, Regulation of gene expression by cell-to-cell communication: acyl-homoserinlactone quorum sensing, Annu. Rev.Gen., V.35., P.439-468.

73. Gelder C.M., Thomas P.S., Yates D.H. et al., 1995, Cytokine expression in normal, atopic and asthmatic subject using the combination of sputum induction and the polimerase chain reaction., Thorax., N.50, P.1033-1037.

74. Gollapudi S, Gupta S, Thadepalli H., 2000, Salmonella typhimurium-induced reactivation of latent HIV-l in promonocytic U1 cells is inhibited by trovafloxacin. Int J Mol Med., Jun, 5(6), P. 615-8.

75. Graves P.R., Haystead Taj., 2002, Molecular Biologists Guide to Proteomics, MNBR, V66, N1, P.39-61.

76. Gruss H., Dower S., 1995, Tumor necrosis factor ligand superfamily: involvment in the pathology of malignant lymphomas, Blood, V.85, N12, P. 3378-3404.

77. Hanazawa S., Takeshita A., Amano S. et al., 1993, Tumor necrosis factor-alpha induces expression of monocyte chemoattractant JE via fos and jun genes in clonal osteoblastic MC3T3- El cells, J. Biol. Chem., 268, P. 9526-9532.

78. He F, Morita H, Ouwehand AC, Hosoda M, Hiramatsu M, Kurisaki J, 2002, Isolauri E, Benno Y, Salminen S. Stimulation of the secretion of pro-inflammatory cytokines by Bifidobacterium strains., Microbiol Immunol., 46(11), P. 781-5.

79. Henderson В., Wilson M., 1995, Modulins: a new class of cytokine-inducing, pro-inflammatory bacterial virulence factor., InflammRes. May;44(5): 187-97. Review.

80. Hennet Т., Richter C. and Peterhans E., 1993, Tumour necrosis factor-alpha induces superoxide anion generation in mitochondria of L929 cells, Biochem. J., 289, P. 587-592.

81. Herring A.C., Lee J., McDonald R.A., Toews G.B., Huffnagle G.B., 2002, Induction of Interleukin-12 and Gamma Interferon Requires

82. Tumor Necrosis Factor Alpha for Protective T1-Cell-Mediated Immunity to Pulmonary Cryptococcus neoformans Infection.Infection and Immunity, Vol. 70, № 6, P.2959-64.

83. Higuchi M. and Aggarwal B.B., 1994, TNF induces internalization of the p60 receptor and shedding of the p80 receptor, J. Immunol., 152, P. 3550-3558.

84. Hirono I., Nam В., Kurobe Т., Aoki Т., 2000, Molecular Cloning, Characterization, and Expression of TNF cDNA and Gene from Japanese Flounder Paralychthys olivaceus, J Immunology, 165, P. 4423-27.

85. Horvat R.C., Parmely M.J., 1988, Pseudomonas aeruginosa alkaline protease degrades human gamma interferon and inhibits its bioactivivty., Inf Imm, V.56., P. 1775-1786.

86. Hussong D., Colwell R.R., O'Brien M. Et al., 1987, Viable L.pneumophila not detectable by culture on agar medium, Bio Technology, V.5, P.947-950.

87. Ikuo Hiron, Bo-Hye Nam, Tomofumi Kurobe, Takashi Aoki, 2000, Molecular Cloning, Characterization, and Expression of TNF cDNA and Gene from Japanese Flounder Paralychthys olivaceus, Journal of Immunology, 165, P. 4423-4427.

88. Itoth N., Nagata Sh., 1993, A novel Protein Domain Required for Apoptosis (mutational analisis of human Fas antigen, J Biological Chemistry, Vol. 268, № 15, P. 10932-37.

89. Jones D.M., Sutcliffe E.M., Curry A., 1991, Recovery of viable but non-culturable Campylobacter jejuni., J Gen Microbiol. Oct; 137(10):2477-82.

90. Jones E.Y., Stuart D.I., Walker N.P.C., 1989, Structure of tumor necrosis facor, Nature, Vol. 338, P. 225-228.

91. Jungblut PR., Bumann D., Haas G. et al., 2000, Comparative proteome analysis of Helicobacter pylori, Molecular Microbiology, 36(3), 710725.

92. Jun-ichiro Inoue, Takaomi Ishida, Nobuo Tsukamoto et al., 2000, Tumor Necrosis Factor Receptor-Associated Factor (TRAF) Family: Adapter Proteins That Mediate Cytokine Signaling, Experimental Cell Research, 254, P. 14-24

93. Kanangat S., Meduri Gu., Tolley E.-F. Et al., 1999, Effects of cytokines and endotoxin on the intracellular growth of bacteria. Infect.Immun., 67 (6), P. 2834-2840.

94. Kaper J.B., Sperandio V., 2005, Bacterial cell-to-cell signaling in the gastrointestinal tract., Infect Immun. Jun;73(6):3197-209. Review.

95. Kaprelyants A.S., Kell D.B., 1996, Do bacteria need to communicate with each other for growth?, Trends Microbiol. Jun;4(6):237-42. Review

96. Kievit T.R., Iglewski B.H., 2000, Bacterial Quorum sensing in pathogenic relationships, Inf. Immun., V.68, P.4839-4849.

97. Klapproth J.M., Donnenberg M.S., Abraham J., 1995, Products of enteropathogenic E.coli inhibit lumphocyte activation and lymphokine production., Inf Imm, V.63, P. 2248-2254.

98. Kogure K., Simidu U., Taga N., 1979, A tentative direct microscopic method for counting living marine bacteria, Can J.Microbiol., V.25, P.415-420.

99. Kuprash D.V, Alimzhanov М.В., Tumanov A.V. et al., 1999, TNF and Lymphotoxin Cooperate in the Maintenance of Secondary Lymphoid Tissue Microarchitecture But Not in the Development of Lymph Nodes , Journal of Immunol., Vol. 163, P. 6575-80.

100. Kurita-Ochiai Т., Ochiai K., 1996Immunology Actinobacillus actinomycetemcomotans down regulatio., Inflmm, V.64, P. 50-54.

101. Laemmli U.K., 1970, Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4., Nature., V. 227, P. 680685.

102. Leal-Berumen I., Snider D.P., Barajas-Lopez., 1996, Cholera toxin increase IL-6 synthesis and decrease rat peritoneal mast cells., J Immun., V.156., P. 316-321.

103. Lee G., Piquette-Miller M., 2003, Cytokines alter the expression and activity of the multidrug resistance transporters in human hepatoma cell lines; analysis using RT-PCR and cDNA microarrays.,J Pharm Sci, Vol. 92(11), P. 2152-63.

104. Locksley M.R., Killeen N., Lenardo M.J., 2001, The TNF an TNF Receptor Superfamilies: Integrating Mammalian Biology, Cell, Vol. 104, P.487-501.

105. Lucas R., Juillard P., Decoster E. et al., 1997, Crucial role of tumor necrosis factor (TNF) receptor 2 and membrane- bound TNF in experimental cerebral malaria, Eur. J. Immunol., 27, P. 1719-1725.

106. Lyte Mark, 2004, Microbial endocrinology and infectious disease in the 21th century, Trends of microbiology, Voll2, N1, P. 14-20.

107. Maisey K., Nardocci G., and al., 2003, Expression of proinflamatory cytokines and receptors by human fallopian tubes in organ culture following challenge with Neisseria gonorrhoeae., Infect Immun, Vol. 71(1), P. 527-32.

108. Manahan S.N., Steck T.R., 1997, The viable but nonculturable state in Agrobacterium tumefaciens and Rhizobium melitoli, FEMS Microb. Ecol., V.22, P.29-38.

109. Mannel D.N. and Echtenacher В., 2000, TNF in the inflammatory response, Chem. Immunol., 74, P. 141-161.

110. Mannel D.N., Farrar J.J., Mergenhagen S.E., J Immunol., 1980, Separation of a serum-derived tumoricidal factor from a helper factor for plaque-forming cells,124(3), P. 1106-10.

111. Marino M.W., Dunn A., Grail D. et al., 1997, Characterization of tumor necrosis factor-deficient mice, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 94, P. 8093-8098.

112. Marques, M.A., Chitale S., Brennan P.J., Pessolani M. C., 1998. Mapping and identification of the major cell wall-associated components of Mycobacterium leprae. Infect. Immun. 66:2625-2631

113. Masters S.A., Frutkin A.D., Simpson N.J., Fendly B.M. and Ashkenazi, 1992, Identification of cysteine-rich domains of the type 1 TNF receptor involved in ligand binding, J. Biol. Chem., Vol.267, Issue 9, 5747-5750.

114. Maurin Т., Saillan-Barreau C., Cousin В., Casteilla L., Doglio A., Penicaud L., 2005, Tumor necrosis factor-alpha stimulates HIV-l production in primary culture of human adipocytes., Exp Cell Res., Apr 1, 304(2), P.544-51.

115. McKay A.M., 1992, Nonviable bacterial pathogens, 3ett. Appl., Microbiol., V 14, P.129-135.

116. Meduri Gu., Kanangat S., Stefan J. et al., 1999, Cytokine IL-6, and TNF-alpha enchance in vitro growth of bacteria., Am.J.Respirat.Crit.Care Med., Vol. 160 (3), P. 961 967.

117. Morgan J.H., Gamblin T.C., Adkins J.R. et al, 2004, Norepineprine is a more potent inhibitor of tumor necrosis factor over a range of doses than dopamine, Am Surg, 70(6), P.526-8.

118. Mukamolova G.V., Turapov O.A., Young D.I., Kaprelyants A.S., Kell D.B., Young M., 2002, A family of autocrine growth factors in Mycobacterium tuberculosis., Mol Microbiol. Nov;46(3), 623-35.

119. Murray H.W., Jungbluth A., Ritter E., Montelibano C., and Marino M.W., 2000, Visceral leishmaniasis in mice devoid of tumor necrosis factor and response to treatment, Infect. Immun., 68, P.6289-6293.

120. Old L.J., 1988, Tumor necrosis factor, Sci. Am., 258, P. 59-75.

121. Oliver J.D., Hite F., McDougald D. Et al., 1995, Entry into, and resuscitation from, the viable but nonculturable state by V.vulnificus in an estuarine environment, Appl. Environ. Microbiol., N7, P.2624-2630.

122. Passador L, Cook JM, Gambello MJ, Rust L, Iglewski ВН., 1993, Expression of Pseudomonas aeruginosa virulence genes requires cell-to-cell communication., Science., May 21, 260(5111), P.l 127-30.

123. Perkins N.D., 2000, The Rel/NF-kappa В family: friend and foe, Trends Biochem. Sci., 25, P. 434-440.

124. Platzer C., and Blankenstein Т., 1995, Polimerase chain reaction to quantitate mRNA., Cytokine,Vol.417, P. 57-68.

125. Rontgen P., Sablotzki A, Simm A et al, 2004, Effect of catecholamines on intracellular cytokine synthesis in human monocytes, Eur Cytokine Netw, 15(1), P. 14-23.

126. Rosenberg Z.B., Farici A.S., 1990, Immunopathagenic mechanisms of HIV infection: cytokine induction of HIV expression., Immunology Today, Vol.11., P.10-14.

127. Rosenberger C.M., Scott M.G., Gold M.R. et al., 2000, Salmonella typhimurium infection and lipopolysaccharide stimulation induce similar changes in macrophage gene expression., J Immunol, Vol. 164(11), P. 5894-904.

128. Roszak D.B., Cowell R.R., 1987, Metabolic activity of bacterial cells enumerated by direct viable count, Appl. Environ. Microbiol., V.53, P.2889-2893.

129. Roszak D.B., Grimes D.J., Colwell RR., 1984, Viable but nonrecoverable stage of Salmonella enteritidis in aquatic systems., Can J Microbiol. Mar;30(3):334-8.

130. Rothe J., Mackay F., Bluethmann H. et al., 1994, Phenotypic analysis of TNFR1-deficient mice and characterization of TNFR1-deficient fibroblasts in vitro, Circ. Shock, 44, P. 51-56.

131. Saha S.K., Saha S., Sanyal S.C.,1991, Recovery of injured C.jejuni cells after animal passage, Appl. Environ. Microbiol., N11, P.3388-3389.

132. Signoretto C., Lleo M.M., Tafi M.C., Canepari P., 2000, Cell wall chemical composition of Enterococcus faecalis in the viable but nonculturable state. Appl Environ Microbiol. May;66(5): 1953-9.

133. Silva A.M., Barboza F.H., Duarte R., et al., 2004, Effect of Bifidobacterium longum ingestion on experimental salmonellosis in mice., J Appl Microbiol., 97(1), P. 29-37.

134. Smith C.A., Farrah Т., Goodwin R.G., 1994, the TNF Receptor Superfamily of Cellular and Viral Proteins: Activation, Costimulation, and Death, Cell, Vol.76, P. 959-962.

135. Staugas R., Harvey D.P., et al., 1992, Induction of TNF by Pseudomonas aeruginosa and endotoxin A-indeced lymphoproliferation in human leukocytes., Inf Imm., V.60., P. 31-39.

136. Stern N.J., 1994, Mucosal competitive exclusion to diminish colonization of chickens by Campylobacter jejuni. Poult Sci. Mar;73(3):402-7.

137. Tracey KJ, Wei H, Manogue KR, Fong Y, Hesse DG, Nguyen HT, Kuo GC, Beutler B, Cotran RS, Cerami A, et al., 1988, Cachectin/tumor necrosis factor induces cachexia, anemia, and inflammation, J Exp Med., Mar 1, 167(3), P. 1211-27.

138. Uicker WC, Doyle HA, McCracken JP, Langlois M, Buchanan KL., 2005, Cytokine and chemokine expression in the central nervous system associated with protective cell-mediated immunity against Cryptococcus neoformans., Med Mycol., Feb, 43(1). P. 27-38.

139. Vercammen D., Beyaert R., Denecker G. et al., 1998, Inhibition of caspases increases the sensitivity of L929 cells to necrosis mediated by tumor necrosis factor, J. Exp. Med., 187, P. 1477-1485.

140. Vieira L.Q., Goldschmidt M., Nashleanas M. et al., 1996, Mice lacking the TNF receptor p55 fail to resolve lesions caused by infectionwith Leishmania major, but control parasite replication, J. Immunol., 157, P. 827-835.

141. Wajant H., Henkler F., Scheurich P., 2001, The TNF-receptor-associated factor family. Scaffold molecules for cytokine receptors, kinases and their regulators, Cell Signal., 13, P. 389-400.

142. Wajant H., Pfizenmaier K. and Scheurich P., 2003, Tumor necrosis factor signaling, Cell Death and Differentiation, №10, P. 45

143. Wilson M., Seymour R., Henderson В., 1998, Bacterial Perturbation of Cytokine Networcs. Infect.Immun., V.66 (6), P.2401

144. Xu H-Sh., Roberts N., Singleton F.L. et al., 1982, Survival and viability of nonculturable Escherichia coli and Vibrio cholerae in the estuarine and marine environment, Microb. Ecol., N8, P.313-323.

145. Zhao Y.X., Lajoie G., Zhang H. et al., 2000, Tumor necrosis factor receptor p55-deficient mice respond to acute Yersinia enterocolitica infection with less apoptosis and more effective host resistance, Infect. Immun., 68, P. 1243-1251.

146. Zimmerman R., Ituriada R., Vecker-Brick J., 1978, Simultaneus determination of the total number of aquatic bacteria and the number thereof involved in respiration, Appl. Environ. Microbiol., V.36, P.92665.2409.