Выявление индивидуальных белков вируса гепатита С и определение частоты их встречаемости в клетках печени больных хроническим гепатитом С с помощью моноклональных антител тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.06, кандидат медицинских наук Адбулмеджидова, Анисат Газиевна

• Адбулмеджидова, Анисат Газиевна
• кандидат медицинских наук
• 2002

Оглавление диссертации кандидат медицинских наук Адбулмеджидова, Анисат Газиевна

ИСПОЛЬЗОВАННЫЕ СОКРАЩЕНИЯ

ВВЕДЕНИЕ

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Глава 1. Молекулярно-биологическая организация вируса гепатита С

1.1. Организация вирусного генома

1.2. Структура и функции белков

Глава 2. Инфекция, вызываемая ВГС

2.1. Эпидемиология вирусного гепатита С

2.2. Клиническое течение гепатита С

2.3. Гуморальный и клеточный ответы при ВГС-инфекции

Глава 3. Методы лабораторной диагностики вирусного гепатита С

3.1. Выявление антител к белкам ВГС

3.2. Выявление РНК ВГС

Глава 4. Применение моноклональных антител для детекции вирусных белков ВГС

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Глава 5. Получение МКА к рекомбинантным белкам Core, NS3, NS

5.1. Рекомбинантные белки Core, NS3, NS5 вируса гепатита С

5.2. Синтетические пептиды

5.3. Иммунизация

5.4. Слияние клеток и скрининг гибридом

5.5. Выделение МКА из асцитных жидкостей и определение концентрации белка

5.6. Субтипирование МКА и определение типов легких цепей в составе иммуноглобулинов

5.7. Твердофазный иммуноферментный анализ (т-ИФА)

5.8.Твердофазный ИФА с денатурированным антигеном

5.9.Конкурентный вариант т-ИФА 51 5.10.Эпитопное картирование 51 5.11 .Иммуноблот 52 5.12.Истощение МКА

Глава 6. Характеристика пациентов

Глава 7. Выявление белков ВГС in situ

7.1. Выявление белков ВГС в трансфицированных клетках методом иммуногистохимии (ИГХ)

7.2. Получение криостатных срезов печени

7.3. Окрашивание клеток авидин-биотиновым комплексом

7.4. Непрямой иммунопероксидазный метод иммуногистохимии

7.5. Определение маркеров лимфоцитов периферической крови

Глава 8. Детекция вирусной РНК

Глава 9. Статистическая обработка результатов

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Глава 10. Получение и характеристика МКА

10.1. Получение МКА к рекомбинанатным белкам core, NS3, NS

10.2. Иммунохимические свойства МКА

10.3. Эпитопная специфичность МКА

10.4. Взаимодействие МКА с денатурированным антигеном

10.5. Реципрокный конкурентный анализ МКА

10.6. Способность МКА конкурировать с антителами в сыворотках от больных с хроническим генатитом С

Глава 11. Выявление белков ВГС

11.1. Использование МКА для изучения распределения белков ВГС в трансфицированных клетках

11.2. Оптимизация метода выявления белков ВГС на криостатных срезах печени

11.3. Изучение способности МКА к белкам ВГС выявлять натуральные антигены в клетках печени больных ВГС

11.4. Изучение экспрессии вирусных белков в клетках печени у пациентов с хроническим генатитом С

11.5. Детекция белков ВГС в лимфоцитах периферической крови

Глава 12. Выявление РНК ВГС

Глава 13. Исследование иммунологического статуса у больных ХГС

Глава 14. Изучение взаимосвязи между обнаружением белков ВГС и вирусологическими, клиническими, биохимическими и гистологическими характеристиками печени больных с хроническим генатитом С

ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ

ВЫВОДЫ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Выявление индивидуальных белков вируса гепатита С и определение частоты их встречаемости в клетках печени больных хроническим гепатитом С с помощью моноклональных антител»

Актуальность проблемы.

Вирус гепатита С (ВГС) является одним из наиболее частых этиологических факторов, вызывающих гепатит с парентеральным путем заражения. Актуальность изучения этого заболевания обусловлена: 1-широкой распространенностью гепатита С (до 3% популяции населения инфицированы ВГС); 2 - высоким риском хронизации инфекции - от 50% до 85% случаев острого гепатита С принимает хроническую форму [27, 161]; 3 - неблагоприятным исходом (у 20-30% больных гепатит С приводит к циррозу печени или гепатоцеллюлярной карциноме) [201]; 4 -отсутствием специфических средств профилактики и лечения.

У 70% ВГС инфицированных лиц отмечено хроническое течение заболевания печени и только в 20% случаев наблюдают явления острого гепатита [39]. Летальные исходы при остром гепатите С (ОГС) встречаются редко. Однако, по данным Европейского комитета по профилактике вирусных гепатитов, гепатит С по причине смертности среди больных с хроническим поражением печени занимает второе место, уступая только хроническому алкоголизму [1]. Гепатит С характеризуется преобладанием случаев бессимптомного течения: так, до 95% ОГС протекает в безжелтушной форме [1], в 85% случаев хроническая инфекция также является бессимптомной [39]. Отсутствие клинических проявлений осложняет специфическую диагностику этого заболевания.

В настоящее время первичная диагностика вирусного гепатита С основывается на выявлении антител к белкам ВГС. Однако, обнаружение анти-ВГС в сыворотке больных оказывается недостаточным, не позволяя разграничить текущую инфекцию от перенесенной в прошлом и закончившейся реконвалесценцией больного [66]. Кроме того, отсутствие антител к вирусным белкам может быть обусловлено периодом "окна" при сероконверсии. Известно также, что часть (около 10%) больных, особенно при иммунодефицитных состояниях, остается серонегативной [251]. В связи с этим возникает необходимость определять у больных РЖ ВГС и вирусные белки. В настоящее время основным методом, позволяющим установить наличие вируса гепатита С в организме, является полимеразная цепная реакция (ПЦР). С использованием этого метода возможно как качественное, так и количественное определение РНК ВГС. Однако, применеиие ПЦР имеет свои ограничения, связанные со значительным расхождением результатов в разных лабораториях мира. Другим подходом для прямого определения вируса в организме больных является определение белков ВГС. Эффективным инструментом для решения этой задачи являются моноклональные антитела (МКА) к вирусным белкам, обладающие высокой специфичностью. Использование МКА позволяет выявлять вирусные антигены в клетках и тканях больных ВГС.

Цель и задачи исследования.

Цель настоящей работы состояла в получении моноклональных антител к белкам ВГС и в разработке на их основе иммуногистохимического метода детекции вирусных белков в клетках ВГС-инфицированных лиц. Для достижения цели ставились следующие задачи:

1. Получить гибридомные клеточные линии, стабильно секретирующие МКА, взаимодействующие с белками ВГС.

2. Изучить иммунохимические свойства МКА к структурным и неструктурным белкам ВГС.

3. Определить способность МКА выявлять белки ВГС, экспрессированные в эукариогических клетках, трансфицированных рекомбинантной ДНК, содержащей гены белков ВГС.

4. Исследовать способность МКА взаимодействовать с натуральными вир> сными белками в клетках печени и лимфоцитах периферической крови (ЛПК) больных ХГС.

5. Сравнить накопление и распределение белков ВГС в клетках печени и ЛПК больных ХГС.

6. Изучить экспрессию поверхностных маркеров Т- и В-лимфоцитов больных с различной активностью гепатита С.

7. Провести статистический анализ полученных результатов для оценки связи между обнаружением вирусных маркеров (РНК ВГС и вирусные белки) и активностью патологического процесса.

Научная новизна и практическая значимость.

1. Получена панель МКА, направленных к 11 индивидуальным эпитопам рекомбинантных белков Core, NS3 и NS5 ВГС. С помощью МКА установлена локализация 9 не описанных ранее антигенных эпитопов белков ВГС.

2. Показана способность МКА взаимодействовать с белками ВГС, экспрессированными в клетках после введения в них ДНК, содержащей гены ВГС.

3. На основе полученных МКА разработан метод выявления белков ВГС на криостатных срезах печени и в препаратах ЛПК больных ХГС.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. МКА, полученные в ходе выполнения работы, направлены к 11 различным антигенным детерминантам белков Core, NS3 и NS5 ВГС.

2. Разработан иммуногистохимический метод выявления вирусных белков на криостатных срезах печени и в ЛПК больных ХГС с использованием полученных МКА.

3. Индивидуальные белки ВГС выявляются в клетках печени пациентов с ХГС с различной частотой. Не обнаружено корреляции между накоплением вирусных белков в печени и активностью хронического гепатита С.

4. Установлено, что частота выявления вирусных белков в ЛПК значительно ниже, чем в клетках печени больных ХГС. При этом в ЛПК частота обнаружения белка нуклеокапсида выше, чем неструктурных белков ВГС, тогда как в клетках печени чаще других белков выявляется неструктурный белок NS4.

Заключение диссертации по теме «Вирусология», Адбулмеджидова, Анисат Газиевна

Выводы

1. Получено 13 гибридом, продуцирующих моноклональные антитела (МКА) к рекомбинантным белкам вируса гепатита С, экспрессированным в бактериальных клетках E.coli. МКА выявляют 11 индивидуальных и 2 перекрестно реагирующих эпитопов на белках ВГС: 3 -на белке нуклеокапсида, 5- на белке NS3 и 3- на белке NS5.

2. Установлено, что все МКА способны взаимодействовать с белками ВГС в эукариотических клетках культуры, трансфицированных рекомбинантной ДНК-плазмидой, содержащей гены NS3, NS4 и NS5 ВГС.

3. Обнаружено, что индивидуальные белки ВГС в печени пациентов с ХГС выявляются с различной частотой: белок нуклеокапсида - у 33% больных, белок NS3 - у 35%, белок NS4 - у 64%, белок NS5 - у 46% больных ХГС.

4. Белки ВГС выявлены в лимфоцитах периферической крови (ЛПК) у

23% больных ХГС. С наибольшей частотой (21%) обнаруживался белок нуклеокапсида, неструктурные белки обнаружены в лимфоцитах 13-16% пациентов.

5. Показано, что накопление белков ВГС в печени и в ЛПК больных ХГС не зависит от уровня АЛТ, гистологических показателей и количества РНК в сыворотке. Одновременное выявление белков в печени и РНК ВГС в сыворотке прямо коррелирует с активностью АЛТ.

6. Установлено, что количественные изменения в субпопуляциях лимфоцитов не коррелируют с показателями активности ХГС (ИГА, ГИС и АЛТ).

7. Выявлена обратная зависимость между экспрессией антигена CD95 (фактор апоптоза) на лимфоцитах периферической крови и накоплением белков Core и NS4 в печени.

На основе МКА ldll и 6Ы1 и 2с9, наиболее эффективно выявляющих натуральные белки, разработан иммунный реагент для иммуногистохимического выявления белков ВГС, позволивший обнаружить вирусные белки в криостатных срезах печени у 72% больных с ХГС.

Список литературы диссертационного исследования кандидат медицинских наук Адбулмеджидова, Анисат Газиевна, 2002 год

1. Балаян М.С., Михайлов М.И. Энциклопедический словарь -вирусные гепатиты. Изд. 2-е. М.: Амипресс. 1999. - 304 с.

2. Игнатова Т.М. Хронический гепатит С: Клинико-морфологическая характеристика, течение, лечение // Дисс. Докт. Мед. Наук М. - 2000.

3. Каминский Л.С. Статистическая обработка лабораторных и клинических данных. Ленинградское отделение: Медицина. - 1964. -252с.

4. Кожевникова Г.М. //Дисс.док.мед.наук М., 2000

5. Лакина Е. И. // Дисс. канд. биол. наук М., 2000

6. Лопаткина Т.Н. Клиника гепатита С. // Вирусные гепатиты: достижения и перспективы. 1997. -№ 1. - С. 12-16.

7. Львов Д.К. Вирусный гепатит С "ласковый убийца". // Росс, гастроэнтерол. журнал. - 1995. - № 1. - С.4-6.

8. Пименов В. К. // Дисс. канд. биол. наук М. 1999.

9. Соринсон С.Н. Вирусные гепатиты. / С.-Петербург: Теза, 1997. -306 С.

10. Соринсон С.Н. Вирусные гепатиты. Изд. 2-е. Санкт-Петербург: Теза. 1998.-331 с.

11. Шахгильдян И.В. Современная эпидемиологическая характеристика гепатитов В и С в Российской Федерации // Вирусные гепатиты Информационный Биллютень № 3 (7), 1999

12. Шахгильдян И.В. Характеристика групп высокого риска инфицирования вирусом гепатита С // Информационный биллютень № 2 (9), 2000, с. 3-4.

13. Шахгильдян И.В., Кузин С.Н., Ершова О.Н., Самохвалов Е.И., Хухлович П.А., Лыткина И.Н., Шулакова Н.И., Храпунова И.А., Мартынюк Г.А., Трецкая Т.А., Бахлыкова Н.Ю., Лисицина Е.В.,

14. Кириллова И.Л. Современная эпидемиологическая характеристика гепатита С // Гепатит С (Российский консенсус) тезисы докладов научно-практичексой конференции 26-27 сентября 2000 года, с. 167169.

15. Almeshari K., Alahdal M., Alfiirayh O. et al. New inights into hepatitis С virus ifection of hemodialisis patients the implications. // Am. J. Kid. Dis. 1995. - V. 25. - N4. - P. 572-578.

16. Asabe S. I., Tanji Y., Satoh S. et al. The N-terminal region of hepatitis С virus-encoded NS5A is important for NS4A-dependent phosphorylation. // J. Virol. 1997. - V. 71. - P. 790-796.

17. Ballardini G., Groff P., Giostra F. et al. Hepatocellular codistribution of C100, СЗЗ, C22, and NS5 hepatitis С virus antigens detected by using immunopurified polyclonal spontaneous human antibodies. // Hepatology. 1995. - V. 21. - P.730-734.

18. Ballardini G., Manzin A., Giostra F. et al. Quantitative liver parametrs of HCV infection relation to HCV genotypes, viremia and response to interferon treatment. // J. Hepatol. - 1997. - V. 26. - N4. - P.779-786.

19. Barba В., Harber F., Harada T. et al. Hepatitis С virus core shown a citoplasmic localization and associates to cellular lipid storage droplets. // Proc. Natl. Acad. USA 1997. - V. 94. P. 1200-1205.

20. Bartenschlager R., Ahlborn-Laake L., Mous G., Jacobsen H. Nonstructural protein 3 of the hepatitis С virus encodes a serine-type proteinase required for clevage at the NS3/4 and NS4/5 junctions. // J. Virol.- 1993. -V. 67. P. 3835-3844.

21. Bartenschlager R., Ahlborn-Laake L., Mous J., Jacobsen M. Kinetic and structural analyses of hepatitis С virus polyprotein processing. // J. Virol. 1994. - V. 68. - N8. - P. 5045-5055.

22. Bartenschlager R., Lohmann V. Replication of hepatitis С virus. // J. Gen. Virol. -2000. -V. 81. P. 1631-1648.

23. Behrens S.-E., Tomei L., De Francesco R. Identification and properties of the RNA-dependent RNA polymerase of hepatitis С virus. // EMBO J. 1996. - V. 15.-№ l.-P. 12-22.

24. Beld M., Penning M., Van Putten M. et al. Hepatitis С virus serotype-specific core and NS4 antibodies in injecting drug users participating in the Amsterdam cohort studies. // J. Clin. Microbiol. 1998. - V. 36. - P. 3002-3006.

25. Bellentani S., Pozzato G., Saccoccio G. et al. Clinical course and risk factors of hepatitis С virus related liver disease in the general population: report from the Dionysos study. // Gut. 1999. - V. 44. - N6. - P. 874880.

26. Bergeron J. J., Brenner M. В., Thomas D. Y. et al. Calnexin: a membrane-bound chaperone of the endoplasmic reticulum. // Trends Biochem. Sci. 1994. - V. 19. - № 3. - P. 124-128.

27. Bhattacherjee V., Prescott L. E., Pike I. et al. Use of NS-4 peptides to identify type-specific antibody to hepatitis С virus genotypes 1, 2, 3, 4, 5 and 6. // J. Gen. Virol. 1995. - V. 76. - P. 1737-1748;

28. Blight K., Rowland R., Hall P. et al. Immunohistochemical detection of the NS4 antigen of hepatitis С vs. us and its relation to histopathology. // Amer. J. Pathol.-1993.-V. 143.-P. 1568-1573.

29. Во Shiun Yan, Ming H Tam, Wan-Jr Syu. Self-association of the C-terminal domain of the hepatitis С virus core protein. // Biochem. - 1998. -V. 258.-P. 100-106.

30. Booth J.C., Foster G.R., Levine T. et al. The relationship to genotype in chronic HCV infection. // Liver. 1997. - V. 17. -N3. - P. 144-151.

31. Botarelli P., Brunetto MR., Minutello MA.et al. T-limphocyte response to hepatitis С virus in different clinical courses of infection. // Gastroenterology. 1993. - V. 194. - P. 580-587.

32. Boyer J. C., Haenni, A. L. Infectious transcripts and cDNA clones of RNA viruses. // Virol. 1994. - V. 198. - P. 415-426.

33. Boyer N., Marcellin P. Natural history of hepatitis С and the impact of anti-viral therapy. // Forum (Genova). 2000. - V. 10. - 1. - P.4-18.

34. Brody R.I., Eng S., Melamed J. et al. Immunohistochemical detection of hepatitis С antigen by monoclonal antibody TORDJI-22 compared with PCR viral detection. // Am. J. Clin. Pathol. 1998. - V. 110. - № 1. - P.32-37.Brody et al., 1998

35. Buti M., Esteban R. What to do when standart therapy fails. // Forum (Genova). 2000. - V. 10. - № 1. - P.63-69.

36. Chamberlain R.W., Adams N., Saeed A.A. et al. Complete nucleotide sequence of a 4 hepatitis С virus variant, the predominant genotype in the Middle East // J. Gen. Virol. 1997. - V. 78. - P. 1341-1347.

37. Chamlian A., Benkoel L., Sahel J. et al. Immunohistochemical detection of hepatitis С virus related С100-3 and core antigens in formalin-fixed liver tissue. // Cell.Molec. Biology. 1996. - V. 42. - P. 557-566.

38. Chang M., Marquardt A.P., Wood B.L. et al. In situ distribution of hepatitis С virus replicative-intermediate RNA in hepatic tissue and its correlation with liver disease. // J. Virol. 2000. - V.74. - № 2. - P.944-955.

39. Chen M., Sallberg M., Sonnerborg A. et al. Human and murine antibody recognition is focused on the ATP/helicase, but not the proteasedomain of hepatitis С vims nonstructural 3 protein. // Hepatology. -1998.-V. 28.-P. 219-224.

40. Chen M., Sallberg M., Sonnerborg A. et al. Limited humoral immunity in hepatitis С virus infection. // Gastroenterology. 1999. - V. 116.-P. 135-143.

41. Chien D., Choo Q.-L., Ralston R. et al. Persistence of HCV dispite antibodies to both putative envelope glycoproteins. // Lancet. 1993. - V. 342.-P. 933.

42. Cho S.W., Hwang S.G., Han D.S. et al. In situ detection of hepatitis С virus RNA in liver tissue using a digoxigenin-labeled probe created during a polimerase chain reaction. // J. Med. Virol. 1996. - V. 48. - № 3. - P. 327-333.

43. Choo Q.-L., Weiner A.J., Overby L. et al. Hepatitis С virus: the major causative agent viral non-A, non-B hepatitis. // British. Med. Bull. 1990. -V. 46.-P. 423-441.

44. Clarke B. Molecular virology of hepatitis С virus. // J. Gen. Virol. -1997.- V. 78.-P. 2397-2410.

45. Cocquerel L., Duvet S., Meunier J. C. et al. The transmembrane domain of hepatitis С virus glycoprotein El is a signal for static retention in the endoplasmic reticulum. // J. Virol. 1999. - V. 73. - P. 2641-2649.

46. Consensus Statement. EASL. Internatinal Consensus Conference on hepatitis C. // J.Hepatol. 1999. V. 30. - P. 956-961.

47. Cooreman M.P. Hepatitis С virus: biological and clinical consequences of genetic heterogenity. // Scand. J. Gastroenterol. 1996. -V. 218 (Suppl.). - P. 106-115.

48. Courouce A. M., Le Marrec N., Girault A. et al. Anti-hepatitis С virus (anti-HCV) seroconversion in patients undergoing hemodialysis: comparison of second- and third-generation anti-HCV assays. // Transfusion 1994. - V. 34. - P. 790-795.

49. Ctamp M., Catucci P., Rossol S. et al. Hepatitis С virus (HCV) specific immune response in anti-HCV positive patients without Hepatitis С viraemia. // Gut. 1999. - V. 44. - P. 424 - 429.

50. De Francesco R., Urbani A., Nardi M.C. et al. A zinc binding site in viral serine proteinases. // Biochemistry. 1996. - V. 35. - P. 1328213287.

51. De Moliner L., Pontisso P., De Salvo G.L. et al. Serum and liver HCV RNA levels in patients with chronic hepatitis C: correlation with clinical and histological features. // Gut. 1998. - V. 42. - N5. - P. 856860.

52. Del Porto P., Puntoriero G., Scotta С et al. High prevalence of hypervariable region 1-specific and -cross-reactive CD4(+) T cells in HCV-infected individuals responsive to IFN-alpha treatment. // Virology. 2000. - V. 269. - N2. - P. 313-324.

53. Deleersnyder V., Pillez A., Wychowski C. et a!. Formation of native hepatitis С virus glycoprotein complexes. // J. Virol. 1997. - V. 71. - P. 697-704.

54. Desmet V.J., Gerber M., Hoofnagle J.H. et al. Classification of chronic hepatitis: diagnosis, grading and staging. // Hepatology. 1994. -V.19. - P.1513-1520.

55. Diepolder H.M., Gerlach J.T., Zachoval K. et al. Immunodominant CD4+ T cell epitope within nonstructural protein 3 in acute hepatitis С virus infection. //J. Virol. 1997. -V. 71. - P. 6011-6019.

56. Diepolder H.M., Zachoval K., Hoffman R.M. et al. Possible mechanism involving T lymphocyte to response to non-structural protein3 in viral clearance in acute hepatitis С infection. 11 Lancet. 1995. - V. 346.-P. 1006-1007.

57. Diepolder H.M., Zachoval R., Hottmann R.M. // IX Triennial international symposium on viral hepatitis and liver disease. Rome. -April, 1996.-P. 39.

58. Doughty A.L., Painter D.M., McCaughan G.W. Nonspecificity of monoclonal antibody Tordji-22 for the detection of hepatitis С virus in liver transplantant recipients with cholestatic hepatitis. // Liver Transpl. Surg. 1999. -V. 5. - № 1. - P. 40-45.

59. Dries V., von Both I., Muller M. et al. Detection of hepatitis С virus in paraffin-embedded liver biopsies of patients negative for viral RNA in serum. //Hepatology. 1999. - V.28.- N1.-P.223-229.

60. D'Souza E. D., O'Sullivan E., Amphlett E. M. et al. Analysis of NS3-mediated processing of the hepatitis С virus non-structural region in vitro. // J. Gen. Virol. 1994. - V. 75. - P. 3469-3476.

61. Dubuisson J., Hsu H. H., Cheung R. C. et al. Formation and intracellular localization of hepatitis С virus envelope glycoprotein complexes expressed by recombinant vaccinia and Sindbis viruses. // J. Virol. 1994. - V. 68. - P. 6147-6160.

62. Dubuisson J., Rice Ch. Hepatitis С virus glycoprotein folding disulfidebond formation and assotiation with calnexin. // J. Virol. 1996. -V. 70. - № 2. - P. 778-786.

63. Duvet S., Cocquerel L., Pillez A. et al. Hepatitis С virus glycoprotein complex localization in the endoplasmic reticulum involves a determinant for retention and not retrieval. // J. Biol. Chem. 1998. - V. 273. - P. 32088-32095.

64. Enomoto N., Sakuma I., Asahina Y. et al. Mutations in the nonstructural protein 5A gene and response to interferon in patients with chronic hepatitis С virus lb infections. // New Engl. J. Med. 1996. - V. 334.-P. 77-81.

65. Errington W., Wardell A. D., McDonald S. et al. Subcellular localisation of NS3 in HCV-infected hepatocytes. // J. Med. Virol. 1999. -V. 59.-P. 456-462.

66. Esteban J.I., Genesca J., Alter H.J. Hepatitis C: molecular biology, pathogenesis, epidemiology, clinical features, and prevention. // Progr. Liv. Dis. 1992. - № 10. - P. 253-282.

67. Farci P., Alter H.J., Govindarajan S. et al. Lack of protective immunity against reinfection with hepatitis С virus. // Science. 1992. -V. 258.-P. 135-140.

68. Farci P., Alter H.J., Wong D. et al. A long-term study of hepatitis С virus replication in non-A, non-B hepatitis. // N. Eng. J. Med. 1991. - V. 325.-P. 98-104.

69. Feray C., Samuel D., Thiers V. et al. Reinfection of liver graft by hepatitis С virus after liver transplantation. // J. Clin. Invest. 1992. - V. 89.-P. 1361-1366.

70. Flint M., Thomas J. M., Maidens С. M. et al. Functional analysis of cell surface-expressed hepatitis С virus E2 glycoprotein. // J. Virol. 1999. -V. 73.-P. 6782-6790.

71. Fournillier-Jacob A., Cahour A., Escriou N. et al. Processing of the El glycoprotein of hepatitis С virus expressed in mammalian cells. // J. Gen. Virol. 1996. - V. 77. - P. 1055-1064.

72. Francis В., Ball V., Lee S. et al. Earlier detection of antibody to hepatitis С virus in seroconverters by Ortho second generation HCV assay. // Symposium on HCV. Los-Angeles. - 1990. - V. 16. - P. 103.

73. Frangeul L., Cresta P., Petrir> M. Pattern of HCV antibodies with special reference to NS5A reactivity in HCV-infected patients: relation to viral genotype, cryoglobulinemia and response to interferon. // J. Hepatol. 1998.-V. 28.-P. 538-543.

74. Fukushi S., Katayama K., Kurihara C. et al. Complete 5' noncoding region is necessary for the efficient internal initiation of hepatitis С virus RNA. // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1994. - V. 199. - P. 425-432.

75. Gale M. J., Blakely C.M., Kwieciszewski B. et al. Control of PKR protein kinase by hepatitis С virus nonstructural 5A protein: molecular mechanisms of kinase regulation. // Mol. Cell. Biol. 1998. - V. 18. - P. 5208-5218.

76. Gale M. J., Korth M. J., Tang N. M. et al. Evidence that hepatitis С virus resistance to interferon is mediated through repression of the PKR protein kinase by the nonstructural NS5A protein. // Virol. 1997. - V. 230.-P. 217-227.

77. Gastaldi M., Massacrier A., Plannels R. et al. Detection by in situ gybridization of hepatitis С virus positive and negative RNA strands using digoxigenin-labeled cDNA probes in human liver cells. // J. Hepatol. -1995. V. 23. - № 5. - P. 509-518.

78. Gerber M.A.Chronic hepatitis C: the beginning of the end of a time -honoured nomenclature? // Hepatology. 1992. - V.15. - N4. - P.733-734.

79. Gil В., Quian C., Riezu-Boj J.I. et al. Hepatic and extrahepatic HCV RNA strands in chronic hepatitis C: different patterns of response to interferon treatment. // Hepatology. 1993. - V. 18. - P. 1050-1054.

80. Goeser Т., Muller H., Pfaff Ye. et al. Characterization of antigenic determinants in the core antigen of the hepatitis С virus. // Virology. -1994.-V. 205 -P. 462-509.

81. Gonzalez-Peralta R. P., Fang J. W., Davis G. L. et al. Optimization for the detection of hepatitis С virus antigens in the liver. // J. Hepr.tol. 1994. -V. 20.-P. 143-147.

82. Gonzalez-Peralta R.P., Fang J., Gary L. et al. Significance of hepatic expression of hepatitis С viral antigens in chronic hepatitis C. // Dig. Dis. Sci.- 1995.-V. 40.-P. 2595-2601.

83. Gosalvez J., Rodriguez-Inigo E., Ramiro-Dias J. et al. Relative quantification and mapping of hepatitis С virus by in situ hybridization and digital image analysis. // Hepatology. 1998. - V. 27. - № 5. - P. 14281434.

84. Grakoui A., McCourt D. W., Wychowski C. et al. A second hepatitis С virus-encoded proteinase. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1993. - V. 90. -P. 10583-10587.

85. Grakoui A., Wychowski C., Lin C. et al. Expression and identification of hepatitis С virus polyprotein cleavage products. // J. Virol. 1993. - V. 67.-P. 1385-1395.

86. Grassi G., Pozzato G., Moretti M., Giacca M. Quantitative analysis of hepatitis С virus RNA in liver biopsies by competitive reverse transcription and polymerase chain reaction. // J. Hepatol. 1995. - V. 23. -№4,-P. 403-412.

87. Gretch D.R., Bacchi C.E., Corey L. et al. Persistent hepatitis С virus infection after liver transplantation: clinical and virological features. // Hepatology. 1995. - V.22. - P. 1-9.

88. Gretch D.R., Corey L., Wilson J. et al. Acessment of hepatitis С virus RNA levels by quantitative competitive RNA polymerase chain reaction: high-titer viremia correlates with advanced stage of disease. // J. Infect. Dis. 1994. - V.169. - P. 1219-1225.

89. Guido M., Rugge M., Thung S.N. et al. Hepatitis С virus serotypes and liver pathology. // Liver. 1996. - V. 16. - № 6. - P. 353-357.

90. Gutfreund K.S., Bain V.G. Chronic viral hepatitis C: management update.

91. CMAJ 2000. - V. 162. - № 6. - P. 827-833.

92. Hahm В., Kim Y. К., Kim J. H. et al. Heterogeneous nuclear ribonucleoprotein L interacts with the 3' border of the internal ribosomal entry site of hepatitis С virus. // J. Virol. 1998. - V. 72. - P. 8782-8788.

93. Hahn C., Cho Y., Kang B. et all. The HCV Core protein acts as a positive regulator of FAS-mediated apoptosis in a human limphoblastoid T-cells line. // Virol. 2000. - V. 276 - P 127-137.

94. Heilek G. M., Peterson M. G. A point mutation abolishes the helicase but not the nucleoside triphosphatat з activity of Hepatitis С virus NS3 protein. // J. Virol. 1997. - V. 71. - P. 6264-6266.

95. Hellen C.U.T., Pestova T.V. Translation of hepatitis С virus RNA. // J. Viral. Hepatitis 1999. - V. 6. - P. 79-87.

96. Hijikata M., Kato N., Ootsuyama Y. et al. Gene mapping of the putative structural region of the hepatitis С virus genome by in vitro processing analysis. 11 Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 1991. - V. 88. - P. 5547-5551.

97. Hijikata M., Mizushima H., Akagi T. et al. Two distinct proteinase activities required for the processing of a putative nonstructural precursor protein of hepatitis С virus. // J. Virol. 1993. - V. 67. - P. 4665-75.

98. Hijikata M., Mizushima H., Tanji Y. et al. Proteolytic processing and membrane association of putative nonstructural proteins of hepatitis С virus. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1993. - V. 90, - P. 10773-10777.

99. Hirota M., Satoh S., Asabe S. et al. Phosphorylation of nonstructural 5 A protein of hepatitis С virus: HCV group-specific hyperphosphorylation. // Virology. 1999. - V. 257. - № 1. - P. 130-137.

100. Honda M., Ping L. H., Rijnbrand R. A. et al. Structural requirements for initiation of translation by internal ribosome entry within genome-length hepatitis С virus RNA. // Virol. 1996. - V. 222. - P. 31-42.

101. Houghton M., Weiner A., Han J. et al. Molecular biology of the hepatitis С viruses: implication for diagnosis, development and control of viral disease. // Hepatol. 1991.- V. 14. - P. 381-388.

102. Hwang S. В., Park K. J., Kim Y. S. et al. Hepatitis С virus NS5B protein is a membrane-associated phosphoprotein with a predominantly perinuclear localization. // Virol. 1997. - V. 227. - P. 439-46.

103. Ide Y., Zhang L., Chen M. et al. Characterization of the nuclear localization signal and subcellular distribution of Hepatitis С virus nonstructural protein 5A. // Gene 1996. - V. 182. - P. 203-211.

104. Ishido S., Fujita Т., Hotta H. Complex formation of NS5B with NS3 and NS4A proteins of hepatitis С virus. // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1998. - V. 244. - № 1. - P. 35-40.

105. Ishii K., Rosa D., Watanabe Y. et al. High titers of antibodies inhibiting the binding of envelope to human cells correlate with natural resolution of chronic hepatitis C. // Hepatology. 1998. - V. 28. - P. 1117-1120.

106. Ito Т., Lai M. M. An internal polypyrimidine-tract-binding protein-binding site in the hepatitis С virus RNA attenuates translation, which is relieved by the З'-untranslated sequence. // Virol. 1999. - V. 254. - P. 288-296.

107. Ito Т., Tahara, S. M., Lai M. C. The З'-untranslated region of hepatitis С virus RNA enhances translation from an internal ribosomal entry site. // J. Virol. 1998. - V. 72. - P. 8789-8796.

108. Kage M., Shimamatu К., Nakashima E. et al. Long-term evolution of fibrosis from chronic hepatitis to cirrhosis in patients with hepatitis C: morphometric analysis of repeated biopsies. // Hepatology. 1997. - V. 25.-P. 1028-1031.

109. Kanai A., Tanade K., Kahoora M. Poly(U)binding activity of hepatitis С virus NS3 protein a putative RNA helicase. // FEBS Letters. -1995. V. 376. - № 10. - P. 221-224.

110. Kaneko Т., Tanji Y., Satoh S. Production of two phosphoproteins from the NS5A region of the hepatitis С viral genome. // Biochem. Biophys. Res. Comm. 1994. - V. 205. - P. 320-326.

111. Kao C.C., Delvecchio A., Zhong W. De novo initiation of RNA sinthesis by a recombinant Flaviviridae RNA-depended RNA polymerase. //Virology. 1999. - V. 253. - P. 1-7.

112. Kathryn Large, David J.Kittlesen, Young S. Hahn. Supression of host immune response by the core protein of hepatitis С virus: possible implications for hepatitis С virus persistence. // J. Immunology. 1999. -V. 162.-P. 931-938.

113. Kato N., Lan К. H., Ono-Nita S. K. et al. Hepatitis С virus non structural region 5A protein is a potent transcriptional activator. // J. Virol. 1997.-V. 71.-P. 8856-8859.

114. Kato N., Sekiya H., Ootsuyama Y. et al., Humoral immune response to hypervariable region 1 of the putative envelope glicoprotein (gp70) of hepatitis С virus. // J. Gen. Virol. 1993. - V. 67. - P. 3923-3930.

115. Katze M. G. Regulation of the interferon-induced PKR: an viruses cope? // Trends in Microbiol. 1995. - V. 3. - P. 75-78.

116. Khudyakov Y.E., Khudyakova N.S., Jue D.L., et al. Linear B-cell epitopes of the NS3-NS4-NS5 proteins of the hepatitis С virus as modeled with synthetic peptides. // Virology. 1995. - V. 206. - P. 666-672.

117. Kim D. W., Kim J., Gwack Y. et al. Mutational analysis of the hepatitis С virus RNA helicase. // J. Virol. 1997. - V. 71. - P. 94009409.

118. Kim J. E., Song W. K., Chung К. M. et al. Subcellular localization of hepatitis С viral proteins in mammalian cells. // Arch. Virol. 1999. -V. 144.-P. 329-343.

119. Kita H., Hiroishi K., Moriyama T. et al. A minimal and optimal cytotoxic T cell epitope within hepatitis С virus nucleoprotein. // J. Gen.Virol. 1995. -V. 76. - P. 3189-3193.

120. Kobayashi K., Ishii M., Igarashi T. et al. Profiles of cytokines produced by CD4-positive Y lymphocytes stimulated by anti-CD3 antubody in patients with chronic hepatitis C. // J. Gastroenterol. 1998. -V. 33.-P. 500-507.

121. Kobayashi M., Tanaka E., Matsumoto A. et al. Antibody response to E2/E1 hepatitis С virus protein in patients with acute hepatitis C. // J. Gastroenterol. Hepatol. 1997. - V. 12. - P. 73-76.

122. Koch J.O., Bartenschlager R. Modulation of hepatitis С virus NS5A hyperphophorylation by nonstructural proteins NS3, NS4A, and NS4B. // J. Virol. 1999. - V. 73. - № 9. - P. 7138-7146.

123. Kolykhalov A. A., Agapov E. V., Blight K. J. et al. Transmission of hepatitis С by intrahepatic inoculation with transcribed RNA. // Science -1997.-V. 277.-P. 570-574.

124. Kolykhalov A.A., Feinstone S.M., Rice Ch.M. Identification of a highly conserved sequence element at the З'-terminus of hepatitis С virus genome RNA. // J. Virol. 1996. - V. 70. - № 6. - P. 3363-3371.

125. Koziel M.J., Walker B.D. Characteristics of the intrahepatic cytotoxic T lymphocyte response in chronic hepatitis С infection. // Springer Semin. Immunopatol. 1997. - V. 19. - P. 69-83.

126. Krawczynski K., Beach M.J., Bradly D.W. et al. Hepatitis С virus antigen in hepatocytes: immunomorphologic detection and identification. //Gastroenterology. 1992. - Vol. 103. -N5.-P. 622-629.

127. Kwong A. D., Kim J. L., Rao G. et al. Hepatitis С virus NS3/4A protease. // Antiviral Res. 1998. - V. 40. - P. 1-18.

128. Lau G.K.K., Fang J.V.C., Wu P.S. et al. Detection of hepatitis С vim's genome in formalin-fixed parafin-embedded liver tissue by in situ reverse transcription polymerase chane reaction. // J. Med. Virol. 1994. -V. 44.-№5.-P. 406-409.

129. Lee J.W., Kim K.-M. Jung S.-H. et al. Identification of a domain containing B-cell epitopes in hepatitis С virus E2 glycoprotein by using mouse monoclonal antibodies. II J. Virol. 1999. - V. 73. - № 1. - P. 1118.

130. Leevy C.B., Zierer K.G., Leevy C.M. Viral hepatitis C. // J. Assoc. Acad. Minor. Phys. 1998. - V. 9. - № 4. - P. 59-64.

131. Lelie P.N., Damen M., Cuypers H. et al. International collaborative study on the second eurohep HCV-RNA reference panel. // J. Virol. -1996. V. 81. - № 1. - P. 347-352.

132. Lerat H., Berby F., Trabaud M.A. et al. Specific detection of hepatitis С minus strand RNA in hematopoetic cells. // J. Clin. Invest.1996. V. 97. - № 3. - P. 845-851.

133. Lin C., Lindenbach B. D., Pragai В. M. et al. Processing in the hepatitis С virus E2-NS2 region: identification of p7 and two distinct E2-specific products with different С termini. // J. Virol. 1994. - V. 68. - № 8.-P. 5063-5073.

134. Lin C., Pragai В. M., Grakoui A. et al. Hepatitis С virus NS3 serine proteinase: trans-cleavage requirements and processing kinetics. // J. Virol. 1994. - V. 68.-P. 8147-8157.

135. Lin C., Rice, С. M. The hepatitis С virus NS3 serine proteinase and NS4A cofactor: establishment of a cell-free trans-processing assay. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1995. - V. 92. - P. 7622-7626.

136. Lin C., Wu J. W., Hsiao K. et al. The hepatitis С virus NS4A protein: interactions with the NS4B and NS5A proteins. // J. Virol. 1997. -V.71.-P. 6465-6471.

137. Liu Q., Bhat R. A., Prince A. M. et al. The hepatitis С virus NS2 protein generated by NS2-3 autocleavage is required for NS5A phosphorylation. // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1999. - V. 254. -P. 572-577.

138. Liu Q., Takni C., Bhat R. et al. Regulated processing of hepatitis С virus core protein is linked to subcellular lokalisation. // J. Virol.1997.-V. 71.-P. 657-662.

139. Lo S. Y., Selby M. J., Ou J. H. Interaction between hepatitis С virus core protein and El envelope protein. // J. Virol. 1996. - V. 70. - P. 5177-5182.

140. Lo S., Masiarz F., Hwang S. et al. Differential subcellular localization of hepatitis С virus core gene products. // Virologi. 1995. -V. 213. - P. 455-461.

141. Lohmann V., Koch J. O., Bartenschlager R. Processing pathways of the hepatitis С virus proteins. // J. Hepatol. 1996. - V. 24. - P. 11-19.

142. Lohr H.F., Schlaak J.K. Kollmannsperger S. et al. Liver infiltrating and circulating CD4+ T cells in chronic hepatitis C: immunodominant epitopes, HLA-restriction and functional significance. // Liver. 1996. -V. 16.-P. 174-182.

143. Luo G. Cellular proteins bind to the poly(U) tract of the 3' untranslated region of hepatitis С virus RNA genome. // Virol. 1999. -V. 256.-P. 105-118.

144. Luo G., Hamatake R.K., Mathis M.D. et al. De novo initiation of RNA synthesis by the RNA-depended RNA polymerase (NS5B) of hepatitis С virus. // J. Virol. 2000. - V. 74. - P. 851 - 863.

145. Lvov D.K., Samokhvalov E.I., Tsuda P. et al. Prevalence of hepatitis С virus and distribution of its genotypes in Northern Eurasia // Arch, virol. 1996. - V. 141. - P. 1613 - 1622.

146. Machida-K, Tsukiyamakohara K., Seike E., et all. Ingibition of Cytochrome Release in Fas-mediated signaling pathway in transgenic mice induced to ezpress hepatytys С viral proteins. // J. Biological chemistry. - 2001. - V 276. - P. 12140-12146.

147. Mangia A., Andriulli A., Zenarola P. et al. Lack of hepatitis С virus replication intermediate RNA in diseased skin tissue of chronic hepatitis С patients. // J. Med. Virol. 1999. - V. 59. - № 3. - P. 277 - 280.

148. Manns M.P., Griffin K.J., Sullivan K.F. et al. LKM-1 autoantibodies recognaze a short linear sequence in P450IID6, a cytochrome P450 monooxygenase. //J. Clin. Invest. 1991. -V. 88. - P. 1370- 1378.

149. Marcellin P. Hepatitis C: clinical spectrum of the disease // J. Hepatol. 1999. - V. 31. - № 1. - P. 9 - 16.

150. Masalova O.V., Atanadze S.N., Samokhvalov E.I. et al. Detection of hepatitis С virus core protein circulating within different virus particle population. // J. Med. Virol.- 1998. V. 55. - P. 1 - 6.

151. Matsumoto M., Hwang S.B., Jeng K-S. et al. Homotypic interaction and multimerization of hepatitis С virus core protein. // Virol. 1996. - V. 218.-№2.-P. 43-51.

152. Mazzella G., Accogli E., Sottili S. et al. Alpha interferon treatment may prevent hepatocellular carcinoma in HCV-related liver cirrosis. // J. Hepatol. 1996. - V.24. - P. 141 - 147.

153. Mc Gornick S.E., Goodman Z.D., Maydonovitch C.L., Sjogren M.H. Evaluation of liver histology, ALT elevation and HCV RNA titer in patients with chronic hepatitis C. //Amer. J. Gastroenterol. 1996. - V. 91. -N8.-P. 1516- 1523.

154. Mellor J., Haydon G., Blair C. et al. Low level or absent in vivo replication of hepatitis С virus and hepatitis G virus / GB virus С in peripheral blood mononuclear cells. // J. Gen. Virol. 1998. - V. 79. - № 4.-P. 705-714.

155. Michalak J. P., Wychowski C., Choukhi A. et al. Characterization of truncated forms of hepatitis С virus glycoproteins. // J. Gen. Virol. 1997. -V. 78.-P. 2299-2306

156. Mishiro S., Hoshi Y., Takeda K. Hepatitis С specific an-tibodies directed at host derived epitope implication for an au-toimmune process. // J. Virol. 1994. - Vol. 69. - № 4. - P. 1400 - 1403.

157. Miyamura Т., Matsuura Y. Structural proteins of hepatitis С virus. // Trends in Microbiol. 1993. - V. 1. - P. 229 - 231.

158. Mizushima H., Hijikata M., Asabe S. et al. Two hepatitis С virus glycoprotein E2 products with different С termini. // J. Virol. 1994. - V. 68.-P. 6215-6222.

159. Mondelli M. Cerino A., Beiiotti V. et al. Immunobiologi and pathogenesis of HCV infection. // Res. Virologi. 1993. - V. 144. - P. 269-274.

160. Moradpour D., Englert C., Wakita T. et al. Characterization of cell lines allowing tightly regulated expression of hepatitis С virus core protein. // Virol. 1996. - V. 222. - P. 51 - 63.

161. Moriya K., Fujie H., Shintani Y. et al. The core proteins hepatitis С virus induce hepatocellular carcinoma in transgenic mice. // Nat. Med. -1998.-V. 4.-P. 1065- 1067.

162. Muramatsu S., Ishido S., Fujita T. et al. Nuclear localization of the NS3 protein of hepatitis С virus and factors affecting the localization. // J. Virol. 1997. - V. 71. - P. 4954 - 4961.

163. Murasawa H., Hijikata M., Chiba T. et all. Hepatitis С virus core protein inhibits Fas-mediated and tumor necrosis factor alpha - mediated apoptosis via NF - kappa - В activation. // 1999. - V. 73. - P. 4713-4720.

164. Muratori B.L., Gibellini D., Lenzi M. et al. Quantification of hepatitis С virus infected peripheral blood mononuclear cells by in situ reverse transcriptase chain reaction. // Blood. 1996. - V.88. - № 7. - P. 2768-2774.

165. Murphy F. A., Fauquet С. M., Bishop D. H. L. et al. Virus Taxonomy. Sixth Report of the International Committee on Taxonomy of Viruses. // Vienna & New York: Springer-Verlag, 1995. P. 424 - 426.

166. Nakamoto Yi M., Kaneko Y., et al. Delineation of regions important for heteromeric association of hepatitis С virus El and E2. // Virol. 1997. -V. 231. - № 1. - P. 119 - 129.

167. Nakane P.K., Kawaoi A. Peroxidase labelled antibody:a new method of conjugation. // J. Histochem. Cytochem. 1974. - V.22. - P.l 084-1091.

168. Nayak N.C., Sathar S. A. Immunohistochemical detection of hepatitis С virus antigen in paraffin embedded liver biopsies from patients with chronic liver disease. // Acta Histochem. 1999. - V. 101. - № 4. - P. 409 -419.

169. Negro F., Giostra E., Krawczynski K. et al. Detection of intrahepatic hepatitis С virus replication by strand-specific semiquantitative RT-PCR: preliminary application to the liver transplantation model. // J. Hepatol. 1998. - V. 29. -P. 1-11.

170. Nelson D.R., Marousis C.G., Davis G.L. et al. The role of hepatitis С virus-specific cytotoxic T lymphocytes in chronic hepatitis C. // J. Immunol.- 1997.-V. 158.-P. 1473- 1488.

171. Nemecek V., Fleglova Z.I., Suchankova A.V. Mapping of immunodominant epitopes in NS3/NS4 region of HCV by syntetic peptides.//J. Virol. 1993.-V. 52.-№7.-P. 185-190.

172. Neville J. A., Prescott L. E., Bhattacherjee V. et al. Antigenic variation of core, NS3, and NS5 proteins among genotypes of hepatitis С virus. // J. Clin. Microbiol. 1997. - V. 35. - P. 3062 - 3070.

173. Nikolaeva L.I., Olenina L.V., Kolesanova E.F. Immuniti of different types of hepatitis C. // Russ. J. Immunol. 1999. - V. 4. - № 2. - P. 92112.

174. Nouri Aria K.T., Sallie R., Sangar D. et al. Detection of genomic and intermediate replicative strands of hepatitis С virus in liver tissue by in situ hybridization. // J. Clin. Invest. 1993. - V. 91. - № 5. - P. 2226 - 2234.

175. Oh J. W., Ito Т., Lai, M. MA recombinant hepatitis С virus RNA-dependent RNA polymerase capable of copying the full-length viral RNA. // J. Virol. 1999. - V. 73. - № 9. - P. 7694 - 702.

176. Okabe M., Fukuda K., Arakawa K., Kikuchi M. Chronic variant of myocarditis associated with hepatitis С virus infection. // Circulation. -1997.-V. 96.-№ l.-P. 22-24.

177. Okamoto H., Kojima M., Okada Sh.-I., et al. Genetic driff of hepatitis С virus during an 8.2-year infection in chimpanzee: variability and stability. // Virol. 1992. - V. 190. - № 7. - P. 894-899.

178. Okamoto H., Okada S., Sugiyama Y. Detection of hepatitis С virus RNA by a two-stage polymerase chain reaction with two pairs of praimers deduced from the 5'noncoding region. // Jap. J. Exp. Med. 1990. - V. 60. -№3.- P. 215-222.

179. Orito E., Mizokavi M., Tanaka T. et al. Quantification of serum hepatitis С virus core protein level in patients chronically infected with different hepatitis С genotypes. // Gut. 1996. - V. 39. - P. 876-880.

180. Osna N., Silonova G., Vilgert N. et al. Chronic hepatitis С: T helper 1/T helper 2 imbalance could cause virus persistence in peripheral blood. // Scand. J. Clin. Lab. Invest. 1997. - V. 57. - P.703-710.

181. Pereboeva L. A., Pereboev A. V., Morris G. E. Identification of antigenic sites on three hepatitis С virus proteins using phage-displayed peptide libraries.//J. Med. Virol.-1998.-V. 56.-P. 105-111.

182. Pereboeva L. A., Pereboev A. V., Wang L. F. Hepatitis С epitopes from phage-displayed cDNA libraries and improved diagnosis with a chimeric antigen. // J. Med. Virol. 2000. - V. 60. - P. 144-151.

183. Peterson D.A., Johnson R.G., Nemo G. et al. Evaluation of TTVS specimens for antibodies to HCv by Abbot HCV EIA and a prototypesecond generation assay. // Second Int. Symposium on HCV. Los Angeles. - 1990. - V. 26. - P. 55.

184. Pileri P., Uematsu Y., Campagnoli S. et al. Binding of hepatitis С virus to CD81. // Science 1998. - V. 282. - P. 938-941.

185. Pizzi E., Tramontano A., Tomei L. et al. Molecular model of the specificity pocket of the hepatitis С virus protease: implications for substrate recognition. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1994. - V. 91. - P. 888-892.

186. Powell E.E., Edwards-Smith C.J., Hay J.L. et al. Host genetic factors influence disease progression in chronic hepatitis C. // Hepatology. 2000. - V. 31. - № 4. - P. 828-833.

187. Prince A.M., Scheffel J.W., Moore B. et al. A search for hepatitis С virus polymerase chain reaction-positive but seronegative subjects among blood donors with elevated alanine aminotransferase. // Transfusion. -1997.-V. 37.-P. 211-214.

188. Quiroga J.A., Martin J., Pardo M., Carreno V. Serum levels of soluble immune factors and pathogenesis of chronic hepatitis C, and their relationship to therapeutic response to interferon-a. // Dig. Dis. Sci. -1994.-V. 39.-P. 2485-2496.

189. Radkowski M., Kubicka J., Kisiel E. et al. Detection of active hepatitis С virus and hepatitis G virus/GB virus С replication in bone marrow in human subjects. // Blood. 2000. - V. 95. - № 12. - P. 39863989.

190. Ralston R., Thudium K., Berger K. et al. Characterization of hepatitis С virus envelop glycoprotein complexes expressed by recombinant vaccinia viruses. // J.Virol. 1993. - V. - 67. - P. 6753-6761.

191. Rasenack J. Viral hepatitis diagnostics. // Germany: Falk Foundation. 1993. - P. 52.

192. Ray R., Khanna A., Lagging L.M. et al. Peptide immunogen mimicry of putative El glycoprotein-specific epitopes in hepatitis С virus. //J. Virol. 1994. -V. 68. - N7. - P. 4420-4426.

193. Ray R., Lagging L., Meyer K. et al. Transcriptional regulation of cellular and viral promoters by of hepatitis С virus core protein. // Virus Res. 1995. - V. 37. - P. 209-220.

194. Reynolds J. E., Kaminski A., Kettinen H. J. et al. Unique features of internal initiation of hepatitis С virus RNA translation. // EMBO J. 1995. -V. 14.-P. 6010-6020.

195. Rice, C.M. Flaviviridae: The viruses and their replication. In Fields Virology, 3rd ed. // Philadelphia: Lippincott-Raven, 1996. P. 931-959.

196. Robertson В., Myers G., Howard C. et al. Classification, nomenclature, and database development for hepatitis С virus (HCV) and related viruses: proposals for standardization // Arch. Virol. 1998. - V. 143.-№ 12.-P. 2493-2503.

197. Ruster В., Zeuzem S., Roth W. Hepatitis С virus sequences encoding truncated core protein detected in hepatocellular carcinoma. // Biochem. Biofhis. Res. 1996. - Vol. 219. - P. 911-915.

198. Saito K., Sullivan D., Haruna Y. et al. Detection of hepatitis С virus RNA sequences in hepatocellular carcinoma and its precursors by microdissection polymerase chain reaction. // Arch. Pathol. Lab. Med. -1997. V. 121. - № 4. - P. 400-403.

199. Sakamuro D., Furukawa Т., Takegami T. Hepatitis С virus nonstructural protein NS3 transforms NIH 3T3 cells. // J. Virol. 1995. -V. 69.-P. 3893-3896.

200. Sallberg M., Pumpen P., Zhang Z.X. et al. Location of antibody-binding sites within conserved regions of the hepatitis С virus core protein. // J. Med. Virol. 1994. - V. 43. - № 1. P. 62-68.

201. Sanchez-Tapias J.M., Barrera J., Costa J. et al. Hepatitis С virus infection in patients with nonalcoholic chronic liver disease. // Ann. Intern. Med.-1990.-V. 112.-P. 921-924.

202. Sansonno D., Cornacchiulo V., Iacobelli A.R. et al. Localization of hepatitis С virus antigens in liver and skin tissues of chronic hepatitis С virus-infected patients with mixed cryoglobulinemia. // Hepatology. -1995. V.21. -P.305-312.

203. Sansonno D., Cornacchiulo V., Racanelli V., Damacco F. In situ simultaneous detection of hepatitis С virus RNA and hepatitis С virus-related antigenes in hepatocellular carcinoma. // Cancer. 1997. - V. 80. -№ 1. - P. 22-33.

204. Sansonno D., Dammacco F. Hepatitis С virus с 100 antigen in liver tissue from patients with acute and chronic infection. // Hepatology. -1993. V.18. - P.240-245.

205. Sansonno D., Iacobelli A.R., Cornacchiulo V. et al. Immunohistochemical detection of hepatitis С virus-related proteins in liver tissues. // Clin. Exp. Rheumatol. 1995. - V. 13. - S29-S32.

206. Santolini E., Migliaccio G., La M.N. et al. Biosynthesis and biochemical properties of the hepatitis С virus core protein. // J Virol. -1994.-V. 68. -P. 3631.

207. Santolini E., Pacini L., Fipaldini C. et al. The NS2 protein of hepatitis С virus is a transmembrane polypeptide. // J. Virol. 1995. - V. 69.-P. 7461-7471.

208. Selby M. J., Glazer E., Masiarz F. et al. Complex processing and protein: protein interactions in the E2:NS2 region of HCV. // Virol. 1994. -V. 204.-P. 114-122.

209. Sharara A.I., Hunt C.M., Hamilton J D. Hepatitis C. // Ann. Intern. Med. 1996. - V. 125. - P. 658-668.

210. Sherlock S. The hepatic flaviviridae: summary. // J. Viral. Hepat. -1999.-V. l.-P. 1-5.

211. Sherlock S., Dooley J. Diseases of the liver and biliary system. // Tenth Edition Blackwell Science. 1997. - P. 289-296.

212. Shimizu Y.K., Hijikata M., Iwamoto A. et al. Neutralizing antibodies against hepatitis С virus and the emergence of neutralization escape mutant viruses. // J. Virol. 1994. -V. 68. - P. 1494-1500.

213. Shin C., Lo S., Miyamura T. et al. Supression of hepatitis В virus expression and replication by hepatitis С virus core protein in Huh-7 cells. // J. Virol. 1993 Ы - P. 5823-5832.

214. Shindo M l)i Bisceglu A.M., Akatsuca T. et al. The physical state of the negative t hepatitis С virus RNA in serum of petients with chronic hepatitis L. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA - 1994. - V. 91. - № 8. -P. 8719-8723.

215. Shirai M., Okada H., Nishioka M. et al. An epitope in hepatitis С virus core region recognized by cytotoxic T cells in mice and humans. // J. Virol. 1994. - V. 68. - № 5. - P. 3334-3342.

216. Shiratori Y., Kato N., Yokosuka O. et al. Quantitative assays for hepatitis С virus in serum as predictors of long-term response to interferon. // J. Hepatol. 1997. - V. 27. - P. 437-444.

217. Shoji I., Suzuki Т., Sato M. et al. Internal processing of hepatitis С virus NS3 protein. // Virol. 1999. - V. 254. - P. 315-323.

218. Simmonds P. Variability of hepatitis С virus // Hepatol. 1995. - V. 21.-P. 570-583.

219. Sonnerborg A., Zhang Z.X., Sallberg M. A cell-binding Arg-Gly-Asp sequence is present in close proximitly to the major linear antigenic region of HCV NS3. // Bioch. Bioph. Res. Commun. 1994. - V. 202. - № 3.-P. 1355-1356.

220. Stempniak M., Hostomska Z., Nodes B. R. et al. The NS3 proteinase domain of hepatitis С virus is a zinc-containing enzyme. // J. Virol. 1997. -V.71.-P. 2881-2886.

221. Sugano M., Hayashi J., Joon S. et al. Quantification of hepatitis С viral RNA in liver and serum samples using competitive polymerase chain reaction. // J. Clin. Pathol. 1995. - V. 48. - № 8. -P. 820-825.

222. Sun X. L., Johnson R. В., Hockman M. A. et al. De Novo RNA Synthesis Catalyzed by HCV RNA-Dependent RNA Polymerase. // Biochem. Biophys. Res. Commun. 2000. - V. 268. - № 3. - P. 798-803.

223. Tai C. L., Chi W. K., Chen D. S. et al. The helicase activity associated with hepatitis С virus nonstructural protein 3 (NS3). // J. Virol. 1996. - V. 70. - P. 8477-8484.

224. Takahashi K., OkamotoH., Kishimoto S. et al. Demonstration of a hepatitis С virus-specific antigen predicted from the putative core gene in the circulation of infected hosts. // J. Gen. Virol. 1992. - Vol. 73. - № 5. -P. 667-672

225. Taliani G., Badolato C., Lecce R. et al. Hepatitis С virus RNA in peripheral blood mononuclear cells: relation with response to interferon treatment. // J. Med. Virol.- 1995. V. 7. - № 9. - P. 16-22.

226. Tanji Y., Hijikata M., Hirowatari Y. et al. Hepatitis С virus polyprotein processing: kinetics and mutagenic analysis of serine proteinase-dependent cleavage. // J. Virol. 1994. - V. 68. - P. 84188422.

227. Tanji Y., Hijikata M., Saton S. et al. Hepatitis С virus-encoded nonstructural protein NS4A has versatil function in viral protein processing. // J. Virol. -1995. V. 69. - № 3. - P. 1575-1581.

228. Tanji Y., Kaneko Т., Satoh S., Shimatoho K. Phosphorylation of hepatitis С virus-encoded nonstructural protein NS5A. // J. Virol. 1995. -V. 69. - № 6. -P. 3980-3986.

229. Tomei L., Failla C., Santolini E. et al. NS3 is a serine protease required for processing of hepatitis С virus polyprotein. // J. Virol. 1993. -V. 67.-P. 4017-4026.

230. Tong M.J., El-Farra N.S., Reikes A.R., Co R.L. Clinical outcomes after transfusion-associated hepatitis C. // N. Engl. J. Med.-1995.- V. 332. -P. 1463-1466.

231. Toshiko F., Enomoto N., Marumo F. et al. Mutations in the interferon- sensitivity determining region of hepatitis С virus and transcriptional activity of the nonstructural region 5a protein. // Hepatol. -1998.-V. 28.-P. 1147-1153.

232. Trepo C., Alonso S., Li J.S. et al. Limitation of immunoserological and molecular diagnosis of hepatitis C. // Nuclear Med. Biol. 1994. - V. 21. -№ 3. - P. 419-431.

233. Tsutsumi M., Urashima S., 1 akada A. et al. Detection of antigens related to hepatitis С virus RNA encoding the NS5 region in the livers of patients with chronic type С hepatitis. // Hepatology. 1994. - V. 19. - № 2.-P. 773-778.

234. Tu H., Gac L., Shi S. T. et al. Hepatitis С virus RNA polymerase and NS5A complex with a SNARE-like protein. // Virol. 1999. - V. 263. - № l.-P. 30-41.

235. Wardell A. D., Errington W., Ciaramella G. et al. Characterization and mutational analysis of the helicase and NTPase activities of hepatitis С virus full-length NS3 protein. // J. Gen. Virol. 1999. - V. 80. - P. 701709.

236. Wong D.K.H., Dudley D.D., Afdhal N.H. et al. Liver-derived CTL in hepatitis С infection: breadth and specificity of responses in a cohort of persons with chronic infection. // J. Immunol. 1998. - V. 160. - P. 14791488.

237. Wright-Minogue J., Yao N., Zhang R. et al. Cross-genotypic interaction between hepatitis С virus NS3 protease domains and NS4A cofactors. // J. Hepatol. 2000. - V. 32. - P. 497-504.

238. Yamada K., Mori A., Seki M. et al. Critical point mutations for hepatitis С virus NS3 proteinase. // Virol. 1998. - V. 246. - P. 104-112.

239. Yang S. H., Lee C. G., Song M. K. et al. Internal cleavage of hepatitis С virus NS3 protein is dependent on the activity of NS34A protease. // Virol. 2000. - V. 268. - № 1. - P. 132-40.

240. Yao N., Hesson Т., Cable M. et al. Structure of the hepatitis С virus RNA helicase domain. // Nat. Struct. Biol. 1997. - V. 4. - P. 463-467.

241. Yao N., Reichert P., Taremi S. S. et al. Molecular views of viral polyprotein processing revealed by the crystal structure of the hepatitis С virus bifunctional protease-helicase. // Struct. Fold. Des. 1999. - V. 7. -P. 1353-1363.

242. Yap S-H., Willems M., Van den Oord J. et all. Detection of hepatitis С virus antigen by immuno-histochemical staining: a histological marker of hepatitis С virus infection. / Hepatology. 1994. - V. 20. - P. 275 -281.

243. Yasui K., Wakita Т., Tsukiyama-Kohara K. et al. The native form and maturation process of hepatitis С virus core protein. // J. Virol. 1998. - V. 72. - № 7. - P. 6048-6055.

244. Zhang Z.X., Sonnerborg A., Sallberg M. Antigenic structure of the hepatitis С virus envelope 2 protein. // Clin. Exp. Immunol. 1994. - V. 98. -№3.~ P. 382-387.

245. Zhong W., Uss A. S., Ferrari E. et al. De novo initiation of RNA synthesis by hepatitis С virus nonstructural protein 5B polymerase. // J. Virol. 2000. - V. 74. - № 4. - P. 2017-2022.

246. Zhu N., Khoshnan A., Schneider R. et al. Hepatitis С virus core protein binds to the cytoplasmic domain of tumor necrosis factor (TNF) receptor 1 and enhances TNF-induced apoptosis. // J. Virol. 1998. - V. 72.-P. 3691-3697.