РНК и неструктурный белок NS4 вируса гепатита C в печени и периферической крови больных хроническим гепатитом C тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.03, кандидат биологических наук Лакина, Екатерина Ивановна

• Лакина, Екатерина Ивановна
• кандидат биологических наук
• 2000

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Лакина, Екатерина Ивановна

ИСПОЛЬЗОВАННЫЕ СОКРАЩЕНИЯ

ВВЕДЕНИЕ 6 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Глава 1. Общие сведения о вирусе гепатита С

1.1. Вирус гепатита С - строение, распространенность и пути передачи

1.2. Клиническое течение гепатита С

1.3. Патологические изменения в печени при гепатите С

Глава 2. Молекулярная организация и иммунологические свойства вируса гепатита С

2.1 .Организация вирусного генома

2.2. Структура и функции вирусных белков

2.3. Гуморальный и клеточный иммунные ответы при ВГС-инфекции

Глава 3. Молекулярные основы диагностики гепатита С

3.1. Выявление антител к белкам ВГС

3.2. Детекция РНК ВГС

3.3.Выявление вирусных белков

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Глава 4. Материал от больных

Глава 5. Детекция РНК вируса гепатита С

5.1. Выделение РНК ВГС

5.2. Детекция геномной РНК ВГС

5.3. Выявление репликативной формы РНК вируса 51 гепатита С.

Глава 6. Получение МКА к рекомбинантному белку NS вируса гепатита С

6.1. Рекомбинантный белок NS4 вируса гепатита С

6.2.Синтетические петиды

6.3. Иммунизация

6.4. Миеломная клеточная линия

6.5. Культивирование клеток

6.6. Слияние клеток и выращивание гибридом

6.7. Скрининг гибридом

6.8. Криоконсервирование гибридом

6.9.Получение асцитных жидкостей, содержащих МКА

6.10.Выделение МКА из асцитных жидкостей

6.11 .Определение концентрации белка

6.12. Субтипирование МКА и определение типов легких цепей в составе иммуноглобулинов

6.13. Твердофазный ИФА

6.14. Иммуноблот

6.15. Эпитопное картирование МКА

6.16. Конкурентный т-ИФА

Глава 7. Детекция белка NS4 ВГС in situ

7.1. Приготовление препаратов изолированных клеток

7.2. Получение криостатных срезов печени

7.3. Выделение лимфоцитов из цельной крови 59 7. 4. Непрямой иммунофлюоресцентный анализ (нИФ) 59 7.5. Непрямой иммуноферментный анализ in situ

Глава 8. Статистическая обработка результатов

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Глава 9. Выявление РНК ВГС

9.1 .Выявление геномной РНК ВГС

9.2. Детекция минус-РНК ВГС

9.3.Выявление РНК ВГС после интерферонотерапии

Глава 10. Получение и характеристика МКА

10.1. Слияние и скрининг гибридом

10.2. Характеристика МКА к белку N84 71 10.3 .Эпитопная специфичность МКА 73 10.4. Реципрокный конкурентный анализ МКА

Глава 11. Выявление натурального белка N84 ВГС

11.1. Детекция N84 в изолированных инфицированных гепатоцитах

11.2. Изучение экспрессии белка N84 ВГС на криостатных срезах печени

11.3. Выявление белка N84 в лимфоцитах периферической крови

ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ

ВЫВОДЫ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «РНК и неструктурный белок NS4 вируса гепатита C в печени и периферической крови больных хроническим гепатитом C»

АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ.

Гепатит С является актуальной проблемой современной медицины. Это обусловлено несколькими причинами. Во-первых, вирус гепатита С широко распространен в мире, им инфицированы 170 млн человек, что составляет около 3% человеческой популяции. Во-вторых, для данного заболевания характерен высокий уровень хронизации. По данным разных источников, в 50 [17] - 85% [140] случаев острый гепатит С принимает хроническое течение. В 20-30% случаев хронический гепатит С заканчивается циррозом с возможным развитием первичного рака печени [180]. В-третьих, до сих пор не создано специфических средств профилактики и лечения этого опасного заболевания.

На долю гепатита С приходится 20% случаев острого и 70% случаев хронического гепатита [26]. Летальные исходы при остром гепатите С встречаются редко. Однако, по данным Европейского комитета по профилактике вирусных гепатитов, гепатит С по причине смертности среди больных с хроническим поражением печени занимает второе место, уступая только хроническому алкоголизму [1].

Для гепатита С в подавляющем большинстве случаев характерно бессимптомное течение. Считается, что на один случай заболевания с желтухой приходится, как минимум, пять-шесть случаев безжелтушного гепатита [1]. В 85% случаев хроническая инфекция также является бессимптомной [26]. Это определяет широкое распространение ВГС-инфекции и делает специфическую диагностику этого заболевания актуальной проблемой здравоохранения во всем мире.

Первичная диагностика ВГС-инфекциии основывается на выявлении антител к вирусным белкам. При обнаружении сывороток, содержащих антитела к ВГС, необходимо проведение подтверждающего теста методом иммуноблоттинга. Однако для адекватной диагностики определения одних вирусспецифических антител недостаточно. Это обусловлено рядом причин. Во-первых, выявление анти-ВГС антител не позволяет разграничить текущую инфекцию от прошлой, закончившейся элиминацией вируса [60]. Во-вторых, получение отрицательного результата при анализе антител не всегда однозначно свидетельствует об отсутствии инфекционного агента в организме. Это связано с наличием так называемого периода "окна" при образовании антител. Кроме того, часть пациентов (около 10%), особенно при иммунодифицитных состояниях, остается серонегативной [239]. В связи с этим возникает необходимость выявления прямых маркеров вируса - РНК и белков. Выявление РНК ВГС методом ПЦР является в настоящее время единственным применяемым в клинической практике методом прямого определения вируса. Однако определение вирусной РНК проводится, главным образом, в сыворотке крови. В то время как печень остается неизученной. Другим прямым маркером являются вирусные белки, но в настоящее время доступные тест-системы для их выявления отсутствуют. Изучение РНК и белков ВГС непосредственно в печени - органе, в котором происходит активная репликация вируса необходимо как для решения задач практического здравоохранения, так и ряда фундаментальных проблем молекулярной биологии вируса и патогенеза гепатита С. Многие вопросы, связанные с данным заболеванием, остаются нерешенными. В частности, не ясен механизм персистенции вируса и повреждения клеток печени [26]. Активно обсуждается связь между накоплением РНК и белков вируса и активностью патологического процесса. Открытым остается вопрос о внепеченочной репликации ВГС.

ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ.

Цель настоящей работы состояла в изучении частоты определения геномной и антигеномной форм РНК ВГС в печени и периферической крови (сыворотке и лимфоцитах) больных с различной активностью хронического гепатита С (ХГС) и в разработке метода выявления белка N84 в организме больных с помощью моноклональных антител (МКА). Для достижения цели планировалось решение следующих задач:

1. Исследовать частоту выявления геномных и антигеномных цепей РНК ВГС в сыворотках крови, лимфоцитах периферической крови и печени больных с разными формами и стадиями ХГС.

2. Провести статистический анализ полученных результатов для оценки связи между частотой выявления РНК ВГС и активностью патологического процесса.

3. Получить гибридомные клеточные линии, продуцирующие МКА к рекомбинантному белку N84 ВГС.

4. Исследовать способность полученных МКА взаимодействовать с натуральным антигеном N84 в клетках печени больных ХГС.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА И ПРАКТИЧЕСКАЯ ЦЕННОСТЬ.

1. Установлено, что положительные цепи РНК (плюс-РНК) ВГС достоверно чаще выявляются в печени, чем в периферической крови (в сыворотке крови и лимфоцитах) больных ХГС. Отрицательные цепи (минус-РНК) ВГС обнаружены в ткани печени и не обнаружены в лимфоцитах периферической крови больных ХГС.

2. Показано, что прогрессирование поражения печени сопровождается уменьшением частоты выявления минус-РНК ВГС, что может свидетельствовать о подавлении репликации вируса при серьезных воспалительных процессах в печени.

3. В печени части пациентов после интерферонотерапии обнаружена РНК ВГС при отсутствии этого маркера в сыворотке, что свидетельствует о необходимости определения вирусной РНК в печени после лечения.

4. Получена панель моноклональных антител, выявляющих 5 индивидуальных антигенных детерминант неструктурного белка N84 ВГС.

5. Разработан метод выявления белка N84 ВГС в криостатных срезах печени больных ХГС на основе полученных моноклональных антител.

ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ.

1. Установлено, что частота выявления РНК ВГС максимальна в ткани печени и значительно ниже в сыворотке крови больных ХГС.

2. В лимфоцитах периферической крови антигеномная форма РНК ВГС не выявлена.

3. Получено 6 гибридом, продуцирующих МКА, направленные к пяти антигенным детерминантам белка N84 ВГС.

4. Показана принципиальная возможность выявления вирусного белка N84 в клетках печени больных хроническим гепатитом С с помощью полученных МКА.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Заключение диссертации по теме «Молекулярная биология», Лакина, Екатерина Ивановна

ВЫВОДЫ.

1. Из 87 исследованных больных хроническим гепатитом С (ХГС) положительные цепи РНК (плюс-РНК) вируса гепатита С (ВГС) выявлены методом ОТ-ПЦР у 82% пациентов в печени, у 66% в лимфоцитах и у 54% в сыворотке крови. Обнаружена положительная коррелятивная связь между присутствием плюс-РНК ВГС в печени и активностью аланинаминотрансферазы (АЛТ) в сыворотке крови. Между индексом гистологической активности (ИГА) и гистологическим индексом склероза (ГИС) и частотой выявления плюс-РНК связи не выявлено.

2. Отрицательные цепи РНК ВГС (минус-РНК) в печени выявлены, в среднем, у 32% больных ХГС. Частота выявления минус-РНК возрастает при переходе гепатита с минимальной степенью активности (ИГА=1-3) в гепатит со слабовыраженной активностью (ИГА=4-8) от 12 до 42% и уменьшается у пациентов с умеренной активностью ХГС (ИГА=9-12) до 17%.

3. В лимфоцитах периферической крови больных ХГС не обнаружено маркера активной вирусной репликации (минус-РНК) при наличии в этих образцах положительных цепей РНК вируса.

4. Для адекватной оценки эффективности противовирусной терапии необходимо исследовать РНК ВГС не только в сыворотке крови, но и в печени.

5. Получено 6 гибридом, продуцирующих моноклональные антитела (МКА) к рекомбинантному белку N84 ВГС. Эти МКА опознают пять антигенных эпитопов: один линейный эпитоп в области 1700-1707 а.о. (МКА ЗП1 и ЗН2), два линейных эпитопа в области 1711-1732 а.о. (МКА ШЗ и Ш11), и два конформационно-зависимых эпитопа, расположенных в районе 1689-1738 а.о. (МКА С1) и 1677-1756 а.о. (МКА 6В11).

6. МКА способны выявлять натуральный белок N84 в клетках печени больных хроническим гепатитом С. Наиболее эффективно взаимодействуют с белком N84, локализованном в цитоплазме зараженных клеток, МКА 6В11, Ш11 и ЗР12.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Лакина, Екатерина Ивановна, 2000 год

1. Балаян М.С., Михайлов М.И. Энциклопедический словарь -вирусные гепатиты. Изд. 2-е. М.: Амипресс. 1999. - 304 с.

2. Каминский Л.С. Статистическая обработка лабораторных и клинических данных. Ленинградское отделение: Медицина. - 1964. -252с.

3. Лопаткина Т.Н. Клиника гепатита С. // Вирусные гепатиты: достижения и перспективы. 1997. -N1. - С. 12-16.

4. Львов Д.К. Вирусный гепатит С "ласковый убийца". // Росс, гастроэнтерол. журнал. - 1995. -N1. - С.4-6.

5. Майтесян Е.С., Кудрявцева М.В., Кудрявцев Б.Н. Цитофлуо-риметрическое исследование содержания гликогена в синтезирующих и несинтезирующих ДНК гепатоцитах регенерирующей печени. // Цитология. 1983. - Т. 25. - N5. -С. 546-551.

6. Пименов В.К., Зубов С.В., Колобов A.A. и др. Антигенные свойства синтетических пептидов, воспроизводящих основные антигенные детерминанты структурных и неструктурных белков вируса гепатита С. // Биотехнология. 1998. - N3. - С.76-81.

7. Соринсон С.Н. Вирусные гепатиты. Изд. 2-е. Санкт-Петербург: Теза.- 1998.-331 с.

8. Adinolfi L.E., Andreana A., Utili R. et al. HCV RNA levels in serum, liver, and peripheral blood mononuclear cells of chronic hepatitis С patients and their relationship to liver injury. // Am. J. Gastroenterol. 1998. - V.93. -N11.-P.2162-2166.

9. Almeshari K., Alahdal M., Alfurayh O. et at. New inights into hepatitis С virus ifection of hemodialisis patients the implications. // Am. J. Kid. Dis.1995.-V. 25.-N4.-P. 572-578.

10. Ballardini G., GroffP., Giostra F. et al. Hepatocellular codistribution of С100, СЗЗ, C22, and NS5 hepatitis С virus antigens detected by using immunopurified polyclonal spontaneous human antibodies. // Hepatology. -1995. V. 21. - P.730-734.

11. Ballardini G., Manzin A., Giostra F. et al. Quantitative liver parametrs of HCV infection relation to HCV genotypes, viremia and response to interferon treatment. // J. Hepatol. - 1997. - V.26. - N4. - P.779-786.

12. Bartenschlager R., Ahlborn-Laake L., Mous G., Jacobsen H. Nonstructural protein 3 of the hepatitis С virus encodes a serine-type proteinase required for clevage at the NS3/4 and NS4/5 junctions. // J. Virol.- 1993. -V.67.- P.3835-3844.

13. Bartenschlager R., Ahlborn-Laake L., Mous J., Jacobsen M. Kinetic and structural analyses of hepatitis С virus polyprotein processing. // J. Virol. -1994. Vol. 68. - N8. - P. 5045-5055.

14. Bartenschlager R., Ahlborn-Laake L., Yasargil K. et al. Substrate determinants for clevage in cis and in trans by the hepatitis С virus NS3 proteinase. // J. Virol. 1995. - V.69. - P. 198-205.

15. Bartenschlager R., Lohmann V. Replication of hepatitis С virus. // J. Gen. Virol. 2000. - V.81. - P.l631 -1648.

16. Behrens S., Tomei L., De Francesco R. Identification and properties of the RNA-depended RNA polymerase of hepatitis C virus. //EMBO Journal. 1996. - V.15. - P. 12-22.

17. Bellentani S., Pozzato G., Saccoccio G. et al. Clinical course and risk factors of hepatitis C virus related liver disease in the general population: report from the Dionysos study. // Gut. 1999. - V.44. - N6. - P.874-880.

18. Bhattacherjee N., Prescott L.E., Pike I. et al. Use of NS-4 peptides to identifity type-specific antibody to hepatitis C virus genotypes 1, 2,3,4,5 and 6. // J.Gen.Virol. 1995. - V.76. - P. 1737-1748.

19. Blight K., Lesniewski R.R., Labrooy J.T. et al. Localisation of hepatitis C virus proteins in infected liver tissue by immunofluorescence. // J. Gen.Virol. -1993.-V.76.-P. 1737-1748.

20. Blight K., Rowland R., Hall P. et al. Immunohistochemical detection of the NS4 antigen of hepatitis C virus and its relation to histopathology. // Amer. J. Pathol. 1993. - V.143. - P. 1568-1573.

21. Blight K., Lesniewski R.R., Labrooy J.T., Gowans E.J. Detection and distribution of hepatitis C-specific antigens in naturally infected liver. // Hepatology. 1994. - V. 20. - P. 553-557.

22. Booth J.C., Foster G.R., Levine T. et al. The relationship to genotype in chronic HCV infection. // Liver. 1997. - V.17. -N3. - P.144-151.

23. Boyer N., Marcellin P. Natural history of hepatitis C and the impact of anti-viral therapy. // Forum (Genova). 2000. - V. 10. - N1. - P.4-18.

24. Bozdayi A.M., Uzunalimoglu O., Asian N. et al. Influence of viral load and alanine aminotransferase on viral genetic heterogeneity in patients withchronic hepatitis C virus infection. // Intervirology. 2000. - V.43. -Nl. - P.6166.

25. Brody R.I., Eng S., Melamed J. et al. Immunohistochemical detection of hepatitis C antigen by monoclonal antibody TORDJI-22 compared with PCR viral detection. //Am. J. Clin. Pathol. 1998. - V.l 10. - Nl. -P.32-37.

26. Bukh J., Purcell R.H. Miller R.H. At least 12 genotypes of hepatitis C virus predicted by sequence analysis of the putative El gene of isolates collected wordwide. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1993. - V.90. - P.8234-8238.

27. Bukh J., Purcell R.H. Miller R.H. Sequence analysis of the core gene of 14 hepatitis C virus genotypes. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1994. - V.91. -P.8239-8243.

28. Bukh J., Miller R.H., Purcell R.H. Genetic heterogeneity of hepatitis C virus: quasispecies and genotypes. // Semin. Liver Dis. 1995. - V.15. - P.41-63.

29. Buti M., Esteban R. What to do when standart therapy fails. // Forum (Genova). 2000. - V.l0. - N1. - P.63-69.

30. Castillo A., Suhira M.L., Civeira M.P., Prieto J. Correlation between lymphocyte and monocyte function in patients with chronic non-A, non-B hepatitis letter. // Am. J. Gastroenterol. 1989. - V.84. - P.978-982.

31. Cerino A., Mondelli M. Identification of immunodominant B-cell epitope on the hepatitis C nonstructural region definded by human monoclonal antibodies. // J. Immunol. 1991. - Vol. 147. - N4. - P. 2692-2696.

32. Chamberlain R.W., Adams N.J., Taylor L.A. et al. The complete coding sequence of hepatitis C virus genotype 5a, the predominant genotype in South Africa. // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1997. - V.236. - P.44-49.

33. Chamlian A., Benkoel L., Sahel J. et al. Immunohistochemical detection of hepatitis C virus related CI00-3 and core antigens in formalin-fixed liver tissue. // Cell.Molec. Biology. 1996. - V. 42. - P. 557-566.

34. Chang J.C., Seidel C., Ofenloch B. et al. Antigenic heterogeneity of the hepatitis C virus NS4 protein as modeled with synthetic peptides. // Virology. -1999. V. 257.-P. 177-190.

35. Chang M., Marquardt A.P., Wood B.L. et al. In situ distribution of hepatitis C virus replicative-intermediate RNA in hepatic tissue and its correlation with liver disease. // J. Virol. 2000. - V.74. - N2. - P.944-955.

36. Chen D., Kuo G., Sung J. et al. Hepatitis C virus infection in an area hyperendemic for hepatitis B and chronic liver disease; the faiwan experience. // J. Infect. Dis. 1990. - V. 162. - P.817-822.

37. Chen C.-M., You L.-R., Hwang L.-H. Lee Y.-H. Direct interaction of hepatitis C virus core protein with the cellular lymphotoxin-(3 receptor modulates the signal pathway of the lymphotoxin-P receptor. // J.Virol. 1997. -V.71.-P.9417-9426.

38. Chen ML, Sallberg M., Sonnerborg A. et al. Human and murine antibody recognition is focused on the ATP/helicase, but not the protease domain of hepatitis C virus nonstructural 3 protein. // Hepatology. 1998. - V.28. - P.219-224.

39. Chen M., Sallberg M., Sonnerborg A. et al. Limited humoral immunity in hepatitis C virus infection. // Gastroenterology. 1999. - V.l 16. - P. 135-143.

40. Cherman K.E. Alanine-aminotranspherase in clinical practice: review. // Arch. Intern. Med. -1991. V.151. -P.260-265.

41. Chien D., Choo Q.-L., Ralston R. et al. Persistence of HCV dispite antibodies to both putative envelope glycoproteins. // Lancet. 1993. - V.342. -P.933.

42. Cho S.W., Hwang S.G., Han D.S. et al. In situ detection of hepatitis C virus RNA in liver tissue using a digoxigenin-labeled probe created during a polimerase chain reaction. // J. Med. Virol. 1996. - V.48. -N3. -P.327-333.

43. Chomezynski P., Sacchi N. Single step metod of RNA isolation by acid guanidium thiocyanate-phenol-chlorophorm extraction. // Analyt. Biochem. -1987. V.162. -P.156-159.

44. Choo Q.-L., Kuo G., Weiner A.J. et al. Isolation of cDNA clone derived from a blood-borne non-A, non-B viral hepatitis genome. // Science. 1989. -V.244. - P.359-361.

45. Choo Q.-L., Weiner A.J., Overby L. et al. Hepatitis C virus: the major causative agent viral non-A, non-B hepatitis. // British. Med. Bull. 1990. -V.46. - P.423-441.

46. Choo Q.-L., Richman J.H., Han K. et al. Genetic organization and diversity of the hepatitis C virus. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1991. - V.88. -P.2451-2455.

47. De Francesco R., Urbani A., Nardi M.C. et al. A zinc binding site in viral serine proteinases. // Biochemistry. 1996. - V.35. - P.13282-13287.

48. De Francesco R. Molecular virology of the hepatitis C virus. // J. Hepatol. 1999.- V.31.-N1.-P 47-53.

49. De Moliner L., Pontisso P., De Salvo G.L. et al. Serum and liver HCV RNA levels in patients with chronic hepatitis C: correlation with clinical and histological features. // Gut. 1998. - Y.42. - N5. - P.856-860.

50. Del Porto P., Puntoriero G., Scotta C et al. High prevalence of hypervariable region 1-specific and -cross-reactive CD4(+) T cells in HCV-infected individuals responsive to IFN-alpha treatment. // Virology. 2000. -V.269. - N2. - P.313-324.

51. Desmet V.J., Gerber M., Hoofnagle J.H. et al. Classification of chronic hepatitis: diagnosis, grading arid staging. // Hepatology. 1994. - V.19. -P. 1513-1520.

52. Di Martino V., Saurini F., Samuel D. et al. Long-term longitudinal study of intrahepatic hepatitis C virus replication after liver transplantation. // Hepatology. 1997. - V.26. - N5. - P.1343-1350.

53. Diepolder H.M., Zachoval K., Hoffman R.M. et al. Possible mechanism involving T lymphocyte to response to non-structural protein 3 in viral clearance in acute hepatitis C infection. // Lancet. 1995. - V.346. - P. 10061007.

54. Diepolder H.M., Gerlach J.T., Zachoval K. et al. Immunodominant CD4+ T cell epitope within nonstructural protein 3 in acute hepatitis C virus infection. // J. Virol. 1997. - V.71. - P.6011-6019.

55. Doughty A.L., Painter D.M., McCaughan G.W. Nonspecificity of monoclonal antibody Tordji-22 for the detection of hepatitis C virus in liver transplantant recipients with cholestatic hepatitis. // Liver Transpl. Surg. 1999. -V.5. - N1. - P.40-45.

56. Dries V., von Both I., Muller M. et al. Detection of hepatitis C virus in paraffin-embedded liver biopsies of patients negative for viral RNA in serum. // Hepatology.- 1999. V.28. - N1.-P.223-229.

57. Dubuisson J., Hsu H., Cheung R. et al. Formation and intracellular localization of hepatitis C virus invelope glycoprotein complexes expressed by recombinant vaccinia and sindbis viruses.//J. Virol. 1994. - Vol. 68. - N10. - P.6147-6160.

58. Dubuisson J., Rice C.M. Hepatitis C virus glycoprotein folding: disulfide bond formation and assotiation with calnexin. // J. Virol. 1996. - V.70. -P.778-786.

59. Enomoto N., Kurosaki M., Tanaka Y. et al. Fluctuation of hepatitis C virus quasispecies in persistent infection and interferon treatment revealed by single-strand conformation polymorphism analysis. // J. Gen. Virol. 1994. -Vol. 75.-N2.-P. 1361-1369.

60. Esteban R. Epidemiology of hepatitis C virus infection. // Abstr. Internat. Symp. on Viral Hepatitis and Liver Disease. Houston. 1990. - P. 160.

61. Esteban J.I., Genesca J., Alter H.J. Hepatitis C: molecular biology, pathogenesis, epidemiology, clinical features, and prevention. // Progr. Liv. Dis.- 1992. N10. - P.253-282.

62. Fan X., Solomon H., Poulos J.E. et al. Comparison of genetic heterogeneity of hepatitis C viral RNA in liver tissue and serum. // Am. J. Gastroenterol. 1999. - V.94. -N5. - P. 1347-1354.

63. Farci P., Alter H.J., Wong D. et al. A long-term study of hepatitis C virus replication in non-A, non-B hepatitis. // N. Eng. J. Med. 1991. - V.325. -P.98-104.

64. Farci P., Alter HJ., Govindarajan S. et al. Lack of protective immunity against reinfection with hepatitis C virus. // Science. 1992. - V.258. - P.135-140.

65. Feray C., Samuel D., Thiers V. et al. Reinfection of liver graft by hepatitis C virus after liver transplantation. // J. Clin. Invest. 1992. - V.89. -P. 13611366.

66. Ferrari E., Wright M.J., Fang J.W. et al. Characterization of soluble hepatitis C virus RNA-dependent RNA polymerase expressed in Escherichia coli. // J. Virol. 1999. - V.73. - P. 1649-1654.

67. Forns X., Bukh J. Methods for determining the hepatitis C virus genotype. // Viral Hepatitis. 1998. - V.4. - N1. - P. 1 -19.

68. Fournillier-Jacob A., Cahour A., Escriou N. et al. Processing of the El glycoprotein of hepatitis C virus expressed in mammalian cells. // J. Gen. Virol.- 1996. Vol. 77. - N5. - P. 1955-1964.

69. Francis B., Ball V., Lee S. et al. Earlier detection of antibody to hepatitis C virus in seroconverters by Ortho second generation HCV assay. // Symposium on HCV. Los-Angeles. - 1990. - V. 16. - P. 103.

70. Franco F., Mele A., Caprilli F. et al. Anti-HCV prevalence in outpatients attending a sexual transmitted disease clinic in Italy. // Abstr. Internal Symp. on Viral Hepatitis and Liver Disease. Houston. 1990. - P. 156.

71. Gale M. Jr., Biakely C.M., Kwieciszewski B. et al. Control of PKR protein kinase by hepatitis C virus nonstructural 5A protein: molecular mechanisms of kinase regulation. // Mol. Cell. Biol. 1998. - V.18. - P.5208-5218.

72. Gastaldi M., Massacrier A., Plannels R. et al. Detection by in situ gybridization of hepatitis C virus positive and negative RNA strands using digoxigenin-labeled cDNA probes in human liver cells. // J. Hepatol. 1995. -V.23. - N5. - P.509-518.

73. Gil B., Quian C., Riezu-Boj J.I. et al. Hepatic and extrahepatic HCV RNA strands in chronic hepatitis C: different patterns of response to interferon treatment. // Hepatology. 1993. - V.18. - P. 1050-1054.

74. Gerber M.A.Chronic hepatitis C: the beginning of the end of a time — honoured nomenclature? // Hepatology. 1992. - V.15. - N4. - P.733-734.

75. Goeser T., Muller H.M., Jin Y.E. et al. Characterization of antigenic determinants in the core antigen of the hepatitis C virus. // Virology. 1994. -V.205. - P.462-469.

76. Gonzalez-Peralta R. P., Fang J. W., Davis G. L. et al. Optimization for the detection of hepatitis C virus antigens in the liver. // J. Hepatol. 1994. - V. 20. -P. 143-147.

77. Gonzalez-Peralta R.P., Fang J., Gary L. et al. Significance of hepatic expression of hepatitis C viral antigens in chronic hepatitis C. // Dig. Dis. Sci. -1995.-V. 40.-P. 2595-2601.

78. Gosalvez J., Rodriguez-Inigo E., Ramiro-Dias J. et al. Relative quantification and mapping of hepatitis C virus by in situ hybridization and digital image analysis. // Hepatology. 1998. - V.27. - N5. - P. 1428-1434.

79. Grassi G., Pozzato G., Moretti M., Giacca M. Quantitative analysis of hepatitis C virus RNA in liver biopsies by competitive reverse transcription and polymerase chain reaction. // J. Hepatol. 1995. - V.23. - N4. - P.403-412.

80. Gretch D.R., Corey L., Wilson J. et al. Acessment of hepatitis C virus RNA levels by quantitative competitive RNA polymerase chain reaction: high-titer viremia correlates with advanced stage of disease. // J. Infect. Dis. 1994. -V.169. - P. 1219-1225.

81. Gretch D.R., Bacchi C.E., Corey L. et al. Persistent hepatitis C virus infection after liver transplantation: clinical and virological features. // Hepatology. 1995. - V.22. - P.l-9.

82. Guido M., Rugge M., Thung S.N. et al. Hepatitis C virus serotypes and liver pathology. // Liver. 1996. - V.16. - N6. - P.353-357.

83. Gutfreund K.S., Bain V.G. Chronic viral hepatitis C: management update. // CMAJ 2000. - V.162. - N6. - P.827-833.

84. Haydon G.H., Yarvis L.M., Blair C.S. et al. Clinical significance of intrahepatic hepatitis C virus levels in patients with chronic HCV infection. // Gut. 1998. - V.42. - N4. - P.570-575.

85. Hellen C.U.T., Pestova T.V. Translation of hepatitis C virus RNA. // J. Viral. Hepat. 1999. - V.6. - PP.79-87.

86. Hijikata M., Kato N., Ootsuyama Y. et al. Gene mapping of the putative structural region of the hepatitis C virus genome by in vitro processing analysis. 11 Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 1991. - V.88. -P.5547-5551.

87. Hijikata ML, Mizushima H., Tanji Y. et al. Proteolytic processing and membrane association of putative nonstructural proteins of hepatitis C virus. // Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 1993. - V.90.-P. 10773-10777.

88. Hirota M., Satoh S., Asabe S. et al. Phosphorylation of nonstructural 5A protein of hepatitis C virus: HCV group-specific hyperphosphorylation. // Virology. 1999.-V.257.-N1.-P.130-137.

89. Irwing W., Creme E., Ho W. et al. Hepatitis C infection in anteantes and sexual health clinic patients in Australia: evidence for sexual transmission. // Abstr. VII Internat. Congr. Virol. Berlin. 1990. - P.38.

90. Ishii K., Rosa D., Watanabe Y. et al. High titers of antibodies inhibiting the binding of envelope to human cells correlate with natural resolution of chronic hepatitis C. // Hepatology. 1998. - V.28. - P.l 117-1120.

91. Ito T., Mukaigawa I., Hirabayaschi Y. et al. Cultivation of hepatitis C virus in primari hepaticyte culture from patients with chronic hepatitis C virus in release of high titre infectious virus. // J. Gen. Virol. 1996. - Vol. 77. -N5.-P. 1043-1054.

92. Jamal M.M., Soni A., Quinn P.G. et al. Clinical features of hepatitis C-infected patients with persistently normal alanine transaminase levels in the Southwesten United States. // Hepatology. 1999. - V.30. - N5. -P.1307-1311.

93. Jolivet-Reynaud C., Dalbon P., Viola F. et al. HCV core immunodominant region analysis using mouse monoclonal antibodies and human sera: characterization of major epitopes useful for antigen detection. // J. Med. Virol. 1998. - V.56. - N4. - P.300-309.

94. Kage M., Shimamatu K., Nakashima E. et al. Long-term evolution of fibrosis from chronic hepatitis to cirrhosis in patients with hepatitis C: morphometric analysis of repeated biopsies. // Hepatology. 1997. - V.25. -P.1028-1031.

95. Khudyakov Y.E., Khudyakova N.S., Jue D.L. et al. Linear B-cell epitopes of the NS3-NS4-NS5 proteins of the hepatitis C virus as modeled with synthetic peptides // Virology. 1995. - V.206. - P.666-672.

96. Kim D.W., Kim J., Gwack Y. et al. Mutational analysis of the hepatitis C virus RNA helicase. // J.Virol. 1997. - V.71. - P.9400-9409.

97. Kim J.E., Song W.K., Chung K.M. et al. Subcellular localization of hepatitis C viral proteins in mammalian cells. // Arch. Virol. 1999. - V.144. -N2. -P.329-343.

98. Kita H., Hiroishi K., Moriyama T. et al. A minimal and optimal cytotoxic T cell epitope within hepatitis C virus nucleoprotein. // J. Gen.Virol. 1995. -V.76. - P.3189-3193.

99. Kobayashi M., Tanaka E., Matsumoto A. et al. Antibody response to E2/E1 hepatitis C virus protein in patients with acute hepatitis C. // J. Gastroenterol. Hepatol. 1997. - V.12. - P.73-76.

100. Kobayashi K., Ishii M., Igarashi T. et al. Profiles of cytokines produced by CD4-positive Y lymphocytes stimulated by anti-CD3 antubody in patients with chronic hepatitis C. // J. Gastroenterol. 1998. - V.33. - P.500-507.

101. Koch J.O., Bartenschlager R. Modulation of hepatitis C virus NS5A hyperphophorylation by nonstructural proteins NS3, NS4A, and NS4B. // J. Virol. 1999. - V.73. -N9. - P.7138-7146.

102. Kohler G., Milstein C. Continuous cultures of fused cells secreting antibody of predifmed specificity. // Nature. 1975. - V. 256. - P. 495-497.

103. Kolykhalov A.A., Feinstone S.M., Rice C.M. Identification of highly conserved sequence element at the 3'-terminus of hepatitis C virus genome RNA. // J. Virol. 1996. - V.70. - N6. - P.3363-3371.

104. Koziel M.J., Walker B.D. Characteristics of the intrahepatic cytotoxic T lymphocyte response in chronic hepatitis C infection. // Springer Semin. Immunopatol. 1997. - V.19. -P.69-83.

105. Krawczynski K., Beach M.J., Bradly D.W. et al. Hepatitis C virus antigen in hepatocytes: immunomorphologic detection and identification. // Gastroenterology.- 1992. Vol. 103. - N5. - P. 622-629.

106. Lam N.P. Hepatitis C: natural history, diagnosis, and management. // Am. J. Health. Syst. Pharm. 1999. - V.56. -N10. - P.961 - 973.

107. Larghi A., Tagger A., Crosignani A. et al. Clinical significance of hepatitis C HCV RNA in patients with chronic hepatitis C demonstrating long-term sustained response to interpheron-alpha therapy. // J. Med. Virol. 1998. -V.55. -Nl. -P.7-11.

108. Laskus T., Radkowski M., Wang L.F. et al. Lack of evidence of hepatitis G virus replication in the livers of patients coinfected with hepatitis C and G viruses. // J. Virol. 1997. - V.71. - N10. - P.7804-7806.

109. Lau G.K.K., Fang J.V.C., Wu P.S. et al. Detection of hepatitis C viru s genome in formalin-fixed parafin-embedded liver tissue by in situ reverse transcription polymerase chane reaction. // J. Med. Virol. 1994. - V.44. - N5.- P.406-409.

110. Lee J.W., Kim K.-M. Jung S.-H. et al. Identification of a domain containing B-cell epitopes in hepatitis C virus E2 glycoprotein by using mouse monoclonal antibodies. // J. Virol. 1999. - V.73. - N1. - P. 11-18.

111. Leevy C.B., Zierer K.G., Leevy C.M. Viral hepatitis C. // J. Assoc. Acad. Minor. Phys. 1998. - V.9. - N4. - P.59-64.

112. Lelie P.N., Damen M., Cuypers H. et al. International collaborative study on the second eurohep HCV-RNA reference panel. // J. Virol. 1996. - Vol. 81.- N1. P.347-352.

113. Lerat H., Berby F., Trabaud M.A. et al. Specific detection of hepatitis C minus strand RNA in hematopoetic cells. // J. Clin. Invest. 1996. - V.97. - N3. -P.845-851.

114. Lin C., Lindenbach B.D., Pragai B.M. et al. Processing in the hepatitis C virus E2-NS2 region: identification of p7 and two distinct E2-specific products with diffirent C-termini. // J. Virol. 1994a. - Vol. 68. - N8. - P. 5063-5073.

115. Lin C., Pragai B.M., Grakoui A. et al. Hepatitis C virus NS3 serine proteinase: trans-cleavage requirements and processing kinetics. // J. Virol. -19946. Vol. 68. - N12. - P. 8147-8157.

116. Lo S.-Y., Masiarz F., Hwang S.B. et al. Differencial subcellular localization of hepapitis C virus core gene products. // Virology. 1995. -Vol.213. - N4.-P. 456-461.

117. Lo S.-Y., Selby M.J., Ou J.-H. Interaction between hepatitis C virus core protein and El envelope protein. // J. Virol. 1996. - V.70. - P.5177-5182.

118. Lohr H.F., Schlaak J.K. Kollmannsperger S. et al. Liver infiltrating and circulating CD4+ T cells in chronic hepatitis C: immunodominant epitopes, HLA-restriction and functional significance. // Liver. 1996. - V.16. - P. 174182.

119. Lu W., Lo S., Chen M. et al. Activation of p53 tumor supressor by hepatitis C virus core protein In Process Citation. // Virology. 1999. - V.264. - P.134-141.

120. Luo G., Hamatake R.K., Mathis M.D. et al. De novo initiation of RNA synthesis by the RNA-depended RNA polymerase (NS5B) of hepatitis C virus. // J. Virol. 2000. - V. 74. - P.851 -863.

121. Lvov D.K., Samokhvalov E.I., Tsuda F. et al. Prevalence of hepatitis C virus and distribution of its genotypes in Northern Eurasia. // Arch. Virol. -1996. -V. 141. P. 1613-1622.

122. Mandelli M., Cristine G., Filice G. et al. Anti-HCV positive patients in dialysis units. // Lancet. 1990. - V.336. - P.244.

123. Mangia A., Andriulli A., Zenarola P. et al. Lack of hepatitis C virus replication intermediate RNA in diseased skin tissue of chronic hepatitis C patients. // J. Med. Virol. 1999. - V.59. -N3. - P.277-280.

124. Manns M.P., Griffin K.J., Sullivan K.F. et al. LKM-1 autoantibodies recognaze a short linear sequence in P450IID6, a cytochrome P450 monooxygenase. // J. Clin. Invest. 1991. -V.88. - P. 1370-1378.

125. Manzin A., Bagnarelli P., Menzo S. et al. Quantification of hepatitis C virus genome molecules in plasma samples. // J. Clin. Microbiol. 1994. -V.32.-N8. -P.1939-1944.

126. Marcellin P. Hepatitis C: clinical spectrum of the disease. // J. Hepatol. -1999. V.31. - N1. - P.9-16.

127. Markis M., Preston F., Triger D. et al. Hepatitis C antibody and chronic liver disease in haemophilia. // Lancet. 1990. - V.335. - P.l 117-1119.

128. Martin J., Navas S., Quiroga J.A. et al. Quantification of hepatitis C virus in liver and peripheral blood mononuclear cells from patients with chronic hepatitis C virus infection. // J. Med. Virol. 1998. - V.54. -N4. - P.265-270.

129. Masalova O.V., Atanadze S.N., Samokhvalov E.I. et al. Detection of hepatitis C virus core protein circulating within different virus particle population. // J. Med. Virol.- 1998. V.55. - P. 1-6.

130. Matsumoto M., Hwang S.B., Jeng K.-S. et al. Homotypic interaction and multimerization of hepatitis C virus core protein. // Virology. 1996. - Vol. 218. - N3. - P. 43-51.

131. Mayo M.A., Pringle C.R. Virus taxonomy 1997. // J. Gen. Virol. -1998. - V.79. - P.649-657.

132. Mazzella G., Accogli E., Sottili S. et al. Alpha interferon treatment may prevent hepatocellular carcinoma in HCV-related liver cirrosis. // J. Hepatol. -1996. V.24. -PP.141-147.

133. Mc Gornick S.E., Goodman Z.D., Maydonovitch C.L., Sjogren M.H. Evaluation of liver histology, ALT elevation and HCV RNA titer in patients with chronic hepatitis C. //Amer. J. Gastroenterol. 1996. - V.91. - N8. -P. 1516-1523.

134. Mc Guinnes P.H., Bishop G.A., Painter D.M., Chan R. Intrahepatic hepatitis C RNA levels do not correlate with degree of liver injury in patients with chronic hepatitis C. // Hepatology. 1996. - V.23. - N4. - P.676-687.

135. Mc Kechnie V.M., Mills P.R., Mc Gruden E.A. The NS5a gene of hepatitis C virus in patients treated with interferon-alpha. // J. Med. Virol. -2000. V.60. - N4. - P.367-378.

136. Mellor J., Haydon G., Blair C. et al. Low level or absent in vivo replication of hepatitis C virus and hepatitis G virus / GB virus C in peripheral blood mononuclear cells. // J. Gen. Virol. 1998. - V.79. - N4. - P.705-714.

137. Mishiro S., Hoshi Y., Takeda K. Hepatitis C specific an-tibodies directed at host derived epitope implication for an au-toimmune process. // J. Virol.1994. Vol. 69. -N4. -P. 1400-1403.

138. Mizokami M., Gojobori T., Ohba K.-I. et al. Hepatitis C virus types 7, 8 and 9 shoud be classified as type 6 subtypes. // J. Hepatol. 1996. - V.24. -P.622-624.

139. Mizushima H., Mijikata M., Asabe S.-I. et al. Two hepatitis C virus glycoprotein E2 products with different C-termini. // J. Virol. 1994. - Vol.68. -N10.-P. 6215-6222.

140. Moradpour D., Kary P., Rice C., Blum H.E. Continious human cell lines inducibly expressing hepatitis C virus structural and nonstructural proteins. // Hepatology. 1998. -V. 28.-P. 192-201.

141. Muratori B.L., Gibellini D., Lenzi M. et al. Quantification of hepatitis C virus infected peripheral blood mononuclear cells by in situ reverse transcriptase chain reaction. // Blood. 1996. - V.88. - N7. - P.2768-2774.

142. Nagata I., Iizuka T., Harada Y. et al. Prospective study of mother to -infant transmission of hepatitis C virus. // Abstr. of 8-th Intern. Sympos. on Viral Hepatitis and Liver Dis., Tokyo. - 1993. - P.70.

143. Nakajima N., Hijikata M., Yoshikura H., Shimizu Y. Characterization of long-term cultures of hepatitis C virus. // J. Virol. 1996. - V. 70. - N5. - P. 3325-3329.

144. Nakane P.K., Kawaoi A. Peroxidase labelled antibody:a new method of conjugation. // J. Histochem. Cytochem. 1974. -V.22. - P. 1084-1091.

145. Navas S., Bosch O., Castillo I. et al. Porphyria cutanea tarda and hepatitis C and hepatitis B viruses infection a retrospective study. // Hepatology.1995. V.21. - N2. - P.279-284.

146. Nayak N.C., Sathar S.A. Immunohistochemical detection of hepatitis C virus antigen in paraffin embedded liver biopsies from patients with chronic liver disease. // Acta Histochem. 1999. - V. 101. - N4. - P.409-419.

147. Negro F., Giostra E., Krawczynski K. et al. Detection of intrahepatic hepatitis C virus replication by strand-specific semi-quantitative RT-PCR: preliminary application to the liver transplantation model. // J. Hepatol. 1998. -V.29.-P.1-11.

148. Nelson D.R., Marousis C.G., Davis G.L. et al. The role of hepatitis C virus-specific cytotoxic T lymphocytes in chronic hepatitis C. // J. Immunol. -1997. V. 158. - P. 1473-1488.

149. Nelson D.R., Marousis C.G., Ohno T. et al. Intrahepatic hepatitis C virus-specific cytotoxic T lymphocyte activity and response to interferon alfa therapy in chronic hepatitis C. // Hepatology. 1998. - V.28. - P.225-230.

150. Nemecek V., Fleglova Z.I., Suchankova A.V. Mapping of immunodominant epitopes in NS3/NS4 region of HCV by syntetic peptides. // J. Virol. 1993. -V. 52. - N7. - P. 185-190.

151. Nikolaeva L.I., Olenina L.V., Kolesanova E.F. Immuniti of different types of hepatitis C. // Russ. J. Immunol. 1999. - V.4. - N2. - P.92-112.

152. Nouri Aria K.T., Sallie R., Sangar D. et al. Detection of genomic and intermediate replicative strands of hepatitis C virus in liver tissue by in situ hybridization. // J. Clin. Invest. 1993. - V.91. - N5. - P.2226-2234.

153. Nouri-Aria K.T., Sallie R., Mizokami M. et al. Intrahepatic expression of hepatitis C virus antigens in chronic liver disease. // J. Pathol. 1995. - V.175. -P.77-83.

154. Okabe M., Fukuda K., Arakawa K., Kikuchi M. Chronic variant of myocarditis associated with hepatitis C virus infection. // Circulation. 1997. -V.96. - N1. - P.22-24.

155. Okamoto H., Okada S., Sugiyama Y. Detection of hepatitis C virus RNA by a two-stage polymerase chain reaction with two pairs of praimers deduced from the 5'noncoding region. // Jap. J. Exp. Med. 1990. - V.60. - N3. - P.215-222.

156. Okamoto M., Kojima M., Okada S.-I. et al. Genetic drift of hepatitis C virus during an 8,2 year infection in a chimpanzee: variability and stability. // Virology. 1992. - V.190. -N7. -P.894-899.

157. Okumura A., Yoshioka K., Aiyama T. et al. Different constitution of hepatitis C virus population in peripheral blood mononuclear cells and plasma in patients with type C chronic liver disease. // Dig. Dis. Sci. 1998. - V.43. - N2. -P.377-383.

158. Orito E., Mizokavi M., Tanaka T. et al. Quantification of serum hepatitis C virus core protein level in patients chronically infected with different hepatitis C genotypes. // Gut. 1996. - V.39. - P.876-880.

159. Osna N., Silonova G., Vilgert N. et al. Chronic hepatitis C: T helper 1/T helper 2 imbalance could cause virus persistence in peripheral blood. // Scand. J. Clin. Lab. Invest. 1997. - V.57. -PP.703-710.

160. Peterson D.A., Johnson R.G., Nemo G. et al. Evaluation of TTVS specimens for antibodies to HCv by Abbot HCV EIA and a prototype second generation assay. // Second Int. Symposium on HCV. Los Angeles. - 1990. -V.26. -P.55.

161. Pileri P., Uematsu Y., Campagnoli S. et al. Binding of hepatitis C virus to CD81. // Science. 1998. - V.282. -P.938-941.

162. Pizzi E., Tramontano A., Tomei L. et al. Molecular model of the specificity pocket of the hepatitis C virus proteinase: implications for substrate recognition. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1994. - V.91. - P.888-892.

163. Powell E.E., Edwards-Smith C.J., Hay J.L. et al. Host genetic factors influence disease progression in chronic hepatitis C. // Hepatology. 2000. -V.31. - N4. - P.828-833.

164. Prince A.M., Brotoman B., Grady G.F. et al. Long-incubation posttransfusion hepatitis without serological evidence of exposure to hepatitis B virus. // Lancet. 1974. - V.2. - P.241-246.

165. Prince H.E., Fang C.T. Unaltered lymphocyte subsets in hepatitis Cvirus-seropositive blood donors. // Transfusion. 1992. - V.32. - P.166-168.

166. Prince A.M., Scheffel J.W., Moore B. et al. A search for hepatitis C virus polymerase chain reaction-positive but seronegative subjects among blood donors with elevated alanine aminotransferase. // Transfusion. 1997. - V.37. -P.211-214.

167. Quiroga J.A., Martin J., Pardo M., Carreno V. Serum levels of soluble immune factors and pathogenesis of chronic hepatitis C, and their relationship to therapeutic response to interferon-a. // Dig. Dis. Sci. 1994. - V.39. - P.2485-2496.

168. Radkowski M., Kubicka J., Kisiel E. et al. Detection of active hepatitis C virus and hepatitis G virus/GB virus C replication in bone marrow in human subjects. // Blood. 2000. - V. 95. - N12. - P.3986-3989.

169. Rasenack I. Viral hepatitis diagnostics. Germany. - Falk Foundation.1993. -52p.

170. Ray R., Khanna A., Lagging L.M. et al. Peptide immunogen mimicry of putative El glycoprotein-specific epitopes in hepatitis C virus. // J. Virol.1994. Vol. 68. - N7. - P. 4420-4426.

171. Ray R., Lagging L.M., Meyer K. et al. Transcriptional regulation of cellular and viral promoters by the hepatitis C virus core protein. // Virus Res.1995.- V.37. -P.209-220.

172. Ray R., Steele R., Meyer K., Ray R. Transcriptional repression of p53 promoter by hepatitis C virus core protein. // J. Biol. Chem. 1997. - V.272. -P.10983-10986.

173. Ray R., Steele R., Meyer K., Ray R. Hepatitis C virus core protein represses p21 WAFl/Cipl/Sidl promoter acyivity. // Gene. 1998. - V.208. -P.331-336.

174. Robertson B., Myers G., Howard C. et al. Classification, nomenclature, and database development for hepatitis C virus (HCV) and related viruses: proposals for standartization. // Arch. Virol. 1998. - V.143. - N12. - P.2493-2503.

175. Rodriguez-Inigo E., Bartolome J., de Lucas S. et al. Histological damage in chronic hepatitis C is not related to the extent of infection in the liver. // Am. J. Pathol. 1999. - V.154. -N6.- P. 1877-1881.

176. Ruster B., Zeuzem S., Roth W.K. Quantification of hepatitis C virus RNA by competitive reverse transcription and polymerase chain reaction using a modified hepatitis C virus RNA transcript. // Anal. Biochem. 1995. - V.224. -P.597-600.

177. Sacamuro D., Furukawa T., Takegami T. Hepatitis C virus nonstructural protein NS3 transforms NIH3T3 cells. // J. Virol. 1995. - V. - 69. - N6. - P. 3893-3896.

178. Saito K., Sullivan D., Haruna Y. et al. Detection of hepatitis C virus RNA sequences in hepatocellular carcinoma and its precursors by microdissection polymerase chain reaction. // Arch. Pathol. Lab. Med. 1997. - V. 121. - N4. -P.400-403.

179. Sakugawa H., Nakasone H., Nakayoshi T. et al. Relation between reactivity to the NS4 region peptides of hepatitis C virus (HCV) and clinicalfeatures among patients infected with HCV genotype IB. // Microbiol. Immunol.- 1998.- V.42. P.299-303.

180. Sallberg M., Pumpen P., Zhang Z.X. et al. Location of antibody-bin-ding sites within conserved regions of the hepatitis C virus core protein. // J. Med. Virol. 1994. - Vol. 43. -Nl. P. 62-68.

181. Sanchez-Tapias J.M., Barrera J., Costa J. et al. Hepatitis C virus infection in patients with nonalcoholic chronic liver disease. // Ann. Intern. Med. 1990. - V.112. - PP.921-924.

182. Sansonno D., Dammacco F. Hepatitis C virus clOO antigen in liver tissue from patients with acute and chronic infection. // Hepatology. 1993. - V.18. -P.240-245.

183. Sansonno D., Cornacchiulo V., Iacobelli A.R. et al. Localization of hepatitis C virus antigens in liver and skin tissues of chronic hepatitis C virus-infected patients with mixed cryoglobulinemia. // Hepatology. 1995. - V.21. -P.305-312.

184. Sansonno D., Iacobelli A.R., Cornacchiulo V. et al. Immunohistochemical detection of hepatitis C virus-related proteins in liver tissues. // Clin. Exp. Rheumatol. 1995. - V.13. - S29-S32.

185. Sansonno D., Cornacchiulo V., Racanelli V., Damacco F. In situ simultaneous detection of hepatitis C virus RNA and hepatitis C virus-relatedantigenes in hepatocellular carcinoma. // Cancer. 1997. - V.80. -Nl. - P.2233.

186. Santolini E., Migliaccio G., La Monica N. Biosynthesis and biochemical properties of the hepatitis C virus core protein. // J. Virol. 1994. - V. 68. - N6. -P. 3631-3641.

187. Sato K., Okamoto H., Aihara Sh. Demonstration of sugar moiety on the surface of hepatitis C virions recovered from circulation of infected humans. // Virology. 1993. -V.196. -N3. -P. 354-357.

188. Scmidt W.N., Wu P., Han J.-Q. et al. Distribution of hepatitis C virus (HCV) RNA in whole blood and blood cells fractions: plasma HCV RNA analysis underestimates circulating virus load. // J. Infect. Dis. 1997. - V.176.- P.20-26.

189. Seidl S., Koenig B., Reinhardt G. et al. Higher detection rate of hepatitis G and C virus RNA in liver tissue than in serum of deceased injection drug users. // Int. J. Legal. Med. 1999. - V.l 12. - Nl. -P.35-38.

190. Selby M.J., Choo Q.-L., Berger K. et al. Expression, identification and subcellular localization of the proteins encoded by the hepatitis C viral genome. // J. Gen. Virol. -1993. V.74. - P.l 103-1113.

191. Sergi C., Goeser T., Otto G.F. et al. A rapid and highly specific technique to detect hepatitis C RNA in frozen section in liver. // J. Clin. Pathol. 1996. -V.49. - N3. - P.369-372.

192. Shapiro C., Cannon R., Alter M. et al. Prevalence of antibody to hepatitis C virus in heterosexuals attending in clinic for sexually transmitted desease. // Abstr. Internat. Symp. on Viral Hepatitis and Liver Disease. Houston. 1990. -P.156.

193. Sharara A.I., Hunt C.M., Hamilton J.D. Hepatitis C. // Ann. Intern. Med.- 1996. V.125. -P.658-668.

194. Sherlock S., Dooley J. Diseases of the liver and biliary system. // Tenth Edition Blackwell Science. 1997. -P.289-296.

195. Sherlock S. The hepatic flaviviridae: summary. I I J. Viral. Hepat. 1999.- V.l. P.l-5.

196. Shih C.-M., Lo S.J., Miyamura T. et al. Suppression of hepatitis B virus expression and replication by hepatitis C virus core protein in HuH-7 cells. // J. Virol. 1993. - V.67. - P.5823-5832.

197. Shimizu Y.K., Hijikata M., Iwamoto A. et al. Neutralizing antibodies against hepatitis C virus and the emergence of neutralization escape mutant viruses. // J. Virol. 1994. - V.68. - P. 1494-1500.

198. Shindo M., Di Biscegln A.M., Akatsuka T. et al. The physical state of the negative strand of hepatitis C virus RNA in serum of patients with cronic hepatitis C. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1994. - Vol. 91. - N8. - P. 87198723.

199. Shirai M., Okada H., Nishioka M. et al. An epitope in hepatitis C virus core region recognized by cytotoxic T cells in mice and humans. // J. Virol. -1994. V.68. - N5. - P.3334-3342.

200. Shiratori Y., Kato N., Yokosuka O. et al. Quantitative assays for hepatitis C virus in serum as predictors of long-term response to interferon. // J. Hepatol.- 1997. V.27. - P.437-444.

201. Simmonds P., Mellor J., Sakuldamrongpanich T. et al. Evolutionary analysis of variants of hepatitis C virus found in South-East Asia: comparison with classifications based upon sequence similarity. // J. Gen. Virol. 1996. -V.77. - P.3013-3024.

202. Sonnerborg A., Zhang Z.X., Sallberg M. A cell-binding Arg-Gly-Asp sequence is present in close proximitly to the major linear antigenic region of HCV NS3. // Bioch. Bioph. Res. Commun. 1994. - Vol. 202. - N3. - P. 13551356.

203. Srinivas R.V., Ray R.B., Meyer K., Ray R. Hepatitis C virus core protein inhibits human immunodeficiency virus type 1 replication. // Virus Res. 1996. - 1996. - V.45. - P.87-92.

204. Sugano M., Hayashi J., Joon S. et al. Quantification of hepatitis C viral RNA in liver and serum samples using competitive polymerase chain reaction. // J. Clin. Pathol. 1995. - V.48. - N8. -P.820-825.

205. Suzuki R., Matsuura Y., Suzuki T. et al. Nuclear localization of the truncated hepatitis C virus core protein with its gydrophobic COOH-terminus deleted. // J. Virol. 1995. - V. 76. - N5. - P.53-61.

206. Takahashi K., Okamoto H., Kishimoto S. et al. Demonstration of a hepatitis C virus-specific antigen predicted from the putative core gene in the circulation of infected hosts. // J. Gen. Virol. 1992. - Vol. 73. - N5. - P. 667672

207. Taliani G., Badolato C., Lecce R. et al. Hepatitis C virus RNA in peripheral blood mononuclear cells: relation with response to interferon treatment. // J. Med. Virol- 1995. V.7. - N9. - P. 16-22.

208. Tanaka K., Kato N., Cho M.J., Shimotohno K. A novel sequence found at the 3' terminus of the hepatitis C virus genome. // Biochem. Bioph. Res. Commun. 1995. - V.215. -P.744-749.

209. Tanaka K., Kato N., Cho M.J., Shimotohno K. Structure of the 3' terminus of the hepatitis C virus. // J. Virol. 1996. - V.70. - P.3307-3312.

210. Tanji Y., Hijikata M., Saton S. et al. Hepatitis C virus-encoded nonstructural protein NS4A has versatil function in viral protein processing. // J. Virol. -1995. V. 69. - N3. - P. 1575-1581.

211. Tanji Y., Kaneko T., Satoh S., Shimatoho K. Phosphorylation of hepatitis C virus-encoded nonstructural protein NS5A. // J. Virol. 1995. - V. 69. - N6. -P. 3980-3986.

212. Tokita H., Okamoto H., Tsuda F. et al. Hepatitis C virus variants from Vietnam are classifiable into the seventh, eighth and ninth major genetic groups. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1994. - V.91. - P. 11022-11026.

213. Tokita H., Okamoto H., Iizuka H. et al. Hepatitis C virus variants from Jakarta, Indonesia classifiable into novel genotypes in the second (2e and 2f), tenth (10a) and eleventh (11a) genetic groups. // J. Gen. Virol. 1996. - V.77. -P.293-301.

214. Tomei L., Failla C., Vitale R.L. et al. A central hydrophobic domain of the hepatitis C virus NS4A protein is necessary and sufficient for the activation of the NS3 proteinase. // J. Gen. Virol. 1996. - V.77. - P.1065-1070.

215. Tong M., Blatt L., Mc Hutchison J. Prediction of response during interferon alpha-2b therapy in chronic hepatitis C using viral and biochemical characteristics: a comparison. // Hepatology. 1997. - V.26. - P. 1640-1645.

216. Trepo C., Alonso S., Li J.S. et al. Limitation of immunoserological and molecular diagnosis of hepatitis C. // Nuclear Med. Biol. 1994. - V.21. -N3. -P.419-431.

217. Tsutsumi M., Urashima S., Takada A. et al. Detection of antigens related to hepatitis C virus RNA encoding the NS5 region in the livers of patients with chronic type C hepatitis. // Hepatology. 1994. - V.19. -N2. - P.773-778.

218. Van Doom L., Capriles J., Maertens G. et al. Sequence evolution of the hypervariable region in the putative envelope region E2/NS1 of hepatitis C virus is correlated with specific humoral immune responses. // J. Virol. 1995. -V.69. - N2. - PP.773-778.

219. Wang C., Sarnow P., Siddqui A. A conserved helical element is essential for internal initiation of translation of hepatitis C virus RNA. // J. Virol. 1994. - V.68. - Nil. -PP.7301-7307.

220. Wejstal R., Hermodsson S., Iwarson S. et al. Mother to infant transmission of hepatitis C virus infection. // J. Med. Virol. 1990. - V.30. -P.178-180.

221. Wienhues U., Ihlenfeldt H.G., Seidel C. et al. Characterization of a linear epitope in the nonstructural region-4 of hepatitis C virus with reactivity to seroconversion antibodies. // Virology. 1998. - V. 245. - P. 281-288.

222. Wolk B., Sansonno D., Krausslich H.G. et al. Subcellular localization, stability, and trans-cleavage competence of the hepatitis C virus NS3-NS4A complex expressed in tetracycline-regulated cell lines. // J. Virol. 2000. -V.74. - N5. - P.2293-2304.

223. Wong D.K.H., Dudley D.D., Afdhal N.H. et al. Liver-derived CTL in hepatitis C infection: breadth and specificity of responses in a cohort of persons with chronic infection. // J. Immunol. 1998. - V.160. - P. 1479-1488.

224. Wright-Minogue J., Yao N., Zhang R. et al. Cross-genotypic interaction between hepatitis C virus NS3 protease domains and NS4A cofactors. // J. Hepatol. 2000. - V.32. - P.497-504.

225. Yamaguchi K., Nishimura Y., Fukuoka N. et al. Hepatitis C virus antibodies in haemodialisis patients. // Lancet. 1990. - P.335.

226. Yamschikov V. F., Compans R. W. Formation of the Flavi-virus envelope: role of the viral NS2B-NS3 protease. // J. Virol. - 1995. - V. 69. -N4.-P. 1995-2003.

227. Yan B.-S., Tam M.H., Syu W.-J. Self-association of the C-terminal domain of the hepatitis-C virus core protein. // Eur. J. Biochem. 1998. -V.258. - PP.100-106.

228. Yasui K., Wakita T., Tsukiyama-Kohara K. et al. The native form and maturation process of hepatitis C virus core protein. // J. Virol. 1998. - V.72. -N7. - PP.6048-6055.

229. Young K.C., Chang T.T., Liou T.C., Wu H.L. Detection of hepatitis C virus RNA in peripheral blood mononuclear cells and in saliva. // J. Med. Virol. 1993.- V.41.-N1.-P.55-60.

230. Zignego A.L., De Carli M., Monti M. et al. Hepatitis C virus infection of mononuclear cells from peripheral blood and liver infiltrates in chronically infected patients. // J. Med. Virol. 1995. - V.47. - P.58-64.

231. Zanella A., Conte D., Ptati D. et al. Hepatitis C virus RNA and liver histology in blood donors reactive to a single antigen by second-generation recombinant immunoblot assay. // Hepatology. 1995. - V.20. - N4. - P.913-917.

232. Zhang Z.X., Sonnerborg A., Sallberg M. Antigenic structure of the hepatitis C virus envelope 2 protein. // Clin. Exp. Immunol. 1994. - V. 98. -N3.-P. 382-387.