Вирусный гепатит C: новые подходы к изучению патогенеза и разработка средств диагностики и профилактики тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.02.02, кандидат наук Масалова, Ольга Владимировна

• Масалова, Ольга Владимировна
• кандидат наук
• 2011

Оглавление диссертации кандидат наук Масалова, Ольга Владимировна

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ ................................................................................................................................5

ВВЕДЕНИЕ......................................................................................................................................................................7

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

ГЛАВА 1. ВИРУС ГЕПАТИТА С: ПАТОГЕНЕЗ, ДИАГНОСТИКА И

ПРОФИЛАКТИКА........................................................................................................................18

1.1. Эпидемиология и клиническое течение гепатита С..................................18

1.2. Молекулярная организация вируса гепатита С................................................25

1.2.1. Структура вириона..................................................................................................................................25

1.2.2. Организация вирусного генома................................................................................................26

1.2.3. Структура и функции вирусных белков..............................................................................28

1.2.4. Жизненный цикл ВГС....................................................................................................................46

1.2.5. Антигенная структура белков ВГС и методы картирования В-клеточных эпитопов................................................................................................................................................48

1.3. Иммунопатогенез вирусного гепатита С..............................................................54

1.3.1. Врожденный иммунный ответ..................................................................................................54

1.3.2. Адаптивный иммунный ответ.....................................................................55

1.3.3. Иммунный статус больных гепатитом С............................................................................64

1.3.4. Лечение гепатита С........................................................................................................................75

1.3.5. Вирусные и хозяйские факторы, связанные с исходом ОГС и эффективностью 1Р]Ч-терапии..................................................................................................77

1.4. Разработка вакцин против гепатита С........................................................................78

1.5. Молекулярные основы диагностики гепатита С..........................................84

1.5.1. Определение маркеров ВГС в сыворотке крови............................................................84

1.5.2. Выявление ВГС в инфицированных клетках больных гепатитом С..................91

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ....................................................97

2.1. Характеристика клинического материала..........................................................97

2.2. Лабораторные животные и клеточные линии..................................................101

2.3. Основные материалы (рекомбинантные белки, синтетические пептиды, ДНК-конструкции, адъюванты)............................................................101

2.4. Получение гибридом, продуцирующих моноклональные антитела (МКА) к рекомбинантным белкам вируса гепатита С.. 106

2.5. Биохимические и иммунохимические методы исследования............107

2.5.1. Определение концентрации белка..........................................................................................107

2.5.2 Изотипирование МКА...................... ......................................................................107

2.5.3. Очистка МКА из асцитных жидкостей................................................................................107

2.5.4. Приготовление конъюгатов...................................................................................................107

2.5.5. Подготовка биологического материала................................................................................108

2.5.6. Иммуноферментный анализ (ИФА)......................................................................................110

2.5.7. Реакция иммунофлюоресценции............................................................................................113

2.5.8. Иммуногистохимическое и иммуноцитохимическое окрашивание in situ... 113

2.5.9. Выявление белков ВГС в МКПК методом проточной цитофлюориметрии.. 115

2.5.10. Иммуноблоттинг и иммунодот................... ............................................................115

2.5.11. Истощение МКА и сывороток..................................................................................................116

2.6. Картирование антигенных детерминант белков ВГС с помощью технологии фагового дисплея........................................................................................116

2.7. Иммунологические методы исследования........................................................117

2.7.1. Реакция бласттрансформации лимфоцитов (РБТЛ)......................................................117

2.7.2. Определение содержания популяций лимфоцитов......................................................118

2.7.3 ELISpot....................................................................................................................................................118

2.7.4. Определение содержания цитокинов....................................................................................119

2.7.5. Определение содержания растворимых форм дифференцировочных антигенов................................................................................................................................................119

2.8. Детекция РНК вируса гепатита С и генотипирование ВГС................120

2.9. Статистическая обработка результатов..................................................................121

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

ГЛАВА 3. ПОЛУЧЕНИЕ, ХАРАКТЕРИСТИКА И ЭПИТОПНАЯ

СПЕЦИФИЧНОСТЬ МКА................................................................................................122

3.1. Получение МКА к рекомбинанатным белкам core, NS3, NS4 и NS5 ВГС............................................................................................................................................122

3.2. Иммунохимические свойства МКА..........................................................................123

3.3. Эпитопная специфичность МКА................................................................................123

3.4. Взаимодействие МКА с денатурированными антигенами..................128

3.5. Реципрокный конкурентный анализ МКА........................................................130

3.6. Конкуренция МКА с антителами в сыворотках больных гепатитом С....................................................................................................................................133

3.7. Картирование антигенных детерминант с помощью технологии фагового дисплея........................................................................................................................134

ГЛАВА 4. ВЫЯВЛЕНИЕ ВГС В МАТЕРИАЛАХ ОТ БОЛЬНЫХ ГЕПАТИТОМ С.. 140

4.1. Детекция РНК ВГС в материалах от больных гепатитом С................140

4.2. Экспрессия вирусных белков в клетках печени у пациентов с острым и хроническим гепатитом С........................................................................142

4.3. Детекция белков ВГС в мононуклеарных клетках периферической крови..........................................................................................................156

4.3.1. Выявление белков ВГС в клетках крови in situ..............................................................156

4.3.2. Анализ белков ВГС в клетках крови методом проточной цитометрии............159

4.4. Обнаружение белков ВГС в лизатах инфицированных клеток.... 162

4.5. Количественное определение содержания белка core ВГС в сыворотке и плазме крови................................................................................................164

4.5.1. Разработка метода выявления соге-белка ВГС..............................................................164

4.5.2. Анализ содержания соге-белка в сыворотках больных гепатитом С

171

ГЛАВА 5. ИССЛЕДОВАНИЕ ИММУННОГО ОТВЕТА НА ВГС-ИНФЕКЦИЮ И АНАЛИЗ ИММУНОЛОГИЧЕСКОГО СТАТУСА БОЛЬНЫХ ГЕПАТИТОМ С.............................................................. 178

5.1. Активность антител к белкам ВГС в сыворотке и плазме крови.. 178

5.2. Анализ относительного содержания различных популяций

клеток крови................................................................ 180

5.3. Изменение содержания растворимых форм дифференцировочных антигенов в сыворотках крови больных гепатитом С................................................................. 183

5.4. Цитокиновый профиль больных гепатитом С........................ 189

ГЛАВА 6. ИНДУКЦИЯ И АНАЛИЗ ИММУННОГО ОТВЕТА НА ИММУНИЗАЦИЮ МЫШЕЙ РЕКОМБИНАНТНЫМИ БЕЛКАМИ

ВГС, ОТДЕЛЬНЫМИ ДЕТЕРМИНАНТАМИ И ДНК- 193

КОНСТРУКЦИЯМИ.........................................................

6.1. Иммунный ответ на введение рекомбинантных белков........................193

6.2. Иммунный ответ при иммунизации мышей ВГС-специфическими фагами и синтетическими пептидами........................203

6.3. Анализ иммунного ответа на ДНК-иммунизацию......................................207

6.4. Сочетанная иммунизация животных рекомбинантными белками и ДНК-конструкциями....................................................................................215

ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ....................................................................234

ЗАКЛЮЧЕНИЕ............................................................................................................................................................295

ВЫВОДЫ........................................................................................................................................................................297

СПИСОК ЦИТИРОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ....................................................................................300

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Вирусный гепатит C: новые подходы к изучению патогенеза и разработка средств диагностики и профилактики»

ВВЕДЕНИЕ

АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ

Гепатит С по оценкам экспертов ВОЗ и Европейского Союза относится к трем наиболее важным социально значимым инфекционным заболеваниям человека и является одной из главных причин хронических заболеваний печени. Около 3% человеческой популяции на Земле (примерно 170 млн. человек) инфицировано вирусом гепатита С (ВГС), и ежегодно около 3-4 млн. человек вновь инфицируется [Albeldawi et al., 2010]. Современные проявления эпидемического процесса при гепатите С характеризуются снижением частоты острых форм этой инфекции, но ростом числа лиц с наличием антител к ВГС в крови, а также увеличением числа микст-инфекций (в том числе сочетание ВГС- и ВИЧ-инфекции); отмечается также изменение возрастного состава больных, структуры путей передачи ВГС, увеличение показателей смертности от хронических гепатитов и цирроза печени [Михайлов М.И., Шахгильдян И.В., 2007, Шахгильдян И.В. и др., 2008]. Гепатит С характеризуется высокой частотой формирования хронической инфекции (до 70% - 80% острых форм переходят в хронический гепатит) и широким спектром клинических проявлений. Тяжесть заболевания варьирует от бессимптомного носительства до тяжелых форм с повреждением печени, прогрессирующим в цирроз и гепатоцеллюлярную карциному. Кроме того, с хроническим гепатитом С (ХГС) связывают многочисленные внепеченочные проявления, что позволяет рассматривать гепатит С как системное заболевание [Bowen, Walker, 2005, Heller, Rehermann, 2005]. Эффективность комбинированного лечения больных ХГС с помощью пегилированного интерферона-альфа (IFN-a) с рибавирином не превышает 50%, к тому же данная терапия сопряжена с серьезными побочными эффектами [Ghany et al., 2009].

За 20 лет интенсивных исследований со времени открытия ВГС определены структура вирусного РНК-генома и функции значительной части кодируемых им белков. Несмотря на успехи в изучении молекулярно-биологических свойств вируса, до сих пор не существует единой концепции патогенеза ВГС-

инфекции и ясного понимания механизма повреждающего действия ВГС на клетки печени. По-прежнему, не совсем ясно, какие факторы вируса и хозяина определяют исходы острого гепатита С (ОГС) - реконвалесценцию или формирование хронической инфекции, а также обусловливают прогрессирующее в цирроз течение ХГС [Sumida et al., 2010, Wadhawan et al., 2010]. Возможности изучения структуры ВГС и патогенеза заболевания ограничены сложностями культивирования вируса in vitro и узким кругом восприимчивых к вирусу животных. Большинство исследователей полагает, что ВГС не обладает прямым цитопатогенным действием, и главным фактором хронизации и прогрессирования заболевания является нарушение Т-клеточного ответа, а именно дисбаланс в соотношении Thl и Th2 лимфоцитов и секретируемых ими цитокинов [Albeldawi et al., 2010, Sharma, 2010].

Белки вируса изучены недостаточно в связи с их малой доступностью, так как ВГС циркулирует и накапливается в организме больных в низких концентрациях. Сведения о воздействии белков ВГС на клетки и организм противоречивы: вирусные белки могут супрессировать или усиливать иммунный ответ, ингибировать или индуцировать апоптоз [Irshad, Dhar, 2006, Pindel, Sadler, 2010, Siavoshian et al., 2005, Tang, Grisé, 2009]. До сих пор не выяснена функциональная роль белков ВГС в формировании хронического гепатита, а также не выявлены маркеры инфекции, ассоциированные с активностью и стадией ХГС. Выяснение структуры и свойств вирусных белков необходимо как для решения теоретических проблем (локализация антигенных и иммуногенных детерминант, определение протективных эпитопов), так и для решения задач практической медицины - создания профилактических средств, терапевтических препаратов и диагностических тест-систем.

Актуальной проблемой здравоохранения является усовершенствование диагностики гепатита С. Для ограничения распространения ВГС-инфекции особое значение имеет обнаружение ВГС в крови и продуктах крови. Серодиагностика, основанная на определении специфических антител к вирусным белкам, сегодня является одним из основных методов диагностики

ВГС-инфекции. Однако, одного этого теста недостаточно, поскольку антитела не выявляются на ранних стадиях инфицирования вирусом (фаза серонегативного «окна» продолжительностью до нескольких месяцев), а также при иммунодефицитных состояниях [Daniel et al., 2008]. Высокий уровень антигенной вариабельности ВГС может обусловливать ложноотрицательные результаты. Возможно также получение ложноположительных результатов за счет перекрестно-реагирующих детерминант [Pawlotsky, 2003]. Часто отмечаются несовпадения в результатах тестирования контрольных панелей сывороток с помощью различных тест-систем [Chen, Morgan et al., 2006, Chou et al., 2004]. В основе перечисленных недостатков - использование в тест-системах рекомбинантных белков и пептидов, недостаточно точно моделирующих антигенную структуру возбудителя, а также неполное знание особенностей взаимодействия ВГС с иммунной системой хозяина.

Индикация анти-ВГС антител, в основном, решает задачу этиологического диагноза, но не характеризует течение инфекции и не решает задачу прогноза исхода заболевания. По этим причинам важным является развитие методов прямого определения вирусспецифических маркеров - РНК и белков, как в сыворотке крови, так и непосредственно в клетках организма. Обнаружение указанных маркеров ВГС может решить проблему серонегативного «окна», а также дать ответ на вопрос о репликации ВГС и вирусной нагрузке. Метод полимеразной цепной реакции (ПЦР) для выявления РНК ВГС в плазме или сыворотке крови обладает высокой чувствительностью. Главным ограничением методов генодиагностики является недостаточная стандартизация [Творогова М.Г. и др., 2009, Schnuriger et al., 2006]. В последние годы активно разрабатываются иммуноферментные методы выявления белка нуклеокапсида (соге-белка) ВГС в сыворотках крови, способные служить определенной альтернативой ПЦР. [Ansaldi et al., 2006, Schnuriger et al., 2006, Seme et al., 2005]. За рубежом предложено несколько коммерческих тест-систем для детекции соге-белка ВГС, однако в нашей стране они дороги и малодоступны. В связи с этим разработка и внедрение в практику новых чувствительных,

простых и относительно недорогих методов для количественного выявления ВГС в крови является чрезвычайно актуальной задачей.

Вакцина против гепатита С до настоящего времени не создана. Одна из основных причин - недостаточная изученность защитных механизмов врожденного и адаптивного иммунитета в ходе взаимодействия ВГС и иммунной системы хозяина. Сложность разработки вакцины заключается в высокой гетерогенности ВГС и способности вируса ускользать от иммунного ответа хозяина (escape effect). Имеющиеся данные позволяют заключить, что решающим фактором при элиминации ВГС является ранний, сильный, мультиспецифичный и функционально активный иммунный ответ клеточного звена иммунитета [Albeldawi et al., 2010, Sharma, 2010]. Основным подходом к созданию вакцин против гепатита С в настоящее время является использование индивидуальных рекомбинантных белков, отдельных пептидов или участков генома ВГС в составе ДНК-конструкций [Abdulhaqq et al., 2008, Houghton, Abrignani, 2005, Encke et al., 2007]. Анализ результатов опубликованных работ показал, что ни одна из кандидатных вакцин пока не способна обеспечить полноценный профилактический и терапевтический эффекты против ВГС. Можно констатировать, что, несмотря на определенные успехи, разработка вакцин против гепатита С требует дальнейших усилий и новых решений.

Вышеизложенное свидетельствует об актуальности работ, направленных на комплексный анализ роли вирусных факторов (РНК и белков ВГС) и иммунного ответа хозяина (спектра антител к ВГС, иммунокомпетентных клеток, цитокинов и других иммунорегуляторных молекул) в патогенезе гепатита С. Эти знания необходимы для разработки эффективных средств диагностики, профилактики и создания специфических препаратов для лечения гепатита С, что позволит контролировать это широко распространенное заболевание.

Перечисленные нерешенные проблемы в изучении гепатита С определили актуальность настоящей работы, цель и задачи, которые в ней были поставлены.

ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ

Цель работы - разработать критерии оценки активности гепатита путем комплексного определения РНК и белков ВГС в печени и периферической крови, маркеров функциональной активности иммунной системы у больных острым и хроническим гепатитом С для прогнозирования исходов заболевания и на основании полученных данных разработать вакцинную композицию, обеспечивающую эффективный иммунный ответ против ВГС.

Для достижения цели был поставлен ряд как фундаментальных, так и прикладных задач:

1. Получить панель моноклональных антител к белкам ВГС для изучения антигенной структуры белков и разработки иммунохимических методов выявления белков ВГС;

2. Оценить степень накопления белков ВГС в инфицированных клетках печени и в мононуклеарных клетках периферической крови больных гепатитом С;

3. Исследовать количественное содержание белка нуклеокапсида (core) ВГС в сыворотках крови больных гепатитом С и ВГС-инфицированных лиц;

4. Оценить частоту встречаемости геномных и репликативных форм РНК ВГС в печени и периферической крови больных гепатитом С;

5. Выявить особенности спектра и активности антител к белкам ВГС у пациентов с острым и хроническим гепатитом С;

6. Определить популяционный состав лимфоцитов периферической крови и исследовать содержание растворимых форм дифференцировочных антигенов в сыворотке крови больных с разными формами и стадиями гепатита С;

7. Исследовать концентрацию про- и противовоспалительных цитокинов в сыворотке крови, а также продукцию цитокинов in vitro клетками периферической крови пациентов с гепатитом С;

8. С помощью комплексного корреляционного анализа сопоставить результаты

выявления вирусных маркеров и параметров иммунного ответа с клинико-

морфологическими и биохимическими данными больных гепатитом С.

11

Оценить роль вирусных и хозяйских факторов в повреждении печени, в течение и прогнозе гепатита С;

9. Провести иммунизацию мышей рекомбинантными белками ВГС и ДНК-конструкциями, сравнить эффективность иммунного ответа;

10.Дать сравнительную оценку иммуномодулирующего действия адъювантов, усиливающих гуморальный и клеточный иммунные ответы;

11. Выбрать оптимальные антигенные сочетания и адъюванты, создать вакцинную композицию, обеспечивающую эффективный иммунный ответ против ВГС.

Научная новизна

С использованием полученных моноклональных антител (МКА) к белкам ВГС установлена структурная организация 10 антигенных детерминант, не описанных ранее. Впервые установлено, что антигенные детерминанты белков ВГС выявляются в инфицированных клетках печени и мононуклеарных клетках периферической крови (МКПК) больных гепатитом С с различной частотой. Наиболее часто выявляются пять эпитопов на белках N84А, Ш4В и N8 5А, что может быть связано с пространственной доступностью этих детерминант.

С помощью иммунохимических методов, разработанных на основе МКА, получены новые данные о патогенетической роли белков ВГС. Впервые установлено, что у больных ХГС накопление соге-белка в печени и в МКПК прямо коррелирует с выявлением репликативной формы РНК ВГС. Таким образом, соге-белок может служить маркером активной репликации вируса. Частота обнаружения репликативной формы РНК ВГС, а также экспрессия белка Ш4А в печени и в МКПК больных ХГС сокращается при тяжелых некрозо-воспалительных процессах в печени, что может свидетельствовать о снижении репликативной активности ВГС при прогрессировании заболевания. Впервые показано, что гистологическая активность ХГС и повышение уровня ферментов печени прямо связана с наличием как геномной РНК ВГС, так и белков ВГС в ткани печени, РНК и соге-белка ВГС в сыворотках крови и

белков ВГС в МКПК. При ХГС впервые установлена прямая зависимость между экспрессией белка NS5A в печени, выработкой антител к этому белку, увеличением гистологической активности и развитием фиброза, что позволяет рассматривать NS5A как один из маркеров степени повреждения ткани печени.

Анализ белков ВГС в печени больных гепатитом С впервые позволил получить прямые доказательства более высокой транскрипционной активности ВГС при ОГС по сравнению с ХГС. При ОГС выявлена прямая зависимость между накоплением белков core, NS3 и NS5A в гепатоцитах и некрозо-воспалительными изменениями ткани печени. Интенсивная экспрессия белков NS4A и NS3 в печени в период около 1 месяца после манифестации ОГС является предпосылкой спонтанной реконвалесценции.

Впервые установлено, что накопление белков ВГС в МКПК ассоциируется с иммунными расстройствами - сокращением доли мононуклеарных клеток и лимфоцитов в популяции лейкоцитов. При ОГС уменьшение количества CD 1 61 -лимфоцитов связано с более активной экспрессией белков NS3 и NS5A ВГС в печени (г= -0,7, р<0,05), а С04+-лимфоцитов - с повышенным содержанием sFas (г= -0,52; р<0,05) и sHLA-DR (г= -0,56; р<0,05) в сыворотке крови.

Впервые установлена преимущественная циркуляция ВГС у пациентов с ОГС в виде безоболочечных нуклеокапсидов, а у больных с циррозом печени -в виде иммунных комплексов. Средняя концентрация соге-белка в сыворотках крови больных ХГС достоверно выше, чем у пациентов с ОГС (р<0,05).

Впервые показано, что достоверный (р<0,05) прогноз реконвалесценции может быть сделан на основе комплекса следующих иммунологических и вирусологических признаков: в течение 1 месяца от начала клинических симптомов ОГС - отсутствие антител к NS5A, низкая концентрация (<20 УЕ/мл) растворимой формы дифференцировочного антигена sCD38 и низкая концентрация (<40 пг/мл) соге-белка в сыворотке крови; в течение 3-4 месяцев - сочетание отсутствия РНК ВГС в сыворотке крови и нормализация уровня аланинаминотрансферазы (AJ1T).

При помощи технологии фагового дисплея получены фаговые клоны с пептидными вставками, имитирующими 11 антигенных детерминант белков core, NS3, NS4B и NS5A ВГС. Впервые показано, что антигенные детерминанты белков ВГС, экспонированные на поверхности фаговых частиц, являются более эффективными стимуляторами клеточного иммунного ответа по сравнению с олигопептидами со сходной аминокислотной последовательностью.

Впервые установлено, что ковалентные конъюгаты рекомбинантных белков ВГС с петидогликаном растительного происхождения иммуномодулятором иммуномаксом наиболее эффективно стимулируют гуморальный и клеточный иммунные ответы при введении низких доз антигена (около 1 мкг/мышь). Иммуномакс оказался также эффективным адъювантом при иммунизации мышей ДНК-плазмидой, кодирующей белки ВГС. Впервые показано, что вакцинная композиция, включающая специфические компоненты ВГС (ДНК-плазмиду и рекомбинантные белки) и иммуномакс в качестве адъюванта стимулирует интенсивный клеточный и гуморальный иммунный ответ к широкому спектру эпитопов ВГС.

Практическая значимость

Полученные МКА могут быть использованы в разных областях вирусологии и биотехнологии: для контроля качества и стандартизации рекомбинантных белков при производстве диагностических тест-систем, предназначенных для выявления антител к белкам ВГС в сыворотках крови; как аффинные сорбенты при очистке рекомбинантных белков; для разработки более чувствительных вариантов ИФА-диагностикумов ("capture"-ИФА и варианты, основанные на конкуренции); для анализа экспрессии белков ВГС в эукариотических клетках при создании новых векторных систем и ДНК-вакцин. Информация о детальном строении детерминант ВГС, полученная с помощью МКА, может применяться для усовершенствования диагностики гепатита С, для изучения влияния аминокислотных замен в белках на их антигенные свойства, а также

для изучения иммунного ответа у пациентов, инфицированных разными генотипами ВГС.

Разработан чувствительный иммуноферментный метод выявления соге-белка в сыворотках как бессимптомных ВГС-инфицированных доноров, так и больных ОГС и ХГС. Получен патент на изобретение № 2329303 от 20.07.2008 г. Показано, что для обнаружения ВГС в крови пациентов с ОГС достаточно выявлять свободно циркулирующие вирионы, тогда как при ХГС следует включать анализ ВГС в составе иммунных комплексов. Преимущества количественного определения белка могут быть полезны для определения вирусной нагрузки, в том числе при оценке эффективности терапии. Низкая концентрация (<40 пг/мл) соге-белка в сыворотке в ранние сроки (около 1 месяца) после манифестации ОГС является предиктором реконвалесценции. Полученные результаты являются основой для разработки ИФА тест-системы для диагностики гепатита С, в том числе и его ранних стадий. Внедрение метода в практику позволит увеличить надежность диагностики гепатита С и вирусную безопасность гемотрансфузий.

Разработан метод выявления белков ВГС в инфицированных клетках (печень, клетки крови, трансфицированные ДНК-плазмидами клетки) in situ. Выбраны иммунные реагенты (смесь МКА к неструктурным белкам NS4 и NS5A), позволяющие выявлять натуральные белки ВГС с наибольшей чувствительностью. Показано, что обнаружение белков ВГС в зараженных клетках увеличивает эффективность диагностики. Метод полезен также для исследования фундаментальных вопросов, связанных с механизмами взаимодействия хозяин-вирус на клеточном уровне. Иммунные реагенты на основе МКА к ВГС, меченных ФИТЦ, пригодны для определения внутриклеточной экспрессии белков ВГС и анализа клеток методами проточной цитофлюориметрии и прямой иммунофлюоресценции. Конъюгаты МКА с пероксидазой хрена являются компонентами для разработки сэндвич-ИФА на антигены ВГС. На основе МКА к белкам core и NS4 разработаны варианты сэндвич-ИФА для выявления белков ВГС в лизатах клеток и тканей.

С помощью данного метода обнаружены белки ВГС в лизатах биоптатов печени пациентов с гепатитом неуточненной этиологии. Методы могут быть полезны при исследовании замороженных клеток крови, биопсийных и аутопсийных материалов, а также для анализа экспрессии белков ВГС в трансфицированных клетках.

Выявлены закономерности, которые являются предикторами реконвалесценции: отсутствие антител к белку NS5A; низкая концентрация sCD38 и соге-белка в ранние сроки после манифестации заболевания (около 1 месяца), сочетание отсутствия РНК ВГС в сыворотке крови и нормального уровня трансиаминаз в период 3-4 мес. от начала заболевания.. Включение этих параметров в обследование пациентов позволит повысить точность прогноза исхода ОГС и своевременно начать противовирусную терапию.

Выбраны адъюванты для вакцинной композиции против гепатита С: иммуномакс в виде ковалентного конъюгата с рекомбинантными белками ВГС, иммуномакс или ген GM-CSF - для ДНК-плазмиды. Эти вещества наиболее эффективно стимулируют гуморальный и клеточный иммунные ответы к широкому спектру эпитопов ВГС. Определен дизайн экспериментальной кандидатной вакцины против гепатита С. Принцип, положенный в основу создания описанного мультиэпитопного вакцинного препарата, открывает перспективы для разработки на его основе вакцин нового поколения с использованием биотехнологических конструкций (белков и ДНК), содержащих аминокислотные и нуклеотидные последовательности структурных и неструктурных белков ВГС, в сочетании с иммуномаксом.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Получена панель из 26 МКА к 5 белкам ВГС, с помощью которых проведено антигенное картирование белков core, NS3, NS4A, NS4B и NS5A.

2. На основе МКА разработано три группы иммунохимических методов для выявления белков ВГС в материалах (сыворотка/плазма крови, клетки периферической крови и печени) от больных гепатитом С и ВГС-инфицированных лиц.

3. Антигенные детерминанты белков ВГС выявляются в инфицированных клетках с различной частотой, что может быть связано с пространственной доступностью этих детерминант.

4. Частота обнаружения белков ВГС в печени больных ОГС статистически значимо выше, чем больных ХГС, что свидетельствуют о более высокой активности репликации ВГС при ОГС по сравнению с ХГС.

5. Выявление соге-белка в сыворотке крови прямо коррелирует с гистологической и биохимической активностью, а также стадией ХГС.

6. Белки ВГС экспрессируются в мононуклеарах периферической крови большинства больных ХГС и чаще обнаруживаются в моноцитах.

7. Наличие и высокая активность антител к неструктурному белку N8 5А ассоциированы с более тяжелым поражением печени при ХГС, а также с неблагоприятным прогнозом исхода ОГС.

8. У больных гепатитом С выявлены изменения функциональной активности иммунной системы: повышение концентрации растворимых форм дифференцировочных антигенов, усиление экспрессии рецептора Раз-зависимого апоптоза на клетках крови, уменьшение доли Т-хелперов и №С-клеток, снижение иммунорегуляторного индекса, дисбаланс продукции цитокинов с преобладанием ТЬ2-цитокинов.

9. Мультикомпонентный препарат, созданный на основе биотехнологических продуктов - рекомбинантных белков ВГС, ДНК-конструкций, содержащих гены ВГС, в составе эукариотических векторов и иммуномодулятора иммуномакса, индуцирует наиболее эффективный клеточный и гуморальный ответ, направленный к широкому спектру эпитопов ВГС.

Заключение диссертации по теме «Вирусология», Масалова, Ольга Владимировна

выводы

1. Впервые на белках core, NS3, NS4A, NS4B и NS5A вируса гепатита С (ВГС) определена локализация 22 антигенных детерминант, взаимодействующих с моноклональными антителами (МКА). Установлено, что большинство эпитопов (16) являются конформационно-зависимыми, 6 эпитопов выявляют линейные участки вирусных белков. При помощи технологии фагового дисплея получены фаговые клоны с пептидными вставками, имитирующими 11 антигенных детерминант белков core, NS3, NS4B и NS5A ВГС.

2. Впервые установлены особенности экспрессии белков ВГС в печени при различных формах гепатита С. При ХГС показана прямая зависимость между накоплением белка NS5A в печени, выработкой антител к этому белку, увеличением гистологической активности и развитием фиброза, что позволяет рассматривать NS5A как один из маркеров повреждения ткани печени. Экспрессия белков core и NS4A, напротив, уменьшается по мере увеличения активности ХГС. Степень накопления белков ВГС и выявление геномной РНК ВГС в печени коррелируют с более высокой активностью аланинаминотрансферазы (AJIT) и с большей длительностью инфицирования.

3. Сравнительный анализ структурных и неструктурных белков ВГС в клетках печени показал, что у пациентов с ОГС частота обнаружения белков статистически значимо выше, чем у больных ХГС (100% против 74%), р=0,009). Вирусные белки в печени обнаруживались при ОГС с частотой 89-95%, при ХГС - 28-65%. Среднее количество ВГС-содержащих клеток печени при ОГС превышает таковое при ХГС: 51+7% против 33+3% (р=0,006). Полученные данные прямо свидетельствуют о более высокой активности репликации ВГС при ОГС по сравнению с ХГС.

4. В мононуклеарных клетках периферической крови (МКПК) больных ХГС геномная РНК ВГС выявляется достоверно чаще по сравнению с частотой ее выявления в сыворотке (94,6%) против 76%, р=0,029). Белки ВГС найдены у 86% больных ХГС преимущественно в моноцитах (до 32% популяции), в меньшей степени - в лимфоцитах (до 5% популяции). Накопление белков ВГС в МКПК ассоциируется с уменьшением количества мононуклеаров (г= -0,66, р=0,001), повышением активности

AJIT (p<0,05) и присутствием репликативной формы РНК ВГС в МКПК (р<0,05).

5. Частота выявления белка core ВГС в ткани печени и МКПК значительно ниже, чем в сыворотке крови (28 и 44%, соответственно, против 71%, р<0,05). Наличие соге-белка в периферической крови прямо коррелирует с гистологической и биохимической активностью, а также стадией ХГС (р<0,05). Результаты определения соге-белка в сыворотках статистически значимо связаны с обнаружением геномной РНК ВГС, а в клетках крови и печени - репликативной формы РНК ВГС (р<0,05).

6. У больных гепатитом С на МКПК статистически значимо по сравнению с ВГС-негативными донорами повышена экспрессия рецептора Fas-зависимого апоптоза CD95+ (р<0,05). Выявлена негативная корреляция между количеством CD95+-лимфоцитов и степенью накопления в клетках печени белков ВГС: core и NS4A - при ХГС (р<0,05), NS3, NS4A и NS5A - при ОГС (р<0,05). При ХГС относительное содержание CD95+-лимфоцитов у больных с виремией в 2 раза больше, чем у больных без виремии (р<0,05).

7. У больных гепатитом С по сравнению с ВГС-негативными донорами установлено статистически значимое (р<0,05) повышение концентраций растворимых дифференцировочных антигенов в сыворотке крови: sFas, sCD38, sHLA-I и sHLA-DR - при ОГС, sFas и sCD38 - при ХГС. Выявлена прямая корреляция между концентрациями sFas и sHLA-I и накоплением белков ВГС в клетках печени больных гепатитом С (г=0,3-0,4, р<0,05). Уровень sFas достоверно выше у больных ОГС с генотипами 1а и lb ВГС по сравнению с генотипами 2а и За (462±120 и 148±29 УЕ/мл, соответственно, р<0,05).

8. У больных ХГС наблюдается нарушение иммунного статуса, которое проявляется в статистически значимом снижении относительного количества субпопуляций лимфоцитов с маркерами CD4+ (Th) и CD16+ (NK), а также иммунорегуляторного индекса CD4+/CD8+ (р<0,05) по сравнению с ВГС-негативными донорами. У больных ОГС, кроме этого, статистически значимо увеличена субпопуляция CD8+ (CTL); сокращение количества CD 16+-лимфоцитов ассоциировано с более активной экспрессией белков NS3 и NS5A ВГС в печени (г=-0,7, р<0,05).

9. У больных гепатитом С по сравнению с ВГС-негативными донорами выявлен дисбаланс цитокинов, продуцируемых Thl и Th2 Т-клетками. Он

заключается в гиперпродукции IL-4, IL-6, IL-10 и TNF-a в сыворотках крови (р<0,001). Кроме этого, при ОГС повышена продукция IL-8 (р<0,002) и понижена - IL-2 (р<0,05). Спонтанная продукция цитокинов IL-8 и IL-10 клетками крови больных гепатитом С достоверно снижена по сравнению с донорами (р<0,05). Рекомбинантные белки ВГС значительно слабее стимулировали секрецию клетками крови in vitro цитокинов IL-2, IFN-y и TNF-a, чем конканавалин А (р<0,01).

10.При исследовании гуморального ответа установлено, что частота встречаемости и активность антител к белку NS5A статистически значимо выше у пациентов с большей гистологической и биохимической активностью и стадией ХГС, а также у больных ОГС с последующей хронизацией заболевания (р<0,05). Эти данные позволяют рассматривать наличие антител к NS5A как неблагоприятный признак при гепатите С.

11. Анализ полученных вирусологических и иммунологических данных выявил новые прогностические критерии для оценки исхода ОГС. Показано, что предвестниками реконвалесценции в течение первого месяца после начала заболевания служат: более интенсивное накопление белков NS4A и NS3 в печени в ранние сроки после манифестации ОГС; низкая концентрация sCD38 в сыворотке; отсутствие антител к NS5A; низкая концентрация (<40 пг/мл) соге-белка в сыворотке.

12.На основе полученных МКА разработан комплекс иммунохимических методов, которые позволили: а)- выявлять белки ВГС в инфицированных клетках печени и крови in situ; б) - обнаруживать белки ВГС в лизатах клеток и тканей; в) - определять белок нуклеокапсида в сыворотках крови и дифференцировать безоболочечные нуклеокапсиды, вирионы ВГС и иммунные комплексы. Выбраны иммунные реагенты - смеси МКА, позволяющие выявлять натуральные белки ВГС, по крайней мере, трех генотипов (1, 2 и 3) с наибольшей чувствительностью.

13.Разработан дизайн экспериментальной кандидатной мультиэпитопной вакцины против гепатита С. Вакцинная композиция включает: специфические компоненты ВГС (ДНК-плазмиду и рекомбинантные белки) и новый оригинальный отечественный иммуномодулятор иммуномакс в качестве адъюванта. Установлено, что трехкратное введение комплексной вакцины лабораторным животным стимулирует интенсивный клеточный и гуморальный иммунный ответ к широкому спектру эпитопов ВГС.

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Масалова, Ольга Владимировна, 2011 год

СПИСОК ЦИТИРОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

1. Антитела. Методы./Под. ред. Д. Кэтти - М.: Мир. - 1991. - Т.2. - 227 с.

2. Атауллаханов Р.П, Пичугин А.В, Мельникова Т.М, Хаитов P.M. Повышение иммуногенности белковых антигенов путем конъюгации с иммуномаксом.//Иммунология. - 2008. - Т.29. - №6. - С.334-337.

3. Атауллаханов Р.И, Пичугин А.В, Шишкова Н.М. и др. Клеточные механизмы иммуномодулирующего действия препарата Иммуномакса.// Иммунология. - 2005. - Т.26. - С.111-120.

4. Балаян М.С, Михайлов М.И. Энциклопедический словарь - вирусные гепатиты./Изд. 2-е. М.: Амипресс. - 1999. - 304 стр.

5. Баранов А.В, Малеев В.В. Иммунологические показатели при хроническом течении гепатита С.//Инфекц. болезни. - 2008 а. - №1. -С.13-15.

6. Баранов А.В, Малеев В.В. Эпидемиологические и клинические особенности хронического гепатита С.//Эпидемиология и инфекционные болезни. - 2008 б. - №2. - С.32-35.

7. Буеверов А.О. Некоторые аспекты изучения апоптоза при хронических вирусных гепатитах.//Клинич. перспективы гастроэнтерологии, гепатологии. - 2009. - № 2. - С.11-17.

8. Вирусные гепатиты в Российской Федерации.//Аналитический обзор, 6 выпуск / Под ред. Жебруна А.Б. - НИИЭМ им. Пастера, СПб. - 2006.

9. Давыдов Я.И, Тоневицкий А.Г. Предсказание линейных В-клеточных эпитопов.//Молекулярная биология. - 2009. - Т.43. - №1. - С.166-174.

10. Дерябин П.Г, Вязов С.О, Исаева Е.И. и др. Персистенция вируса гепатита С в культурах клеток головного мозга мышей-сосунков.//Вопр. вирусол. - 1997а. - Т.6. - С.254-258.

11. Дерябин П.Г, Исаева Е.И, Вязов С.О. и др. Хроническая инфекция культур клеток почки эмбриона свиньи, вызванная вирусом гепатита С.//Вопр. вирусол. - 1997 б. - Т.6. - С.259-263.

12. Дерябин П.Г, Львов Д.К. Высокопродуктивный вариант вируса гепатита С. Выделение, характеристика, идентификация.//Доклады Академии наук РФ. - 1998. - Т.358. - №5. - С.688-691.

13. Дунаева Н.В, Неустроева Ю.А, Тихомирова Т.А. Распространённость патологии почек у больных хроническим гепатитом С и клиническое значение криоглобулинемии в её развитии.//Мир вирусных гепатитов. -2008. - №5.-С. 17-22.

14. Ершов Ф.И., Мезенцева М.В.. Интерфероны и другие цитокины при остром вирусном гепатите С.//Цитокины и воспаление. - 2007. - Т.6. -С.32-35.

15. Ершов Ф.И., Наровлянский А.Н., Мезенцева М.В. Ранние цитокиновые реакции при вирусных инфекциях.//Цитокины и воспаление. - 2004. -Т.З. - С.3-6.

16. Жукова О.Б., Рязанцева Н.В., Новицкий В.В. и др. Модуляция апоптоза лимфоцитов крови как способ выживания вируса гепатита С.//Иммунология. - 2005. - Т.26. - №2. - С.79-83.

17. Иванисенко В.А., Ерошкин A.M. Поиск сайтов, содержащих функционально значимые замены в наборах родственных или мутантных белков.//Молекул. биология. - 1997. - Т.31. - С.880-887.

18. Киселева JIM., Шаршова С.М., Ильмухина JI.B. и др. Оптимизация этиопатогенетической терапии хронического гепатита С.//Мир вирусных гепатитов. - 2008. - №2. - С. 12-15.

19. Козлов А.Ю., Климова P.P., Шингарова JI.H. и др. Сравнительный анализ адъювантных свойств глюкозаминил-мурамилдипептида и гена гранулоцитарно-макрофагального колониестимулирующего фактора при ДНК-иммунизации против вируса простого герпеса.//Молекул. биология. - 2005. - Т.39 - №3. - С. 504-512.

20. Крель П.Е., Цинзерлинг О.Д. Внепеченочная локализация вируса гепатита С: особенности клинических проявлений и прогностическая значимость.//Терапевтический архив. - 2009. - №11. - С.63-68.

21. Круглов И.В., Знойко О.О., Огиенко O.JI. и др. Спектр антител к различным антигенам HCV при разных вариантах течения хронической НСУ-инфекции.//Вопросы вирусологии. - 2002. - №2. - С.11-15.

22. Круглов И.В., Огиенко O.JL, Знойко О.О. и др. Исследование сероконверсии к различным антигенам ВГС у больных гепатитом С с различными исходами.//Вопросы вирусологии. - 2003. - №2. - С.36-40.

23. Литвинов A.C., Цыркунов В.М., Кравчук Р.И., Лукашик С.П. Механизмы липидной инфильтрации гепатоцитов при хронической НСУ-инфекции.//Инфекционные болезни. - 2008. - Т.6. - №1. - С.8-12.

24. Лопаткина Т.Н. Хронический гепатит С: внепеченочные проявления, особенности клинического течения, диагностика.//Вирусные гепатиты -достижения и перспективы. - 2000. - №2. - С.5-6.

25. Макашова В.В., Яковенко М.А., Флоряну А.И. и др. Особенности иммунитета у больных хроническим гепатитом С.//Эпидемиология и инфекционные болезни. - 2009. - №2. - С.58-62.

26. Мезенцева M.B, Панкова Е.П, Ершов Ф.И. Цитокиновый профиль и интерфероновый статус при хроническом вирусном гепатите С.//Мир вирусных гепатитов. - 2007. - №6. - С. 10-16.

27. Мироджов Г.К, Одинаев Р.И, Сатарова М.И. Цитокины при хроническом гепатите С.//Клинич. медицина. - 2009. - № 2. - С.13-17.

28. Михайлов М.И, Шахгильдян И.В. Актуальные проблемы эпидемиологии вирусных гепатитов.//Мат. VII Российской научно-практической конференции «Вирусные гепатиты - эпидемиология, диагностика, лечение и профилактика». - 29-31 мая 2007 г. - С.122-123.

29. Москалёв A.B., Астапенко П.В. Латентные формы вирусных гепатитов В и С. Оптимизация диагностики.//Информационный бюллетень "Новости "Вектор-Бест". -2009. -Т.51. - №1.

30. Наследникова И.О., Рязанцева Н.В, Белобородова Е.В. и др. Дизрегуляция клеточного звена иммунитета при хроническом вирусном гепатите. //Бюллетень СО РАМН. - 2005. - Т. 118. - №4. - С.59-63.

31. Николаева Л.И, Михайлов М.И, Блохина H.A. и др. Титры специфических антител в разные фазы гепатита С.//Эпидемиология и инфекционные болезни. - 2004.- № 5. - С.37-42.

32. Николаева Л.И, Петрова Е.В, Макашова В.В. и др. Изменения специфического гуморального иммунитета у пациентов с хроническим гепатитом С при противовирусной терапии.//Эпидемиология и вакцинопрофилактика. - 2005. - № 5. - С.44-49.

33. Николаева Л.И, Финогенова М.П, Шибнев В.А. Выявление антител к консенсусной последовательности первого гипервариабельного региона белка Е2 вируса гепатита С в зависимости от фазы инфекции.//Вопр. вирусол. -2006. - №4.-С. 16-19.

34. Николаева Л.И, Макашова В.В, Петрова Е.В. и др. Снижение содержания антител к вирусу гепатита С при антивирусной терапии.//Биомедицинская химия. - 2009. - №2. - С.201-211.

35. Новиков В.В, Евсегнеева И.В, Караулов A.B., Барышников А.Ю. Растворимые формы мембранных антигенов клеток иммунной системы при социально значимых инфекциях. Сообщение 2. Исследование их роли при вирусных инфекциях.//Росс. биотерапевт, журн. - 2005. - Т.4. -№3. - С.133-144.

36. Пименов В.К, Афанасьев А.Ю, Колобов A.A. и др. Диагностические возможности иммуноферментной тест-системы для определения спектра антител к структурным и неструктурным антигенам вируса гепатита С.//Вопр. вирусол. - 2000. - Т.45. - №6. - С.44-47.

37. Птицына Ю.С. Сывороточный уровень растворимых форм мембранных антигенов клеток иммунной системы при вирусных гепатитах В, С и G.// Автореферат диссертации на соискание учёной степени кандидата биологических наук. - 2003.

38. Редькин Ю.В, Дронь Е.В. Иммунный и цитокиновый статус у больных хроническим вирусным гепатитом С при использовании противовирусного средства Панавир и иммуномодулятора Галавит.//Цитокины и воспаление. - 2007. - Т.6 - №1. - С.40-46.

39. Ройт А, Бростофф Д, Мейл Д. Иммунология.//М. Мир. - 2003. - 620 с.

40. Рязанцева A.A., Завалишина Л.Э, Маныкин A.A. Выявление РНК вируса гепатита С в образцах печени больных хроническим гепатитом С и гепатоцеллюлярной карциномой с помощью in situ RT-PCR.//Bonp. вирусол. - 2005. - Т.50. - №6. - С.9-14.

41. Санин A.B., Наровлянский А.Н, Ожерелков C.B. и др. Иммуномодуляторы в ветеринарной практике: применение и противоречия.//Ветеринарная клиника. - 2008. - №10 (77).

42. Семененко Т.А. Клеточный иммунный ответ при гепатите С.//Вирусные гепатиты: достижения и перспективы. - 2001. - №1. - С.3-9.

43. Семененко Т.А. Иммунологические показатели эффективности лечения хронического гепатита С.//Вирусные гепатиты: достижения и перспективы. - 2004. - №1. - С.3-9.

44. Скляр Л.Ф. Роль системы цитокинов в гепатоцеллюлярном повреждении при хроническом гепатите С.//Медиц. иммунол. - 2006. -Т.8.-С. 81-87.

45. Творогова М.Г, Чуланов В.П, Волкова P.A. и др. Оценки качества выявления РНК вируса гепатита С методом ПЦР в Федеральной системе внешней оценки качества в 2005-2007 гг.//Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. - 2009 - №1. -С.59-62.

46. Хаитов P.M., Алексеев Л.П. Физиологическая роль главного комплекса гистосовместимости человека.//Иммунология. - 2001. - №3. - С.4-12.

47. Шахгильдян И.В, Ясинский A.A., Михайлов М.И. Эпидемиологическая характеристика хронических гепатитов В и С в Российской Федерации.//Мир вирусных гепатитов. - 2008. - №5 - С.11-16.

48. Щелкунов С.Н. Нитевидные фаги Е. coli - молекулярные векторы генетической мнженерии.//Соровский образовательный журнал. - 2001. - Т.7. - №8. - С.2-6.

49. Abdulhaqq S.A., Weiner D.B. DNA vaccines: developing new strategies to enhance immune responses.//Immunol. Res. - 2008. - Y.42. - P.219-232.

50. Aberle J.H, Formann E., Steindl-Munda P. et al. Prospective study of viral clearance and CD4(+) T-cell response in acute hepatitis C primary infection and reinfection.//! Clin. Virol. - 2006. - V.36. - P.24-31.

51. Afdhal N.H., McHutchison J.G., Zeuzem S. et al. Hepatitis C pharmacogenetics: State of the art in 2010.//Hepatology. - 2011. - V.3. - №1.

- P.336-345.

52. Ahlen G., Nystrom J., Pult I. et al. In vivo clearance of hepatitis C virus nonstructural 3/4A-expressing hepatocytes by DNA vaccine-primed cytotoxic T lymphocytes.//J. Inf. Diseases. - 2005. -V.192. - №12. - P.2112-2116.

53. Ait-Goughoulte M., Hourioux C., Patient R. et al. Core protein cleavage by signal peptide peptidase is required for hepatitis C virus-like particle assemblyV/J. Gen. Virol. - 2006. - V.87. - P.855-860.

54. Albeldawi M., Ruiz-Rodriguez E., Carey W.D. Hepatitis C virus: Prevention, screening, and interpretation of assays .//Cleve Clin. J. Med. - 2010. - V. 77.

- №9.-P.616-626.

55. Alekseeva E., Sominskaya I., Skrastina D. et al. Enhancement of the expression of HCV core gene does not enhance core-specific immune response in DNA immunization: advantages of the heterologous DNA prime, protein boost immunization regimen.// Genet. Vaccines Ther. - 2009. - V.7. -P.7.

56. Aloman C., Gehring S., Wintermeyer P. et al. Chronic ethanol consumption impairs cellular immune responses against HCV NS5 protein due to dendritic cell dysfunction.//Gastroenterology. -2007. - V. 132. - №2. -P.698-708.

57. Al-Qahtani A., Al-Hazzani T., Al-hussain T. et al. Correlation between clinical characteristics, survival and genetic alterations in patients with hepatocellular carcinoma from Saudi Arabia.//Cancer Genet. Cytogenet. -2010. - V.203. - №2. - P.269-277.

58. Alvarez-Lajonchere L., Dueñas-Carrera S. Advances in DNA immunization against hepatitis C virus infection.//Hum. Vaccin. - 2009. - V.5(8). - P.568-571.

59. Alvarez-Lajonchere L., Shoukry N. H., Gra B. et al. Immunogenicity of CIGB-230, a therapeutic DNA vaccine preparation, in HCV-chronically infected individuals in a Phase I clinical trial.//J.Viral Hepatitis. - 2009. -V.16. №3.-P. 156-167.

60. Amador-Cañizares Y, Alvarez-Lajonchere L, Guerra I. et al. Induction of IgA and sustained deficiency of cell proliferative response in chronic hepatitis C.//World J. Gastroenterol. -2008. - V.14 - №44. - P.6844-6852.

61. André P, Komurian-Pradel F, Deforges S. et al. Characterization of low-and very-low-density hepatitis C virus RNA-containing particles.//J. Virol. -2002. - V.76 - №14. - P.6919-6928.

62. Ansaldi F, Bruzzone B, Testino G. et al. Combination hepatitis C virus antigen and antibody immunoassay as a new tool for early diagnosis of infection.//.!. Viral. Hepat. - 2006. - V.13. - P.5-10.

63. Antonaci S, Jirillo E, Schiraldi O. Soluble HLA class I antigens in chronic hepatitis C: a disease-associated manifestation or molecules modulating immunoresponsiveness?//Immunopharmacol. Immunotoxicol. - 1999. -V.21. - №4. - P.727-738

64. Appel N, Schaller T, Penin F, Bartenschlager R. From structure to function: new insights into hepatitis C virus RNA replication.//!. Biol. Chem. - 2006. -V.281. - №15. - P.9833-9836.

65. Appel N, Zayas M, Miller S. et al. Essential role of domain III of nonstructural protein 5A for hepatitis C virus infectious particle assembly.//PLoS pathogens. - 2008. - V.4. - el000035.

66. Asselah T. NS5A inhibitors: a new breakthrough for the treatment of chronic hepatitis C.//J. Hepatol. -2011. - V.54. - №5. - P. 1069-1072.

67. Ballardini G, De Raffele E, Groff P. et al. Timing of reinfection and mechanisms of hepatocellular damage in transplanted hepatitis C virus-reinfected liver.//Liver Transpl. - 2002. - V.8. - P. 10-20.

68. Bare P, Massud I, Parodi C. et al. Continuous release of of hepatitis C virus (HCV) by peripheral blood mononuclear cells and B-lymphoblastoid cell-line cultures derived from HCV-infected patients.//J. Gen. Virol. - 2005. - V. 86. -P.1717-1727.

69. Baril M, Brakier-Gingras L. Translation of the F protein of hepatitis C virus is initiated at a non-AUG codon in a +1 reading frame relative to the polyprotein.//Nucleic Acids Res. - 2005. - V.33. - №5. - P. 1474-1486.

70. Barril G, Castillo I, Arenas M.D. et al. Occult hepatitis C virus infection among hemodialysis patients.//! Am. Soc. Nephrol. - 2008. - V.19. -P.2288-2292.

71. Bartenschlager R, Lohmann V. Replication of hepatitis C virus.//J. Gen. Virol. - 2000. - V.81. - P. 1631 -1648.

72. Bartolomé J., López-Alcorocho J.M., Castillo I. et al. Ultracentrifugation of serum samples allows detection of hepatitis C virus RNA in patients with occult hepatitis C.//J. Virol. - 2007. - V.81. - №14. - P.7710-7715.

73. Bartolomé J., Rodríguez-Iñigo E., Quadros P. et al. Detection of hepatitis C virus in thyroid tissue from patients with chronic HCV infection.//. J. Med. Virol. - 2008. - V.80. - №9. - P. 1588-1594.

74. Bedossa P., Poynard T. An algorithm for the grading of activity in chronic hepatitis C.//Hepatology. - 1996. - V.24. -P.289-293.

75. Beld M., Penning M., van Putten M. et al. Quantitative antibody responses to structural (Core) and nonstructural (NS3, NS4, and NS5) hepatitis C virus proteins among seroconverting injecting drug users: impact of epitope variation and relationship to detection of HCV RNA in blood.//Hepatology.

- 1999. -V. 29. - P. 1288-1298.

76. Belon C.A., Frick D.N. Helicase inhibitors as specifically targeted antiviral therapy for hepatitis C.//Future Virol. - 2009. - V.4. - №3. - P.277-293.

77. Bhattacherjee Y., Prescott L.F., Pike I. et al. Use of NS4 peptides to identify type-specific antibody to hepatitis C virus genotypes 1, 2, 3, 4, 5 and 6.//J. Gen. Virol. - 1995. -V.76. - P. 1737-1748.

78. Bigger C.B., Brasky K.M., Lanford R.E. DNA microarray analysis of chimpanzee liver during acute resolving hepatitis C virus infection.//.!. Virol.

- 2001. - V.75. - P.7059-7066.

79. Blackard J.T., Smeaton L., Hiasa Y. et al. Detection of hepatitis C virus (HCV) in serum and peripheral blood mononuclear cells from HCV-monoinfected and HIV/HCV-coinfected persons.//J. Infect. Dis. - 2005. -V.192. - P.258-265.

80. Bocharov G., Ludewig B., Bertoletti A. et al. Underwhelming the immune response: effect of slow virus growth on CD8+ -T-lymphocyte responses.//.!. Virol. - 2004. - V.78. - P.2247-2254.

81. Boettler T., Spangenberg H.C., Neumann-Haefelin C. et al. T cells with a CD4+CD25+ regulatory phenotype suppress in vitro proliferation of virus-specific CD8+ T cells during chronic hepatitis C virus infection.//.!. Virol. -2005. - V.79. - P.7860-7867.

82. Bolukbas C., Bolucbas F.F., Kocyigit A. et al. Relationship between levels of DNA damage in lymphocytes and histopatological severity of chronic hepatitis C and various clinical forms of hepatitis B.//J. Gastroenterol. Hepatol. -2006. -V.21. -P.610-616.

83. Bouvier-Alias M, Patel K, Dahari H. et al. Clinical utility of total HCV core antigen quantification: a new indirect marker of HCV replication.//Hepatology. - 2002. - V.36. - P.211-218.

84. Bowen D, Walker C. Adaptive immune responses in acute and chronic hepatitis C virus infection.//Nature. - 2005. - V.436. - P.946-952.

85. Boyer N, Marcellin P. Pathogenesis, diagnosis and management of hepatitis C.//J. Hepatol. -2000.-V.32. -P.98-112.

86. Brass V, Gosert R, Moradpour D. Investigation of the hepatitis C virus replication complex.//Methods Mol. Biol. - 2009. - V.510. - P. 195-209.

87. Bratkovic T. Progress in phage display: evolution of the technique and its application.//Cell Mol. Life Sci. - 2010. - V.67. - №5. - P.749-767.

88. Brody R.I, Eng S, Melamed J. et al. Immunohistochemical detection of hepatitis C antigen by monoclonal antibody TORDJI-22 compared with PCR viral detection. // Am. J. Clin. Pathol. - 1998. - V.l 10. - № 1. - P.32-37.

89. Cabrera R. An immunomodulatory role for CD4+CD25+ regulatory T lymphocytes in hepatitis C virus infection.//Hepatology. - 2004. - V.40. - № 5. -P.1062-1071.

90. Calvaruso V, Burroughs A.K, Standish R. et al. Computer-assisted image analysis of liver collagen: relationship to Ishak scoring and hepatic venous pressure gradient.//Hepatology. - 2009. - V.49. - №4. - P. 1236-1244.

91. Carreño V, Pardo M, López-Alcorocho J.M. et al. Detection of hepatitis C virus (HCV) RNA in the liver of healthy, anti-HCVantibody-positive, serum HCV RNA-negative patients with normal alanine aminotransferase levels.//J. Infect. Dis. -2006. -V. 194. - №1. -P.53-60.

92. Castillo I, Rodrigues-Inigo E, Bartolomé J. et al. Hepatitis C virus replicates in peripheral blood mononuclear cells of patients with occult hepatitis C virus infection.//Gut. - 2005. - V.54. - P.682-685.

93. Castillo I, Rodríguez-Iñigo E, López-Alcorocho J.M. et al. Hepatitis C virus replicates in the liver of patients who have a sustained response to antiviral treatment.//Clin. Infect. Dis. -2006. - V.43. -№10. - P.1277-1283.

94. Chamlian A, Benkoel L, Sahel J. et al. Immunohistochemical detection of hepatitis C virus related CI00-3 and core antigens in formalin-fixed liver tissue. //Cell .Molec. Biology. - 1996. - V. 42. - P.557-566.

95. Chan S.C, Lo S.Y, Liou J.W. et al. Visualization of the structures of the hepatitis C virus replication complex.//Biochem. Biophys. Res. Commun. -2011.-V.404. -№l.-P.574-578.

96. Chang K.M. Immunopathogenesis of hepatitis C virus infection.//Clin. Liver Dis. - 2003. - V.7. - P.89-105.

97. Chang M., Marquardt A.P., Wood B.L. et al. In situ distribution of hepatitis C virus replicative-intermediate RNA in hepatic tissue and its correlation with liver disease.//! Virol. - 2000. - V.74. - №2. - P.944-955.

98. Chang J.C., Seidel C., Ofenloch B. Et al. Antigenic heterogeneity of the hepatitis C virus NS4 protein as modeled with synthetic peptides.//Virology. -1999. -V.257. - P. 177-190.

99. Chang T.-T., Young K.-C., Yang Y.-J. et al. Hepatitis C virus RNA in peripheral blood mononuclear cells: comparing acute and chronic hepatitis C virus infection.//Hepatology. - 1996. - V.23. - P.977-981.

100. Chen J.Y., Li F. Development of hepatitis C virus vaccine using hepatitis B core antigen as immuno-carrier.//World J. Gastroenterol. - 2006. - V.12. -№48. - P.7774-7778.

101. Chen S.L., Morgan T.R. The Natural history of hepatitis C virus (HCV) infection.//Intern. J. Med. Sci. -2006. - V.3 -P.47-52.

102. Chen M., Sallberg M., Sonnerborg A. et al. Human and murine antibody recognition is focused on the ATP/helicase, but not the protease domain of hepatitis C virus nonstructural 3 protein.//Hepatology. - 1998. - V.28. -P.219-224.

103. Chen M., Sallberg M., Sonnerborg A. et al. Limited humoral immunity in hepatitis C virus infection.//Gastroenterology. - 1999. - V.l 16. - P.135-143.

104. Choo Q., Kuo G., Weiner A J. et.al. Isolation of a cDNA clone derived from a blood-borne non-A, non-B viral hepatitis genome.//Science. - 1989. - V. 244. - P.359-362.

105. Chou R., Clark E.C., Helfand M. Screening for hepatitis C virus infection: a review of the evidence for the U.S. Preventive Services Task Force.//Ann. Intern. Med. - 2004. - V.140. - №6. - P.465-479.

106. Ciccaglione A.R., Marcantonio C., Tritarelli E. et al. The transmembrane domain of hepatitis C virus El glycoprotein induces cell death.//Virus Res. -2004. - V.104. - №1. - P.1-9.

107. Claassen M.A., de Knegt R.J., Tilanus H.W. et al. Abundant numbers of regulatory T cells localize to the liver of chronic hepatitis C infected patients and limit the extent of fibrosis.//.!. Hepatol. - 2010. - V.52. - №3. - P.315-321.

108. Contini P., Ghio M., Poggi A. et al. Soluble HLA- A, -B, -C and -G molecules induce apoptosis in T and NK CD8+ cells and inhibit cytotoxic T cell activity through CD8 ligation.//Eur. J. Immunol. - 2003. - V.33. - №1. -P.125-134.

109. Coppola N, Pisapia R, Tonziello G. et al. Virological pattern in plasma, peripheral blood mononuclear cells and liver tissue and clinical outcome in chronic hepatitis B and C virus coinfection.//Antivir. Ther. - 2008. - V.13. -№2. -P.307-318.

110. Coquillard G, Patterson B.K. Determination of hepatitis C virus-infected, monocyte lineage reservoirs in individuals with or without HIV coinfection.//J. Infect. Dis. - 2009. - V.200. - №6. - P.947-954.

111.Courouse A, Noel L, Barin F. et al. A comparative evaluation of the sensitivity of 5 anti-hepatitis C virus immunoblot assays.//Vox sanguinis. -1998. - V.74. - №4 - P.217-224.

112. Cox A. L, Mosbruger T, Lauer G. M. et al. Comprehensive analyses of CD8+ T cell responses during longitudinal study of acute human hepatitis C.//Hepatology. - 2005. - V.42. - P.104-112.

113. Cramp M, Catucci P, Rossol S. et al. Hepatitis C virus (HCV) specific immune response in anti-HCV positive patients without hepatitis C viraemia.//Gut. - 1999. - V.44. - P.424-429.

114. Creedon G, Mabruk M.J, Grace A. et al. Lack of association between hepatitis C viral RNA in serum and liver and histologic gradings: a study on Irish anti-D-treated patients.// Diagn. Mol. Pathol. - 2002. - V.ll. - №1. -P.27-32.

115.Crespo J, Rivero M, Mayorga M. et al. Involvement of the Fas system in hepatitis C virus recurrence after liver transplantation.//Liver Transpl. -2000. - V.6. - №5. - P.562-569.

116. Crovatto M, Pozzato G, Zorat F. et al. Peripheral blood neutrophils from hepatitis C virus-infected patients are replication sites of the virus.//Haematologica. - 2000. - V.85. - P.356-361.

117. Daniel H.D, Grant P.R, Garson J.A. et al. Quantitation of hepatitis C virus using an in-house real-time reverse transcriptase polymerase chain reaction in plasma samples.//Diagn. Microbiol. Infect. Dis. - 2008. - V.61. - №4. -P.415-420.

118. Deaglio S, Zubiaur M, Gregorini A. et al. Human CD38 and CD 16 are functionally dependent and physically associated in natural killer cells.//Blood. - 2002. - V.99. - P.2490-2498.

119.de Almeida C.M, de Lima T.A, Castro D.B. et al. Immunological/virological peripheral blood biomarkers and distinct patterns of sleeping quality in chronic Hepatitis C patients.//Scand. J. Immunol. -2011.-V.73. -№5.-P.486-495.

120. Decalf J., Fernandes S., Longman R. et al. Plasmacytoid dendritic cells initiate a complex chemokine and cytokine network and are a viable drug target in chronic HCV patients.//! Exp. Med. - 2007. - V.204. - P.2423-2437.

121.de Leuw P., Sarrazin C., Zeuzem S. How to use virological tools for the optimal management of chronic hepatitis C.//Liver Int. - 2011. - V.31. - P.3-12.

122. Delia Bella S., Crosignani A., Riva A. et al. Decrease and dysfunction of dendritic cells correlate with impaired hepatitis C virus specific CD4+ T-cell proliferation in patients with hepatitis C virus infection.//Immunology. -2007.-V. 121,-P.283-292.

123. Desmet V.J., Gerber M., Hoofnagle J.H. et al. Classification of chronic hepatitis: diagnosis, grading and staging.//Hepatology. - 1994. - V.19. -P.1513-1520.

124.Dimitrova M, Imbert I, Kieny MP, Schuster C. Protein-protein interactions between hepatitis C virus nonstructural proteins.//J. Virol. - 2003. - V.77. -P.5401-5414.

125. Doi H., Hiroishi K., Shimazaki T. et al. Magnitude of CD8+ T-cell responses against hepatitis C virus and severity of hepatitis do not necessarily determine outcomes in acute hepatitis C virus infection.//Hepatology Research. - 2009. - V.39. - №3 - P.256-265.

126. Dou X.-G., Talekar G., Chang J. et al. Antigenic heterogeneity of the hepatitis C virus NS5A protein.// J. Clin. Microbiol. - 2002. - V.40. - P.61-67.

127. Drane D., Maraskovsky E., Gibson R. et al. Priming of CD4+ and CD8+ T cell responses using a HCV core ISCOMATRIX vaccine: a phase I study in healthy volunteers.//Human Vaccines. - 2009. - V.5. - №3. - P.151-157.

128. Egger D., Wolk B., Gosert R. et al. Expression of hepatitis C virus proteins induces distinct membrane alteration including a candidate viral replication complex.//! Virol. - 2002. - V.76. - P.5974-6984.

129. El-Awady M.K., Tabll A.A., El Abd Y.S., et al. Conserved peptides within the E2 region of Hepatitis C virus induce humoral and cellular responses in goats.// Virol. J. - 2009. - V.6. - P.66.

130. El-Awady M.K., Tabll A.A., Redwan E.R.M. et al. Flow cytometric detection of hepatitis C virus antigens in infected peripheral blood leukocytes: Binding and entry.//World J. Gastroenterol. - 2005. - V.ll. -№33. - P.5203-5208.

131. El Bassiouny A, El-Bassiouni N, Nosseir M.M. Circulating and hepatic Fas expression in HCV-induced chronic liver disease and hepatocellular carcinoma.//Medscape J. Med. - 2008. - V.10. - №6. - P. 130.

132. Elliot L.N, Lloyd A.R, Ziegler J.B, Ffrench R.A. Protective immunity against hepatitis C virus infection.//Immunol. Cell. Biol. - 2006. - V.84. -P.239-249.

133. Elmowalid G.A, Qiao M, Jeong S.H. et al. Immunization with hepatitis C virus-like particles results in control of hepatitis C virus infection in chimpanzees.//Proc. Natl. Acad. Sci. USA. - 2007. - V.104. - P.8427-8432.

134.Encke J, Bernardin J, Geib J. et al. Genetic vaccination with Flt3-L and GM-CSF as adjuvants: Enhancement of cellular and humoral immune responses that results in protective immunity in a murine model of hepatitis C virus infection.//World J. Gastroenterol. - 2006 a. - V.12. - P.7118-7125.

135. Encke J, Findeklee .J, Geib J. et al. Prophylactic and therapeutic vaccination with dendritic cells against hepatitis C virus infection.//Clin. Exp. Immunol. - 2005. - V.142. - №2. - P.362-369.

136. Encke J, Geissler M, Stremme W, Wands J.R. DNA-based immunization breaks tolerance in a hepatitis C virus transgenic mouse model.//Human vaccines. - 2006 b. - V.2. - P.78-83.

137. Encke J, Radunz W, Eisenbach C. et al. Development of a heterologous, multigenotype vaccine against hepatitis C virus infection.//Europ. J. Clin. Investigat. - 2007. - V.37. - P.396^106.

138.Enomoto N, Sakuma I, Asahina Y. et al. Comparison of full-length sequences of interferon-sensitive and resistant hepatitis C virus I b sensitivity to interferon is conferred by amino acid substitutions in the NS5A region.//J. Clin. Invest. - 1995. - V.96. - P.224-230.

139. Enshell-Seijffers D, Denisov D, Groisman B. et al. The mapping and reconstitution of a conformational discontinuous B-cell epitope of HIV-1.//J. Mol. Biol. - 2003. - V.334. - P.87-101.

140. Enshell-Seijffers D, Smelyanski L, Gershoni J.M. The rational design of a "type 88" genetically stable peptide display vector in the filamentous bacteriophage fd.//Nucleic Acids Res. - 2001. - V.29. - P.50-63.

141. Errington W, Wardell A.D, McDonald S. et al. Subcellular localisation of NS3 in HCV-infected hepatocytes.//J. Med. Virol. - 1999. - V. 59. - P.456-462.

142. Farci P, Shimoda A, Wong D. et al. Prevention of hepatitis C virus infection in chimpanzees by hyperimmune serum against the hypervariable region 1 of

the envelope 2 protein.//Proc. Natl. Acad. Sei. USA. - 1996. - V.93. -P.15394-15399.

143. Ferns R.B, Tuke P, Sweenie C. H. Characterisation of a panel of monoclonal antibodies raised against recombinant HCV core protein.//J. Med. Virology. - 1996. - V.50. - P.221-229.

144. Fields Virology//Edit. by Knipe D.M., Howley P.M. - 2001. - V.l. - P.991-1127.

145.Firbas C, Jilma B, Tauber E. et al. Immunogenicity and safety of a novel therapeutic hepatitis C virus (HCV) peptide vaccine: a randomized, placebo controlled trial for dose optimization in 128 healthy subjects.//Vaccine. -2006. - V.24 - №20. - P.4343^1353.

146. Fletcher N.F, Yang J.P, Farquhar M.J. et al. Hepatitis C virus infection of neuroepithelioma cell lines.//Gastroenterology. - 2010. - V.139. - P. 13651374.

147. Flint M, Tscherne D.M. Cellular receptors and HCV entry .//Methods Mol. Biol. - 2009. - V.510 - P.265-277.

148. Fournillier A, Dupeyrot P, Martin P. et al. Primary and memory T cell responses induced by hepatitis C virus multiepitope long peptides.//Vaccine. - 2006. - V.24. - P.3153-3164.

149. Francavilla V, Accapezzato D, De Salvo M, et al. Subversion of effector CD8+ T cell differentiation in acute hepatitis C virus infection: exploring the immunological mechanisms.//Europ. J. Immunology. - 2004. - V.34. - №2. -P.427-437.

150. Frank A.C., Zhang X, Katsounas A. et al. Interleukin-27, an anti-HIV-1 cytokine, inhibits replication of hepatitis C virus.//J. Interferon Cytokine Res. -2010. - V.30. - №6. -P.427-431.

151. Frese M, Schwarzle V, Barth K. et al. Interferon-gamma inhibits replication of subgenomic and genomic hepatitis C virus RNAs.//Hepatology. - 2002. -V.35. - P.694-703.

152. Frey S.E, Houghton M, Coates S. et al. Safety and immunogenicity of HCV E1E2 vaccine adjuvanted with MF 5 9 administered to healthy adults.//Vaccine. - 2010. - V.28. - №38. -P.6367-6373.

153.Friebe P, Lohmann V, Krieger N, Bartenschlager R. Sequences in the 5' nontranslated region ofhepatitis C virus required for RNA replication.//J. Virol. - 2001. - V.75. - P.12047-12057.

154. Fujita N, Kaito M, Takeo M. et al. Different hepatitis C virus dynamics of free-virions and immune-complexes after initiation of interferon-a in patients with chronic hepatitis C.//J. Hepatology. - 2003. - V.39. - P. 1013-1019.

155.Fujita N, Kaito M., Tanaka H. et al. Hepatitis C virus free-virion and immune-complex dynamics during interferon therapy with and without ribavirin in genotype-lb chronic hepatitis C patients.//! Viral. Hepat. - 2006. - V.13. -P.190-198.

156. Gao D.Y., Jin G.D., Yao B.L. et al. Characterization of the specific CD4+ T cell response against the F protein during chronic hepatitis C virus infection.//PLoS One. - 2010. - V.5. - №12. - el4237.

157. Garcia F.J, Garcia F, Roldan C. et al. Detection of HCV and GBV-CHGV RNA in peripheral blood mononuclear cells of patients with chronic type C hepatitis.//Microbios. -2000. - V.103. -P.7-15.

158. Garmory H.S, Perkins S.D., Phillpotts R.J, Titball R.W. DNA vaccines for biodefence.//Advanced drug delivery reviews. - 2005. - V.57. - P. 13431361.

159. Gamier J, Osguthorpe D.J, Robson B. Analysis of the accuracy and implications of simple methods for predicting the secondary structure of globular proteins.//! Mol. Biol. - 1978. - V.120. -P.97-120.

160. Gastaminza P, Dryden KA, Boyd B et al. Ultrastructural and biophysical characterization of hepatitis C virus particles produced in cell culture.//J. Virol. - 2010.-V.84. -№21.-P.10999-1009.

161. Gaudy C, Thevenas C, Tichet J. et al. Usefulness of the hepatitis C virus core antigen assay for screening of a population undergoing routine medical checkup.//J. Clin. Microbiol. - 2005. - V.43. - №4. - P. 1722-1726.

162. Gehring S, Gregory S. H, Kuzushita N, Wands J. R. Type 1 interferon augments DNA-based vaccination against hepatitis C virus core protein.//J. Medical Virology. - 2005. - V.75. - №2. - P.249-257.

163. Gehring S, Gregory S.H, Wintermeyer P. et al. Generation of immune responses against hepatitis C virus by dendritic cells containing NS5 protein-coated microparticles.//Clin. Vaccine Immunol. - 2009. - V.16. - №2. -P.163-17!

164. Geiss G.K, Carter V.S, He Y. et al. Gene expression profiling of the cellular transcriptional network regulated by alpha/beta interferon and its partial attenuation by the hepatitis C virus nonstructural 5A protein.//J. Virol. -2003. - V.77. -№11,- P.6367-6375.

165. Geysen H.M, Mason T.J, Rodda S.J. Cognitive features of continuous antigenic determinants.//J. Mol. Recognit. - 1988. - V.l. - P.32-35.

166. Geysen H.M, Rodda S.J, Mason T.J. et al. Strategies for epitope analysis using peptide synthesis.//J. Immunol. Methods. - 1987. - V.l02. - P.259-274.

167. Ghabril M, Dickson R.C, Krishna M. et al. Persistence of hepatitis C RNA in liver allografts is associated with histologic progression independent of serologic viral clearance.//.!. Transplant. - 2009. - V.2009. - P.297528.

168. Ghany M.G, Strader D.B, Thomas D.L, Seeff L.B. Diagnosis, management, and treatment of hepatitis C: an update. American Association for the Study of Liver Diseases.//Hepatology. - 2009. - V.49. - №4. - P. 1335-1374.

169. Giannini C, Brechot C. Hepatitis C virus biology.//Cell Death and Differentiation. - 2003. - V.10. - P.27-38.

170. Golden-Mason L, Klarquist J, Wahed A.S, Rosen H.R. Cutting edge: programmed death-1 expression is increased on immunocytes in chronic hepatitis C virus and predicts failure of response to antiviral therapy: race-dependent differences.//!. Immunology. - 2008. - V.180. - №6. - P.3637-3641.

171. Gong G.-Z, Lai L.-Y, Jiang Y.-F. et al. HCV replication in PBMC and its influence on interferon therapy.//World J. Gastroenterol. - 2003. - V.9. - №2.

- P.291-294.

172. Goeser T, Muller H.M, Pfaff E, Theilmann L. Characterization of antigenic determinants of the hepatitis C virus.//Virology. - 1994. - V. 205. - P. 462469.

173. Gonzalez V, Padilla E, Diago M. et al. Clinical usefulness of total hepatitis C virus core antigen quantification to monitor the response to treatment with peginterferon alpha-2a plus ribavirin.//J. Viral. Hepat. - 2005. - V.12. -P.481-487.

174. Gonzalez-Peralta R. P, Fang J. W, Davis G. L. et al. Optimization for the detection of hepatitis C virus antigens in the liver.//J. Hepatol. - 1994. -V.20. - P.143-147.

175. Gonzalez-Peralta R.P, Fang J, Gary L. et al. Significance of hepatic expression of hepatitis C viral antigens in chronic hepatitis C.//Dig. Dis. Sci.

- 1995. - V.40. - P.2595-2601.

176. Gouda I, Nada O, Ezzat S. et al. Immunohistochemical detection of hepatitis C virus (genotype 4) in B-cell NHL in an Egyptian population: correlation with serum HCV-RNA.//Appl. Immunohistochem. Mol. Morphol. -2010.-V.18. -№l.-P.29-34.

177. Gouttenoire J, Penin F, Moradpour D. Hepatitis C virus nonstructural protein 4B: a journey into unexplored territory.//Rev Med Virol. - 2010. -V.20.-P.l 17-129.

178. Gowans E.J. Distribution of markers of hepatitis C virus infection throughout the body.//Semin. Liver Dis. - 2000. - V.20. - P.85-102.

179. Guglietta S, Garbuglia A.R, Salichos L, et al. Impact of viral selected mutations on T cell mediated immunity in chronically evolving and self limiting acute HCV infection.//Virology. - 2009. - V.386. - P.398^106.

180. Guobuzaite A, Chokshi S, Balciüniene L. et al. Viral clearance or persistence after acute hepatitis C infection: interim results from a prospective study.//Medicina. - 2008. - V.44. - №7. - P.510-520.

181. Habersetzer F, Zarski J.-P, Leroy V. et al. A novel vectorized HCV therapeutic vaccine (TG4040): results of a phase I study in naive patients chronically infected by HCV.//Proceedings of the 44th Annual Meeting of the European Association for the Study of the Liver (EASL '09). -Copenhagen, Denmark. - 2009 a.

182. Habersetzer F, Baumert T.F, Stoll-Keller F. GI-5005, a yeast vector vaccine expressing an NS3-core fusion protein for chronic HCV infection.//Curr. Opin. Mol. Ther. - 2009 b. - V. 11. - №4. - P.456-462.

183. Hahn C, Cho Y, Kang B. et al. The HCV Core protein acts as a positive regulator of Fas-mediated apoptosis in a human limphoblastoid T-cells line.//Virology. -2000. - V.276 - P. 127-137.

184. Haller A.A., Lauer G.M, King T.H. et al. Whole recombinant yeast-based immunotherapy induces potent T cell responses targeting HCV NS3 and Core proteins. - 2007. - №8. - V.25. - P. 1452-1463.

185. Harris R.A, Sugimoto K, Kaplan D.E. et al. Human leukocyte antigen class II associations with hepatitis C virus clearance and virus-specific CD4 T cell response among Caucasians and African Americans.//Hepatology. - 2008. -V.48. - №1. - P.70-79.

186. Heller T, Rehermann B, Acute hepatitis C: a multifaceted disease.//Semin. Liver. Dis. - 2005. - V.25. - P.7-17.

187. Heller T, Saito S, Auerbach J. et al. An in vitro model of hepatitis C virion production.//Proc. Natl. Acad. Sei. USA. - 2005. - V.102. - №7. - P.2579-2583.

188. Hiramatsu N, Hayashi N, Hurana Y. et al. Immunohistochemical detection of hepatitis C virus-infected hepatocytes in chronic liver disease with monoclonal antibodies to core, envelope and NS3 regions of the hepatitis C virus genome.//Hepatology. - 1992. - V.16. - P.306-311.

189. Hiroishi K, Eguchi J, Ishii S. et al. Immune response of cytotoxic T lymphocytes and possibility of vaccine development for hepatitis C virus infection.//J. Biomed. Biotechnol. -2010. - V.2010. -P.263810.

190. Hoofnagle J.H. Course and outcome of hepatitis C.//Hepatology. - 2002. -V.36. - P.S21-S29.

191.Hopp T.P, Woods K.R. Prediction of protein antigenic determinants from amino acid sequences.//Proc. Natl. Acad. Sci. USA. - 1981. - V.78. -P.3824-3828.

192. Horner S.M, Gale M. Jr.. Intracellular innate immune cascades and interferon defenses that control hepatitis C virus.//J. Interferon Cytokine Res. - 2009. - V.29. - №9. - P.489-498.

193.Hosoi K, Hagihara M, Kagawa T. et al. The serum soluble HLA-DR antigens as a predictive marker the response to interferon-alpha treatment in patients with chronic hepatitis C.//Tokai J. Exp. Clin. Med. - 2000. - V.25. -P.l 17-124.

194. Houghton M, Abrignani S. Prospects for a vaccine against the hepatitis C virus.//Nature. - 2005. - V.436. - P.961-966.

195. Hughes M, Gretton S, Shelton H. et al. A conserved proline between domains II and III of hepatitis C virus NS5A influences both RNA replication and virus assembly.//J. Virol. - 2009. - V.83. - №20. - P. 1078810796.

196. http://hcv.lanl.gov/content/immuno/maps/maps.html

197. http ://www.clinicaltrials. gov/ct2/sho w/

198. http://www.clinicaltrials.gov/ct2/results?term=NCT00563173

199. http://www.ncbi.nlm.nih.gov/

200. Iio S, Hayashi N, Mita E. et al. Serum levels of soluble Fas antigen in chronic hepatitis C patients.//J. Hepatology. - 1998. - V.29. - P.517-523.

201. Irshad M, Dhar I. Hepatitis C virus core protein: an update on its molecular biology, cellular functions and clinical implications.//Med. Princ. Pract. -2006.-V. 15. -№6.-P.405-416.

202. Isaguliants M.G, Petrakova N.V, Mokhonov V.V. DNA immunization efficiently targets conserved functional domains of protease and ATPase/helicase of nonstructural 3 protein (NS3) of human hepatitis C virus.//Immunol. Lett. -2003. -V.88. -P.l-13.

203. Ishida C, Matsumoto K, Fukada K. et.al. Detection of antibodies to hepatitis C virus (HCV) structural proteins in anti-HCV-positive sera by enzyme-linked immunosorbent assay using synthetic peptides as antigens.//J. Clinical Microbiology. - 1993. - V.31. - P.936-940.

204. Jain N, Nguyen H, Chambers C, Kang J. Dual function of CTLA-4 in regulatory T cells and conventional T cells to prevent multiorgan autoimmunity.//Proc. Natl. Acad. Sci. USA. - 2010. - V.107. - P.1524-1528.

205. Jennings T.A, Chen Y, Sikora D. et al. RNA unwinding activity of the hepatitis C virus NS3 helicase is modulated by the ns5b polymerase.//Biochemistry. - 2008. - V.47. -P.l 126-1135.

206. Jiao X, Wang R.Y, Feng Z. et al. Modulation of cellular immune response against hepatitis C virus nonstructural protein 3 by cationic liposome encapsulated DNA immunization.//Hepatology. - 2003. - V.37. - P.452-460.

207. Jiao J, Wang J, Sallberg M. Effects of HCV proteins in current HCV transgenic models.//Hepatol. Res. - 2010. - V.40. - №2. - P.l 15-124.

208. Jirasko V, Montserret R, Lee J. et al. Structural and functional studies of nonstructural protein 2 of the hepatitis C virus reveal its key role as organizer of virion assembly. //PLoS Pathog. - 2010. - V.6. - №12. - el001233.

209. Jolivet-Reynaud C, Adida A, Michel S. et al. Characterization of mimotopes mimicking an immunodominant conformational epitope on the hepatitis C virus NS3 helicase.//J. Med. Virol. - 2004. - V.72. - P.385-395.

210. Jolivet-Reynaud C, Dalbon P, Viola F. et al. HCV Core Immunodominant region analysis using mouse monoclonal antibodies and human sera: characterization of major epitopes useful for antigen detection.//J. Med. Virol. - 1998. - V.56. - P.300-309.

211. Jones C, Murray C, Eastman D. et al. Hepatitis C virus p7 and NS2 proteins are essential for production of infectious virus.//J. Virol. - 2007. - V.81. -P.8374-8383.

212. Kanda T, Steele R, Ray R, Ray R. Inhibition of intrahepatic IFN-(gamma) production by hepatitis C virus non-structural protein 5 a in transgenic mice.//J. Virol. - 2009. - V.83. - P.8463-8469.

213. Kaplan D.E, Sugimoto K, Newton K. et al. Discordant role of CD4 T cell response relative to neutralizing antibody and CD8 T-cell responses in acute hepatitis C.//Gastroenterology. - 2007. - V.132. - P.654-666.

214.Kato T, Matsumura T, Heller T. et al. Production of infectious hepatitis C virus of various genotypes in cell cultures.//J. Virol. - 2007. - V.81. -P.4405-4411.

215. Khoo K.M, Han M.-K, Park J.B. et al. Localization of the cyclic ADP-ribose-dependent calcium signaling pathway in hepatocyte nucleus.//J. Biol. Chem. - 2000. - V.275. - №32. - P.24807-24817.

216. Khudyakov Y.E, Khudyakova N.S, Jue D.L. et al. Linear B-cell epitopes of the NS3-NS4-NS5 proteins of the hepatitis C virus as modeled with synthetic peptides.//Virology. - 1995. - V.206 - P.666-672.

217. Kim J.L, Morgenstern K.A, Griffith J.P. et al. Hepatitis C virus RNA heliease domain with a bound oligonucleotide: the crystal structure provides insights into the mode of unwinding.//Structure. - 1998. - V.6. - P.89-100.

218. Klade C, Wedemeyer H, Berg T. et al. Therapeutic vaccination of chronic hepatitis C nonresponder patients with the peptide vaccine IC41.//Gastroenterology. -2008. - V. 134. - №5. - P.1385-1395.

219.Klimashevskaya S, Obriadina A, Ulanova T. et al. Distinguishing acute from chronic and resolved hepatitis C virus (HCV) infections by measurement of anti-HCV immunoglobulin G avidity index.//J. Clin. Microbiol. - 2007. - V.45. - №10. - P.3400-3403.

220. Knodell R.G, Ishak K.G, Black W.C. Formulation and application of a numerical scoring system of assessing hystological activity in asymptomatic chronic active hepatitis.//Hepatology. - 1981. - №1. - P.431-435.

221.Kohler G, Milstein C. Continuous cultures of fused cells secreting antibody of predefined specificity.//Nature. - 1975. - V.256. - P.495-497.

222. Koike K. Steatosis, liver injury, and hepatocarcinogenesis in hepatitis C viral infection.//! Gastroenterol. - 2009. - V.44. - Suppl. 19. - P.82-88.

223.Kolykhalov A, Mihalik K, Feinstone S, Rice C. Hepatitis C virus-encoded enzymatic activities and conserved RNA elements in the 3' nontranslated region are essential for virus replication in vivo.//J. Virol. - 2000. - V.74. -P.2046-2051.

224.Konan K, Giddings T, Ikeda M. et al. Nonstructural protein precursor NS4A/B from hepatitis C virus alters function and ultrastructure of host secretory apparatus.//.!. Virol. - 2003. - V.77. - №14. - P.7843-7855.

225. Kountouras J, Zavos C, Chatzopoulos D. Apoptosis in hepatitis C.//J. Viral. Hepat. - 2003. - V.10. - P.335-342.

226. Koutsoudakis G, Kaul A, Steinmann E. et al. Characterization of the early steps of hepatitis C virus infection by using luciferase reporter viruses.//! Virol. - 2006. - V.80. - P.5308-5320.

227. Kriegs M, Burckstummer T, Himmelsbach K. et al. The hepatitis C virus non-structural NS5A protein impairs both the innate and adaptive hepatic immune response in vivo .//J. Biol. Chem. - 2009. - V.284. - P.28343-28351.

228.Krishnadas D, Ahn J, Han J. et al. Immunomodulation by hepatitis C virus-derived proteins: targeting human dendritic cells by multiple mechanisms.//Int. Immunol. - 2010. - V.22. - №6. - P.491-502.

229. Lagging L, Garcia C, Westin J. et al. Comparison of serum hepatitis C virus RNA and core antigen concentrations and determination of Whether

levels are associated with liver histology or affected by specimen storage time.//J. Clin. Microbiol. - 2002. - V.40. -№11.- P.4224-4229.

230. Lande R, Urbani F, Carlo B. et al. CD38 ligation plays a direct role in the induction of IL-ip, IL-6 and IL-10 secretion in resting human monocytes.//! Cell. Immunol. - 2002. - V.220. - P. 30-38.

231. Lanford R.E, Chaves D, Chisari F.V, Sureau C. Lack of detection of negative-strand hepatitis c virus RNA in peripheral blood mononuclear cells and other extrahepatic tissues by the highly strand-specific rTth reverse transcriptase PCR.//J. Virol. - 1995. - V.69. - №12. - P.8079-8083.

232. Lang K, Yan J, Draghia-Akli R.et al. Strong HCV NS3- and NS4A-specific cellular immune responses induced in mice and Rhesus macaques by a novel HCV genotype la/lb consensus DNA vaccine.//Vaccine. - 2008. - V.26. -P.6225-6231.

233. Laperche S, Marrec N.L, Simon N. et al. A new HCV core antigen assay based on disassociation of immune complexes: an alternative to molecular biology in the diagnosis of early HCV infection.//Transfusion. - 2003. -V.43. -P.958-962.

234. Lau G, Fang J, Wu P. et al. Detection of hepatitis C virus genome in formalin-fixed parafm-embedded liver tissue by in situ reverse transcription polymerase chane reaction.//! Med. Virol. - 1994. - V.44. - №5. - P.406-409.

235.Lavillette D, Morice Y, Germanidis G. et al. Human serum facilitates hepatitis C virus infection, and neutralizing responses inversely correlate with viral replication kinetics at the acute phase of hepatitis C virus infection.//! Virol. -2005. -V.79. -P.6023-6034.

236. Lazdina U, Hultgren C, Frelin L. et al. Humoral and CD4(+) T helper (Th) cell responses to the hepatitis C virus non-structural 3 (NS3) protein: NS3 primes Thl-like responses more effectively as a DNA-based immunogen than as a recombinant protein. //! Gen. Virol. - 2001. - V.82. - Pt.6. -P.1299-1308.

237. Lee K, Choi J, Ou J, Lai M. The C-terminal transmembrane domain of hepatitis C virus (HCV) RNA polymerase is essential for HCV replication in vivo .//! Virol. -2004. - V.78. - №7. - P.3797-3802.

238. Lee A, Manning W, Arian C. et al. Priming of hepatitis C virus-specific cytotoxic T lymphocytes in mice following portal vein injection of a liver-specific plasmid DNA.//Hepatology. - 2000. - V.31. - P.1327-1333.

239. Leroux-Roels G, Batens A, Desombere I. et al. Immunogenicity and

tolerability of intradermal administration of an HCV El-based vaccine

319

candidate in healthy volunteers and patients with resolved or ongoing chronic HCV infection.//Human Vaccines. -2005. - V.l. - №2. - P.61-65.

240. Liefhebber J, Brandt B, Broer R. et al. Hepatitis C virus ns4b carboxy terminal domain is a membrane binding domain.//J. Virol. - 2009. - V.6. -P.62-73.

241.Lindenbach B, Evans M. J, Syder A. J. et al. Complete replication of hepatitis C virus in cell culture.//Science. - 2005. - V.309. - P.623-626.

242. Lin L, Libbrecht L, Verbeeck J. et al. Quantitation of replication of the HCV genome in human livers with end-stage cirrhosis by strand-specific real-time RT-PCR assays: methods and clinical relevance.//J. Med. Virol. -2009.-V.81. -№9.-P.1569-1575.

243. Liu Y.J. Dendritic cell subsets and lineages, and their functions in innate and adaptive immunity.//Cell. - 2001. - V.106. - P.259-262.

244. Liu Z, Yang F, Robotham J, Tang H. Critical role of cyclophilin A and its prolyl-peptidyl isomerase activity in the structure and function of the hepatitis C virus replication complex.//J. Virol. - 2009. - V.83. - №13. -P.6554-6565.

245. Logvinoff C, Major M, Oldach D. et al. Neutralizing antibody response during acute and chronic hepatitis C virus infection.//Proc. Natl. Acad. Sci. USA. -2004. -V.101.-P.10149-10154.

246. López-Alcorocho J, Rodríguez-Iñigo E, Castillo I. et al. The role of genomic and antigenomic HCV-RNA strands as predictive factors of response to pegylated interferon plus ribavirin therapy.//Aliment Pharmacol. Ther. -2007. - V.25. - №10. - P.l 193-1201.

247. Lorenzo J, Castro A, Aguilera A. et al. Total HCV core antigen assay A new marker of HCV viremia and its application during treatment of chronic hepatitis C.//J. Virol. Methods. - 2004. - V.120. - P.173-177.

248. Lundin M, Lindstrom H, Gronwall C, Persson M. Dual topology of the processed hepatitis C virus protein ns4b is influenced by the NS5A protein.//J. Gen. Virol. - 2006. - V.87. - P. 3263-3272.

249. MacDonald J, Duffy M, Brady M. et al. CD4 T helper type 1 and regulatory T cells induced against the same epitopes on the core protein in hepatitis C virus-infected persons.//J. Infect. Diseases. - 2002. - V.l85. - №6. - P.720-727.

250. Machida K, Tsukiyama-Kohara K, Seike E. et al. Inhibition of cytochrome -release in Fas-mediated signaling pathway in transgenic mice induced to express hepatitis C viral proteins.//J. Biol. Chemistry. - 2001. - V.276. -P.12140-12146.

251.Maekawa S, Enomoto N. Viral factors influencing the response to the combination therapy of peginterferon plus ribavirin in chronic hepatitis C.//J. Gastroenterol. - 2009. - V.44. - №10. - P.l009-1015.

252.Mangia A, Thompson A, Santoro R. et al. An IL28B polymorphism determines treatment response of hepatitis C virus genotype 2 or 3 patients who do not achieve a rapid virologic response.//Gastroenterology. - 2010. -V.139. - P.821-827.

253.Maillard P, Krawczynski K, Nitkiewicz J. et al. Nonenveloped nucleocapsids of hepatitis C virus in the serum of infected patients.//J. Virol.

- 2001. - V.75. - P.8240-8250.

254. Major M, Dahari H, Mihalik K. et al. Hepatitis C virus kinetics and host responses associated with disease and outcome of infection in chimpanzees.//Hepatology. - 2004. - V.39. - P.1709-1720.

255. Majumder M, Ghosh A, Steele R. et al. Hepatitis C virus NS5A protein impairs TNF-mediated hepatic apoptosis, but not by an anti-FAS antibody, in transgenic mice.//Virology. - 2002. - V.294. - №1. - P.94-105.

256. Malavasi F, Deaglio S, Ferrero E. et al. CD38 and CD157 as receptors of the immune system: a bridge between innate and adaptive immunity.//Mol. Med. - 2006. - V.12. - №11-12. - P.334-341.

257. Martin J, Navas S, Quiroga J.A. et al. Quantification of hepatitis C virus in liver and peripheral blood mononuclear cells from patients with chronic hepatitis C virus infection.//J. Med. Virol. - 1998. - V.54. - №4. - P.265-270.

258. Martínez-Donato G, Capdesuñer Y, Acosta-Rivero N. et al. Multimeric HCV E2 protein obtained from Pichia pastoris cells induces a strong immune response in mice.//Mol. Biotechnol. -2007. - V.35. - №3. - P.225-235.

259. Martínez-Donato G, Musacchio A, Alvarez-Lajonchere L. et al. Ratio of HCV structural antigens in protein-based vaccine formulations is critical for functional immune response induction.//Biotechnol .Appl. Biochem. - 2010.

- V.56. -№3. -P.111-118.

260. Marusawa H, Hijikata M, Chiba T, Shimotohno K. Hepatitis C virus core protein inhibits Fas-mediated and TNF-alpha-mediated apoptosis via NF-Kappa-B activation.//! Virol. - 1999. - V.73. - P.4713-4720.

261.Masaki T, Suzuki R, Murakami K. et al. Interaction of hepatitis C virus nonstructural protein 5 a with core protein is critical for the production of infectious virus particles.//! Virology. - 2008. - V.82. - P.7964-7976.

262. Matsui M, Moriya O, Belladonna M.L. et al. Adjuvant activities of novel

cytokines, interleukin-23 (IL-23) and IL-27, for induction of hepatitis C

321

virus-specific cytotoxic T Lymphocytes in HLA-A*0201 transgenic mice.//J. Virol. - 2004. -V.78. - P. 9093-9104.

263. Mazur W, Mazurek U, Jurzak M. et al. Positive and negative strands of HCV-RNA in sera and peripheral blood mononuclear cells of chronically hemodialyzed patients.//Med. Sei. Mon. - 2001. - V.7. - №1. - P. 108-115.

264. Macdonald A, Harris M. Hepatitis C virus NS5A: tales of a promiscuous protein.//J. Gen. Virology. -2004. - V.85. -P.2485-2502.

265. McCormick C, Maucourant S, Griffm S. et al. Tagging of NS5A expressed from functional hepatitis C virus replicon.//J. Gen. Virol. - 2006. - V.87. -P.635-640.

266. McHutchison J, Läwitz E, Boyer T. et al. GI-5005 therapeutic vaccine plus PEG-IFN/Ribavirin improves end of treatment response at 48 weeks versus PEG-IFN/Ribavirin in naive genotype 1 chronic HCV patients.//Proceedings of the 60th Annual Meeting of the American Association for the Study of Liver Disease, Boston, Mass, USA, October-November 2009.

267.McKinney M, Parkinson A. A simple, non-chromatographic procedure to purify immunoglobulins from serum and ascites fluid.//J. Immunol. Methods. - 1987. - V.96. - №2. - P.271-278.

268. McLauchlan J. Lipid droplets and hepatitis C virus infection.//Biochim. Biophys. Acta. -2009. -V.1791. -P.552-559.

269. Meier V, Mihm S, Braun P. et al. HCV-RNA positivity in peripheral blood mononuclear cells of patients with chronic HCV infection: does it really mean viral replication?//World J. Gastroenterol. - 2001. - V.7. - №2. -P.228-234.

270. Menez R, Bossus M, Muller B.H. et al. Crystal structure of a hydrophobic immunodominant antigenic site on hepatitis C virus core protein complexed to monoclonal antibody 19D9D6.//J. Immunol. - 2003. - V.170. - P.1917-1924.

271. Meng S, Li J. A novel duplex real-time reverse transcriptase-polymerase chain reaction assay for the detection of hepatitis C viral RNA with armored RNA as internal control.//Virol. J. - 2010. - V.7. - P.l 17.

272. Mihailova M, Boos M, Petrovskis I. et al. Recombinant virus-like particles as a carrier of B- and T-cell epitopes of hepatitis C virus (HCV).//Vaccine. -2006. - V.24. - №20. - P.4369-4377.

273.Migliaresi S, Bresciani A, Ambrosone L. et al. Increased serum concentrations of solubleHLA-class I antigens in hepatitis C virus related mixed cryoglobulinaemia.//Ann. Rheum. Dis. - 2000. - V.59. - P.20-25.

274. Minenkova O., Gargano N, Tomassi A.D. et.al. ADAM-HCY, a new-concept diagnostic assay for antibodies to hepatitis C virus in serum.//Eur. J. Biochem. - 2001. - V.268. - P.4758-4768.

275.Missale G, Cariani E, Ferrari C. Role of viral and host factors in HCV persistence: which lesson for therapeutic and preventive strategies?//Digestive and Liver Disease. - 2004. - V.36. - №11. - P.703-711.

276. Molina S, Castet V, Fournier-Wirth C. et al. The low-density lipoprotein receptor plays a role in the infection of primary human hepatocytes by hepatitis C virus.//J. Hepatol. - 2007. - V.46. - P.411^19.

277. Mondelli M, Cerino A, Boender P. et al. Significance of the immune response to a major, conformational B-cell epitope on the hepatitis C virus NS3 region defined by a human monoclonal antibody.//J. Virol. - 1994. -V.68 - P.4829-4836.

278. Moradpour D, Gosert R, Egger D. et al. Membrane association of hepatitis C virus nonstructural proteins and identification of the membrane alteration that harbors the viral replication complex./ Antiviral research. - 2003. - V. 60.-P. 103-109.

279. Morishima C, Paschal D.M, Wang C.C. et al. Decreased NK cell frequency in chronic hepatitis C does not affect ex vivo cytolytic killing.//Hepatology. -2006. - V.43. - P.573-580.

280. Muerhoff A, Jiang L, Shah D. et al. Detection of HCV core antigen in human serum and plasma with an automated chemiluminescent immunoassay.//Transfusion. - 2002. - V.42. - P.349-356.

281.Nakamoto N, Cho H, Shaked A. et al. Synergistic reversal of intrahepatic HCV-specific CD8 T cell exhaustion by combined PD-l/CTLA-4 blockade.//PLoS Pathog. - 2009. - V.5. - №2. - el000313.

282. Nakamuta M, Shimohashi N, Tada S. et al. Serum levels of HCV RNA and core protein before and after incubation at 37°C for 24 h.//Hepatol. Res. -2001. - V.19. -P.254-262.

283.Nakane P, Kawaoi A. Peroxidase-labeled antibody. A new method of conjugation.//J. Histochem. Cytochem. - 1974. -V.22. - P. 1084-1091.

284.Navas M, Fuchs A, Schvoerer E. et al. Dendritic cell susceptibility to hepatitis C virus genotype 1 infection.//J. Med. Virol. - 2002. - V.67. -P.152-161.

285.Nayak N, Sathar S. Immunohistochemical detection of hepatitis C virus antigen in paraffin embedded liver biopsies from patients with chronic liver disease.//Acta Histochem. - 1999. - V. 101. - №4. - P.409 - 419.

286. Negro F, Krawczynski K, Quadri R. et al. Detection of genomic- and minus-strand of hepatitis C virus RNA in the liver of chronic hepatitis C patients by strand-specific semiquantitative reverse-transcriptase polymerase chain reaction.//Hepatology. - 1999. - V.29. - P.536-542.

287. Neumann A, Lam N, Dahari H. et al. Hepatitis C viral dynamics in vivo and the antiviral efficacy of interferon-alpha therapy.//Science. - 1998. - V.282. -P.103-107.

288. Neumann-Haefelin C, Spangenberg H., Blum H, Thimme R. Host and viral factors contributing to CD8+ T cell failure in hepatitis C virus infection.//World J. Gastroenterol. -2007. -V. 13. - №36. -P.4839-4847.

289. Neumann-Haefelin C, Thimme R. Impact of the genetic restriction of virus-specific T-cell responses in hepatitis C virus infection.//Genes Immun. -2007. - V.8. - №3. -P.181-192.

290. Nevens F, Roskams T, Van Vlierberghe H. et al. A pilot study of therapeutic vaccination with envelope protein El in 35 patients with chronic hepatitis C.//Hepatology. - 2003. - V.38. - №5. - P.1289-1296.

291. Neville J, Prescott L, Bhattacherjee V. et al. Antigenic variation of core, NS3, and NS5 proteins among genotypes of hepatitis C virus.//J. Clin. Microbiol. - 1997. - V.35. - P.3062 - 3070.

292. Nielsen S, Bassendine M, Martin C. et al. Characterization of hepatitis C RNA-containing particles from human liver by density and size.//J. Gen. Virol. - 2008. - V.89. - Pt 10. - P.2507-2517.

293. Nikolaeva L.I, Blokhina N.P, Tsurikova N.N. et al. Virus-specific antibody titers in different phases of hepatitis C virus infection.//! Viral Hepatitis. -2002. - V.9. - P.429-437.

294.Nikonov A, Juronen E, Ustav M. Functional characterization of fingers subdomain-specific monoclonal antibodies inhibiting the hepatitis C virus RNA-dependent RNA polymerase.//! Biol. Chem. - 2008 - V.283. -P.24089-24102.

295.Nolandt O, Kern V, Muller H. et al. Analysis of hepatitis C virus core protein interaction domains.//! Gen. Virology - 1997. - V.78. - P. 13311340.

296. Nuovo G, Holly A, Wakely P et al. Correlation of histology, viral load, and in situ viral detection in hepatic biopsies from patients with liver transplants secondary to hepatitis C infection.//Human Pathol. - 2002. - V.33. - 277284.

297. Nuriya H, Inoue K, Tanaka T. et al. Detection of hepatitis B and C viruses in almost all hepatocytes by modified PCR-based in situ hybridization.//J. Clin. Microbiol. -2010. -V.48. -№11. -P.3843-3851.

298.0'Hagan D, Singh M, Dong C. et al. Cationic microparticles are a potent delivery system for a HCV DNA vaccine.//Vaccine. - 2004. - V.23. - P.672-680.

299. Ohkawa K, Hiramatsu N, Mochizuki K. et al. Significance of serum soluble Fas antigen level in chronic hepatitis C patients treated with interferon: Relationship to the therapeutic response.//! Gastroenterology and Hepatology. -2001. -V.16. -P.1009-1014.

300. Ohno O, Mizokami M, Wu R.R. et al. New hepatitis C virus (HCV) genotyping system that allows for identification of HCV genotypes la,lb,2a,2b,3a,3b,5,5a and 6a.//J. Clinical. Microbiol. - 1997. - V.35. - №1.

- P.201-207.

301. Okamoto H, Okada S, Sugiyama Y. Detection of hepatitis C virus RNA by a two-stage polymerase chain reaction with two pairs of praimers deduced from the 5'noncoding region.//Jap. J. Exp. Med. - 1990. - V.60. - №3. -P.215-222.

302. Olesen O.F, Lonnroth A, Mulligan B. Human vaccine research in the European Union.//Vaccine. - 2009. - V.27. - №5. - P.640-645.

303. Orland J.R, Wright T.L, Cooper S. Acute hepatitis C.//Hepatology. - 2001.

- V.33.-P.321-327.

304. Owsianka A, Timms J, Tarr A. et al. Identification of conserved residues in the E2 envelope glycoprotein of the hepatitis C virus that are critical for CD81 binding.//! Virol. - 2006. - V.80. - №17. - P.8695-8704.

305. Ozaslan E, Kilicarslan A, Simsek H. et al. Elevated serum soluble Fas levels in the various stages of hepatitis C virus-induced liver disease.//! Int. Med. Res. - 2003. - V.31. - №5. - P.384-391.

306. Pal S, Shuhart M.C, Thomassen L. et al. Intrahepatic hepatitis C virus replication correlates with chronic hepatitis C disease severity in vivo .//J. Virol. - 2006. - V.80. - №5. - P.2280-2290.

307. Paredes A, Blight K. A genetic interaction between hepatitis C virus NS4B and NS3 is important for RNA replication.//!. Virol.- 2008,- V.82. -P.10671-10683.

308.Pavio N, Lai M.M. The hepatitis C virus persistence: how to evade the immune system?//! Biosci. - 2003. - V.28. - P.287-304.

309. Pawlotsky J.M. Use and interpretation of hepatitis C virus diagnostic assays.//Clin. Liver Dis. - 2003. - V.7. - P.27-37.

310. Pawlotsky J.M, Germanidis G. The non-structural 5A protein of hepatitis C virus.//J. Viral Hepatitis. - 1999. - V.6. - P.343-356.

311.Penin F, Dubuisson J, Rey F.A. et. al. Structural biology of hepatitis C virus.//Hepatology. - 2004. - V. 39. - №1. - P. 5-19.

312. Pereboeva L.A, Pereboev A.V, Morris G.E. Identification of antigenic sites on three hepatitis C virus proteins using phage-displayed peptide libraries.//.!. Med. Virol. - 1998. - V.56. - P. 105-111.

313. Pereboeva L.A, Pereboev A.V, Wang L.F, Morris G.E. Hepatitis C epitopes from phage-displayed cDNA libraries and improved diagnosis with a chimeric antigen.//J. Med. Virol. -2000. - V.60. - P. 144-151.

314. Perry S, Mostafa S, Wenstone R. et al. HLA-DR regulation and the influence of GM-CSF on transcription, surface expression and shedding.//Int. J. Med. Sci. -2004. - V.l. - №3. -P.126-136.

315. Petit M, Jolivet-Reynaud C, Peronnet E. et al. Mapping of a conformational epitope shared between El and E2 on the serum-derived human hepatitis C virus envelope.//.!. Biol. Chem. -2003. - V.278. - №45. -P.44385-44392.

316. Pham T, MacParland S, Mulrooney P.M. et al. Hepatitis C virus persistence after spontaneous or treatment-induced resolution of hepatitis C.//J. Virol. -2004. - V.78. -№11.- P.5867-5874.

317. Pindel A, Sadler A. The Role of Protein Kinase R in the Interferon Response.//J. Interferon Cytokine Res. -2010. -V.31. -№1. -P.59-70.

318. Polyak S, Khabar K, Paschal D. et al. Hepatitis C virus nonstructural 5A protein induces interleukin-8, leading to partial inhibition of the interferon-induced antiviral response.//! Virol. - 2001 a. - V.75. - №13. - P.6095-6106.

319. Polyak S, Khabar K, Rezeiq M, Gretch D. Elevated levels of interleukin-8 in serum are associated with hepatitis C virus infection and resistance to interferon therapy.//! Virol. - 2001 b. - V.75. - №13. - P.6209-6211.

320. Prezzi C, Nuzzo M, Meola A. et al. Selection of antigenic and immunogenic mimics of hepatitis C virus using sera from patients.//! Immunol. - 1996. -V.156. -P.4504-4513.

321.Pugnale P, Latorre P, Rossi C. et al. Real-time multiplex PCR assay to quantify hepatitis C virus RNA in peripheral blood mononuclear cells.//J. of Viral. Methods. -2006. - V.l33. - P. 195-204.

322. Puppo F, Contini P, Ghio M. et al. Soluble HLA class I molecules/CD8 ligation trigger apoptosis of CD8+ cells by Fas/Fas- ligand interaction.//The Sci. World J. - 2002. - V.2. - P.421-423

323. Qiu Q, Wang R, Jiao X. et al. Induction of multispecific Th-1 type immune response against HCV in mice by protein immunization using CpG and Montanide ISA 720 as adjuvants.//Vaccine. - 2008. - V.26. - P.5527-5534.

324. Quinkert D, Bartenschlager R., Lohmann V. Quantitative analysis of the hepatitis C virus replication complex.//J Virol. - 2005. - V.79. - №21. -P.13594-13605.

325. Quintavalle M, Sambucini S, Summa V. et al. Hepatitis C virus NS5A is a direct substrate of casein kinase I-alpha, a cellular kinase identified by inhibitor affinity chromatography using specific NS5A hyperphosphorylation inhibitors.//! Biol. Chem. - 2007. - V.282. - P.5536-5544.

326. Racanelli V, Manigold T. Presentation of HCV antigens to naive CD8+T cells: why the where, when, what and how are important for virus control and infection outcome.//Clin. Immunol. - 2007. - V.124. №1. - P.5-12.

327. Raghuraman S, Abraham P, Daniel H.D. et al. Characterization of soluble FAS, FAS ligand and tumour necrosis factor-alpha in patients with chronic HCV infection.//! Clin. Virol. - 2005. - V.34. - P.63-70.

328. Rahman F, Heller T, Sobao Y. et al. Effects of antiviral therapy on the cellular immune response in acute hepatitis C.//Hepatology. - 2004. - V.40. - P.87-97.

329. Realdon S, Gerotto M, Dal Pero F. et al. Proapoptotic effect of hepatitis C virus core protein in transiently transfected cells is enhanced by nuclear localization and is dependent on PKR activation.//! Hepatol. - 2004. - V.40. -P.77-85.

330. Rebmann V, Ronin-Walknowska E, Sipak-Szmigiel O. et al. Soluble HLA-DR and soluble CD95 ligand levels in pregnant women with antiphospholipid syndromes.//Tissue Antigens. -2003. - V.62. - P.536-541.

331.Reigadas S, Pacheco A, Ramajo J. et al. Specific interference between two unrelated internal ribosome entry site elements impairs translation efficiency.//FEBS Lett. - 2005. - V.579. - №30. - P.6803-6808.

332. Reimer U. Prediction of linear B-cell epitopes.//Methods Mol. Biol. - 2009. -V.524. - P.335-344.

333. Resti M, Azzari C, Moriondo M. et al. Injection drug use facilitates hepatitis C virus infection of peripheral blood mononuclear cells.//Clin. Infect. Dis. -2002. - V.35. - P.236-239.

334. Rodrigues-Inigo E, Casqueiro M, Navas S. et al. Fluorescent "in situ" hybridization of hepatitis C virus RNA in peripheral blood mononuclear cells from patients with chronic hepatitis C.//J. Med. Virol. - 2000. - V.60. -P.269-274.

335. Rollier C, Depla E, Drexhage J. et al. Control of heterologous hepatitis C virus infection in chimpanzees is associated with the quality of vaccine-induced periferal T-helper immune response.//! Virol. - 2004. - V.78. -P.187-196.

336. Rosa C, Osborne S, Garetto F. et al. Epitope mapping of the NS4 and NS5 gene products of hepatitis C virus and the use of a chimeric NS4-NS5 synthetic peptide for serodiagnosis.//J. Virol. Meth. - 1995. - V.55. - P.219-232.

337. Rushbrook S, Ward S, Unitt E. et al. Regulatory T cells suppress in vitro proliferation of virus-specific CD8+ T cells during persistent hepatitis C virus infection.//! Virol. - 2005. - V.79. - P.7852-7859.

338. Sabato M, Shiffman M, Langley M. et al. Comparison of performance characteristics of three real-time reverse transcription-PCR test systems for detection and quantification of hepatitis C virus.//! Clin. Microbiol. - 2007.

- V.45. - №8. - P.2529-2536.

339. Sabelko-Downes K, Russell J. The role of Fas ligand in vivo as a cause and regulator of pathogenesis.//Curr. Opin. in Immunology. - 2000. - V.12. -№3. -P.330-335.

340. Sacco R, Tsutsumi T, Suzuki R. et al. Antiapoptotic regulation by hepatitis C virus core protein through up-regulation of inhibitor of caspase-activated DNase.//Virology. - 2003. - V.317. - P.24-35.

34! Saito R, Yokota H, Takahashi E. et al. Performance of an automated system for quantitation of hepatitis C virus core antigen.//! Virol. Methods. - 2003.

- V.112. -P.93-97.

342. Sakaki M, Hiroishi K, Baba T. et al. Intrahepatic status of regulatory T cells in autoimmune liver diseases and chronic viral hepatitis.//Hepatology Research. - 2008. - V.38. - №4. - P.354-361.

343. Sallberg M, Frelin L, Weiland O. DNA vaccine therapy for chronic hepatitis C virus (HCV) infection: immune control of a moving target.//Expert Opin. Biol. Ther. - 2009. - V.9. - №7. - P.805-815.

344. Sansonno D, Cornacchiulo V, Racanelli V, Damacco F. In situ simultaneous detection of hepatitis C virus RNA and hepatitis C virus-related antigens in hepatocellular carcinoma.//Cancer. - 1997. - V.80. - P.22-33.

345. Sansonno D, Dammacco F. Hepatitis C virus clOO antigen in liver tissue from patients with acute and chronic infection.//Hepatology. - 1993. - V.18. -P.240-245.

346. Sansonno D, Iacobelli A.R, Cornacchiulo V. et al. Immunohistochemieal detection of hepatitis C virus-related proteins in liver tissues.//Clin. Exp. Rheumatol. - 1995. - V.13. - S29-S32.

347. Sansonno D, Iacobelli A.R, Cornacchiulo V. et al. Detection of Hepatitis C virus (HCV) proteins by immunofluorescence and HCV RNA genomic sequences by non-isotopic in situ hybridization in bone marrow and peripheral blood mononuclear cells of chronically HCY-infected patients.//1996. - V.103. -P.414-421.

348. Sarobe P, Lasarte J, Zabaleta A. et al. Hepatitis C virus structural proteins impair dendritic cell maturation and inhibit in vivo induction of cellular immune responses.//J. Virology. - 2003. - V.77. - №20. - P.10862-10871.

349. Sarasin-Filipowicz M, Oakeley E.J, Duong F.H. et al. Interferon signaling and treatment outcome in chronic hepatitis C.//Proc. Natl. Acad. Sei. USA. -2008. - V.105. - №19. - P.7034-7039.

350. Sarfraz S, Hamid S, Siddiqui A. et al. Altered expression of cell cycle and apoptotic proteins in chronic hepatitis C virus infection.//BMC Microbiology. -2008.-V.8.-P.133.

351. Sarrazin C, Dragan A, Gärtner B. et al. Evaluation of an automated, highly sensitive, real-time PCR-based assay (COBAS Ampliprep/COBAS TaqMan) for quantification of HCV RNA.//J. Clin. Virol. - 2008. - V.43. - №2. -P.162-168.

352. Sasayama M, Deng L, Kim S. et al. Analysis of neutralizing antibodies against hepatitis C virus in patients who were treated with pegylated-interferon plus ribavirin.//Kobe J. Med. Sei. - 2010. - V.56. - №2. - E60-E66.

353. Schnuriger A, Dominguez S, Valantin M.-A. et al. Early detection of hepatitis C virus infection by use of a new combined antigen-antibody detection assay: potential use for high-risk individuals.//!. Clin. Microbiol. -2006.-V.44. -№4.-P.1561-1563.

354. Schregel V, Jacobi S, Penin F, Tautz N. Hepatitis C virus NS2 is a protease stimulated by cofactor domains in NS3.//Proc. Natl. Acad. Sei. USA. - 2009. -V.106.-P.5342-5347.

355. Schulze zur Wiesch J, Lauer G, Day C. et al. Broad repertoire of the CD4+ Th cell response in spontaneously controlled hepatitis C virus infection includes dominant and highly promiscuous epitopes.//.!. Immunol. - 2005. -V.175. - №6. -P.3603-3613.

356. Schuttler C, Thomas C, Discher T. et al. Variable ratio of hepatitis C virus RNA to viral core antigen in patient sera.//J. Clin. Microbiol. - 2004. - V.42.

- №5. - P.1977-1981.

357. Seme K, Poljak M, Babic D.Z. et al. The role of core antigen detection in management of hepatitis C: a critical review.//! Clin. Virol. - 2005. - V.32. -P.92-101.

358. Shahzamani K, Merat S, Rezvan H. et al. Development of a low-cost realtime reverse transcriptase-polymerase chain reaction technique for the detection and quantification of hepatitis C viral load.//Clin. Chem. Lab. Med.

- 2010. - V.48. - №6. - P.777-784.

359. Sharma S.D. Hepatitis C virus: molecular biology & current therapeutic options.//Indian J. Med. Res. - 2010. - V. 131. - P. 17-34.

360. Shaw S, Luse G, Gilks W. et al. Leucocyte differentiation antigen database.//Leucocyte typing/Ed. Schlossman S.F.- Oxford university press. -1995. -P.16-198.

361. Shi S, Polyak S, Tu H. et al. Hepatitis C virus NS5A colocalizes with the core protein on lipid droplets and interacts with apolipoproteins.//Virology. -2002. - V.292. - P.198-210.

362. Shimakami T, Hijikata M, Luo H. et al. Effect of interaction between hepatitis C virus NS5A and NS5B on hepatitis C virus RNA replication with the hepatitis C virus replicón.//! Virol. - 2004. - V.78. - №6. - P.2738-2748.

363. Siavoshian S, Abraham J, Kieny M, Schuster C. HCV core, NS3, NS5A and NS5B proteins modulate cell proliferation independently from p53 expression in hepatocarcinoma cell lines.//Arch. Virol. - 2004. - V.149. -№2. - P.323-336.

364. Siavoshian S, Abraham J, Thumann C. et al. Hepatitis C virus core, NS3, NS5A, NS5B proteins induce apoptosis in mature dendritic cells.//! Med. Virol. - 2005. - V.75. - №3. - P.402-411.

365. Simmonds P. Genetic diversity and evolution of hepatitis C virus - 15 years on.//! Gen. Virology. -2004. - V.85. - P.3173-3188.

366. Simmonds P, Rose K, Graham S. et al. Mapping of serotype-specific, immunodominant epitopes in the NS-4 region of hepatitis C virus (HCV): use of type-specific peptides to serologically differentiate infections with HCV types 1, 2, and 3.//J. Clin. Microbiol. - 1993. - V.31. -P.1493-1503.

367. Slavenburg S, Huntjens-Fleuren H, Dofferhoff T. et al. Ribavirin plasma concentration measurements in patients with hepatitis C: early ribavirin concentrations predict steady-state concentrations.//Ther. Drug Monit. -2011. - V.33. - №1. - P.40-44.

368. Smith G. P, Scott J. K. Libraries of peptides and proteins displayed on filamentous phage.//Methods Enzymol. - 1993. - V.217. - P.228-257.

369. Smyk-Pearson S, Tester I, Lezotte D. et al. Differential antigenic hierarchy associated with spontaneous recovery from Hepatitis C Virus infection: Implications for vaccine design.//! Inf. Dis. - 2006. - V.194. - P.454-463.

370. Smyk-Pearson S, Tester I.A, Klarquist J. et al. Spontaneous recovery in acute human hepatitis C virus infection: functional T-cell thresholds and relative importance of CD4 help.//J. Virol. - 2008. - V.82. - №4. - P. 18271837.

371. Spaggiari G, Contini P, Negrini S. et al. IFN-gamma production in human NK cells through the engagement of CD8 by soluble or surface HLA class I molecules.//Eur. J. Immunol. - 2003. - V.33. - P.3049-3059.

372. Stevens T, Bossie A, Sanders V. et al. Regulation of antibody isotype secretion by subsets of antigen-specific helper T cells.//Nature. - 1988. -V.334. -P.255-258.

373. Sumida K, Ubara Y, Hoshino J. et al. Hepatitis C virus-related kidney disease: various histological patterns.//Clin. Nephrol. - 2010. - V.74. - №6. -P.446-456.

374. Sung V, Shimodaira S, Doughty A.L. et al. Establishment of B-cell lymphoma cell lines persistently infected with hepatitis C virus in vivo and in vitro: the apoptotic effects of virus infection.//! Virol. - 2003. - V.77. -P.2134-2146.

375. Suslov A.P, Kuzin S.N, Golosova T.V. et al. Limits of diagnostic accuracy of anti-hepatitis C virus antibodies detection by ELISA and immunoblot assay.//Russ. J. Immunol. - 2002. - V.7. - №2. - P. 175-184.

376. Suzuki T. A Hepatitis C virus-host interaction involved in viral replication: toward the identification of antiviral targets.//Jpn. J. Infect. Dis. - 2010. -V.63. - №5,-P.307-311.

377. Syder A, Lee H, Zeisel M. et al. Small molecule scavenger receptor BI antagonists are potent HCV entry inhibitors.//!. Hepatol. - 2011. - V.54. -P.48-55.

378. Szabo G, Dolganiuc A. Subversion of plasmacytoid and myeloid dendritic cell functions in chronicHCV infection.//Immunobiology. - 2005. - V.210. -P.237-247.

379. Tanaka Y, Takagi K, Fujihara T. High stability of enzyme immunoassay for hepatitis C virus core antigen - evaluation before and after incubation at room temperature.//Hepatol. Res. - 2003. - V.26. - P.261-267.

380. Tang H, Grisé H. Cellular and molecular biology of HCV infection and hepatitis.//Clin. Sci. (Lond). - 2009. - V.l 17. - №2. - P.49-65.

381. Taya N, Torimoto Y, Shindo M. et al. Fas-mediated apoptosis of periferal blood mononuclear cells in patients with hepatitis C.//Br. J. Haematol. -2000. - V. 110. - P.89-97.

382. Tellinghuisen T, Foss K, Treadaway J. Regulation of hepatitis C virion production via phosphorylation of the NS5A protein.//PLoS pathogens. -2008. - V.4. - el000032.

383. Teo M, Hayes P. Management of hepatitis C.//British Medical Bulletin. -2004.-V.70.-P.51-69.

384. Thimme R, Oldach D, Chang K.M. et al. Determinants of viral clearance and persistence during acute hepatitis C virus infection.//! Exp. Med. - 2001.

- V.194.-P.1395-1406.

385. Tsutsumi M, Urashima S, Takada A. et al. Detection of antigens related to hepatitis C virus RNA encoding the NS5 region in the livers of patients with chronic type C hepatitis.//Hepatology. - 1994. - V.l9. - P.773-778.

386. Thimme R, Bukh J, Spangenberg H.C. et al. Viral and immunological determinants of hepatitis C virus clearance, persistence, and disease.//Proc. Natl. Acad. Sci. USA. -2002. -V.99. - P. 15661-15668.

387. Thimme R, Neumann-Haefelin C, Boettler T., Blum H.E. Adaptive immune responses to hepatitis C virus: from viral immunobiology to a vaccine.//Biol. Chem. - 2008. - V.389. - №5. - P.457-467.

388. Thimme R, Oldach D, Chang K.-M. et al. Determinants of viral clearance and persistence during acute hepatitis C virus infection.//! Exp. Med. - 200!

- V.194. -P.1395-1406.

389. Torres B, Martin J.L, Caballero A. et al. HCV in serum, peripheral blood mononuclear cells and lymphocyte subpopulations in C-hepatitis patients.//Hepat. Res. -2000. - V.18. -P.141-15!

390. Toussaint N.C, Donnes P, Kohlbacher O. A mathematical framework for the selection of an optimal set of peptides for epitope-based vaccines.//PLoS Comput. Biol. - 2008. - V.4. - №12. - el000246.

391. Tsai S, Liaw Y, Chen M. et al. Detection of type 2-like T-helper cells in hepatitis C infection: implications for chronicity.//Hepatology. - 1997. -V.25. -P.449-458.

392. Tseng C, Klimpel G. Binding of the hepatitis C virus envelope protein E2 to CD81 inhibits natural killer cell functions.//! Exp. Med. - 2002. - V.l95. -P.43^9.

393. Uebelhoer L, Han J.-H, Callendret B. et al. Stable cytotoxic T cell escape mutation in hepatitis C virus is linked to maintenance of viral fitness.//PLoS Pathogens. - 2008. - V.4. - №9. - el000143.

394. Urbani S, Amadei B, Fisicaro P. et al. Outcome of acute hepatitis C is related to virus-specific CD4 function and maturation of antiviral memory CD8 responses.//Hepatology. - 2006. - V.44. - P.126-139.

395. Vajdy M, Selby M, Medina-Selby A. et al. Hepatitis C virus polyprotein vaccine formulations capable of inducing broad antibody and cellular immune responses.//J. Gen. Virol. - 2006. - V.87. - Pt 8. - P.2253-2262.

396. Valkavi P, Mediei M, Casula F. et al. Evaluation of a total hepatitis C virus (HCV) core antigen assay for the detection of antigenaemia in anti-HCV positive individuals.//!. Med. Virol. - 2004. - V.73. - P.397-403.

397. Vauloup-Fellous C, Pene V, Garaud-Aunis J. et al. Signal peptide peptidase-catalyzed cleavage of hepatitis C virus core protein is dispensable for virus budding but destabilizes the viral capsid.//J. Biol. Chem. - 2006. -V.281. - №38. - P.27679-27692.

398. Vietheer P, Boo I, Drummer H.E, Netter H.J. Immunizations with chimeric hepatitis B virus-like particles to induce potential anti-hepatitis C virus neutralizing antibodies.//Antivir. Ther. - 2007. - V.12. - P.477^187.

399. Vieyres G, Thomas X, Descamps V. et al. Characterization of the envelope glycoproteins associated with infectious hepatitis C virus.//J. Virol. - 2010. -V.84. - №19. - P.10159-10168.

400. Vieyres G, Dubuisson J, Patel A.H. Characterization of antibody-mediated neutralization directed against the hypervariable region 1 of hepatitis C virus E2 glycoprotein.//J. Gen. Virol. -2011. -V.92. -Pt.3. -P.494-506.

401.Viliano P, Vlanov D, Nelson K. et al. Persistence of viremia and the importance of long-term follow-up after acute hepatitis C infection.//Hepatology. - 1999. - V.29. - P.908-914.

402. Wadhawan M, Rastogi M, Gupta S, Kumar A. Peritransplant management of chronic hepatitis C.//Trop. Gastroenterol. - 2010. - V.31. - №2. - P.75-81.

403. Wakita T, Pietschmann T, Kato T. et al. Production of infectious hepatitis C virus in tissue culture from a cloned viral genome.//Nat. Med. - 2005. -V.ll. - P.791-796.

404. Wang Q, Johnson R, Chen D. et al. Expression and purification of untagged full-length HCV NS5B RNA-dependent RNA polymerase.//Protein Expr. Purif. -2004. - V.35. -№2. -P.304-312.

405. Wang L.-F, Yu M. Epitope identification and discovery using phage display libraries: application in vaccine development and diagnostics.//Current Drug Targets. - 2004. - V.5. - P. 1-15.

406. Waris G, Sarker S, Siddiqui A. Two-step affinity purification of the hepatitis C virus ribonucleoprotein complex.//RNA. - 2004. - V.10. - №2. -P.321-329.

407. Wedemeyer H, Schuller E, Schlaphoff V. et al. Therapeutic vaccine IC41 as late add-on to standard treatment in patients with chronic hepatitis C.//Vaccine. - 2009. - V.27. - №37. - P.5142-5151.

408. Weiler-Normann C, Rehermann B. The liver as an immunological organ.//J.Gastroenterology and Hepatology. - 2004. - V.19. - S279-S283.

409. Welbourn S, Pause A. The hepatitis C virus NS2/3 protease.//Curr. Issu. Mol. Biol. - 2007. - V.9. - P.63-69.

410. Wertheimer A, Miner C, Lewinsohn D.M. et al. Novel CD41 and CD81 T-cell determinants within the NS3 protein in subjects with spontaneously resolved HCV infection.//Hepatology. - 2003. - V.37. - P.577-589.

411. White P.A, Pan Y, Freeman A.J. et al. Quantification of hepatitis C virus in human liver and serum samples by using LightCycler reverse transcriptase PCR.// J. Clin. Microbiol. - 2002. - V.40. - №11. - P.4346-4348.

412. Willberg C, Ward S, Clayton R. et al. Protection of hepatocytes from cyototoxic T cell mediated killing by interferon-alpha.//PLoS One. - 2007. -V.2. - e791.

413. Wintermeyer P, Gehring S, Eken A, Wands J.R. Generation of cellular immune responses to HCV NS5 protein through in vivo activation of dendritic cells.//J. Viral Hepat. - 2010. - V.17. - №10. - P.705-713.

414. Xagorari A, Chlichlia K. Toll-Like Receptors and Viruses: Induction of Innate Antiviral Immune Responses.//The Open Microbiology Journal. -2008. - V.2. - P.49-59.

415. Yan F, Chen A, Hao F. et al. Hepatitis C virus may infect extrahepatic tissues in patients with hepatitis C.//World J. Gastroenterol. - 2000. - V.6. -№6. - P.805-811.

416. Yang S, Lai M, Chen D. et al. Mutations in the NS5A and E2-PePHD regions of hepatitis C virus genotype lb and response to combination therapy of interferon plus ribavirin.//Liver Int. - 2003. - V.23. - №6. - P.426-433.

417. Yao Z, Eisen-Vandervelde A, Ray S, Hahn Y. HCV core/gClqR interaction arrests T cell cycle progression through stabilization of the cell cycle inhibitor p27Kip 1.//Virology. -2003. -V.314. - №1. - P.271-282.

418. Yasui K, Wakita T, Tsukiyama-Kohara K. et al. The native form and maturation process of hepatitis C virus core protein.//J. Virol. - 1998. - V.72. - P.6048-6055.

419. Yerly D, Heckerman D, Allen T.M. et al. Increased cytotoxic T-lymphocyte epitope variant cross-recognition and functional avidity are associated with hepatitis C virus clearance.//! Virol. - 2008. - V.82. - №6. - P.3147-3153.

420. Yi M, Ma Y, Yates J, Lemon S.M. Trans-complementation of an NS2 defect in a late step in hepatitis C virus (HCV) particle assembly and maturation.//Pub. Libr. Sci. Pathog. - 2009. - V.5. - el000403.

421. Yip Y.L, Smith G„ Ward R.L. Comparison of phage pill, pVIII and GST as carrier proteins for peptide immunisation in Balb/c mice.//Immunology Letters. -2001. -V.79. - P. 197-202.

422. Yu H, Babiuk L.A, van Drunen Littel-van den Hurk S. Strategies for loading dendritic cells with hepatitis C NS5a antigen and inducing protective immunity.//! Viral Hepatitis. - 2008. - V.15. - P.459^170.

423. Yu M, Bartosch B, Zhang P. et al. Neutralizing antibodies to hepatitis C virus (HCV) in immune globulins derived from anti-HCV-positive plasma.//Proc. Natl. Acad. Sci. USA. - 2004. - V. 101. - P.7705-7710.

424. Yu C, Chiang B.L. A new insight into hepatitis C vaccine development.//!. Biomed. Biotechnol. - 2010. - V.2010. - 548280.

425. Yuki N., Matsumoto S, Tadokoro K. et al. Significance of liver negativestrand HCV RNA quantitation in chronic hepatitis C.//J. Hepatol. - 2006. -V.44. - №2. - P.302-309.

426. Yutani S, Komatsu N, Shichijo S. et al. Phase I clinical study of a peptide vaccination for hepatitis C virus-infected patients with different human leukocyte antigen-class I-A alleles.//Cancer Science. - 2009. - V.100. - №10. -P.1935-1942.

427. Zarife M.A, Reis E.A, Meira G.C. et al. IL-8 is associated with non-viremic state and IFN-y with biochemical activity in HCV-seropositive blood donors.//Intervirology. - 2010. - V.54. - №2. - P.87-96.

428.Zein N.N, Li H, Persing D.H. Humoral immunity in acute and chronic hepatitis C infection.//Gastroenterology. - 1999. - V.l 17. - №2. - P.510.

429. Zeisel M.B, Fofana I, Fafi-Kremer S, Baumert T.F. Hepatitis C virus entry into hepatocytes: Molecular mechanisms and targets for antiviral therapies.//! Hepatol. -2010. -V.54. - №3. - P.566-576.

430. Zhang Z.X, Chen M, Hultgren C. et al. Immune responses to the hepatitis C virus NS4A protein are profoundly influenced by the combination of the viral

genotype and the host major histocompatibility complex.//! Gen. Virology. -1997. - V.78. - P.2735-2746.

431. Zhang Z.X, Lazdina U, Chen M. et al. Characterization of a monoclonal antibody and its single-chain antibody fragment recognizing the nucleoside triphosphatase/helicase domain of the hepatitis C virus nonstructural 3 protein.//Clinical And Diagnostic Laboratory Immunology. - 2000. -V.7 -P.58-63.

432. Zhong J, Gastaminza P, Cheng G. et al. Robust hepatitis C virus infection in vitro.//Proc. Natl. Acad. Sci. USA. -2005. - V. 102. - P.9294-9299.

433. Zhu Z, Wilson A, Gopalakrishna K. et al. Hepatitis C virus core protein enhances telomerase activity in Huh7 cells.//! Med. Virol. - 2010. - V.82. -№2. -P.239-248.

434. Zibert A, Kraas W, Meisel H. et al. Epitope mapping of antibodies directed against hypervariable region 1 in acute self-limiting and chronic infections due to hepatitis C virus.//! Virology. - 1997. - V.71. - №5. - P.4123^1127.

435.Zignego A.L, Giannini C, Monti M, Gragnani L. Hepatitis C virus lymphotropism: lessons from a decade of studies.//Dig. Liver Dis. - 2007. -V.39. - Suppl.l. - S38-45.