Влияние трансгенного фактора роста нервов (НГФ) млекопитающих на рост и морфологию клеточных систем тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.26, кандидат биологических наук Муркин, Евгений Васильевич

• Муркин, Евгений Васильевич
• кандидат биологических наук
• 2007

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Муркин, Евгений Васильевич

ОГЛАВЛЕНИЕ.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

Трансгенные животные как экспериментальная модель.

Нейрогенные гены.

Белковые продукты генов Notch и Delta.

Нейротрофические факторы.

Классификация нейротрофических факторов.

Фактор роста нервов.

Характеристика фактора роста нервов.

Сигнальные каскады, вызываемые NGF.

Характеристика сигнальных каскадов, вызываемых NGF.

Ras-MAPK киназный путь.

Генная экспрессия: немедленно ранние гены.

Экспрессия задержанно-ранних генов.

Фосфолипазный путь.

Ras - независимые сигнальные пути.

Нейротрофиновый рецептор р75.

Использование нейротрофических факторов для лечения некоторых нейродегенеративных болезней.

Белки теплового шока (HSP).

Регуляция экспрессии белков семейств HSP.

ГЛАВА 2.

Материалы и методы.

Ферменты и реактивы.

Конструкции.

Рестрикция.

Лигирование.

Приготовление компетентных клеток.

Трансформация бактерий Е. Coli плазмидами.

Выделение плазмидной ДНК из Е. coli.

Электрофорез в агарозном геле.

Метод инъекций.

Выведение гомозиготных линий мух.

Контроль наличия вставки (блот-гибридизация по Саузерну).

Выделение хромосомной ДНК.

Рестрикция хромосомной ДНК.

Гель-электрофорез ДНК.

Перенос ДНК на нейлоновую мембрану.

Приготовление меченого зонда.

Гибридизация.

Контроль экспрессии ( Нозерн блот-гибридизация).

Выделение тотальной РНК.

Гель - электрофорез РНК.

Перенос РНК на нейлоновую мембрану.

Гибридизация.

Гибридизация in situ на целых эмбрионах.

Приготовление меченого зонда.

Сбор и фиксация эмбрионов.

Подготовка эмбрионов к гибридизации.

Гибридизация.

Предадсорбция антител.

Отмывка гибридизации и обработка антителами.

Окрашивание.

Вестерн - блот гибридизация(иммуноблотинг).

Получение белковых лизатов.

Фракционирование белков в полиакриламидном геле.

Перенос на нитроцелюлозную мембрану.

Имуннодетекция.

Получение первичной культуры клеток D.melanogaster, трансгенных по гену ngf.

ГЛАВА 3.

Результаты.

Исследование жизнеспособности клеток мух D.melanogaster, кокультивированных со срезом мозга млекопитающих с помощью GFP -подобного флуоресцентного белка DsRed.

Исследование влияния фактора роста нервов на клетки D.melanogaster, используемые при ксенотрансплантации.

ГЛАВА 4.

Обсуждение результатов.

ВЫВОДЫ.

СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМОЙ ЛИТЕРАТУРЫ.

БЛАГОДАРНОСТИ.

Список сокращений

ADF - аденозиндифосфат AMP - аденозинмонофосфат ARTN - артемин, АТР - аденозинтрифосфат

BDNF - Нейротрофический фактор головного мозга, сАМР - циклоаденозинмонофосфат

CDP - цитозиндифосфат

СМР - цитозинмонофосфат

СТР - цитозинтрифосфат

ДАБ- диаминобензидин

DEPC - диэтилпирокарбонат

DRG - задержанно ранние гены,

EGF - эпидермальный фактор роста

FRET - флуоресцентный резонансный перенос энергии

GDNF - глиальный нейротрофический фактор роста,

GDP - гуанидиндифосфат

GFP - зелёный флуоресцентный белок

GMP - гуанидинмонофосфат

GTP - гуанидинтрифосфат

HSE - элемент теплового шока

HSF, HSTF - фактор транскрипции теплового шока,

Hsp, БТШ - белок теплового шока,

IEG - немедленно ранне гены

МГЭ мобильные генетические элементы

МНС - комплекс гистосовместимости

NGF, ФРН - фактор роста нервов,

NRTN - ньюртурин,

NT - нейротрофин, п.н. - пара нуклеотидов, PBS - фосфатно-солевой буфер, PSPN - персефин,

DsRed - красный флуоресцентный белок,

SDS додецил сульфат натрия,

TGF-P - трансформирующий фактор роста, т.п.н. - тысяча пар нуклеотидов,

Trk - тирозинкиназа,

ЭДТА - Этилен-диамидтетрауксусная кислота.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Влияние трансгенного фактора роста нервов (НГФ) млекопитающих на рост и морфологию клеточных систем»

В последние годы всё больше внимания уделяется лечению нейродегенеративных заболеваний, связанных с отмиранием нервных клеток в ЦНС, что приводит к функциональному дефициту.

Для восстановления функционального состояния применяют или трансплантацию незрелой нервной ткани или клеток, или инъекции непосредственно в мозг нейротрофического фактора, стимулирующего рост и дифференцировку нервных клеток. Это является потенциальной возможностью улучшения состояния, возникающего в результате отмирания нейронов.

Критической при трансплантации незрелой нервной ткани или клеток является приживляемость (выживание в новых условиях и образование связей между пересаженными клетками и клетками реципиента) трансплантированных нейронов. Большинство пересаженных клеток отмирают в течение раннего посттрансплантационного периода (Brundin, Р et all, 2000.). На этот процесс влияют многие факторы: неполный обмен кислорода и углекислого газа, питательных веществ и метаболитов вследствие отека, отсутствия васкуляризации и последующего дефицита трофической поддержки и ростовых факторов, а так же влияния клеточного стресса и воздействия свободных радикалов и иммунных медиаторов. Так, при репарации повреждения дорсальных корешков спинального ганглия крыс, аксоны поврежденных дорсальных корешков легко растут в периферический отдел корешков, но сразу останавливаются, когда встречаются с окружением промежуточной зоны. При этом человеческие эмбриональные или фетальные ганглии дорсальных корешков, пересаженные на место нативных, приживаются, протягивают аксоны через спинной мозг взрослых крыс-реципиентов и создают там функциональные связи (Kozlova et all 1995, 1997). Кроме того, клетки из трансплантата так же приживаются и отправляют аксоны через дорсальные корешки и периферическую нервную систему. Однако, при этом, большая часть пересаженных клеток отмирает, скорее всего, в результате недостаточного кровоснабжения, так как вокруг участка трансплантанта образуется глиальный рубец, блокирующий его васкуляризацию и образование связей с хозяйскими нейронами.

Таким образом, метод, состоящий в пересадке эмбриональной нервной ткани имеет низкий процент излечения и требует переодического повторения трансплантации.

Инъекция нейротрофического фактора применяется для стимуляции оставшихся нервных клеток к делению и росту, что замещает отмершие нейроны. Однако данная процедура является травматической для пациента. Кроме того, так как нейротрофический фактор нестоек, этот метод так же требует периодического повторения инъекции.

В последнее время планируется использование трансплантации эмбриональных стволовых клеток для восстановления функционального дефицита нейронов при нейродегенеративных болезнях. Однако, известно, что пересаженные эмбриональные стволовые клетки дают до 30% случаев перерождения в опухолевую ткань, следовательно, преимущества подобного метода так же сомнительны.

Более перспективен метод трансплантации аллогеных (собственных) стволовых клеток. При этом не возникает иммунный ответ на пересаженные клетки, практически не образуется глиальный рубец, однако сохраняется онкологический риск.

В 1990 году Л.И.Корочкин и С.В.Савельев показали, что нервные клетки плодовой мушки D.melanogaster, пересаженные в нервную трубку зародышей амфибий, выживают и образуют связи с нервными клетками реципиента, при этом не образуется глиальный рубец, блокирующий их васкуляризацию {Савельев С.В и др. 1990). Позднее, в опытах Л.И.Корочкина (Korochkin, 2000.) было показанно, что при ксенотрансплантации в мозг крыс нервные клетки D.melanogaster так же выживали в течение минимум месяца и блокировали образование глиального 9 рубца, что способствовало васкуляризации трансплантата и образованию связей с хозяйскими клетками.

Это даёт возможность применить новый метод ксенотрансплантации клеток плодовой мухи D.melanogaster для восстановления функционального состояния повреждённых участков мозга (Лосева Е.В. 2001). Кроме того, предпочтительнее будет использование при пересадке клеток D.melanogaster в качестве носителей чужеродных нейротрофических факторов, например, фактора роста нервов человека. Так как в геном плодовой мушки можно легко ввести чужеродные гены, то можно использовать для ксенотрансплантации клетки, трансгенные по гену нейротрофического фактора. При этом перспективно будет поставить экспрессию трансгенного гена под контроль регуляторных элементов генома D.melanogaster с целью активировать её только при ксенотрансплантации. Самым предпочтительным из регуляторных элементов генома D.melanogaster является промотор белка теплового шока HSP70. Данный промотор активирует транскрипцию находящегося под его контролем гена при повышении температуры до 37° С, т.е., при нормальной температуре тела млекопитающих, следовательно активация нейротрофинов в клетках ксенотрансплантата будет возможна только в мозге реципиента (Korochkin et all 2002).

Однако, не ясно, будет ли осуществляться экспрессия гена, контролируемого промотором теплового шока в условиях ксенотрансплантации, т.е. в мозге млекопитающих. И будет ли влиять экспрессирующийся нейротрофический фактор на окружающие клетки в условиях ксенотрансплантации. Данная работа была призвана дать ответ на часть этих вопросов.

Целью данной работы было исследование возможности применения клеток D.melanogaster, экспрессирующих при ксенотрансплантации чужеродный фактор роста нервов для восстановления повреждённых участков в мозге млекопитающих.

Для достижения поставленной цели были поставленны следующие задачи:

• исследовать возможность экспрессии гена, находящегося под контролем промотора белка теплового шока в клетках генома D.melanogaster в условиях ксенотрансплантации в мозг млекопитающих

• исследовать возможность применения фактора роста нервов для улучшения приживаемости ксенотрансплантата и стимуляции образования связей между ним и клетками реципиента.

Заключение диссертации по теме «Молекулярная генетика», Муркин, Евгений Васильевич

Выводы

1. Показано, что клетки D.melanogaster, инкубированные в стрессовых для них условиях, выживают как минимум два дня, при этом, чужеродный ген, находящийся под контролем промотора белка теплового шока D.melanogaster, может активироваться при температуре тела млекопитающих (37° С).

2. Показано, что в культуре эмбриональных клеток D.melanogaster, трансгенных по гену фактора роста нервов млекопитающих (NGF) под контролем промотора белка теплового шока HSP70 дрозофиллы, при температуре 37° С экспрессируется трансгенный белок, оказывающий влияние на рост и морфологию клеток, в которых он экспрессируется.

3. Показано, что NGF млекопитающих, экспрессирующийся в клетках эмбриональной нервной ткани трансгенной линии D.melanogaster при инкубировании в условиях для культивации клеток млекопитающих, оказывает влияние на окружающие нервные клетки млекопитающих, инкубированные вместе с эмбрионом трансгенной линии. При этом оказываемый эффект заключается в направленном росте отростков нейронов млекопитающих в сторону эмбриональной нервной ткани D.melanogaster с образованием контактов между отростками и клетками эмбриональной нервной ткани трансгенной линии.

4. Клетки полученной линии D.melanogaster, трансгенной по гену ngf, могут быть использованы при ксенотрансплантации для улучшения приживаемости трансплантата.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Муркин, Евгений Васильевич, 2007 год

1. Иванов А.И., Фролова И.П., Захаров И.К., Корочкин Л.И. 1993. Анализ нарушений развития мозга у нового Notch мутанта Drosophila melanogaster. Доклады Академии наук. т. 331. № 6.

2. Корочкин Л.И. 1989. Генетическая регуляция процессов нейрогенеза. Онтогенез, т. 20.№ 6. стр 593-606.

3. Корочкин Л.И., Михайлов А.Т. 2000. Введение в нейрогенетику. Москва «Наука».

4. Красильников М.А. 2000. Сигнальные пути, регулируемые фосфатидилинозит-3-киназой и их значение для роста, выживаемости и злокачественной трансформации клеток. Биохимия. 65(1). 68-78.

5. Лозовская Е.Р., Евгеньев М.Б. 1984. Тепловой шок у дрозофилы и регуляция активности генома. Молекулярная биология. 20:142-185

6. Лосева Е.В. 2001. Нейротрансплантация фетальных тканей и компенсаторно-восстановительные процессы в центральной нервной системе реципиентов. Успехи Физиол. Наук. Т. 12. N 1. С. 19-37.

7. Маниатис Т., Фрич Э., Сэмбрук Дж. 1984. Молекулярное клонирование. Москва «Мир».

8. Маргулис Б.А., Гужова И.В. 2000. Белки стресса в эукариотической клетке. Цитология. 42(4):323-342.

9. Ю.Потеряев Д.А., Саарма М. 2001. Семейство GDNF: от нейротрофических факторов к онкогенезу. Молекулярная биология. 35(2). 309-320.

10. П.Родионов И.М. 1996. "Фактор роста нервов"; Соросовскийобразовательный журнал, №3. П.Савельев С.В., Корочкин Л.И., Иванов А.И., Евгеньев М.Б., Бесова

11. H.В., Гулимова В.И. 1990. Трансплантация нейральной закладки дрозофилы в нервную трубку зародышей амфибий. Доклады Академии наук СССР. Генетика. Том 313 №6 стр 1491-1493.

12. Степанов В.М. 1996. Молекулярная биология. Москва «Высшая школа».

13. Татосян А.Г., Мизенина О.А. 2000. Киназы семейства Srs: структура и функции. Биохимия. 65(1) 57-67

14. Alessi D.R., Saito Y., Campbell DG., Cohen P., Sithanandam G. 1994. Identification of the sites in MAP kinase kinase-1 phosphorylated dy p74raf1.EMBO J. 13.1610-1619.

15. Aloe L., Vigneti E. 1992. In vivo and in vitro NGF studies on developing cerebellar cells. Developmental Neuroscience.

16. Andres D.A., Rudolph J.L., Sendoku T. Shi G.X. 2005. Analysis of rit signaling and biological activity. Methods Enzymol. 407:499-512.

17. Anton E., Weskamp G., Reichardt L., Matthew W. 1994. Nerve growgh factor and its low affinity receptor promote Schwann cell migration. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 91. 2795-2799

18. Auger K., Serunian L., Soltoff S., Libby P., Cantey L. 1989. PDGF-dependent tyrosine phosphorylation stimulates production of novel phosphoinositides in intact cells. Cell. 57. 167-175.

19. Bar-Sagi D., Feramisco J.R. 1985. Microinjection of the ras oncogene protein into PC 12 induces morfologic differentiation. Cell 42. 841-848

20. Behrens M.M., Strasser U., Lobner D., Dugan L.L. 1999. Neurotrophin-mediated potentiation of neuronal injury. Microsc. Res. Tech. May 15-Jun l;45(4-5):276-84.

21. Berk G., Munno D.W., Levy Z., Dissel H.M., Van-Minnen J., Syed N.I., Fainzilber M. 2004. Neurotrophic activities of trk receptors conserved over 600 million years of evolution. J.Neurobiol. Jul; 60(1): 12-20

22. Berkowitz L., Riabowal K., Gilman M. 1989. Multiple sequence elements of a single functional class are required for cyclin AMP responsiveness of the mouse c-fos promoter. Mol.Cell. Boil. 9. 4272-4281.

23. Berninger В., Garcia D.E., Inadaki N., Hahnel C., Lindholm D. 1993. BDNFand NT-3 induce intracellular Ca elevation in hippocampal neurons. NeuroReport. 4. 1303-1306.

24. Bingham P.M., Kidwell M.G., Rubin G.M. 1982. The molecular basis of P-M hybrid dysgenesis: the role of the P element, a P-strain-specific transposonfamily.Cell. 1982 Jul;29(3):995-1004.

25. Blenis J. 1993. Signal transduction via the MAP kinases: proceed at your ownRSK. Proc.Natl.Acad.Sci.USA. 90.5889-5892.

26. Bonni A., Ginty D., Dudek H., Greenberg M. 1995. Serine 133-phosphorylated CREB induces transcription via a cooperative mechanism that may confer specificity to neurotrophin signals. Mol.Cell Neurosci. 6. 168-183.

27. Boydston W.R., Sohal G.S. 1979. Grafting of additional periphery reduces embryonic loss of neurons. Brain Res. Dec 14;178(2-3):403-10.

28. Brundin, P.; Karlsson, J.; Emgard, M.; Schierle, G. S.; Hansson, 0.; Petersen, A.; Castilho, R. F. 2000.1mproving the survival of grafted dopaminergic neurons: A review of current approaches. Cell Transplant. 9:179-195.

29. Casey P. 1995 Protein lipidation in cell signaling. Science. 268. 221-224

30. Castro J.R. Carareto C.M. 2004 Drosophila melanogaster P transposable elements: mechanisms of transposition and regulation. Genetica. Jun;121(2):107-18.

31. СЬао M.V. 2000. Trophic factors: An evolutionary cul-de-sac or door into higher neuronal function? J Neurosci Res. Feb l;59(3):353-5. Review.

32. Chen R.H., Tung R.R., Abate C., Blenis J. 1992. Nuclear localization and regulation of erk- and rsk- encoded protein kinases. Mol. Cell. Biol. 12. 915927.

33. Chen R.H., Sarnecki C., Blentis J. 1993. Citoplasmic to nuclear signal transduction by mitogen-activated protein kinase and 90 kDa ribosomal S6 kinase. Biochem. Soc. Trans. 21. 895-900.

34. Cohen G., Ren R., Baltimore D. 1995. Modular binding domains in signal transduction proteins. Cell. 80. 237-248.

35. Conover J.C., Yancopoulos G.D. 1997 Neurotrophin regulation of the developing nervous system: analyses of knockout mice. Rev Neurosci. 1997 Jan-Mar;8(l):13-27.

36. Cowley S., Paterson H., Kemp P., Marshall C. 1994. Activation of MAP kinase kinase is necessary and sufficient for PC 12 differenciation and for transformation of NIH 3T3 cells. Cell. 77.841-852

37. Curran Т., Franza B. 1988. Fos and Jun: the AP-1 connection. Cell. 55. 395397.

38. Davies A.M., Lee K.F., Jaenisch R. 1993. p75-deficient trigeminal sensory neurons have an altered response to NGF but not to other neurotrophins. Neuron. 11.565-574.

39. Diederich R.J., Matsuno К., Hing H., Artavins-Tsakonas S. 1990. Citolic interaction between deltex and Notch ankirin repeats implicates deltex in the Notch signaling pathway. Development. 120. 473-481.

40. Dobrowsky R., Werner M., Castellino A., Chao M., Hannun Y. 1994. Activation of the cphingomyelin cicle through the low affinity neurotrophin receptor. Science. 265.1596-1599.

41. Echalier G. 1997. Drosophila cells in culture. Academic Press. San Diego. CA.

42. Edwards R.H., Rutter W.J.,Hanahan D. 1989. Directed expression of NGF to pancreatic beta cells in transgenic mice leads to selective hyperinnervation of the islets. Cell. Jul 14;58(1): 161-70.

43. Gershon M. 1997. Genes and lineages in the formation of the enteric nervous system // Curr. Opin. Neurobiol. V. 7. P. 101-109.

44. Ginty D.D., Bonni A., Greenberg M.E. 1994. Nerve growth factor activates a ras-dependent protein kinase that stimulates c-fos transcription via phosphorylation of CREB. Cell. 77. 713-725.

45. Greene L., Tischler A. 1982. PC 12 pheochromocytoma cultures in neurobiological research. Adv. Cell. Neurobiol. 3. 373-414.

46. Hagag N., Halegoua S., Viola M. 1986. Inhibition of growth factor induced differentiation of PC12 cells by microinjection of antibodies to ras p21. Nature. 319. 680-682.

47. Haider S.A., Thaller V.T. 1992. Lid melanoma and parkinsonism. Brit. J. Ophtalmol. 76. 246 247.

48. Hayashi I., Perez-Magallanes M., Rossi G.M. 1992. Neurotrophic factor-like activity in Drosophila. Biochem Biophys Res Commun. Apr 15;184(l):73-9.

49. Hill С., Treisman R. 1995. Transcriptional regulation by extracellular signals: mechanisms and specifity. Cell. 80. 199-211.

50. Jaaro H., Beck G., Conticello S.G., Fainzilber M. 2001 Evolving better brains: a need for neurotrophins? Trends Neurosci. 24(2):79-85.

51. Jachansan Amin, Ruben Nestril, Paul Schiller, Michel Dreano and Richard Voellmy. Organization of the Drosophila melanogaster hsp70 heat shock regulation unit. Mol. Cell. Biol., 1987, 7 (3): 1055 1062

52. Jianq H., Zhanq J., Zhu H., Zhanq X. 2007. Nerve growth factor prevents the apoptosis-associated increase in acetylcholinesterase activity after hydrogen peroxide treatment by activating Akt. Jan;39(l):46-56.

53. Jing S., Tapley P., Barbacid M. 1992. Nerve growth factor mediates signal transduction through trk homodimer receptors. Neuron. 9. 1067-1079

54. Kaplan D.R.,Hempstead B.L., Martin-Zanca D., Chao M.V. Parada L.F. 1991. The trk protooncogene product: a signal transducing receptor for nerve growth factor. Science. 252. 558-561.

55. Kawamoto Y., Nakamura S., Kawamato Т., Akiguchi I. Kimura J. 1999. Cellular localization of brain derived neurotrophic factor like immunoreactivity in adult monkey brain. Brain research. 381. 341-349.

56. Kolch W., Heidecker G., Kochs G., Hummel R., Vahidi H., Mischak H., Finkenzeller G., Marme D., Rapp U.R. 1993. Protein kinase Ca activates RAF-1 by direct phosphorylation. Nature. 364. 249-252.

57. Korochkin, L. I. 2000. New approaches in developmental genetics and gene therapy: Xenotransplantation of Drosophila embryonic nerve cells into the brain of vertebrate animals. Genetika 36:1436-1442. (in Russian, English abstract).

58. Korochkin, L. I.; Alexsandrova, M. A.; Pavlova, G. V.; Bashkirov, V. N.; Revischin, A. V.; Alexenko, 0. A.; Evgen'ev, M. B. 2002. Hsp70 family proteins seem to facilitate alio- and Xenotransplantation in the rat brain. Tsitologia 44:803-806.

59. Levi Montalchini R. 1987. The nerve growth factor: five years later. EMBOJ. 6. 1145-1154.

60. Lindquist S. 1986. The heat-shock response. Ann. Rev. Biochem. 55, 11511191.

61. Loeb D., Maragos J., Martin-Zanca D., Chao M., Parada L., Greene L. 1991. The trk protooncogene rescues NGF responsiveness in mutant NGF-responsive PC 12 cell lines. Cell. 66. 961-966.

62. Lowenstein E., Daly R., Batzer A., Li W., Margolis B. 1992. The SH2 and SH3 domain-conteining protein GRB2 links receptor tyrosine kinases to Ras signaling. Cell. 70. 431-442

63. March H.M., Scholz W.K., Lamballe F., Klein R., Nanduri V. 1993. Signal transduction events mediated dy the BDNF receptor gp 145(trkB) in primary hyppocampal pyramidal cell culture. J.Neurosci. 13. 4281-4292.

64. Middlemas D.S., Meisenhelder J., Hunter T. 1994. Identification of TrkB autophosphorylation sites and evidence that phospholipase C-gamma 1 is a substrate of the TrkB receptor. J. Biol. Chem. 269. 5458-5466

65. Miranti C., Gunti D., Huang G., Chatila Т., Greenberg M.E. 1995. Calcium activates serum response factor-dependent transcription by a Ras- and Elk-1-independent mechanism that involves a Ca2+/Calmodulin-dependent kinase. Mol. Cell. Biol. 15.3672-3684.

66. Panin V.M., Papayannopoulos V., Wilson R., Irvin K.D. 1997. Fringe modulates Notch ligand interactions. Nature. Jun 26;387(6636):908-12.

67. Panin V.M., Irvin K.D. 1998. Modulators of Notch signaling. Cell and developmental biology. 9 609-617.

68. Payne D., Rossamondo A., Martino P., Erickson A., Her J. 1991. Indentification of the regulatory phosphorylation sites in pp42/Mitogen-activated protein kinase (MAP Kinase). EMBO J. 10.885-892.

69. Pelham H.R. 1986. Speculations on the functions of the major heat shock and glucose-regulated proteins. Cell, 46(7), 959-961.

70. Pradat P.F. 2003. Treatment of peripheral neuropathies with neurotrophic factors: animal models and clinical trials 2003 Rev Neurol (Paris). Feb; 159(2): 147-61.

71. Rabizaden S., Oh J., Zhong L.T., Yang J., Butler C.M. 1993. Induction of apoptosis by the low-affinity NGF receptor. Science. 261. 345-348.

72. Ritossa F. 1962. A new puffing pattern induced by heat shock and DNP in Drosophila. Experientia, 18, 571-573.

73. Rodriguez-Tebar A., Dechant G., Barde Y.A. 1990. Binding of brain derived neurotrophic factor hin-3 to nerve growth factor receptor. Neuron. 4. 487492.

74. Rodriguez-Tebar A., Dechant G., Gotz R., Barde Y.A. 1992. Binding of neurotrophin-3 to its neuronal receptors and interactions with nerve growgh factors and brain-derived neurotrophic factor. EMBO J. 11. 917-922.

75. Rubin G.M., Kidwell M.G., Bingham P.M. 1982. The molecular basis of P-M hybrid dysgenesis: the nature of induced mutations. Cell. Jul; 29(3). 987-94.

76. Rubin G.M., Spradling A.C. 1982. Genetic transformation of Drosophila with transposable element vectors. Science. Oct 22. 218(4570). 348-53.

77. Ryder E., Russell S. 2003. Transposable elements as tools for genomics and genetics in Drosophila. Brief Funct Genomic Proteomic. 2003 Apr; 2(1). 5771.

78. Schlessinger J. 1994. SH2/SH3 signaling proteins. Curr. Opin Genet. Dev. 4. 25-30

79. SpradlingA.C., Rubin G.M. 1982. Transposition of cloned P elements into Drosophila germ line chromosomes.

80. Thummel C.S., Boulet A.M. 1988. Vectors for Drosophila P-element-mediated transformation and tissue culture transfection. Gene. Dec. 30. 74(2). 445-56.

81. Tissieres A, Mitchell H.K, Tracy U.M. 1974. Protein synthesis in salivary glands of Drosophila melanogaster: relation to chromosome puffs. J. Mol. Biol., 84(3), 389-398.

82. Treisman R. 1992. The serum response element. Trends Biochem.Sci. 17. 423-426.

83. Treisman R. 1994. Ternari complex factors: growth regulated transcriptional activators. Curr. Opin. Genet. Dev. 4. 694-701.

84. Так же хочу выразить благодарность всем, кто принял живое участие в подготовке данной работы в печать и помогал при этом своими ценными советами и замечаниями.