Синтез и исследование транспортных форм противоопухолевых лекарственных веществ на основе альфа-фетопротеина и полимерных наночастиц тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.04, кандидат биологических наук Бобрускин, Алексей Игоревич

• Бобрускин, Алексей Игоревич
• кандидат биологических наук
• 2000

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Бобрускин, Алексей Игоревич

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

ПАССИВНЫЙ ТРАНСПОРТ РАСТВОРИМЫХ МАКРОМОЛЕКУЛЯРНЫХ СИСТЕМ ДОСТАВКИ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ВЕЩЕСТВ В ОПУХОЛЬ

Введение

1. ТРАНСПОРТ МАКРОМОЛЕКУЛ ЧЕРЕЗ

СТЕНКИ СОСУДОВ

1.1. Транспорт макромолекул через стенки нормальных капилляров

1.2. Эндотелий центральной нервной системы

1.3. Проницаемость синусоидных капилляров

1.4. Фильтрация через эндотелий почечных клубочков

1.5. Экстравазация в зонах воспалительного процесса

1.6. Экстравазация в капиллярах, питающих опухоль

2. ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИЕ ПАРАМЕТРЫ МАКРОМОЛЕКУЛ, ВЛИЯЮЩИЕ НА

СКОРОСТИ ЭКСТРАВАЗАЦИИ

3. ПРОНИКНОВЕНИЕ МАКРОМОЛЕКУЛ В ЛИМФАТИЧЕСКУЮ СИСТЕМУ

4. НАКОПЛЕНИЕ МАКРОМОЛЕКУЛ В

ОПУХОЛЕВОЙ ТКАНИ

5. ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ МАКРОМОЛЕКУЛ, ВЛИЯЮЩИЕ НА ИХ НАКОПЛЕНИЕ В ОПУХОЛИ

6. НЕКОТОРЫЕ ПРИМЕРЫ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ ПАССИВНОГО ТРАНСПОРТА ЛЕКАРСТВЕННЫХ ВЕЩЕСТВ В ОПУХОЛЬ

6.1. Неокарциностатин

6.2 Митомицин С

6.3 Доксорубицин 39 ЗАКЛЮЧЕНИЕ

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1 Выделение и очистка АФП

2.2 Получение конъюгатов 46 2.2.1. Синтез конъюгата доксорубицина с АФП с использованием глутарового альдегида (ДОКС-Га-АФП) 46 2.2.2. Синтез конъюгата доксорубицина с АФП с использованием аконитового ангидрида (ДОКС-Ак-АФП)

2.2.3. Синтез конъюгата ДОКС-декстран-АФП

2.2.4. Синтез конъюгата терафтала с АФП

2.3. Получение коллоидных форм противоопухолевых препаратов на основе наночастиц из полибутилцианоакрилата

2.3.1. Получение коллоидных форм терафтала и доксорубицина на основе наночастиц из полибутилцианоакрилата

2.3.2. Получение наночастиц из полибутилцианоакрилата

2.4. Культивирование клеток

2.5. Определение цитотоксической активности препаратов in vitro

2.5.1. Определение цитотоксической активности транспортных форм доксорубицина

2.5.2. Определение цитотоксической активности транспортных форм терафтала

2.6. Исследование доставки транспортных форм доксорубицина в клетки мышиного лимфолейкоза Р 388 in vitro

2.7. Исследование противоопухолевой активности препаратов

2.8 Вычисление критериев противоопухолевой активности

2.9. Изучение накопления терафтала в печени и коже здоровых крыс

2.9.1. Электронная микроскопия

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

3.1. Получение конъюгатов доксорубицина и терафтала с АФП и БСА

3.2. Получение коллоидных форм терафтала и доксорубицина

3.3. Цитотоксическая активность конъюгатов доксорубицина с АФП и БСА

3.4. Цитотоксическая активность доксорубицина, ассоциированного с наночастицами из полибутилцианоакрилата

3.5. Исследование процесса интернализации клетками Р388 конъюгатов доксорубицина с АФП и доксорубицина, ассоциированного с наночастицами

3.6. Исследование противоопухолевой активности конъюгатов доксорубицина с АФП

3.7. Исследование противоопухолевой активности коллоидной формы доксорубицина

3.8. Изучение биологических свойств транспортных форм терафтала

3.9. Исследование противоопухолевой активности конъюгата терафтала с АФП.

3.9.1 Изучение распределения коллоидной формы терафтала по органам

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Синтез и исследование транспортных форм противоопухолевых лекарственных веществ на основе альфа-фетопротеина и полимерных наночастиц»

Повышение избирательности действия противоопухолевых препаратов является актуальной проблемой современной химиотерапии. Одним из наиболее интересных путей решения этой проблемы является использование различных макромолекулярных систем доставки лекарственных веществ (ЛВ).

Транспорт JIB в опухоль с помощью макромолекулярных носителей может быть пассивным или активным. Концепция пассивного транспорта основана на способности опухолевой ткани накапливать макромолекулы и коллоидные частицы в результате нарушенного оттока лимфы и повышенной проницаемости капилляров, питающих опухоль (1,2,3). Для осуществления активного транспорта JIB используют высокоспецифичные механизмы, основанные на взаимодействии лиганда-вектора, входящего в состав системы, с рецепторами на поверхности опухолевых клеток. Создание макромолекулярных систем для активного транспорта JIB в клетки опухоли представляет особый интерес; при этом ключевую роль играет выбор вектора. В качестве векторов часто используют антитела, факторы роста, липопротеины и т.п. Однако рецепторы к этим лигандам присутствуют и в здоровых клетках, поэтому такие системы не обладают достаточной специфичностью, хотя и проявляют высокую цитотоксичность в опытах in vitro. В то лее время известно, что многие опухолевые клетки экспрессируют рецепторы, активно связывающие онкофетальный белок альфа-фетопротеин (АФП), при этом содержание этих рецепторов в здоровых тканях весьма незначительно (Naval J. et al., 1985; Geuskens M. et al., 1991) (4,5). Ранее было показано, что избирательность действия ряда противоопухолевых препаратов может существенно возрастать в результате конъюгирования их с АФП (S.E. Severin et al, 1995) (6), однако для оценки терапевтического потенциала систем на основе АФП необходимы дальнейшие исследования.

Среди систем пассивной доставки перспективными представляются полимерные наночастицы. По ряду фармакологических параметров наночастицы схожи с липосомами, важным преимуществом наночастиц является высокая стабильность. Наночастицы получают из различных полимеров, как природных (альбумин, желатин, декстран), так и синтетических (полистирол, полиметилметакрилат, полиалкилцианоакрилаты). Полиалкилцианоакрилаты - доступные, малотоксичные, биодеградируемые полимеры, применяющиеся в медицине как основа хирургического клея. В водных растворах наночастицы из полиалкилцианоакрилатов образуют устойчивые коллоидные системы, пригодные для внутривенного введения. Препараты на основе таких наночастиц являются удобной лекарственной формой, их можно стерилизовать и хранить в лиофилизованном виде. Опираясь на многочисленные литературные данные, можно полагать, что применение наночастиц в качестве носителей противоопухолевых JIB позволит снизить побочные эффекты.

Заключение диссертации по теме «Биохимия», Бобрускин, Алексей Игоревич

Выводы

1. Разработаны методики синтеза трех типов конъюгатов доксорубицина с АФП с помощью глутарового альдегида, аконитового ангидрида и диальдегиддекстрана. Во всех полученных конъюгатах антибиотик связан с носителем через лабильные в физиологических условиях спейсеры.

2. Синтезирован конъюгат терафтала с АФП с помощью метода активированных эфиров. Получена коллоидная форма терафтала на основе наночастиц из полибутилцианоакрилата.

3. Наибольшую противоопухолевую активность показал конъюгат доксорубицина с аконитовым спейсером: торможение роста опухолей у мышей с солидным вариантом лимфолейкоза Р388 превышало аналогичные показатели доксорубицина и конъюгата доксорубицина, полученного с помощью глутарового альдегида, в 4 и 1,5 раза, соответственно.

4. Все синтезированные транспортные формы способны эффективно доставлять доксорубицин в клетки линии Р388.

5. Применение синтезированных нами макромолекулярных систем доставки позволяет преодолеть резистентность опухолевых клеток к доксорубицину.

6. Конъюгат терафтала с АФП проявил высокую противоопухолевую активность, обеспечив выживаемость 67% животных с гепатомой 22.

7. Применение наночастиц в качестве носителей позволяет в 2 раза снизить концентрацию терафтала в коже.

Автор выражает благодарность за помощь при проведении экспериментов к.х.н. Е.Г. Гивенко (МГУ), д.х.н. С.А. Борисенковой (МГУ), к.м.н. З.С. Смирновой (НИИ ЭДиТО РОНЦ), к.м.н. Н.В. Андроновой (НИИ ЭДиТО РОНЦ), к.м.н. Е.М.Трещалиной (НИИ ЭДиТО РОНЦ), к.б.н. Н.Б. Фельдман (МНИИМЭ), к.х.н. Г.А. Посыпановой (МНИИМЭ), к.б.н. А.И. Сотниченко (МНИИМЭ).

Автор также выражает глубокую признательность д.б.н. Е.Ю. Москалёвой за ценные советы при написании диссертационной работы.

Заключение

В результате проведённых исследований были синтезированы конъюгаты доксорубицина с АФП с помощью глутарового альдегида, аконитового ангидрида и диальдегиддекстрана. Во всех полученных конъюгатах антибиотик связан с носителем через лабильные в физиологических условиях спейсеры. Также был синтезирован конъюгат терафтала с АФП с помощью метода активированных эфиров. Были получены коллоидные формы доксорубицина и терафтала на основе наночастиц из полибутилцианоакрилата. Разработанная методика позволяет получать наночастицы с высоким содержание доксорубицина и терафтала, а также с узким распределением частиц по размерам.

При исследовании цитотоксической активности транспортных форм доксорубицина была выявлена высокая цитотоксическая активность конъюгата доксорубицина с АФП, полученного с помощью глутарового альдегида, в отношении всех клеточных культур, используемых в экспериментах. Следует отметить, что данный конъюгат имел также высокую цитотоксическую активность в отношении клеток МСБ-7Дс1г11, резистентных к доксорубицину. Включение доксорубицина и терафтала в наночастицы предложенным в работе методом, позволяет сохранить цитотоксические свойства данных препаратов. Коллоидная форма ДОКС, как и другие системы доставки, эффективно обращала резистентность клеток линии МСР-7МгК

Эксперименты по изучению противоопухолевой активности транспортных форм доксорубицина на модели мышиного лимфолейкоза Р388, перевиваемого подкожно, показали высокую противоопухолевую активность конъюгата доксорубицина с АФП, полученного с помощью аконитового ангидрида. Полученные результаты подтверждают, что противоопухолевая эффективность действия исследуемых конъюгатов зависит как от природы векторной молекулы, так и от типа связи между лекарственным веществом и векторной молекулой. Введение коллоидных форм доксорубицина мышам с перевитым подкожно лимфолейкозом Р 388 приводило к увеличению средней продолжительности жизни животных по сравнению с контролем. Следует также отметить высокую противоопухолевую активность конъюгата терафтала с АФП на модели асцитной гепатомы 22 у мышей. Эффект состоял в излечении 67% животных.

Изучение распределения коллоидной формы терафтала по органам показало высокий уровень накопления терафтала в коже, который сохраняется до 9 часов. Применение наночастиц позволяет снизить уровень терафтала в коже примерно в 2 раза. Уровень накопления терафтала, ассоциированного с наночастицами, не превышает уровня накопления в печени свободного терафтала.

Полученные результаты могут служить основой для создания эффективных противоопухолевых препаратов направленного действия на основе альфа-фетопротеина и полимерных наночастиц из полибутилцианоакрилата, а также снизить побочные эффекты, связанные с применением свободных противоопухолевых препаратов.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Бобрускин, Алексей Игоревич, 2000 год

1. Maeda Н. SMANCS and polymer-conjugated macromolecular drugs: advantages in cancer chemotherapy. Adv. Drug Deliv. Rev., 6, 181-202, 1991.

2. Davis S.S., Ilium L. Colloidal delivery systems opportunities and challenges, in Site-specific Drug Delivery. Tomlinson E. and Davis S.S., Eds., John Wiley&Sons, Chichester, U.K., 1986, 93-103.

3. Wright J. J., Ilium L. Active targeting of microcapsules and microspheres to specific regions. In: Microcapsules and Nanoparticles in Medicine and Pharmacy, Ed. Donbrow M., CRC Press Boca Raton London 1992, 281297.

4. Naval J., Villacampa M.-J., Goguel A.-F. and Uriel J. Cell-type specific receptor for alpha-fetoprotein in a mouse T-lymphoma cell line. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 1985, 82, p. 3301-3305.

5. Douglas S.J., Davis S.S., Ilium L. Nanoparticles in drug delivery. Crit. Rev. Ther. Drug Carrier Syst., 3, 233-256, 1987.

6. Bundgaard H. Design of Prodrugs, Elsevier, Amsterdam, 1985.

7. Duncan R. Lysosomal degradation of polymers used as drug carriers. Crit. Rev. Biocompat., 2, 127-135, 1986.

8. Kopecek J., Duncan R., Targetable polymeric prodrugs. J. Control. Rel., 6,315-323, 1987.

9. Tomlinson E. Theory and practice of site-specific drug delivery. Adv. Drug Deliv. Rev., 1, 87-104, 1987.

10. Drobnik J., Rypacek F. Soluble synthetic polymers in biologic systems. Adv. Polymer Sci., 57, 2, 1984.

11. Joyner W.L. Kern D.F. Microvascular permeability to macromolecules and its dynamic modulation. Adv. Drug Deliv. Rev., 4, 319-325, 1990.

12. Seymour L.W., Ulbrich K., Strohalm J., Kopecek J., Duncan R. Pharmacokinetics of polymer-bound adriamycin, Biochem. Pharmacol., 39, 1125-1143, 1990.

13. Mayerson H.S., Wolfram C.G., Shirley H.H., Wasserman K. Regional differences in capillary permeability. Am. J. Physiol., 198, 155 163, 1960.

14. Bundgaard M. Transport pathways in capillaries in search of pores. Annu. Rev. Physiol, 42, 325-335, 1980.

15. Palade G.E., Simionescu M, Simionescu N. Transport of solutes across the vascular endothelium, in Transport of Molecules in Cellular Systems, Silverstein S.C., Ed. Dahlem Konferenzem, Berlin, 1978.

16. Firrell J.C., Lewis G.P., Youlten L.J.F. Vascular permeability to macromolecules in rabbit paw and sceletal muscle: a study with a mathematical interpretation of transport processes. Microvasc. Res., 23, 294-299, 1982.

17. Renkin E.M. Multiple pathways of capillary permeability. Circ. Res., 41, 735-757, 1978.

18. Taylor A.E. Granger D.N. Exchange of macromolecules across the microcirculation, in Handbook of Physiology, Vol. 6, Microcirculation, Part 1, Renkin E.M., Michel C.C. Eds., Waverly Press, Baltimore, MD, 1984, 467-477.

19. Wagner r.C., Casley-Smith J.R. Endothelial vesicles, Microvasc. Res., 21,267, 1981.

20. S.K. Hobbs, F. Yuan, L.G. Cima, R.K. Jain, Tumor microvascular pore cutoff size: Implications for macromolecules and particle drug delivery, Int. J. Microcirc.: Clin Exp. 16 (Supp. 1) (1996), 218.

21. Rippe B., Kamiya A., Folkow B. Transcapillary passage of albumin, effects of tissue cooling and increase in filtration and plasma colloid osmotic pressure. Acta Physiol. Scand., 105, 171-178, 1979.

22. Robinson P.J. Osmotic opening of the blood-brain barrier and brain tumor chemotherapy. Methods in Neurosciences, 21, 35-50, 1994.

23. Bocci V. Catabolism of therapeutic proteins and peptides with implications for drug delivery. Adv. Drug Deliv. Rev., 4, 149-161, 1990.

24. Rypacek F., Drobnic J., Chmelar V., Kalal J. The renal excretion and retention of macromolecules; the chemical structure effect. Pfluegers Arch., 392,211-218, 1982.

25. Arfors K.-E., Rutili G., Svensjo E. Microvascular transport of macromolecules in normal and inflammatory conditions. Acta Physiol. Scand., 463, 93-99, 1979.

26. Majno G., Palade G.E. Studies on inflammation. 1. The effect of histamine and serotonin on vascular permeability: an electron microscopy study. J. Biophys. Biochem. Cytol., 11, 607-613, 1961.

27. Fox J., Galey F., Wayland H. Action of histamine on the mesenteric microvasculature, Microvasc. Res., 19, 108-114, 1980.

28. Grega G.J., Adamski S.W., Svensjo E. Is there evidence for venular large junctional gap formation in inflammation? Microcirc. Endothelium Lymphatics, 2, 211-218, 1985.

29. Love W.G., Farr S.J., Kellaway I.W., Williams B.D. Liposome accumulation within inflamed tissue: gamma scintigraphic evidence, Proc. Int. Symp. Control Rel. Bioact. Mater., 17, 377-382, 1990.

30. Seale L., Love W.G., Williams B.D., Kellaway I.W. Accumulation of polymers within inflammatory tissue. Proc. Int. Symp. Control. Rel. Bioact. Mater., 18, 386-389, 1991.

31. Love W.G., Amos N., Kellaway I.W., Williams B.D. Specific accumulation of cholesterol-rich liposomes in the inflammatory tissue of rats with adjuvant arthritis. Ann. Rheum. Dis., 49, 611-618, 1990.

32. Larsen G.L., Henson P.M. Mediators of inflammation, Annu. Rev. Immunol., 1,335-341, 1983.

33. Dvorak H.F., Nagy J.A., Dvorak A.M. Structure of solid tumors and their vasculature implications for therapy with monoclonal antibodies. Cancer Cells, 3, 77-85,1991.

34. Blood C.H., Zetter B.R. Tumor interactions with the vasculature: angiogenesis and tumor metastasis, Biochim. Biophys. Acta, 1032, 8995, 1990.

35. Dewey W.C. Vascular-extravascular exchange of I-plasma proteins in the rat. Am. J. Physiol., 197, 423-431, 1959.

36. Song C.W., Lewitt S.H. Quantitative study of vascularity in walker carcinoma 256, Cancer Res, 31, 587-595, 1971.

37. Ackerman N.B., Hechmer P.A. Studies on the capillary permeability of experimental liver metastases. Surg. Gynecol. Obstet., 146, 884-890, 1978.

38. O'Connor S.W., Bale W.F. Accessibility of circulating immunoglobulin G to the extravascular compartment of solid rat tumors. Cancer res., 44, 3719-3722,1984.

39. Heuser L.S., Miller F.N. Differential macromolecular leakage from the vasculature of tumors. Cancer, 57, 461-468, 1986.

40. Underwood J.C.E., Carr I. The ultrastructure and permeability characteristics of the blood vessels of a transplantable rat sarcoma. J. Pathol., 107, 157-164, 1972.

41. Ward J.D., Hadfield M.G., Becker D.P., Lovings E.T. Endothelial fenestrations and other vascular alterations in primary melanoma of the central nervous system. Cancer, 34, 1982-1991, 1974.

42. Yamada K., Ushio Y., Hayakawa T., Kato A., Yamada N., Mogami H. Quantitative autoradiographic measurements of blood-brain permeability in the rat glioma model. J. Neurosurg., 57, 394-400, 1982.

43. Peterson H.I. Tumor Blood Circulation, CRC Press, Boca Raton, FL, 1979.

44. Dvorak H.F., Nagy J.A., Dvorak J.T., Dvorak A.M. Identification and characterization of the blood vessels and fibrin deposition. Am J. Pathol, 133, 95-104, 1988.

45. Nagy J.A., Brown L.F., Senger D.R., Lanir N., Van der Water L., Dvorak A.M., Dvorak H.F. Pathogenesis of tumor stroma generation: a critical role for leaky blood vessels and fibrin deposition. Biochim. Biophys. Acta, 948, 305-313, 1988.

46. Brown L.F., Dvorak A.M., Dvorak H.F. Leaky vessels, fibrin depositions and fibrosis a sequence of events common to solid tumors and to many other types of disease. Am. J. Resp. Dis., 140, 1104-1112, 1989.

47. Senger D.R., Peruzzi C.A., Feder J., Dvorak H.F. A highly conserved vascular permeability factor secreted by a variety of human and rodent tumor cell lines. Cancer Res., 46, 5629-5634, 1986.

48. Jain R.K. Delivery of molecular and cellular medicine to solid tumors. J. Cont. Rel. 53, 49-67, 1998.

49. Jain R.K. Vascular and interstitial barriers to the delivery of therapeutic agents in tumors. Cancer Metastat Rev., 9, 253-257, 1991.

50. Jain R.K. Transport of molecules in the tumor interstitium: a review, Cancer Res., 47, 3039-3051, 1987.

51. Chang R.L.S., Veki I.F., Troy J.L., Deen W.M., Robertson C.R., Brenner B.M. Permselectivity of the glomerular capillary wall to macromolecules. II. Experimental studies in rats using neutral dextran. Biophys. J., 15, 887-898, 1975.

52. Ulbrich K., Konak C., Tuzar Z, Kopechek J. Solution properties of drug carriers based on poly(N-(2-hydroxypropyl)methaciylamide) containing biodegradable bonds. Macromol. Chem., 188-195, 1261, 1987.

53. Sprincl L, Exner J, Sterba O, Kopecek J. New types of synthetic infusion systems. III. Elimination and retention of poly(N-(2-hydroxypropyl)methacrylamide in a test organism. J. Biomed. Mater. Res. 10, 953-957, 1976.

54. Renkin E.M, Gilmore J.P. Glomerular filtration, in Handbook on Physiology, Sect. 8, Orloff J. and Bekker R.W, Eds, Waverly Press, Baltimore, MD, 1973, 185-198.

55. Rennke H.G, Venkatachalam M.A. Glomerular permeability of macromolecules. Effect of molecular configuration on the fractional clearance of uncharged dextrans and neutral horseradish peroxidase in the rat. J. Clin. Invest., 63, 713-719, 1979.

56. Hardwicke J, Hulme B, Henry Jones J, Ricketts C.R. Measurement of glomerular permeability to polydisperse radioactivity-labelled macromolecules in normal rabbits. Clin. Sci, 34, 505-511, 1968.

57. DeGennes P.I. Reptilation of a polymer chain in the presence of fixed obstacles. J. Chem, Phys, 55, 572-575,1971.

58. Bohrer M.P., Deen W.M., Robertson D.R., Troy J.L., Brenner B.M. Influence of molecular configuration on the passage of macromolecules across the glomerular capillary wall. J. Gen. Physiol., 74, 583-591, 1979.

59. Jargensen K.E., Moller J.V. Use of flexible polymers as probes of glomerular size. Am. J. Physiol., 236, F103, 1979.

60. Brenner B.M., Beeuwkes R. The renal circulations. Hosp. Pract., 35, 4651, 1978.

61. Bohrer M.P., Baylis C., Humes H.D., Glassock R.J., Robertson C.R., Brenner B.M. Permselectivity of the glomerular capillary wall. Facilitated filtration of circulating polycations. J. Clin. Invest., 61, 7281, 1978.

62. Michels L.D., Davidman M., Keane W.F. Glomerular permeability to neutral and anionic dextrans in experimental diabetes. Kidney Int., 21, 699-707, 1982.

63. Pietra G.G., Fishman A.P., Lanken P.N., Sampson P.M., HansenFlaschen J. Permeability of pulmonary endothelium to neutral and charged macromolecules. Ann. N.Y. Acad. Sci., 401, 241-247, 1982.

64. Kern D.F., Bell D.R., Blumenstock F.A. The effect of charge on albumin permeability and uptake in the lung. Microvasc. Res., 3, A241, 1983.

65. Deen W.M., Satvat B., Jamieson J.M. Theoretical model for glomerular filtration of charged solutes. Am. J. Physiol., 238, F126, 1980.

66. Kern D.F., Swanson J.A. Determinants of charge selectivity across pulmonary microvasculature, FASEB J., 3, A1390, 1989.

67. Lanken P.N., Hansen-Flaschen J.H., Sampson P.M., Pietra G.G., Haselton F.R., Fishman A.P. Passage of imcharged dextrans from blood to lymph in awake sheep. J. Appl. Physiol., 59, 580-587, 1985.

68. Matsumura Y., Maeda H. A new concept for macromolecular therapeutics in cancer therapy: mechanism of tumoritropic accumulationof proteins and the antitumor agent SMANCS, Cancer Res., 44, 238244, 1984.

69. Jain R.K., Baxter L.T. Mechanisms of heterogeneous distribution of monoclonal antibodies and other macromolecules in tumor: significance of interstitial pressure. Cancer Res., 48, 7022-7032, 1988.

70. Clauss M.A., Jain R.K. Interstitial transport of rabbit and sheep antibodies in normal and neoplastic tissues. Cancer Res., 50, 3487-3495, 1990.

71. Nugent L.J., Jain R.K. Extravascular diffusion in normal and neoplastic tissue, Cancer Res., 44, 238-244, 1984.

72. Gerlowski L.E., Jain R.K. Microvascular permeability of normal and neoplastic tissues, Microvasc. Res., 31, 288-300, 1986.

73. Knudson W., Biswas C., Li X.-Q., Nemec R.E., Toole B.P. The role and regulation of tumour-associated hyaluronan, in The Biology of Hyaluronan, Evered, D., Wlielan J., Eds., Ciba Foundation Symposium No 143, Wiley, Chichester, U.K., 1989, 150-161.

74. Poste G. Drug targeting in cancer chemotherapy, in Receptor-Mediated Targeting of Drugs, Gregoriadis G., Poste G., Senior J., Trouet A., Eds., Plenum Press, New York, 1985, 427-465.

75. Babson A.L., Winnick T., Protein transfer in tumor-bearing rats. Cancer Res., 14, 606-609, 1954.

76. Hradec J. Metabolism of serum albumin in tumor-bearing rats. Br. J. Cancer, 12, 290-298, 1961.

77. Day E.D., Planinsek J. A., Pressman M.D. Localisation of radioiodinated rat fibrinogen in transplanted rat tumors. J. Natl. Cancer. Inst., 23, 799806, 1959.

78. Dewey W.C., Bale W.F., Rose R.C., Marrack D. Localisation of antifibrin antibodies in human tumors. Acta Un. Int. Contra Cancrum, 19, 185-192, 1963.

79. Rossing N. Albumin metabolism in neoplastic diseases. Scand. J. Clin. Invest., 22, 211-220,1968.

80. Peterson H.I., Appelgren K.L. Experimental studies on the uptake and retention of labelled proteins in a rat tumor. Eur. J. Cancer, 9, 543-551, 1973.

81. Shibata K., Okubo H., Ishibashi H., Tsuda-Kawamura K., Yanase I. Rat glycoprotein: uptake by inflammatory and tumor tissue. Br. J. Exp. Pathol., 59, 601,1978.

82. Butler T.P., Grantham F.H., Gullino P.M. Bulk transfer of fluid in the interstitial compartment of mammary tumors. Cancer Res., 35, 30843092, 1975.

83. Busch H., Greene H.S.N. Studies on the metabolism of plasma proteins in tumor-bearing rats. Yale J. Biol. Med., 27, 339-347, 1955.

84. Busch H., Fujiwara E., Firszt D.C. Studies on the metabolism of radioactive albumin in tumor-bearing rats. Cancer Res., 21, 371-378, 1961.

85. Som P., Ostor Z.H., Matsui K., Guglielmi G., Persson B.R.R., Pellettieri M.L., Srivastava S.C., Richards P., Atkins H.L., Brill A. 97Ru-transferrin uptake in tumor and abscess. Eur. J. Nucl. Med., 8, 491-499, 1983.

86. Cerrotini J.C., Isliker H. Transport d'agents cytostatique par les proteins plasmatiques. I. Penetration de la serumalbumine dans les cellules tumorales. Eur. J. Cancer, 3, 111-118,1967.

87. DeCarvalho S., Rand H.J., Lewis A. Coupling of cyclic chemotherapeutic compounds to immune gamma-globulins. Nature, 202, 255-265, 1964.

88. Magnenant S., Schindler R., Isliker H. Transport d'agents cytostatique par les proteins plasmatiques. III. Activite antitumorale in vitro de conjugates cytostatique-azoproteines. Eur. J. Cancer, 5, 33-41, 1969.

89. Seymour L.W. Passive tumor targeting of solute macromolecules and drug conjugates. CRC Crit. Rev. Tlier. Drug Carrier Sys., 9, 135-187, 1992.

90. Szekerke M., Wade R., Whisson M.E. The use of macromolecules as carriers of cytotoxic drugs. I. Conjugates of nitrogen mustards with proteins, peptidylproteins and polypeptides. Neoplasma, 19, 199-207, 1972.

91. Szekerke M., wade R., Whisson M.E. The use of macromolecules as carriers of cytotoxic drugs. III. Nitrogen mustard-protein complexes. Neoplasma, 19, 211-221, 1972.

92. Pittman R.C., Carew T.E., Glass C.K., Green S.R., Taylor C.A. Jr., Attie A.D. A radioiodinated intracellulary trapped ligand for determining the sites of plasma protein degradation in vivo. Biochem J., 212, 791799, 1983.

93. Sinn H., Schrenk H.H., Friedrich E.A., Schilling U., Maier-Borst W. Design of compounds having an enhanced tumor uptake, using serum albumin as carrier. Nucl. Med. Biol. 17, 819-825, 1990.

94. Takakura Y., Fujita T., Hashida M., Sezaki H. Disposition characteristics of macromolecules in tumor-bearing mice. Pharm.Res., 7, 339-348, 1990.

95. Maeda H., Takeshita J., Yamashita A. Lymphotropic accumulation of an antitumor antibiotic protein neocarzinostatin. Eur. J. Cancer, 16, 723728, 1980.

96. Kobayashi A., Oda T., Maeda H. Protein binding of macromolecular anticancer agent SMANCS: characterization of poly(styrene-co-maleic acid) derivatives as an albumin-binding ligand. J. Bioact. Compat. Polymers, 3, 319-328, 1989.

97. Maeda H., Polymer conjugated macromolecular drugs for tumor-specific targeting, in Polymer Site-Specific Pharmacotherapy A.J. Domb, Ed. John Wiley&Sons Ltd., New York, 1994, 95-116.

98. Duncan R., Folkman J., Regelson W. SMANCS, Jpn. J. Cancer Res. 86, 1234-1235, 1995.

99. Maeda H., Matsumoto T., Konno T., Iwai K., Ueda M. Tailor-making of protein drugs by polymer-conjugation for tumor targeting: a brief review on SMANCS. J. Protein Chem., 3, 181-191, 1984.

100. Ohtsuka N., Konno T., Miyauchi Y., Maeda H. Anticancer effects of arterial administration of the anticancer agent SMANCS with lipiodol on metastatic lymph nodes, Cancer, 59, 1560-1567, 1987.

101. Matsumura Y., Kimura K., Yamamoto T., Maeda H. Involvement of kinin-generated cascade in enhanced vascular permeability in tumor tissue. Jpn. J. Cancer Res., 79, 1327-1335, 1988.

102. Goldberg J.A., Murray T., Kerr D.J., Willmott N. The use of angiotensin II as a potential method of targeting cytotoxic microspheres in patients with intrahepatic tumour. Br. J. Cancer, 63, 308-317, 1991.

103. Tokunaga Y., Iwasa T., Fujisaki J., Sawai S., Kagayama A. Liposomal sustained release delivery systems for intravenous injection. III. Antitumor efficacy of lipophilic Mitomycin C prodrug-bearing liposomes. Chem Pharm. Bull., 36, 3565-3571, 1988.

104. Sasaki H., Kakutani T., Hashida M., Sezaki H. Caracterization of liposomes and an emulsion containing mitomycin C or lipophilic mitomycin C prodrugs. J. Pharm. Sci., 75, 1166-1173, 1986.

105. Kaneo Y., Tanaka Y., Hashida M., Kimura T., Sezaki H. Physicochemical and antitumor characteristics of high molecular weight prodrugs of mitomycin C. Chem Pharm. Bull., 30, 2951-2960, 1982.

106. Takakura Y., Matsumoto S., Hashida M., Sezaki H. Physicochemical properties and antitumor activities of polymeric prodrugs of mitomycin C with different regenerated rates. J. Cont. Rel. 10, 97-106,1989.

107. Duncan R., Dimitrijevic S., Evagorou E.G. The role of polymer conjugates in the diagnosis and treatment of cancer. S.T.P. Pharma 6(4), 237-263, 1996.

108. Yeung T.K., Hopewell J.W., Rezzani G., et al. Reduced cardiotoxicity of doxorubicin administered in the form of N-(hydroxypropyl)methacrylamide conjugates: an experimental study in the rat. Cancer Chemother. Pharmacol., 29, 105-111, 1991.

109. Bibby M.C. Double J.A., Duncan R. Activity of polymer-bound doxorubicin PK1 and doxorubicin in experimental murine colon tumors. Proc 1st Int. Symp. on Polymer Therapeutics , London, 1996.

110. Lowry O.H., Rosenbrough N.J., Farr A.L., Randall R.J. Protein measurement with Folin phenol reagent. J.Biol. Chem. 1951,193, 265-275.

111. Mosmann T. Rapid colorimetric assay for cellular growth and survival: application to proliferation and cytotoxity assays. J. Immunol. Meth, 1983, 65, 55-63.

112. Kopecek J, Kopecekova P, Minko T, Lu Z-R HPMA copolimer-anticancer drug conjugates: design, activity, and mechanism of action. Eur., J., of Phar., and Biopharm. 2000, 50,61-81.

113. H. Soyes, E. Schacht, S. Vanderkerken The crucial role of spacer groups in macromolecular prodrug design. Adv. Drug Delivery Rev. 1996,21,81-106.

114. Shen W.C. and Ryser H.J.P. Cis-aconitil spacer between daunomycin and macromolecular carriers: a model of pH-sensitive linkage releasing drug from a lysosomotropic conjugate. Biochem. Byophys. Res. Commun. 1981, 102, 1048-1054.

115. Ringsdorf H, Structure and properties of pharmacologically active polymers. J. Polym. Sci. Polym. Symp. 1975, 51, 135-153.

116. De Marre A., Soyez H., Scacht E., Shoaibi M.A., Seumour L.W., Rihova B. Synthesis and evaluation of macromolecular prodrugs of mitomycin C. J. Cont. Rel., 36, 87-97, 1995.

117. Vasey P., Duncan R., Twelves C., Kaye S.B., Strolin-Benedetti M, Cassidy J. Clinical and pharmacokinetical phase I study of PK1 (HPMA) copolymer of doxorubicin. Annals of oncology, 7, 97-112, 1996.

118. Duncan R., Drug-polymer conjugates: potential for improved chemotherapy. Anti-Cancer Drugs, 3, 175-210, 1992.

119. Cassidy J., Duncan R., Morrison G.J., Strohalm J., Plocova D., Kopecek J., Kaye S.B. Activity of N-(hydroxypropyl)methacrylamide copolymers containing daunomycin against a rat tumor model. Biochem. Pharmacol., 38, 875-879, 1989.

120. Duncan R., Seymour L.W., O'Hare K.B. et al. Preclinical evaluation of polymer-bound doxorubicin. J. Cont. Rel. 19, 331-346, 1992.

121. O'Hare K.B., Duncan R., Strohalm J., Ulbrich K., Kopeckova P. Polymeric drug carriers containing doxorubicin and melanocyte stimulating hormones: in vitro and in vivo evaluation against murine melanoma. J. Drug Targeting, 1, 217-229, 1993.

122. Kreuter J. Nanoparticles in: Colloidal drug delivery systems. Ed. Kreuter J., Marcel Dekker, New York, 1994.

123. Couvreur P., Kante В., Lenaerts V., Scailteur V., Roland M. and Speiser P. Tissue distribution of antitumor drugs associated with polyalkylcyanoacrylate nanoparticles. J. Pharm. Sci., 1980, 69, 199202.

124. Okawa K., Hatano Т., Yamada K., Joh K., Takada K., Tsukada Y. and Matsuda M. Bovine serum albumin-doxorubicin conjugate overcomes multidrug resistance in a rat hepatoma. 1993, 53, 42384242.

125. Tores J.M., Geuskens M., Uriel J Activated human T lymphocytes express albumin binding proteins which cross-react with alpha-fetoprotein. Eur.J.of Cell Biology 1992, 57, 222-228.

126. Alava M., Iturralde M., Lampreave F., Pineiro A. Specific uptake of alfa-fetoprotein and albumin by rat Moriss 777 hepatoma cells. Tumor Biology 1999, 20, 52-64.

127. Платэ H.A., Васильев A.E. Физиологически активные полимеры. Москва «Химия», 1986, 234с.

128. Мануйлов К.К., Кашина Л.Б. Новый метод расчета коэффициента распределения ткань-кровь для физиологическихмоделей фармакокинетики. Антибиотики и химиотерапия, 1990, № 5, с. 35-36.

129. Скидан И.Н., Тихонова Е.В., Гуляев А.Е и др. Химико-биологические аспекты направленного транспорта лекарственных веществ на полимерной основе. В кн.: Поиск и создание методов получения фитопрепаратов. Алматы, 1997, С321-333.росс;; TOCЛ;-'