Влияние функциональных элементов в лидерах прокариотических мРНК на эффективность инициации трансляции тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.03, кандидат биологических наук Комарова, Анастасия Васильевна

  • Комарова, Анастасия Васильевна
  • кандидат биологических науккандидат биологических наук
  • 2003, Москва
  • Специальность ВАК РФ03.00.03
  • Количество страниц 127
Комарова, Анастасия Васильевна. Влияние функциональных элементов в лидерах прокариотических мРНК на эффективность инициации трансляции: дис. кандидат биологических наук: 03.00.03 - Молекулярная биология. Москва. 2003. 127 с.

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Комарова, Анастасия Васильевна

Содержание

Список сокращений

Общая характеристика работы

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ. Структурно-функциональные элементы в областях инициации трансляции мРНК и современные модели образования инициаторных комплексов у прокариот

1. Введение. Современные представления об инициации трансляции у прокариот и эукариот - сходство и различия

2. Каноническая схема инициации трансляции прокариотических мРНК

2.1. Участок связывания рибосомы (RBS)

2.2. Трансляционный инициаторный район (ТИР)

2.3. Роль вторичной структуры мРНК в RBS и ТИР

2.4. ТИР и возможные механизмы трансляционного усиления

2.4.1. Существует ли downstream box?

2.4.2.Трансляционные энхансеры в 5'-НТО и механизмы усиления трансляции

Полифункциональность рибосомного белка S

Строение и свойства белка S

Белок S1 и инициация трансляции

3. Неканонические механизмы инициации трансляции у прокариот

3.1. Примеры трансляции в отсутствие последовательности Шайна-Дальгарно

3.2. Примеры усложненных RBS и позитивная роль вторичной структуры в инициации трансляции

3.3. Область инициации трансляции мРНК белка малой субчастицы рибосомы S

3.4. Инициация трансляции на мРНК, не имеющих лидерной последовательности (безлидерных)

Рекомендованный список диссертаций по специальности «Молекулярная биология», 03.00.03 шифр ВАК

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Влияние функциональных элементов в лидерах прокариотических мРНК на эффективность инициации трансляции»

2. Эффективность трансляции мРНК, содержащих сильный SD-домен43

2.1. Выбор RBS.43

2.2. Создание хромосомных конструкций для оценки выхода белка с одной копии гена45

2.3. Результаты измерения р-галактозидазной активности в полученных рекомбинантных штаммах 48

2.4. Проверка эффективности образования тройного инициаторного комплекса in vitro с помощью метода тоупринт-анализ49

2.5. Возможные причины ингибирующего влияния протяженных SD дуплексов на трансляцию55

3. Эффективность трансляции мРНК, содержащих A/U-богатые участки в

5'-сторону от протяженной SD-последовательности 57

3.1. Антитерминация транскрипции оперонов рибосомных РНК. БоксА-элемент и его функциональные комплексы с клеточными белками57

3.2. Оценка эффективности образования трансляционного инициаторного комплекса in vivo и in vitro 61

3.3. Применение метода торможения в геле для оценки аффинности S1 к мРНК лидерам, содержащим и не содержащим трансляционные энхансеры 65

3.4. Биологический смысл A/U богатых последовательностей в лидерах прокариотических мРНК68

3.5. О возможной роли белка S1 в процессе антитерминации транскрипции 70

4. Зависимость стабильности мРНК от строения 5'-НТО 73

5. Заключение 83

Глава 3. МЛ ТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ86

1. Материалы и оборудование86

1.1. Ферменты и реактивы 86

1.2. Оборудование87

1.3. Расходные материалы88

1.4. Буферные и другие растворы88

1.5. Микробиологические среды90

1.6. Концентрации антибиотиков: 91

1.7. Олигонуклеотиды, использованные в работе:91

1.8. Штаммы и плазмиды 92

2. Методы93

2.1. Получение плазмидных конструкций для экспериментов in vivo и in vitro93

2.2. Эксперименты in vivo95

Трансформация95

Гомологическая рекомбинация96

Р1-трансдукция97

А. Приготовление фагового лизата97

Б. Трансдукция с исползованием Р1-фаголизатов98

Измерение активности (3-галактозидазы в клеточных экстрактах99

Определение количества белка по методу Брэдфорд (Bradford)100

Выделение РНК из клеток для Нозерн блот-гибридизации: 100

2.3. Эксперименты in vitro101

Нозерн-блот гибридизация 101

ДНК-зонды для гибридизации:102

Анализ комплексов Sl-мРНК методом торможения в геле103

ДСН-ПААГ- электрофорез белков по методу Лэммли:105

Анализ формирования 30S-mPHK-tPHKIMc1 инициаторного комплекса in vitro тоупринтинг)106

Секвенирование вставок в вектор pEMBLA46 по Сэнгеру:108

Выводы 110

Список литературы111

Благодарности12 7

Список сокращений

НТО -нетранслируемая область

RBS - участок связывания рибосомы на мРНК (ribosome binding site)

TIR (ТИР) - трансляционный инициаторный район (translation initiation region)

SD - последовательность Шайна-Дальгарно

SELEX - Sistematic Evolution of Ligands by Exponential Enrichment pPHK - рибосомная рибонуклеиновая кислота тРНК - транспортная рибонуклеиновая кислота мРНК — матричная рибонуклеиновая кислота т.п.о. - (kilobase) - тыс. пар оснований п.о. - (base pairs) - пара оснований н.о.- нуклеотидный остаток ак.о.- аминокислотный остаток ед.акт. - единица активности

PCR или ПЦР - полимеразная цепная реакция dNTP- 2' -дезоксирибонуклеозид-5' -трифосфат ddNTP- 2',3'-дидезоксирибонуклеозид-5 '-трифосфат

ПААГ- полиакриламидный гель мкМ, цМ - микромолярная концентрация мМ, тМ- миллимолярная концентрация пмоль - пикомоль мкл - микролитр нм - нанометр

RT - ревертаза, обратная транскриптаза (reverse transcriptase)

Ampr и Amps - ампициллин резистентные и ампициллин чувствительные клеточные культуры

Tetr - тетрациклин резистентные клеточные культуры

X-gal - 5-бромо-4-хлоро-3-индолил-р-В-тиогалактопиранозид

IPTG - индуктор (3-галактозидазы - изопропил-Р-О-тиогалакгопиранозид

30S - малая рибосомная субчастица

ВВ и ХС - маркеры-красители бромфеноловый голубой и ксиленцианол ONPG - ортонитрофенил-р-Б-галактозид

Общая характеристика работы

Актуальность проблемы. Эффективность белкового синтеза у прокариот зависит от эффективности инициации трансляции. Информация о том, как эффективно будет узнаваться мРНК малой субчастицей рибосомы, закодирована, главным образом, в структурно-функциональных элементах ее лидерных последовательностей. В общепринятой модели инициации трансляции ведущая роль в образовании инициаторных комплексов отводится последовательности Шайна-Дальгарно (SD), пурин-богатому участку перед инициаторным кодоном, образующему комплементарный дуплекс с 3'-концевой последовательностью 16S рРНК. В то же время, многие прокариотические мРНК эффективно транслируются и в отсутствие SD-последовательности. Имеющаяся информация о так называемых энхансерных элементах в 5'-нетранслируемых областях (5'-НТО) мРНК пока не обобщена в виде модели, так как механизмы трансляционного усиления все еще дискутируются. Таким образом, фундаментальные исследования молекулярных механизмов белкового синтеза представляют несомненную актуальность, поскольку до сих пор невозможно создать алгоритм, позволяющий предсказать эффективность инициации трансляции, а, следовательно, и процесса в целом, исходя из первичной структуры мРНК.

Цель и задачи работы. В узнавании мРНК рибосомой на этапе инициации трансляции принимают участи два компонента малой субчастицы рибосом - 3'-концевой участок 16S рРНК (aHTHSD), связывающий SD-последовательность, и рибосомный белок S1. Согласно данным, ранее полученным в нашей группе [Boni et al. 1991; Tzareva et al. 1994; Artamonova et al. 1998], белок SI взаимодействует с U- или A/U-богатыми участками в мРНК-лидерах, которые выполняют функцию трансляционных усилителей (энхансеров). Целью настоящей работы явилась оценка вклада РНК-РНК (SD-aHraSD) и РНК-белковых (Sl-мРНК) взаимодействий в эффективность трансляции. Для этого были поставлены следующие задачи:

1. Оценить вклад сильных SD-взаимодействий в эффективность трансляции in vivo.

2. В экспериментах in vitro (тоупринт-анализ) исследовать зависимость образования инициаторных комплексов на мРНК с протяженными SD-последовательностями от присутствия рибосомного белка S1.

3. Изучить влияние A/U-богатых участков-мишеней для белка S1 на эффективность трансляции мРНК с протяженными SD-элементами in vivo и образование инициаторных комплексов in vitro.

4. Исследовать зависимость стабильности мРНК от строения 5'-нетранслируемой области (от присутствия протяженных SD-элементов и S1-мишеней).

Научная новизна и практическая ценность работы. Для выполнения поставленных в работе задач была использована совокупность экспериментов in vivo и in vitro, позволяющая соотнести наблюдаемые in vivo эффекты с определенными молекулярными взаимодействиями. С помощью такого подхода в работе получены новые данные о негативном влиянии SD-последовательности с избыточной комплементарностью к 3'- концевому участку 16S РНК на эффективность трансляции in vivo; впервые показаны строгая необходимость присутствия рибосомного белка S1 при инициации трансляции даже при наличии протяженного SD-домена и способность белка S1 модулировать SD взаимодействия; найдена прямая корреляция между аффинностью белка S1 к мРНК-лидерам и эффективностью трансляции и показана возможность повышения продуктивности белкового синтеза при встраивании A/U-богатых S1 -мишеней в 5'-сторону от протяженного SD-домена; наконец, получены новые данные о том, что стабильность мРНК определяется, главным образом, эффективностью ее трансляции. Результаты работы позволили впервые представить экспериментально-обоснованную динамическую модель инициации трансляции, описывающую роль Sl-мРНК и SD-взаимодействий при образовании инициаторных комплексов in vivo. Полученные в работе данные об эффективности трансляции мРНК, содержащих сильный SD-домен, и о роли A/U-богатых элементов в лидерных последовательностях прокариотических мРНК могут быть использованы при оптимизации генно-инженерных конструкций для экспрессии гетерологичных генов в E.coli.

Публикация и апробация работы. По теме диссертационной работы опубликовано две статьи и одна статья готовится к печати. Материалы диссертации докладывались на Международном симпозиуме для студентов и аспирантов «Ломоносов-99», г. Москва, Россия, 1999 г.; на Международной школе "Advanced Bacterial Genetics Course" (CSHL) Колд Спринг Харбор, США, 2001г.; на 7-ой Международной конференции Общества РНК (RNA Society) «RNA 2002»,

Висконсин-Мэдисон, США, 2002г.; на Международном симпозиуме «Нетранслируемая РНК: роль в трансляции и регуляции генов" г. Осуа, Франция, 2003г.

Структура и объем работы. Диссертационная работа изложена на страницах машинописного текста и содержит следующие разделы: введение,

Похожие диссертационные работы по специальности «Молекулярная биология», 03.00.03 шифр ВАК

Заключение диссертации по теме «Молекулярная биология», Комарова, Анастасия Васильевна

Выводы

1. Протяженная SD-последовательность негативно влияет на эффективность трансляции in vivo.

2. Присутствие рибосомного белка S1 в составе 308-субчастиц рибосом E.coli строго необходимо для формирования инициаторного комплекса на мРНК с протяженным SD-доменом.

3. Рибосомный белок S1 модулирует SD-взаимодействия, препятствуя образованию 10-звенного SD-дуплекса.

4. Сродство белка S1 к лидерными последовательностями прямо коррелирует с эффективностью трансляции мРНК in vivo.

5. Встраивание A/U- богатых мишеней для белка S1 в 5'-сторону от протяженного SD-домена приводит к повышению продуктивности белкового синтеза.

6. Sl-зависимое связывание лидеров мРНК является первым событием в инициации белкового синтеза, за которым следует образование SD-дуплекса (взаимодействие mPHK-16S рРНК) и попадание инициаторного кодона в Р-сайт рибосомы, где он связывается с инициаторной тРНК кодон-антикодоновыми взаимодействиями.

7. Сильного взаимодействия рибосом с инициаторной областью мРНК недостаточно для стабилизации lacZ мРНК E.coli\ стабильность этой мРНК может быть обеспечена только эффективной трансляцией.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Комарова, Анастасия Васильевна, 2003 год

1. Adhya, S. and M. Gottesman (1978). "Control of transcription termination." Annu Rev Biochem 47: 967-96.

2. Artamonova, V. S., N. V. Tsareva and I. V. Boni (1998). "Regulation of synthesis of ribosomal protein L7-L12: role of intercistronic rplJL region as an enhancer of translation." Bioorg Khim 24(7): 530-8.

3. Balakin, A. G., S. L. Bogdanova and E. A. Skripkin (1992). "mRNA containing an extended Shine-Dalgarno sequence is translated independently of ribosomal protein SI." Biochem Int 27(1): 117-29.

4. Balakin, A. G., E. A. Skripkin, I. N. Shatsky and A. A. Bogdanov (1992). "Unusual ribosome binding properties of mRNA encoding bacteriophage lambda repressor." Nucleic Acids Res 20(3): 563-71.

5. Bollen, A., R. Lathe, A. Herzog, D. Denicourt, J. P. Lecocq, L. Desmarez and R. Lavalle (1979). "A conditionally lethal mutation of Escherichia coli affecting the gene coding for ribosomal protein S2 (rpsB)." J Mol Biol 132(2): 219-33.

6. Boni, I. V., V. S. Artamonova and M. Dreyfus (2000). "The last RNA-binding repeat of the Escherichia coli ribosomal protein SI is specifically involved in autogenous control." J Bacteriol 182(20): 5872-9.

7. Boni, I. V., V. S. Artamonova, N. V. Tzareva and M. Dreyfus (2001). "Non-canonical mechanism for translational control in bacteria: synthesis of ribosomal protein S1." Embo J 20(15): 4222-32.

8. Boni, I. V., D. M. Isaeva, M. L. Musychenko and N. V. Tzareva (1991). "Ribosome-messenger recognition: mRNA target sites for ribosomal protein SI." Nucleic Acids Res 19(1): 155-62.

9. Boni, I. V., I. V. Zlatkin and E. I. Budowsky (1982). "Ribosomal protein SI associates with Escherichia coli ribosomal 30-S subunit by means of protein-protein interactions." Eur J Biochem 121(2): 371-6.

10. Braun, F., E. Hajnsdorf and P. Regnier (1996). "Polynucleotide phosphorylase is required for the rapid degradation of the RNase E-processed rpsO mRNA of Escherichia coli devoid of its 3' hairpin." Mol Microbiol 19(5): 997-1005.

11. Butler, J. S., M. Springer, J. Dondon, M. Graffe and M. Grunberg-Manago (1986). "Escherichia coli protein synthesis initiation factor IF3 controls its own gene expression at the translational level in vivo." J Mol Biol 192(4): 767-80.

12. Butler, J. S., M. Springer and M. Grunberg-Manago (1987). "AUU-to-AUG mutation in the initiator codon of the translation initiation factor IF3 abolishes translational autocontrol of its own gene (infC) in vivo." Proc Natl Acad Sci U S A 84(12): 4022-5.

13. Bycroft, M., T. J. Hubbard, M. Proctor, S. M. Freund and A. G. Murzin (1997). "The solution structure of the SI RNA binding domain: a member of an ancient nucleic acid-binding fold." СеД 88(2): 235-42.

14. Calogero, R. A., C. L. Pon, M. A. Canonaco and С. O. Gualerzi (1988). "Selection of the mRNA translation initiation region by Escherichia coli ribosomes." Proc Natl Acad Sci USA 85(17): 6427-31.

15. Carpousis, A. J., A. Leroy, N. Vanzo and V. Khemici (2001). "Escherichia coli RNA degradosome." Methods Enzymol 342: 333-45.

16. Carpousis, A. J., G. Van Houwe, C. Ehretsmann and H. M. Krisch (1994). "Copurification of E. coli RNAase E and PNPase: evidence for a specific association between two enzymes important in RNA processing and degradation." CeU 76(5): 889-900.

17. Castel, A., B. Kraal, A. Konieczny and L. Bosch (1979). "Translation by Escherichia coli ribosomes of alfalfa mosaic virus RNA 4 can be initiated at two sites on the monocistronic message." Eur J Biochem 101(1): 123-33.

18. Chang, A. C. and S. N. Cohen (1978). "Construction and characterization of amplifiable multicopy DNA cloning vehicles derived from the PI5A cryptic miniplasmid." JBacteriol 134(3): 1141-56.

19. Chen, H., M. Bjerknes, R. Kumar and E. Jay (1994). "Determination of the optimal aligned spacing between the Shine-Dalgarno sequence and the translation initiation codon of Escherichia coli mRNAs." Nucleic Acids Res 22(23): 4953-7.

20. Cho, К. O. and C. Yanofsky (1988). "Sequence changes preceding a Shine-Dalgarno region influence trpE mRNA translation and decay." J Mol Biol 204(1): 51-60.

21. Coburn, G. A. and G. A. Mackie (1999). "Degradation of mRNA in Escherichia coli: an old problem with some new twists." Prog Nucleic Acid Res Mol Biol 62: 55108.

22. Coburn, G. A., X. Miao, D. J. Briant and G. A. Mackie (1999). "Reconstitution of a minimal RNA degradosome demonstrates functional coordination between a 3' exonuclease and a DEAD-box RNA helicase." Genes Dev 13(19): 2594-603.

23. Cohen, S. N. and K. J. McDowall (1997). "RNase E: still a wonderfully mysterious enzyme." Mol Microbiol 23(6): 1099-106.

24. Cole, J. R. and M. Nomura (1986). "Changes in the half-life of ribosomal protein messenger RNA caused by translational repression." J Mol Biol 188(3): 383-92.

25. Comer, M. M., J. Dondon, M. Graffe, O. Yarchuk and M. Springer (1996). "Growth rate-dependent control, feedback regulation and steady-state mRNA levels of the threonyl-tRNA synthetase gene of Escherichia coli." J Mol Biol 261(2): 108-24.

26. Condon, C. (2003). "RNA Processing and Degradation in Bacillus subtilis." Microbiol. Mol. Biol. Rev. 67(2): 157-174.

27. Diwa, A., A. L. Bricker, C. Jain and J. G. Belasco (2000). "An evolutionarily conserved RNA stem-loop functions as a sensor that directs feedback regulation of RNase E gene expression." Genes Dev 14(10): 1249-60.

28. Donovan, W. P. and S. R. Kushner (1986). "Polynucleotide phosphorylase and ribonuclease II are required for cell viability and mRNA turnover in Escherichia coli K-12." Proc Natl Acad Sci U S A 83(1): 120-4.

29. Dreyfus, M. (1988). "What constitutes the signal for the initiation of protein synthesis on Escherichia coli mRNAs?" J Mol Biol 204(1): 79-94.

30. Dreyfus, M. and S. A. Joyce (2002). The Interplay Between Translation and mRNA Decay in Procaryotes: A Discussion on Current Paradigms. Translation Mechanisms. J. L. a. L. Brakier-Gingras: 21.

31. Dreyfus, M. and P. Regnier (2002). "The poly(A) tail of mRNAs: bodyguard in eukaryotes, scavenger in bacteria." Cell 111(5): 611-3.

32. Ehretsmann, C. P., A. J. Carpousis and H. M. Krisch (1992). "Specificity of Escherichia coli endoribonuclease RNase E: in vivo and in vitro analysis of mutants in a bacteriophage T4 mRNA processing site." Genes Dev 6(1): 149-59.

33. Ellinger, Т., D. Behnke, H. Bujard and J. D. Gralla (1994). "Stalling of Escherichia coli RNA polymerase in the +6 to +12 region in vivo is associated with tight binding to consensus promoter elements." J Mol Biol 239(4): 455-65.

34. Ellington, A. D. and J. W. Szostak (1990). "In vitro selection of RNA molecules that bind specific ligands." Nature 346(6287): 818-22.

35. Etchegaray, J. P. and M. Inouye (1999). "Translational enhancement by an element downstream of the initiation codon in Escherichia coli." J Biol Chem 274(15): 10079-85.

36. Fargo, D. С., M. Zhang, N. W. Gillham and J. E. Boynton (1998). "Shine-Dalgarno-like sequences are not required for translation of chloroplast mRNAs in

37. Chlamydomonas reinhardtii chloroplasts or in Escherichia coli." Mol Gen Genet 257(3): 271-82.

38. Farwell, M. A., M. W. Roberts and J. C. Rabinowitz (1992). "The effect of ribosomal protein S1 from Escherichia coli and Micrococcus luteus on protein synthesis in vitro by E. coli and Bacillus subtilis." Mol Microbiol 6(22): 3375-83.

39. Faxen, M., J. Plumbridge and L. A. Isaksson (1991). "Codon choice and potential complementarity between mRNA downstream of the initiation codon and bases 1471-1480 in 16S ribosomal RNA affects expression of glnS." Nucleic Acids Res 19(19): 5247-51.

40. Freier, S. M., R. Kierzek, J. A. Jaeger, N. Sugimoto, M. H. Caruthers, T. Neilson and D. H. Turner (1986). "Improved free-energy parameters for predictions of RNA duplex stability." Proc Natl Acad Sci U S A 83(24): 9373-7.

41. Gallie, D. R. and С. I. Kado (1989). "A translational enhancer derived from tobacco mosaic virus is functionally equivalent to a Shine-Dalgamo sequence." Proc Natl Acad Sci U S A 86(1): 129-32.

42. Gold, L. (1988). "Posttranscriptional regulatory mechanisms in Escherichia coli." Annu Rev Biochem 57: 199-233.

43. Gold, L., D. Pribnow, T. Schneider, S. Shinedling, B. S. Singer and G. Stormo (1981). "Translational initiation in prokaryotes." Annu Rev Microbiol 35: 365403.

44. Gold, L., G. Stormo and R. Saunders (1984). "Escherichia coli translational initiation factor IF3: a unique case of translational regulation." Proc Natl Acad Sci U S A 81(22): 7061-5.

45. Golshani, A., V. Golomehova, R. Mironova, I. G. Ivanov and M. G. AbouHaidar1997). "Does the epsilon sequence of phage T7 function as an initiator for the translation of CAT mRNA in Escherichia coli?" Biochem Biophys Res Commun 236(2): 253-6.

46. Grill, S. (2000). The role of initiation factors in translation of prokaryotic leaderless mRNAs. Vienna, University of Vienna.

47. Grill, S., С. О. Gualerzi, P. Londei and U. Blasi (2000). "Selective stimulation of translation of leaderless mRNA by initiation factor 2: evolutionary implications for translation." Embo J 19(15): 4101-10.

48. Gualerzi, С. O. and C. L. Pon (1990). "Initiation of mRNA translation in prokaryotes." Biochemistry 29(25): 5881-9.

49. Hajnsdorf, E. and P. Regnier (1999). "E. coli RpsO mRNA decay: RNase E processing at the beginning of the coding sequence stimulates poly(A)-dependent degradation of the mRNA." J Mol Biol 286(4): 1033-43.

50. Hartz, D., D. S. McPheeters and L. Gold (1991). "Influence of mRNA determinants on translation initiation in Escherichia coli." J Mol Biol 218(1): 83-97.

51. Hartz, D., D. S. McPheeters, L. Green and L. Gold (1991). "Detection of Escherichia coli ribosome binding at translation initiation sites in the absence of tRNA." J Mol Biol 218(1): 99-105.

52. Hartz, D., D. S. McPheeters, R. Traut and L. Gold (1988). "Extension inhibition analysis of translation initiation complexes." Methods Enzymol 164: 419-25.

53. Herschlag, D. (1995). "RNA chaperones and the RNA folding problem." J Biol Chem 270(36): 20871-4.

54. Hui, A. and H. A. de Boer (1987). "Specialized ribosome system: preferential translation of a single mRNA species by a subpopulation of mutated ribosomes in Escherichia coli." Proc Natl Acad Sci U S A 84(14): 4762-6.

55. Jackson, R. J. (2000). A comparative view of initiation site selection mechanisms. Translational control of gene expression. H. J. Sonnenberg N, Mathews MB. Cold Spring Harbor, NY, Cold Spring Harbor Laboratory Press: 127-183.

56. Jacob, W. F., M. Santer and A. E. Dahlberg (1987). "A single base change in the Shine-Dalgarno region of 16S rRNA of Escherichia coli affects translation of many proteins." Proc Natl Acad Sci U S A 84(14): 4757-61.

57. Jain, C. and J. G. Belasco (1995). "RNase E autoregulates its synthesis by controlling the degradation rate of its own mRNA in Escherichia coli: unusual sensitivity of the me transcript to RNase E activity." Genes Dev 9(1): 84-96.

58. Jain, C. and N. Kleckner (1993). "IS10 mRNA stability and steady state levels in Escherichia coli: indirect effects of translation and role of rne function." Mol Microbiol 9(2): 233-47.

59. Jones, R. L., 3rd, J. C. Jaskula and G. R. Janssen (1992). "In vivo translational start site selection on leaderless mRNA transcribed from the Streptomyces fradiae aph gene." JBacterid 174(14): 4753-60.

60. Joyce, S. A. and M. Dreyfus (1998). "In the absence of translation, RNase E can bypass 5' mRNA stabilizers in Escherichia coli." J Mol Biol 282(2): 241-54.

61. Komarova, A. V., L. S. Chufistova, E. V. Supina and I. V. Boni (2001). "Extensive complementarity of the Shine-Dalgarno region and З'-terminal sequence of 16S ribosomal RNA is inefficient for translation in vivo." Bioorg Khim 27(4): 28290.

62. Komarova, A. V., L. S. Tchufistova, E. V. Supina and I. V. Boni (2002). "Protein SI counteracts the inhibitory effect of the extended Shine- Dalgarno sequence on translation." Rna 8(9): 1137-47.

63. Ma, J., A. Campbell and S. Karlin (2002). "Correlations between Shine-Dalgarno sequences and gene features such as predicted expression levels and operon structures." J Bacteriol 184(20): 5733-45.

64. McCarthy, J. E. and R. Brimacombe (1994). "Prokaryotic translation: the interactive pathway leading to initiation." Trends Genet 10(11): 402-7.

65. McCarthy, J. E. and C. Gualerzi (1990). "Translational control of prokaryotic gene expression." Trends Genet 6(3): 78-85.

66. McCarthy, J. E., H. U. Schairer and W. Sebald (1985). "Translational initiation frequency of atp genes from Escherichia coli: identification of an intercistronic sequence that enhances translation." Embo J 4(2): 519-26.

67. McCormick, J. R., J. M. Zengel and L. Lindahl (1994). "Correlation of translation efficiency with the decay of lacZ mRNA in Escherichia coli." J Mol Biol 239(5): 608-22.

68. McDowall, K. J., S. Lin-Chao and S. N. Cohen (1994). "A+U content rather than a particular nucleotide order determines the specificity of RNase E cleavage." J Biol Chem 269(14): 10790-6.

69. Melancon, P., D. Leclerc, N. Destroismaisons and L. Brakier-Gingras (1990). "The anti-Shine-Dalgarno region in Escherichia coli 16S ribosomal RNA is not essential for the correct selection of translational starts." Biochemistry 29(13): 3402-7.

70. Miczak, A., V. R. Kaberdin, C. L. Wei and S. Lin-Chao (1996). "Proteins associated with RNase E in a multicomponent ribonucleolytic complex." Proc Natl Acad Sci U S A 93(9): 3865-9.

71. Miller, J. (1972). Experiments in molecular genetics. Cold Spring Harbor, New York, Cold Spring Harbor Laboratory Press.

72. Miranda-Rios, J., M. Navarro and M. Soberon (2001). "A conserved RNA structure (thi box) is involved in regulation of thiamin biosynthetic gene expression in bacteria." Proc Natl Acad Sci USA 98(17): 9736-41.

73. Mogridge, J. and J. Greenblatt (1998). "Specific binding of Escherichia coli ribosomal protein S1 to boxA transcriptional antiterminator RNA." J Bacteriol 180(8): 2248-52.

74. Moll, I. (2000). Studies on translation initiation of leaderless mRNAs. Vienna, University of Vienna.

75. Moll, I., S. Grill, A. Grundling and U. Blasi (2002). "Effects of ribosomal proteins SI, S2 and the DeaD/CsdA DEAD-box helicase on translation of leaderless and canonical mRNAs in Escherichia coli." Mol Microbiol 44(5): 1387-96.

76. Moll, I., S. Grill, С. O. Gualerzi and U. Blasi (2002). "Leaderless mRNAs in bacteria: surprises in ribosomal recruitment and translational control." Mol Microbiol 43(1): 239-46.

77. Moll, I., M. Huber, S. Grill, P. Sairafi, F. Mueller, R. Brimacombe, P. Londei and U. Blasi (2001). "Evidence against an Interaction between the mRNA downstream box and 16S rRNA in translation initiation." J Bacteriol 183(11): 3499-505.

78. Morgan, E. A. (1986). "Antitermination mechanisms in rRNA operons of Escherichia coli." J Bacteriol 168(1): 1-5.

79. Morita, M. Т., Y. Tanaka, T. S. Kodama, Y. Kyogoku, H. Yanagi and T. Yura1999). "Translational induction of heat shock transcription factor sigma32: evidence for a built-in RNA thermosensor." Genes Dev 13(6): 655-65.

80. Mudd, E. A., H. M. Krisch and C. F. Higgins (1990). "RNase E, an endoribonuclease, has a general role in the chemical decay of Escherichia coli mRNA: evidence that rne and ams are the same genetic locus." Mol Microbiol 4(12): 2127-35.

81. Muniyappa, K. and E. Mythili (1993). "Phage lambda beta protein, a component of general recombination, is associated with host ribosomal SI protein." Biochem Mol Biol Int 31(1): 1-11.

82. Muto, А., С. Ushida and H. Himeno (1998). "A bacterial RNA that functions as both a tRNA and an mRNA." Trends Biochem Sci 23(1): 25-9.

83. Nagai, H., H. Yuzawa and T. Yura (1991). "Interplay of two cis-acting mRNA regions in translational control of sigma 32 synthesis during the heat shock response of Escherichia coli." Proc Natl Acad Sci U S A 88(23): 10515-9.

84. Nahvi, A., N. Sudarsan, M. S. Ebert, X. Zou, K. L. Brown and R. R. Breaker (2002). "Genetic control by a metabolite binding mRNA." Chem Biol 9(9): 1043.

85. Nakahigashi, К., H. Yanagi and T. Yura (1995). "Isolation and sequence analysis of rpoH genes encoding sigma 32 homologs from gram negative bacteria: conserved mRNA and protein segments for heat shock regulation." Nucleic AddsRes 23(21): 4383-90.

86. Nivinskas, R., N. Malys, V. Klausa, R. Vaiskunaite and E. Gineikiene (1999). "Posttranscriptional control of bacteriophage T4 gene 25 expression: mRNA secondary structure that enhances translational initiation." J Mol Biol 288(3): 291-304.

87. O'Connor, M., T. Asai, C. L. Squires and A. E. Dahlberg (1999). "Enhancement of translation by the downstream box does not involve base pairing of mRNA with the penultimate stem sequence of 16S rRNA." Proc Natl Acad Sci U S A 96(16): 8973-8.

88. O'Connor, M. and A. E. Dahlberg (2001). "Enhancement of translation by the epsilon element is independent of the sequence of the 460 region of 16S rRNA." Nucleic Acids Res 29(7): 1420-5.

89. O'Donnell, S. M. and G. R. Janssen (2001). "The initiation codon affects ribosome binding and translational efficiency in Escherichia coli of cl mRNA with or without the 5' untranslated leader." J Bacteriol 183(4): 1277-83.

90. O'Donnell, S. M. and G. R. Janssen (2002). "Leaderless mRNAs bind 70S ribosomes more strongly than 30S ribosomal subunits in Escherichia coli." J Bacteriol 184(23): 6730-3.

91. Olins, P. O. and S. H. Rangwala (1989). "A novel sequence element derived from bacteriophage T7 mRNA acts as an enhancer of translation of the lacZ gene in Escherichia coli." J Biol Chem 264(29): 16973-6.

92. Pedersen, S., J. Skouv, M. Kajitani and A. Ishihama (1984). "Transcriptional organization of the rpsA operon of Escherichia coli." Mol Gen Genet 196(1): 135-40.

93. Ptashne, M., K. Backman, M. Z. Humayun, A. Jeffrey, R. Maurer, B. Meyer and R. T. Sauer (1976). "Autoregulation and function of a repressor in bacteriophage lambda." Science 194(4261): 156-61.

94. Py, В., H. Causton, E. A. Mudd and C. F. Higgins (1994). "A protein complex mediating mRNA degradation in Escherichia coli." Mol Microbiol 14(4): 71729.

95. Py, В., С. F. Higgins, H. M. Krisch and A. J. Carpousis (1996). "A DEAD-box RNA helicase in the Escherichia coli RNA degradosome." Nature 381(6578): 169-72.

96. Rapaport, L. R. and G. A. Mackie (1994). "Influence of translational efficiency on the stability of the mRNA for ribosomal protein S20 in Escherichia coli." J Bacteriol 176(4): 992-8.

97. Resell, A., K. Tedin, A. Graschopf, E. Haggard-Ljungquist and U. Blasi (1995). "Ternary complex formation on leaderless phage mRNA." FEMS Microbiol Rev 17(1-2): 151-7.

98. Resch, A., K. Tedin, A. Grundling, A. Mundlein and U. Blasi (1996). "Downstream box-anti-downstream box interactions are dispensable for translation initiation of leaderless mRNAs." Embo J 15(17): 4740-8.

99. Richardson, J. P. (1991). "Preventing the synthesis of unused transcripts by Rho factor." Cell 64(6): 1047-9.

100. Ringquist, S., T. Jones, E. E. Snyder, T. Gibson, I. Boni and L. Gold (1995). "High-affinity RNA ligands to Escherichia coli ribosomes and ribosomal protein SI: comparison of natural and unnatural binding sites." Biochemistry 34(11): 36408.

101. Ringquist, S., S. Shinedling, D. Barrick, L. Green, J. Binkley, G. D. Stormo and L. Gold (1992). "Translation initiation in Escherichia coli: sequences within the ribosome-binding site." Mol Microbiol 6(9): 1219-29.

102. Roberts, M. W. and J. C. Rabinowitz (1989). "The effect of Escherichia coli ribosomal protein SI on the translational specificity of bacterial ribosomes." J Biol Chem 264(4): 2228-35.

103. Ruckman, J., S. Ringquist, E. Brody and L. Gold (1994). "The bacteriophage T4 regB ribonuclease. Stimulation of the purified enzyme by ribosomal protein SI." J Biol Chem 269(43): 26655-62.

104. Scherer, G. F., M. D. Walkinshaw, S. Arnott and D. J. Morre (1980). "The ribosome binding sites recognized by E. coli ribosomes have regions with signal character in both the leader and protein coding segments." Nucleic Acids Res 8(17): 3895907.

105. Schneider, T. D., G. D. Stormo, L. Gold and A. Ehrenfeucht (1986). "Information content of binding sites on nucleotide sequences." J Mol Biol 188(3): 415-31.

106. Sengupta, J., R. K. Agrawal and J. Frank (2001). "Visualization of protein SI within the 30S ribosomal subunit and its interaction with messenger RNA." Proc Natl Acad Sci US A 98(21): 11991-6.

107. Shean, C. S. and M. E. Gottesman (1992). "Translation of the prophage lambda cl transcript." Cell 70(3): 513-22.

108. Shine, J. and L. Dalgarno (1974). "The З'-terminal sequence of Escherichia coli 16S ribosomal RNA: complementarity to nonsense triplets and ribosome binding sites." ProcNatl Acad Sci U S A 71(4): 1342-6.

109. Skouv, J., J. Schnier, M. D. Rasmussen, A. R. Subramanian and S. Pedersen (1990). "Ribosomal protein SI of Escherichia coli is the effector for the regulation of its own synthesis." J Biol Chem 265(28): 17044-9.

110. Sorensen, M. AM J. Fricke and S. Pedersen (1998). "Ribosomal protein SI is required for translation of most, if not all, natural mRNAs in Escherichia coli in vivo." J Mol Biol 280(4): 561-9.

111. Sprengart, M. L., H. P. Fatscher and E. Fuchs (1990). "The initiation of translation in E. coli: apparent base pairing between the 16srRNA and downstream sequences of the mRNA." Nucleic Acids Res 18(7): 1719-23.

112. Sprengart, M. L., E. Fuchs and A. G. Porter (1996). "The downstream box: an efficient and independent translation initiation signal in Escherichia coli." Embo J 15(3): 665-74.

113. Sprengart, M. L. and A. G. Porter (1997). "Functional importance of RNA interactions in selection of translation initiation codons." Mol Microbiol 24(1): 19-28.

114. Squires, C. L. and D. Zaporojets (2000). "Proteins shared by the transcription and translation machines." Annu Rev Microbiol 54: 775-98.

115. Stanssens, P., E. Remaut and W. Fiers (1986). "Inefficient translation initiation causes premature transcription termination in the lacZ gene." Cell 44(5): 711-8.

116. Steitz, J. A. (1969). "Polypeptide chain initiation: nucleotide sequences of the three ribosomal binding sites in bacteriophage R17 RNA." Nature 224(223): 957-64.

117. Stormo, G. D., T. D. Schneider, L. Gold and A. Ehrenfeucht (1982). "Use of the 'Perceptron' algorithm to distinguish translational initiation sites in E. coli." Nucleic Acids Res 10(9): 2997-3011.

118. Stormo, G. D., T. D. Schneider and L. M. Gold (1982). "Characterization of translational initiation sites in E. coli." Nucleic Acids Res 10(9): 2971-96.

119. Subramanian, A. R. (1983). "Structure and functions of ribosomal protein SI." Prog Nucleic Acid Res Mol Biol 28: 101-42.

120. Sussman, J. К., E. L. Simons and R. W. Simons (1996). "Escherichia coli translation initiation factor 3 discriminates the initiation codon in vivo." Mol Microbiol 21(2): 347-60.

121. Szer, W., J. M. Hermoso and S. Leffler (1975). "Ribosomal protein SI and polypeptide chain initiation in bacteria." Proc Natl Acad Sci U S A 72(6): 23259.

122. Szer, W. and S. Leffler (1974). "Interaction of Escherichia coli 30S ribosomal subunits with MS2 phage RNA in the absence of initiation factors." Proc Natl Acad Sci U SA 71(9): 3611-5.

123. Tedin, К., I. Moll, S. Grill, A. Resch, A. Graschopf, С. O. Gualerzi and U. Blasi1999). "Translation initiation factor 3 antagonizes authentic start codon selection on leaderless mRNAs." Mol Microbiol 31(1): 67-77.

124. Tedin, K., A. Resch and U. Blasi (1997). "Requirements for ribosomal protein SI for translation initiation of mRNAs with and without a 5' leader sequence." Mol Microbiol 25(1): 189-99.

125. Thao, M. L., N. A. Moran, P. Abbot, E. B. Brennan, D. H. Burckhardt and P. Baumann (2000). "Cospeciation of psyllids and their primary prokaryotic endosymbionts." Appl Environ Microbiol 66(7): 2898-905.

126. Tuerk, C. and L. Gold (1990). "Systematic evolution of ligands by exponential enrichment: RNA ligands to bacteriophage T4 DNA polymerase." Science 249(4968): 505-10.

127. Vellanoweth, R. L. and J. C. Rabinowitz (1992). "The influence of ribosome-binding-site elements on translational efficiency in Bacillus subtilis and Escherichia coli in vivo." Mol Microbiol 6(9): 1105-14.

128. Venkatesh, Т. V. and С. M. Radding (1993). "Ribosomal protein SI and NusA protein complexed to recombination protein beta of phage lambda." J Bacteriol 175(6): 1844-6.

129. Vogel, U. and K. F. Jensen (1995). "Effects of the antiterminator Box A on transcription elongation kinetics and ppGpp inhibition of transcription elongation in Escherichia coli." J Biol Chem 270(31): 18335-40.

130. Wagner, L. A., R. F. Gesteland, T. J. Dayhuff and R. B. Weiss (1994). "An efficient Shine-Dalgarno sequence but not translation is necessary for lacZ mRNA stability in Escherichia coli." J Bacteriol 176(6): 1683-8.

131. Wilson, J. E., Т. V. Pestova, C. U. Hellen and P. Sarnow (2000). "Initiation of protein synthesis from the A site of the ribosome." Cell 102(4): 511-20.

132. Wimberly, В. Т., D. E. Brodersen, W. M. Clemens, Jr., R. J. Morgan-Warren, A. P. Carter, C. Vonrhein, T. Hartsch and V. Ramakrishnan (2000). "Structure of the 30S ribosomal subunit." Nature 407(6802): 327-39.

133. Winkler, W., A. Nahvi and R. R. Breaker (2002). "Thiamine derivatives bind messenger RNAs directly to regulate bacterial gene expression." Nature 419(6910): 952-6.

134. Winkler, W. C., S. Cohen-Chalamish and R. R. Breaker (2002). "An mRNA structure that controls gene expression by binding FMN." Proc Natl Acad Sci U S A 99(25): 15908-13.

135. Winzeler, E. and L. Shapiro (1997). "Translation of the leaderless Caulobacter dnaX mRNA." J Bacteriol 179(12): 3981-8.

136. Wu, C. J. and G. R. Janssen (1996). "Translation of vph mRNA in Streptomyces lividans and Escherichia coli after removal of the 5' untranslated leader." Mol Microbiol 22(2): 339-55.

137. Wu, C. J. and G. R. Janssen (1997). "Expression of a streptomycete leaderless mRNA encoding chloramphenicol acetyltransferase in Escherichia coli." J Bacteriol 179(21): 6824-30.

138. Yarchuk, О., N. Jacques, J. Guillerez and M. Dreyfus (1992). "Interdependence of translation, transcription and mRNA degradation in the lacZ gene." J Mol Biol 226(3): 581-96.

139. Zengel, J. M. and L. Lindahl (1994). "Diverse mechanisms for regulating ribosomal protein synthesis in Escherichia coli." Prog Nucleic Acid Res Mol Biol 47: 33170.

140. Zhang, Y. В., S. Ayalew and S. A. Lacks (1997). "The rnhB gene encoding RNase HII of Streptococcus pneumoniae and evidence of conserved motifs in eucaryotic genes." J Bacteriol 179(12): 3828-36.1. Благодарности

141. Автор выражает благодарность старшему научному сотруднику ИБХ к.х.н. И.В.Бони за научное руководство и помощь при выполнении данной работы; Скапцовой Н.В. (ИБХ РАН) за синтез олигонуклеотидов;

142. М.Дрейфусу за помощь в выполнении работы по стабильности сконструированных lacZ мРНК и научное руководство в течение летней командировки в возглавляемую им лабораторию (M.Dreyfus, ENS, CNRS D1320, Paris).

143. Автор благодарит весь коллектив Лаборатории Структуры и Функции Генов Человека ИБХ РАН и особенно Г.С.Монастырскую, Е.В.Надеждина и Л.С.Чуфистову за создание и поддержание благоприятной атмосферы во время работы.

Обратите внимание, представленные выше научные тексты размещены для ознакомления и получены посредством распознавания оригинальных текстов диссертаций (OCR). В связи с чем, в них могут содержаться ошибки, связанные с несовершенством алгоритмов распознавания. В PDF файлах диссертаций и авторефератов, которые мы доставляем, подобных ошибок нет.