Влияние полипептида с молекулярной массой 22 КД на свойства клеточной поверхности штаммов возбудителя чумы тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.07, кандидат биологических наук Заднова, Светлана Петровна

• Заднова, Светлана Петровна
• кандидат биологических наук
• 1998

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Заднова, Светлана Петровна

ОГЛАВЛЕНИЕ

Стр.

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Белки клеточной поверхности грамотрицатель ных бактерий с адгезивной функцией как факторы патогенности

1.2. Свойства ахромогенных вариантов возбудителя чумы

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

2.1. Бактериальные штаммы

2.2. Питательные среды, реактивы, оборудование

2.3. Методы исследований

ГЛАВА 3. ИЗУЧЕНИЕ КУЛЬТУРАЛЬНО-МОРФОЛОГИЧЕСКИХ И БИОЛОГИЧЕСКИХ СВОЙСТВ АХРОМОГЕННЫХ ВАРИАНТОВ В03БУ-

3.1. Выяснение условий появления ахромогенных вариантов возбудителя чумы

3.2. Культурально-морфологические свойства, ультраструктура колоний и чувствительность ахромогенных вариантов к чумным, псевдотуберкулезному, кишечным бактериофагам

3.3. Плазмидный профиль и белковый спектр ахромогенных вариантов

3.4. Определение электрокинетического потенциала кле-

ток ахромогенных вариантов

3.5. Изучение иммунобиологической активности ахромо-

генных вариантов

ГЛАВА 4. РОЛЬ ПОЛИПЕПТИДА С МОЛЕКУЛЯРНОЙ МАССОЙ 22 кО В

АДГЕЗИВНОЙ АКТИВНОСТИ ШТАШОВ ЧУМНОГО МИКРОБА

4.1. Гемагглютинирующая активность вакцинного штамма

Y. pest is EV и ахромогенных вариантов

4.2. Динамика фагоцитарных реакций с перитонеальными макрофагами культуры Y.pestis EV и вариантов, не содержащих полипептида с молекулярной массой KD *а »»«■»■»а»«»*««**«-»«»*««**«»»*''«

4.3. Электронно-микроскопическое изучение процесса фагоцитоза вакцинного штамма и ахромогенного варианта

ГЛАВА 5. ПОЛУЧЕНИЕ И СВОЙСТВА БЕЛКОВОГО ПРЕПАРАТА. СОДЕРЖАЩЕГО ПОЛИПЕПТИД С МОЛЕКУЛЯРНОЙ МАССОЙ 22 KD

5.1. Выделение белкового препарата из внешней мембраны штамма Y. pest is EV

5.2. Физико-химическая и иммунохимическая характеристика полученного белкового препарата

5.3. Адгезивные свойства препарата, содержащего полипептид с молекулярной массой 22 kD

5.4. Изучение иммунобиологических свойств препарата, содержащего полипептид с молекулярной массой

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

ВЫВОДЫ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Влияние полипептида с молекулярной массой 22 КД на свойства клеточной поверхности штаммов возбудителя чумы»

ВВЕДЕНИЕ

АКТУАЛЬНОСТЬ РАБОТЫ. Изучение биологических свойств возбудителя чумы в плане выяснения основ его патогенного действия, иммуно-генной активности является одной из актуальных задач, связанных с диагностикой и специфической профилактикой чумы. Многие исследователи при этом отводят важную роль изучению поверхностных компонентов бактериальной клетки, ее мембранных структур (липополисаха-рид-белковые комплексы, белки). Такое внимание обусловлено высокой функциональной значимостью этих структур в процессах взаимодействия патогенных бактерий с клетками и тканями макроорганизма (Smith,1977;Голубинский с соавт.,1987; Соловьева,1990; Щербаков, 1991;Анисимов,Можаров,1992). Поэтому проведение исследований по обнаружению в мембранных структурах клетки иммунохимически активных макромолекул является важной задачей при исследовании процессов патогенеза и иммуногенеза этой инфекции,

У возбудителя чумы имеется ряд факторов как хромосомной, так и плазмидной детерминированности, связанных с клеточной поверхностью, определяющих его патогенные свойства. К ним относятся: антиген рНб, обладающий адгезивной активностью (Lindler et al.,1990; Водопьянов, 1995) ; капсульный антиген, рассматриваемый как аналог бактериальных адгезинов и фактор, препятствующий фагоцитозу (Сердобинцев с соавт.,1989; Куклева,1996); секретируемые белки Yops (Yersinia outer membrane proteins), которые способствуют диссеминации возбудителя и оказывают антифагоцитарное действие (Leung,Stralеу,1989; Straley, Cibui1,1989); белки, принимающие участие в метаболизме железа (Perry et al. /1990; Sikkema, Brubaker,1989).

В последнее время появились сведения, которые можно рассматри-

с

- о -

вать как указание на существование еще одного белка, играющего определенную роль в проявлении патогенности возбудителя чумы. Так,при исследовании клеточных оболочек двух штаммов возбудителя чумы Y.pestis EV, Y.pestis TWJ и их ахромогенных вариантов, получены важные данные об отсутствии полипептида с молекулярной массой 22 kD в ахромогенных вариантах (Дробышева с соавт., 1990). Из литературных источников известно, что ахромогенные варианты, выделенные из вакцинных штаммов Y.pestis EV и К-1, отличаясь морфологией колоний, проявляли значительное снижение иммуногенности для лабораторных животных (Покровская, 1934; Муравьева, 1969-, Чернова с соавт. ,1974). Имеются сведения об ахромогенном варианте, полученном из вирулентного штамма, который, сохраняя все свойства исходного штамма, в том числе и известные детерминанты патогенности, отличался ослабленной вирулентностью (Классовский с соавт.,1971). Корреляция утраты вирулентности и снижения иммуногенности отмечена у ряда аргининзависи-мых мутантов возбудителя чумы, при этом было показано, что в клетках происходит нарушение синтеза белка с молекулярной массой 23 kD (Гуревич с соавт., 1993; Гуревич и Некляев,1994,).

Можно предположить, что свойства патогенности и иммуногенной активности возбудителя чумы, наряду с другими известными генетически детерминированными продуктами, участвующими в экспрессии этих важных биологических признаков, связаны с наличием полипептида с молекулярной массой 22 (23) kD. Поэтому исследования, направленные на получение сведений о белке с молекулярной массой 22 kD Y.pestis EV являются, несомненно, актуальными.

В связи с этим необходимо проведение комплексных исследований, включающих изучение плазмидного состава, иммуногенных свойств, ге-магглютинирующей активности, белкового спектра, свойств поверхности

(взаимодействия с фагами, измерение поверхностного заряда) культур возбудителя чумы У.реэ1лз ЕУ и его ахромогенных вариантов, отличающихся по функционально-морфологическим признакам.

ЦЕЛЬ РАБОТЫ: Изучить влияние полипептида с молекулярной массой 22 kD на свойства клеточной поверхности штаммов возбудителя чумы.

ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ:

- получить набор ахромогенных вариантов штаммов чумного микроба, выяснив условия их появления в популяциях культур;

- изучить культурально-морфологические свойства ахромогенных вариантов, ультраструктуру их колоний и чувствительность к чумному, Л-413 С, псевдотуберкулезному, кишечным бактериофагам;

- определить плазмидный состав ахромогенных вариантов, провести сравнительный анализ белковых спектров типичных культур и их ахромогенных вариантов, с одинаковым плазмидным профилем;

- измерить величину поверхностного заряда клеток ахромогенных вариантов в сравнении с Y.pestis EV;

- изучить влияние белка 22 kD на гемагглютинирующую активность культур возбудителя чумы;

- выяснить особенности взаимодействия культур, утративших полипептид с молекулярной массой 22 kD, с перитонеальными макрофагами животных;

- получить из внешней мембраны Y.pestis EV белковый препарат, содержащий полипептид с молекулярной массой 22 kD, изучить его физико-химические и иммунобиологические свойства.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА.

Впервые на семи штаммах чумного микроба показана корреляция ахромогеннос-ти колоний с утратой бактериями полипептида с молекулярной массой 22 kD.

В результате проведенных исследований получены сведения о белке с молекулярной массой 22 kD, принимающем участие в формировании поверхностного заряда клетки, проявлении адгезивных свойств.

Впервые выделен и изучен белковый препарат из внешней мембраны вакцинного штамма возбудителя чумы, содержащий полипептид с молекулярной массой 22 kD, который обладает свойствами бактериального лектина (адгезина).

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ.

- составлены и утверждены директором РосНИПЧИ "Микроб" "Методические рекомендации по выделению ахромогенных вариантов возбудителя чумы" и "Методические рекомендации по выделению белка молекулярной массы 22 kD из вакцинного штамма возбудителя чумы" (протокол N 10 от 30 декабря 1997 г.);

- штамм У.pestis EV К-8 депонирован в РКПБ ин-та "Микроб" как ахромогенный вариант Y.pestis EV;

- составлена и одобрена Ученым Советом ВНИПЧИ "Микроб" Временная фармокопейная статья на диагностикум эритроци-тарный чумной антигенный (на основе мембранных белков) сухой и жидкий (от 20 марта 1990 г.).

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ.

Материалы диссертации доложены и представлены на Всесоюзном семинаре молодых ученых противочумных учреждений "Эпидемиология, молекулярная биология, генетика и иммунология возбудителя чумы" (Саратов, 1986) ; ежегодных итоговых научных конференциях РосНМПЧИ "Микроб"; 1-ом съезде Вавиловского общества генетиков и селекционеров (ВОГИС) (Саратов,1994); 3 Международной конференции молодых ученых "Актуальные вопросы современной медицины" (Бишкек, 1996 г); молодежной школе по оптике, лазерной физике и оптоэлектронике (Саратов,1997).

1ШЕШШШЦШ.

По теме диссертации опубликовано 12 научных работ.

ОБЪЕМ И СТРУКТУРА РАБОТЫ.

Диссертация состоит из введения и пяти глав, содержащих обзор литературы, описание материалов и методов исследований, результаты собственных исследований, заключения, выводов и списка литературы. Работа иллюстрирована 8 таблицами и 25 рисунками. Список литературы содержит 144 источника, из них 72 зарубежных.

ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ, ШНОШШ НА ЗАЩИТУ.

1. Ахромогенность колоний возбудителя чумы коррелирует с отсутствием полипептида молекулярной массы 22 к.О во внешней мембране и не связана с плазмидным составом штаммов возбудителя чумы.

3. Белок внешней мембраны возбудителя чумы с молекулярной массой 22 КБ, обеспечивает его адгезивные свойства (гемагглютинирующую

активность, прикрепление к поверхности макрофагов) и принимает участие в формировании поверхностного заряда клеток,

4. Гель-фильтрация на сефадексе 6-100 позволяет проводить выделение белкового препарата, содержащего полипептид с молекулярной массой 22 кБ, из внешней мембраны вакцинного штамма.

5. Белковый препарат, содержащий полипептид с молекулярной массой 22 кО, является биологически активным веществом со свойствами лектина, обладает гемагглютинирующей активностью и способен вызывать протективный эффект у иммунизированных животных.

Заключение диссертации по теме «Микробиология», Заднова, Светлана Петровна

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Мембранные белки являются одними из основных компонентов наружной мембраны бактерий. Особый интерес к ним со стороны исследователей обусловлен как многообразием функций этих структур, так и выяснением молекулярных основ их биологического действия, что способствует решению многих фундаментальных вопросов иммуногенеза и клеточной рецепции. В силу своей поверхностной локализации, мембранные белки обеспечивают взаимодействие бактериальных клеток с окружающей средой, а в случае патогенных микроорганизмов с тканями хозяина.

Важная роль, которая принадлежит белкам поверхностных структур бактерий при чумной инфекции, и определяет актуальность их изучения. Изучение биохимии и генетики возбудителя чумной инфекции позволило выяснить роль многих антигенных структур микробной клетки. Установлена роль в развитии инфекции капсульного антигена, обеспечивающего защиту от фагоцитоза; секретируемых белков Торз, способствующих диссеминации возбудителя и устойчивости к фагоцитозу; рН6 антигена, повышающего устойчивость чумного микроба к разрушительному действию макрофагов и обладающего свойствами адгезина (Сердобин-цев с соавт., 1989;Ьеип^, 31:га1еу, 1989;Б1га1еу,С1Ьи11,1989; ЫгкПег et а1.,1990; Водопьянов,1995; Куклева с соавт. ,1996).

Объем данных о структуре, физико-химических и биохимических свойствах других, кроме рН 6 антигена, белков клеточной поверхности, кодируемых хромосомными генами, а также их биологической роли весьма ограничен. Для более определенного суждения о вкладе тех или иных поверхностных белков в патогенез инфекции требуется проведение специальных исследований, Целью нашей работы было изучение свойств одного из поверхностных белков, синтезируемого в большом количестве бактериальной клеткой - белка с молекулярной массой 22 kD. Для достижения поставленной цели проводили сравнительное изучение свойств штаммов, утративших этот белок (ахромогенные варианты) и свойств исходных культур, сохраняющих яолипептид 22 kD, Изучали также свойства белкового препарата, содержащего полипептид с молекулярной массой 22 kD.

В работе использовали ахромогенные варианты У.pestis EV, полученные при производстве живой чумной вакцины в разные годы сушки и предоставленные сотрудником РосНИПЧМ "Микроб" Т,М.Дробышевой: Y.pestis EV С-69, Y.pestis EV С-79, Y.pestis EV C-83, а также полученный нами Y.pestis EV К-8,

Колонии ахромогенных вариантов отличались от колоний вакцинного штамма большими размерами, изрезанным, бухтообразным краем, в проходящем свете полупрозрачные, без темного центра. На агаре, с добавлением красителя "конго", популяция формировала непигментированные колонии. При сканирующей микроскопии колонии ахромогенных вариантов отличались величиной и хаотичным расположением клеток, отсутствием плотного центра. Вероятно, полипелтид 22 kD принимает участие в формировании структуры колоний чумного микроба на искусственных питательных средах,

В соответствии с поставленной целью дальнейшие исследования были направлены на сравнительное изучение поверхностных свойств бактерий вакцинного штамма и ахромогенных вариантов с использованием методов спектроскопии, иммунохимии, бактериофагии.

Присутствие полипептида 22 kD оказывает влияние на ряд свойств поверхности бактериальной клетки. Так, установлено, что ахромогенные варианты снижают чувствительность к чумному фагу, несколько повышают к псевдотуберкулезному и фагу Л-413 С, и резко возрастает (на 5 порядков) чувствительность к кишечному фагу *fll. Показанная разница чувствительности к бактериофагам культур штамма Y.pestis EV и ахромогенных вариантов, по-видимому, связана с изменением у последних поверхностных рецепторов, происходящих одновременно с утратой полипептида 22 kD.

Следующим этапом нашей работа стало изучение плазмидного и белкового состава ахромогенных вариантов возбудителя чумы, с целью установления природы синтеза полипептида 22 kD, Результаты скрининга плазмидных профилей исследуемых культур показали, что штаммы: Y.Pestis Е¥ 0-79 и Y.pestis ЕУ С-69 содержат по три плазмиды. Y.Pestis ЕУ С-83 не содержит зоны, соответствующей pFra. Вариант Y.pestis EV К-8 отличается от исходного вакцинного штамма ЕУ отсутствием плаамиды кальцийзависимости. Y.pestis TWJaxp содержит pFra, так же как к исходный штамм, Y. pestis КМ 218&Хр - бесплазмидный. При изучении методом ПААГ-электрофореза в присутствии додецилсульфата натрия белкового спектра вариантов вакцинного штамма Y.pestis EV, имеющих равный набор плазмад, было установлено, что все культуры, независимо от того содержат ли они одну (Y.pestis КМ 216, КМ 217, КМ 225), две (Y.pestis КМ 215,' КМ 226, КМ 227), три плазмиды (ЕУ), ми не содержат ни одной (Y.pestis КМ 218), имели полипептид 22 kD в своем составе. У всех ахромогенных вариантов возбудителя чумы, имеющих разный пдавмидным состав, полипептвд 22 kD отсутствовал. Таким образом, установлена важная особенность ахромогенных вариантов возбудителя чумы, в отсутствии в лизатах культур полипептида с молекулярной массой 22 kD. Изучение белкового спектра вариантов вакцинного штамма ЕУ, с разным плазмидным профилем, в сравнении с ахромогенными вариантами с таким же набором плазмид выявило отсутствие связи наличия или утраты белка 22 kD с каким-либо плазмидным решш-коном, эти данные дали основание считать., что синтез полипептида 22 kD детерминирован хромосомными генами.

Белок с молекулярной массой 22 kD, вероятно, участвует в формировании поверхностного заряда бактерий возбудителя чумы, о чем свидетельствует повышение в 1.4-1.5 раза электрокинетического потенциала у ахромогенных вариантов в сравнении с клетками исходного вакцинного штамма. Такая особенность дает основание предположить, что наличие бежа с молекулярной массой 22 kD в штамме Y. pest is EV вносит определенный вклад в формирование его поверхностного потенциала. Возможно, белок 22 kD* входящий в состав внешней мембраны вакцинного штамма* экранирует отрицательные заряды липопояисахари-да, что не наблюдается у ахромогенных вариантов.

Наряду с повышением злектрокинетического потенциала у клеток ахромогенных вариантов наблюдалось уменьшение адгезивной способности. Адгезивная активность изучалась на модели гемагглаотинации эритроцитов и фагоцитарных реакций с перитонеальными макрошагами мыши. Гемагглютинируздая активность ахромогенных вариантов в отношении нативных эритроцитов человека и морской свинки была на 1-2 порядка ниже таковой исходного вакцинного штамма, а эритроциты барана ахро-могенные варианты не агглютинировали, в отличие от вакцинного штамма. Взаимодействие ахромогенных вариантов с перитонеальными макрофагами характеризовалось пониженной, в сравнении с исходным вакцинным штаммом, способностью прикрепления и проникновения в клетки макрофагов в первые 10-40 мин контакта, а, также сниженным показателем фагоцитарной активности в начальный этап фагоцитоза. Слабая активность фагоцитоза на начальном этапе, вероятно, объясняется отсутствием полипептида 22 кО у ахромогенных вариантов и дает основание считать его одним ив адгезинов чумного микроба. Проникнув в фагоцит, ахромогенные варианты сохраняли способность размножаться внутри клетки, что через 6 ч инкубации обуславливают картину незавершенного фагоцитоза. Описанная динамика фагоцитарных реакций подтверждена данными электронно-микроскопических исследований. Сниженная адгезивная активность клеток ахромогенных вариантов является причиной снижения приживаемости их в макроорганизме, ведущей к уменьшению иммуногенных и патогенных свойств. Данные изучения им-муногенной активности вакцинного штамма Е¥ и ТШ и их ахромогенных вариантов показали значительное снижение иммуногенной активности ахромогенных вариантов.

Подтверждением адгезивных свойств белка 22 ко служат результаты изучения свойств белкового препарата, полученного из фракции внешней мембраны вакцинного штамма У.резМз £¥. Препарат выделяли методом гель-фильтрации на сефадексе 6-100, с использованием трис-ЭДТА-буфера (рН 7.4) с 0.2 % додецилсульфатом натрия при 45 °С. Белковая фракция выходила в свободном объеме и в нативном состоянии имела молекулярную массу 2000 ко. Материал отбирали в начале и максимуме пика, т.к. в следующих фракциях содержались минорные полипептиды и липополисахарид. Фракция содержала три полипептида: 83, 82 и 22 ко, причем, содержание последнего было основным (примерно 70 %). Полипептид с молекулярной массой 22 ко проявлял термолабильные свойства, поскольку прогрев образцов при 100 °0 в течение 5 мин перед нанесением на гель, приводил к снижению его молекулярной массы до 13 кО. Дифференциальная окраска белкового препарата, содержащего полипептид с молекулярной массой 22 кБ, с использованием ионов серебра, а также количественная реакция с тимоловым реактивом и анализ инфракрасных спектров позволили констатировать, что выделенный белковый препарат является гликопротеином, т.к. содержит углеводный компонент.

Выделенный белковый препарат в концентрации 62-31 мкг/мл агглютинирует эритроциты человека группы 0(1)Rh"4" и морской свинки. В концентрации 125 мкг/мл агглютинирует эритроциты барана. В дальнейшем адгезивные свойства изучали на лимфоцитах. Учет при этом производили микроскопически. Было установлено, что белковый препарат вызывает агглютинацию лимфоцитов в концентрации 16 мкг/мл, в тоже время, взятые для контроля г бычий сывороточный альбумин даже в концентрации 500 мкг/мл не агглютинировал лимфоциты, а известный растительный лектин фасоли (ФГА) агрегировал лимфоциты в концентрации 0.2 мкг/мл. Известно, что бактериальные лектины имеют избирательную активность к определенным углеводам, которые выявляют по ингибиро-ванию реакции гемагглютинации углеводами. Поскольку белковый препарат, содержащий полипептид молекулярной массы 22 kD, вызывает агглютинацию эритроцитов, необходимо было выяснить к каким углеводам он проявляет специфичность, т.к. характеристика углеводной специфичности определяет ценность лектина как инструмента исследования. Гемагглютинация ингибировалась 0.01 М раствором рамнозы, дульцита, мелибиозы, N-ацетилнейраминовой кислоты и 0.05 М раствором Д-глюко-замина HCl. Таким образом, выделенный препарат обладает свойствами бактериального лектина (адгезина), специфичного к указанным углеводам, и может использоваться в различных биохимических, биофизических и биотехнологических исследованиях.

Выделенный белковый препарат использовался в качестве сенсити-на при конструировании антигенного эритроцитарного диагностикума, который применялся для детекции антител в сыворотках животных. При иммунизации животных уровень специфических антител в кроличьих антисыворотках в РИГА зарегистрирован в титрах 1:800-1:1600. При однократной иммунизации экспериментальных животных (морские свинки) белковым препаратом, содержащим полипептид молекулярной массы 22 kD, в дозе 100 мкг белка титр сывороток на 7-21 сутки составил 1:200-1:400. В результате иммунизации препарат вызывает выраженные метаболические реакции: отмечается повышение количества кортикосте-роидов, активируется процесс дифференцировки и пролиферации лимфоцитов, повышается в четыре раза активность креатинфосфокиназы и концентрация адениловых нуклеотидов (в частности АТФ в шесть раз), наблюдается значительная энергетическая перестройка в организме в процессе иммуногенеза. При этом его реактогенность является причиной развития затяжной стрессорной реакции, поскольку восстановление гомеостаза наблюдалось только к 21-м суткам после иммунизации животных .

Белковый препарат, содержащий полипептид с молекулярной массой 22 kD обладает некоторой протективной активностью в отношении экспериментальных животных (белые мыши). Установлено, что после однократной иммунизации в дозе 100 мкг белка, препарат обеспечивает 40 Z защиту взятых в опыт животных, при 100 % гибели контрольной группы, после заражения 50 Del штамма Y.pestis 231.

Результаты исследований, полученные при выполнении настоящей работы дают основание для заключения, что белок внешней мембраны с молекулярной массой 22 kD обладает свойствами адгезина, обуславливая гемагглютинирующую активность, обеспечивая прикрепление и проникновение бактерий внутрь фагоцита, принимая участие в формировании электрокинетического потенциала клетки, т. е. определяя способность возбудителя приживаться в организме и взаимодействовать с его факторами защиты. Перечисленные свойства позволяют оценить полипептид 22 к.0? тлеющего хромосомную детерминированность синтеза., как один из многих факторов патогенности и иммуногенности возбудителя чумы. шшадУ

1. Показана корреляция ахромогенности колоний чумного микроба с утратой бактериями белка с молекулярной массой 22 kD.

2. Синтез полипептида с молекулярной массой 22 kD не зависит от плазмидного состава культур возбудителя чумы и кодируется, вероятно, хромосомными генами.

3. Белок с молекулярной массой 22 kD принимает участие в формировании поверхностного заряда клеток и проявлении адгезивных свойств культур. Утрата полипептида 22 kD ахромогенными вариантами ведет к снижению их гемагглютинирующей активности и показателей первого этапа фагоцитоза - прикрепления и поглощения бактерий фагоцитирующими клетками.

4. Из внешней мембраны клеток Y. pest,is EV гель-фильтрацией выделен белковый препарат, содержащий полипептид с молекулярной массой 22 kD, который обладает свойствами бактериального лектина, специфичного к рамнозе, дульциту, мелибиозе, N-ацетилнейраминовой кислоте, Д-глюкозамину. Препарат обладает адгезивной активностью в отношении эритроцитов и лимфоцитов, проявляет антигенные свойства и некоторую протективную активность.

5. Белок с молекулярной массой 22 kD, входящий в состав внешней мембраны возбудителя чумы, может рассматриваться как дополнительный фактор, обеспечивающий контакт патогена с клетками макроорганизма, и играющего определенную роль в патогенности и иммуноген-ности.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Заднова, Светлана Петровна, 1998 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

Анисимов П.И., Можаров О.Т. Современные представления о пато-генности и вирулентности с позиции достижений в области генетики возбудителя чумы // Генетика и биохимия вирулентности возбудителей особо опасных инф.. Матер. Росс. науч. конф.: Тез. докл., Волгоград, 21-22 окт. 1992 г. - Волгоград, 1992. - С. 7.

Анисимова Т.И., Горькова А.В., Сергеева Г.М., Тропина Г.В. Изыскание новых методов определения безопасности и реактогенности чумных и холерных вакцин /'/ XVI Всесоюзн. съезд микробиол. и эпиде-миол.(Ульяновск, 4-7 окт.1977): Тез. докл. - М., 1977. - Ч. II. -С. 148-150.

Ашмарин И.П., Воробьев А.А. Статистические методы в микробиологических исследованиях // Л.: Медгиз, 1962. - С. 30-66.

Бичуль O.K. Моноююналъные антитела к поверхностным антигенам чумного микроба // Автореф. дисс... канд. мед. наук. - Ростов-на-Дону, 1993. - 20 С.

Бурцева Т.Н., Лоенко Ю.Н. Трипсиноподобная протеиназа и ее эндогенный ингибитор из Yersinia pseudotubercu1osis // Второй съезд биохимического общества РАН (Москва, 19-23 мая 1997 г.): Тез. стенд, сообщ. - Пущино, 1997. - Ч. I. - С. 12.

Васильева Г.И., Пустовалов В.Л. Фагоцитарная активность макрофагов морских свинок, иммунизированных антигенами F 1А, F 1В, водно-солевым экстрактом и живой чумной вакциной ЕВ /7 Пробл. особо опасных инф. - 1977. - Вып. 6 (58). - С. 34-37.

Васильева Г.И., Пустовалов В.Л., Тараканова В.Н. Оценка "латентной" вирулентности вакцинных штаммов чумного микроба по степени завершенности фагоцитоза // Пробл. особо опасных инф. - 1979. -

Вып. 5 (69). - С. 52-56.

Водопьянов С.О., Мишанькин Б.Н. Пили адгезии у Y.pestis // той. - 1985. - N 6. - С. 13-17.

Водопьянов С.О. Пилеобразование у микроорганизмов рода Yersi-niae // Автореф. диос. ... докт. мед. наук. - Ростов-на-Дону, 1995.

Голубинский Е.П., Жовтый И.Ф., Лемешева Л.Б. О чуме в Сибире // Труды изд. Иркутского университета. - Иркутск, 1987. - С.185.

Горькова A.B., Челова Л.А., Тихомирова Л.А., Внеклеточные механизмы гуморальных, обменных сдвигов и динамика популяционного состава лимфоцитов при специфических и неспецифических изменениях резистентности организма к чуме /У Молекул, механизмы развития инфекционного заболевания (Звенигород, 1990 г.): Тез. Всесоюз. конф. М., 1990. - С.24.

Громов Б.В. Строение бактерий // Ленинград: Изд-во Ленинг. ун-та. - 1985. - 189 С.

Гуревич Г. К., Некляев В.Н., Чернявская A.C., Стьпценко Т.М. Изучение иммуногенных свойств у аргининзависимых мутантов ауксотро-фов чумного микроба /./ Иммунол. и спец. профилакт. особо опасных инф.: Матер. Росс. науч. конф., (Саратов, 21-23 сент. 1993 г.) -Саратов, 1993. - С.21-22.

Гуревич Г.К., Некляев В.Н. Определение генетической детерминированности, иммуногенности и вирулентности у чумного микроба /У Профилакт. и меры борьбы с чумой: Матер.межгосуд. научн.конф., пос-вящ. 100-летию открытия возб. чумы, 6-7 сентября 1994 г., г. Алмаа-ты, - Алмааты, 1994. - С. 56,

Детерман Г. Гель-хроматография. Гель-фильтрация. Гель-проникающая хроатография. Молекулярные сита //М: Мир, 1970. - С. 252.

Дробышева Т.У. Ахромогенные варианты различных субкультур чумного микроба £¥ .// Профилакт. особо опасных инф. йзд-во Сарат. ун-та., 197?. - Вып.З. - С. 50-55.

Дробышева Т.М., Щербаков А,А., Миронова Н.П., Заднова С.П. Некоторые структурные и функциональные особенности хромогенного и ах-ромогенного вариантов штаммов чумного микроба ЕВ и ТШ // Микроби-ол., биохимия и специф. профилак. карант. инф. - Саратов, 1990. -С. 27-32.

Дроздовская Ф.К., Муравьева Н.К., Глушко Л.И. Динамика синтеза белка и некоторых специфических антигенов вакцинным штаммом Е¥ и его ахромогенным вариантом в процессе глубинного выращивания при аэрации /У Пробл. особо опасных инф. - 1970. - Вып.2 (12). - С. 75-78.

Дятлов И.А. Разработка новых технологий экспериментального и производственного аппаратного культивирования чумного микроба Дисс. на соискание ученой степени докт. мед. наук. - Саратов, 1992. -407 С.

Дятлов И.А., Кутырев В.В. Исследование влияния экспрессии плазмид и некоторых хромосомных генов на электроповерхностные свойства возбудителя чумы // Генетика и биохимия вирулентности возбудителей особо опасных инф. Матер. Росс. науч. конф.: Тез. докл., Волгоград, 21-22 окт. 1992 г. - Волгоград, 1992. - С. 37.

Езепчук Ю.В. Патогенность как функция биомолекул // М.: Медицина, 1985. - 240 С.

Елкин Ю.М., Лалазарова И.Г., Розанова Г.Н. Вирулентность субкультур чумного микроба полевочьей разновидности, полученных на среде с гемином /У Тез. докл. науч. конф. (октябрь 1972). - Ставрополь, 1972.- С. 25-26.

Журба М. Д., Прядкина М.Д., Абрамова Т.Ф. Об изменчивости чумного вакцинного штамма EV // ЖМЭИ. - 1966. - N 4. - С.64-68.

Иванов В.й., Прядкина М.Д., Ведешкина В.М. Получение новых форм у вакцинного штамма чумного микроба (В.pest.is EV 76) под влиянием радиоактивных излучений // Мед. радиология. - 1956. - Т. 2. -С. 52-56.

Классовский Л.Н., Степанов В.М., Бибикова В.А. Об "ахромоген-ном" мутанте вирулентного штамма возбудителя чумы /У Пробл. особо опасных инф. - 1971. - Вып. 3 (19). - С. 78-80.

Коссе Л.В., Гуревич Г.К., Панасенко М.В. Генетическая детерминированность протективных антигенных комплексов чумного микроба // Матер.межгосуд. науч. конф. "Профилактика и меры борьбы с чумой, пос-вящ. 100-летию откр. возб. чумы (6-7 сентября г. г.Алматы) - Ал-маты, 1994. - С, 103.

Куличенко А.Н., Кутырев В.В., Филиппов A.A., Дроздов И.Г. Инактивация и лизис вирулентных культур возбудителя чумы, выращенных на нитроцеллюлозных фильтрах /У Методические рекомендации. -Саратов. - 1988. - 7 С.

Куклева Л.М. Фагоцитоз перитонеальными и альвеолярными макрофагами штаммов возбудителя чумы, отличающихся по вирулентности и антигенному составу // Дисс. на соискание ученой степени канд. мед. наук. - Саратов, 1987. - 147 С.

Куклева Л.М., Кутырев В.В., Проценко O.A. Молекулярно-генетические аспекты инвазивных и антифагоцитарных свойств патогенных иерсиний //Молекул, генет., микробиол. и вирусол. - 1996. - N 1. -С. 11-16.

Лахтин В.М. Лектины и аспекты их изучения // Микробиол. журнал. - Киев, 1989. - Т.51, N 3. - С. 69-75.

Ледванов М.Ю., Наумов A.B. Биоэнергетические процессы в лимфоцитах при формировании иммунитета .// Первый Всесоюзн. иммунол. съезд (Сочи, 15-17 нояб. 1989 г.): 'Тез. секцион стенд, сообщ. - М., 1989. Т.2. - С. 156.

Линевич Л.И. Лектины и углевод-белковое узнавание на разных уровнях организации живого /У Успехи биол. химии. - 1979. - Т.20. -С. 71-94.

Луцик М.Д., Панасюк Е. Н., Луцик А.Д. Лектины. Львов. Мзд-во "Вища Школа". 1981. - 155 С.

Луцик М.Д. Исследование мембранных гликопротеинов эритроцитов человека с применением лектинов // Украинский биохим. журнал. -1987. - Т.59, N 6. - С. 6-9.

Мавзютов А.Р., Габидиллин З.Г. Адгезивная активность кишечных иерсиний /У йерсиниозы (Микробиол., эпидемиол., клиника, патогенез, иммунол.) - Тез. Всесоюз. науч.-практ. конф. (28-29 авг. 1986 г.) -Владивосток, 1986. - С.45.

Малинина З.Е., Муравьева Н.К., Дудкова В.К., Гольдфарб Л.М., Тараненко Т.М. Ахромогенный вариант живой чумной вакцины К-1 // Пробл. особо опасных инф. - -1974. - Вып.5 (39). - С. 57-60.

Малинина З.Е., Тараненко Т.М., Дальвадянц С.М. Спектр антител и потективная активность сывороток кроликов, иммунизированных типичными и ахромогенными вариантами возбудителя чумы // Механизмы формир.иммунитета к особо опасным инф. - Саратов, 1986. - С. 53-59.

Малинина З.Е., Дягилева И.Э. Использование антибиотиков для выделения ахромогенных вариантов возбудителя чумы // Микробиол., биохимия и специф. профилак. карант. инф.- Саратов, 1990. - С. 22-26.

Мартиневский й.Л., Лешкович Л.И., Слынко 0.0., Тараканов Н.Ф.

Об изменчивости и некоторых свойствах различных линий вакцинного

штамма EV // Пробл. особо опасных инф. - 1977. - Вып.3(55). - С. 65-66.

Маянский А. Н., Невмятуллин Д. Л. , Маянская И. В., Зеленова Е.Г. Структурные и функциональные аспекты прямого взаимодействия бактерий с фагоцитами // ШЭИ. - 1986. - N 4. - С. 90-96.

Муравьева Н,К., Филиппов А.Ф., Павлова Л.П., Лискина И.В.» Дроздовская Ф.К. Свойства субкультур ахромогенного варианта, выделенных из чумной вакцины EV // Пробл. особо опасных инф. - 1969. -Вып.5 (9). - С. 52-55.

Муравьева Н.К., Филиппов А.Ф., Павлова Л.П. Изучение условий возникновения ахромогенного варанта штамма EV // Пробл. особо опасных инф. - 1969. - Вып. 6 (10). - С.121-124.

Наумов A.B., Ледванов М.Ю., Дроздов И.Г. Иммунология чумы // Саратов, 1992 - С. 22-24.

Овод В.В., Вершигора А.Е. Адгезивность бактерий // Успехи соврем. биологии. - Москва, 1982. - Т. 94. Вып.2(5) - С. 213-224.

Петров Р.В., Дозморов И.М., Левин А.Д. Иммунология /V М.: Медицина, 1980. - С. 5-8.

Покровская М.П. Авирулентный мутант В..pestis (культура AMP) // Вестн. микробиол., эпидемиол. и паразитол. - 1934. - T.XIII. - N 1. - С. 3-17.

Пустовалов В.Л., Васильева Г.И., Кисилева А.К. Определение антифагоцитарной активности антигенов чумного микроба // Патол. физи-ол., иммунол. и аллергол. особо опасных инф. - Саратов, 1984. -С.8-12.

Прядкина М.Д., Журба М.В., Абрамова Г.Ф. К вопросу об изменчивости вакцинного штамма EV возбудителя чумы // Мат. межинстит. на-

уч. конф., памяти Л.А.Тарасевича (май - 1965). - М, 1966. - С. 170.

Руководство по профилактике чумы /Под общ. ред.проф. Н.И.Николаева. - Саратов, 1972. - 200 С.

Сборник инструкций по общим методам контроля стерильности,фи-зико-химических свойств, пирогенности, на отсутствие контаминирую-щих агентов и токсичности медицинских иммунобиологических препаратов. - Москва, 1983. - С.52-53.

Сердобинцев Л. Н., Карпунина Л.В., Коннов Н.П., Тихомирова Е.й., Демченко Т.А., Гусева Н.П. Изучение гемагглютинирующей активности препаратов капсульного белка чумного микроба // Виотехнол., иммунол. и биохимия особо опасных инф. - Саратов, 1989. - С. 19-25.

Сергеева Г.М. Оценка реактогенности и безвредности вакцинных штаммов чумного микроба и вакцин по их стрессорному действию: Авто-реф.дис. ...канд.биол.наук. - Саратов, 1981.

Смирнов К.К. Разработка средств измерения дзета-потенциала бактерий амплитудно-частотным методом /./ Физико-химические исследования патогенных энтеробактерий в процессе культивирования. - Иваново. - 1979. - С. 81-98.

Соловьева Т.Ф. Липополисахарид-белковые комплексы грамотрица-тельных бактерий. Структура и свойства // Автореф. дисс... докт. хим. наук. - Владивосток, 1990. - 49 С.

Степаншина В.Н., Гремякова Г.А., Анисимов А.П., Потапов В.Д. Выделение и свойства pH 6 антигена чумного микроба // Матер. XIV науч.-практ. конф. Новые технологии и биосистемы. Достижения и перспективы". (21-23 мая 1991 г. Оболенск). Тез. докл. Оболенск, 1991. - С. 78-80.

Степаншина В.Н., Гремякова Т.А. Модификация биологической и иммунохимичес-кой активности рНб антигена чумного микроба // Генет.

и биохим. вирулентности возбудителей особо опасных инф,: Тез. докл., Волгоград, 21-22 окт. 1992 г. - Волгоград, 1992. - С. 132.

Степанов В.М., Кондратьева О.В. Изучение некоторых вопросов вирулентности возбудителя чумы на модели его аргининзвисимых мутантов // Пробл. особо опасных инф. - 1974. - Вып.6 (40). - С. 19-23.

Стейниер Р., Эдельберг Э., Ингрэм Дж. Мир микробов // М.:Мир, 1979. - Т. 1. - С.186.

Тараненко Т.М., Дальвадянц С.М., Боровикова Т.П., Ковалев И.Ф., Дернова B.C. Использование инфракрасной спектроскопии для изучения химического состава антигенов чумного и псевдотуберкулезного микробов // Пробл. особо опасных инф. - 1972. - Вып.1 (23). -С. 37-41.

Тараненко Т.М., Бахрах Е.Э., Малинина З.Е., Андреева И.П. Особенности строения соматических .антигенов, изолированных из вакцинных штаммов EV и К-1 и их ахромогенных вариантов // Профилакт. особо опасных инф. Из-во Оарат. у-та, 1977. - Вып.З. - С. 64-68.

Тихомирова Л.А., Ермакова Г.В., Корсуков В.Н., Горькова A.B. Злектрофоретическая подвижность Т- и В-лимфоцитов крови и селезенки в динамике развития противочумного иммунитета /./ Иммунология и профилакт. особо опасных инф.- Саратов, 1985. - С. 26-31

Тюменцев С.Н., Андреевская Н.М., Гефан Н.Г., Попов A.B., Климов В.Т. Диагностическая иммунная сыворотка к вирулентным штаммам Yersinia enterocolitica // Иммунология и специфич. профилакт. особо опасных инф.: Матер. Росс. науч. конф. (21-23 сент.1993, Саратов).

- Саратов, 1993. - С. 248.

Учитель И.Я., Хосман Э.Л. Роль макрофагов в естественной и специфической невосприимчивости // Вест. АМН СССР. - 1983. - N 10.

- С. 91-99.

Чернова 3.А,, Иванова В,Ф., Майская В.Д. Стабильность клеточного состава типичных и атипичных вариантов штамма EV // Тез. докл. науч. конф. (окт. 1972, Ставрополь). - Ставрополь, 1972. - С. 59-60.

Чернова З.А., Иванова В.Ф., Майская В.Д. Свойства типичных и

»

некоторых атипичных субкультур штамма ЕУ // Тез. докл. научн. конф. (окт. 1972, Ставрополь). - Ставрополь, 1972. - С. 58-59.

Чернова Э.А., Иванова В.Ф., Майская В.Д. Иммуногенные свойства различных вариантов штамма EV // Пробл. особо опасных инф. - 1974. - Вып.6 (40). - С. 73-75.

Чернова Э. А., Иванова В.Ф., Майская В.Д. О стабильности вакцинного штамма чумного микроба К-1 // Пробл. особо опасных инф. -1976. - Вып. 3 (49). - С. 24-26

Чернова Э.А., Афанасьев E.H., Майская В.Д. Изучение водорастворимых белков чумных вакцинных штаммов // Профилакт. природнооча-говых инф.: Тез. докл. научно-практ. конф. (6-8 дек. 1983). - Ставрополь, 1983. - С. 327-328.

Черепанов П.А., Каримова Г.А., Михайлова Т.Г., Панферцев Е.А. Молекулярный анализ Psa оперона, крдирующего синтез рН6 антигена Yersinia pestis // Матер. XIV науч.-практич. конф. "Новые технологии и биосистемы. Достижения и перспективы": Тез. докл., Оболенск, 21-23 мая. 1991 г. - Оболенск, 1991. - С. 20-22.

Черепанов П.А., Панферцев Е.А., Каримова Г.А., Михайлова Т.Г., Носков А.Н., Волковой К.И. Исследование взаимодействия рН6 антигена Y.pestis с сывороткой неиммунных животных // Генет. и биохимия вирулентности возбудит. особо опасных инф.: Матер. Росс. науч. конф., 21-22 окт. 1992 г., г.Волгоград - Волгоград, 1992. - С.147.

Чиргадзе Ю.Н. В кн.: Физические методы исследования белков и

нуклеиновых кислот. Изд-во "Наука", М., 1967. - С.132-148.

Хромых Л.М., Галактионов В.Г., Абрамов В.М., Васильев A.M., Янанкин В.Г. Влияние рекомбинантного белка I (антиген рН6,0) .на рост опухолевых и нормальных клеток // Генетика и биохимия вирулентности возбудителей особо опасных инф.. Матер. Росс. науч. конф.: Тез. докл., Волгоград, 21-22 окт. 1992 г. - Волгоград, 1992. - С. 143.

Aronson М., Вichowsky-S1 cmnicki L. Temperature and pH dependent changes of eiectrophoretic niobi 1 it у of Pasteurella pest is .// J.Bacterid. - i960. - V. 79, N . - P.734-740.

Bakker D. Studies on the K88 fimbriae of enteropatogenic Escherichia coli // Academisch proefschrift Utrecht. - Amsterdam, 1991. - P. 12-15.

Beer K., Miller V.L. Amino acid substitution in naturelly occurs ing variants of ail result in altered invasion activity // J. Bacterid. - 1992. - ¥.174, N 4, - P. 1360-1369.

Ben-Efraim S., Aronson M., Вichowsky-S1omnicky L. New antigenic component of Pasteurella pestis formed under specified conditions of pH and temperature // J. Bacteriol. - 1961. - ¥.81, N 5. -P. 704-714.

Bernet-Camard M.F., Duigou F., Kernels S., Coconnier M.H., Servin A.L. Glucose Up-regulates expression of the differentiation-associated brush border binding site for Enterotoxigenic Eshe-richia coli colonization factor antigen J in cultured human Entero-cyte-Like cells // Infect. Immun. - 1997. - ¥.65, N 4. - P. 1299-1306.

Bichowsky-Siomnicky L.,Ben-Efraim S. Biological activities in extracts of P. pest is and their relation to the "pH6 antigen" /./

J. Bacterid. - 1963. - ¥.86, N 1. - P.101-111.

Bochmer H.V. Separation of T-and B-lumphocyte reaction // J. Immunol. - 1974. - V.l. - P. 70-78.

Burnette W. N. "Western blotting-": Electroporetic transfer of proteins from sodium dodecyl sulfate - polyacrylamide gels to unmodified nitrocellulose and radiographic detection with antibody and radioiodicated protein A // Analit. Biochem. - 1981. - V. 112. - P. 195-203.

Crumpton M,J., Davies D.A.L. As antigenic analysis of Pasteu-rella pestis by diffusion of antigens and antibodies in agar // Proc. r-oy. Soc. B. - 1956. - V. 145, N 918. - P. 109-134.

De Cupere F., Depres P., Sanchez R., Hendriks H., Koninkx J., Muylle E., Driessche E.V. Evaluation of the effect of sugars and glycoproteins on the in vitro adhesion of Escherichia coli 0139:K12:HI, associated with edema disease in piglets, to mucus and brush border membranes with an Enzyme Linked Immunosorbent Adhesion Assay (ELISAA) // 17th International Lectin Meeting, Wurzburg, Germany, 24-27 September, 1997. Abstr. Europen J. of Cell Biol. Suple-ment 46 ,1997. - V.74. - P. 34.

Duguid J.P., Smith I.W., Dempster I., Edmunds P.N. Non-filamentous appendages (fimbriae) and haemagllutinatting activity in E.coli // J. Path. Bact. - 1955. - V.70. - P. 335-348.

Duguid J.P. The function of bacterial fimbriae /7 Arch. Immun. Ther. Exp. - 1968. - V.16. - P. 173-188.

Evans D.G., Evans D.J., CIegg S., Payley J.A. Purification and characterisation of the CFA/I antigen of enterotoxigenic Escherichia coli // Infect. Immun. - 1979. - V.25. - P. 738-748.

Fernando N.V.P., Erkel G. A., Movat H.Z. The fine structure of

- tm ~

connective tissues. IV. The itercellular elements // Exptl. Mol. Pathol. - 1964. - V.3, M 6. - P. 535-545.

Girargeau J.P., Vartanian M., Oilier J.L., Oontrepois M. CS 31A, a new K 88-related fimbria! antigen on bovine enterotoxigenic arid septicemic Escherichia coli strains // Infect. Immun. - 1988. -V.56, N 8. - P.2180-2188.

Heeseman J., and Gruter L. Genetic evidence that the outer membrane protein Yop 1 of Yersinia enterocolitica mediater adherence and phagocytosis resistance to human epithelial cells // FEMS Microbiol. Lett. - 198?. - V. 40. - P. 37-41.

Hitchcock P.J,, Brown T.M. Morphological heterogeneity among Salmonella lipopolvsaccharide chemotypes in sikver-stained polyac-rilamide gels // J. Bacteriol. - 1983. - V.154, N 1. - P.269-277.

Jerse A.E., Kaper J.B. The eae gene of enteropathogenic Escherichia coli encodes a 94-kilodaIton membrane protein, the expression of which is influenced by the EAF plasmid // Infect. Immun. -1991. - V. 59, N 13. - P. 4302-4309.

Isaacson R.E. K99 surface antigen of Escherichia coli: purification and partial characterization // Infect. Immun. -1977. -V.15, N 1. - P. 272-279.

Isaacson R.E.f Richter P. Escherichia coli 987P pi lis: purification and partial characterization // J. Bacteriol. - 1981. -V.146. - P.784-789.

Isberg R., Falkow S. A single genetic locus encoded by Yersinia pseudotubercu1osis permits invasion of cultured animal cells by Escherichia coli K-12 // Nature. - 1985. - V,31?,M 1. - P.262-244.

Isberg R.R., Swain A., Falkow S. Analysis of expression and ther-moregulation of the Yersinia pseudotuberculosis inv gene with

hubrid proteins // Infect. Immun. - 1988. - V. 56., MB. - P. 2133-2138.

Isberg R.R. Determinants for thermoinducible cell binding and piasmid-encoded penetration detected in the absence of the Yersinia

pseudotuberculosis invasin protein // Infect. Immun. - 1989. -V. 57, N 7. - P. 1998-2005.

Isberg R.R. Pathways for the penetration of enteroinvasive Yersinia into mammalian cells // Mol. Biol. Med. - 1990. - V.7,N 1.

- P.73-82.

Kado C., Liu S.-T. Rapid procedure for detection and isolation of large and small piasrnids // J. Bacteriol. - 1981. - V. 11, N 3.

- P. 1365-1373.

Kallenius G., Mollby R., Svenson S.B. The Pkantigen as receptor for the haemoagglutinin of pyelonephritic Escherichia coli // FEMS Microbiol. Lett. - 1980. - V.7, N 1. - P. 297-302.

Kapperud G., Namork E., Skarpeid H.I. Temperature-inducible surface fibrillae associated with the virulence plasmid of Y.ente-rocolitica and Yersinia pseudotuberculosis // Infect. Immun. -1985. - ¥.47, N2. - P. 561-566.

Kapperund G., Namork E., Skurnik M., Nesbakken T. Plasmid-me-diated surface fibrillae of Yersinia pseudotuberculosis and Yersinia enterolitica: Relationship to the outer membrane protein Yopl and possible importance for pathogenesis // Infect. Immun. - 1987.

- ¥.55, N 9.- P. 2247-2254.

Korhonen T.K., Vaisanen ¥., Saxen H. P-antigen-recognizing fimbriae from human uropathogenic E.coli strains .// Infect. Iinmun.

- 1982. - ¥.37. - P. 286-291.

Klemm P. The Complete amino-acid sequence of K88 antigen, a

fimbrial protein from E.coli // Eur. J. Biochem. - 1981. - V.117. ~ P.617-627.

Lawton W.D., Fukui 6.M., Surgalia M.G. Studies on the antigens of Pasteurella pest.is and Pasteurella pseudotuberculosis //J. Immunol. - 1960. - V.84, N 5. - P. 475-479.

Leung K.Y., Straley S.O. The yop M gene of Yersinia pestis encodes a released protein having homology with the human platelet surface protein GPIba // J.Bacterid. - 1989. - ¥.171, N 9. -P.4623-4632.

Lindler L.E., Klempner M.S., Straley S.O. Yersinia pestis pH6 antigen: genetic, biochemical, and virulence charact.erization of a protein involved in the pathogenesis of bubonic plague //Infect. Immun. - 1990. - ¥.58, N 8. - P. 2569-2577.

Lindl er L.E. and Tall ¡S.D. Yersinia pest is pH6 antigen forms fimbriae and is induced by intracellular association with macrofap-hages // Molec.Microbiol. - 1993. - ¥.8, N 1. - P. 311-324.

Lowry O.H., Roserbrough N.J., Farr A.L., Randall R.J. Protein measurement with the Fol in phenol reagent // J. Biol. Chem. - 1951. - ¥.193, N 1. - P. 265-275.

Lugtenberg B., Bronstein H., van Selm N., Peters R. Peptidog-lycan - assaciated outer membrane proteins in gram-negative bacteria // Biochim. Biophys. Acta. - 1977. - ¥.433. - P. 118.

Mantle M., Basaraba L., Peacock S.O., Gall D.G. Binding of Yersinia enterocolitica to rablit intestinal brush border membranes, mucus, and mucin // infect. Immun. - 1989. - ¥.57, N 11. - P. 3292-3299.

Martinez R.J. Thermoregulation-dependent expression of Yersinia enterocolitica protein 1 imparts serum resistance to Escheric-

hi a coli K-12 // J. BacterioL - 1989. - ¥.171, N 7. - P.

3732-3739.

Martinez M.B., Hoshino-Shimizu S. Agglutination of Yersinia strains by lectins /./ 6th Int. symposium on Yersinia, Rome, Italy, 26-28 September, 1994 - P.65.

Mooi F.R., and de Graaf F.K. Molecular biology of enterotoxigenic Escherichia coli // Curr. Top. Microbiol. Immunol. - 1985. -V.118. - P. 119-138.

Moon H.W., Nagy B., Isaacson R.E. Intestinal colonization and adhesion by enterotoxigenic E.coli: ultrastructural observations on adherence to ileal epithelium of pig // J. Infect. Dis. - 1977. -¥.136. - P. 5124-5129.

Mollenhauer 9.H., Totten 0. Studies on seeds. I. Fixation of seeds // J. Cell Biol. - 1971. - ¥.48. - P. 337-394.

McCormick 8.A., Nusrat A., Parkos C.A., Andrea L., Hofman P.M., Carnes D., Liang T.W., Madara J.L. Unmasking of intestinal epithelial lateral membrane ± integrin consequent to transepitheli-al neutrophil migration in vitro facilitates inv-mediated invasion by Yersinia pseudotubercu1osis // Infect. Immun. - 1997. - ¥.65, N 4. - P. 1414-1421.

McConnell M.M., Thomas L.A., Wi1ishaw 6.A., Smith H.R., Rowe B. Genetic control and properties of coli surface antigen I¥ (PCF8775) of enterotoxigenic Escherichia coli // Infect. Immun. -1988. - ¥. 56, N 8. - P.1974-1980.

Murphy T.F., Apicella M.A, Antigenic heterogeneity of outer membrane proteins of nontypable Hemophilus influenzae is a basis for a serotyping system // Infect, and Immun. - 1985. - ¥. 50, N 1. - P.15-21.

Ofek I., Beachev E.H. Mannose binding and epithelial cell adherence of E.coli // Infect. Immun. - 1978. - ¥.22. - P.247-254.

Paerregaard A., Espersen F., Jensen O.M., Skurnik M. Interactions between Yersinia enterocolitica and rablit neal mucus: growth, adhesion, penetration and subsequent, changes in surface hydrophobicity and ability to adhere to neal brush border membrane vesicles // Infect. Immun. - 1991. - ¥.59, N 1. - P.253-260.

Pearce W.A., Buchanan T.M. Attachment role of gonococcal pili. Optimum conditions and quantitation of adherence of isolated pili to human cells in vitro // J. Clin. Invest. - 1978. - ¥.61. - P. 931-943.

Pepe J.C., Wachtel M.R., Wagar E., Miller ¥.L. Pathogenesis of defined infasion mutants of Yersinia enterocolitica in a BaLB/c mouse model of infection // Infect. Immun. - 1995. - ¥. 63, N 12. P. 4837-4848.

Perry R., Pendrak M., Schuetze P. Identification and cloning of hemin storage locus involued in the pigmentation phenotype of Yersinia pestis // J. Bacteriol. - 1990. - ¥.1726, N. - P. 5929-5937.

Peterson P., Quie P. Bacterial surface components and the pathogenesis of infectious diseases // Ann. Rev. Med. .-Selec.Top. Clin. Sei.- 1981. - ¥. 32. - P. 29-43.

Pirce S.B., Freeman M.D. and Yen K.S, Transcriptional analysis of the Yersinia pestis pH6 antigen gene // J. Bacteriol. - 1995. -¥. 177, N 20. - P. 5997-6000.

Pierson D.E. Mutations affecting lipopolуsaccharide enhance ail-mediated entry of Yersinia enterocolitica into mamalian cells // J.Bacteriol. - 1994. - V.176.N 13. - P. 4043-4051.

Reynolds E.S. The use of lead citrate at hight pH as on electron microscopy // J. Cell Biol. - 1963. - ¥.17, N 1. - P. 208-211.

Rosqvist R., Magnusson K.E,, Wolf-Watz H. Target cell contact triggers expression and polarized transfer of Yersinia Yop E cyto-toxin into mammalian cells // EMBO J. - 1994. - ¥.13,. N 4. -P.964-972.

Sabatini D.D., Bensch K., Barrnett R.J. Cytochemistry and electron microscopy. The preservation of cellular ultrastructure and enzymatic activity by aldehyde fixation // J. Cell Biol. -1963. - ¥.17, N 1. - P. 19-58.

Sammons D., Adams L., Nishizawa E. Ultrasensitive silver-based color straining of polypeptides in polyacrilamide gels // Electrophoresis. - 1981. - N 2. - P. 135-141.

Sikkema D., Brubaker R. Outer-membrane peptide of Yersinia pestis mediating siderophoreindepedent assimilation of iron // Biol. Metabs. - 1989. - ¥.2. - P. 174-184.

Sohel J. I., Puente L., Murray W. I., ¥arkila ¥., Schoolnik G.K. Cloning and characterization of the bundle-forming pi 1 in gene of enteropat.hogenic Escherichia coli and its distribution in Salmonella serotypes // Mol. Microbiol. - 1993. - ¥.7. - P. 563-575.

Skurnik M., Bolin I., Heikkinen H., Pihe S,, Wolf-Watz H. ¥i~ rulence plasmid-associated autoagg1utination in Yersinia // J. Bac-teriol. - 1984. - ¥.158, N 3. - P. 1033-1036. .

Smith H, Microbial surfaces in relation to pathogenicity // Bact, Rev. - 1977. - ¥.41. - P. 475-500.

Spurr A.R. A low-viscosity epoxy resin embedding medium for electron microscopy /7 J. Ultrastruct. Res. - 1969. - ¥.26. -P.31-43.

Straley S., Cibuil M. Differential clearance and host-pathogen interactions of Yop E aid K, Yop L Yersinia pestis in BALB/c mice // Infect. Immun. - 1989. - Y.57, N 4. - P. 1200-1210.

Towbin H., Staehelin I., Gordon J. Electrophoretic transfer of proteins from polyacrilamide gels to nitrocellulose sheets: procedure and sane applications // Proc. .Natl. Acad. Sei. U.S.A. - 1979. - V.765 N 3. - P. 4350-4354.

Vaisanen V., Elo J., Tallgren L.G. et ad. Mannose-resistance hemagglutination and pantigen recognition are characteriatic of E.coli cousing primary pyelonephrits // Lancet. - 1981. - V.2. - P. 1366-1369,

Vanmaele R. P. arid Armstrong G.D. Effect of carbon source on lacalized adherence of enteropathogenic Escherichia coli // Infect. Immun. - 1997. ¥.65, N 4. - P. 1408-1413,

Wachtel M.R., Miller ¥.L. In vitro and in vivo characterization of an ail mutant of Yersinia enterocolitica // infect. Immun. -1995. - V.63,N 7. - P. 2541-2548.

Wolf M.K., Andrews G.P., Fritz D.L., Sjogren R.W., Boedeker J.K., Boedeker E.G. Characterization of the piasmia from Escherichia coli RDEC-1 that, mediates expression of adhesin AF/R1 and evidence that AF/R1 pili promote but are not essential for enteropato-genic disease // Infect. Immun. - 1988. - ¥.56, N 8. - P. 1846-1857.

Wilson M.H., Collier A.M. Ultrastructural study of Mycoplasma pneumoniae in organ culture // J. Bacterid. - 1976. - V.125. -P.332-339.

Ysng Y. and Isberg R.R. Cellular internalization in the absence of invasion efpression is promoted by the Yersinia pseudotuber-

culosis yad A product // Infect. Immun. - 1993. - ¥.61, N 7. - P. 3907-3913.

Yang Y., Merriam J.J., Mueller J.P., Isberg R.R. The psa locus is responsible for thermoinducible binding of Yersinia pseudotuberculosis to cultured ctlls // Infect. Immun. - 1996. - ¥.84, N 7. -P.2483-2489.

Zavyalov ¥.P., Abramov V.M., Cherepanov P.G., Spirina G.¥., Chernovskaya T.¥., ¥as.iliev A.M. , Zavyalova G. A. pH6 antigen (Psa A protein) of Yersinia pestis a novel bacterial Fc-receptor // FEMS Immunol. and Med. Microbiol. - 1996. - ¥.14, Ml. - P. 53-57.