Усовершенствование методов выделения, идентификации индикации бактерий Pseudomonas Aeruginosa тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.02.03, кандидат биологических наук Шестаков, Андрей Геннадьевич
- Специальность ВАК РФ03.02.03
- Количество страниц 155
Оглавление диссертации кандидат биологических наук Шестаков, Андрей Геннадьевич
СПИСОК УСЛОВНЫХ СОКРАЩЕНИЙ.
ВВЕДЕНИЕ.
1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.
1.1. Классификация бактерий рода Pseudomonas.
1.2. Биологические свойства Pseudomonas aeruginosa.
1.3. Устойчивость Pseudomonas aeruginosa к некоторым веществам.
1.3.1. Антибиотикочувствительность Pseudomonas aeruginosa.
1.4. Резервуар распространения Pseudomonas aeruginosa и вызываемые бактериальные инфекции.
1.5. Способность Pseudomonas aeruginosa к биодеструкции.
1.6. Идентификация Pseudomonas aeruginosa.
1.6.1. Бактериологические методы идентификации
Pseudomonas aeruginosa.
1.6.2. Генетические методы идентификации
Pseudomonas aeruginosa.
1.7. Фагодиагностика Pseudomonas aeruginosa.
1.7.1. Чувствительность бактериофагов Pseudomonas aeruginosa к инактивирующим факторам.
1.7.2. Развитие фаговых корпускул в клетке хозяина.
1.7.3. Реакция нарастания титра фага.
2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.
2.1. Объект материалы и методы исследований.
2.2. Результаты исследований и их обсуждение.
2.2.1. Тинкториальные свойства клеток Pseudomonas aeruginosa.
2.2.2. Рост референс-штаммов Pseudomonas aeruginosa на стандартных средах и образование пигментов.
2.2.3. Характеристики отечественных селективных сред, применяющихся для выделения Pseudomonas aeruginosa.
2.2.4. Биохимические свойства референс-штаммов
Pseudomonas aeruginosa.
2.2.5. Антибиотикочувствительность референс-штаммов
Pseudomonas aeruginosa.
2.2.6. Конструирование среды накопления УГСХА-Р.а.1.
2.2.7. Усовершенствование плотной селективной среды с цетримидом УГСХА-Р.а.2.
2.2.8. Конструирование тестов бактериологической дифференциации.
2.2.8.1. Конструирование теста «А».
2.2.8.2. Разработка теста «В».
2.2.8.3. Усовершенствование теста «С».
2.2.8.4. Усовершенствование теста «D».
2.2.9. Усовершенствование бактериологической схемы выделения и идентификации Pseudomonas aeruginosa.
2.2.10. Образование пигментов штаммами Pseudomonas aeruginosa, выделенных из объектов внешней среды, пищевого сырья и пищевых продуктов.
2.2.11. Основные биохимические свойства выделенных штаммов Pseudomonas aeruginosa.
2.2.12. Выделение бактериофагов Pseudomonas aeruginosa.
2.2.13. Характеристика выделенных фагов Pseudomonas aeruginosa.
2.2.14. Разработка технологических параметров изготовления и контроля биопрепарата для диагностики Pseudomonas aeruginosa.
2.2.15. Разработка оптимальных условий постановки реакции нарастания титра фага с применением диагностического биопрепарата.
Рекомендованный список диссертаций по специальности «Микробиология», 03.02.03 шифр ВАК
Усовершенствование методов выделения, идентификации и индикации бактерий Pseudomonas putida2011 год, кандидат биологических наук Викторов, Денис Александрович
Биотехнологические параметры разработки фагового препарата для индикации и идентификации бактерий Bacillus subtilis в пищевом сырье и продуктах питания2012 год, кандидат биологических наук Мустафин, Али Хамзеевич
Выделение и изучение биологических свойств бактериофагов Bordetella bronchiseptica и разработка на их основе биопрепарата для индикации и идентификации2012 год, кандидат биологических наук Семанина, Екатерина Николаевна
Биотехнологические аспекты разработки фагового препарата для индикации и идентификации бактерий рода Providencia2012 год, кандидат биологических наук Барт, Наталья Геннадьевна
Разработка фагового препарата Bacillus mesentericus и область его практического применения2012 год, кандидат биологических наук Юдина, Мария Александровна
Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Усовершенствование методов выделения, идентификации индикации бактерий Pseudomonas Aeruginosa»
Актуальность темы*
Бактерии вида Pseudomonas aeruginosa вызывают заболевание «псевдо-моноз» к которому восприимчивы: крупный рогатый скот, свиньи, овцы, птица, пушные звери, пчёлы, рыбы, из лабораторных животных чувствительны белые мыши, морские свинки и кролики (Lipej et al., 1993; Прунтова и др., 1995; Покровский 2002). Диагноз ставят на основании лабораторных исследований на Р. aeruginosa. Источник возбудителя, больные животные, выделяющие его с различными выделениями, калом, мочой, молоком, со спермой. Факторы передачи возбудителя - инфицированные корма, пищевое сырьё, вода, почва, окружающая среда (Сидоров, 1995; Красильников, 1999). По существующим данным в окружающей среде Р. aeruginosa паразитирует в простейших (Ряпис, 1994; Бухарин, Розенберг, 2007). На особом месте стоит водный ареал распространения Р. aeruginosa (Смирнов, Киприанова, 1990; Афонин, 1999).
Отмечена высокая резистентность бактерии к антибиотикам и антимикробным веществам (Nikaido, 1978; Илюхин, 1985). Р. aeruginosa вызывает порчу белковых пищевых продуктов (в первую очередь мясомолочных) (Стефанов, 1997). Сообщается, что Р. aeruginosa вызывает деструкцию нефтепродуктов и углеродсодержащих веществ (Al-Hadhrami, Lapin-Scott, Ficher, 1995). Несмотря на то, что потребность в диагностике синегнойной инфекции очевидна, существующие бактериологические параметры схем, методов выделения, идентификации и индикации Р. aeruginosa в объектах внешней среды, пищевом сырье и пищевых продуктах не совершенны. Трудности диагностики Р. aeruginosa связаны с беспигментными штаммами и ассоциативной микрофлорой (Шуляк, 2003). В связи с этим исследования, посвященные методам быстрого и точного обнаружения Р. aeruginosa в объектах окружающей среды, пищевом сырье и пищевых продуктах являются актуальными и могут иметь значительный научный интерес и прикладное значение
Цель работы
Совершенствование методов выделения, идентификации и индикации бактерий вида Р. aeruginosa из объектов внешней среды, пищевого сырья и пищевых продуктов.
Задачи работы
1. Изучить основные биологические свойства штаммов Р. aeruginosa, выделенных из объектов внешней среды, пищевого сырья и пищевых продуктов.
2. Усовершенствовать среды для выделения и идентификации атипичных и беспигментных штаммов Р. aeruginosa.
3. Усовершенствовать схему бактериологической идентификации и дифференциации Р. aeruginosa из объектов внешней среды, пищевого сырья и пищевых продуктов на основе разработанных сред и тестов.
4. Выделить из объектов внешней среды, пищевого сырья и пищевых продуктов специфические бактериофаги бактерий Р. aeruginosa и изучить их основные биологические свойства; отобрать наиболее оптимальный специфический бактериофаг для конструирования биопрепарата.
5. На основе отобранного бактериофага создать биопрепарат и технологию его изготовления для индикации и идентификации бактерий вида Р. aeruginosa.
6. Усовершенствовать схему индикации бактерий Р. aeruginosa в объектах внешней среды, пищевого сырья и пищевых продуктов с помощью- биопрепарата бактериофага УГСХА-Р.а.№4, методом реакции нарастания титра фага.
Научная новизна
Проведены комплексные исследования по выделению и из объектов внешней среды, пищевого сырья- и пищевых продуктов, штаммов Р. aeruginosa. Получены новые данные о биологических свойствах атипичных и беспигментных штаммах, выделенных из объектов внешней среды, пищевого сырья и пищевых продуктов. Сконструирована новая специфическая среда накопления. Усовершенствована селективная среда с цетримидом для выделения атипичных и беспигментных штаммов Р. aeruginosa. Отобран« ряд наиболее информативных тестов и разработаны дополнительные тесты, позволяющие проводить видовую дифференциацию бактерий рода Pseudomonas с учётом существующих беспигментных штаммов.
Усовершенствована схема выделения и бактериологической идентификации бактерий вида Р. aeruginosa в объектах внешней среды, пищевом сырье и пищевых продуктах.
Выделены и изучены по заданным биологическим свойствам бактериофаги Р. aeruginosa, и отобран наиболее оптимальный специфический бактериофаг УГСХА-Р.а.№4 для создания диагностического биопрепарата.
Разработаны биотехнологические параметры изготовления диагностического биопрепарата и усовершенствована схема индикации Р. aeruginosa в объектах внешней среды, пищевого сырья и пищевых продуктов с применением специфического бактериофага УГСХА-Р.а.№4.
Практическая значимость работы
Предложенная в диссертационной работе схема бактериологической идентификации и дифференциации позволяет выделять и типировать атипичные, беспигментные штаммы Р. aeruginosa из объектов внешней среды, пищевого сырья и пищевых продуктов. Использование сконструированной нами среды накопления, усовершенствованной селективной среды и подобранных тестов бактериологической идентификации, позволяет выделять и типировать бактерии Р. aeruginosa до вида в течение 75 часов. Сконструирован диагностический биопрепарат на основе специфичного бактериофага и усовершенствована схема индикации бактерий Р. aeruginosa методом реакции нарастания титра фага (РНФ) в течение 19-20 часов.
Результаты усовершенствования бактериологической схемы выделения и идентификации Pseudomonas aeruginosa из объектов внешней среды, пищевого сырья, и пищевых продуктов, а также возможность использования диагностического биопрепарата специфичного бактериофага-УГСХА-Р:а.4 в схеме реакции нарастания титра фага, подтверждены актами комиссионных испытаний; в Ульяновской ГСХА от 22 января;20 Юг.
По материалам диссертационной работы разработаны и утверждены ректором УГСХА (от 10 феврвля 2010г) «Методические рекомендации по ускоренной индикации бактерий P. aeruginosa методом реакции нарастания титра фага в объектах санитарного надзора», «Методические рекомендации по изготовлению и контролю бактериофага УГСХА-Р.а.№4», а так же «Методические рекомендации по выделению и идентификации бактерий вида Р. aeruginosa в объектах санитарного надзора». Методические рекомендации разработаны для сотрудников медико-биологических научных учреждений и специалистов бактериологических лабораторий. Материалы диссертационной работы используются в учебном процессе при чтении лекций, для практических занятий студентов, работы аспирантов на кафедре микробиологии, вирусологии, эпизоотологии и ВСЭ Ульяновской государственной сельскохозяйственной академии.
Основные положения, выносимые на защиту
1. Среда накопления (УГСХА-P.a.l) способствует избирательному росту и размножению P. aeruginosa, при первичном посеве исследуемого материала. Плотная селективная среда (УГСХА-Р.а.2) является специфичной и обеспечивает преимущественный рост P. aeruginosa, угнетая рост возможных ассоциантов.
2. Использованные среды УГСХА-P.a.l и УГСХА-Р.а.2, а также подобранные тесты в усовершенствованной схеме бактериологической дифференциации дают возможность за 75 ч идентифицировать P. aeruginosa.
3:. Отобран штамм специфического бактериофага для целей идентификации и индикации P. aeruginosa в объектах внешней среды, пищевом сырье и пищевых продуктах.
4. Разработаны биотехнологические параметры по созданию диагностического биопрепарата специфического бактериофага УГСХА-Р.а.№4.
5. Усовершенствованная схема индикации Р.aeruginosa методом РНФ с применением диагностического биопрепарата бактериофага УГСХА-Р.а.№4 ускоряет определение видовой принадлежности Р. aeruginosa.
Апробация работы
Материалы диссертации были представлены на: Всероссийских научно-практических конференциях Ульяновской ГСХА (Ульяновск, 2005, 2008, 2009), Международной научно-практической конференции «Современное состояние и перспективы исследований по инфекционной и протозойной патологии животных, рыб и пчел» (Москва, 2008), Конференции молодых ученых «Актуальные проблемы инфекционной патологии ветеринарной медицины» (Покров, 2009).
Работа выполнена на кафедре микробиологии, вирусологии, эпизоотологии и ветеринарно-санитарной экспертизы ФГОУ ВПО «Ульяновская государственная сельскохозяйственная академия».
Публикации
По теме диссертации опубликовано 9 научных работ, из них 1 статья в журнале, рекомендованном ВАК РФ.
Структура и объем диссертации
Диссертация состоит из введения, двух глав: обзора литературы, собственных исследований, состоящих из материалов и методов, результатов исследований и их обсуждения, заключения, выводов, списка использованных литературных источников, приложений. Материалы диссертации изложены на 155 страницах, включают 33 таблицы и 21 рисунок. Список использованных литературных источников включает 203 наименования, в том числе 111 зарубежных.
Похожие диссертационные работы по специальности «Микробиология», 03.02.03 шифр ВАК
Выделение и изучение основных биологических свойств бактериофагов Enterobacter и конструирование на их основе биопрепарата2006 год, кандидат биологических наук Пожарникова, Елена Николаевна
Разработка и применение диагностического биопрепарата "YP-09 УГСХА" на основе бактериофагов Yersinia Pseudotuberculosis2010 год, кандидат биологических наук Катмакова, Надежда Петровна
Выделение и изучение биологических свойств бактериофагов рода Proteus, конструирование на их основе биопрепарата и разработка параметров практического применения2006 год, кандидат биологических наук Феоктистова, Наталья Александровна
Выделение и изучение основных биологических свойств бактериофагов Klebsiella, конструирование на их основе биопрепарата2006 год, кандидат биологических наук Бульканова, Елена Анатольевна
Выделение и изучение основных биологических свойств бактериофагов escherichia coli 0157 и их применение в диагностике2004 год, кандидат биологических наук Молофеева, Надежда Ивановна
Заключение диссертации по теме «Микробиология», Шестаков, Андрей Геннадьевич
127 ВЫВОДЫ
1. Показано, что сконструированная накопительная среда с сукцинатом* натрия, аргинином и фурадонином и усовершенствованная селективная среда с цетримидом, в комплексе обладают высокой специфичностью, позволяют выделять атипичные и беспигментные штаммы
P. aeruginosa, из объектов внешней среды, пищевого сырья и пищевых продуктов.
2. Усовершенствованая бактериологическая схема выделения и диффе ренциации P. aeruginosa, включающая специфичные среды и подоб ранные бактериологические тесты, основанные на утилизации ацета мида в анаэробных условиях, ингибировании солями бария, окислении глюкозы, разжижении желатина, позволила из внешней среды, пище вого сырья и пищевых продуктов выделить и идентифицировать 35 штаммов P. aeruginosa, в течение 75 часов.
3. Выделено 7 бактериофагов бактерий вида P. aeruginosa и изучены их изоляты, которые имели два типа колоний: с прозрачным центром и мутной переферией и мелкие прозрачные; литическая активность варьировала от 10"7 до 10"10 по методу Аппельмана и от 2 х 107 до 2 х Ю10 по методу Грациа. Изоляты бактериофагов проявляли устойчивость к хлороформу в течение 60 минут и инактивировались при температуре 75 °С в течение 30 минут.
4. В результате изучения биологических свойств бактериофагов, выбран один бактериофаг УГСХА — Р.а.№4 имеющий оптимальные для конструирования диагностического биопрепарата свойства: титр бактериофага составляет Ю"10 по методу Аппельмана и 2 х 10ю по методу Грациа; спектр литической активности 94.8 %.
5. Разработаны параметры постановки реакции нарастания титра фага для ускоренной индикации бактерий вида P. aeruginosa с использованием биопрепарата из бактериофага УГСХА-Р.а.№4, позволяющие обнаружить в исследуемом материале указанные бактерии в концентрации от
10 м.к. в 1г (1мл) в течение 19-20 часов. 6. Оптимальными технологическими показателями для изготовления специфического биопрепарата бактериофага УГСХА-Р.а.№4 с высокой литической активностью являются: соотношение количества фаговых корпускул к количеству бактериальных клеток индикаторного штамма Р. aeruginosa 1:5, оптимальное время инкубирования при температуре 37 °С — 6 часов, обработка фаголизата хлороформом в соотношении 1:10 в течение 30 минут.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Проблема диагностики так.называемых неферментирующих бактерий,и в. частности Р. aeruginosa, во внешней среде, пищевом сырье и пищевых продуктах, наиболее актуальна (Афонин, 1999; Покровский, 2002; Шуляю 2003); Бактерии Р. aeruginosa вызывают заболевания у животных, что приводит к снижению экономического эффекта в животноводстве (Бовкун, Борисенкова, 1995).
Р. aeruginosa вызывает порчу пищевого сырья животного происхождения, а продукты питания, кроме того, являются одними из факторов передачи инфекций вызванных бактериями этого вида (Стефанов, 1997; Красильников, 1999).
Определенные проблемы, связанные с биодеградацией и ухудшением качества нефтяного сырья и нефтяных продуктов Р. aeruginosa представляет для нефтегазовой отрасли (Al-Hadhrami, Lapin-Scott, Ficher, 1995).
Инфекции, вызванные Р. aeruginosa в условиях госпитальных стационаров, представляют серьезную проблему для больных ожоговых отделений, родильных отделений, урологических и хирургических стационаров (Яковлев, 2001; Kirschke, 2003).
Устойчивость Р. aeruginosa во внешней среде, а так же способность длительное время сохранять свою жизнеспособность в субстратах бедных питательными веществами, способствуют циркуляции указанных бактерий в городах и в животноводческих комплексах (Bergen, 1981).
Проведение нерациональной антибиотикотерапии, а также безконтроль-ное применение антибиотиков в животноводстве, способствуют появлению штаммов Р. aeruginosa обладающих полирезистентностью к широкому спектру антибиотиков. Этому способствует наличие у Р. aeruginosa плазмид резистентности, отвечающих за устойчивость к определенным группам антибиотиков (Trevors, 1991).
При разработке накопительной УГСХА-Р.а.1 и усовершенствовании селективной среды УГСХА-Р.а.2, нами были использованы антимикробный препарат фурадонин и поверхностно-активное вещество цетримид, существенно не влияющие на рост клеток P. aeruginosa, но в комплексе обеспечивающие хороший селективный эффект. Чувствительность разработанной нами среды накопления УГСХА-Р.а.1, составляет 10 м.к./мл. Через 24 часа культивирования при температуре 37 °С количество бактериальных клеток P. aeruginosa увеличивается в 400 раз. Чувствительность селективной среды
-J
УГСХА-Р.а.2 составляет 10 м.к./мл. При дифференцированной чувствительности среды накопления УГСХА-Р.а.1 и селективной среды УГСХА-Р.а.2, появляется возможность визуализировать бактериальные колоний на плотной селективной среде и, кроме того, снижается риск лабораторных ошибок и случайного заражения среды второго этапа.
Типичные штаммы P. aeruginosa синтезируют различные пигменты, и идентификация пигментообразующих штаммов для бактериологов при проведении рутинных исследований не представляет серьезных трудностей. Однако 8% - 18% штаммов P. aeruginosa лишены пигментов (Мороз, 1988). Лабораторные ошибки при идентификации P. aeruginosa от неферментирую-щих бактерий других близких видов и родов создают трудности в своевременной диагностике этого возбудителя во внешней среде, пищевом сырье и пищевых продуктах (Meschede, 1986; Neu, 1985; Zierdt, 1985).
Нами предложено 4 теста бактериологической идентификации Р. aeruginosa, учитывающие их основные биохимические свойства. Тест «А» основан на способности Р. aeruginosa утилизировать ацетамид в анаэробных условиях, тест «В» основан на ингибировании роста Р. aeruginosa солями бария, тест «С» учитывает способность вышеуказанных бактерий окислять глюкозу с образованием кислоты и тест «D» выявляет протеолитические ферменты. Так же в бактериологическую схему добавлен биопрепарат бактериофага УГСХА-Р.а.№4, обладающий высокой специфичностью и широким спектром литической активности.
Таким образом, используя разработанные среды, тесты и специфичный бактериофаг УГСХА-Р.а.№4 в строгой последовательности, мы усовершенствовали схему выделения и идентификации P. aeruginosa с чувствительностью 10м.к./мл в исследуемом субстрате, высокой специфичностью и учетом непигментированных штаммов. Специфичность сконструированной схемы выделения и идентификации P. aeruginosa из объектов внешней среды, пищевого сырья и пищевых продуктов проверена на 16 штаммах бактерий других видов и родов. С использованием усовершенствованной нами схемы, из объектов внешней среды, пищевого сырья и пищевых продуктов выделено 35 штаммов P. aeruginosa, четыре из которых лишены пигментов, что согласуется с данными литературы. Общее время, затрачивающееся на бактериологическую схему выделения и идентификацию бактерий до вида Pseudomonas aeruginosa, составляет 75 часов.
Для быстрого и точного обнаружения Р. aeruginosa, ускоренная индикация в объектах внешней среды, пищевом сырье и пищевых продуктах приобретает важное значение. Однако, применение современных генетических и иммунологических методов для решения этих задач зачастую притерпевает трудности связанные с высокой стоимостью, либо сложностью выполнения данных исследований.
О возможности применения бактериофагов бактерий Р. aeruginosa с целью идентификации указанных бактерий сообщают некоторые исследователи (Postic, Finland, 1961; Graber, Latta,Vogel, Brame, 1962; Sjoberg, Lindberg, 1968).
Для достижения поставленной цели, из объектов внешней среды выделено 7 бактериофагов активных в отношении штаммов Р. aeruginosa. Для конструирования биопрепарата и разработки реакции нарастания титра фага нами были изучены основные биологические свойства выделенных бактериофагов, это морфология негативных колоний и литическая активность и на основании полученных данных отобран наиболее подходящий для- этих целей штамм бактериофага.
По морфологии негативных колоний выделенные бактериофаги разделены на две группы. К первой группе относятся бактериофаги, образующие негативные колонии диаметром 2мм и полностью прозрачные, ко второй группе относятся бактериофаги, имеющие диаметр 3-4мм с четким прозрачным центром и мутным ореолом по периферии.
Литическая активность выделенных бактериофагов P. aeruginosa варьи
7 1Л 7 1П ровала от 10" до 10" по методу Аппельмана и от 2x10 до 4x10 по методу Грациа.
Далее изучили спектр литической активности и специфичность действия выделенных и отобранных бактериофагов УГСХА- Р.а.№1 и УГСХА-Р.а.№4. Проведенные эксперименты показали, что оба фага являются высокоспецифичными по отношению к штаммам P. aeruginosa. Спектр литической активности составил у бактериофага УГСХА- Р.а.№1 - 76.9 %, а спектр литической активности бактериофага УГСХА- Р.а.№4 - 94.8 %. В настоящее время в России препараты бактериофагов выпускаются на производственных объединениях концерна «Микроген». Спектр литической активности комер-ческих бактериофагов составляет 48,4%. Препарат разработанный коллективом авторов Санкт-Петербурга, состоящий из нескольких бактериофагов, имеет совокупный спектр литической активности 81,7% (Асланов, Яфаев, Зуева, 2003).
Изучена температурная чувствительность и устойчивость к хлороформу бактериофага УГСХА- Р.а.№4. Оказалось что бактериофаг УГСХА- Р.а.№4 оказался устойчив к температуре 55 °С. При температуре выше 55 °С фаг УГСХА-Р.а.№4 терял свою физиологическую активность и погибал при температуре выше 75 °С. Литературные данные показывают, что фаги P. aeruginosa устойчивы к температуре 60 °С — 65 °С в течение 30 минут (Maillard, Hann, Perrin, 1998; Жиленков, 1998).
Результаты исследований устойчивости бактериофага УГСХА-Р.а.№4 к инактивирующему действию хлороформа (обработка 1:10 в течение 60 минут) определили их 100% устойчивость, а штаммы P. aeruginosa инактивиро-вались уже при экспозиции 30 минут. В результате анализа полученных данных было установлено, что при конструировании биопрепарата и постановки реакции; нарастания® титра фага, инактивировать фаголизаты целесообразно? хлороформом.
Таким образом по результатам изучения биологических свойств был отобран бактериофаг УГСХА-Р.а.№4, для изготовления биопрепарата с целью идентификации и индикации P. aeruginosa в объектах внешней среды, пищевом сырье и пищевых продуктах.
Определены оптимальные технологические параметры для изготовления биопрепарата с высокой литической активностью: соотношение количества фаговых корпускул к к количеству бактериальных клеток индикаторного штамма P. aeruginosa 1:5, время инкубирования при температуре 37 °С — 6 часов. Для освобождения фаголизата от жизнеспособных бактерий необходимо применение хлороформа в соотношении 1:10 в течение 30 минут.
Для ускоренной индикации P. aeruginosa в объектах внешней среды, пищевом сырье и пищевых продуктах, разработали биотехнологические параметры постановки реакции нарастания титра фага, включающие количественный показатель реакции, имеющий диагностическое значение и оптимальное время, обеспечивающее полноценное взаимодействие: фага с бактериями.
По результатам проведенных исследований установлено, что количественный показатель реакции нарастания титра фага для УГСХА-Р.а.№4 (увел личение количества корпускул фага более чем в 5 раз) составил 10 м.к./мл. Оптимальное время экспозиции выбирали из следующих параметров:
- предварительное подращивание исследуемого материала в течение 5, „ 16, 24 часов, с последующим инкубированием в течение 5 ч при температуре 37 °С.
- Увеличение времени контакта исследуемого материала с фагом до 7, 16, 24 часов при температуре 37 °G.
В результате проведенных исследований было установлено; что после предварительного подращивания исследуемого материала: в течение 5 часов удалось обнаружить P. aeruginosa гомологичные фагу УГСХА-Р.а.№4 в fy концентрации 10 м.к./мл.
Увеличение времени предварительной инкубации до 16 часов повысило чувствительность РНФ на один порядок. Подращивание материала при 24-часовой экспозиции существенно не повлияло на результаты РНФ.
Полученные экспериментальные данные позволяют считать, что наиболее оптимальным является режим РНФ при 7 часовой экспозиции исследуемого материала с фагом без подращивания. Такой режим позволяет провести индикацию P. aeruginosa в количестве 10 м.к./мл, в течение 24 часов. Однако увеличение времени инкубирования до 16 часов повышает чувствительность метода и биопрепарата на порядок и позволяет выявлять P. aeruginosa при наличии их в исходном исследуемом материале 10 м.к./мл.
РНФ как указывают В.Д. Тимаков и Д.М. Гольдфарб (1956), является чувствительным и специфическим методом диагностики, позволяющим за относительно короткий срок обнаружить искомые бактерии в субстрате, при наличии посторонней микрофлоры без выделения чистых культур.
Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Шестаков, Андрей Геннадьевич, 2010 год
1. Абдусаматов, М.А. Сравнительное изучение реакции нарастания титра фага и бактериологического метода при диагностике брюшного тифа у больных и реконвалесцентов / М.А Абдусаматов. // ЖМЭИ. — 1960. -№1. С. 23-27.
2. Аврех, В.В. О применении бактериофагов в диагностике сальмонелле-зов / В.В. Аврех // ЖМЭИ. 1954. - №7. - С. 93-96.
3. Азизбекян, P.P. Изменение наследственности бактерий путем фаговой конверсии / P.P. Азизбекян // В кн. Микробиология. Т.З. (Итоги науки и техники ВИНИТИ АН СССР). М. - 1974. - С. 191-233.
4. Алешня, Е.П. Способ идентификации Pseudomonas aeruginosa / Е.П. Алешня, В.В. Алешня // Открытия. 1977. - №36. - С. 70-72.
5. Ароне, P.M. Применение синтетических минеральных сред для выделения синегнойной палочки / P.M. Ароне, Т.В. Чурсина // Лаб. дело. -1976. -№3.- С. 179-180.
6. Арский, В.Г. Применение реакции нарастания титра фага для диагностики хронической дизентерии / В.Г. Арский, 3.3. Ахметов, А.В. Ясен-ский // Здравоохранение Таджикистана. — 1961. — №2. — С. 5-11.
7. Архангельский, И.И. Фаготипирование патогенных стафилококков, выделенных из молока коров / Б.А. Степанов, И.И. Архангельский // Ветеринария. 1966. - №3. - С. 27-29.
8. Асланов, Б.И. Пути рационального использования синегнойных бактериофагов в лечебной И'противоэпидемической практике / Б.И. Асланов, Р.Х. Яфаев, Л.П. Зуева // Микробиол. 2003. - №5. - С. 72-76.
9. Афонин, Э.А. Разработка бактериологического метода выделения и идентификации Pseudomonas aeruginosa / Э.А. Афонин // Автореф. дис. . канд. биол. наук. — Ульяновск, 1999 — 18 с.
10. Ашмарин, И.П. Статистические методы в микробиологических исследованиях / И.П. Ашмарин, А.А. Воробьев. — Л., 1962. — 261 с.
11. Байрак В*.А. Тесты патогенности и фаготипы стафилококков, выделенных при мастите коров / В.А. Байрак // Автореф. дис. .канд. биол. наук. — М., 1970;- 19 с.
12. Бейли, Н. Математика-в биологии и медицине / Н. Бейли. — М.: Мир, 1970.-326 с.
13. Бовкун Г.Ф. Биологические свойства синегнойной,палочки и ее роль в патологии птицы / Г.Ф. Бовкун, А.Н. Борисенкова // Ветеринария. — 1995.- №2.- С. 30-33.
14. Белов, Д. В. Физико-химические явления на поверхности алюминия и его сплавов при воздействии микроорганизмов / Д.В. Белов // Автореф. дис. канд. химич. Наук. Нижний-Новгород, 2007. — 23 с.
15. Бульканова, Е.А. Выделение и изучение основных биологических свойств бактериофагов Klebsiella, конструирование на их основе биопрепарата и разработка параметров их применения // Автореферат, дис. . канд. биол. наук. — Саратов. — 2006. — 20 с.
16. Бухарин, О.В. Биоиндикация экологического состояния равнинных рек / О.В. Бухарин, Г.С. Розенберг. М.: Наука, 2007. - 403 с.
17. Висконти, Р. Генетика бактериофага / Р. Висконти // Онтогенез вирусов. М. - 1956. - С. 141-142.
18. Владимиров, Добрецов Флюорисцентные зонды в исследовании биологических мембран / Ю.А. Владимиров, Г.Е. Добрецов // Наука. — М. — 1980.- С. 268-270.
19. Габрилович, И.М. Общая,характеристика бактериофагов / И.М. Габрилович // Основы бактериофагии. Минск. - 1973. — С. 5 - 24.
20. Ганюшкин, В.Я. Бактериофаги Salmonella choleraesuis, сравнительная характеристика и практическое применение / В.Я. Ганюшкин // Автореф. дис. .докт. вет. наук. — М. — 1984. — 34 с.
21. Гольдфарб, Д.М. Опыт применения реакции нарастания титра фага для диагностики дизентерии / Д.М. Гольдфарб, В.Н. Кузнецова // ЖМЭИ. — 1957.-№8.-С. 90-94.
22. Гольдфарб, Д.Mi Бактериофагия / Д.М. Гольдфарб // Mi: Медгиз. -1961.-299 с.
23. Гордина, Р.В. Фаготипирование паратифозных В бактерий: и действие на них бактериофагов / Р1В. Гордина // Автореф. дис. . докт. вет. наук. -М., 1954.-С. 24-27.
24. ГОСТ Р 26670-91. Продукты пищевые. Методы культивирования, микроорганизмов. Взамен ГОСТ 26670-85. - М.: Изд-во стандартов, 2008. -8 с.
25. ГОСТ Р 51426-99. Микробиология. Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Общее руководство по приготовлению разведений для микробиологических исследований. — М.: Изд-во стандартов, 2002. — 7 с.
26. ГОСТ Р 51446-99. Микробиология. Продукты пищевые. Общие правила микробиологических исследований. — введен 01.01.2001 до 01.01.2010.-М.: Изд-во стандартов, 2005 .-31 с.
27. Давиденко, Т.А. Фаготипирование S.typhimurium, выделенных в Киеве в 1966-1970 / Т.А. Давиденко, А.М. Зарицкий // В кн.: Кишечные инфекции. Киев. - 1972. - С. 41-43.
28. Домарадский, И.В. Методика быстрого обнаружения чумного микроба при помощи бактериофага / И.В. Домарадский, О.Н. Мосолова, JI.K. Денисенко // Иркутск. 1957. - С. 44-51.
29. Жарикова, М.С. Оценка эффективности питательных сред для обнаружения синегнойной палочки / М.С. Жарикова, А.Т. Козлова, Л.Г. Зимина//Лаб. дело. 1983. - №10. - С. 48-51.
30. Жиленков, Е.Л. Изучение начальных стадий взаимодействия умеренного фага phi04 с клеткой Pseudomonas aeruginosa / Е.Л. Жиленков // Микробиол. 1997. - Т.66. - №4. - С. 532-538;.
31. Золотухин, С.Н. Создание и разработка схем применения диагностических» биопрепаратов на основе выделенных и изученных бактериофагов энтеробактерий /■ С.Н. Золотухин // Автореф. дис. . д-ра биол. наук. -Ульяновск, 2007. 39 с.
32. Инфекция, вызванная Pseudomonas aeruginosa у шиншилл / Lipej Z. et al.. Hrv. Vet. Vjesn. - 1993. - V.21. - №3. - P. 73-77.
33. Применение РНФ для индикации дизентерийных бактерий флекснера в организме зараженных кроликов / А.Ю. Иллютович и др. // Бюлл. эксп. биол. и мед. 1958. - № 6. - С. 78-83.
34. Илюхин, В.И. Псевдомонадные инфекции в патологии человека / Илюхин, В.И. // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 1985. - №2. - С. 110-114.
35. Калина, Г.П. Применение жидких сред накопления при поисках Pseudomonas aeruginosa в объектах окружающей среды и патологическом материале / Г.П. Калина, Н.Б. Комзолова // ЖМЭИ. — 1988. — №5. -С. 98-105.
36. Кандемия у пациентов в стационарах Санкт-Петербурга / Н.Н. Климко и др. // журнал клин, микробиол. и антимикр. химиотерап. — 2002. -Т. 4.- № 1. С. 15-21.
37. Капырина, Н.А. Идентификация возбудителя листериоза с помощью бактериофага / И.А. Бакулов, Н.А. Капырина // Симпозиум "Профилактика и меры борьбы с лептоспирозом и листериозом с/х животных". -Новочеркасск. — 1972. С. 76-78.
38. Усвоение додецилсульфата натрия бактериями рода Pseudomonas / Е.А. Киприанова и др. // Микробиол. 1978. - Т.40. - №4. - С. 503-505.
39. Кандемия у пациентов в стационарах Санкт-Петербурга / Н.Н. Климко и др. // Клин, микробиол. и антимикр. химиотерап. — 2002. — Т.4. — № 1.- С. 15-21.
40. Клюянова, М. Ä. Разработка основы.биопрепарата для диградации нефти при загрязнении природных сред / М.А. Клюянова // Автореф. дис. .канд. биол. наук. — Уфа, 2009. — 24 с.
41. Ковалева, E.H. Создание биопрепарата на основе выделенных и изученных бактериофагов Enteroccocus faecalis // Автореф. дис. .канд. биол. наук. Ульяновск, 2009. - 20 с.
42. Козелько, O.A. Применение метода РНФ для контроля качества дезинфекции в очагах кишечных инфекций / O.A. Козелько // ЖМЭИ. — 1961.-№2.-С. 36-40.
43. Кольпикова, Т.И. Фаготипирование листерий / Т.И. Кольпикова // Ветеринария. 1990. - №6. - С. 31-32.
44. Коритняк, Б.М. . Выделение и изучение основных биологических свойств бактериофагов Yersinia enterocolitica и их применение в диагностике // Автореф. дис. . .канд. биол. наук. Саратов, 2005. - 20 с.
45. Красильников, А.П. Микробиологический словарь — справочник / А.П. Красильников, Т.Р. Романовская // Минск: Асар. 1999. - С. 310-311.
46. Кременчук, Г.А. Применение реакции нарастания титра фага для исследования объектов внешней среды / Г.А. Кременчук, М.А. Гицевич, К.П. Бояршинова // ЖМЭИ. 1961. - № 7. - С. 124-126.
47. Кульба, A.M. Биологические свойства и нуклеотидный состав ДНК бактериофагов Pseudomonas / A.M. Кульба, A.C. Горелышев // Ж., Микробиология. 1981. - Т.50. - В.З. - С. 536-542.
48. Мац, Л.И. Вопросы санитарной бактериологии и вирусологии. — М.: Медицина. 1965. - С. 44-59.
49. Методические рекомендации: по выделению и диагностике псевдомо-ноза сельскохозяйственных животных. — ГУВ МСХ СССР, М., 1982.
50. Методы частной бактериологии / Д.А. Васильев и-др.. Ульяновск : Ульяновская ГСХ, 2004. - 233 с.
51. Молофеева, Н.И. Выделение и изучение основных биологических свойств бактериофагов Escherichia coli 0157 и их применение в диагностике: Автореф. дис. .канд. биол. наук. — Саратов, 2004. 20 с.
52. Мороз, А.Ф. Синегнойная инфекция / Мороз, А.Ф. Анциферова, Н.Г. Баскакова, Н.В. М. - Медицина, 1988. — 256 с.
53. Мороз, А.Ф. Питательная среда для выделения Pseudomunas aeruginosa / А.Ф. Мороз, Г.Е. Афиногенов, Б.М. Бекбергенов // Лаб. дело. — 1976. №5.- С. 302-303.
54. Общая и санитарная микробиология с техникой микробиологических исследований / под редакцией А.С. Лабинской, Л.П. Блинковой, А.С. Ещиной. -М.: Медицина, 2004. — 576 с.
55. Островская, Н.Н. Ускоренный метод диагностики брюшного тифа Vi-фага / Н.Н. Островская, Б.Н. Папкова // ЖМЭИ. 1951. - № 2. - С. 37-40.
56. Определитель бактерий Берджи / под редакцией Дж. Хоулта и др., 9-е издание. Т.1. М.: Мир, 1997. - 432 с.
57. Островская, Н:Н. К использованию метода нарастания* титра фага для выявления бруцелл во внешней среде / Н.Н". Островская, Д.М. Гольд-фарб // ЖМЭИ. 1961. - № 5. - С. 145-147.
58. Павлова, И.П. Изучение морфологии и биологических свойств фагов Вас. anthracis и Вас. Cereus / И.П. Павлова // ЖМЭИ. 1971«. - № 7. —1. С. 147-149.
59. Плетенева, Е.А. Изучение разнообразия в группе фагов вида РВ1 (Mio-viridae) Pseudomonas aeruginosa и их поведения на адсорбционно-устойчивых мутантах бактерий / Е.А. Плетенева, О.В. Шабурова // Генетика. 2008. - Т. 44. - №2. - С. 185-194.
60. Покровский, В.И. Медицинская микробиология / В.И. Покровский, O.K. Поздеев // М.: Гоэтар Медицина. 2002. - С. 343-348.
61. Покровский, В.И. Медицинская микробиология / В.И. Покровский, O.K. Поздеев // М.: Гоэтар Медицина. 1998. - С. 183-192.
62. Пожарникова, E.H. Выделение и изучение биологических свойств бактериофагов рода Enterobacter, конструирование на их основе биопрепарата и разработка параметров практического применения: Автореф. дис. . канд. биол. наук. — Саратов, 2006. — С. 4-19.
63. Поляк, М.С. Питательные среды для медицинской и санитарной микробиологии / М.С. Поляк СПб.: ЭЛБИ-СПб. - 2008. - С. 179-180.
64. Пульчеровская, Л.П. Выделение и изучение основных биологических свойств бактериофагов Citrobacter и их применение в диагностике: Автореф. дис. . канд. биол. наук. Саратов, 2004. — 21 с.
65. Ревенко И.П. К диагностике рожи свиней / И.П. Ревенко // Ветеринария. 1970. - № 6. - С. 13-23.
66. Ревенко И.П. Бактериофаги и их использование в ветеринарной практике. Киев: Урожай. - 1978. - С. 41-88.
67. Рожавин М.А. Меланинообразующие культуры Pseudomonas aeruginosa / М.А. Рожавин, П.Л. Тыдельская // Журн. микробиологии.-1979.- N2.-С. 21-23.
68. Результаты бактериологического обследования поросят различного возраста в свиноводческом комплексе / О. В. Прунтова и др. // Вирусные болезни с.-х. животных : тез. докл. Всерос. науч.-практ. конф. Владимир. — 1995. 175 с.
69. Рубашкина Б.К., Казакова С.Ф. Применение метода нарастания титрафага для исследования объектов внешней среды / Б.К. Рубашкина, С.Ф. Казакова // ЖМЭИ. 1959; - №6. - С. 110-112.
70. Ряпис, Л.А. Биологическая активность, музейных и свежевыделенных культур Pseudomunas aeruginosa и возможные* фазовые преобразования популяций возбудителя / Л.А. Ряпис и др.. — микробиол:, эпидемиол. и иммунобиол. — 1994. № 6. — С. 31-32.
71. Сергиенко Ф.Е. Новый метод бактерюлопчно д!агностики за допомо-гою бактерюфага / Ф.Е. Сергиенко // Мжробюл. журн. АН УССР. — 1936. -№1. -С. 85-112.
72. Сиволодский, Е.П. Тест идентификации бактерий рода Pseudomonas / Е.П. Сиволодский // Лаб. дело. 1988. - № 11. - С. 64-66.
73. Смирнов, В.В. Бактерии рода Pseudomonas / B.B. Смирнов, Е.А. Ки-прианова // Киев: Наук. Думка. — 1990. С. 65-69.
74. Стефанов, И. Распространение Pseudomonas aeruginosa в мякоти мясных продуктов / И. Стефанов // Вет. мед. — 1997. — №4. С. 256-257.
75. Стронговская, Н.В. Сравнительное изучение РНФ для выявления носи-тельства дизентерийных бактерий: Автореф. дис. . канд. мед. наук. — Симферополь. 1964. - С. 6-20.
76. Сидоров, М.А. Определитель зоопатогенных микроорганизмов, справочник / М.А. Сидоров, Д.И. Скородумов, В.Ф. Федотов. М.: Медицина, 1995.-319 с.
77. Тимаков, В.Д. Экспериментальное обоснование нового принципа обнаружения дизентерийных и брюшнотифозных бактерий с помощью фага / В.Д. Тимаков, Д.М. Гольдфарб // ЖМЭИ. 1956. - № 10. - С. 3-7.
78. Тимаков, В:Д: Об условиях взаимодействия фага и бактериальной клетки / В.Д. Тимаков, Д.М. Гольдфарб // Вестник АМН СССР. 1958. - № 2. — С. 37-43.
79. Тимаков, В.Д. Реакция нарастания титра фага (РНФ) / В.Д. Тимаков, Д.М. Гольдфарб. М., 1962. - 32 с.
80. Тихоненко, A.C. Ультраструктура вирусов бактерий. — М.: Наука.1968.-89 с.
81. Тыдельская, И.JI.Селективная среда для выделения Pseudomonas aeruginosa / И.Л. Тыдельская, М.А. Рожавин, В.В. Солозуб // Лаб. дело. 1980. - № 9. - С. 549-550.
82. Усвоение додецилсульфата натрия бактериями рода Pseudomonas / Е.А. Киприанова и др. // Микробиол. 1978. - Т. 40. - №4. - С. 503-505.
83. Феоктистова, Н.А. Выделение и изучение основных биологических свойств бактериофагов Proteus, конструирование на их основе биопрепарата и разработка параметров практического применения // Автореф. дис. . канд. биол. наук. — Саратов. — 2006. 22 с.
84. Цветков, К.И. Применение специфического фактериофага для диагностики паратифозного аборта кобыл / К.И. Цветков // Ветеринария. -1941.-№6.-С. 4-6.
85. Шуляк, Б.Ф. Руководство по бактериальным инфекциям собак. Том 2. Грамотрицательные бактерии / Б.Ф. Шуляк. — М.: «Олита», 2003. -283 с.
86. Щеглова, М.К. Некоторые свойства листериозного бактериофага / М.К. Щеглова // ЖМЭИ. 1962. - № 1. - С. 99-102.
87. Яковлев С.В. Современные подходы к антибактериальной терапии инфекций мочевыводящих путей / С.В. Яковлев // Consilium-medicum. — 2001.- №3.-С. 300-306.
88. Яковлев, С.В. Бактериальные инфекции в амбулаторной практике: выбор оптимального антибактериального препарата / С.В. Яковлев, Л.И.
89. Дворецкий, М.П. Суворова // Consilium medicum. 2002. — №4. - С. 10-21.
90. A second N-acylhomoserine lactone signal produced by Pseudomonas aeruginosa / J.P. Pearson et al. // Proc Natl Acad Sci U. S. A. — 1995. V. 92.-P. 1490-1492.
91. Aalam, S. High efficiency styrene biodégradation in a biphasic organic/water continuous reactor / S. Aalam, A. Pauss, J. Lebeault //Applied Microbiology Biotechnology. 1993. - №39. - P. 696-699.
92. Al-Hadhrami, M.N. Bacterial survival and n-alkane degradation within omani crude oil and a mousse / M.N. Al-Hadhrami, H.M. Lappin-Scott, P J. Fisher // Mar. Pollut. Bull. 1995. V. 30. - №6. - P. 403-408.
93. Barnes, H.J. Miscellaneous and sporadic bacterial infections / H.J. Barnes // In Y.M. Saif : Diseases of poultry, 11th edition. 2003. - P. 845-862.
94. Bonde, G. Bacterial Indicator of Water Pollution. / G. Bonde // Teknisk For-lag. Copenhagen. - 1963. - P. 164-167.
95. Boucadida, J. Molecular epidemiology of chronic pulmonary colonization by Pseudomonas aeruginosa in cystic fibrosis / J. Boucadida, M. de Montalembert, J. Lenoir // J. Med. Microbiol. 1993. - V. 38. - P. 29-33.
96. Bouza, E. A European perspective on nosocomial urinary tract infections. I. Report on the microbiology, work-load, etiology and antimicrobial susceptibility / E. Bouza, A. Voss, et al. // Clin Microbiol Infect. 2001. - V. 7. -P. 523-531.
97. Boyd, J. S. K. Bacteriophage and heredity / J. S. K. Boyd // Nature. 1954. -V. 173.-P. 50-51.
98. Burnet, F. M. Induced lysogenicity and mutation of bacteriophage within ly-sogenic bacteria / F. M. Burnet, D. Lush. // Australian J. Exptl. Biol. Med. Sei. 1936. - V. 14. - P. 27-38.
99. Byng, G. Variable enzymological pattering in tyrosine biosynthesis as a means of determining natural relatedness among the Pseudomonadaceae / G. Byng, R. Whitarer, Cherna et al. // J. Bacteriol. 1980. - V. 144. - №1. -P. 247-257.
100. Comparative Genomic Analysis of 18 Pseudomonas aeruginosa Bacteriophages / T. Kwan et al. // Journal of Bacteriology. 2006. - V. 188. - № 3. -P. 184-187.
101. Darreil, J.H. Pyocine-typing of hospital strains of Pseudomonas pyocyanea / J. H. Darrell, A.H. Wahba. // J. Clin. Pathol. 1964. - V. 17. - P. 236-242.
102. De Vos, P. Intrageneric and intergeneric similarities of ribosomal RNA cis-trons of the Genus Pseudomonas and the implications for taxonomy / P. De Vos // Antonie van Leeuwenhoek J. Microbiol, and Serol. 1980. — V. 46. — № l.-P. 96-99.
103. Ednie, L.M. Comparative activities of clinafloxacin against gram-positive and -negative bacteria / L.M. Ednie, M.R. Jacobs, P.C. Appelbaum // An-timicrob Agents Chemother. 1998. - V. 42. - P. 269-273.
104. Euzeby, J.P. List of Prokaryotic Names with Standing in Nomenclature -Genus Pseudomonas. http://www.bacterio.cict.fr/index.html.
105. Expression of Pseudomonas aeruginosa virulence genes requires cell-to-cell communication / L. Passador et al. // Science. 1993. - V.260. - P. 127130.
106. Feldman, M. Role of flagella inj pathogenesis of Pseudomonas aeruginosa pulmonary infection / M.' Feldman; R. Bryan, S. Rajan, L. Scheffler, S. Brunnert, H. Tang, et al. // Infect Immun. 1998. - V. 66. - P. 43-51.
107. Festl, H. DNA hybridization probe for the Pseudomonas fluorescens group/ H. Festl, W. Ludwig, K. H. Schleifer // Appl. And Environ. Microbiol. -1986.-V.52.- №5.- P. 190-194
108. Finegold, Bailey and Scott's Diagnostic Microbiology / Finegold // 7th ed., The C. V. Mosby Co., St. Louis. 1986.
109. Frank, D.W. Cloning and sequence analysis of a transregulatory locus required for exoenzyme S synthesis in Pseudomonas aeruginosa / D.W. Frank, B.H. Iglewski 11J Bacteriol. 1991. - V. 17. - №3. - P. - 460-468.
110. Freeman, V. J. Studies on the virulence of bacteriophage infected strains of Corynebacterium diphtheriae / V. J. Freeman // J. Bacteriol. 1951. - V. 61.-P. 675-688.
111. Frei, W. Uber Cytochrom and das Atmungssystem der Bakterien / W. Frei, L. Riedmuller, F. Almasy // Biochem. Z. 1934. - V.27. - №4. - P. 253267.
112. Fuerst, J.A. Surfase appendages similar to fimbriae (pili) von Pseudomonas cpecies / J.A. Fuerst, A. Hayward // J. Gen. Microbiology. 1969. - V. 58. -№ 2. - P. 227-237.
113. Fuqua, W.C. Quorum sensing in bacteria: the LuxR-LuxI family of cell density-responsive transcriptional regulators / W.C. Fuqua, S.C. Winans, E. P. Greenberg // J Bacteriol. 1994. -V. 17. - №6. - P. 269-275.
114. Gaby, W.L. Differential diagnosis of pseudomonas-like microorganisms in the clinical laboratory / W. L. Gaby, E. Free // J. Bact. 1958. - V.76. -№4. p. 442-444.
115. Gaby, W. L. Practical laboratory test for the identification of Pseudmnas aeruginosa / W. L. Gaby, C. Hadley // J. Bact. 1957. - V. 74. - P. 356-363.
116. Galloway, D.K: Pseudomonas aeruginosa elastase and elastolysis revisited: recent developments / D.R. Galloway I I Mol Microbiol: — 1991. — V.5. — №2.-P. 315-321.
117. Gambello, M:J. Cloning and characterization of the Pseudomonas aeruginosa lasR gene, a transcriptional activator of elastase expression / M.J. Gambello, B.H: Iglewski //J Bacteriol. 1991. - V. - 17. - №3. - P. - 3039.
118. Greta, B. Elaboraría Si Evaluaría Metodelor Rapide Pentru Diagnosticul La-borator AI Infectiilor Tractusulii Urinar / G. Balan, // Teza de doctor on medicina. Chisunai. - 2008.
119. Gould, W. New selective media for enumeration and recovery of Pseudomo-nads from various habitats / W. Gould, C. Hagertorn, T. Bardinelli, R. Zabrotoviwicz // Appl. and Envirion.Microbiol. — 1985. V. 45. - №1. - P. 28-32.
120. Garg, P.K. Incidence, spectrum and antibiotic sensitivity pattern of bacterial infections among patients with acute pancreatitis / P.K. Garg, S. Khanna, N.P. Bohidar, et al. // J. Gastroenterol Hepatol. 2001. - V.16. - P. 55-59.
121. Gilardi, G. L. Nonfermentative gram-negative bacteria encouatered in clinical specimens. J. Microbiol. Serol. - 1974. - V. 39. - №2. -P. 29-42.
122. Graber, C. D. Bacteriophage grouping of Pseudomonas aeruginosa / C. D. Graber, R. Latta, E. H. Vogel, R. Brame. // Amer. J. Clin. Pathol. 1962. -V.37.-P. 54-62.
123. Hancock, R. Antibiotic uptake in.Gram-negative bacteria / R.Hancock, A. Bell // Eur. J. Clin Microbiol Infect. Dis. 1988. - V.7. - P. 713-720.
124. Holloway, B. W. Genom organization in Pseudomonas / B. W. Holloway, A. F. Morgan // Ann. Rev. Microbiol: 1986. - V. 40. - P. 79-105.
125. Holloway, B.W. Lysogeny in Pseudomonas, aeruginosa / B.W. Holloway, J. B. Egan, M. Monk. // Aust. J: Exp. Biol. 1960. - V. 38. - P. 321-330.
126. Holloway, B. W. Lysogenic conversion in Pseudomonas aeruginosa / B. W. Holloway, G. N Cooper. II J. Bacteriol. 1962. -V. 84. - P. 321-324.
127. Hugh, R. The taxonomic significance of fermentative versus oxidative metabolism of carbohydrates by various Gram-negative bacteria / R. Hugh, E. Leifson // J. Bact. 1953. - V. 66. - №1. - P. 24-26.
128. Husson, M.O. Pseudomonas and Burkholderia / M.O. Husson, Mr. Hamze, S. Verhille, D. Izard //Clinical precis of bacteriology, Paris. 2000. - P. 259-285.
129. Iglewski, B.H. Pseudomonas. In: Baron's Medical Microbiology (Barron S et al, eds.) / B.H. Iglewski // 4th ed., Univ of Texas Medical Branch. 1996. -P. - 543-548.
130. Iglewski, B.H. Pseudomonas aeruginosa exoenzyme S: an adenosine diphosphate ribosyltransferase distinct from toxin A / B.H. Iglewski, J. Sadoff, M.J. Björn, E.S. Maxwell // Proc Natl Acad Sei USA.- 1978. V.75. -№3.-P. 211-215.
131. Jain, D.K. Effect of addition of Pseudomonas aeruginosa Ug2 inocula or biosurfactants on biodégradation of selected hydrocarbons in soil / D.K. Jain, H. Lee, J.T. Trevors // Journal of Industrial Microbiology. 1992. -V.lOi — №2. — P. 87-93.
132. Jessen, O. Pseudomonas aerugenosa and other green fluorescent pseudomo-nads / Jessen. O. // Munksgaad, Copenhagen. 1965 - P. 244-246.
133. Keeven, J. A new selective medium for isolation / J. Keeven, B. De Cicco // Abstr. Annu. Meet. Amer. Soc. Microbiol., 1987, 87tm Annu. Meet., AtlantaWashington, D.C. 1987.-P. 382-385.
134. Kirschke, D.L. Pseudomonas aeruginosa and Serratia marcescens contamination associated with amanufacturing defect in bronchoscopes / D.L. Kirschke, et. al. // The New England Journal of Medicine. — 2003. V. 348. -№3.- P. 214-220.
135. Klinge, K. Differential tehniques anB methods of isolation of Pseudomonas / K. Klinge // Journal of Applied Microbiology. 1960. - V. 23. - №3. - P. 442-462.
136. Kramer, G. Beitrage1 zum- sofortigen Nachweis von Oxydations-und Reduktionswirkungen der Bakterien auf Grund der neuen Methode von W. H. Schultze / G. Kramer // Zbl. Bakt. (Abt. 1 Orig.). 1912. - V.62.1. P. 394-399.
137. Krylov, V. Myoviridae bacteriophages of Pseudomonas aeruginosa: a long and complex evolutionary pathway / V. Krylov // Res Microbiol. — 2003. — V. 154.-P. 69-75.
138. Lazdunski, A. Factors of virulence of Pseudomonas aeruginosa and their regulation / A. Lazdunski // Med. Badly. Repugnant. 1998. - V. 28. - P. 109-118.
139. Levin, M.A. Membrane filter technique for enumeration of Pseudomonas aeruginosa / M.A. Levin, V.J. Cabelli // Appl. Microbiol. 1972. - V. 24. -P. 864-870.
140. Loele, W. Uber die Verwendbarkeit von Oxydationswirkungen mit Para-phenylendiamin in der Bakteriologie / Loele, W. // Zbl. Bakt. (Abt. 1 Orig.). — 1929. — V. 111.-P. 325-328.
141. MacFaddin, J.F. Media for Isolation Cultivation -Identification-Maintenance of Medical Bacteria / J.F. MacFaddin // Williams and Wilkins, Baltimore. - 1985. -V. 1. - P. 25-28.
142. Maillard, J.Y. Perrin R Resistance of Pseudomonas aeruginosa PAOl phage Fl 16 to sodium hypochlorite / J.Y. Maillard, A.C. Hann // J: Appl Microbiol. 1998. - V.85. - №5. - P. 799-806.
143. Mann, S. Ober melaninbildende Stamme von Pseudomonas aeruginosa / S. Mann // Arch. Microbiol. 1969. - V. 65. - №4. - P. 359-379.
144. Meschede, W. Pseudomonas aerugenosa / W. Meschede // Med. Welt. — 1986. -V. 37, №41. -P. 269-272.
145. Multiple antibiotics, resistance in Pseudomonas aeruginosa: evidence, for involvement of an efflux operone / K. Poole et al. // J: Bacteriol. 1993. -V. 175.-P. 363-372.
146. Neu, H.C. Ecology, clinical significance and antimicrobial susceptibility of Pseudomonas aerugenosa / H.C. Neu // Nonfermentative gram-negative rods.- 1985.-V. 16.-P. 117-159.
147. Nicas, T.I. The role of exoenzyme S in infections with Pseudomonas aeruginosa / T.I. Nicas, J. Bradley, J.E. Lochner, B.H. Iglewski // J Infect Dis. -1985.-№152.-P. 16-21.
148. Nikaido, H. Outer membranes of gram-negative bacteria. XIX. Isolation from Pseudomonas aeruginosa PAOl and use in reconstitution and definition of the permeability barrier / H. Nikaido, R.E. Hancock // J. Bacteriol. -1978.-V. 136.-№1.-P. 381-390.
149. Nikaido, H. Penetration of lipophilic agents with multiple protonation sites into bacteria cells; tetracyclines and fluoroquinolones as examples / H. Nikaido, D.G. Thanassi // Antimicrob Agents Chemother. — 1993. V. 37. -P. 393-399.
150. O'Calaghan, R.J. Physical stability and biological and physicochemical properties of twelve Pseudomonas aeruginosa bacteriophages / R.J. O'Calaghan, W. O'Mara, J. B. Grogan // Virology. 1969. - V.37. -P. 642-653.
151. Ojeniyi, B. Comparison of genome fingerprinting with conventional typing methods used on Pseudomonas aeruginosa isolates from cystic fibrosis patients / B. Ojeniyi, U. Steen-Petersen, N. Hoiby // APMIS. 1993". - V. 101. -P. 168-175.
152. Ogle, J.W. Characterization and use of a DNA probe as an epidemiological marker for Pseudomonas aeruginosa / J.W. Ogle, J.M. Janda, D.E. Woods, M.L. Vasil // J. Infect. Dis. 1987. -V. 155. - P. 119-126.
153. Olive, P.r B. Di Principles and applications of methods for DNA-based typing of microbial organisms / PI B. D. Olive // J. Olin Microbiol 1999. V. 37.-P. 661-669.
154. Osman, M.A.Pyocine typing of P. Aeruginosa / M.A. Osman // J. Clin. Pathol. 1965. - V. 18. - P. 200-202.
155. Palleroni, N.J. Doudoroff M. Nucleic acid homologies in the genus Pseudomonas / N.J. Palleroni, M. Doudoroff // Int. J. Syst. Bacteriol. 1973. - V. 23.-№4.-P. 333-339.
156. Palleroni, N.J. Genus Pseudomonas Migula 1984 / N.J. Palleroni // Bergey's manual of systematic bacteriology Ed. R. Noel, Krieg J. G. Holf.-Baltimore: London: Williams Wilkins. 1984. - V.l. - P. - 141-198.
157. Palleroni, N.J. The Pseudomonas group / N.J. Palleroni // Bushey: Meadow-field press Ltd. 1978. - 80 p.
158. Pesci, E.C. The chain of command in Pseudomonas quorum sensing / E.C. Pesci, B.H. Inglewski // Trends Microbiol. 1997. - V. 24. - P. 132-134.
159. Pickett, M.J. Manual of Clinical Microbiology / M.J. Pickett, D.G. Hollis, E. Bottone // 5th ed., ed. in chief A.Ballows. Washington: Am Soc Mirobiol. -1991.-P. 410-428.
160. Postic, B. Observations on bacteriophage typing of Pseudomonas aeruginosa / B. Postic, M. Finland // J. Clin. Invest.-1961. V.40. - №20. - P. 6475.
161. Premalatha, A. Pentachlorophenol degradation by Pseudomonas aeruginosa / A. Premalatha, G. S. Rajakumar // World Journal of Microbiology« and Biotechnology. 1994. -№10. - P. 334-337.
162. Roncero, C. Pseudomonas aeruginosa Transposable Bacteriophages D3112 and B3 Require Pili and Surface Growth for Adsorption / C. Roncero, A. Darzins, J. Malcolm // J. of Bact., Apr. 1990. P. 899-904.
163. Ryan, K.J. Sherris Medical Microbiology / K.J. Ryan, C.G. Ray // 4th ed., McGraw. 2004. - P. 236-239.
164. Shibata, N., Doi Y., Yamane K., Yagi T., Kurokawa H., Kato K.S.H.,.Kai. K., Arakawa Y. // Journal of Clinical Microbiology. 2003. - V. 41. - P. 407-411.
165. Schubert R., The use of arginine brilliant' green glucose peptone broth (ABGP medium) as a primary culture medium for Pseudomonas'aeruginosa / R. Schubert // Zbl.Bakt. B. 1989. - V.187. - №3. - P. 266-268.
166. Schultze, W.H. Uber eine neue Methode zum Nachweis von Reduktions-u. Oxydations-wirkungen der Bakterien / W.H. Schultze // Zbl. Bakt. (Abt. 1 Orig.). 1910. - V. 56. - P. 544-548.
167. Schwartz, D.C. and Cantor C.R. // Cell. 1984. -V. 37. -P. 67-75.
168. Sellers, W. Medium for differentiating the gram-negative, nonfermenting bacilli of medical interest / W. Sellers //J. Bact. 1964. - V.8. - P. 46-48.
169. Sjoberg, L. Phage typing of Pseudomonas aeruginosa / L. Sjoberg, A. A. Lindberg. // Acta Pathol. Microbiol. Scand. 1968. - V.74. - P. 61-68.
170. Srinivasan, A. An outbreak of Pseudomonas aeruginosa infection associated with flexible bronchoscopes / A. Srinivasan, et.al. // The New England Journal of Medicine. 2003. - V.348. -№3. - P. 221-227.
171. Stackrerbrandt, E. The evolution of prokaryotes / E. Stackrerbrandt, C.R. Woese // Molecular and cellular aspects of microbial evolution: Soc. Gen. microbiol. symp.- Cambridge: Univ. Press. — 1981. — P. 21-31.
172. Stanier, R. Y. The aerobic pseudomonads: a taxonomic study / R. Y. Stanier, N. J. Palleroni, M. Doudoroff. // J. Gen. Microbiol. 1966. -V. 43. P. 159271.
173. Steed, C.J. Common infections acquired in the hospital: the nurse's role in prevention / C.J. Steed. // Nurs Clin North Am. 1999. - V.34. - №2. - P. 43-61.
174. Stock, J.B. Protein phosphorylation and regulation of adaptive response in bacteria / J.B. Stock, A.J. Ninfa, A.M. Stock // Microbiol Rev 1989. V. 53. -P. 450-490.
175. Uetake, H. Conversion of somatic antigens in Salmonella by phage infection leading to lysis or lysogeny / H. Uetake // Virology. 1958. — V. 5. - P. 6891.
176. Van Dyke, M.I. Evaluation of microbial surfactants for recovery of hydrophobic pollutants from soil / M.I. Van Dyke, S.L. Gulley, H. Lee, J.T. Trevors // Journal of Industrial Microbiology. 1993. - №11. - P. 163-170.
177. Vidal, D.R. Immunosuppressive effects of Pseudomonas aeruginosa exotoxin A on human B-lymphocytes / D.R. Vidal, P. Garrone, J. Banchereau // Toxicon. 1993. - V.31. - P. 27-34.
178. Weber, D.J. Nosocomial infections in the ICU: the growing importance of antibiotic-resistant pathogens / D.J. Weber, R. Raasch, W.A. Rutala // Chest 1999.-V.115.-P. 34-41.
179. Welsh, J. Fingerprinting genomes using PCR with arbitrary primers / J. Welsh, M. McClelland // Nucleic Acids Res. 1990. - V. 18. - №72. - P. 13-18.
180. Wick, M.J. Analysis of the structure-function relationship of Pseudomonas aeruginosa exotoxin A / M.J. Wick, A.N. Hamood, B.H. Iglewski //Mol Microbiol 1990. V.4. -№5. - P. 27-35.
181. Williams, J.G.K. DNA polymorphism amplified by arbitrary primers useful as genetic markers / J.G.K. Williams, A.R. Kubelik, K.J. Livak, J.A. Rafal-ski, S.V. Tingey // Nucleic Acids Res. 1989. - V.18. -№6. -P. 531-535.
182. Woese, C.R. Phylogenetic definition of the major eubacterial taxa / C.R. Woese, E. Stackrerbrandt, T. Macre, J.E. Fox // Syst. Appl. Microbiol. -1985. V.6. -№1. — P. 143-151.
183. Woods, D.E. Toxins of Pseudomonas aeruginosa: new perspectives / D.E. Woods, B.H. Iglewski // Rev Infect Dis. 1983. - V.4. - №7. - P. 15-22.
184. Yahr, T.L. Identification of type III secreted products of the Pseudomonas aeruginosa exoenzyme S regulon / T.L. Yahr, L.M. Mende-Mueller, M.B. Friese, D.W. Frank // J. Bacteriol. 1997. - V.179. - №7. - P. - 165-168.
185. Zabransky, R.J. Day Pyocine typing of clinical strains of Pseudomonas aeruginosa / R.J. Zabransky, F.E. Day // Appl. Microbiol. 1969. — V. 17. -P. 293-296.
186. Zierdt, C.H. Pseudomonas aerugenosa: Serology, phase, pyocin / C.H. Zierdt // Nonfermentative gram-negative rods. New York; Basel. - 1985. - V. 15. -P. 283-241.
Обратите внимание, представленные выше научные тексты размещены для ознакомления и получены посредством распознавания оригинальных текстов диссертаций (OCR). В связи с чем, в них могут содержаться ошибки, связанные с несовершенством алгоритмов распознавания. В PDF файлах диссертаций и авторефератов, которые мы доставляем, подобных ошибок нет.