Цитокины и показатели иммунного статуса больных вирусным гепатитом С и сочетанным вариантом гепатита C+B тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.36, кандидат биологических наук Курамшин, Денис Халитович

• Курамшин, Денис Халитович
• кандидат биологических наук
• 2002

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Курамшин, Денис Халитович

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Особенности возбудителя ВГС

1.1.2 Генетическая вариабельность вируса

1.1.3 Иммунодепрессивные, антиапоптотические и 17 канцерогенные свойства белков HCV

1.2 Особенности сочетанного варианта гепатита (С+В)

1.3 Иммунный ответ при вирусных гепатитах

1.3.1 Цитокины, секретируемые Т-хелперами 1 и 2 типов при 27 вирусном гепатите С и С+В

1.3.2 Провоспалительные цитокины при вирусном гепатите С

ГЛАВА 2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

ГЛАВА 3 РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1 Структура субпопуляций иммунокомпетентных клеток 4 9 при ВГС и ВГС+В

3.2 Содержание провоспалительных цитокинов при ВГС и 64 ВГС+В

3.3 Цитокины Т-хелперов 1 и 2 типа при ВГС и ВГС+В

ГЛАВА 4 ОБСУЖДЕНИЕ

ГЛАВА 5 ЗАКЛЮЧЕНИЕ

ВЫВОДЫ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Цитокины и показатели иммунного статуса больных вирусным гепатитом С и сочетанным вариантом гепатита C+B»

Актуальность проблемы. Вирусный гепатит С представляет собой серьезную проблему практической медицины [б]. На современном этапе циркуляция вируса С в человеческой популяции поддерживается преимущественно искусственными "неэволюционными" путями передачи, такими как парентеральные медицинские вмешательства, гемотрансфузии и внутривенное употребление наркотических веществ. Ряд особенностей организации вируса, выработавшихся в результате эволюции, в том числе его уникальная изменчивость, обеспечивают устойчивость возбудителя к иммунному надзору. Основным патогенетическим механизмом развития инфекции является ее персистирующий характер (Alberti [20]).

Оценка характера и тяжести развивающейся болезни чрезвычайно затруднена ввиду ее преимущественно скрытого или малосимптомного течения. Значительна доля пациентов, у которых длительная персистенция вируса проходит без особой дезорганизации, однако в других более редких случаях неблагоприятные исходы болезни, такие как цирроз и гепатокарцинома, развиваются в короткие сроки с момента инфицирования [104], [105].

В свете последних исследований [38] [3,19,70] эрадикация вируса из организма любыми известными способами, в частности при терапии интерферонами, представляется практически невозможной.

Известно, что эффективность противовирусного иммунитета связывается, в первую очередь, с активностью клеточного звена иммунитета, которое регулируется преимущественно Т-хелперами первого типа путем продукции соответствующих цитокинов. В настоящее время результаты оценки профиля цитокинов при гепатите С неоднозначны [11]. Хроническое течение HCV-инфекции само по себе является доказательством того, что противовирусный иммунитет даже при явном доминировании влияния Т-хелперов 1 все же оказывается недостаточным для естественного завершения инфекции. Тем не менее, в обосновании терапии, в частности, применения интерферонов, наиболее распространено мнение о необходимости усиления влияния Т-хелперов 1 типа в целях достижения развития более эффективного противовирусного иммунитета [12] . Однако рассматривать однозначно как положительный факт преимущественную активацию Т-хелперов 1 типа нельзя в связи с доказанной ролью именно этих реакций в повреждении печени [22] . Большинство исследовательских работ, посвященных ВГС, выполнено на разнородных малых (20-30 человек) группах, что требует проведения более масштабных исследований с учетом возможно большего числа параметров иммунной системы [2] ,[10]. Кроме того, разноречивость результатов исследований подчеркивает отсутствие единой закономерности в формировании иммунного ответа при HCV-инфекции. Наиболее перспективным в связи с этим представляется дальнейшее изучение корреляционных взаимосвязей в функционировании отдельных звеньев системы защиты, что необходимо для поиска методов терапии, способной повлиять на течение болезни и ее исходы в условиях неизбежного персистирования инфекции.

Цель и задачи исследования. Целью настоящей работы было изучение характера реагирования иммунной системы при различных формах гепатита С и его сочетания с гепатитом В по результатам комплексного исследования структурно-функциональных характеристик иммунокомпетентных клеток и спектра цитокинов.

В соответствии с целью работы были поставлены следующие задачи:

1. Изучить субпопуляционную структуру иммунокомпетентных клеток в группах пациентов с гепатитом С и микст-гепатитом С+В, определившихся с учетом клинической формы заболевания, активности инфекционного процесса и спектра специфических антител.

2. Определить содержание сывороточных концентраций цитокинов Тх1 и 2 типа и провоспалительных (ФНО-альфа, ИЛ-1бета, ИЛ-б) в этих же группах.

3. Оценить различия исследуемых показателей иммунитета у больных ВГС и ВГС+В с учетом фактора внутривенного употребления наркотиков.

Научная новизна.

Установлено что в иммунопатогенезе вирусного гепатита С выражены реакции иммунной системы преимущественно гуморального типа что не приводит к эрадикации вируса из организма и способствует развитию хронизации заболевания

Изучение цитокинового спектра в сопоставлении с клиническими данными результатами ИФА и ПЦР позволило выявить ряд особенностей иммунного статуса исследуемого контингента имеющего маркеры инфекции что может быть учтено при планировании и оценке эффективности терапии Впервые на основании анализа спектра цитокинов показаны различия в реакциях иммунитета у больных с клиническими признаками острого гепатита и разными показателями активности инфекционного процесса что позволяет дифференцировать истинные случаи ранней фазы болезни и сходные с ними клинически эпизоды обострения хронического гепатита

Теоретическая и практическая значимость работы.

Теоретическая значимость работы заключается в установлении ведущей роли цитокинов Тх типа в патогенезе вирусного гепатита С что способствует развитию иммунной реакции по гуморальному типу неэффективному при данном вирусном заболевании

Практическая значимость установленная зависимость характера иммунологического реагирования пациентов с гепатитом С или микст гепатитом С В от ряда изученных признаков клиническая форма болезни активность инфекционного процесса, спектр антител, фактор наркомании) позволяет повысить качество диагностики, а именно, дифференцировать клинически сходные малосимптомные случаи болезни, что необходимо в обеспечении индивидуального подхода в терапии ВГС.

Основные положения, выносимые на защиту.

Характерной особенностью иммунного статуса изученного контингента больных вирусным гепатитом С является снижение ряда показателей системы клеточно-опосредованного иммунитета и возрастание показателей гуморального иммунитета, ключевую роль в котором играет баланс цитокинов, секретируемых Т лимфоцитами-хелперами 1 и 2 типа.

Апробация материалов диссертации.

Материалы диссертации доложены и обсуждены на: 1. 5-й отчетной сессии ИКИ СО РАМН. (Новосибирск 2000г.); 2. Семинарах группы молекулярной иммунологии лаборатории регуляции иммунопоэза ИКИ СО РАМН (Новосибирск, 2000, 2001); 3. III Всероссийском сьезде иммунологов (Москва, 2000). По теме диссертации опубликовано б печатных работ, в том числе 3 в центральной печати.

Самостоятельность выполненной работы.

Измерение содержания цитокинов в сыворотке крови больных ВГС и статистический анализ всех полученных данных были выполнены лично автором. Автор выражает признательность:

• ГНЦ ВБ "Вектор" за предоставленные даные ПЦР-анализа и ИФА-тестов на Core- и NS-специфические иммуноглобулины.

• Сотрудникам лаборатории клинической иммунологии ИКИ СО РАМН и д.м.н. B.C. Кожевникову за данные о субпопуляционном составе иммунокомпетентных клеток периферической крови.

Автор благодарит д.м.н., проф. Н.П.Толоконскую и к.м.н. С. В. Сенникова за подробное обсуждение полученных результатов и коллег, сотрудников Института Клинической Иммунологии, за неоценимые помощь и поддержку: С.В. Крысова, А.Н Силкова, В.В. Темчура, JI.B. Гришину и А.П. Хабарову.

Заключение диссертации по теме «Аллергология и иммулология», Курамшин, Денис Халитович

выводы.

1. Иммунный статус у больных вирусным гепатитом С характеризуется значительными изменениями структурных и функциональных характеристик системы клеточного иммунитета, которые проявляются в виде лимфоцитоза, понижения показателей содержания натуральных киллеров и активности фагоцитоза, и изменением баланса иммунорегуляторных медиаторов в пользу цитокинов ТХ2 типа, как при остром течении, так и особенно при хроническом течении, что способствует развитию иммунной реакции по гуморальному типу и хронизации течения гепатита С.

2. Тенденция к снижению показателей клеточного иммунитета (содержания натуральных киллеров и активности фагоцитоза) и усиления секреторной активности Т-хелперов 2 типа при сочетанном варианте гепатита С+В еще более выражена, чем при моногепатите, что также может способствовать развитию течения патологического процесса по типу хронического.

3. Повышенное содержание провоспалительных цитокинов ИЛ-1 и ИЛ-б зарегистрировано как при острых, так и при хронических формах моно- и микст-инфекции, и, таким образом, не зависит от наличия и степени выраженности воспалительного процесса в печени.

4. При моногепатите С активному инфекционному процессу (ПЦР+) соответствуют признаки активации в системе клеточного иммунитета с одновременным усилением функций Т-хелперов 1 и 2 типа, что подтверждается увеличении содержания CD8+ Т-лимфоцитов, а также значительным повышением уровня всех изученных цитокинов, особенно при остром течении (ИФН-гамма, ИЛ-2,4,10). Изменения профиля цитокинов Тх1\2 типа у пациентов с острыми проявлениями болезни и отсутствием при этом РНК HCV в сыворотке крови аналогичны таковым при хроническом гепатите, что является дополнительным подтверждением факта хронического течения в HCV - инфекции этих случаях.

5. Положительные результаты тестов анти-Core и -NS у больных ВГС и ВГС+В ассоциированы с более высокими концентрациями провоспалительных цитокинов. Повышение у этой группы пациентов уровня CD19, CD72 и цитокинов Т-хелперов 2 типа свидетельствует о более интенсивных реакциях гуморального иммунитета.

6. Характерной особенностью иммунного статуса пациентов - наркоманов при исследованных нами формах гепатита, по сравнению с остальными пациентами из изученной когорты, является увеличение показателей гуморального иммунитета и рост концентраций провоспалительных медиаторов.

ГЛАВА 5. ЗАКЛЮЧЕНИЕ.

В соответствии с полученными нами данными, при вирусном гепатите С происходит изменение ряда параметров иммунного статуса пациентов, которое проявляется в виде лимфоцитоза, понижения показателей содержания натуральных киллеров и активности фагоцитоза. При моногепатите наблюдается достоверно повышенное содержание CD19+ клеток, несущих маркер CD5, что свидетельствует об участии аутоиммунного компонента в патогенезе этой формы гепатита. Доминирующим компонентом в изученном спектре цитокинов сыворотки крови у пациентов, имеющих маркеры HCV-инфекции, является значительно повышенный уровень ИЛ-4 и ИЛ-10, как в острой, так и в хронической фазе заболевания. Цитокины Т-хелперов 1 типа ИЛ-2 и ИФН-гамма, который обладает широким спектром иммунорегуляторных свойств, выше контрольных значений только при остром течении. Это указывает на значительное влияние Тх2 и преобладание реакций гуморального звена иммунитета, которые в отличие от клеточно-опосредованных реакций приводят не к элиминации инфицированных вирусом клеток, а к длительному сосуществованию вируса в организме и к хронизации процесса.

Наличие микст-инфекции приводит к более сильным изменениям в балансе цитокинов в пользу Тх2. При остром течении вирусного гепатита с микст-формой наблюдается не столь выраженное повышение цитокинов Тх1 типа, как при моноинфекции, и профиль цитокинов приближается к профилю цитокинов, регистрируемому при хронической форме. Этому сопутствовало достоверное снижение Т-клеток эффекторов (CD8+) и увеличение содержания CD72+ В-клеточной популяции. Наличие микст-инфекции (С+В) приводит к более быстрой хронизации процесса и сдвигом цитокинов в пользу ТХ2 типа уже в острую фазу заболевания. Своеобразие иммунного ответа у пациентов с микст-инфекцией, несомненно, имеет отношение к проблеме интерференции вирусов и требует дальнейшего изучения.

Содержание провоспалительного цитокина ИЛ-1 в сыворотке было достоверно выше контрольных значений, ФНО-альфа также имел тенденцию к повышению. Факторами, сопутствующими повышению уровня этих цитокинов были сочетанная инфекция ВГВ, положительные значения ПЦР, анти-Core и NS тестов и наркомания. Содержание ИЛ-б, участвующего в процессах регенерации ткани печени, было также повышено. По нашим и литературным даным содержание провоспалительных цитокинов в сыворотке не связано напрямую со степенью тяжести инфекционного процесса, а повышенные концентрации ИЛ-1 и б могут служить только недифференциальными маркерами воспалительных процессов и процессов регенерации в печеночной ткани.

Положительные результаты тестов анти-Core и -NS ассоциированы с более высокими концентрациями провоспалительных цитокинов и повышением ряда показателей гуморального иммунитета (CD19, CD72, Т-хелперов 2 типа).

При моногепатите с положительной ПЦР ряд показателей активности клеточного иммунитета (CD8+, активность фагоцитоза, содержание цитокинов Т-хелперов 1 типа) выше, а гуморального (CD72+) ниже, чем при отрицательной ПЦР. Особенно высокие концентрации цитокинов Т-хелперов 1 и 2 типа наблюдались при остром гепатите ПЦР+. Данные наблюдения позволяют дифференцировать клинически сходные периоды обострения течения хронического ВГС и истинные случаи острого гепатита, в которых наблюдается активация регуляторного звена иммунной защиты. При "молчащем" ВГС (ПЦР-) и сочетанном гепатите доминируют цитокины Т-хелперов 2 типа. Любопытно, что при микст-гепатите в отличие от моно-ВГС-вириемия приводит не к повышению, а, наоборот, к снижению цитокинов Т-хелперов 1 типа, что негативно влияет на состояние противовирусного иммунитета.

Наркомания также является фактором, отягощающим развитие патологического процесса при исследованных нами формах гепатита, что выражается в увеличении В-клеточных показателей и росте концентраций провоспалительных медиаторов.

Таким образом вирусный гепатит С в моно- и микст-форме (С+В) является иммунокомпроментированным заболеванием, о чем свидетельствует значительные изменения в уровне сывороточных концентраций цитокинов Тх1 и 2 типа при разных формах его течения. Хронизация процесса при вирусном гепатите С с моно- и микст- (С+В) формой связаны с преобладанием активности гуморального звена иммунитета, что выражается в изменении баланса иммунорегуляторных медиаторов в пользу цитокинов Тх2 типа.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Курамшин, Денис Халитович, 2002 год

1. Гольдберг Е.З. и др. Вирусный гепатит С. Вопросы вирусологии N2, 84-90. 1992.

2. Ивашкин В.Т. и др. Особенности иммунного ответа у больных хроническим вирусным гепатитом С. Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии и колопроктологии N3, 2429. 2001.

3. Ивашкин В.Т. и др. Механизмы иммунного "ускользания" при вирусных гепатитах. Российский жунал гастоэнтеологии, гепатологии и колопроктологии N5, 7-13. 2000.

4. Ивашкин В.Т., Надинская М.Ю. Лечение хронического гепатита С в России. Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии N4, 51-53. 2001.

5. Игнатова Т.М. Апросина З.Г и др. Внепеченочные проявления хронической HCV-инфекции. Российский медицинский журнал N2, 13-18. 2001.

6. Игнатова Т.М., Серов В.В. Патогенез хронического гепатита С. Арх.патологии N3, 54-59. 2001.

7. Лакина Е.И., Куш М.В. РНК вируса гепатита С в организме больных вирусным гепатитом С. Вопросы вирусологии N2, 411. 2002.

8. Лукин Е.А. и др. Гематологические синдромы у больных хроническим гепатитом С. Терапевтический архив N7, 60-63. 2000.

9. Майер К. П. Естественное течение и диагностика вирусного гепатита С. Росс.Журн Гастроэнтерол. Гепатол. и Колопроктол. N4, 21-23. 2002.

10. Ю.Маммаев С.Н. Показатели клеточного и гуморального иммунитета больных хроническим гепатитом С при лечении интерфероном-альфа. Медицинская иммунология N4, 557-562. 2001.

11. И.Маммаев С.Н., Лукина Е. А. и др. Продукция цитокинов у больных хроническим вирусным гепатитом С на фоне терапии интерфероном. Клин.Лаб.Диагностика N8, 45-48. 2002.

12. Радченко В.Г. и др. Гломерулонефрит у больных с вирусным гепатитом С. Нефрология N4, 17-22. 1999.

13. Романова Е.А. и Глинщикова О.А.и др. Вирусный гепатит С: новое в эпидемиологии, методах диагностики и терапии. Гематология и трансфузиология N3, 86-91. 2001.

14. Шувалова Е.И.и др. Биохимические аспекты патогенеза вирусных гепатитов. Терапевтический архив N2, 8-10. 1996.

15. Abrignani, S. 1997. Immune responses throughout hepatitis С virus (HCV) infection: HCV from the immune system point of view. Springer Semin.Immunopathol. 19:47-55.

16. Alberti, A., L. Chemello, ацс! L. Benvegnu. 1999. Natural history of hepatitis C. J.Hepatol. 31 Suppl 1:17-24.

17. Blackburn, G. F., H. P. Shah, J. H. Kenten, J. Leland, R.

18. A. Kamin, J. Link, J. Peterman, M. J. Powell, A. Shah, D.

19. B. Talley, and . 1991. Electrochemiluminescence detection for development of immunoassays and DNA probe assays for clinical diagnostics. Clin.Chem. 37:1534-1539.

20. Boyer, N. and P. Marcellin. 2000. Pathogenesis, diagnosis and management of hepatitis C. J. Hepatol. 32:98-112.

21. Buskila, D. 2000. Hepatitis C-associated arthritis. Curx.Op in.Rheumatol. 12:295-299.

22. Cacciarelli, Т. V., 0. M. Martinez, R. G. Gish, J. C. Villanueva, and S. M. Krams. 1996. Immunoregulatory cytokines in chronic hepatitis С virus infection: pre- and posttreatment with interferon alfa. Hepatology 24:6-9.

23. Cacciola, I., T. Pollicino, G. Squadrito, G. Cerenzia, M. E. Orlando, and G. Raimondo. 1999. Occult hepatitis В virus infection in patients with chronic hepatitis С liver disease. N. Engl.J.Med. 341:22-26.

24. Camargo, C. A., Jr., J. F. Madden, W. Gao, R. S. Selvan, and P. A. Clavien. 1997. Interleukin-6 protects liver against warm ischemia/reperfusion injury and promotes hepatocyte proliferation in the rodent. Hepatology 26:15131520.

25. Choo, Q. L., G. Kuo, A. J. Weiner, L. R. Overby, D. W. Bradley, and M. Houghton. 1989. Isolation of a cDNA clone derived from a blood-borne non-A, non-B viral hepatitis genome. Science 244:359-362.

26. Chu, С. M., С. Т. Yeh, and У. F. Liaw. 1999. Fulminant hepatic failure in acute hepatitis C: increased risk in chronic carriers of hepatitis В virus. Gut 45:613-617.

27. Ciurea, A., P. Klenerman, L. Hunziker, E. Horvath, В. M. Senn, A. F. Ochsenbein, H. Hengartner, and R. M. Zinkernagel. 2000. Viral persistence in vivo through selection of neutralizing antibody- escape variants. Proc.Natl.Acad.Sci. U.S.A 97:2749-2754.

28. Clarke, B. 1997. Molecular virology of hepatitis С virus. J.Gen.Virol. 78 ( Pt 10):2397-2410.

29. Cordel, N., 0. Chosidow, and C. Frances. 2000. Cutaneous disorders associated with hepatitis С virus infection. Ann.Med.Interne (Paris) 151:46-52.

30. Cribier, В., С. Schmitt, D. Rey, J. M. Lang, A. Kirn, and F. Stoll-Keller. 1998. Production of cytokines in patients infected by hepatitis С virus. J.Med.Virol. 55:89-91.

31. Curry, M. P., L. Golden-Mason, N. Nolan, N. A. Parfrey, J. E. Hegarty, and C. O'Farrelly. 2000. Expansion of peripheral blood CD5+ В cells is associated with mild disease in chronic hepatitis С virus infection. J. Hepatol. 32:121-125.

32. Dumoulin, F. L., A. Bach, L. Leifeld, M. El Bakri, H. P. Fischer, T. Sauerbruch, and U. Spengler. 1997. Semiquantitative analysis of intrahepatic cytokine mRNAs in chronic hepatitis C. J.Infect.Dis. 175:681-685.

33. Finkelman, F. D. and J. F. Urban, Jr. 2001. The other side of the coin: the protective role of the TH2 cytokines. J.Allergy Clin.Immunol. 107:772-780.

34. Franco, A., C. Ferrari, A. Sette, and F. V. Chisari. 1995. Viral mutations, TCR antagonism and escape from the immune response. Curr.Opin.Immunol. 7:524-531.

35. Fukuda, R., S. Satoh, X. T. Nguyen, Y. Uchida, N. Kohge, S. Akagi, S. Ikeda, M. Watanabe, and S. Fukumoto. 1995. Expression rate of cytokine mRNA in the liver of chronic hepatitis C: comparison with chronic hepatitis B. J.Gastroenterol. 30:41-47.

36. Gale, M., Jr., B. Kwieciszewski, M. Dossett, H. Nakao, and M. G. Katze. 1999. Antiapoptotic and oncogenic potentials of hepatitis С virus are linked to interferon resistance by viral repression of the PKR protein kinase. J.Virol. 73:6506-6516.

37. Germain, R. N. 1994. МНС-dependent antigen processing and peptide presentation: providing ligands for T lymphocyte activation. Cell 76:287-299.

38. Hilzenrat, N., D. Buskila, D. Zilberman, and E. Sikuler. 1998. Beneficial effect of phlebotomy on hepatitis С virus-associated musculoskeletal manifestations. Clin.Rheumatol. 17:390-392.

39. Jefferson, J. A. and R. J. Johnson. 2000. Treatment of hepatitis C-associated glomerular disease. Semin.Nephrol. 20:286-292.

40. J00, M. and Y. S. Hahn. 2000. Animal models for immune defects caused by hepatitis С virus. Mol .Med.Today 6:176177.

41. Kakumu, S., A. Okumura, T. Ishikawa, K. Iwata, M. Yano, and K. Yoshioka. 1997. Production of interleukins 10 and 12 by peripheral blood mononuclear cells (PBMC) in chronic hepatitis С virus (HCV) infection. Clin.Exp.Immunol. 108:138-143.

42. Khakoo, S. I., P. N. Soni, K. Savage, D. Brown, A. P. Dhillon, L. W. Poulter, and G. M. Dusheiko. 1997. Lymphocyte and macrophage phenotypes in chronic hepatitis Сinfection. Correlation with disease activity. Am. J. Pathol. 150:963-970.

43. Koziel, M. J. 1996. Immunology of viral hepatitis. Am.J.Med. 100:98-109.

44. Koziel, M. J. 1997. The role of immune responses in the pathogenesis of hepatitis С virus infection. J.Viral Hepat. 4 Suppl 2:31-41.

45. Kraj csi, P. and W. S. Wold. 1998. Viral proteins that regulate cellular signalling. J.Gen.Virol. 79 ( Pt 6):1323-1335.

46. Krengel, S., B. Tebbe, S. Goerdt, M. Stoffler-Meilicke, and С. E. Orfanos. 1999. Hepatitis С virus-associated dermatoses: a review., Hautarzt 50:629-636.

47. Kumar, U., J. Monjardino, and H. C. Thomas. 1994. Hypervariable region of hepatitis С virus envelope glycoprotein (E2/NS1) in an agammaglobulinemic patient see comments. Gastroenterology 106:1072-1075.

48. Large, M. K., D. J. Kittlesen, and Y. S. Hahn. 1999. Suppression of host immune response by the core protein of hepatitis С virus: possible implications for hepatitis С virus persistence. J. Immunol. 162:931-938.

49. Larrea, E., N. Garcia, C. Qian, M. P. Civeira, and J. Prieto. 1996. Tumor necrosis factor alpha gene expression and the response to interferon in chronic hepatitis C. Hepatology 23:210-217.

50. Liaw, Y. F., С. T. Yeh, and S. L. Tsai. 2000. Impact of acute hepatitis В virus superinfection on chronic hepatitis С virus infection. Am.J.Gastroenterol. 95:2978-2980.

51. Liu, W., D. Tan, Z. Zhang, X. Fan, and K. Ouyang. 2000. Lymphocyte subset and its apoptosis in chronic hepatitis С In Process Citation. Zhongh ив Gan Zqtkj . Bing. Z& Zhi . 8:269-271.

52. Llorent, L., Y. Richaud-Patin, N. Alcocer-Castillejos, R. Ruiz-Soto, M. A. Mercado, H. Orozco, A. Gamboa-Dominguez, and J. Alcocer-Varela. 1996. Cytokine gene expression in cirrhotic and non-cirrhotic human liver. J.Hepatol. 24:555563.

53. Lovy, M. R. and G. Starkebaum. 2000. Rheumatic disorders associated with hepatitis C. Baillieres Best. Pract.Res.Clin.Rheumatol. 14:535-557.

54. Malaguarnera, M., F. Di, I, A. Laurino, L. Ferlito, M. Romano, and B. A. Trovato. 1997. Serum interleukin 6 concentrations in chronic hepatitis С patients before and after interferon-alpha treatment. Int.J. Clin. Pharmacol. Ther. 35:385-388.

55. Malaguarnera, M., F. Di, I, M. A. Romeo, S. Restuccia, A. Laurino, and B. A. Trovato. 1997. Elevation of interleukin 6 levels in patients with chronic hepatitis due to hepatitis С virus. J.Gastroenterol. 32:211-215.

56. Malaguarnera, M., B. A. Trovato, A. Laurino, F. Di, I, M. A. Romeo, and M. Motta. 1996. Interleukin-6 in hepatitis С cirrhosis. Panminerva Med. 38:207-210.

57. Marusawa, H., M. Hijikata, T. Chiba, and K. Shimotohno. 1999. Hepatitis С virus core protein inhibits Fas- and tumor necrosis factor alpha-mediated apoptosis via NF-kappaB activation. J.Virol. 73:4713-4720.

58. Miller, D. M. and D. D. Sedmak. 1999. Viral effects on antigen processing. Curr.Opin.Immunol. 11:94-99.

59. Mizutani, Т., N. Kato, S. Saito, M. Ikeda, K. Sugiyama, and K. Shimotohno. 1996. Characterization of hepatitis С virus replication in cloned cells obtained from a human T-cell leukemia virus type 1-infected cell line, MT-2. J.Virol. 70:7219-7223.

60. Moriya, К., H. Fujie, Y. Shintani, H. Yotsuyanagi, T. Tsutsumi, K. Ishibashi, Y. Matsuura, S. Kimura, T. Miyamura, and K. Koike. 1998. The core protein of hepatitis С virus induces hepatocellular carcinoma in transgenic mice. Nat.Med. 4:1065-1067.

61. Moriya, К., H. Yotsuyanagi, Y. Shintani, H. Fujie, K. Ishibashi, Y. Matsuura, T. Miyamura, and K. Koike. 1997. Hepatitis С virus core protein induces hepatic steatosis in transgenic mice. J.Gen.Virol. 78 ( Pt 7) :1527-1531.

62. Mosmann, T. R. and S. Sad. 1996. The expanding universe of T-cell subsets: Thl, Th2 and more. Immunol.Today 17:138146.

63. Napoli, J., G. A. Bishop, P. H. McGuinness, D. M. Painter, and G. W. McCaughan. 1996. Progressive liver injury in chronic hepatitis С infection correlates with increased intrahepatic expression of Thl-associated cytokines. Hepatology 24:759-765.

64. Nirei, К., M. Kaneko, M. Moriyama, and Y. Arakawa. 2000. The clinical features of chronic hepatitis С are not affected by the coexistence of hepatitis В virus DNA in patients negative for hepatitis В surface antigen. Intervirology 43:95-101.

65. Oyanagi, Y., T. Takahashi, S. Matsui, S. Takahashi, S. Boku, K. Takahashi, K. Furukawa, F. Arai, and H. Asakura. 1999. Enhanced expression of interleukin-6 in chronic hepatitis C. Liver 19:464-472.

66. Pontisso, P., M. Gerotto, L. Benvegnu, L. Chemello, and A. Alberti. 1998. Coinfection by hepatitis В virus and hepatitis С virus. Antivir.Ther. 3:137-142.

67. Ray, R. В., К. Meyer, and R. Ray. 2000. Hepatitis С virus core protein promotes immortalization of primary human hepatocytes. Virology 271:197-204.

68. Reiser, M., C. G. Marousis, D. R. Nelson, G. Lauer, R. P. Gonzalez-Peralta, G. L. Davis, and J. Y. Lau. 1997. Serum interleukin 4 and interleukin 10 levels in patients with chronic hepatitis С virus infection. J.Hepatol. 26:471-478.

69. Romagnani, S. 1994. Human TH1 and TH2 subsets: "eppur si muove"! Eur.Cytokine Netw. 5:7-12.

70. Sharara, A. I., С. M. Hunt, and J. D. Hamilton. 1996. Hepatitis C. Ann.Intern.Med. 125:658-668.

71. Sherlock, S. 1999. The hepatic flaviviridae: summary. J. Viral Repat. 6 Suppl 1:1-5.

72. Shih, С. M., S. J. Lo, T. Miyamura, S. Y. Chen, and Y. H. Lee. 1993. Suppression of hepatitis В virus expression and replication by hepatitis С virus core protein in HuH-7 cells. J.Virol. 67:5823-5832.

73. Smith, D. В., J. McAllister,' C. Casino, and P. Simmonds.1997. Virus 'quasispecies': making a mountain out of a molehill? J.Gen.Virol. 78 ( Pt 7):1511-1519.

74. Stransky, J., L. Malina, B. Cieslarova, J. Stritesky, I. Putova, and J. Horak. 2000. Overt and hidden coinfection with hepatitis В and С viruses in chronic liver disease and porphyria cutanea tarda. Acta Virol. 44:23-28.

75. Taylor, D. R., S. T. Shi, P. R. Romano, G. N. Barber, and M. M. Lai. 1999. Inhibition of the interferon-inducible protein kinase PKR by HCV E2 protein see comments. Science 285:107-110.

76. Tsai, S. L., Y. F. Liaw, M. H. Chen, C. Y. Huang, and G. C. Kuo. 1997. Detection of type 2-like T-helper cells in hepatitis С virus infection: implications for hepatitis С virus chronicity. Hepatology 25:449-458.

77. Tsuchihara, К., M. Hijikata, K. Fukuda, T. Kuroki, N. Yamamoto, and K. Shimotohno. 1999. Hepatitis С virus core protein regulates cell growth and signal transduction pathway transmitting growth stimuli. Virology 258:100-107.

78. Woitas, R. P., M. Lechmann, G. Jung, R. Kaiser, T. Sauerbruch, and U. Spengler. 1997. CD30 induction and cytokine profiles in hepatitis С virus core-specific peripheral blood T lymphocytes. J.Immunol. 159:1012-1018.

79. Wozniakowska-Gesicka, Т., M. Wisniewska-Ligier, K. Zeman, and M. Banasik. 2000. Prognostic value of natural killercells monitoring in the course of IFN-alpha therapy in children with chronic hepatitis C. Pol.Merkuriusz.Lek. 8:376-377.

80. Yang, H., J. K. Leland, D. Yost, and R. J. Massey. 1994. Electrochemiluminescence: a new diagnostic and research tool. ECL detection technology promises scientists new "yardsticks" for quantification. Biotechnology (N.Y.) 12:193-194.

81. Yatsuhashi, H., K. Inokuchi, 0. Inoue, N. Matsumura, M. Кода, Y. Kosakai, and M. Yano. 1993. The clinical significance of reactivity to individual epitopes of the hepatitis С viral genome. Gastroenterol. Jpn. 28 Suppl 5:611.

82. Yoshioka, K., S. Kakumu, M. Arao, Y. Tsutsumi, and M. Inoue. 1989. Tumor necrosis factor alpha production by peripheral blood mononuclear cells of patients with chronic liver disease. Hepatology 10:769-773.