Тестирование племенного крупного рогатого скота по ДНК-маркерам молочной продуктивности тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 06.02.07, кандидат биологических наук Зиннатова, Фарида Фатиховна

• Зиннатова, Фарида Фатиховна
• кандидат биологических наук
• 2013

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Зиннатова, Фарида Фатиховна

Содержание

Введение

1. Обзор литературы

1.1 Методы молекулярных маркеров в селекции хозяйственно-полезных признаков у крупного рогатого скота

1.2 Микросателлиты

1.3 Полиморфизм генов молочных белков крупного рогатого скота

1.4 Полиморфизм гена молочного гормона -пролактина

1.5 Полиморфизм гена жирномолочности - диацилглицерол-О-ацилтрансферазы и гормона тиреоглобулина

1.6 Краткое заключение по обзору литературы

2 Материалы и методы

2.1 Материалы

2.2 Статистическая обработка полученных данных

3 Результаты собственных исследований

3.1 ПЦР-ПДРФ анализ локусов СБЮ, ЬвВ, РИЬ, ЭОАТ1 и Т05 крупного рогатого скота

3.2 Анализ состояния селекционно-племенной работы в исследуемых хозяйствах РТ

3.3 Оценка полиморфизма гена каппа-казеина у крупного рогатого скота

3.3.1 Полиморфизм коров и первотелок по гену каппа-казеина

3.3.2 Полиморфизм быков-производителей и ремонтных-бычков по гену каппа-казеина

3.4 Оценка полиморфизма гена бета-лактоглобулину крупного рогатого

скота

3.4.1 Полиморфизм коров и первотелок по гену бета-лактоглобулина

3.4.2 Полиморфизм быков-производителей и ремонтных бычков по гену бета-лактоглобулина

3.5 Оценка полиморфизма гена пролактина крупного рогатого скота

3.5.1 Полиморфизм коров и коров-первотелок по гену пролактин

3.5.2 Полиморфизм быков-производителей и ремонтных бычков по гену пролактина

3.6 Оценка полиморфизма гена диацилглицерин-О-ацилтрансферазы

крупного рогатого скота

3.6.1 Полиморфизм коров и первотелок по гену диацилглицерин-О-ацилтрансферазы

3.6.2 Полиморфизм быков-производителей и ремонтных бычков по гену диацилглицерин-О-ацилтрансферазы

3.7 Оценка полиморфизма гена тиреоглобулина крупного рогатого скота

3.7.1 Полиморфизм коров и первотелок по гену тиреоглобулин

3.7.2 Полиморфизм быков-производителей и ремонтных бычков по гену тиреоглобулина

3.8 Изучение ассоциации полиморфизма генов-молочных белков

с молочной продуктивностью и качественным составом молока крупного рогатого скота

3.8.1 Ассоциация полиморфизма гена каппа-казеина с молочной продуктивностью коров и первотелок

3.8.2 Ассоциация полиморфизма гена каппа-казеина с родительским индексом быков-производителей и ремонтных бычков

3.8.3 Ассоциация полиморфизма гена бета-лактоглобулина с молочной продуктивностью коров и первотелок

3.8.4 Ассоциация полиморфизма гена бета-лактоглобулина с родительским индексом быков-производителей и ремонтных бычков

3.9 Изучение ассоциации полиморфизма гена-молочного гормона пролактина с молочной продуктивностью и качественным составом молока крупного рогатого скота

3.9.1 Ассоциация полиморфизма гена пролактина с молочной продуктивностью коров и первотелок

3.9.2 Ассоциация полиморфизма гена пролактина с родительским индексом быков-производителей и ремонтных бычков

3.10 Изучение ассоциации полиморфизма гена-молочного гормона диацилглицерин-О-ацилтрансферазы с молочной продуктивностью и качественным составом молока крупного рогатого скота

3.10.1 Ассоциация полиморфизма гена диацилглицерин-О-ацилтрансферазы

с молочной продуктивностью коров и первотелок

3.10.2 Ассоциация полиморфизма гена диацилглицерин-О-ацилтрансферазы

с родительским индексом быков-производителей и ремонтных бычков

3.11 Изучение ассоциации полиморфизма гена тиреоглобулина с молочной родуктивностью и качественным составом молока крупного рогатого скота.. 99 3.11. 1 Ассоциация полиморфизма гена тиреоглобулина с молочной

продуктивностью коров и первотелок

3.11.2 Ассоциация полиморфизма гена тиреоглобулина с родительским индексом быков-производителей и ремонтных бычков

3.12 Корреляция между основными признаками молочной продуктивности крупного рогатого скота

3.13 Изучение частоты встречаемости комплексных генотипов CSN3,

DGAT1, TG5, PRL, LGB крупного рогатого скота

3.14 Изучение влияния комплексных генотипов генов CSN3, DGAT1, TG5,

PRL, LGB на показатели молочной продуктивности коров и первотелок

3.15 Изучение влияния комплексных генотипов генов CSN3, DGAT1, TG5, PRL, LGB на показатели родительского индекса быков-производителей и ремонтных бычков

4 Обсуждение результатов исследований

5 Выводы

6 Предложение производству

7 Список использованной литературы

Приложения

Список сокращений

В/см - вольт на сантиметр

ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота.

ед. - единиц

нг - нанограмм

п.н. - пар нуклеотид.

ПДРФ - полиморфизм длины рестрикционных фргаментов (RFLP - Restriction Fragment Length Polymorphism). пМ - пикомоль

ПЦР - полимеразная цепная реакция (PCR - Polymerase Chain Reaction). РИБ - родительский индекс быков, сек. - секунд

СХПК - сельскохозяйственный производственный комплекс РТ - Республика Татарстан

ЭДТА - этилендиаминтетрауксусная кислота (EDTA -

ethylenediaminetetraacetic acid)

10х ТВЕ буфер - трис - боратный буфер.

А - adenosine (А - аденозин).

bp - base pair (п.о. - пары оснований).

СаС12 - хлорид кальция

CSN3 (кСп) - каппа-казеин.

DGAT1 - диацилглицеролОацилтрансфераза

dNTPs - deoxynucleosidtriphosphates (дНТФ - дезоксинуклеозидтрифосфаты).

et. al. - и другие

G - guanosine (Г - гуанозин).

H2SO4 - серная кислота

LGB- бета - лактоглобулин.

MgCl2 - магний хлорид.

PRL - пролактин

RAPD (Random Amplified Polymorphic DNA) - произвольная амплификация полиморфных локусов ДНК.

SNP - Single Nucleotide Polymorphism (полиморфизм единичных нуклеотидов). SSCP - Single Strand Conformation Polymorphism (конформационный полиморфизм однонитевых фрагментов ДНК). STS - маркеров (от англ. Sequence Tagged Sites). TG5 - тиреоглобулин. PLG - бета - лактоглобулин. С - cytosine (Ц - цитозин). Т - thymidine (Т - тимидин).

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Тестирование племенного крупного рогатого скота по ДНК-маркерам молочной продуктивности»

Введение

Актуальность. Дальнейшая интенсификация производства молока может быть достигнута путем разведения молочного скота, обладающего нужной наследственностью, способной продуцировать максимальное количество молока желательного состава и качества (Стрекозов, Н.И. и др. 2006).

Важнейшей мерой в повышении и совершенствовании молочного и мясного стада крупного рогатого скота в Республике Татарстан и в Российской Федерации в целом явилось приобретение высокопродуктивных животных из-за рубежа. Однако отсутствие соответствующего контроля здоровья и наследственности импортируемых животных привело к накоплению животных с проблемами наследственного характера, таких как уменьшение генетического многообразия животных и распространение генетических аномалий (Губайдуллин Э. С. и др., 1995).

Проблема построения совершенной генеалогической и генетической структуры стада крупного рогатого скота связана не только с использованием качественного маточного поголовья, как по продуктивности, экстерьеру, генетическим показателям, но и с использованием препотентных быков-производителей, оцененных как улучшатели значимых селекционных признаков. Скрещивание коров отечественной породы с такими быками производителями приведет к сужению генетической изменчивости в результате нарастания общей гомозиготности среди маточной части стада, поголовья быков-производителей и ремонтных бычков (Макаров В.Ю. и др., 2007).

Известно, что наряду с увеличением кормовой базы, совершенствованием технологий кормления, технологий содержания скота, ветеринарного обслуживания животных селекция является мерой, увеличивающей производительность животноводства. Однако методы классической селекции -отбор и подбор не способны полностью удовлетворить запросы животноводов, в то же время селекция, основанная на анализе потомства при помощи методов ДНК технологий, позволяет существенно ускорить селекционно-племенной

процесс. Окончательно происходит отбор наилучших животных с высокими племенными и производственными характеристиками. При этом интенсивность селекции животных по формированию высокопродуктивных стад на основе ДНК-тестирования выше в два и более раза по сравнению с классическими методами отбора (Зеленков П. А. и др., 2009).

Селекционно-племенная работа должна основываться на научно-обоснованные программы, разработанные для каждого племенного стада (Дунин И.М., Прохоренко Д., 1995). Данные программы обуславливают мероприятия по сохранению поголовья, методы разведения, принципы отбора и подбора под генетическим контролем с целью расширения аллельного диапазона и определения маркеров генных комплексов с показателями продуктивности.

На сегодняшний день, как за рубежом, так и в большинстве племенных хозяйств РТ и РФ в целом оценка генов-кандидатов племенных животных является основным критерием в селекционно-племенном процессе. Так, например проверка быков-производителей по потомству и анализ происхождения дает основной материал для совершенствования селекции молочного скота (Яковлев А.Ф. и др., 2007).

Селекция, основанная на ДНК-диагностике позволяет идентифицировать гены напрямую либо косвенно связанные с молочной продуктивностью и генетическими аномалиями. Разработаны методы, которые обеспечивают анализ полиморфизма генов, участвующих в формировании продуктивности животных (Могпбс Б. е1;. а1., 2006). Известно, что генетическое совершенствование молочного стада на 85-90% обусловлено племенной ценностью быков-производителей и ремонтных бычков. На сегодняшний день в связи с широким распространением искусственного осеменения выборка потомства увеличивается: от одного быка-производителя можно получить до 400 тыс. спермодоз (Амерханов Ф.А., 2003). По данным Стрекозова Н. И. (2008) только 39-44% быков-производителей являются улучшателями. Оплодотворение спермой быков-ухудшателей приводит к тиражированию

рецессивных мутаций в потомстве. Таким образом, выявление генетических аномалий и выбраковка животных носителей (в первую очередь производителей), а также преимущественное использование производителей с желательными аллелями генов хозяйственно-полезных признаков является первоочередной задачей селекции на настоящем этапе развития животноводства.

Целью исследований явилось - молекулярно-генетическое тестирование племенного крупного рогатого скота отдельных племхозяйств и племрепредприятий Республики Татарстан по ДНК-маркерам хозяйственно-полезных признаков, а также изучение взаимосвязи полиморфизма с молочной продуктивностью.

Для достижения цели поставлены следующие задачи;

1) анализ состояния селекционно-племенной работы в исследуемых хозяйствах РТ;

2) изыскать ДНК-маркеры, ассоциирующие с молочной продуктивностью крупного рогатого скота и оптимизировать методы ПЦР-ПДРФ анализа;

3) провести молекулярно-генетическое тестирование коров и первотелок, быков-производителей по локусам генов каппа-казеина, диацетилглицерин-О-ацетилтрансферазы, бета-лактоглобулина, пролактина, тиреоглобулина, определить аллельные варианты, а также их взаимосвязь с молочной продуктивностью коров и родительским индексом быков (РИБ);

4) определить коэффициент корреляции между основными признаками молочной продуктивности крупного рогатого скота;

5) изучить встречаемость комплексных генотипов, а также их взаимосвязь с признаками молочной продуктивностью коров и РИБ.

Научная новизна работы. Оптимизированы условия проведения ПЦР-ПДРФ анализа для генотипирования крупного рогатого скота по ДНК маркерам молочной продуктивности. Впервые проведен генетический мониторинг ремонтных бычков и быков-производителей различных пород, первотелок и коров татарстанского типа холмогорской породы по генам-

маркерам CSN3, LGB, PRL, DGAT1, TG5. Изучена взаимосвязь отдельных и комплексных генотипов с молочной продуктивностью, выявлены частоты встречаемости аллельного полиморфизма животных. Отобраны наиболее ценные по комплексу признаков животные с целью расширения генофонда этой популяции в Республике Татарстан, сформированы группы особо ценных животных.

Практическая значимость. Ввиду полигенного характера формирования признаков молочной продуктивности целесообразно проводить молекулярно-генетическое тестирование молочных пород скота по пяти генам CSN3, LGB, PRL, DGAT1 и TG5. Животные, выявленные как наиболее ценные, могут быть использованы в дальнейших селекционно-племенных работах при подборе родительских пар, для получения потомства с наилучшими показателями молочной продуктивности. Результаты исследований использованы при составлении каталога «Генеалогия, племенные качества, ДНК-маркеры продуктивности быков производителей татарстанского типа, черно-пестрой и мясных пород скота» и внедрены в учебный процесс на кафедре биологической и неорганической химии и генетики и селекции сельскохозяйственных животных ФГБОУ ВПО КГАВМ, а также в лаборатории молекулярно-генетических исследований ГНУ ТатНИИСХ Россельхозакадемии.

Апробация работы. Основные положения диссертации доложены на:

- всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Молекулярная диагностика - 2010» (г. Москва, 2010).

всероссийской научно-практической конференции молодых ученых посвященной памяти Р.Г. Гареева «Научное обеспечение агропромышленного комплекса России» (г. Казань, 2010);

всероссийской научно-практической конференции молодых ученых посвященной памяти Р.Г. Гареева «Инновационные разработки молодых ученых АПК России» (г. Казань, 2011);

- II - международной научно-практической конференции «Молодые ученые в решении актуальных проблем науки» (г. Владикавказ, 2011);

- всероссийской агропромышленной выставке «Золотая осень - 2011», в конкурсе «За инновационные разработки в области сельскохозяйственной науки» (г. Москва, 2011);

- международной научно-практической конференции молодых ученых и специалистов "Молодежь. Наука. Будущее: технологии и проекты" (г. Казань, 2012).

Публикация результатов исследования. По теме диссертации опубликовано 19 научных работ, в том числе 9 в ведущих рецензируемых научных журналах, рекомендованных ВАК.

Основные положения, выносимые на защиту:

- оптимизированные условия ПЦР-ПДРФ анализа эффективны для оценки полиморфизма генов-маркеров молочной продуктивности крупного рогатого скота;

- выявлены генетические особенности быков-производителей, ремонтных бычков различных пород, коров и первотелок татарстанского типа холмогорской породы по частоте встречаемости аллелей и генотипов генов С8Ш, ЬвВ, РМ., ВвАТ! и ТС5;

- более высокими показателями молочной продуктивности обладают животные с гомозиготными генотипами - С8ШВВ, ЬОВАА, и у животных с аллелями К и В по генам БОАТ1 и РЛЬ соответственно;

- наиболее распространенными являются комплексные генотипы у коров и первотелок - С8Юал00АТ1ллТ05ссР11ЬллЬ0Вав с частотой встречаемости от 7,15 % по 17,00 %, СБЫЗааВОАТ 1 ааТС5ссР11ЬааЬОВлл с частотой от 8,80 % по 10,40 % и С8№авБ0АТ1ааТ05ссРКЬааЬ0Влв с частотой от 6,60 % по 8,80 %, а среди быков - С8КЗааВОАТ1каТС5ссРКЬааЬОВаа частота встречаемости, которого от 6,77 % по 11,76 %, С8ЫЗааБОАТ1ааТС5ссРКЬалЬОВвв с частотой встречаемости от 5,72% по 18,64%;

- выявлены ассоциации между определенными сочетаниями комплексных генотипов с показателями молочной продуктивности у коров и первотелок и родительским индексом быков.

Объем и структура диссертационной работы. Диссертация изложена на 170 страницах компьютерного текста (текстовый редактор «Microsoft Word 2007», стиль «Times New Roman», размер шрифта 14 пт, интервал полуторный) и включает: введение, обзор литературы, материалы и методы исследования, результаты собственных исследований, обсуждение результатов исследования, выводы, практические предложения, список использованной литературы (всего 253 источника, в том числе 148 иностранных) и приложения. Диссертация иллюстрирована 28 таблицами и 36 рисунками.

1 Обзор литературы

1.1 Методы молекулярных маркеров в селекции хозяйственно-полезных

признаков у крупного рогатого скота

В настоящее время широко распространены методы генотипирования по маркерам, основанным на анализе рестрикционного полиморфизма. Рестриктазы - ферменты расщепляющие нить ДНК в участках со специфической последовательностью. В результате этого открытия разработаны маркеры на основе рестрикционного полиморфизма ДНК, а метод анализа назвали - полиморфизм длин рестрикционных фрагментов (ПДРФ), от англ. Restriction Fragment Length Polymorphism (RFLP) (Arber W., 1979).

ПДРФ анализ впервые применен в 1974 г., и начиная с 1980 г. после выхода работы Botstein D. et. al., этот вид молекулярного анализа нашел свое широкое применение. На сегоднешний день этот метод анализа используют для изучения полиморфизма конкретных генов. Суть ПДРФ анализа заключается в обработке рестриктазами ДНК с последующим электрофоретическим разделением в агарозном либо в полиакриламидном геле, и соответственно определение длин рестрикционных фрагментов. Каждая рестриктаза имеет свой сайт узнавания. Расщепление нити ДНК протекает строго в местах, где нуклеотидная последовательность соответствует сайту узнавания рестриктазы, с помощью которой и происходило расщепление. Все это приведет к тому, что длины гомологичных фрагментов будут различаться, и таким образом полиморфизм тестируемого гена будет анализироваться, как ПДРФ (Алтухов Ю.П. и др., 2002; Сулимова Г.Е., 1993; Beckmann J.S. et. al., 1983; Beckmann J.S.et. al.,1986).

В 1983 году Кэри Маллис изобрел новый метод молекулярного анализа -амплификация in vitro определенных участков нити ДНК в процессе циклически повторяющихся температурных профилей полимеразной реакции (ПЦР - полимеразная цепная реакция, от англ. PCR - Polymerase Chain

Reaction). Этот метод молекулярного анализа позволяет быстро получить в течение короткого времени более 10 миллионов копий специфических последовательностей ДНК. Существует несколько видов ПЦР анализа, которые широко используют в различных областях биологии и медицины (Saiki R.K. et. al., 1988; Schlotterrer С. 2004).

Olson M. et. al. (1989) выдвинул идею создания системы STS-маркеров (от англ. Sequence Tagged Sites). В основу данной идеи легла стандартизация всех обозначений маркированных последовательностей ДНК в геноме, а также все типы картированных последовательностей. Одним из главных требований в STS является уникальность в геноме информации о нуклеотидной последовательности. STS, являясь мономорфным маркером нашел свое применение в исследованиях, где отсутствует необходимость анализа полиморфизма.

Одним из разновидностей STS маркеров является EST-маркеры (от англ. Expressed Sequence Tags). EST маркеры основываются на использовании нуклеотидных последовательностей комлементарных ДНК. Они обширно используются для построения транскрипционных карт геномов, выявления тестируемых генов и поиск новых генов (см.базу данных: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/dbEST/).

Высокой эффективностью обладают ДНК-маркеры на основе ПЦР с праймерами, имеющими множественную локализацию в геноме. RAPD-маркеры (Randomly Amplified Polymorphic DNA). Данная группа маркеров основана на ПЦР с использованием праймеров со случайной нуклеотидной последовательностью. Этот вид праймеров можно применять без соответствующего знания конкретных нуклеотидных последовательностей исследуемого генома, они должны отвечать конкретному требованию по соотношению GC-nap (около 60%) и длине (Welsh J. et. al., 1990; Williams I. et. al., 1990).

Метод RAPD-маркеров основывается в амплификации фрагментов ДНК нити с использованием единичного короткого праймера, температура отжига

которого низкая в ПЦР. Праймер связывается с геномной ДНК в двух различных участках инвертированных повторов, а вот уже при электрофоретическом разделении продуктов амплификации, формируется дискретные продукты размер, которых находится в диапозоне от 100 до 5000 п.о. RAPD - метод анализа, может служить своеобразным экспресс методом выявления генетического полиморфизма, особенно у малоизученных токсономических групп (Caetano-Anolles G. et. al., 1990; Welsh J. et. al., 1990; Williams I. et. al., 1990; Waugh R. et. al., 1992).

Разрабатываются и начинают применять AFLP-маркеры (от англ. Amplified Fragment Length Polymorphism). Данные маркеры являются доминантными диаллельными маркерами (Vos P., et. al., 1995), метод используется для определения вариабельности генома. Метод AFLP-маркеров позволяет одновременно анализировать изменения по нескольким генам, выявлять «точковые мутации» в неизвестных участках генома, где и может находиться неизвестный функциональный ген, несущий определенную мутацию. Недостаток метода, в том, что нельзя отличить гомозиготный, по доминантному аллелю, от гетерозиготного, что приводит к снижению их использования в исследованиях генетического разнообразия внутри породы, и при инбридинге. Однако профили AFLP несут большое количество информации о взаимосвязи между породами (Ajmone-Marsan. et. al., 2002; De Marchi M. et. al., 2006; SanCristobal M. et al., 2006).

Большой интерес представляют ISSR-маркеры (Inter-simple-sequence-repeats) их получают с помощью праймеров, комплементарных микросателлитным повторам (4-12 единицам повтора), несущих на одном из концов последовательность из 2-4 произвольных нуклеотидов. С помощью такого рода праймеров при амплификации получают такие фрагменты ДНК, которые находятся между двумя близко расположенными микросателлитными последовательностями при этом амплифицируется большое число фрагментов, которые при электрофоретическом разделении образуют картину с дискретным

количеством полос (ISSR-фингерпринтинг), (Zietkiewicz Е. et. al., 1994; Gupta M. et. al., 1994).

Полиморфизм ISSR маркеров тестируется по наличию либо отсутствию, при электрофоретическом разделении в геле, полос. Так создание ISSR не требует предварительного знания нуклеотидной последовательности исследуемой ДНК. Нужно сказать, что ISSR-метод хорошо воспроизводится и также, как и AFLP может быть использован для выявления, как внутри, так и межвидовой генетической изменчивости, идентификации видов, популяций и.т.д. (Neve G. et. al., 2000; Zietkiewicz E. et. al., 1994; Gupta M. et. al., 1994), a также для картирования геномов и маркирования хозяйственно-полезных признаков (Fang D.Q. et. al., 1998; Irzikovska L.et. al., 2001).

1.2 Микросателлиты

На сегодняшний день для определения полиморфизма ядерной ДНК существует ряд разных маркеров. Для изучения разнообразия наиболее часто используются микросателлиты - первые, полученные с использованием ПЦР высокополиморфные маркеры для индивидуальных локусов. Микросателлиты или SSR (Simple Sequence Repeats) или STR (Simple Tandem Repeats) состоят из участков ДНК длиной в 2-6 п.о. тандемно повторенных много раз т.е. микросателлиты имеют малые размеры, следовательно, они легко могут быть амплифицированны при использовании полимеразно цепной реакции на ДНК. Полиморфизмы могут быть визуализированы на секвенирующем геле (Goldstain D.B. et. al., 1999; JarneP. et. al., 1996).

Наиболее часто микросателлиты имеют несколько десятков аллелей по одному и тому же локусу, которые отличаются друг от друга по количеству повторов. Поэтому их часто используют для картирования локусов количественных признаков (QTL - quantitive traite loci) (Smaragdov M.G., 2005).

В 1995 году появилась первая работа Georges M. et. al. (1995) по поиску QTL в геноме крупного рогатого скота, которые контролируют качественные

признаки молока (Smaragdov M.G., 2005). QTL - это генетический локус, вариабельность которого, на базе различных аллелей ведет к статистически значимым изменениям фенотипического проявления признака (Кузнецов В.М., 2009 ).

SNP - полиморфные маркеры (от англ. Single Nucleotide Polymorphism), основанные на тестировании однонуклеотидных замен (Brookes A.J., 1999).

Метод SNP используется в изучении генетического разнообразия, как альтернатива микросателлитам. Существует несколько методов по выявлению и типированию SNP-маркеров (Syvänen, A.C., 2001). Являясь диаллельным маркером, SNP имеют очень маленькое количество сведений, и для получения того же уровня информации, какой можно получить при использовании стандартной панели из 30 микросателлитных локусов, необходимо использовать большее их количество (Wong G.K., 2004).

Одновременно с высокой плотностью, SNP обладает низким уровнем мутаций на поколение (10-8), что делает их удобными маркерами молекулярной эволюции при оценке крупномасштабных эволюционных событий (Crow J.F 1995; Fisher S.G. 1983).

Важным достоинством этого метода является возможность использования автоматических методов их детекции, например использование ДНК - микропанелей (Chen X., 2003).

Существует условное деление SNP-метода на несколько групп: ферментативные, химические, детекция на твердых подложках, хроматография, физические, секвенирование ДНК.

Одним из ферментативных методов SNP-маркеров является ПДРФ- ПЦР, который аналогичен методу ПДРФ, но в его основе лежит использование ПЦР. В отличии от ПДРФ, в ПЦР-ПДРФ гидролизу, под действием эндонуклеазы рестрикции, подвергается не геномная ДНК, а продукт амплификации (ПЦР-продукт). Из-за своей простоты и высокой надежности данный метод получил широкое распространение и до сих пор используется для анализа аллельного полиморфизма генов, в том числе и у сельскохозяйственных животных

(Сулимова Г.Е. и др. 1989; Avise J.C., 1994; Удина И.Г. и др., 2003; Thiel T. et. al., 2004).

1.3 Полиморфизм генов молочных белков крупного рогатого скота

Молоко - это один из наиболее ценных продуктов питания являющийся жидкостью биологического происхождения, образующийся в молочной железе млекопитающих. Его составные части усваиваются на 95-98% (Барабанщиков Н.В. и др., 1989).

Как известно молоко является коллоидным соединением воды, молочного жира, белков, молочного сахара, липидов, органических и неорганических солей, газов, ферментов, витаминов и других веществ. Некоторые из основных компонентов молока казеин, лактоза ни в каких других природных веществах не существуют (Арзуманян Е.А. и др., 1978) .

При оценке коров и родительского индекса быков молочных пород большое значение имеет не только высокий уровень молочной продуктивности, но и качественные показатели молока. Основой конкурентоспособности молочного животноводства и соответственно молочной промышленности, заключается, как уже было сказано выше, в качестве используемого сырья, а в частности от содержания в нем не только жира, но и белка.

Известно, что белки молока имеют немаловажное значение для питания человека, так как содержат незаменимые аминокислоты и лучше усваиваются организмом, чем белки других продуктов питания. Установлено, что на долю молока приходится 25% потребляемого человеком белка (Martin P. et. al., 1993).

Белки представляют собой сложный компонент молока, которые по строению и свойствам не однородны и представляют собой совокупность белковых фракций, общее количество которых превышает 20 наименований (Тепел А.; 1979).

Молочные белки - это высокомолекулярные комплексные органические соединения, которые содержат углерод, водород, кислород, азот, серу, иногда

фосфор. Эти элементы образуют структурные частицы белка - аминокислоты, которые связаны между собой специфической для них пептидной связью. Разнообразие свойств и функций белка, его специфичность определяют азот и сера (Алиев А.; 1997).

Известно, что белки молока крупного рогатого скота представлены четырьмя казеиновыми фракциями -а-,|3-,у казенны и к-казеин, а так же фракциями кислых (сычужных) белков - это альфа-лактальбумин и бета-лактоглобулин, а так же иммуноглобулин и сывороточный альбумин, являющиеся полиморфными.

Все белки молока характеризуются наличием генетически обусловленных полиморфных вариантов, отличающиеся одной или несколькими аминокислотами (генетический полиморфизм) (Aschaffenburg Я., е1:. а1., 1955). Изначально полиморфизм молочных белков был выявлен на белковом уровне, а уже с развитием молекулярно-генетических методов анализа, на уровне последовательности ДНК соответствующих локусов. Необходимо сказать, что изменения внешних условий, и состояния организма определенный генотип соответствующего гена остается неизменным его маркером (Ахметов Т.М. и др., 2009).

В настоящее время огромный интерес представляют таких молочные белки, как каппа-казеин и бета-лактоглобулин (Валлиуллина Э. Ф. и др., 2007).

Каппа-казеин и бета-лактоглобулин являются важными молочными белками у млекопитающих, синтезируемые элементами эпителиальной ткани молочных желез. Эти белки играют значительную роль в обеспечении качества молока, образования сыра и молока. Абсорбция главных компонентов в молоке достигается благодаря процессу коагуляции белков (Ра1е1 Я. К. е^ а1., 2007).

Генетические сведения об аллельных вариантах локусов, кодирующих синтез молочных белков, и их сочетание в геноме крупного рогатого скота оказывает значительную помощь в селекции молочного скота (Валиуллина Э.Ф. и др., 2007).

При тепловой обработке молока происходит взаимодействие денатурированных сывороточных белков (бета-лактоглобулин) с каппа-казеином казеиновых мицелл. Образующиеся при этом комплексы влияют на технологические свойства молока - термоустойчивость и способность к сычужному свертыванию (Алексеева Н.Ю. и др., 1965).

Казеин - это группа гетерогенных фосфопротеидов самоассоциирующихся в мицеллы в присутствии кальция цитратов и фосфатов (Дьяченко П. Ф., 1959).

В 1939 г. исследования Mellander О. показали, что казеин состоит как минимум из трех фракций - это а -,Р-,у- казенны, которые обозначены согласно порядку уменьшения их подвижности. Warner R.C в 1944 году впервые предложил химическое разделение а-, р- компонентов казеина. Этот химический метод основан на различиях растворимости этих двух компонентов в воде при рН 4,4 и 2 С0 . А в 1950 г. Хиппом и сотруд. был описан метод выделения у-казеина, а вот в 1952 году этими же авторами были предложены методы для выделения из цельного казеина любой из трех фракций.

В последние годы многих исследователей привлекает ген каппа-казеина. Это связано с тем, что каппа-казеин один из немногих известных генов, связанный с признаками белковомолочности и сыропригодности молока.

Каппа-казеин - растворимая фракция белка в растворе хлористого кальция, стабилизирующая мицеллы казеина по отношению к ионам кальция. В отличие от других фракций каппа-казеин содержит мало фосфора, но много углеводов и сиаловую кислоту.

При рН 7,0 в ультрацентрифуге каппа-казеин оседает как полимер, а при рН 12, 0 ведет себя как мономер. В результате редукции дисульфидных связей молекулярный вес каппа-казеина снижается с 60 до 20 тыс., в связи с чем сделан вывод, что каппа-казеин состоит из двух или большего числа полипептидных цепей, которые соединены дисульфидными связями (Swaigood Н. Е., 1962).

Существуют несколько методов приготовления каппа-казеина — это растворение его в 0,4 М растворе СаС12 при pH 7,0 и 0-4 С0 (McKenzie H.A. et. al. 1961), методы фракционирования, включающие растворимость CSN3 в 6,6 М растворе мочевины и сильных кислотах, 12% трихлоруксусной кислоте или H2S04 (Zittle С. А. et. al., 1963).

Аллельные варианты гена каппа-казеина во многом определяют качество молока и возможность его использования в сыроварении.

На сегодняшний день описано 13 аллелей каппа-казеина крупного рогатого скота: A.B. (Grocclaude F., 1965), С (Di Stasio L., Merlin P., 1979), E (Erhardt E., 1989), F (Сулимова Г.Е. и др., 1992, 1997; Erhardt E., 1996), G (Бадагуева Ю.Н. и др., 1996; Erhardt E., 1989), H (Бадагуева Ю.Н. и др., 1996). Локус каппа-казеина относится к синтенной группе U15 и находится в хромосоме 6, в то время как ген а-лактоглобулина находится в группе сцепления U16 (Theardgill D. W. et. al., 1990). Большая часть перечисленных вариантов относится к редким, и встречаются у отдельных пород с очень низкой частотой.

Известные нам четыре гена казеина находятся в тесном сцеплении, занимая участок ДНК протяженностью 200 кД. Необходимо отметить, что группа генов asl-,ß-, и аз2-казеинов находятся в более тесном сцеплении и создают эволюционно родственную семью, в то время когда ген каппа-казеина отделен от остальной группы на 70 п.н. (Ferretti L. et. al., 1990).

Белок каппа-казеина по своей структуре и свойствам во многом отличается от остальных казеинов и имеет высокий уровень гомологии с у-цепью фибриногена и сходную с этим белком функцию - они выполняют роль стабилизирующего фактора в образовании мицеллярной структуры при свертывании молока (Сулимова Г. Е., 2007).

Настоящие методы молекулярной генетики позволяют выявить аллельные варианты генов, кодирующих синтез молочных белков, и их сочетания в генотипе сельскохозяйственных животных (Труфанов В. Г., 2006).

В результате молекулярно-генетических, биохимических исследований 13 генетических вариантов гена CSN3 было установлено, два его варианта - А и В являются основными у крупного рогатого скота. Фенотипически, эти два варианта белка CSN3 отличаются друг от друга двумя аминокислотными заменами в позициях 136 Thr (А)/11е (В) и 148 Asp(A)/Ala(B). Наличие треонина и аланина в положениях соответствующих 136 и 148, по нумерации аминокислотной последовательности, каппа-казеина крупного рогатого скота характерно, как для близкородственных видов - буйвола, зубра, яка (Сулимова Г. Е. и др., 1996), также и для каппа-казеинов тех видов, которые далеки друг от друга в эволюционном развитии, таких как овцы, козы, человек (Mercier J.C. et. al., 1990).

На сегодняшний день благодаря многим исследованиям известно, что лишь у крупного рогатого скота и зебу появляются А и В аллели гена CSN3, у которых эти аминокислоты разнесены: 136 Thr - у А-аллеля, и 148 Ala - у В-аллеля (Сулимова Г.Е., и др., 2007).

Каждый аллельный вариант имеющих выше изложенные специфические, нуклеотидные замены - точковые мутации, являются причиной синтеза в молоке каппа-казеинов разной структуры (Тинаев А.Ш. и др., 2005).

Наиболее . лучшие технологические свойства молока (консистенция, казеинового сгустка, время сычужного свертывания) установлены у коров с генотипом ВВ. Необходимо отметить, что у животных несущих в своем геноме генотип ВВ гена CSN3, затраты на производство сыра и творога - ниже, а качество таких продуктов - выше, в отличие от особей, несущих другие генотипы АА и АВ (Афанасьев М.П., 1996).

До недавнего времени полиморфизм молочных белков, в частности казеинов, можно было оценить только у лактирующих коров, а производители могли быть оценены путем генотипирования молочных белков их дочерей. В настоящее же время с появлением методов ДНК-диагностики стало возможным идентифицировать генотипы каппа-казеина у производителей и молодняка, что

значительно ускоряет решение селекционно-племенных задач (Тинаев А. Ш. и др., 2005).

В проведенных рядом авторов исследованиях методами ДНК тестирования было установлено, что частота встречаемости желательного генотипа ВВ по гену CSN3 существенно варьирует в зависимости от породы и региона, где находится подопытное хозяйство, будь оно племенное либо товарное стадо. При этом наименьшая частота встречаемости генотипа ВВ отмечена у животных голштинской породы (Дунин И.М., 1998), а из отечественных пород наименьшей частотой генотипов АВ и ВВ характеризуется черно-пестрая порода крупного рогатого скота (Зиновьева Н.А. и др., 2001).

Артемьев A.M. (2006) при исследовании черно-пестрого скота в хозяйствах Московской области получил следующее распределение частот генотипов гена CSN3: АА - 73,5%, АВ - 25%, ВВ - 1,5%. Частота аллелей составила А - 0,86 и В - 0,14. Подобные данные были получены в ранних исследованиях М. Алипанах (2006) и Е.А. Гладырь (2001), а вот данные, полученные А. Ш. Тинаевым (2003) и Б. С. Илочевым (1993), показывают обратную картину, где частоты встречаемости аллеля В среди популяции черно-пестрого скота, той же Московской области равна 0,40 и 0,434 соответственно.

По результатам исследований, проведенных на голштинской популяции крупного рогатого скота в Чехии частоты встречаемости аллелей А и В составило 78,9% и 11,04% соответственно, а вот частота аллеля Е составило -10,06% (Jandurovojm М. et. al., 2002).

По данным Кириленко С.Д. и Глазко В.И. (1996) частоты аллелей и генотипов гена CSN3 внутри трех пород крупного рогатого скота было следующим: импортные голштины А аллель - 0,75 и В аллель - 0,25, по генотипам АА - 60, АВ - 30, ВВ - 10; черно - пестрый А аллель - 0, 656 и В -0,344, по генотипам АА - 50, АВ - 31, ВВ - 19; симменталы А аллель - 0, 73 и В - 0,27, по генотипам АА - 69, АВ - 8, ВВ - 23.

В результате генотипирования коров различных пород в различных регионах РФ показали следующее соотношение частот аллелей и генотипов по гену СБЫЗ: Саха (Якутия, п=69) по аллелям А - 0,75 и В - 0,25 по генотипам АА - 52,17%, АВ - 44,93%, ВВ - 2,90%; черно - пестрая (Московская область, п= 52) аллель А - 0,85 и аллель В - 0,15; по генотипам АА - 71,0%, АВ - 27,0%, ВВ - 2,0%; бестужевская (Татарстан, п= 63), А - 0,71, В - 0,29 по АА - 49,20%, АВ - 42,86%, ВВ - 7,94%; ярославская («Михайловская», п= 60) А - 0,55 и В -0,45 по генотипам АА - 33,33%, АВ - 43,33% и ВВ - 23,34%; калмыцкая (Целинный район, п= 91) А - 0,68 и В - 0,32 по генотипам АА - 43,96%, АВ -47,25% и ВВ - 8,79% (Сулимова Г.Е. и др., 1995 ).

По результатам исследований, проведенных на первотелках помесей холмогоров и голштинов Ахметовым Т. М. и Вафиным Р.Р. в одном из хозяйств РТ (2005), частота аллелей и генотипов по гену СБШ составила: А — 0,83 и В -0,17, по генотипам АА - 69,3%, АВ - 28% и ВВ - 2,67% при п= 225.

Хабибрахманова Я.Ф. (2009), исследуя несколько пород крупного рогатого скота по гену каппа-казеин, получила следующие результаты: черно -пестрая порода (п= 168) аллель А - 0,78 и В аллель 0,22 по генотипам АА -61%, АВ - 35% и ВВ - 4%; холмогорская порода (п=104) аллель А - 0,80 и В -0,20 по генотипам АА - 69%, АВ - 22% и ВВ - 9%; ярославская порода (п= 34) аллель А - 0,56 и В - 0,44 по генотипам АА - 32%, АВ - 47% и ВВ - 21%; симментальская порода (п= 25) аллель А - 0, 84 и В - 0,16 по генотипам АА -68%, АВ - 32% и ВВ - 0.

Р-лактоглобулин. Известно, что при добавлении в молоко сычужного фермента оно створаживается, при этом происходит осаждение казеиновых белков. После удаления свернувшегося казеинового сгустка, остается прозрачный раствор в состав, которого входит: лактоза, витамины, соли неорганических соединений, а также растворимые азотистые соединения молока, т.е сывороточные белки. Около 20% всех белков молока составляют сычужные белки.

Существует шесть белков сыворотки: быстрая фракция (F), альбумин сыворотки крови (AL), протеозопептонная фракция (Рр), иммуноглобулин (Ig), а также ß-лактоглобулин, а-лактоглобулин, которые являются главными представителями сывороточных белков и составляют 50% и 20% соответственно от общего количества сывороточных белков. Количество сывороточных белков в молоке примерно в 1500 раза больше из-за их малого размера. Однако по массе казеин в девять раз превышает содержание сывороточных белков (Горбатова К.К., 1993).

Белок ß-лактоглобулина впервые был выделен в кристаллической форме в 1934 году из коровьего молока. Он является серосодержащим белком, который осаждается сычужным ферментом (Palmer А.Н., 1934).

Бета-лактоглобулин являясь главным белком молочной сыворотки, представляет собой очень ценный компонент молока необходимый для роста молодняка. Ген бета-лактоглобулина достаточно большой и состоит из семи экзонов охватывающих 4000 п.о. Длина цепи белка бета-лактоглобулина составляет 178 аминокислот (Ахметов Т.М. и др., 2009), а молекулярный вес его мономера 183000 дальтон (Bell К. et. al., 1968).

Бета-лактоглобулин относится к группе липокалинов (от англ. lipocalins) (Flower D.R. et. al., 2000) - это группа транспортных белков с характерной вторичной структурой. Эта группа белков содержат восемь антипараллельных пептидных последовательностей на основе бета-складчатой структуры формирующих своеобразный цилиндр, который содержит внутри лиганд -связывающий участок. Так LGB крупного рогатого скота связывает большой спектр лиганд, обеспечивающих выполнение им такой физиологической функции, как участие в транспорте гидрофобных лиганд, регуляции ферментации и пассивного иммунитета у новорожденных. Во время лактации, у многих видов животных в молочной железе содержится небольшое количество бета-лактоглобулина, который является источником аминокислот для новорожденных (Kontopidis. S.G. et. al., 2004).

Белок гликоделин относящийся к группе транспортных белков, был найден в оболочке матки во время ранней беременности, очень схож с PLG. Данный белок секретируется железистым эпителием эндометрия, и играет роль иммуномодулятора, обеспечивает защиту полуаллогенного эмбриона от иммунной атаки организма матери (Болтовская М.Н. и др., 2000).

Известно, что бета-лактоглобулин хорошо растворим в разбавленных солевых растворах. При длительном тепловом воздействии на молоко, сывороточные белки денатурируют, при этом часть SH групп отщепляется в виде SH2, что и придает кипяченному либо пастеризованному молоку специфический запах (Хазипов Н.З. и др., 2001).

Первичное строение гена бета-лактоглобулин была определена у крупного рогатого скота в 1967 году (Frank G. et. al., 1967). У парнокопытных бета-лактоглобулин встречается, как устойчивый димер в интервале рН 3,0- 7,0, в то время как у моногастричных он встречается, как мономер (Leberatoti J., 1977).

На сегодняшний день известно 11 аллелей гена р-лактоглобулина, обозначенных как А, В, С, D, Е, F, G, Н, X, Dr и W из которых А и В являются доминантными (Eigel W.N. et. al., 1984).

Определенные генетические варианты гена бета-лактоглобулина ассоциируются с высоким содержанием казеина и жирности молока. Так аллель В бета-лактоглобулина характеризуется высоким содержанием в молоке казеиновых белков, высоким процентом жира и параметрами казеинового коагулянта, а аллель А ассоциирован с высоким содержанием сывороточных белков молока (Patel R.K. et. al., 2007).

Наиболее частым у большинства пород встречается В аллель гена бета-лактоглобулина, поэтому данный вариант может быть принят как основной. Генетические различия между ним и другим распространенным вариантом А заключаются в наличии двух аминокислотных замещений в полупептидной цепи, что является результатом точковых мутаций в гене бета-лактоглобулин :64 Асп (GAT) на Гли (GGT) и Вал 118 (GCT) на Ала (GCC). Последняя Т-С

замена создает сайт узнавания для фермента Нае III, что делает возможным ПДРФ анализ (Medrano J.F., 1990).

Результаты отечественных и зарубежных авторов показывают влияния генотипов по локусу гена бета-лактоглобулина на состав, биологическую ценность и технологические свойства молока коров. Показана взаимосвязь аллельных вариантов (З-лактоглобулин с уровнем его содержания в молоке, соотношением белковых фракций, термоустойчивость и сыродельческим качеством (Тинаев А.Ш. и др., 2006).

Популяционный анализ гена Р-лактоглобулина выявил межпородную вариабельность распределения его генотипов по двум наиболее часто встречающимся аллелям - А и В. Так, например по данным Celic S. (2003) показано, что частота встречаемости аллелей гена (3LG в таких породах, как голштинской и брауншвейгской составила: аллель А — 0,27 и 0,44, а по аллелю В - 0,73 и 0,56 соответственно. А вот следуя данным Жебровского JI.C. (1970) распределение генотипов гена (З-лактоглобулин таково: с генотипом АА от 1,2 % (шортгорнская) до 40, 8% (черно-пестрая); с генотипом АВ от 15,9% (бурая латвийская) до 55,8% (швицкая) и с гомозиготным генотипом ВВ от 15,9% (черно-пестрая) до 79,3% (шортгорнская).

Если сравнивать породы абердин-ангузской с украинской красно-пестрой молочной породой, тогда преобладает частота встречаемости аллеля В (0,800) над аллелем А (0,685) (Арнаут Е.А., 2008) .

В результате исследований 158 коров черно-пестро х голштинской породы и 70 быков-производителей зарубежной и отечественной селекции класса элита-рекорд по локусу гена бета-лактоглобулин Ахметовым Т.М. и соавт. (2009) были получены следующие данные: из 158 коров частота аллеля А составило - 0,39 и В - 0,61, а частота генотипов была следующей: АА - 15,8%, АВ - 46,2% и ВВ - 38,0%. Что касается быков-производителей то частота аллеля А составила - 0,31 и В - 0,69, а частота встречаемости генотипов была следующей: АА - 12,9%, АВ - 37,1% и ВВ - 50,0%. Статистический метод Харди - Вайнберга и метода X позволили установить, что в исследуемых

популяциях крупного рогатого скота нет достоверного сдвига генетического равновесия ни по одному из трех генотипов по локусу гена ßLG.

По данным полученных Хабибрахмановой Я.Ф. (2009) распределение частот встречаемости генотипов гена бета-лактоглобулин у крупного рогатого скота была следующей: у черно-пестрой породы (п= 160) АА - 9%, AB - 85% и ВВ - 6%; холмогорская порода (п= 104) АА - 25%, AB - 66% и ВВ - 9%; ярославская порода (п=34) все животные оказались носителями гетерозиготного генотипа AB - 100%; симментальская порода (п=25) АА -12%, AB - 88%, а животные-носители гомозиготного генотипа ВВ отсутствовали.

Таким образом, с помощью молекулярно-генетических методов исследований выявлен не только широкий диапазон полиморфизма генов молочных белков, но и стало возможным генотипирование аллельных вариантов молочных белков у производителей и молодняка, что делает огромный вклад в селекционно-племенной процесс.

1.4 Полиморфизм гена молочного гормона - пролактина

Известно, что пролактин в 1928 г. был открыт, как фактор, влияющий на секрецию молока. На сегодняшний день известно, что пролактин выполняет ряд функций у большинства позвоночных, которые способствуют адаптации к различным физиологическим состояниям организма (Sinha Y. N., 1995).

Многолетними исследованиями доказано, что синтез пролактина регулируется на уровне транскрипции многими факторами, включая и сАМР (Maurer R.A., 1981), эпидермальный фактор роста форболовые эфиры (Potter L.M. et.al., 1981), катионы кальция, дофамин, глюкокортикоиды и эстрадиол. Количество пролактина увеличивается на последних неделях беременности (стельности) и при лактации. Способностью к синтезу пролактина в организме животных и человека обладают такие органы и ткани, как тимус (тимоциты), головной мозг (нейроны), молочная железа (эпителий), костный мозг

(лимфоидные клетки), простата и др. (Sinha Y.N., 1995; Ben-Jonathan et.al., 1996; Nevalainen M.T., et.al., 1996; Дедов И.И. и др., 2004).

Пролактин является белковым гормоном, молекулярная масса которого примерно 23000 дальтон. В 2002 г. Cao X. et. al., выделили и подробно описали структуру гена пролактина. Размер его равен 9388 п.о. и состоит из 5 экзонов и 4 интронов, а длина его составляет 10-12 п.н. (Maurer R.A. et.al., 1981).

Несмотря на то, что гормон пролактин обладает лактогенной активностью, он также имеет ряд физиологических функций, таких как: 1) осморегуляторная функция пролактина у млекопитающих - это регуляция водно-солевого баланса в почках, мочевом пузыре, потовых железах, ободочной кишке, а также в молочных железах (Richardson В.Р., 1973);2) иммуномодуляторная функция - пролактин участвует в регуляции, как гуморального так и клеточного иммунитета - это секреция антител, пролиферация клеток иммунной системы. Ауто-паракринная регуляция иммунного ответа пролактина, говорит секреция пролактина самими иммунными клетками (Dardenne М. et. al., 1994); 3) эффекты связанные с размножением - пролактин регулирует репродуктивные функции у млекопитающих на всех стадиях начиная от полового созревания и заканчивая вскармливанием потомства. Этот гормон играет немаловажную роль в регуляции функций яичников: пролактин является одним из гонадотропных гормонов, регулирующий стероидные ферменты яичников (Alvarest Е.О. et.al., 1994); 4) влияние на эндокринные процессы и метаболизм - пролактин регулирует обменные процессы липидов и углеводов у млекопитающих, а также он изменяет стероидогенез в некоторых эндокринных органах. Пролактин влияет на рецепторы таких гормонов, как эстроген, фолликулостимуллирующего и он также активно участвует в повышении уровня собственных рецепторов, во многих тканях; 5) эффекты связанные с регуляцией роста и дифференцировки - пролактин, как и гормон роста влияет на рост, поэтому их молекулы максимально гомологичные; 6) регуляция поведения (Nevalainen М.Т. et. al., 1996).

i« А

'л

Известно, что пролактин существует в единственном виде у крупного рогатого скота, однако в их организме присутствуют несколько генов, которые кодируют пролактин -подобные белки (Yamakawa М. et. al., 1990).

На сегодняшний день информация о полиморфизме гена пролактин ограничена. Поиск значимой взаимосвязи полиморфных вариантов гена пролактин с конкретными параметрами молочной продуктивности, основан на активном участии продуктов этого гена в формировании признака молочной продуктивности (Cowan С. М. et al. 1990). Полиморфизм гена пролактин был изучен отдельными авторами с использованием метода ПЦР-ПДРФ анализа. Так полиморфизм гена пролактин в 1998 г. был исследован Chrenec J. et. al., с использованием для гидролиза ПЦР-пробы эндонуклеазу рестрикции Rsal. В том же году Chrenec J . et. al., (1998) был изучен полиморфизм гена пролактин у некоторых пород крупного рогатого скота. Распределение частот встречаемости двух аллелей гена PRL внутри каждой исследуемой популяции крупного рогатого скота было следующим: словацкий пинцгау по аллелю А -0,69 и В - 0,31; словацкая пестрая по аллелю А - 0,87 и В - 0,13; герефорд по аллелю А - 0,95 и В - 0,05. ' Нужно сказать, что животные носители желательного генотипа ВВ среди исследуемых животных отсутствовали.

Исследования Турковой С.О. с соавт. (2001) показали, следующее распределение частот встречаемости аллелей гена PRL: у монгольского скота аллель А составил - 67,5% и В - 32,5%; у красной горбатовской породы аллель А составил - 91,4% и В - 8,6%; у айширской породы аллель А - 85,9% и В -14,1; у монгольских яков аллель А - 100% и В соответственно составил - 0%.

Известно, что внутри таких пород, как ярославская и черно-пестрая немецкой селекции животных с желательным аллелем В гена пролактин встречается больше, чем в других породах. У черно-пестрой породы крупного рогатого скота российской селекции частота встречаемости того же аллеля В среди животных этой популяции оказалось самое низкое из всех ранее исследованных пород. Их можно сравнить лишь с животными относящихся к голштинской популяции крупного рогатого скота (Хатами С.Р. и др., 2005).

"i, *(

1.5 Полиморфизм гена жирномолочности диацилглицерол-О-ацилтрансферазы и тиреоглобулина

В коровьем молоке жир находится в виде тонкой эмульсии, которая представляет собой огромное количество мельчайших жировых шариков, окруженных белково-лецитиновой оболочкой и равномерно распределенных среди водной части молока. Содержание жира в молоке может колебаться в пределах 2,7-6,0 %,что в основном зависит в значительной степени от состава кормов. При длительном отстаивании молока жировая часть собирается сверху, поскольку удельная масса жира меньше воды (0,918-0,925) (Википедия -свободная энциклопедия).

Молочный жир, как и другие пищевые жиры - это прежде всего богатый источник энергии для человеческого организма. Для молочного жира характерен ряд особенностей, которые отличают его от других жиров животного и растительного происхождения. Он имеет низкую температуру плавления — 27-35°С, это ниже температуры тела человека. Благодаря этому жир в кишечнике человека переходит в жидкое состояние и легче усваивается. Жир в молоке находится в виде мельчайших жировых шариков. В капле молока насчитывается свыше 10 млд. жировых шариков. Размер их колеблется в пределах 0,5-5 мкм и зависит от породы, периода лактации, индивидуальных особенностей коровы.

Жирномолочность - показатель, который характеризует содержание жира в молоке коров различных пород крупного рогатого скота. Различают жирномолочные породы (джерсейская, красная горбатовская, ярославская, айрширская, истобенская и др.); жидкомолочные (голландская, голштинская, холмогорская, черно-пестрая, красная степная); породы со средним содержанием жира в молоке (симментальская, сычевская и др.).

Молочный жир состоит в основном из триглицеридов и триацилглицеридов, типичная форма хранения липидов, на долю которых приходится более 95% общего молочного жира (Jensen R. 2002). Синтез

триглицеридов катализируется ацилСоА-диацилглицерол-ацилтрансферазой (DGAT). Локус количественного признака (QTL) влияющий на процентное содержание жира в молоке, был картирован на хромосоме 14 в геноме Bos aurus как маркер, влияющий на качество молока (Grisart В. et. al., 2002). Анализ последовательности нуклеотидов позволил идентифицировать последовательность как структурную геномную область гена DGAT1, который кодирует ацилСоА-диацилглицерин-ацилтрансферазу1. Данный фермент играет фундаментальную роль в клеточном метаболизме диацилглицерола, вовлечен в биосинтез липидов, а также играет важную роль в физиологических процессах, таких как метаболизм триглицеридов, адсорбция жиров в кишечнике, связывание липопротеидов, формирование жировой ткани и период лактации у высших эукариот.

Известно, что неконсервативная замена К232А (лизина на аланин) в последовательности этого гена, снижает содержание жира в молоке коров. Таким образом, аллель, содержащий лизин в 232 положении является наиболее желательным, поскольку коровы, несущие этот аллель гена (КК и КА), производят более жирное молоко, чем гомозиготные коровы с генотипом АА, содержащий аллель, где в 232 положении располагается аланин.

Фермент ацилСоА-диацилглицерин-ацилтрансфераза1 являтся неотъемлемой частью микросомального фермента, который катализирует мембранный синтез TAG (триглицеридов) (Lehner R. et. al., 1996; Farese R. et. al., 2000). Реакция включает соединение жирных ацилСоА-диацилглициролов в результате гидролиза в фосфатной кислоте в глицерол фосфат или ацилирование моноацилглицеролов в полиацилглицеролы (Cases S. et. al., 2001).

Исследования на мышах показали, что ген DGAT1 играет важную роль в процессе лактации. У самок дефицит этого фермента приводит к снижению либо прекращению синтеза молока, в большинстве это происходит из-за нарушения синтеза триглицеридов в молочной железе. (Smith S. et. al.,2000).

А

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Зиннатова, Фарида Фатиховна, 2013 год

7 Список использованной литературы

1 .а2-микроглобулин фертильности (гликоделин) как маркер функциональной активности эндометрия / М.Н. Болтовская, Г.Д. Попов, С.А. Калинина, Т.А. Старостина // Проблемы репродукции. 2000. №6. С. 6 - 11.

2. Айала Ф. Ведение в популяционную генетику / М.: Мир, 1984. 345 с.

3. Алексеева Н.Ю. Современная номенклатура белков молока / Молочная промышленность, 1983. С. 27 - 31.

4. Алексеева Н.Ю., Дьяченко П.Ф. Новые данные о казеиновом комплексе молока / М.: Центральный институт информации пищевой промышленности государственного комитета по пищевой промышленности при Госплане СССР. 1965. 56 с.

5. Алиев A.A. Обмен веществ у жвачных животных / М.: НИЦ «Инженер», 1997. 420 с.

6. Алтухов Ю.П. Генетические процессы в популяциях / М.: Наука, 1989.

328 с.

7. Алтухов Ю.П., Салменкова Е.А. / Генетика. 2002. Т. 98. № 9. С. 1173.

8. Амерханов Х.А. Информационно аналитическая система в мясном скотоводстве России / Вестник АСМБ. 2003. С. 332.

9. Анализ полиморфизма ДНК-кластерных генов у крупного рогатого скота: геныказеинов и гены главного комплекса гистосовместимости (BOLA) / Г.Е. Сулимова [и др.] // Цитология и генетика. 1992. № 5. С. 18 - 26.

10. Арнаут Е.А. Использование метода ПЦР-ПДРФ для выявления наследуемых генотипов в популяциях крупного рогатого скота, разводимых на Украине // Материалы 7-ой международной научной конференции-школы. Дубровицы . 2008. С. 110 - 114.

11. Артемьев A.M. Молочная продуктивность и технологические свойства молока коров черно-пестрой породы с различными генотипами каппа-казеина и сезонами отела: автореф. дисс. ... канд. с. - х. наук: 06.02.04 / Артемьев Александр Михайлович. М. 2006. 21 с.

12. Афанасьев М.П., Ардатовская И.П. Химический состав и технологические свойства молока коров различных пород // Тезисы докл. респ. научн. произвол, конф. Казань. 1996. С. 202.

13. Ахметов Т.М. Изучение хозяйственно полезных признаков продуктивности коров с разными генотипами по локусу каппа - казеина // Современные технологические и селекционные аспекты развития животноводства России. Дубровицы. 2005. С. 174 - 177.

14. Ахметов Т.М., Вафин P.P. Продуктивные признаки помесных холмогор-голштинских первотелок с разными генотипами по локусу гена каппа-казеина // Селекция, кормление, содержание с.-х. животных и технология производства продуктов животноводства. Лесные Поляны. 2005. Вып. 18. С. 3 -8.

15. Ахметов Т.М., Тюлькин C.B., Зарипов О.Г. Полиморфизм гена бетта-лактоглобулин в стадх крупного рогатого скота // КГАВМ. 2009. С. 36 - 41.

16. Бадагуева Ю.Н., Сулимова Г.Е., Удина И.Г. Исследование полиморфизма гена каппа-казеина у крупного рогатого скота и родственных видов // Молекулярно-генетические маркеры животных: Тез. докл. II международной конф. Киев. 1996. С. 5.

17. Барабанщиков Н.В. Молочное дело / М.: Агропромиздат. 1990. С. 245.

18. Барабанщиков Н.В., Космынин Е.Г. Молоко коров, выращенных на комплексе, как сырье для сыроделия // Материалы конференции «Современная технология сыроделия и безотходная переработка молока». 1989. С. 93 - 94.

19. Баршинова A.B. Полиморфизм гена каппа-казеина и его связь с хозяйственно-полезными признаками скота красно-пестрой породы: автореф. дисс. ... канд. биол. наук : 06.02.01 / Баршинова Анна Вячеславовна. Лесные Поляны. 2005. 19 с.

20. Бурый скот России / И.М. Дунин, С.Н. Харитонов, А.Н. Ерммилов [и др.] // М.: 1998 г.

21. Введение в молекулярную генную диагностику сельскохозяйственных животных / H.A. Зиновьева, Е.А. Гладырь, Л.К.Эрнст, Г.Брем // Дубровицы. ВИЖ. 2002. 112 с.

22. Влияние полиморфизма гена каппа-казеина на признаки продуктивности коров красно-пестрой породы / М. Алипанах, Г.В Родионов, Л.А. Калашникова, Ю.Б. Медведев // Материалы международной научно -практической конференции. Белоруссия, Минск. 2005. С. 68 - 69.

23. Галлямова А., Исламова С. Каппа-казеин - важный селекционный критерий в молочном скотоводстве // Молочное и мясное скотоводство. 2008. №2. С. 17- 18.

24. Генетический полиморфизм генов-кандидатов мраморности мяса и липидного метаболизма крупного рогатого скота / П.В. Ларионова, М. Гутчер, H.A. Зиновьева, Г. Брем // Современные технологические и селекционные аспекты развития животноводства России. Дубровицы. 2005. № 63. Т. 2. С. 164- 166.

25. Гладырь Е.А. ДНК-диагностика вариантов генов каппа-казеина и бета-лактоглобулина у крупного рогатого скота : автореф. дисс. ... канд. биол. наук : 03.00.23 / Гладырь Елена Андреевна. Дубровицы. 2001. 20 с.

26. Горбатова К.К. Химия и физика молока / Санкт-Петербург. ГИОРД. 2004. 156 с.

27. Горбатова К.К. Химия и физика белков молока / М.: Колос. 1993.

192с.

28. Горячева Т.С., Гончаренко Г. Генетические варианты к-казеина и пролактина в связи с молочной продуктивностью коров черно-пестрой породы // Сельскохозяйственная биология. 2010. №4. С. 51 - 54.

29. Губайдуллин Э. С. Совершенствование племенного дела и системы разведения молочного скота в Татарстане.: автореф. дисс. ... докт. с. - х. наук: 06.02.01 / Губайдуллин Экзам Саматович. Москва. 1997. 79 с.

30. Губайдуллин Э. С., Хаертдинов P.A. Голштинсий скот в Татарстане / Казань. 1995. 112 с.

31. Дедов И.И., Мельниченко Г. А., Романцова Т.И Синдром гиперпролактинемии // М.: 2004. 304 с.

32. Денисенко Е.А., Калашникова Л. А. Белковомолочность и технологические свойства молока коров с различными генотипами каппа-казеин // Сб. докл. сиб. науч. - практ. конф. Красноярск. 2006. С. 64 - 70.

33. ДНК полиморфизм гена BolA- DRB3 у крупного рогатого скота в связи с устойчивостью и восприимчивочтью к лейкозу / Г.Е. Сулимова, И.Г. Удина, Г.О. Шайхаев, И.А. Захаров // Генетика. 1995. Т.31. №9. С. 1294 - 1299.

34. ДНК-полиморфизм генов гормона роста и пролактина у ярославского и черно-пестрого скота в связи с молочной продуктивностью / С.Р. Хатами, O.E. Лазебный, В.Ф. Максименко, Г.Е. Сулимова // Генетика. 2005. 41(2). С.229 -236.

35. ДНК-технологии оценки сельскохозяйственных животных / Л.А. Калашникова, И.М. Дунин, В.И. Глазко [и др.] // ВНИИплем. 1999. 148 с.

36. Долматова И.Ю., Ильясов А.Г. Связь полиморфизма гена соматотропина крупного рогатого скота симментальской породы с продуктивностью // Зоотехния. 2008. №5. С. 6 - 8.

37. Дунин И.М., Прохоренко Д. Направление селекционно-племенной работы в молочном скотоводстве России // Молочное и мясное скотоводство. 1996. № 6/7. С. 2 - 5.

38. Дунин И. М. Использование голштинской породы для повышения продуктивности молочного скота России: автореф. дисс. ... докт. с.-х. наук: 06.02.01 / Дунин Иван Михайлович. М.: 1994. 61 с.

39. Дунин И. М., Переверзев Д.Б., Высоцкая В.М. Современное состояние и перспектива разведения и совершенствования холмогорской породы скота // Племенная работа с холмогорской породой скота. ВНИИплем. М.: 1994. С. 3-5.

40. Дунин И.М. Основные направления селекционно-племенной работы в молочном скотоводстве России // Сб. докл. сиб. науч.-практ. конф. Красноярск. 2006. С. 3-8.

41. Дунин И.М., Аджибеков И.М., Лозовая Г.С. Перспективы разведения красно-пестрой породы крупного рогатого скота в Российской <3> едерации // Зоотехния. 2011. № 12. С. 2 - 4.

42. Дьяченко П.Ф. Исследование белков молока // Труды ВКСИСМИ. М.: Пищепромиздат. 1959. Вып. 19.

43. Жебровский Л.С. Селекционное-генетические основы белкового состава молока коров// М.: Колос. 1973. 248 с.

44. Жебровский Л.С., Бабуков A.B., Митютько В.Е. Связь полиморфных белков с продуктивностью черно-пестрого скота // Животноводство. 1977. №7. С. 25-27.

45. Зеленков П., Зеленков А., Зеленкова А. Теоретические и методические подходы к оценке бычков по собственной продуктивности и быков по качеству потомства в мясном скотоводстве // Вестншс мясного скотоводства. 2009. С.3.

46. Зиновьева H.A. Генетическая оценка в племенном животноводстве // Материалы международной научной конференции «Современные методы генетики и селекции в животноводстве». СПб. ВНИИГРЖ. 2007. С. 34-36.

47. Зиновьева H.A. Животноводство - XXI века // Сб. научи, тр. ВИЖ. Дубровицы. 2003. Вып. 61. Т 1. С. 218 - 224.

48. Зиновьева H.A., Гладырь Е.А. Перспективы использования молекулярной генной диагностики сельскохозяйственной животных // Сб. научн. докладов. ВИЖ. Дубровицы. 1999. № 61. С. 44 - 49.

49. Иолчиев Б.С. К методике качественного и количественного определения фракций белков // Новое в селекции сельскохозяйственных животных: Сб. научн. трудов. ВИЖ. Дубровицы. 1993. №.56. С. 122 - 128.

50. Иолчиев Б.С., Сельцов В.И. Взаимосвязь системы каппа.—казеина с молочной продуктивностью коров//Зоотехния. 1999. №6. С.4 - 5.

51 .Использование метода полимеразной цепной реахсхдии для генотипирования крупного рогатого скота по каппа-казеину / Т. М. Ахметов [и

др.] // Современные проблемы аграрной науки и пути их решения. Ижевская ГСХА. 2005. С. 228 - 231.

52. Использование методов маркер-вспомогательной селекции для повышения продуктивности сельскохозяйственных животных / Т.М. Ахметов [и др.] // Материалы Всероссийской научно-практической конференции, посвященной 85-летию ТатНИИСХ и 1000 - летию Казани. Казань. 2005. С. 467 -470.

53.Использование полиморфизма ДНК и генов в селекции сельскохозяйственных животных / А.Ф. Яковлев, В.П. Терлецкий, В.И Тыщенко, Н. В. Дементьева и др. // Материалы международной научной конференции «Современные методы генетики и селекции в животноводстве». СПб.ВНИИГРЖ. 2007. С. 18-22.

54. Исследование полиморфизма некоторых генетических маркеров мраморности мяса и липидного обмена крупного рогатого скота методом пиросеквенирования / П.В. Ларионова, М. Гутчер, H.A. Зиновьева, Г.Брем II Новые методы генодиагностики и генотерапии: современное состояние и перспективы использования в сохранении генофонда сельскохозяйственных животных. Дубровицы. 2005. С. 100 - 108.

55. Калашникова Л.А., Труфанов В.Г. Влияние генотипа каппа-казеина -на молочную продуктивность и технологические свойства молока коров холмогорской породы // Доклады РАСХН. 2006. № 4. С. 43 - 44.

56. Кириленко С.Д., Глазко В.И. Идентификация генотипов по каппа-казеину и BLAD мутации с использованием полимеразной цепной реакции у крупного рогатого скота // Цитология и генетика. 1995. № 6. С. 60 - 62.

57. Кугенев П.В., Барабанщиков Н.В. Практикум по молочному делу // М.: Агропромиздат. 1988. 224 с.

58. Кузнецов В.М. Возможность селекции и BLUP - оценка быков по жизнеспособности // Вестник РАСХН. 2008. № 2. С. 79 - 82.

59. Кузнецов В.М. Методы племенной оценки животных с введением в теорию BLUP // Киров: Зональный НИИСХ Северо-Востока. 2003. 358 с.

60. Кузнецов В.М. Основы научных исследований в животноводстве // Киров: Зональный НИИСХ Северо-Востока. 2006. 568 с.

61. Лазебная И.В., Лазебный O.E., Сулимова Г.Е. Исследование генетической изменчивости крупного рогатого скота якутской породы (Bos taurus) с использованием генов пролактина (PRL), гормона роста (GH) и транскрипционного фактора (PitI) // Сборник материалов международной конференции. М.: Товарищество научных изданий КМК. 2007. С. 145 - 151.

62. Максименко В.Ф. Новые системы молекулярно-генетического маркирования генома ярославской породы скота // Селекционные и технологические основы повышения продуктивности с.-х. животных. Ярославль. 2005. 4.2. С. 29 - 33.

63. Меркурьева Е.К. Биометрия в животноводстве / М.: Колос. 1977.

311с.

64. Методические рекомендации по использованию новейших достижений ДНК-технологий в селекционно-племенной работе, направленной на улучшение технологических свойств молока / Т.М. Ахметов [и др.] // Казань. Изд. Центр инновац. технолог. 2007. 27 с.

65. Методические рекомендации по определению вариантов каппа-казеина и бета-лактоглобулина крупного рогатого скота методом ПЦР-ПДРФ анализа / Е.А. Гладырь [и др.] // Современные достижения и проблемы биотехнологии сельскохозяйственных животных. Дубровицы. 2001. 14 с.

66. Митюков A.C. Генетическая обусловленность внутрипородных качественных вариаций полиморфных систем белков молока : автореф. дисс. ... канд. биол. наук : 06.02.01 / Митюков Александр Сергеевич. Пушкин. 1974Л5 с.

67. Молекулярная клиническая диагностика. Методы / Под ред. С.Херрингтона, Дж. Макги, пер. с англ. М.: Мир, 1999. 558 с.

68. Особенности распределения частот аллелей генов каппа-казеина, пролактина, гормона роста и BoLA-DRB3 у красной горбатовской породы в связи с устойчивостью к заболеваниям и продуктивностью / С.О. Туркова, И.Г.

Удина, Ю.А. Столповский, Г.Е. Сулимова // Памяти Грегора Менделя. М.: МСХА. 2001. 141 с.

69. Полиморфизм гена пролактина (микросаттелиты, ПЦР-ПДРФ) у крупного рогатого скота / И.Г. Удина, С.О. Туркова, М.В. Костюченко, [и.др.] // Генетика. 2001. №4 (37). С. 511 - 516.

70. Применение ДНК-диагностики для анализа генов-кандидатов локусов количественных признаков с.-х. животных / H.A. Зиновьева [и др.] // Научные труды ВИЖ. Дубровицы. 2001. №61. С. 218-224.

71. Программа совершенствования пород молочного скота в Татарстане / Э. С. Губайдуллин [ и др.] // Казань. 1995. 158 с.

72. Продуктивность черно-пестрых первотелок с разными генотипами по бета-лактоглобулину / А.Ш. Тинаев, JI.A. Калашникова, К.К. Аджибеков, И. А. Павлова//Молочное и мясное скотоводство. 2006. №3. С. 11-13.

73. Развитие племенного молочного скотоводства в Татарстане / М.Г. Нурдинов, H.H. Хазипов, P.A. Хаертдинов, [и др.] // Казань. Центр инновационных технологий. 2006. С. 4 - 12.

74. Разработка систем анализа и изучение полиморфизма некоторых ДНК-маркеров липидного обмена крупного рогатого скота / П.В. Ларионова, М. Гутчер, H.A. Зиновьева, Г.Брем // Биотехнология в мире животных и растений. Бишкек. 2005. С. 174 - 177.

75. Разработка способа высокоспецифичной ПЦР / Т. М. Ахметов [и др.] //Вестник КГАУ. 2006. №3. С. 33 - 37.

76. Скотоводство / Е.А. Арзуманян, А.П. Бегучев, A.A. Соловьев, Б.В. Фандеев. М.: Колос. 1978. 399 с.

77. Скрипниченко Г.Г. Популяционный анализ генетической структуры стад молочного скота по полиморфным системам белков и ферментов крови, молока в связи с селекцией на повышение молочной продуктивности: автореф. дисс. ... канд. биол. наук: 06.02.01. / Скрипниченко Г.Г . М.: 1975. 20с.

78. Состояние и современные подходы к созданию высокопродуктивного молочного скота в Республике Татарстан / М.Г. Нургалиев, И.Р. Закиров, P.A.

Хаердинов, И.Ф. Хусаинов. Слагаемые эффективного агробизнеса обобщение опыта и рекомендации. Казань. 2006. 108 с.

79. Сравнительный анализ генетических профилей свиней ливенской породы по ДНК маркерам / Н. А. Зиновьева [и.др.] // Свиноводство. 2007. №2. С. 5 - 9.

80. Стрекозов Н.И. Молочное скотоводство в России: настоящее и будущее // Зоотехния. 2008. №1.С. 18-21.

81. Стрекозов Н.И., Амерханов Х.А., Первов Н.Г. «Молочное скотоводство России». М.: ВИЖ, 2006. 57 с.

82. Стрекозов Н.И., Чернушенко В.К., Цысь В.И. Интенсификация молочного скотоводства России // Смоленск. 1997. С. 50 - 53.

83. Сулимова Г.Е. Полиморфизм длин рестрикционных фрагментов ДНК у сельскохозяйственных животных: методы изучения и перспективы использования // Успехи современной генетики. 1993. № 18. С. 3 - 35.

84. Сулимова Г.Е., Бадагуева Ю.Н., Удина И.Г. Полиморфизм гена каппа-казеина в популяциях подсемейства Bovinae // Генетика. 1996. Т. 32. №11. С. 1576- 1582.

85. Сулимова Г.Е., Шайхаев Г.О., Берберов Э.М. Генотипирование локуса каппа-казеина у крупного рогатого скота с помощью полимеразной цепной реакции // Генетика. 1991. Т. 27. №12. С. 2053 - 2062.

86. Сулимова Г.Е., Шайхаев Г.О., Захаров И.А., Шевченко В.Г. // Авторское свидетельство N.1659448 (на заявку No.4672018/30-13 (046112) от 31.03.1989). Бюл. N.24.

87. Тепел А. Химия и физика молока / Пер. с нем. М.: Пищевая промышленность. 1979. 623 с.

88. Технологические свойства молока коров разных генотипов по генам каппа-казеина, бета-лактоглобулина и альфа-лактальбумина / О.В. Костюнина, E.H. Хрипякова, Н.И. Стрекозов, H.A. Зиновьева // Материалы международной научной конференции «Современные достижения и проблемы биотехнологии с. - х. животных». Дубровицы. 2004. С. 60 - 67.

89. Тинаев А.Ш., Калашникова Л.А., Аджибеков К.К. Влияние генотипа каппа-казеина на молочную продуктивность и состав молока первотелок черно-пестрой породы // Современные достижения и проблемы биотехнологии сельскохозяйственных животных. Дубровицы. 2003. С. 140 - 141.

90. Тинаев, А.Ш., Калашникова Л.А. Хозяйственно-полезные признаки черно-пестрого скота с разными генотипами каппа-казеина // Молочное и мясное скотоводство. 2005. №5. С. 30 - 32.

91. Томме А. А. Генетический полиморфизм (3-LG и к-казеинов и возможности его использования в селекции пород крупного рогатого скота в Эстонской ССР: автореф., дис. ... канд. биол. наук.: 06.02.01 / Томме Арвидас Ахинатис. Тарту. 972. 27 с.

92. Труфанов В.Г., Глотова Г.Н. Использование методов ДНК-диагностики в селекции коров холмогорской породы // Зоотехния. 2006. №9. С. 10-11.

93. Федотова Н.В., Лозовая Г.С. Влияние генотипов бета-лактоглобулинана показатели молочной продуктивности чёрно-пёстрых коров в родственных группах // Зоотехния. 2011. №3. С. 167 - 169.

94. Хабибрахманова Я.А. Полиморфизм генов молочных белков и гормонов крупного рогатого скота : автореф. дисс. ... канд. биол. наук: 06.02.01 // Хабибрахманова Язиля Аминовна. Лесные Поляны. 2009. 19 с.

95. Хаертдинов Р. А., Афанасьев P.A. Сыродельческие свойства молока в зависимости от генотипа коров по бета-казеину // Молочное и мясное скотоводство. 1997. № 3. С. 30 - 34.

96. Хаертдинов P.A. Содержание белков в молоке коров бестужевской породы с различными генотипами по альфа-Sl, бета каппа-казеинам и бета-лактоглобулину // Сельскохозяйственная биология. 1988. №5. С. 71 - 75.

97. Хаертдинов P.A., Афанасьев М.П., Губайдуллин Э.С. Содержание белковых фракций и влияние их уровня на технологические свойства молока // Молочное и мясное скотоводство. 1997. № 5. С. 17.

98. Хаертдинов P.A., Афанасьев М.П., Хаертдинов P.P. Белки молока. Казань: Издательство «Идел - Пресс», 2009. 256 с.

99. Хазипов Н.З., Аскорова А.Н. Биохимия животных / Казань, 2001.

307 с.

100. Характеристика быков-производителей с различными комбинациями генотипом каппа-казеина, бета-лактоглобулина по молочной продуктивности их матерей / Э.Ф. Валиуллина, О.Г. Зарипов, C.B. Тюлькин [и.др.] // Ветеринарная Практика . 2007. №4 (39). С. 59 - 63.

102. Харзинова В.Р., Зиновьева H.A. Изучение полиморфизма гена DGAT1 у коров черно-пестрой породы и его связи с признаками молочной продуктивности // Сборник материалов научной конференции «Достижения в генетике, селекции и воспроизводстве сельскохозяйственных животных», 9-11 июня. 2010. С. 19-22.

103. Харзинова В.Р., Зиновьева H.A., Гладырь Е.А. Полиморфизм ДНК-маркеров DGAT1, TG5 и GH в связи с линейной принадлежностью и уровнем молочной продуктивности коров черно-пестрой породы // Проблемы биологии продуктивных животных. 2011. № 1. С. 73 - 77.

104. Холмогорский скот и его совершенствование в Татарстане / P.A. Хаертдинов [и др.]. Казань: Издательство «Матбугат йорты», 2000. 120 с.

105. Юхманова H.A., Калашниклва JI.A. Влияние генетических вариантов каппа-казеина на технологические свойства молока и состав сыра скота красно-пестрой породы // В сб.: «Селекция, ветеринария, генетика и экология», г. Новосибирск. 2003. С. 258-259.

106. Юхманова H.A., Калашникова JI.A. Качественные показатели молока коров-первотелок красно-пестрой породы с разными генотипами по каппа-казеину // В сб.: «Современные достижения и проблемы биотехнологии сельскохозяйственных животных», п. Дубровицы. 2003. С. 152 - 153.

107. Яковлев А. Ф., Смарагдов М.Г. Значительное повышение точности оценки племенной ценности животных в молочном скотоводстве // Зоотехния. 2011. №5. С. 2-4.

108. A genome scan for QTL influencingmilk production in dairy cattle / Heyen D.W., Weller J.I., Ron M. [et.al.] // Physiological Genomics . 1999. V. l.P. 165 - 175.

109. A polymorphisms amplified by arbitraryprimers is useful as genetic markers / I.G. Williams, A.R. Kubelik, K.I. Livak [et.al.] // NucleicAcidsRes. 1990. V.18. № 22. P. 6531 -6535.

110. Aaltonen M., Antila V. Milk rennet properties and the genetic variants of proteins // Milchwissenchaft. 1987. V.42 . 8. P.490 - 492.

111. Ailhaud G., P. Grimaldi, R. Negrel. 1992. Cellular and molecular aspects of adipose tissue development / An. Rev. Nutr. V. 12. P. 207 - 233.

112. Alipanah M., Kalashnikova L.A., Rodionov G.V. Polimorphism Prolactin Loci in Russian Cattle // J. of Anim and Vet. Advances. 2007. V. 6(6). P. 813-815.

113. Alipanah ML, Alexandravna K, Veladimirovich RG // Kappa-casein and PRL-Rsal Genotypic Frequencies in two Russian Cattle Breeds. Arch. Zootec. 2008. V. 57(218). P. 131-138.

114. Allelic frequency of kappa-casein and beta-lactoglobulin in Indian croossbred (Bos Taurus x Bos indicus) dairy buuls / R.K. Patel, J.B. Chauhan, K.M. Singa// Turk. J.Vet.Anim.Sci. 2007. № 31(6). P. 399 - 402.

115. Alvarest E.O., Banzan A.M. Behavioral actions of prolactin locally applied into the hyppo campus of adult female rats // J.Neural Transm. 1994. V59. P. 409-416.

116. Amonrat M., Natthaya D., Pongchan N. Effects of Acyl-CoArdiacylglycerol acyl transferase 1 (DGAT1) gene on milk production traits in crossbred Holstein dairy cattle. Tropical Animal Health and Production2012. Volume 44, Issue 4, 751 -755.

117. Amplification of DNA markers from evolutionarily diverse genomes using single primers of SSRs / Gupta M., Chyi Y.S., Romero-Severson J. [et.al.] // Theor.Apl.Genet. 1994. V.89. P. 998 - 1006.

118. An evaluation of genetic distances for use with microsatellite loci / Goldstein D.B., Linares A.R., Cavalli-Sforza L.L. [et.al.] // Genetics .1995. V. 139. P. 463-471.

119. Antibiotic resistance in food / Olson M., Hood L., Carton C. [et.al.] // Science. 1989. V. 245. №.25. P. 1434.

120. Arave C.W. Procedure for simultaneons phenoting of beta-lactoglobulin variants in cows milk // J. Dairy Sci. 1967. V. 50. №8. P. 395 - 401.

121. Arber W. Promotion and limitation of genetic exchange // Science. 1979. V. 205.1. P. 361 -365.

122. Aschaffenburg R., Drewry J. Occurrence of different beta-lactoglobulins in cow's milk//Nature. 1955. V.176. P. 218-219.

123. Assessing genetic diversity in indigenous Veneto chicken breeds using AFLP markers / De Marchi M., Dalvit C., Targhetta C. [et.al.] // Animal Genetics. 2006. V. 37. P. 101 - 105.

124. Association of a lysine - 232/alanine polymorphism in a bovine gene encoding diacylglycerol acyltransferase (DGAT) with variation at a quantitative trait locus for on milk fat content in cattle / A. Winter, W. Kramer, F. Werner [et.al.] // Proceedings of the National Academy of Sciences. 2002. V. 99. P. 93 00 - 9305.

125. Association of Beta-lactoglobulin Polymorphism with Milk Production Traits in Cattle Animal Genetics Division / Badola S., Bhattacharya T. K, Biswas T. K. [et.al.] // Indian Veterinary Research Institute, Izatnagar, Bareilly, 2009.V. 4. P. 243 - 122.

126. Association of DNA polymorphisms of the growth hormone and Prolactin genes with productivity in Yaroslavl and Black and White cattle / Khatami S.R, Lazebny O.E, Maksimenko V.F. [etal.] // Russian J Genet. 2005. V. 41. P. 167 -173.

127. Association of genetic variants of bovine prolactin with milk production traits of Black and White and Jersey cattle / Dybus A, Grzesiak W, Kamieniecki H. [et.al.] // Agriculture University of Szcecin, Departament of Rumiants Science, Poland. Arch. Tierz., Dummersstorf. 2005. V.48(2). P. 149 - 156.

128. Associations between prolactin gene polymorphism and milk production in montebeliard cows / Ghasemi N, Zadehrahmani M, Rahimi G. [et.al.] // Genetic Department, Safayeh, Bouali Street, Research and Clinical Centre for Infertility, Yazd Shahid Sadoughi Medical Sciences University, Yazd, Iran. Int. J. Genet. Mol. Biol. 2009. V. 1(3). P. 048 - 051.

129. Avise J.C. Molecular markers, natural history and evolution. Chapman and HALL: An International Thomson Publishing Company, 1994. 122 p.

130. Beckmann J. S., Soller, M. A genetic linkage map for cattle // Euphitica. 1986. V. 35. № 1. P. 111.

131. Beckmann J. S., Soller, M. DNA fingerprints from hyper variable mitochondrial genotypes // Theoret. Appl. Genet. 1983. V.67. P. 35.

132. Bell J.I., Todd J.A., MeDevite H.O. The molecular basis of HLA - disease association // In: Advances in human denetics (ed. By H. Harris, K. Hirschorn). N.Y. and L: Plenum press. 1989. V. 18. Ch.l. P. 1 - 42.

133. Ben - Jonathan N., Arbogast L. A., Hyde J.F. Neuroendocrine regulation of prolactin relase // Prog. Nerobiol. 1989 V. 33 P.399 - 447.

134. Berry D.P., Howard D., Boyle P.O., Waters S., Kearney J.F., M. McCabe Irish Jornal of Agricultural and food Research 49: 1 - 9, 2010.

135. Bosze Z., Dohy J. Improvement of the quality of milk protein by new biotechnological methods // Hungarian Agricultural Research. 1993. V. 2. №. 1. P. 26 -29.

135. Bovenhuis H., Van Harendonk J.A.M. Estimation of milk protein gene frequencies in crossbred cattle by maximum likelihood // J. Diary Sci.1991. V. 74. P. 2728 - 2736.

136. Brookes A.J. The essence of SNPs. // Gene. 1999. V.234. №.2. P. 177.

137. Brym P, Kamicski S, Wyjcik E. Nucleotide sequence polymorphism within exon 4 of the bovine prolactin gene and its associations with milk performance traits. Department of Animal Genetics, University of Warmia and Mazury, Olsztyn, Poland. J. Appl. Genet. 2005. V. 45(2). P. 179 - 185.

138. Caetano - Anolles G., Bassam B.J., Gressho P.M. DNA amplification fingerprinting using very short arbitrary oligonucleotide primers // Biotechnology. (N Y).1991. V.9. №6. P. 553 - 557.

139. Celic. S. P-Lactoglobulin genetic variants in Brown Swiss breed and its association with compositional properties and rennet clotting time of milk // International dairy journal. 2003. V. 13. №9. P. 727 - 731.

140. Characterization of beta - thalassaemia mutations using direct genomic sequencing of amplified single copy DNA / C. Wong, C.E. Dowling, R.K. Saiki [et.al.] //Nature. 2008. V. 330(6146). P. 384 - 386.

141. Characterization of the DGAT1 gene in New Zealand dairy population / R.J. Spelman, C.A. Ford, P. McElhinney [et.al] / Journal Dairy Science . 2002. V. 85. P. 3514- 3517.

142. Chen J., Hebert P. // Directed termination PCR: a one-step approach to mutation detection. Nucleic Acids Research. 1998. V. 26. P. 1546 - 1547.

143. Chen X, Sullivan PF. Single nucleotide polymorphism genotyping: biochemistry, protocol, cost and throughput. Pharmacogenomics J. 2003. V. 3(2). P. 77 - 96.

144. Chung E.R, Rhim T.J, Han S.K / Associations Between Pcr-Rflp Markers Of Growth Hormone And Prolactin Genes And Production Traits In Dairy Cattle. Korean J. Anim. Sci. 1996. V. 38. P. 321 - 336.

145. Cloning of DGAT2, a second mammalian diacylglycerol-acyltransferase, and related family members / Cases S., Stone S.J., Zhou P/ [et.al.] // Journal of Biological Chemistry.2001. V. 276. P. 3870 - 3876.

146. Construction of genetic linkage map in man using restriction fragment length polymorphism / Botstein D., White R.L., Skolnik M. [et.al.] // Am. J. Genet. 1980. V. 32. P. 314-331.

147. Cowan C. M., Dentine M.R., Coule T. Chromosome substitution effects associated with k-casein and P-lactoglobulin in Holstein cattle. Genetics and Breeding//J. Dairy Sci. 1992. V. 75. №4. P. 1097 - 1104.

148. Cowan C.M., Dentine M.R., Ax R.L. Structural variation around prolactin gene linked to quantitative traits in an elite Holstein sire family // Theor. Appl. Genet. 1990. V.79. P. 577 - 582.

149.Crow JF. Spontaneous mutation as a risk factor. Exp Clin Immunogenet. 1995. V. 12(3). P. 121 - 128.

150. Darewics M., Dziuba J. The structure of milk proteins versus their functional properties / 2005. V.2 (43). P. 47 - 60.

151. Déterminisme genetique des caseines du lait de vache; étroit liaison du locus K-Cn avec les loci as-Cn et ß-Cn / Grosclaude F., Pujolle J., Gamier J. [et.al.] // Comptes-rendus de l'Academie des Sciences (Paris). 1965. V.261. P. 5229 - 5232.

152. DGAT1 K232A quantitative trait nucleotide polymorphism in Polish Black-and-White cattle / Pareek C.S., Czarnik U., Zabolewicz T. [et.al.] // Journal of Applied Genetics. 2005. V. 46. P. 85 - 87.

153. DNA marker test for marbling capacity in Australian feedlot cattle / Barendse W., R. Bunch M. Thomas S. [et.al.] // Proc. Beef Quality CRC Marbling Symp. 2001. P. 52- 57.

154. Dybus A. Association of growth hormone (GH) and Prolactin (PRL) genes polymorphism with milk production trait in Polish Black and White cattle / Anim Sei Paper and Report. 2001. V. 20. P. 203 -212.

155. Effect of Kappa-Casein and Beta-Lactoblobulin Loci on Milk Production Traits and Reproductive Performance of Holstein Cows / A. M. Tsiaras, G.G. Bargouli, G. Banos [et al.] // J. Dairy Sei. 2005. № 88. P. 327 - 334.

156. Effects of DGAT1 variants on milk production traits in Jersey cattle / J. Komisarek, K. Wattkowicz, A. Michalak [et.al.] // Institute of Genetics and Animal Breeding, Jastrzicbiec, Poland Animal Science Papers and Reports. 2004. V. 22. № 3. P. 307-313

157. Enzymatic amplification of ß-lactoglobulin genomic sequences and restriction site anaiysis for diagnosis of sickle cell anemia / R.K. Saiki, F. Sharf, F. Faloona, [et. al.] // Ibid. 1985. V. 230. P. 1350 - 1354.

158. Erhard G. Detection of a new K-casein variant in milk of Pinzgauer cattle / G. Erhardt // Animal Genetics. 1996. V. 27. P. 105 - 107.

159. Erhardt G. Kappa-kasein in bovine milk. Evidence of a further allele (kappa-casein E) in different breeds // J. Animal Breeding and Genetics. 1989. V. 106. P. 225-231.

160. Exclusion probabilities of 22 bovine microsatellite markers in fluorescent multiplexes for semiautomated parentage testing / Heyen D.W., Beever J.E., Da Y. [et.al.] // Animal Genetics. 1997. V. 28. P. 21 - 27.

161. Expression of new members of the prolactin growth hormone gene family in bovine placenta: Isolation and characterization of two prolactin-like cDNA clones. M. Yamakawa, M. Tanakava, Ko Yama M [et.al.] // J. Biol. Chem. 1990. V. 265. P. 8915 - 8920.

162. Fang D.Q., C.T. Federici, M.L. Roose Ahigh resolution linkage map of the citrus tristezavirus resistance gene region in Poncirus trifoliate // Raf. Genetics. 1998. V. 150. P. 883-890.

163. Farese R.V., Cases S., Smoth S.J. Triglyceride synthesis: insights from the cloning of diacylglycerol acyltransferase // Current Opinion in Lipidology. 2000. V. 11. P. 229-234.

164. Ferretti L., Leone P., Sgaramella V. Long range restriction analysis of the bovine casein genes //Nud. Acids Res. 1990. V. 18. P. 6829 - 6833.

165. Fine mapping of quantitative trait loci and assessment of positional candidate genes for backfat on bovine chromosome 14 in a commercial line of Bos Taurus / Moore S.S., Li C., Basarab J. [et.al.] // Journal of Animal Science. 2003. V. 81. P. 1919- 1925.

166. Fischer SG, Lerman LS. DNA fragments differing by single base-pair substitutions are separated in denaturing gradient gels: correspondence with melting theory // Proc Natl Acad Sci USA. 1983. V. 80(6). P. 1579 - 1583.

167. Flower D. R., A. C. North, C. E. Sansom The lipocalin protein family: structural and sequence overview // Biochim. Biophys. Acta 2000. V. 1482. P. 9 - 24.

168. Frank G., Braunozer G., Milchwissenschaft. 1967. V. 20. P. 361 - 365.

169.Frequency and effect of the bovine acyl-CoA:diacylglycerol acyltransferase 1 (DGAT1) K232A polymorphism in Swedish dairy cattle / Naslund J., Fikse W.F., Pielberg G.R. [et.al.] // Journal Dairy Science. 2008. V. 91 (5). P. 2127-2134.

170. Genetic distances within andacross cattle breeds as indicated by biallelic AFLPmarkers. Animal Genetics / Ajmone-Marsan P., Negrini R., Milanesi E. [et.al.]// 2002. V.33. P. 280 - 286.

171. Genetic relationships among linear type traits, milk yield, body weight, fertility and somatic cell count in primiparous dairy cows / Berry D.P., Buckley, F., Dillon, P.G. [et.al.] // Irish Journal of Agricultural and Food Research. 2004. V. 43. P. 161 - 176.

172. Genotype and Allele Frequencies of DGAT 1 Gene in Indian Holstein Bulls / R. K. Patel, J. B. Chauhan, K. J. Soni [et.al.] // Current Trendsin Biotechnology and Pharmacy. 2009. V. 3. №4. P. 234 - 237.

173. Graml R. Zuchtung auf Kasereitauglichtkeit der milch // Zuchtungskunde. 1988. V.60.P.11 - 23.

174. Gravert H.O. Genomanalyse und Michgualitat // Schriftenr. D. Agrarwiss. Fakultat der Univ. Kiel. 1990. V.72. P. 147 - 154.

175. http://www.ncbi.nlm.nih.gov/dbEST/).

176. Identification of a gene encoding an acyl CoA:diacylglycerol acyltransferase, a key enzyme in triacylglycerol synthesis / Cases S., Smith S.J., Zheng Y.W. [et.al.] // Proc Natl Acad Sci U S A . 1998. V. 95 (22). P. 13018.

177. Identity by decent fine-mapping of QTL in outbred populations: Application to milk production in dairy cattle / J. Riquet, W. Coppieters, N. Combisano [et.al.] // Proceedings of the National Academy of Sciences, USA. 1996. P. 9252 - 9257.

178. Impact of single nucleotide polymorphisms in leptin,leptin receptor, growth hormone receptor, and diacylglycerol acyltransferase (DGAT1) gene loci on milk production, feed, and body energy traits of UK dairy cows / Banos G.,

Woolliams J.A., Woodward B.W. [et.al.] // Journal Dairy Science. 2008. V. 91. P. 3190-3200.

179. Irzykowska L., Wolko B., H>wkcicki W.K. The genetic linkage map of pea (Pisum sativum L.) based on molecular, biochemical and morphological markers // Pisum Genetics. 2001. V. 33. P. 13-18.

180. Isolation and characterization of the bovine k-kazeine gene / L.J Alexander, A.F Stewart, A.G Mackinlay [et.al.] // European Journal of biochemistry. 1988. V.178. P. 395 - 401.

182. Jarne P., Lagoda P.J.L. Microsatellites, from molecules to populations and back. Tree. 1996. V. 11. P. 424 - 429..

183. Jensen R.G. The composition of bovine milk lipids: January 1995 to December 2000 // Journal of Dairy Science . 2002. V. 85. P. 295 - 350.

184. Lehner R R., Kuksis A. Biosynthesis of triacylglycerols // Progress in Lipid Research. 1996. V. 35. P. 169 - 201.

185. Liberatoti J. p - lactoglobulins. Chemikal and structural studies // Folia Vet. Lat. 1977. V.7. P. 205 - 222.

186. Localization des substitutions d'ecides amines differenciant les voriants A et B de la caseine bovine / F. Grosclaude, M.F. Mahe, J.C. Mercier .[et.al.] // Ann. Genet. Sel. Anim. 1972. V.52. P. 515 - 521.

187. Mapping quantitative trait loci controlling milk production in dairy cattle by exploiting progeny testing / Georges M., D. Nielsen M. Mackinnon A. [et.al.] // Genetics. 1995. V. 139. P. 907 - 920.

188. Martin P., Grosclaude F., Improvtmtnt of milk protein quality by tehnology// Live. Prod. Scie. 1993. V. 35. P. 95 - 115.

189. Marziali A., Ng-Kwai-Hang K. Effects of milk composition and genetic polymorphism on cheese composition // J. Dairy Sci. 1986. V. 69. P. 2533 - 2542.

190. Maurer R.A. Transcriptional regulation of prolactin synthesis and prolactin messenger RNA accumulation in cultured pituritary cells // nature. 1981. V. 294. P. 94 - 97.

191. McKenzie H.A., Wake R.G. An improved method for the isolation of k -casein//Biochem. Biophis. Acta. 196.1. V. 47. P. 1971.

192. Medrano J.F. Genotyping of bovine kappa-casein loci followinq DNA sequence amplification / J.F. Medrano, E. Aguilar-Cordova // Biotechnoloqy. 1990. V. 8. P. 45 -48.

193. Mellander O. Electrophoretische Untersuchungen von Casein // Boichem. Z. 1939. P. 300

194. Mercier J.C., Chobert J.M., Addeo F. Comparative study of the amino acid sequences of the caseino macropeptides // Animal genetics. 1990. V. 21. P. 215 -216.

195. Mercier J.C., Grosclaude F-, Ribadean-Dumas B. Structure primire de la caseino alpha SI bovine // Sequence Complete. Eur. J. Biochem. 1972. V. 23. P. 41 -51.

196. Molecular cloning and analysis of bovine prolactin full-long genomic as well as cDNA sequences / Cao X, Wang Q., Yan J. [et.al.] // Yi Chuan Xue Bao. 2002. V.29. № 9. P. 768 - 73.

197. Morrisc C. Animal Genetiks. 2006, V.37. P. 411 - 414.

198. Neelin J.M. Variants of k-casein revealed by improved starch gel electrophoresis // Journal of Dairy Science. 1964. V. 47. P. 506 - 510.

199. Nevalainen M.T., Valve E.M., Ingleton P.M., Harkonen P.L. Experession and hormone regulation of prolactin reseptors in the rat dorsal and lateral prostate // Endocrinology. 1996. V.137. P. 3078 - 3088.

200. Neve G, Meglecz E. Microsatellite frequencies in different taxa. Trends Ecol. Evol. 2000. V.15. P. 376 - 377.

201. Nomenclature of proteins of cow's milk: fifth revision / Eigel W.N., Butler J.E., Ernstrom C.A. [et al.] // Journal of Dairy Science. 1984. V.67. P. 1599 -1631.

202. Obesity resistance and multiple mechanisms of triglyceride synthesis in mice lacking Dgat / S.J. Smith, S. Cases, D.R. Jensen [et.al.] // Nature Genetics. 2000. V. 25. P. 87 - 90.

203. Oxytocin and milk removal are required for post-partum mammary-gland development / K.U. Wagner, W.S. Young, X. Liu [et al.] // Genes Funct. 1997. V.l. P. 233 - 244.

204. Palmer A. The preparation of crystalline globulin from the albumin fraction of cow's milk // J. Biol. Chem. 1934. V. 104. P. 359.

205. Pleiotropic effects of ß-lactoglobulin and casein genotypes on milk composition of Simmentals and German Browns in Bavaria.Z. Tierz / Graml V., Buchberger J., Klostermeyer H. [et.al.] // Zuechtungsbiol. 1985. V. 102. P. 355.

206. Polymorphism of the prolactin gene (PRL) and its relationship with milk production in American Swiss cattle / Alfonso E., Rojas R., Herrera Josh G/ [et.al.] // African Journal of Biotechnology. 2012. V. 11(29). P. 7338 - 7343.

207. Polymorphisms alel mlecnych bilkovin u skotu a slechteni na kvalitu mlecne bilkoviny / M. Jandurova, M. Stipkovä, B. Kottovä [et.al.] // Nas chov. 2002. V.8. P.27 - 30.

208. Population-wide analysis of a QTL affecting milk-fat production in the Israeli Holstein population / J. I. Weller, M. Golik, E. Seroussi E. [et.al.] // Journal Dairy Science. 2003. V. 86. P. 2219 - 2227.

209. Positional candidate cloning of a QTL in dairy cattle: identification of a missense mutation in the bovine DGAT1 gene with major effect on milk yield and composition / Grisart B., Coppieters W., Farnir F. [et.al.] // Genome Research. 2002. V. 12(2). P. 222-231.

210. Potteer L.M., Shelton J.R., McCarthy J.P. Lysine and protein requirements of growing turkeys // Poult. Sei. 1981. V. 60. P. 2678 - 2686.

211. Primer-directed enzymatic amplification of DNA with a thermostable DNA Polymerase / R. K. Saiki, P. H. Gelfand, S. Staffel [et al.] // Science. 1988. V. 239. P. 487 - 491.

212. Prolactin and its receptor: actions, signal transduction pathways and phenotypes observed in receptor prolactin knockout mice / Bole-Feysot C., Goffin V., Edery M. [et.al.] // Endocr. Rev. 1998. V. 19. P. 225 - 268.

213. Prolactin receptor expression in human hematopoietic tissues analyzed by flow cytofluorometry / Dardenne M., de-Moraes M. do C., Kelly R.A. [et.al.] // Endocrinology. 1994. V.134. P. 2108 - 2114.

214. Pupkova, G.V. Milk protein polymorphism and milk production of Estonian Black Pied cows//Dairy Sci. 1980. №45. P. 6620.

215. QTL with major effect on milk yield and composition maps to bovine Chromosome 14 / Coppieters, W., J. Riquet, J. J. Arranz. [et.al.] // Mamm. Genome. 1998. V.9. P. 540 -544.

216. Relationships between milk protein polymorphisms and major constituents in Holstein-Friesian cows / Ng-Kwai-Hang K.F., Hayes J., Moxley J. [et.al.] // J. Dairy Sci. 1986. V. 69. P. 22 - 26.

217. Richardson B.P. Evidence for a physiological role of prolactin in osmoregulation in the rat after it's inhibiton by 2 - bromoergokryptine // Br. J. Pharm. 1973. V.47 P. 623 - 624.

218. SanCristobal, M. Genetic diversity in European pigs utilizing amplified fragment length polymorphism markers. Animal Genetics. 2006. № 37. P. 232 - 238.

219. SanCristobal, M. Genetic diversity within and between European pig breeds using microsatellite markers. Animal Genetics. № 2006. № 37. P. 189 - 198.

220. Schaar J. Effects of k-casein genetic variants and lactation number on the renneting properties of individual milks // Journal of Dairy Research. 1984. V. 51. P. 397 - 406.

221. Schaar J., Hansson B., Pettersson H.E. Effects of genetic variants of k-casein and b-laktoglobulin on cheesmaking // Journal of Dairy Research. 1985. V. 52. P. 429 - 437.

222. Schlotterrer C. Demonstration of safety of probiotics a review // Nature Rev. Genet. 2004. V.5. № 1. P. 65 - 150.

223. Schmidt D.G. Starch gel electrophoresis of k-casein // Biochemica et Biophysica Acta. 1964. V. 90. P. 411 - 414.

224. Simultaneous analysis of bovine growth hormone and prolactin alleles by multiplex PCR and RFLP / Chrenek J., Vasicek D., Bauerovf M. [et.al.] // Czech J. Anim. Sci. 1998. V.43. P. 53 - 55.

225. Simultaneous mining of linkage and linkage disequilibrium to fine map quantitative trait loci in outbred half-sib pedigrees: revisting the location of a quantitative trait locus with major effect on milk production on bovine chromosome 14 / Farnir F., Riquet J., Coppieters W. [et.al.] // Genetics. 2002. V. 161. P. 275 -287.

226. Sinha Y.N. Structural variants of prolactin: occurrence and physiological significance // Endocr. Rev. 1995. V.16. P. 354 - 369.

227. Smaragdov M.G. Association of the DGAT1 gene polymorphism in bull with cow milk performance. Animal Genetics. 2011. № 47. P. 126 - 132.

228. Smaragdov M.G. Methods of molecular markers in breeding of economically valuable traits in cattle (Review) // Agricultural Biology. Ser. Biology of animals. 2005. № 6. P. 3 - 8.

229. Smas C. M., H. S. Sul Control of adipocyte differentiation / Biochem. J. 1995. №309. P. 697- 710.

230. SNP2CAPS: a SNP and INDEL analysis tool for CAPS marker development / T. Thiel, R. Kota, I. Grosse [et.al.] // Nucleic Acids Res. 2004. V. 32. P. 345 - 350.

231. SOCS 1 deficiency results in accelerated mammary gland development and rescues lactation in prolactin receptor deficient mice / Lindeman G.J., Wittlin S., LadaH. [et.al.] //Genes. Dev. 2001. V.15. P. 1631 - 1636.

232. Stasio L. Di. Studies on protein polymorphism in pig, horses and cattle Blood groups of animals // Proceedings 9 European animal blood group conference. Prague. 1979. P. 279 - 285.

233. Stralkowska N., Krzyzewski J, Zweirzchowski L. et al. // Anim. Sci. Papers and Reports. 2002. V.20 (1). P. 21 - 35.

234. Structural organization of the 5 region of the thyroglobulin gene. Evidence for intron loss and "exonization"during evolution / Parma J., Christophe D., Pohl V. [et.al.] // J. Mol. Biol. 1987. V.196. P. 769 - 779.

235. Swaisgood H.E. Characterisation of k - casein obtained by fractionation with trichloracetic acid in a concentrated urea solution // J. Dairy Sci. 1962. V.45. P.l.

236. Syvanen A.C. From gels to chips: "minisequencing" primer extension for analysis of point mutations and single nucleotide polymorphisms // Hum. Mutat. 1999. V. 13. P. 1 - 10.

237. Taha F., Puhan Z. Milk protein polymorphism in swiss dairy cattle // Agr. Sci. Finl. 1993. V.2. №5. P. 423 - 429.

238. Thaller G., Kramer W.,Winter A., Effects of DGAT1 variants on milk production traits in German cattle breeds. Journal of Animal Science. 2003. V. 81. P. 1911 -1918.

239. The economic breeding index: a generation on. Technical report to the Irish Cattle Breeding Federation / Berry D.P., Shalloo L., Cromie A.R. [et.al.] // 2007. http://www.icbf. com/publications/files/economic breeding index.pdf [Accessed 19th June 2009].

240. The relation of GH1, GHR and DGAT1 polymorphisms with estimated breeding values for milk production traits of German Holstein sires / HradeckG E, HHtek J, Panicke L,. [et.al.] // Czech J Anim Sci. 2008. V. 53. P. 238 - 245

241. The TG5 thyroglobulin gene test for a marbling quantitative trait loci evaluated in feedlot cattle / Barendse W., Bunch R., Thomas M. [et.al.] // Australian Journal of Experimental Agriculture. 2004. V. 44 (7). P. 669 - 674.

242. Using Gene Expression arrays to Elucidate Transcriptional Profilles Underlying Prolactin Function / Gass G., Harris J., Ormandy C. [et.al.] // Journal of Mammary Gland Biology and Neoplasia. 2003. V.8. P. 269 - 285.

243. Valeria F., Kovacs K., Zsolna A., 2009: Effect of milk production traits in Hungarian Simmental cows. Book and Abstracts of the 60th Annual Meeting of the

European Association for Animal Production barcelona Spain. 2009. № 15. P. 24 -27.

244. Van Eenennaam A., Medrano J.F. Differences in allelic protein expression in the milk of heterozygous k-casein cows // J. Dairy Sci. 1991. V. 74. P. 1491 -1496.

245. Vos P., Hogers R., Bleeker M. // Nucl. Acids Res. 1995. V. 23. N. 21. P.

4407.

246. Wagner K.U., Rui H. Stat 5 signaling in mammogenesis, breast cancer initiation and progression // Journal of Mammary Gland Biology and Neoplasia. 2008. V. 13. P. 93 - 103.

247. Warner R.C. Separation of a- and (3- casein // J. Amer. Schem. Soc. 1944. V. 66. P. 1725.

248. Waugh R., Powell W. Using RAPD markers for crop improvement // Trends Biotechnol. 1992. V. 10. P. 186 - 191.

249. Welsh J., McClelland M. Fingerprinting genomes using PCR with arbitrary primers // Nucleic Acids Res. 1990. V.18. № 24. P. 7213 - 7218.

250. Woychik J.H. Phenotyping k-casein // Journal of Dairy Science. 1965. V. 48. P. 496 - 497.

251. Zietkiewicz E., Rafalski A., Labuda D. Genome Fingerprinting by Simple Sequence Repeat (SSR)-Anchored Polymerase Chain Reaction Amplification // Genomics. 1994. V. 20. P. 176 - 183.

252. Zittle C.A., Custer J.H. Purification and some properties of as - casein in k-casein//J. Dairy Sci. 1963.V.46. P. 1183.

253. p - Lactoglobulin: Binding Properties, Structure, and Function / Kontopidis G., Holt C., Sawyer L. [et.al.] // Journal of Dairy Scince. 2004. V. 87. P. 785 - 796.

Ген/аллель Праймер JK5_

CSN3/A 001 ATCATTTATG GCCATTCCAC CAAAGAAAAA TCAGGATAAA ACAGAAATCC СТАССАТСАА

CSN3/B 001 ............................................................

********** ********** ********** ********** ********** **********

Ген/аллель

CSN3/A 061 TACCATTGCT AGTGGTGAGC CTACAAGTAC АССТАССАСС GAAGCAGTAG AGAGCACTGT

CSN3/B 061 ......................................Т.....................

********** ********** ********** ******** * ********** **********

Ген/аллель Hinfl .

CSN3/A 121 AGCTACTCTA GAAGATTCTC CAGAAGTTAT TGAGAGCCCA CCTGAGATCA ACACAGTCCA

CSN3/B 121 ..............С.............................................

********** **** ***** ********** ********** ********** **********

Ген/аллель

CSN3/A 181 AGTTACTTCA ACTGCAGTCT AAAAACTCTA AGGAGACATС AAAGAAGACA ACGCAGGTAA

CSN3/B 181 ...............G.......Т....................................

********** ***** **** *** ****** ********** ********** **********

Ген/аллель Hinfl

CSN3/A 241 ATAAGCAAAA TGAATAACAG CCAAGATTCA TGGACTTATT AATAAAATCG ТААСАТСТАА

CSN3/B 241 ............................................................

********** ********** ********** ********** ********** **********

Ген/аллель _Праймер JK3 GenBankA/N

CSN3/A 301 ACTAGCGTAG ATGGATAAAT TAAATCTGTT ACAGAGAAGG CGAAATGGGC AY380228

CSN3/B 301 .................................................. AY380229

********** ********** ********** ********** **********

Ген/аллель ПЦР-продуко? AluJ-рестрикционное картирование ПДРФ-А1иХ-профиль

CSN3/A 350 п.н. 1-134/135-265/266-350 н. 134/131/85 п.н.

CSN3/B 350 п.н. 1-265/266-350 н. 265/85 п.н.

Схема. Результаты выравнивания и //ш/7-рестрикционного картирования амплифицируемых с помощью праймеров JK5 и JK3 нуклеотидных последовательностей ДНК локуса CSTVJ-гена

Bos taurus (аллели А и В).

Ген/аллель Праймер ЬСТЗ!_

ВЮ/В 001 СГССТТСТСС ТССАСАСССА СТАСАААААС ТАССТССТСТ ТСТССАТССА СААСАСТССТ

ВЬЭ/А 001 ............................................................

********** ********** ********** ********** ********** **********

Ген/аллель НаеХХХ

ВЬв/В 061 САСССССАСС АААСССТССС СТСССАСТСС СТСССТСССТ СССААСССТС ССТССССАСС

ВЬв/А 061 ...................Т ........................................

********** ********* ********** ********** ********** **********

Ген/аллель НаеХХХ

ВЬв/В 121 САСАССАвСТ СТСТССГССТ СССТССААСС С(ЗСССССС6С ССАСССТССС АССАСССАСС

ВЬв/А 121 .................... ........................................

********** ********** ********** ********** ********** **********

Ген/аллель _

BLG/B 001 ТТвАТТСССА ССАССАССАС ССАТСССССС ТСССССАСТС СССССАССАС АСССТССГСА

ВЬв/А 001 ............................................................

********** ********** ********** ********** ********** **********

Ген/аллель _Праймер ЬСВ2 СепВапк А/И

ВЬв/В 001 ТАТАССйССА СССССТСГСС ТС 004 8 9319

ВЬв/А 001 ...................... Н<258 9925

********** ********** **

Ген/аллель ПЦР-продукт НаеХХХ-рестрикционное картирование ПДРФ-НаеХХХ-профиль ВЬв/В 262 п.н. 1-79/80-153/154-262 н. 109/79/74 п.н.

ВЬв/А 262 п.н. 1-153/154-262 н. 153/109 п.н.

Схема. Результаты выравнивания и /УяеШ-рестрикционного картирования амплифицируемых с помощью праймеров

ЬСВ1 и \jGB2 нуклеотидных последовательностей ДНК локуса ВЬС-гена Боб 1аигт (аллели А и В).