Молекулярная диагностика генетического полиморфизма основных молочных белков и их связь с технологическими свойствами молока тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.23, кандидат биологических наук Костюнина, Ольга Васильевна

• Костюнина, Ольга Васильевна
• кандидат биологических наук
• 2005

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Костюнина, Ольга Васильевна

Краткий словарь

ВВЕДЕНИЕ

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 11 Ф 1.1. Полиморфизм белков у животных и его генетическая природа

1.2. Состав и физико-химические свойства молока коров

1.3. Современная номенклатура и биологические функции белков молока. Молекулярно-биохимический полиморфизм белков молока

1.3.1. Казеиновая фракция

1.3.2. Сывороточные белки

1.4. Хозяйственно-полезные признаки и технологические свойства молока в зависимости от полиморфных систем белков молока

1.5. Селекция с использованием генетических маркеров

1.6. Метод ПЦР как основной метод анализа генетического полиморфизма белков молока

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ 38 ^ 2.1. Материалы

2.1.1. Животные

2.1.2. Оборудование

2.1.3. Реактивы 40 2.2. Методика исследований

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Создание банка ДНК крупного рогатого скота различных пород.

3.2. Разработка и усовершенствование методик диагностики полиморфизма генов альфа-лактальбумина и бета-казеина крупного рогатого скота.

3.2.1. Определение вариантов гена альфа-лактальбумина

3.2.2. Определение вариантов гена бета-казеина

3.3. Популяционно-генетические исследования крупного рогатого скота различных пород по вариантам генов белков молока

3.3.1. Генотипирование животных по вариантам каппа-казеина

3.3.2. Генотипирование животных по вариантам бета-лактоглобулина

3.3.3. Генотипирование животных по вариантам альфа-лактальбумина

3.3.4. Генотипирование животных по вариантам бета-казеина

3.4. Исследование связи полиморфизма генов белков молока с молочной продуктивностью коров

3.4.1. Молочная продуктивность коров с различными генотипами по каппа-казеину

3.4.2. Молочная продуктивность коров с различными генотипами по бета-лактоглобулину

3.4.3. Молочная продуктивность коров с различными генотипами по альфа-лактальбумину

3.4.4. Молочная продуктивность коров с различными генотипами по бета-казеину

3.4.5. Комплексное влияние генотипов нескольких генов на молочную продуктивность

3.5. Качество, технологические свойства молока и молочных продуктов от коров черно-пестрой породы

3.5.1. Технологические свойства молока у коров разных генотипов по каппа-казеину и бета-лактоглобулину

3.5.2. Технологические свойства молока коров с разными генотипами по каппа-казеину и бета-казеину

4. ОБСУЖДЕНИЕ

5. ВЫВОДЫ

6. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ ПРИЛОЖЕНИЯ

Краткий словарь Амплификатор - прибор, предназначенный для проведения ПЦР asCn - альфа- S казеин AL - альбумин сыворотки крови PLG - бета-лактоглобулин CSN1S1, asiCn - альфа S1-казеин ^ CSN2, рСп - бета-казеин

CSN3, кСп - каппа-казеин Ig - иммуноглобулин LALBA, aLA - альфа-лактальбумин Г/2 =0,2 — скорость центрифугирования ПЦР - полимеразная цепная реакция ПДРФ - полиморфизм длин рестрикционных фрагментов п.о. - пар оснований

Праймеры - короткие последовательности нуклеотидов (чаще 20-25) комплементарные концевым участкам изучаемого гена kb - килобейтс

Рр - протеозопептонная фракция

SSCP - полиморфизм структуры одноцепочечной ДНК

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Молекулярная диагностика генетического полиморфизма основных молочных белков и их связь с технологическими свойствами молока»

Актуальность проблемы

В настоящее время основной целью подавляющего большинства отечественных научных разработок является поиск путей к обеспечению населения России животноводческими продуктами, не прибегая к их импорту.

Согласно современной концепции развития животноводства дальнейшее увеличение производства сельскохозяйственной продукции связано с использованием научных разработок. Это позволит сделать отрасль более рентабельной и конкурентоспособной, а также обеспечит снабжение населения качественными продуктами животноводства. (Данкверт С.А., Дунин И.М., 2002).

В настоящее время повышение эффективности селекции животных все больше связывают с работами в области ДНК-технологий, при этом одним из основных направлений является поиск и анализ генов, позволяющих маркировать локусы количественных признаков и вести отбор с помощью маркеров («маркер-зависимая селекция»).

Как известно, на формирование продуктивности сельскохозяйственных животных оказывают влияние, как генетические, так и не генетические (внешние) факторы. В этой связи, при традиционном отборе животных по фенотипическому проявлению признаков оценка истинного генетического потенциала животных может быть занижена.

С древних времен люди используют молоко некоторых сельскохозяйственных животных в пищу. Его потребляют, как в натуральном виде, так и переработанном в различные продукты. Структура потребления молока и молочных продуктов связана с социальными, экономическими, географическими и другими параметрами. Увеличивается количество молока, перерабатываемое на молочные продукты, в том числе на белковомолочные (сыры и творог) (Данкверт С.А., Дунин И.М., 2002).

При производстве того или иного продукта молоко должно отвечать определенным технологическим требованиям. Так, при производстве сыров, особенно его твердых сортов, большое внимание уделяется составу молока. Содержание казеина в этом молоке должно быть не менее 75%, а таких фракций, как asCn, (альфа s-казеин), рСп (бета-казеин) и кСп (каппа-казеин) -91% от общего его количества. Молоко должно хорошо свертываться под действием сычужного фермента, быть термостабильным, обладать хорошими синергетическими свойствами и высоким выходом конечной продукции.

В селекционной работе с крупным рогатым скотом характеристика молока проводится в основном по удою, жиру и общему содержанию белка. Однако полиморфизму белков молока пока не уделяется должного внимания. Вместе с тем, состав молока является основным при производстве сыров и творога. Установлена тесная взаимосвязь между технологическими свойствами и биохимическим полиморфизмом белков молока (Иолчиев Б.С. и др., 1996; Попов Н.А. и др., 2003). Например, содержание общего белка в коровьем молоке, его свертываемость и синергетические свойства взаимосвязаны с генотипом животного по локусу каппа-казеина (Иолчиев Б.С. и др., 1996; Гладырь Е.А., Зиновьева Н.А., 2002; Калашникова JI.A., 2003).

В связи с возрастающими требованиями к качеству молока и молочной продукции, возникает необходимость использования в селекции генетических маркеров, связанных с признаками молочной продуктивности. В сложившейся ситуации требуется изменение в методах оценки признаков селекции животных. К классическим методам селекции животных необходимо добавить новые подходы, связанные с достижениями генетики и биотехнологии. Одним из методов определения полиморфизма систем белков молока является ПЦР-ПДРФ анализ, который отличает высокая чувствительность, быстрота, точность и легкость в исполнении.

Научная новизна.

Модифицирован метод ПЦР-ПДРФ для выявления аллелей и генотипов крупного рогатого скота по генам альфа-лактальбумина и бета-казеина. Проведена апробация метода при определении частот их встречаемости среди поголовья отдельных популяций черно-пестрой, ярославской, симментальской, красной горбатовской, бестужевской, сычевской, костромской, айрширской, голштинской черно-пестрой и швицкой пород.

Цели и задачи исследования.

Цель исследований заключалась в усовершенствовании методов молекулярной диагностики генетического полиморфизма основных молочных белков крупного рогатого скота и изучении его связи с признаками молочной продуктивности и технологическими свойствами молока.

Для достижения этой цели в наших исследованиях были поставлены следующие задачи.

Задачи работы:

1. Разработать и усовершенствовать методики определения аллельного полиморфизма генов бета-казеина и альфа-лактальбумина.

2. Пополнить банк ДНК крупного рогатого скота различных пород и апробировать на нем модифицированные методики определения генетического полиморфизма беков альфа-лактальбумина и бета-казеина.

3. Определить частоты аллелей и генотипов крупного рогатого скота различных пород по генам каппа-казеина, бета-лактоглобулина, бета-казеина и альфа-лактальбумина и дать по ним генетическую структуру популяций отдельных пород.

4. Изучить молочную продуктивность коров с различными вариантами исследуемых генов.

5. Изучить технологические свойства молока коров различных генотипов черно-пестрой породы по генам каппа-казеина, бета-лактоглобулина, бета-казеина.

Практическая значимость работы.

В качестве возможных генетических маркеров, представляющих практический интерес для скотоводства, рассмотрены гены альфа-лактальбумина и бета-казеина, предложены усовершенствованные методики выявления их аллельных вариантов. Рассчитаны частоты встречаемости аллелей и генотипов бета-казеина, альфа-лактальбумина, каппа-казеина и бета-лактоглобулина у крупного рогатого скота отдельных популяций. Изучена молочная продуктивность и технологические свойства молока коров с различными генотипами исследуемых генов.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Усовершенствованные тест-системы анализа полиморфизма генов бета-казеина и альфа-лактальбумина.

2. Характеристика генетической структуры популяций крупного рогатого скота по генам каппа-казеина, бета-лактоглобулина, бета-казеина и альфа-лактальбумина.

3. Связи вариантов исследуемых генов с признаками молочной продуктивности коров и технологическими качествами молока.

Апробация работы.

Результаты исследований были доложены:

• на конференциях аспирантов и молодых ученых, ВИЖ, 2002 г.; 2003 г.;

• на международной научной конференции «Современные достижения и проблемы биотехнологии сельскохозяйственных животных», ВИЖ, 2003 г.;

• на годовых научных отчетах отдела биотехнологии ВИЖ, 2002 г.; 2003 г.; 2004 г.

• в школе-практикуме «Методы исследований в биотехнологии сельскохозяйственных животных», ВИЖ, 2004г.

Публикации.

По материалам диссертации опубликовано 10 научных работ.

Структура и объем работы.

Диссертационная работа изложена на 127 страницах, состоит из следующих разделов: введение, обзор литературы, материалы и методы исследований, результаты исследований, обсуждение, выводы, практические предложения, список литературы. Работа включает 39 таблиц и 13 рисунков, 1 приложение. Список литературы включает 172 источника, в том числе 90 источников на иностранных языках.

Заключение диссертации по теме «Биотехнология», Костюнина, Ольга Васильевна

ВЫВОДЫ

1. Усовершенствована методика определения аллельного полиморфизма гена альфа-лактальбумина крупного рогатого скота, позволяющая диагностировать с помощью ПЦР-ПДРФ анализа наиболее часто встречающиеся варианты А и В. Усовершенствованная методика позволяет определять полиморфизм гена LALBA с использованием электрофореза в агарозном геле. Методика экспериментально апробирована на ДНК крупного рогатого скота \(Щ образца, отобранных от 16 популяций 10 пород.

2. Разработана методика определения аллельного полиморфизма гена бета-казеина крупного рогатого скота, позволяющая диагностировать с помощью ПЦР-ПДРФ анализа варианты А, В и A3. При разработке методики были использованы замены в праймерах, дающие возможность образовывать сайты рестрикции и использовать электрофорез в агарозном геле. Методика была апробирована на 10J образцах ДНК крупного рогатого скота 16 популяций 10 пород.

3. Определены генотипы крупного рогатого скота 5 пород по каппа-казеину. Наиболее полиморфными по гену CSN3 оказались популяции животных красной горбатовской, ярославской пород и Михайловского типа ярославской породы, в которых выявлено 5 из 6 диагностируемых аллелей и, соответственно, 9, 8 и 5 различных генотипов. Коровы красной горбатовской породы с генотипом АВ превышали по содержанию жира сверстниц с генотипом АА на 0,12% (Р<0,05), а по выходу молочного жира имели превосходство коровы с генотипом ВВ на 40 кг (Р<0,05) над генотипом BE. По содержанию белка коровы ярославской породы с ВВ превышали коров с АВ и АА соответственно на 0,16% и 0,12% (Р<0,05).

4. Определены генотипы коров по бета-лактоглобулину в 3 стадах черно-пестрой породы. Выявлено наличие двух из четырех диагностируемых аллелей гена бета-лактоглобулина А и В. Частота встречаемости аллеля А в зависимости от популяции варьировала от 33,7 до 46,0%. Разница между генотипами по содержанию белка АВ>ВВ на 0,11% (Р<0,05).

5. По вариантам гена LALBA наибольшая частота встречаемости аллеля А выявлена у животных бестужевской (82,6-93,8%), красной горбатовской (84,8%) пород и популяции 3 черно-пестрой (82,5%) пород. Наименьшей частотой встречаемости аллеля А характеризовались животные швицкой (48,3-50,0%) породы и популяции 2 черно-пестрой породы (46,0%). В большинстве исследованных пород доля гомозиготного генотипа АА была выше по сравнению с генотипом ВВ. Максимальная частота данного генотипа выявлена у помесных коров бестужевская X голштинская порода (89,6%). Наименьшая доля генотипа АА выявлена у коров популяции 2 черно-пестрой (12,0%) и швицкой (10,3-15,8%) пород. У животных швицкой породы отечественной селекции была отмечена статистически достоверная разница между генотипами АВ и ВВ по содержанию жира 0,03% (Р<0,05), у чистопородных коров ярославской породы и коров Михайловского типа - по выходу молочного жира за лактацию между генотипами АА>АВ на 25,9 кг (Р<0,05), ВВ>АА на 40,1 кг (Р<0,05). Коровы ярославской породы с генотипом ВВ имели более высокое содержание белка в молоке по сравнению с коровами, имеющими генотипы АА на 0,13% (Р<0,05) и АВ на 0,21% (Р<0,05).

6. Исследование коров по CSN2 показало, что частота аллеля А варьировала от 56,8% у коров голштинской черно-пестрой породы до 98,4% у коров айрширской породы. Доля гомозиготных генотипов АА во всех породах была выше по сравнению с частотой встречаемости генотипа ВВ и варьировала от 30,0% в швицкой породе немецкой селекции до 96,8% в айрширской. Коровы швицкой породы немецкой селекции с генотипом АА превосходили животных с генотипом АВ по удою на 481 кг (Р<0,05). По содержанию жира в молоке коровы швицкой немецкой селекции и сычевской пород, имеющие генотип АВ, превосходили своих сверстниц с генотипом АА, соответственно, на 0,1%, (Р<0,05) и 0,11%, (Р<0,05). По количеству молочного жира коровы Михайловского типа с генотипом АА превышали сверстниц с генотипом ВВ на 33,3 кг (Р<0,05). В сычевской породе коровы с генотипом АВ имели превосходство над генотипом АА по содержанию белка на 0,11%, (Р<0,05).

7. Анализ молочной продуктивности коров с генотипами по нескольким генам белков молока показал наличие разности по содержанию жира в группе чистопородных ярославских коров с генотипами по CSN3, LALBA, CSN2 АА-АА-АА>АА-АВ-АА на 0,5% (Р<0,05), а так же по количеству молочного жира АА-ВВ-АА>АА-АА-АА на 62,3 кг (Р<0,05) среди коров Михайловского типа. В стаде коров швицкой породы немецкой селекции выявлена статистически достоверная разница по удою по генам LALBA, CSN2 АВ-АА>АВ-АВ на 446 кг (Р<0,05), содержанию жира АВ-АВ>АВ~АА на 0,12% (Р<0,05) и белка АВ-АВ>АВ-АА на 0,11% (Р<0,05).

8. При изучении технологических свойств молока коров черно-пестрой породы с различными комплексными генотипами было выявлено, что у коров с генотипом АВ, АВ по CSN3 и (3LG содержание белка в молоке и выход творога из него был выше, чем в других группах на 0,5-1%. Наибольший выход сливочного масла отмечался в группе животных с генотипом АА, ВВ, при этом по времени сбивания сливок, характеру масляного зерна и количеству пахты наиболее предпочтительным являлось молоко коров с генотипом АВ, ВВ. При изготовлении масла из молока коров с генотипом АА, ВВ по CSN3 и CSN2 требовалось меньшее время, а его выход был наибольшим у коров с генотипом АВ, ВВ. Молоко коров с генотипом АА, АА по выходу творога наиболее выгодно при производстве данного продукта.

5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

• Лабораториям, занимающимся ДНК-диагностикой генетического полиморфизма рекомендуем использовать разработанные нами на основе ПЦР-ПДРФ анализа тест-системы для определения генотипов по генам белков молока альфа-лактальбумину и бета-казеину.

• Головному и Региональному центрам по генетической экспертизе племенной продукции рекомендовать приступить к мониторингу региональных популяций молочных пород крупного рогатого скота по генам белков молока.

Ill

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Костюнина, Ольга Васильевна, 2005 год

1. Арзуманян Е.А., Бегучев А.П., Соловьев А.А., Фандеев Б.В. Скотоводство. -М.: Колос. 1978. -399 с.

2. Бойланд Г. Технология производства молочных продуктов.-М.: Тетра Пол АО, 2003.-440 с.

3. Вартапетян А.Б. Полимеразная цепная реакция // Молекулярная биология.-М.: 1991 .-Том 25.-№4.-С.926-936.

4. Брем Г., Кройслих X., Штранцингер Г. Экспериментальная генетика в животноводстве //М.-РАСХН.-1995.-326 с.

5. Генетика. // Меркурьева Е.К., Абрамова З.В., Бакай А.В., Кочиш И.И. -М.: Агропромиздат. -1991.-444с.

6. Ф 12. Генетика полиморфных белков животных: Сб. науч. тр./ Куйбыш.госуд. пед. ин-т. им. В.В. Куйбышева. Куйбышев.: КГПИ. -1977.-56 с.

7. Генетические, селекционные, биохимические и физиологические основы изучения белков молока и крови крупного рогатого скота: Библиограф, указ./ Ред. J1.C. Жебровский.- Л.: ЛГУ. -1975.-С.203.

8. Георгиевский В.И. Физиология сельскохозяйственных животных // М.: Агропромиздат.-1990.-510 с.

9. Гладырь Е.А. ДНК-диагностика вариантов генов каппа-казеина и бета-^ лактоглобулина у крупного рогатого скота // Автореф. дис. канд. биол.наук / Дубровицы. -2001. -20 с.

10. Гладырь Е.А., Зиновьева Н.А. Диагностика аллельного полиморфизма основных генов белков молока КРС (каппа-казеина, бета-лактоглобулина, альфа-лактальбумина) // Методы исследований в биотехнологии с/х животных.- ВИЖ., Дубровицы.-2002.-С. 18-25.

11. Гладырь Е.А., Костюнина О.В., Зиновьева Н.А. Диагностика полиморфизма гена альфа-лактальбумина крупного рогатого скота // Современные достижения и проблемы биотехнологии сельскохозяйственных животных. -Дубровицы. -2002. -с. 109-110.

12. Голиков А.Н. Баранова Н.У., Кожебеков З.К. Физиология сельскохозяйственных животных // М.: Агропромиздат.-1991.-432 с.

13. Горбатова К.К. Химия и физика белков молока.- М .: Колос. -1993.-192с.

14. ГОСТ 37-91 «Масло коровье. ТУ»

15. ГОСТ 13277-79 «Молоко пастеризованное»

16. ГОСТ Р52054-2003 «Молоко натуральное коровье сырое»

17. ГОСТ 3622-68 «Молоко и молочные продукты. Отбор проб и подготовка их к испытанию».

18. ГОСТ 26809-86 «Молоко и молочные продукты. Отбор проб и подготовка их к испытанию».

19. Гроклод Ф. Полиморфизм белков молока, некоторые биохимические и генетические аспекты // Материалы XXVI Международной конференции по группам крови и биохимическому полиморфизму животных. -Л. -1979. -Т.1 -С.55-94.

20. Данкверт А.Г., Данкверт С.А. История племенного животноводства России. -М.: Арбат-информ. -2004. -328с.

21. Данкверт С.А., Дунин И.М. Производство и мировой рынок молока в начале XXI века. -М.: Лесные Поляны. -2002. -72с.

22. Диагностика различных аллельных вариантов ДНК «single tube» методом аллелеспецифической полимеразной цепной реакции // Зиновьева Н.А., Васичек Д., Айгнер Б., Попов А.Н., Брем Г. //Биотехнология.-1996.-№6- с. 45-49.

23. Ежегодник по племенной работе в молочном скотоводстве в хозяйствах Российской Федерации (2002 год). -М.: ГНУ ВНИИплем. -2003. -300с.

24. Жебровский Л.С. Селекционно-генетические основы белкового состава молока коров.- М .: Колос. -1973.- 248 с.

25. Жебровский Л.С., Бабуков А.В., Митютько В.Е. Связь полиморфных белков с продутивностью черно-пестрого скота // Животноводство. -1977. -№7. -С.25-27.

26. Журавель Е.В., Глазко В.И. О полиморфизме по локусу к-казеина молока У различных пород крупного рогатого скота //Сельскохозяйственная биология.-1999.- N2.-C. 120-124.

27. Зиновьева Н.А. Подготовка проб, выделение ДНК и оптимизация ПЦР // Методы исследований в биотехологии с/х животных. -ВИЖ.-2002.-С.33-45.

28. Иванченко Е.В., Глазко В.И. PCR-RFLP хозяйственно-ценных генов у крупного рогатого скота Украины и России // Современные достижения и проблемы биотехнологии сельскохозяйственных животных. Материалы конференции. -Дубровицы. -2002. -133-134.

29. Инихов Г.С. Химия и физика белков молока. -М.: Пищепромиздат. -1941.-300 с.

30. Иолчиев Б.С. К методике качественного и количественного определения фракций белков // Новое в селекции сельскохозяйственных животных: Сб. научн. Трудов / ВИЖ. -Вып.56 -Дубровицы, 1993. -С.122-128.,

31. Иолчиев Б.С., Еремина М. А. Использование полиморфных систем белков молока в селекции //Молочное и мясное скотоводство.-1996.-N2.-C.20-22.

32. Иолчиев Б.С., Сельцов В.И. Взаимосвязь системы каппа-казеина смолочной продуктивностью коров // Зоотехния.- 1999.-N6.-C.4-5.

33. Исследование белков молока. Сб. науч. тр. / Ред. П.Ф. Дьяченко.- М.: Пищепромиздат, 1959.- 85 с.

34. Изучение полиморфизма гена каппа-казеина у некоторых пород крупного рогатого скота/Журавель Е.В., Кириленко С.Д., Костецкий И.Е. и др. // Молекуляр.-генет.маркеры животных.-Киев. -1996.-С.8.

35. Калашникова JI.A. Возможности использования ДНК-маркеровпродуктивных качеств животных в практической селекционной работе // Современные достижения и проблемы биотехнологии сельскохозяйственных животных. -Дубровицы. -2003. С.33-39.

36. Кравченко Н.А. Разведение сельскохозяйственных животных. -М.: Колос, 1973. -486с.

37. Кривенцов Ю.М., Щербакова Г.В. Молочная продуктивность, физико-химический состав и технологическое свойство молока черно-пестрого скота различных генотипов // Вестник сельскохозяйственной науки.-1991.-С. 100-104.

38. Кугенев П.В., Барабанщиков Н.В. Практикум по молочному делу.-М.: Агропромиздат.-1998.-223 с.

39. Кузнецов В.М. Модификационный метод оценки быков по качеству #' потомства // Бюл. Науч. Тр. ВНИИРГЖ. 1982 Вып. 58. -С. 11 -13.

40. Кэмпбелл Д.Р., Маршалл Р.Т. Производство молока.-М.: Колос, 1980.670 с.

41. Маринчук Г.Е. Влияние отбора по молочной продуктивности на распределение типов бета-лактоглобулина в популяциях коров красной степной породы // Генетика, разведение и содержание с.-х. животных.1. Киев.-1978.-С.59-81.

42. Маркин Ю.В. Физиологическое обоснование методов повышения энергетической и протеиновой обеспеченности лактирующих коров и молодняка крупного рогатого скота // Автореф. дис. докт. биол. наук. -1997. -38с.

43. Марсия Э., Чимера Д. Идентификация личности: анализ полиморфизма длины амплифицированных фрагментов. // Методы. Молекулярная клиническая диагностика. -М.: Мир.- 1999.-С.508-531.

44. Меркурьева Е.К. Генетические основы селекции в скотоводстве.-М.: Колос, 1977.-238с.

45. Методические рекомендации по использованию метода полимеразной цепной реакции в животноводстве / Н.А. Зиновьев., А.Н. Попов, JI.K. Эрнст и др. Дубровицы: ВИЖ,1998.-36 с.

46. Овчинников А.И., Горбатова К.К. Биохимия молока и молочных продуктов. -JI. -1974. -259 с.

47. Петухов В.Л., Эрнст Л.К., Гудилин И.И. Генетические основы селекции животных. -М.: Агропромиздат. -1989.- 448 с.

48. Плохинский Н.А. Биометрия. М.: Издательство Московского университета. -1970. -366 с.

49. Полиморфизм белков и его значение в генетике и селекции животных /

50. Х.Ф. Кушнер, Л.А. Зубарева, В.Е. Гинговт, И.Е. Новик.- М.-Агропромиздат, 1968.-128с.

51. Попов Н.А., Езерский В.А.„ Хрипякова Е.Н., Нетеча З.А. Полиморфизм белков, технологические и диетические качества молока коров черно-пестрой породы // Материалы научно-практической конференции.

52. Быково. -РАМЖ, 2003. с. 64-66.

53. Популяционно-генетический анализ белков молока у различных видов сельскохозяйственных животных // Иолчиев Б.Н., Стрекозов Н.И., Марзанов Н.С., Зиновьева Н.А. // Методические рекомендации, ВИЖ-2001.-c.28.

54. Сапунов А.Г., Подшибякин А.Е., Чеботарев И.И. и др. Биологическая ценность молозива и молока овцематок и жизнеспособность новорожденных ягнят // Ветеринария.-1986- №9.-С.65-66.

55. Сингер М., Берг П. Гены и геномы / В 2-х томах // М.: Мир.-1998. -794 с.

56. Скрипниченко Г.Г. Популяционный анализ генетической структуры стад молочного скота по полиморфным системам белков и ферментов крови, молока в связи с селекцией на повышение молочной продуктивности: Автореферат дис. канд. наук. -М. -1975. -20с.

57. Состав и свойства молока, как сырья для молочной промышленности / Н.Ю. Алексеева, В.П. Аристова, А.П. Патратий, А.С. Потапов,-М.: Агропромиздат, 1986.-238 с.

58. Сулимова Г.Е., Городецкий С.И.Полиморфизм длин рестрикционных фрагментов гена (3- казеина Bos Таигиз//Сельскохозяйственная биология .-1988.-N3 .-С. 31-34.

59. Сулимова Г.Е., Соколова С.С., Семикозов О.П. и др. Анализ полиморфизма ДНК кластерных генов у крупного рогатого скота: гены казеинов и гены главного комплекса гистосовместимости (BOLA) // Цитология и генетика. -1992. -№5. -С. 18-26.

60. Суяркулов Ш.Р. Белковомолочность черно-пестрого голандизированного скота и ее связь с технологическими свойствами молока: Автореф. Дис. . канд. с.-х. наук. -М., 1987.-12 с.

61. Теоретические основы разведения генетики и селекции сельскохозяйственных животных. Сб. науч. тр.// Всесоюзный науч.-иссследов. ин-т разведения и генетики сельскохоз. ж-х.- JL: ВНИИРГ; 1976.-129 с.

62. Тепел А. Химия и физика молока. -М.: «Пищевая промышленность». -1979. -624с.

63. Технологическая инструкция по производству творога из пастеризованного молока. -1999. ГУ ВНИМИ.

64. Технологическая инструкция по приготовлению масла коровьего сладкосливочного. -1999. ГУ ВНИМИ.

65. Томме А.А. Генетический полиморфизм (3LG и казеинов и возможности его использования в селекции пород крупного рогатого скота в Эстонской ССР: Автореферат, дис. канд. наук. -Тарту. -1972. -27с.

66. ТУ 9222-180-00419785-99 «Творог»

67. Хаертдинов Р.А. Влияние генотипа коров по каппа-казеину на количественное содержание молочных белков // Генетика. -1989. -Т.25. -№8. -С. 1462-1472.

68. Хаертдинов Р., Афанасьев М. Сыродельческие свойства молока в зависимости от генотипа коров по (З-казеину // Молочное и мясное скотоводство.- 1997.-N3.-C.30-34.

69. Шибата Д.К. Полимеразная цепная реакция и молекулярно-генетический анализ биоптатов. // Методы. Молекулярная клиническая диагностика.-М.: Мир.- 1999.-С.395-428.

70. Ясуи В., Ито X., Тахара Е. Анализ ДНК в архивных образцах и его применение для изучения патогенеза опухолей.// Методы. Молекулярная клиническая диагностика.- М.: Мир.-1999.-С.395-428.

71. Alais С. Science du lait Principes des techniques laitieres. Editions SEP. -1974. - Paris. - France. -P.212.

72. Aleanpri R., Buttazzoni L.O. and Scaneiden S.C. The effects of milk components and cheese producing ability // J.Dairi Sci.-1990. Vol. 73. -N 3. — P.241.

73. Alichanidis, A. Polychroniadou. Special features of dairy prod-uctSK-Cn from ewe and goat milk from the physicochemical and or-ganoleptic point of view // Production and utilization of ewe and goat milk. Crete . Greece. 1995.S.21-43.

74. Archibald A.L., McClenaghan M., et. al. High-level expression of biologically active human alpha 1-antitripsin in the milk of transgenic mise // Prok. Natl. Acad. Sci. USA.-1990.-P.5178-5182.

75. Aschaffenburg R., Drewry J. Occurrence of different beta-lactoglobulins in cow's milk. "Nature", -1955. -V.176. -P. 218-219.

76. Barroso A., Dunner S., Canon J. Technical Note: Use of PCR-Single-Strand Conformation Polymorphism Analysis for Detection of Bovine (3-casein Variants A1' A2, A3 and В.// Jornal Animal Sciens.-1999.-N77.-P.2629-2632.

77. Beckmann J.S., Soller M. Restriktion fragment length polymorphisms in genetic improvement: Methodologies mapping and costs // 1983 .-P.35-43

78. Ф 88. Bell K., McKenzie H.A., Shaw D.C. Amino acid composition and peptidemaps of (3-lactoglobulin variants // Biochim. Biophis. Acta. -1968 V.154 -P.284-294.

79. Beckmann J.S., Soller M. Restriktion fragment length polymorphisms in genetic improvement: Methodologies mapping and costs // 1983.-P.35-43.

80. Berg van der G., Escher J.T.M., Koning P.J. Bovenhuis H. Genetic1. A.polymorphism of kappa-casein and beta-lactoglobulin ib relation to milk composition and processing properties // Tetherlands Milk and Dairy J. -1992. -V.46. -P. 145-168.

81. Bleck G.T., Bremel R.D. Sequense and single-base polymorphisms of the bovine alpha-lactalbumin 5"-flanking region // Gene. -1993. -V.126. -P.213-218.

82. Blumberg B.C., Tombs M. P.Possible polimorphism of bovin P-lactalbumin //Nature.- 1958.-P.683.

83. Bonifacio C., Santos I.C., Belo C., Crawador A. Single-strand conformation polymorphism (SSCP) analysis of aSi-casein, (3-casein and к-casein genes in charnequeira Portuguese indigenous goat breed//Archivoc de zootechia.-2001.-N50.-P.105-111.

84. Braunschweig M., Stranzinger G., Puhan Z. A PvuII PCR-RFLP test for the bovine p-lactoglobulin D allele // Animal Genetics. 1999.- V.30. - P.76.

85. Brew K., Castellino F J., Vanaman T.C., Hill R.L. The complete aminoacid sequence of bovine a-lactalbumin. "Journal of Biological Chemistry". -1970. -V. -245. -P. 4570-4582.

86. Chemical composition and coagulation properties of reneted milks from different breeds and species of ruminant. // Stony J.E., Grandison A.S., Millard D., Owen A.-J, Frod G.D. // J. Dairy Res. -1983. -V.50. -P. 215-229.

87. Comparison of milk protein allele frequencies in Nordic cattle breeds// Lien S., Kantanen J., Olsaker I., Holm L-E., Eythorsdottir E., Sandberg K., DalsgardB., Adalsteinsson S. //Animal Genetics.-1999.~N30.-P.85-91.

88. Cow milk protein genotypes: guality and stability of raw milk, pasteurized and fermented milk// Vegarud G.E., Langstud Т., Brovold M J., Devoid T.G. // International Dairy Journal-1999.-N9.-P. 399-400.

89. Die Milchproteingene des Fleckvihbullen "Haxl" und dessen Einfuss auf die Allefrequenzen // Schlee P., Rottman O., Buchberger J., Graml R., Aumann J., Binser R., Pirchner F.// Zuchtungkunde. -1992. -V.64. -N5. -S. 312-322.

90. Ebner К., Schambacher F. // Lactation (Eds.: Larson В., Smith V.). -1974. -№2.-P. 77-113.

91. Ehrmann S. Milchproteine: Mit dem Muster auch die Leistung verbessern? // Der Tierzuchter. 1993. -№3.- S. 44-47.

92. Erlich H.A., Gelfand D. Recent advances in the polymerase chain reaction // Sc.-1989.-P.1643-1650.

93. Fesus L., Zoiolnai A. Bovine leukocyte adhesion deficiency in Hungarian Holstein-Friesian cattle // Hung. Agr. Res. -1995. -4. -№2 -P.27-29.

94. Frank G., Braunizer G., Milchwissenschaft. -1967. -V.20. -P. 361-365.

95. Freier R., Kletter В., Gery I., Lebenthal E., Geifman M. Intolerance to milk protein // J. Pediatr. -1969. -V.75. -P.623-631.

96. Forster M., Graml R. Die Milchproteingene des Rindes und ihre biotechnologischen Nutzungsmoglichkeiten // Bauer Landwirt. Jahrb. -1991. -68.-N2.-S. 255-265.

97. Genotipe anallyses on DNA of zootechnically intersting species breed in Italy // Sangalli S., Blasi M., Ianza A., Gregorio P. Di. / Anim. Genet. -1994. -25. -Suppl №2. -P.39.

98. Geoffrey R.P., Alastair K.H., Jeremy P.H. Influence of %-casein and p-lactoglobulin phenotype on the heat stability of milk/Anternational Dairy Journal.- 1999.-N9.-P.375-376.

99. Godovac-Zimmermann J. The structural motif (3 -lactoglobulin and retinolbinding protein: a basis framework for binding and transport f small hydrophobic molecules? // TIBS. -1988. -V.13. -P.64-66.

100. Grosclaude F., Mahe M.F., Ribadeau-Dumas B. Structure primaire de la caseine asl, et de la caseine bovine. "European Journal of Biochemistry". -1973. №40. -P.323-324.

101. Han S.K., Shin Y.C., Byun H.D. Biochemical, molecular and physiological characterization of a new (3-casein variant detected in Korean Cattle // Animal Genetics. -2000. -V.31. -P.49-51.

102. Hayes H., Popescu P., Dutrillaux B. Comparative gene mapping of lactoperoxidase, retinoblastoma and A-lactalbumin genes in cattle, sheep and goats // Mammalian Genome. -1993. -V.4. -P.593-597.

103. Hippell P., Waugh D. Casein: monomers and polymers // Amer. Schem. Soc.-1955.-V.77.-P. 4311.

104. Identification of a mutation in porsine ryanodin receptor associated with malignant hyperthermia // Fujii J., Otsu K., Zorzato F., Deleon S., Khanna V.K., Weiler J. E., O'Brien P.J., Maclennan D.H. // Sciencce. -1991. -V.253. -P.448-451.

105. Innis M.A., Gelfand D.H. Optimization of PCRs // Academic press, San Diego.-1990.-P.3-12.

106. Isolation and characterization of the bovine kappa-casein gene // Aleksander L.J., Stewart A.F., Mackinlay A.G., Kapelinskaya T.V., Tkach T.M., Gorodetsky S.I. // Molec. Reprod. Develop. -1993. -V.36. -P.291-296.

107. Kaminski S. Identifikation of SDUI polymorphism within 5' flanking region of bovine alpha-lactalbumin gene// Animal Science Papers and reports.-1999.-N17.-P.23-27.

108. Kehrly M.E., Shuster D.E., Ackermann M.R. Leukocyte adhesion deficiency among Holstein cattle // Cornell Vet. -1992. -V.82. -P.103-109.

109. Kuhn N.J. The biosynthesis of lactose In: Biochemistry of lactation // Elsevier. -1997. -Amsterdam. -P. 159-176.

110. Liberatoti J., p -lactoglobulins. Chemikal and structural studies // Folia Vet. Lat. -1977. V.7. P. 205-222.

111. Mackinlay A.G., Wake R.G. The heterogeneity of к-casein // Biochem. Biophys. Acta -1964. V.93. -P. 378.

112. Mariani P., Losi G., Morini D. II Contenuto di acido citrico nel latte di vacchne con genotipo diverso nel locus k-kaseina // Sci. tech. latt.-casear. -1979. -№30. -C.375-384.

113. Martin P., Grosclaude F. Improvement of milk protein quality by gene technology// Livestock Production Science.-1993.-N35.-P.95-115.

114. McLean D.M. Influence of milk protein genetic on composition, yield and cheesemaking properties // Animal Genet. -1987. -Suppl. 1. -P. 100-102.

115. McKenzie H.A., Wake R.G. An improved method for the isolation of к-casein // Biochem. Biophys. Acta -1961. V.47. -P. 1961.

116. Medrano J.F., Aguilar-Gordova E. Genotyping of bovine kappa-caseine folloving DNA sequense amplification // Biotechnology. -1990.-№8.-P.144-146.

117. Mellander O. Electrophoretische Untersuchungen von Casein. -Boichem. Z. 1939. -300 s.

118. Mercier J.C., Grosclaude F., Ribadeau-Dumas B. Structure primaire de la caseine asl bovine. Sequence complete // "European Journal of Biochemistry". -1971. -№ 23. -P. 41-51.

119. Mirck M.H., Bannisseht-Wijsmuller Th. Von, Timmermans-Besselink W.J.H. et al. Optimizations of the PCR test for the mutation causing bovine leucocyte adhesion deficiency // Cell and Mol.Biol. -1995. -41. -№5. -P.695-698.

120. Morini D., Losi G. Castacweti G.B. Properties of ripened cheese in cheesemaking experiments with milk characterized by k-casein variants A and В // Sciera e Technikca Lattiero-Casearia. -1979. -№30. -C.243-262

121. Mullis K.B., Faloona F.A. In: Methods in enzymology. -Academic Press. -1987. -V. 155. -P.335-350.

122. Ng-Kwai-Hang K.F., Haies J.F., Moxley J.E. Relationships between Milk Protein Polymorphizms and Major Milk Constituents in Holstein-Fresian Cows// Journal of Dairy Science.-1986.-V69.-N1.-P.22-26.

123. Ng-Kwai-Hang K.F. Genetic polymorphism of milk proteins: Relationships with production traits, milk composition and technological properties// Animal Science.-1998.-V78.-P. 131-145.

124. Nomenclature of the proteins of bovine milk / Jennes R., Larson В., McMeekin Т., Swanson Т., Whitnah C., Whitey R. // J. Dairy Sci. 1956.-V.39. —P.536.

125. Nomenclature of the proteins of bovine milk first revision / Brunner J., Ernstrom C., Hollis R., Larson В., Whitney R., Zittle CM J. Dairy Sci. -1960.-V.43.-P.901.

126. Nomenclature of the proteins of cow's milk second revision // Thompson M. P., Tarassuk N. P., Jennes R., Lillevik H. A., Ashworth U.S., Rose D. // J. Dairy Sci. - 1965. -V.48. -P.159.

127. Palmer A.H. The preparation of crystalline globulin from the albumin fraction of cow's milk // J. Biol. Chem. 1934. -V.104. -P. 359-373.

128. Parameters affecting the yield of DNA from human blood / Gustavson S., Proper J.A., Bowie E.J.W., Sommer S.S. //Anal. Biochem.- 1987.-P.294-296.

129. Per protocols a guide to methods and applications / Innis M.A., Gelfand D.H., Sninski JJ., White T.J. // Academic Press. -1990. -San Diego, California.

130. Pinder S.J., Perry B.N., Skidmore C.J. Analysis of polymorphism in the bovine casein genes by use of the polymerase chain reaction //Animal Genetics.-1991.-V22.-Nl.-P. 11-19.

131. Piredda G., Papoff C.M., Sanna S.R.& Campus R.L. Influenza del geno-tipo della aspcaseina ovina sulle carateteristiche chmico-fische e latto-dinamografiche del latte. Sci. Teen. Latt-Cas. 1993. V.44.P.135-143

132. Prinzenberg E.-M., Krause I., Erhardt G. SSCP analysis at the bovine CSN3 locus diskriminates six alleles corresponding to known protein variants ( A,B,C,E,F,G) and three new DNA polymorphisms (H, I, A.)// Animal Biotechnology.-1999.-N10.-P.49-62.

133. Proteolytic specificity of chymosin on caprine asrcasem A and f. Production and utilization of ewe and goat milk / Trujillo A.J., Miranda G. Bars D.Ie & Delacroix-Buchet A. // Crete. -Greece. -1995. -S.273.

134. Puyol p., Perez M.D., et al Interaction of bovine (3-lactoglobulins and other bovine and human whey proteins with retinal and fatty acids // Agric. Biol. Chem.-1991.-P.2515-2520.

135. Saici R.K., Scharf S., Faalona F., Mullis K.B., Horn G.T., Erlich H.A., ArnheimN. Science. -1985. -V.230. -P.1350.

136. Saici R.K., Gelfand D.,et. al. Primer-directed enzymanic amplification of with a thermostable DNA polymerase //Science.- 1988.-P.487-491.

137. Sanger F., Nicklen S., Coulson A.R. DNA sequencing with chain-terminatiog inhibitors // Proc. Nat. Acad. sci. USA. -1977. -V.74, N12. -P.5463-5467.

138. Saperstein D.A.Nieckerson J.M. Restriction fragment length polymorphism analysis using PCR coupled tomrestrictions digest // Bio. Techniques. -1991. -V.10.-P.488-489.

139. Schaar J. Studies on к -casein and p -lactoglobulin genetic polymorphism and on milk plasma: Thesis // Swedish University of Agricultural Sciences .Uppsala. 1986.-71 p.

140. Schaar J. Variation in Milk protein composition. Studies on k-casein and B-lactoglobulin genetic polymorphism and milk plasmin. Thesis. Uppsala. -1986. -71 p.

141. Schliebin S., Erhardt G., Senft В., Genotyping of bovine kappa-casein folloving DNA seqence amplification and direct sequenting of kappa Cn-E PCR product // Anim. Genet. -1991. -V.22. P.333-342.

142. Separation of y-casein / Hipp N., Groves M., Custer J., McMeekin T. // Amer. Schem. Soc. -1950. -V.72. -P. 4928.

143. Separation of a-, (3- and y-casein / Hipp N., Groves M., Custer J., McMeekin T. //Amer. Schem. Soc. -1952. -V.35. -P. 272.

144. Shuster D.E., Kehrli M.E., Ackermann M., Gilbert R.O. Identification and prevalence of a genetic defect that causes leukocyte adhesion deficiency in Holstein cattle // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. -1992. -V.89. -P.9225-9229.

145. Smith L.M., Fantozzi P., Greveling R.K. Study of tryglicerid-protein interaction using a microemulsion-filtration method // J. Am. Chem. Oil Soc. -1983. -V.60. -P.691-714.

146. Stasio L.Di., Merlin P., 1979

147. Studies on protein polymorphism in pigs, horses and cattle Blood groups of animals / Graetzer M.A., Hesselholt M., Moustgaard J., Thvmann M. // Proceedings 9th European animal blood group conference. -Prague. -1965. -P.279-293.

148. Swaisgood H.E., Brunner J.R. Characterisazion of к-casein obtained by fractionation with trichloracetic acid in a concentrated urea solution // J. Dairy Sci. -1962. V.45. -P. 1.

149. Swaisgood H.E., Brunner J.R. Characteristics of к-casein in the presence of various dissociation agents // Biochem. Biophys. Res. Commun -1963. -V.12.-P. 148.

150. The efficiency of casein in utilization in dairy cows // Fraser D.L., Orskov E.R., Whitelaw E.G., McLeod N.A. // Livestock Prod. Sci. -1990. -Y.25. -P.67-78.

151. The structure of J3-lactoglobulin and its similarity to plasma retinol-binding protein / Papiz M.Z., Sawyer L., Eliopoulos E.E., North A.C.T., Findlay J.B.C., Sivaprasadaro R., Jones T.A., Newcomer M.E., Kraulis P.J. // Na. -1986. -V.324. -P.383-385.

152. Thompson M.P., Kiddy C.A. Genetic polymorphism in caseins of cow's milk. III. Isolation and properties of asl-caseins А, В and С // J. Dairy Sci. -1964. -V.47.-P. 626.

153. Voelker G.R., Bleck G.T., Wheeler M.B. Single-base polymorphisms within the 5'-flanking region of the bovine a-lactalbumin gene. -1997.-Journal of Dairy Science. V. - 80. -P.194-197.

154. Wake R.G., Baldwin R.L. Analysis of casein fractions by zone electrophresis in concentrated urea // Biochem. Biophys. Acta. -1961. -V.47. —P.225.

155. Warner R.C. Separation of a- and P-casein // J. Amer. Schem. Soc. -1944. -V.66.-P. 1725.

156. Waugh D.F. Formation and structure of casein // In: Milk proteins chemistry and molecular biology (ed.: McKenzie H.A.). -Acad. Press. NY.-1971. -P. 3-85.

157. Waugh D. The interactions of asl-, P and к-casein in micelle formation // Disc. Faraday. Soc. -1958. -V.25. -P. 186.

158. Zittle C.A., Custer J.H. Perifikation and some properties of as-casein in к-casein // J. Dairy Sci. -1963. V.46. -P. 1183.