Связь уровня пропротеиновой конвертазы субтилизин-кексинового типа 9 с показателями липидного профиля и атеросклерозом сонных артерий у пациентов с гиперхолестеринемией. тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.01.05, кандидат наук Попова, Анна Борисовна

• Попова, Анна Борисовна
• кандидат наук
• 2017

Оглавление диссертации кандидат наук Попова, Анна Борисовна

СОДЕРЖАНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА I ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Пропротеиновая конвертаза субтилизин-кексинового типа 9 и ее взаимодействие с рецептором-ЛНП

1.2 Концентрация пропротеиновой конвертазы субтилизин-кексинового типа 9 в плазме крови и регуляция ее экспрессии

1.3 Влияние медикаментозной терапии на уровень пропротеиновой конвертазы субтилизин-кексинового типа 9

1.4 Внепеченочные функции пропротеиновой конвертазы субтилизин-кексинового типа 9

1.5 Ультразвуковой метод в диагностике атеросклероза сонных артерий

1.6 Роль пропротеиновой конвертазы субтилизин-кексинового типа 9 в стратификации риска сердечнососудистых заболеваний

1.7 Ингибиторы пропротеиновой конвертазы субтилизин-кексинового типа 9

Заключение

ГЛАВА II МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1 Материал исследования

2.2 Методы обследования

2.2.1 Ультразвуковой метод обследования сонных артерий

2.2.2 Биохимический метод обследования

2.3 Статистический анализ

ГЛАВА III РЕЗУЛЬТАТЫ

3.1 Клиническая характеристика пациентов

3.2 Сравнение концентрации пропротеиновой конвертазы субтилизин-кексинового типа 9 сыворотки крови у пациентов с гиперлипидемией и здоровых лиц

3.3 Связь уровня пропротеиновой конвертазы субтилизин-кексинового типа 9 сыворотки крови с основными факторами риска сердечно-сосудистых осложнений

3.4 Сравнение уровня пропротеиновой конвертазы субтилизин-кексинового типа 9 сыворотки крови у пациентов, не находящихся на гиполипидемической терапии, и относящихся к категории очень высокого, высокого, умеренного и низкого риска развития сердечно-сосудистых осложнений

3.5 Связь уровня пропротеиновой конвертазы субтилизин-кексинового типа 9 сыворотки крови с выраженностью атеросклероза сонных артерий у пациентов с гиперлипидемией

ГЛАВА IV ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ

ВЫВОДЫ

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

АГ Артериальная гипертония

АД Артериальное давление

АСБ Атеросклеротическая бляшка

ВСА Внутренняя сонная артерия

ДИ Доверительный интервал

ГБ Гипертоническая болезнь

ИБС Ишемическая болезнь сердца

ИМТ Индекс массы тела

ЛВП Липопротеиды высокой плотности

ЛНП Липопротеиды низкой плотности

Лп(а) Липопротеид (а)

НСА Наружная сонная артерия

ОКС Острый коронарный синдром

ОСА Общая сонная артерия

ОШ Отношение шансов

ПИКС Постинфарктный кардиосклероз

Р-ЛНП Рецепторы к ЛНП

сАД Систолическое артериальное давление

дАД Диастолическое АД

СД Сахарный диабет

СГХС Семейная гиперхолестеринемия

СН Сердечная недостаточность

СКФ Скорость клубочковой фильтрации

ССЗ Сердечно-сосудистое заболевание

ССО Сердечно-сосудистые осложнения

ТГ Триглицериды

ТКИМ Толщина комплекса интима-медиа

ОХ Общий холестерин

ЧСС Частота сердечных сокращений

КТ Компьютерная томография

МРТ Магнитно-резонансная томография

PCSK9 Пропротеиновая конвертаза субтилизин-кексинового типа

EGF-A Эпидермальный фактор роста

SREBP-2 Стерол-регулирующий элемент-2

SREBP-1 Стерол-регулирующий элемент-1

IDOL Индуктор деградации Р-ЛНП

ERK Внеклеточные регулируемые киназы

mTORC1 Рапамициновый комплекс млекопитающих

HNFla Ядерный фактор 1а

PPAR Рецептор активации пролиферации пероксисом

HINFP Гистон-ядерный фактор P

SIRT 1/6 Сиртуин 1/6

HOMA Индекс инсулинорезистентности

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Связь уровня пропротеиновой конвертазы субтилизин-кексинового типа 9 с показателями липидного профиля и атеросклерозом сонных артерий у пациентов с гиперхолестеринемией.»

ВВЕДЕНИЕ

АКТУАЛЬНОСТЬ ТЕМЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Сердечно-сосудистые заболевания (ССЗ) занимают ведущее место в структуре заболеваемости и смертности населения всего мира. Только в Европе от патологии сердечно-сосудистой системы умирает около 4 млн. человек каждый год [1], в то время как в России по данным Федеральной службы государственной статистики впервые в жизни диагноз, связанный с системой кровообращения, был выставлен 4563000 обследованным гражданам. Смертность же от ССЗ в Российской Федерации за 2014г. составила 940500 человек (что составило 50% от всех смертей за указанный период) [2].

Возрастной состав лиц с ССЗ крайне разнообразен. По данным Townsend - после 65 лет от болезней сердечно-сосудистой системы женщины умирают чаще, чем мужчины (смертность женщин - 2,2 млн (55%), мужчин - 1,8 млн (45%)). Однако при анализе структуры смертности населения в возрасте до 65 лет, отмечена обратная ситуация -смертность мужчин выше, нежели женщин (490000 и 193000 соответственно) [1, 3].

Профилактика ССЗ представляет перспективное направление медицины, направленное на выявление факторов риска с последующим устранением или минимизацией их влияния на организм человека с целью снижения частоты ССЗ, и, как следствие, связанных с ними инвалидности и смертности. Профилактика должна проводиться среди населения, и ориентироваться на каждого человека, имеющего факторы риска развития ССЗ [1].

Гиперхолестеринемия входит в число основных факторов риска развития сердечно-сосудистых осложнений [1]. По данным исследования ЭССЕ РФ, наибольшая распространенность гиперхолестеринемии

встречается у относительно молодых мужчин (35-44 лет) (в среднем 70%), а также среди женщин старшего возраста (55-64 лет) (в среднем 78%) [4].

Основную роль в обмене холестерина играют рецепторы к липопротеидам низкой плотности (Р-ЛНП). Еще в 1985г. Майклу Брауну и Джозефу Голдштейну за открытие Р-ЛНП и изучение его вклада в патогенез гиперхолестеринемии была присуждена Нобелевская премия по физиологии и медицине [5].

В настоящее время очевидно, что отсутствие Р-ЛНП или их инактивация ведет к развитию нарушений липидного обмена. Открытие пропротеиновой конвертазы субтилизин/кексин типа 9 (PCSK9) в 2003г. изменило понимание проблемы дислипидемий [6]. Доказано, что подобно липопротеидам низкой плотности (ЛНП), PCSK9 служит лигандом для Р-ЛНП. Связываясь с ним прочной связью, PCSK9 приводит к деградации рецептора и не дает возможности рециркулировать ему на поверхность. Тем самым, количество Р-ЛНП уменьшается, а концентрация холестерина-ЛНП увеличивается [7, 8, 9, 10].

Мутации в гене, кодирующем PCSK9 и приводящие к снижению его активности, способствуют уменьшению уровня холестерина-ЛНП и, следовательно, снижению риска развития сердечно-сосудистых осложнений. Причем, такие мутации не приводят к неблагоприятным последствиям для жизнедеятельности организма [11, 12].

Учитывая роль PCSK9 в метаболизме холестерина, все еще остается до конца не изучен вклад этого про-белка в процесс формирования и прогрессирования атеросклероза.

ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ

Оценить уровень (концентрацию) PCSK9 сыворотки крови у пациентов с гиперхолестеринемией (ОХ>7,5 ммоль/л и/или холестерин -ЛНП>4,9 ммоль/л) и сопоставить его с показателями липидного спектра и выраженностью атеросклероза сонных артерий.

ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ

1. Сравнить уровень PCSK9 сыворотки крови у пациентов с гиперлипидемией, не принимающих терапию, и у пациентов, находящихся на терапии статинами, а также у здоровых лиц с нормальным уровнем липидов.

2. Изучить связь уровня PCSK9 сыворотки крови с основными факторами риска развития сердечно-сосудистых заболеваний.

3. Сравнить уровни PCSK9 сыворотки крови у пациентов, не находящихся на гиполипидемической терапии, и у пациентов, относящихся к категории очень высокого, высокого, умеренного и низкого риска развития сердечно-сосудистых заболеваний.

4. Изучить связь уровня PCSK9 сыворотки крови с выраженностью атеросклероза сонных артериях у пациентов с гиперлипидемией.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА

Изучена концентрация PCSK9 сыворотки крови у 241 пациента Московской агломерации (у лиц, находящихся на терапии статинами, без

гиполипидемической терапии, а так же здоровых добровольцев). Продемонстрировано отсутствие связи содержания PCSK9 крови с показателями липидного профиля. Не выявлена корреляция между уровнем PCSK9 и выраженностью атеросклеротического поражения сонных артерий.

ТЕОРЕТИЧЕСКАЯ И ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ

Отсутствие корреляции концентрации PCSK9 сыворотки крови с основными факторами риска развития атеросклероза (общим холестерином, холестерином-ЛНП, индексом массы тела), с максимальным процентом стеноза, суммарным количеством атеросклеротических бляшек и толщиной комплекса интима-медиа сонных артерий, а также не выявлено влияние артериальной гипертонии, статуса курения на уровень изучаемого про-белка, свидетельствует о том, что использование PCSK9 в клинической практике для стратификации риска и оценки тяжести атеросклероза сонных артерий нецелесообразно.

ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ

1. Концентрация PCSK9 у пациентов, принимающих статины, значимо не различалась вне зависимости от вида принимаемого препарата и его дозы.

2. Концентрация PCSK9 среди обследованных лиц варьировала в 10-кратном диапазоне: максимально - более 800 нг/мл, минимально - 85,9 нг/мл.

3. У лиц с гиперхолестеринемией, не находящихся на терапии статинами, концентрация PCSK9 не коррелировала с общим

холестерином (ОХ), холестерином-ЛНП, триглицеридами (ТГ), холестерином-липопротеидов высокой плотности (холестерин-ЛВП), липопротеидом (а), индексом массы тела (ИМТ). Концентрация PCSK9 не различалась у лиц с гипертонической болезнью (ГБ) и без нее. Статус курения также не оказывал влияния на уровень PCSK9.

4. Уровень PCSK9 положительно коррелировал с возрастом у лиц с гиперхолестеринемией, не находящихся на терапии статинами.

5. Выявлено, что уровень PCSK9 у лиц с гиперлипидемией, не находящихся на терапии статинами, в крови женщин был выше, чем у мужчин.

6. Концентрация PCSK9 в сыворотке крови лиц с гиперхолестеринемией, не находящихся на терапии статинами, достоверно не различалась в зависимости от категории сердечно-сосудистого риска.

7. Толщина комплекса интима-медиа (ТКИМ) и максимальный процент стеноза сонных артерий не зависели от концентрации PCSK9 в сыворотке крови. Концентрация пропротеин конвертазы не отличалась у лиц, имеющих атеросклеротические бляшки (АСБ) в сонных артерий и не имеющих, а также не коррелировала с их количеством.

ГЛАВА I ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Пропротеин конвертаза субтилизин/кексин 9 типа и ее взаимодействие с рецептором-ЛНП

PCSK9 является про-белком, относящимся к семейству сериновых протеаз. PCSK9 получил свое название благодаря отношению бактериального субтилизина с дрожжами Кексин и наличием девяти секреторных сериновых протеаз. Основные функции PCSK9 связаны с участием в липидном и углеводном обменах, в воспалительных реакциях и протеолетическом созревании секретируемых белков таких, как гормоны, цитокины, факторы роста и рецепторов на клеточной поверхности [6].

Первые данные о PCSK9 были получены в 2003г. Seidah и соавторами при скрининге гена, активирующегося при апоптозе нейронов. Этот ген, расположенный в локусе 1-й хромосомы рядом с локусами, ответственными за секрецию Р-ЛНП и АроВ, получил название протеин-конвертаза 1 (NARC-1) [6].

В то же время Abifadel с коллегами определили мутации в гене, кодирующем PCSK9, в двух французских семьях с аутосомно-доминантной формой семейной гиперхолестеринемии, у которых были исключены известные мутации генов Р-ЛНП и ApoB [13].

Несколько позже, в 2005г, были выявлены мутации, приводящие к снижению способности конвертазы разрушать Р-ЛНП и тем самым влияющие на риск развития ишемической болезни сердца (ИБС) [14, 15]. Было установлено, что при мутациях Y142X и С679Х в популяции афро-американцев уровень холестерина-ЛНП уменьшался на 28%, что приводило к снижению риска развития ИБС на 88%, в то время как мутации R46L у лиц европеоидной расы приводили к сокращению на 15% уровня холестерина-ЛНП, что вызывало снижение риска ИБС на 47% [15].

В дальнейшем связь между мутацией R46L и риском ИБС была тщательно изучена в трех независимых датских исследованиях [16]. В мета-анализах было показано, что мутации R46L приводили к уменьшению на 12% уровня холестерина-ЛНП и снижению риска ИБС на 28% [16].

В дальнейшем мутации в гене PCSK9 были зарегистрированы и у пациентов из других стран (США, штат Юта), Норвегии и Великобритании) [17-19].

Несмотря на то, что в настоящее время описан ряд мутаций в гене, кодирующем PCSK9, распространенность данных мутаций в популяции значительно ниже, чем распространенность дефектов в Р-ЛНП и апоВ [20].

PCSK9 сегодня является перспективной мишенью для исследований. В связи с этим банк мутаций постоянно дополняется и расширяется.

Семейство сериновых протеиназ, помимо PCSK9, включает в себя также РС1/3, РС2, фурин, РС4, РС5/6, РАСЕ4, РС7, SKI-1/S1P. Гены, кодирующие эти протеазы, получили название соответственно Pcsk1, Pcsk2, Билл, Pcsk4, Pcsk5, Pcsk6, Pcsk7, МЫрэ1 и PCSK9 (кодирует соответствующий про-белок). Все эти сериновые протеазы, кроме PCSK9, расщепляются самостоятельно на один или два основных остатка (РС1/3, РС2, фурин, РС4, РС5/6, РАСЕ4, РС7) или на два неосновных остатка ^Ы-1/S1P и PCSK9). Но только для расщепления PCSK9 необходим субстрат для ее активации [21].

PCSK9 кодируется геном, содержащим 12 экзонов и расположенным на хромосоме 1р32.3 [22]. PCSK9 секретируется в большей степени в печени, но его выработка происходит также в кишечнике, почках, легких, селезенке и клетках центральной нервной системы [23].

PCSK9 синтезируется в виде предшественника про-PCSK9. Про-PCSK9 - это белок, включающий 692 аминокислоты с молекулярной массой 72 кДа, состоящий из сигнального домена, К-концевого про-домена, каталитического домена, С-концевого цистеина и домена, богатого гистидином [24].

Синтез предшественника PCSK9 происходит в эндоплазматическом ретикулуме. Связывание про-PCSK9 с Р-ЛНП способствует транспорту Р-ЛНП из эндоплазмотического ретикулума в сторону комплекса Гольджи, где к Р-ЛНП присоединяются зрелые остатки углевода. Транспорт про-PCSK9 к комплексу Гольджи зависит от наличия белка Sec24A. В аппарате Гольджи про-домен про-PCSK9 аутокаталитически отщепляется, но остается нековалентно связанным со зрелой PCSK9, помогая формированию PCSK9 и блокируя его каталическую активность. Связывание про-PCSK9 с Р-ЛНП способствует самостоятельному каталитическому расщеплению PCSK9 [25].

Некоторые мутации PCSK9 (например, замена аминокислот C678X или S462P) препятствуют высвобождению PCSK9 из эндоплазмотического ретикулума из-за потери части продомена [26-28].

Через аппарат Гольджи и транс-Гольджи, PCSK9 проходит совместно с белком сортилином [29]. У мышей с нокаутированным геном, кодирующем сортилин, концентрация PCSK9 в плазме уменьшается. Таким образом, можно предположить, что подобное взаимодействие «белок-белок» необходимо для клеточной секреции PCSK9 [29]. У здоровых людей уровень циркулирующего PCSK9 прямо коррелирует с уровнем в плазме сортилина [29]. Замена аминокислот S127R и D124G снижает секрецию PCSK9 в гепатоцитах и повышает внутриклеточную экспрессию PCSK9 [30]. Вероятнее всего, частичный протеолиз PCSK9 необходим для его клеточной секреции [31].

Главной функцией PCSK9 является связывание с Р-ЛНП на поверхности гепатоцита. PCSK9, разрушая Р-ЛНП, не позволяет ему рециркулировать из клетки к поверхности клеточной мембраны. Учитывая тот факт, что зрелые Р-ЛНП и PCSK9 находятся в комплексе Гольджи, вероятно процесс деградации Р-ЛНП с помощью PCSK9 протекает или начинается в комплексе Гольджи или в комплексе транс-Гольджи (Рис. 1Б) [7, 8, 9].

Рис. 1. Роль PCSK9 в регуляции ЛНП

1А 1Б

А. синтез и утилизация ЛНП в норме

1. Связывание Р-ЛНП с ЛНП

2. Эндоцитоз комплекса [Р-ЛНП + ЛНП] в эндосому

3. Отделение и экспрессия Р-ЛНП на поверхность клетки

4. Утилизация ЛНП в лизосоме

Б. синтез, секреция PCSK9 и влияния на ЛНП

1. Связывание Р-ЛНП с РСБК9 и ЛНП

2. Эндоцитоз комплекса [Р-ЛНП + РСБК9 + ЛНП] в эндосому

3. Разрушение комплекса [Р-ЛНП + РСБК9 + ЛНП] в лизосоме

Основной функцией секретируемого внеклеточного РСБК9 является посттрансляционное регулирование количества Р-ЛНП на клеточной поверхности. Секретируемый РСБК9 связывается с эпидермальным фактором роста А (ЕОБ-А) в области Р-ЛНП [32, 33, 34]. Для такого связывания каталитическая активность РСБК9 не требуется [35, 36], но необходимо изменение рН и изменение зарядов эпитопов РСБК9 [37, 38]. Связывание комплекса Р-ЛНП/ЛНП/РСБК9 происходит в нейтральной среде мембраны гепатоцита и зависит от концентрации кальция [32, 10, 39]. Весь комплекс перемещается в клетку в составе кларитинового пузырька. В дальнейшем кислая среда в эндосоме способствует усилению связи между Р-ЛНП и РСБК9, и приводит к отделению ЛНП. Усиление

связи в кислой среде происходит благодаря установлению солевых мостиков между про-доменом PCSK9 и бета-пропеллерным доменом Р-ЛНП, а положительно заряженный С-концевой домен PCSK9 связывается с отрицательно заряженным лиганд-связывающим доменом Р-ЛНП [10, 40, 41]. Такое взаимодействие блокирует Р-ЛНП в открытой конформации. Невозможность рецептора принять закрытую конфигурацию в эндосоме, исключает рецеркуляцию его на поверхность мембраны клетки. Тем самым количество Р-ЛНП уменьшается, а концентрация ЛНП в плазме крови увеличивается [10, 42].

Мутации в EGF-А связывающем домене в Р-ЛНП ассоциируются с гиперхолестеринемией, связанной с увеличением PCSK9 [43].

Разрушение PCSK9 происходит с помощью фурина и белковых конвертаз 5/6 [26] на аминокислоты Arg 218 и Gln 219 [44]. PCSK9, расщепленный фурином (55 кДа), по-прежнему активен и связывается с Р-ЛНП, однако, активность его снижается вдвое [45]. Инъекции PCSK9, расщепленного фурином, мышам приводят к увеличению ЛНП, и уменьшению Р-ЛНП на поверхности клетки [45].

На уровень PCSK9 влияют и многие другие белки крови [46]. К одному из таких белков относится аннексин A2, который присутствует в ядре, цитозоле и в мембранах различных клеток [47]. N-концевой повтор R1 аннексина 2 связывается с C-концевым доменом PCSK9. Такое взаимодействие приводит к уменьшению внеклеточной активности Р-ЛНП. У мышей, нокаутированных по гену, кодирующему аннексин А2, концентрация PCSK9 в плазме удваивалась, и, в результате этого, снижалась экспрессия Р-ЛНП и увеличивалась концентрация ЛНП [48]. Благодаря этому аннексин A2 рассматривается как эндогенный ингибитор PCSK9 [47].

Таким образом, PCSK9 играет ведущую роль в обмене холестерина через регуляцию уровня экспрессии Р-ЛНП. Связываясь с Р-ЛНП, PCSK9 как «распорка» удерживает Р-ЛНП в открытом положении, не давая ему

принять закрытую конформацию, необходимую для рециркуляции на поверхность клетки. Это приводит к уменьшению количества доступных Р-ЛНП и, как следствие, увеличению ЛНП в сыворотке крови.

1.2. Концентрация и регуляция экспрессии пропротеиновой конвертазы субтилизин-кексинового типа 9 в плазме крови

На уровень PCSK9 оказывают влияние ряд факторов. Известно, что в процессе голодания уменьшается концентрация холестерина в сыворотке крови, и увеличивается его концентрация в гепатоцитах. Соответственно, уменьшается активность стерол-регулирующего элемента-2 (SREBP-2), что приводит к значительному подавлению экспрессии PCSK9 [49, 50]. После приема пищи, уровень PCSK9 наоборот, увеличивается [49].

Кроме того, концентрация в плазме PCSK9 меняется в течение суток [51]. Максимальное содержание PCSK9 приходится на ранние утренние часы и снижается к полудню [52].

В ряде работ показано, что концентрация PCSK9 выше у женщин, чем у мужчин [53]. Кроме того, с возрастом уровень плазменного PCSK9 у мужчин уменьшается, а у женщин, наоборот, увеличивается [54]. Данный факт объясняется вероятнее всего влиянием эстрогенов - повышенный уровень эстрогенов способствует уменьшению экспрессии PCSK9 [55].

В настоящее время нет референсных значений уровня PCSK9. По данным существующих на сегодняшний день работ, концентрация PCSK9 в плазме варьирует от 30 [56] до 3000 нг/мл [53]. Несмотря на очевидный факт влияния PCSK9 на концентрацию холестерина-ЛНП в плазме крови, корреляция их содержания продемонстрирована не во всех исследованиях [53, 57]. В некоторых работах корреляция с ЛНП прослеживается и у детей [58].

У взрослых людей в плазме крови повышение уровня PCSK9 на 100 нг/мл приводит к увеличению ЛНП на 0,20-0,25 ммоль/л [59].

Повлиять на уровень РСБК9 можно непосредственно удаляя его из кровотока. При аферезе липидов происходит удаление зрелых и фурин-расщепленных форм PCSK9, позволяющее добиться снижения уровня РСБК9 плазмы на 50% [30].

На регуляцию экспрессии генов РСБК9 оказывают влияние и ряд факторов транскрипции и ко-факторов.

К одному из таких факторов относится стерол-регулирующий элемент (БЯЕВР-Ш). Данный фактор стимулирует транскрипцию гена Р-ЛНП и включается в момент, когда концентрация холестерина-ЛНП в крови снижается и уменьшается его захват из кровотока. Тем самым увеличивается концентрация Р-ЛНП и их экспрессия на поверхность гепатоцита. Но SREBP 2 регулирует не только выработку Р-ЛНП, но и образование PCSK9. Одномоментно с увеличением количество Р-ЛНП, БЯЕВР 2 стимулирует и образование PCSK9, что приводит к разрушению первых. В результате чего концентрация холестерина-ЛНП в кровотоке возрастает [60].

Экспрессия БЯЕВР 1 в гепатоцитах также влияет на уровень РСБК9. В исследованиях показано, что увеличиваясь под влиянием инсулина, БЯЕВР 1 также способен увеличивать концентрации PCSK9 [61]. Однако инсулин активирует рапамициновый комплекс млекопитающих 1 (шТОЯС1) / протеинкиназы 5 путем ингибирования ядерного фактора 1а (ИКР 1а) в гепатоцитах. Такое взаимодействие ведет к уменьшению экспрессии РСБК9 в гепатоцитах [62]. Схожий эффект наблюдается также в период менопаузы у женщин с ожирением [63]. У здоровых мужчин суточная гиперинсулинемия не изменяет концентрацию РСБК9 в плазме [64]. Экспрессия РСБК9 у таких людей схожа с экспрессией у здоровых людей, пациентов с нарушением толерантности к глюкозе и сахарным

диабетом 2 типа [65]. Однако оценка зависимости концентрации PCSK9 от уровня инсулина требует проведения дополнительных исследований [66].

Рецептор активации пролиферации пероксисом (PPAR) регулирует экспрессию PCSK9: PPAR а, уменьшая активность промотора PCSK9, тем самым ослабляет экспрессию PCSK9. Напротив, PPAR у, увеличивает экспрессию PCSK9 в гепатоцитах. Кроме того, на концентрацию PCSK9 влияют и ряд других факторов транскрипции - фарнезоидный рецептор Х активируется желчными кислотами, уменьшает концентрацию PCSK9 [67]; печеночный X рецептор активируется оксистеролами и повышает концентрацию PCSK9 [61, 68]; гистон-ядерный фактор P (HINFP) повышает концентрацию PCSK9 [69]. Также Сиртуин 1 и 6 (SIRT 1/6), а так же дезацетилаза гистонов подавляют экспрессию гена PCSK9 [70], способствуя сокращению секреции PCSK9 и повышению экспрессии Р-ЛНП на гепатоцитах, тем самым снижая содержание ЛНП [71].

Адипокин резистин, выделенный из жировой ткани, также оказывает влияние на экспрессию PCSK9. Увеличение его концентрации в крови способствует повышению экспрессии PCSK9, тем самым уменьшая количество Р-ЛНП на поверхности гепатоцита [72].

Еще одним белком, играющим важную роль в интернализации и деградации Р-ЛНП, является индуктор деградации Р-ЛНП (IDOL) [73, 74]. IDOL, связываясь с С-концом Р-ЛНП, способствует клатрин-независимому эндоцитозу Р-ЛНП [68, 75]. Кроме того, IDOL стимулирует SREBP 2 и тем самым увеличивает экспрессию PCSK9 путем сокращения количества Р-ЛНП. Мутации IDOL (pArg266X) приводят к полной потере его функции, тем самым способствуя снижению концентрации в сыворотке крови ЛНП [76].

В настоящее время необходимы дополнительные исследования, которые бы позволили более точно понять механизмы регуляции экспрессии генов PCSK9.

1.3. Влияние медикаментозной терапии на уровень пропротеиновой конвертазы субтилизин-кексинового типа 9

Описано, что на концентрацию РСБК9 значительное влияние оказывают некоторые медикаментозные препараты.

Статины увеличивают концентрацию факторов транскрипции БЯЕВР 2 и тем самым способствуют увеличению экспрессии РСБК9 [77, 78, 79]. Кроме того, статины увеличивают экспрессию НЫБ1а в гепатоцитах, что способствует повышению экспрессии РСБК9 в большей степени, чем Р-ЛНП [80]. В некоторых работах увеличение экспрессии РСБК9 в процессе лечения статинами коррелирует со статин-индуцированным снижением уровня ЛНП [81].

На сегодняшний день имеется незначительного количество работ по изучению влияния доз статинов на степень увеличения PCSK9. Имеющиеся работы были проведены на малой выборке пациентов, находящихся на терапии аторвастатином. Одной из таких работ является исследование китайских ученых во главе с У.Ь. Оио. Они проанализировали данные 66 пациентов, сделали вывод о том, что доза аторвастатина, а также длительность приёма оказывали существенное влияние на содержание PCSK9 в сыворотке. Это исследование содержало 2 протокола - первый оценивал действие аторвастатина на протяжении 4 и 8 недель приема, а второй - краткосрочный эффект через 24 часа после приема препарата. Первый протокол продемонстрировал, что аторвастатин в дозе 10 мг/сут повышал уровень PCSK9 в сыворотке крови на 5-7% через 4 недели приема и оставался на таком же уровне и на 8-й неделе от начала терапии. Концентрация PCSK9 у пациентов, принимающих аторвастатин в дозе 20 мг/сут, увеличивалась на 30% через 4 недели и на 35% через 8 недель (р=0,009 и р=0,002 соответственно). Исследователи также выявили, что прием однократной дозы аторвастатина 10 мг уже через 24 часа

повышал уровень PCSK9 в сыворотке крови на 13%, а прием аторвастатина в дозе 80 мг увеличивал содержание изучаемого про-белка на 27% (р=0,042 и р=0,001 соответственно) [82].

Другие исследования продемонстрировали увеличение PCSK9 на 34% на фоне терапии атовастатином 40 мг/сут [83] и на 47% на фоне терапии 80 мг/сут того же препарата [84].

Фибраты способны влиять на экспрессию PCSK9 в гепатоцитах путем активации PPARa [85, 86, 87]. Однако в настоящее время до конца не ясен механизм их влияния. В ряде работ показано, что таким образом фибраты способны снижать уровень PCSK9, однако, в других работах продемонстрировано повышение уровня PCSK9 в процессе краткосрочного лечения [88].

Ингибитор абсорбции холестерина в кишечнике (Эзетимиб) не увеличивает уровень PCSK9 у здоровых добровольцев [78]. Однако он может вызывать вторичное увеличение PCSK9, уменьшая концентрацию ЛНП в плазме как было показано в исследованиях, проведенных на приматах [89].

Ингибиторы белка-переносчика эфиров холестерина (СЕТР), подавляют экспрессию PCSK9 и Р-ЛНП путем снижения SREBP 2 в гепатоцитах [90].

Рапамицин, как иммунодепрессант, ослабляет активацию mTORC1, увеличивая тем самым активность HNFla и впоследствии экспрессию PCSK9 [62].

Холекинетик берберин также оказывает влияние на экспрессию PCSK9 в гепатоцитах. Ингибируя фактор транскрипции HNFla, берберин способствует снижению уровня PCSK9 [91].

1.4. Внепеченочные функции пропротеиновой конвертазы

субтилизин-кексинового типа 9

PCSK9, обнаруженная впервые при апоптозе нейронов и известная ранее как NARC-1 [6], играет важную роль в работе нервной системы [92] и в постоянных концентрациях присутствует в спинномозговой жидкости [93, 94]. В ряде работ выявлена связь уровня пропротеин конвертазы с развитием заболеваний центральной нервной системы. В частности, в некоторых работах, проведенных на мышах, показано, что наиболее активная выработка PCSK9 встречается у мышей в постнатальном периоде в нейронах мозжечка. Так же концентрация PCSK9 увеличивалась после перенесенного ишемического инсульта [95].

Кроме того, высказывается мнение, что PSCK9 играет роль в возникновении сосудистой деменции и болезни Альцгеймера за счет включения ее в деградацию в-секретазы (в-site amyloid precursor protein cleaving enzyme 1) и амилоидного бета-пептида [96].

Несмотря на то, что основную функцию PCSK9 выполняет в печени, в клетках кишечника PCSK9 также играет очень важную роль для гомеостаза липопротеинов. PCSK9 повышает внутриклеточную экспрессию апопротеина B48 [97, 98] и снижает активность ГМГ-КоА-редуктазы и ацил-СоА-холестерин-трансферазы [97] и увеличивает концентрацию микросомального переносчика белка [94]. Кроме того, повышение концентрации PCSK9 способствует снижению экспрессии Р-ЛНП на базолатеральной мембране, что, соответственно, приводит к снижению поглощения ЛНП [97, 66].

Однако все эти работы малочисленны. Вероятно, после введения в лечебную практику моноклональных антител, блокирующих PCSK9, интерес к экстра-печеночным механизмам влияния PCSK9 возрастет.

1.5. Ультразвуковой метод в диагностике атеросклероза сонных

артерий

Гиперлипидемия является одним из основных факторов риска сердечно-сосудистых осложнений. Повышение уровня холестерина-ЛНП, атерогенного липопротеида, непосредственно ведет к развитию атеросклероза [1]. В зависимости от концентрации холестерина-ЛНП крови, а также выраженности атеросклероза, имеются различные подходы к профилактике сердечно-сосудистых заболеваний и их лечению. Своевременная диагностика атеросклеротических изменений артерий позволяет не только выявить патологическое состояние с целью определения тактики лечения, но и прогнозировать риски развития сердечно-сосудистых осложнений, таких как инсульт и инфаркт миокарда, независимо от традиционных факторов риска сердечно-сосудистых заболеваний [99].

Инвазивные методы диагностики состояния артериальной стенки (в частности сонных артерий) (ангиография) в настоящее время вытесняются неинвазивными - ультразвуковым дуплексным сканированием, компьютерной томографией (КТ) и магнитно-резонансной томографией (МРТ) [100, 101, 102].

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Попова, Анна Борисовна, 2017 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. ESC/EAS Guidelines for the Management of Dyslipidaemias. European Heart Journal. 2016. - 37, 2999-3058.

2. Российский статистический ежегодник - 2015 г. [Электронный ресурс], - http://www.gks.ru/bgd/regl/b15_13/Main.htm - статья в интернете

3. Townsend N, Nichols M, Scarborough P, Rayner M. Cardiovascular disease in Europe—epidemiological update 2015. Eur Heart J. 2015; 36:2696 - 705.

4. Чазова ИЕ, Жернакова ЮВ, Ощепкова ЕВ и соавт. Распространенность факторов риска сердечно-сосудистых заболеваний в российской популяции больных артериальной гипертонией. Кардиология. 2014. 10. - c. 4-12.

5. Goldstein JL, Brown MS. The LDL receptor. Arterioscler Thromb Vasc Biol. - 2009; 29 (4): 431-8.

6. Seidah NG, Benjannet S, Wickham L, et al. The secretory proprotein convertase neural apoptosis-regulated convertase 1 (NARC-1): liver regeneration and neuronal differentiation. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2003; 100: 928-933.

7. Farnier M. PCSK9: From discovery to therapeutic applications. Archives of Cardiovascular Diseases. 2014; Volume 107, Issue 1: 58-66

8. Maxwell KN, Breslow JL. Adenoviral-mediated expression of Pcsk9 in mice results in a low-density lipoprotein receptor knockout phenotype. Proc Natl Acad Sci USA. 2004; 101: 7100-5.

9. Maxwell KN, Fisher EA, Breslow JL. Overexpression of PCSK9 accelerates the degradation of the LDLR in a post-endoplasmic reticulum compartment. Proc Natl Acad Sci USA. 2005; 102: 2069-74.

10. Surdo PL, Bottomley MJ, Calzetta A, et al. Mechanistic implications for LDL receptor degradation from the PCSK9/LDLR structure at neutral pH. EMBO Rep. 2011; 12: 1300-5.

96

11. Kathiresan S, Melander O, Anevski D, et al. Polymorphisms associated with cholesterol and risk of cardiovascular events. N Engl J Med. -2008. - № 358. - P. 1240-9.

12. Huang CC, Fornage M, Lloyd-Jones DM, et al. Longitudinal association of PCSK9 sequence variations with low-density lipoprotein cholesterol levels: the Coronary Artery Risk Development in Young Adults Study. // CircCardiovasc Genet. - 2009. - № 2(4). - P. 354-361.

13. Abifadel M, Varret M, Rabes JP, et al. Mutations in PCSK9 cause autosomal dominant hypercholesterolemia. Nat. Genet. 2003; 34: 154-156.

14. Cohen JC, Pertsemlidis A, Kotowski IK, et al. Low LDL cholesterol in individuals of African descent resulting from frequent nonsense mutations in PCSK9. Nat Genet. 2005; 35: 161-5

15. Cohen JC, Boerwinkle E, Mosley Jr TH, et al. Sequence variations in PCSK9, low LDL, and protection against coronary heart disease. N Engl J Med. 2006; 354: 1264-72

16. Benn M, Nordestgaard BG, Grande P, et al. PCSK9 R46L, low-density lipoprotein cholesterol levels, and risk of ischemic heart disease: 3 independent studies and meta-analyses. J Am Coll Cardiol. 2010; 55: 2833-42

17. Timms KM, Wagner S, Samuels ME, et al. A mutation in PCSK9 causing autosomal-dominant hypercholesterolemia in a Utah pedigree. Hum. Genet. 2004; 114: 349-53.

18. Leren TP. Mutations in the PCSK9 gene in Norwegian subjects with autosomal dominant hypercholesterolemia. Clin. Genet. 2004; 65: 419422.

19. Naoumova RP, Tosi I, Patel D, et al. Severe hypercholesterolemia in four British families with the D374Y mutation in the PCSK9 gene: long-term follow-up and treatment response. Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol.2005; 25: 2654-60.

20. Humphries SE, Whittall RA, Hubbart CS, et al. Genetic causes of familial hypercholesterolemia in patients in the UK: relation to plasma lipid levels and coronary heart disease risk. J. Med. Genet. 2006; 43: 943-9.

21. Seidah NG. The proprotein convertases, 20 years later. Methods Mol Biol. 2011; 768: 23-57.

22. Benjannet S, Rhainds D, Essalmani R, et al. NARC-1/PCSK9 and its natural mutants: zymogen cleavage and effects on the low density lipoprotein (LDL) receptor and LDL cholesterol. J. Biol. Chem. 2004; 279: 48865-75.

23. Norata GD, Tibolla G, Catapano AL. Targeting PCSK9 for hypercholesterolemia. Annu Rev Pharmacol Toxicol. 2014; 54: 273-93.

24. Denis M, Marcinkiewicz J, Zaid A, et al. Gene inactivation of proprotein convertase subtilisin/kexin type 9 reduces atherosclerosis in mice. Circulation. 2012; 125: 894-901.

25. Chen XW, Wang H, Bajaj K, et al. SEC24A deficiency lowers plasma cholesterol through reduced PCSK9 secretion. 2013. Elife 2:e00444. doi:10.7554/eLife.00444;00444

26. Benjannet S, Rhainds D, Hamelin J, et al. The proprotein convertase (PC) PCSK9 is inactivated by furin and/or PC5/6A: functional consequences of natural mutations and post-translational modifications. J Biol Chem. 2006; 281: 30561-72.

27. Cameron J, Holla OL, Laerdahl JK, et al. Mutation S462P in the PCSK9 gene reduces secretion of mutant PCSK9 without affecting the autocatalytic cleavage. Atherosclerosis. 2009; 203: 161-5.

28. Du F, Hui Y, Zhang M, et al. Novel domain interaction regulates secretion of proprotein convertase subtilisin/kexin type 9 (PCSK9) protein. J Biol Chem. 2011; 286: 43054-61.

29. Gustafsen C, Kjolby M, Nyegaard M, et al. The hypercholesterolemia-risk gene SORT1 facilitates PCSK9 secretion. Cell Metab.2014; 19: 310-8.

30. Homer VM, Marais AD, Charlton F, et al. Identification and characterization of two non-secreted PCSK9 mutants associated with familial

98

hypercholesterolemia in cohorts from New Zealand and South Africa. Atherosclerosis. 2008; 196: 659-66.

31. Chorba JS, Shokat KM. The proprotein convertase subtilisin/kexin type 9 (PCSK9) active site and cleavage sequence differentially regulate protein secretion from proteolysis. J Biol Chem. 2014; 289: 29030-43.

32. Bottomley MJ, Cirillo A, Orsatti L, et al. Structural and biochemical characterization of the wild type PCSK9-EGF(AB) complex and natural familial hypercholesterolemia mutants. J Biol Chem. 2009; 284: 1313-23.

33. Chen Y, Wang H, Yu L, et al. Role of ubiquitination in PCSK9-mediated low-density lipoprotein receptor degradation. Biochem Biophys Res Commun. 2011; 415: 515-8.

34. Zhang DW, Lagace TA, Garuti R, et al. Binding of proprotein convertase subtilisin/kexin type 9 to epidermal growth factor-like repeat A of low density lipoprotein receptor decreases receptor recycling and increases degradation. J Biol Chem. 2007; 282: 18602-12.

35. Li J, Tumanut C, Gavigan JA, et al. Secreted PCSK9 promotes LDL receptor degradation independently of proteolytic activity. Biochem J. 2007; 406: 203-7.

36. McNutt MC, Lagace TA, Horton JD. Catalytic activity is not required for secreted PCSK9 to reduce low density lipoprotein receptors in HepG2 cells. J Biol Chem. 2007; 282: 20799-803.

37. Holla OL, Cameron J, Tveten K, et al. Role of the C-terminal domain of PCSK9 in degradation of the LDL receptors. J Lipid Res. 2011; 52: 1787-94.

38. Holla OL, Laerdahl JK, Strom TB, et al. Removal of acidic residues of the prodomain of PCSK9 increases its activity towards the LDL receptor. Biochem Biophys Res Commun. 2011; 406: 234-8.

39. Kwon HJ, Lagace TA, McNutt MC, et al. Molecular basis for LDL receptor recognition by PCSK9. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2008; 105: 1820-5.

40. Yamamoto T, Lu C, Ryan RO. A two-step binding model of PCSK9 interaction with the low density lipoprotein receptor. J. Biol. Chem. 2011; 286: 5464-70.

41. Tveten K, Holla 0L, Cameron J, S et al. Interaction between the ligand-binding domain of the LDL receptor and the C-terminal domain of PCSK9 is required for PCSK9 to remain bound to the LDL receptor during endosomal acidification. Hum. Mol. Genet. 2012; 21: 1402-9.

42. Blacklow SC. Versatility in ligand recognition by LDL receptor family proteins: advances and frontiers. Curr. Opin. Struct. Biol. 2007; 17: 41926.

43. McNutt MC, Kwon HJ, Chen C, et al. Antagonism of secreted PCSK9 increases low density lipoprotein receptor expression in HepG2 cells. J Biol Chem. 2009; 284: 10561-70.

44. Essalmani R, Susan-Resiga D, Chamberland A, et al. In vivo evidence that furin from hepatocytes inactivates PCSK9. J Biol Chem. 2011; 286: 425763.

45. Lipari MT, Li W, Moran P, et al. Furin-cleaved proprotein convertase subtilisin/kexin type 9 (PCSK9) is active and modulates low density lipoprotein receptor and serum cholesterol levels. J Biol Chem. 2012; 287: 43482-91.

46. Xu W, Liu L, Hornby D. c-IAP1 binds and processes PCSK9 protein: linking the c-IAP1 in a TNF-alpha pathway to PCSK9-mediated LDLR degradation pathway. Molecules. 2012; 17: 12086-101.

47. Mayer G, Poirier S, Seidah NG. Annexin A2 is a C-terminal PCSK9-binding protein that regulates endogenous low density lipoprotein receptor levels. J Biol Chem. 2008; 283: 31791-801.

48. Seidah NG, Poirier S, Denis M, et al. Annexin A2 is a natural extrahepatic inhibitor of the PCSK9-induced LDL receptor degradation. PLoS One. 2012; 7:e41865.

49. Browning JD, Horton JD. Fasting reduces plasma proprotein convertase subtilisin/kexin type 9 and cholesterol biosynthesis in humans. J. Lipid Res. 2010; 51: 3359-63.

50. Wu M, Dong B, Cao A, et al. Delineation of molecular pathways that regulate hepatic PCSK9 and LDL receptor expression during fasting in normolipidemic hamsters. Atherosclerosis. 2012; 224: 401-10.

51. Cariou B, Langhi C, Le BM, et al. Plasma PCSK9 concentrations during an oral fat load and after short term high-fat, high-fat high-protein and high-fructose diets. Nutr Metab (Lond). 2013; 10: 4.

52. Persson L, Cao G, Stahle L, et al. Circulating proprotein convertase subtilisin kexin type 9 has a diurnal rhythm synchronous with cholesterol synthesis and is reduced by fasting in humans. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 2010; 30: 2666-72.

53. Lakoski SG, Lagace TA, Cohen JC, et al. Genetic and metabolic determinants of plasma PCSK9 levels. J Clin Endocrinol Metab. 2009; 94: 2537-43.

54. Baass A, Dubuc G, Tremblay M, et al. Plasma PCSK9 is associated with age, sex, and multiple metabolic markers in a population-based sample of children and adolescents. Clin Chem. 2009; 55: 1637-45.

55. Persson L, Henriksson P, Westerlund E, et al. Endogenous estrogens lower plasma PCSK9 and LDL cholesterol but not Lp(a) or bile acid synthesis in women. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 2012; 32: 810-4.

56. Chernogubova E, Strawbridge R, Mahdessian H, et al. Common and low-frequency genetic variants in the PCSK9 locus influence circulating PCSK9 levels. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 2012; 32: 1526-34.

57. Alborn WE, Cao G, Careskey HE, et al. Serum proprotein convertase subtilisin kexin type 9 is correlated directly with serum LDL cholesterol. Clin Chem. 2007; 53: 1814-9.

58. Araki S, Suga S, Miyake F, I et al. Circulating PCSK9 levels correlate with the serum LDL cholesterol level in newborn infants. Early Hum Dev. 2014; 90: 607-11.

59. Lambert G, Petrides F, Chatelais M, et al. Elevated plasma PCSK9 level is equally detrimental for patients with nonfamilial hypercholesterolemia and heterozygous familial hypercholesterolemia, irrespective of low-density lipoprotein receptor defects. J Am Coll Cardiol. 2014; 63: 2365-73.

60. Dubuc G, Chamberland A, Wassef H, et al. Statins upregulate PCSK9, the gene encoding the proprotein convertase neural apoptosis-regulated convertase-1 implicated in familial hypercholesterolemia. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 2004; 24: 1454-9.

61. Costet P, Cariou B, Lambert G, et al. Hepatic PCSK9 expression is regulated by nutritional status via insulin and sterol regulatory element-binding protein 1c. J Biol Chem. 2006; 281: 6211-8.

62. Ai D, Chen C, Han S, et al. Regulation of hepatic LDL receptors by mTORC1 and PCSK9 in mice. J Clin Invest. 2012; 122: 1262-70.

63. Awan Z, Dubuc G, Faraj M, et al. The effect of insulin on circulating PCSK9 in postmenopausal obese women. Clin Biochem. 2014; 47: 1033-9.

64. Kappelle PJ, Lambert G, Dullaart RP. Plasma proprotein convertase subtilisin-kexin type 9 does not change during 24 h insulin infusion in healthy subjects and type 2 diabetic patients. Atherosclerosis. 2011; 214: 432-5.

65. Brouwers MC, Troutt JS, van Greevenbroek MM, et al. Plasma proprotein convertase subtilisin kexin type 9 is not altered in subjects with impaired glucose metabolism and type 2 diabetes mellitus, but its relationship with non-HDL cholesterol and apolipoprotein B may be modified by type 2 diabetes mellitus: the CODAM study. Atherosclerosis. 2011; 217: 263-7.

66. Rainer Schulz, Klaus-Dieter Schlüter, et al. Molecular and cellular function of the proprotein convertase subtilisin/kexin type 9 (PCSK9). Basic Res Cardiol. 2015; 110 (2): 4. Published online 2015 Jan 20. doi: 10.1007/s00395-015-0463-z

67. Langhi C, Le MC, Kourimate S, et al. Activation of the farnesoid X receptor represses PCSK9 expression in human hepatocytes. FEBS Lett. 2008; 582: 949-55.

68. Scotti E, Hong C, Yoshinaga Y, et al. Targeted disruption of the idol gene alters cellular regulation of the low-density lipoprotein receptor by sterols and liver x receptor agonists. Mol Cell Biol. 2011; 31: 1885-93.

69. Li H, Liu J. The novel function of HINFP as a co-activator in sterol-regulated transcription of PCSK9 in HepG2 cells. Biochem J. 2012; 443: 75768.

70. Tao R, Xiong X, DePinho RA, et al. FoxO3 transcription factor and Sirt6 deacetylase regulate low density lipoprotein (LDL)-cholesterol homeostasis via control of the proprotein convertase subtilisin/kexin type 9 (Pcsk9) gene expression. J Biol Chem. 2013; 288: 29252-9.

71. Miranda MX, van Tits LJ, Lohmann C, et al. The Sirt1 activator SRT3025 provides atheroprotection in Apoe-/- mice by reducing hepatic Pcsk9 secretion and enhancing Ldlr expression. Eur Heart J. 2015; 36 (1): 51-9.

72. Melone M, Wilsie L, Palyha O, et al. Discovery of a new role of human resistin in hepatocyte low-density lipoprotein receptor suppression mediated in part by proprotein convertase subtilisin/kexin type 9. J Am Coll Cardiol. 2012; 59: 1697-705.

73. Ishibashi M, Masson D, Westerterp M, et al. Reduced VLDL clearance in Apoe(-/-)Npc1(-/-) mice is associated with increased Pcsk9 and Idol expression and decreased hepatic LDL-receptor levels. J Lipid Res. 2010; 51: 2655-63.

74. Sasaki M, Terao Y, Ayaori M, et al. Hepatic overexpression of idol increases circulating protein convertase subtilisin/kexin type 9 in mice and hamsters via dual mechanisms: sterol regulatory element-binding protein 2 and low-density lipoprotein receptor-dependent pathways. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 2014; 34: 1171-8.

75. Scotti E, Calamai M, Goulbourne CN, et al. IDOL stimulates clathrin-independent endocytosis and multivesicular body-mediated lysosomal degradation of the low-density lipoprotein receptor. Mol Cell Biol. 2013; 33: 1503-14.

76. Sorrentino V, Fouchier SW, Motazacker MM, et al. Identification of a loss-of-function inducible degrader of the low-density lipoprotein receptor variant in individuals with low circulating low-density lipoprotein. Eur Heart J. 2013; 34: 1292-97.

77. Ason B, Tep S, Davis HR, et al. Improved efficacy for ezetimibe and rosuvastatin by attenuating the induction of PCSK9. J Lipid Res. 2011; 52: 67987.

78. Berthold HK, Seidah NG, Benjannet S, et al. Evidence from a randomized trial that simvastatin, but not ezetimibe, upregulates circulating PCSK9 levels. PLoS One. 2013; 8(3): e60095. doi: 10.1371/journal.pone.0060095. Epub 2013 Mar 27.

79. Romano M, Di Taranto MD, D'Agostino MN, et al. Identification and functional characterization of LDLR mutations in familial hypercholesterolemia patients from Southern Italy. Atherosclerosis. 2010; 210: 493-6.

80. Dong B, Wu M, Li H, et al. Strong induction of PCSK9 gene expression through HNF1alpha and SREBP2: mechanism for the resistance to LDL-cholesterol lowering effect of statins in dyslipidemic hamsters. J Lipid Res. 2010; 51: 1486-95.

81. Awan Z, Seidah NG, MacFadyen JG, et al. Rosuvastatin, proprotein convertase subtilisin/kexin type 9 concentrations, and LDL cholesterol response: the JUPITER trial. Clin Chem. 2012; 58: 183-9.

82. Guo YL, Liu J, Xu RX, et al. Short-term impact of low-dose atorvastatin on serum proprotein convertase subtilisin/kexin type9. Clin Drug Investig. 2013 Dec;33(12):877-83. doi: 10.1007/s40261-013-0129-2.

83. Careskey HE, Davis RA, Alborn WE, et al. Atorvastatin increases human serum levels of proprotein convertase subtilisin/kexin type 9. J Lipid Res. 2008 Feb;49(2):394-8. Epub 2007 Nov 21.

84. Welder G, Zineh I, Pacanowski MA, et al. High-dose atorvastatin causes a rapid sustained increase in human serum PCSK9 and disrupts its correlation with LDL cholesterol. J Lipid Res. 2010 Sep;51(9):2714-21. doi: 10.1194/jlr.M008144. Epub 2010 Jun 5.

85. Kourimate S, Le MC, Langhi C, et al. Dual mechanisms for the fibrate-mediated repression of proprotein convertase subtilisin/kexin type 9. J Biol Chem. 2008; 283: 9666-73.

86. Lambert G, Ancellin N, Charlton F, et al. Plasma PCSK9 concentrations correlate with LDL and total cholesterol in diabetic patients and are decreased by fenofibrate treatment. Clin Chem. 2008; 54: 1038-45.

87. Mayne J, Dewpura T, Raymond A, et al. Plasma PCSK9 levels are significantly modified by statins and fibrates in humans. Lipids Health Dis. 2008; 7: 22.

88. Troutt JS, Alborn WE, Cao G, et al. Fenofibrate treatment increases human serum proprotein convertase subtilisin kexin type 9 levels. J Lipid Res. 2010; 51: 345-51.

89. Hentze H, Jensen KK, Chia SM, et al. Inverse relationship between LDL cholesterol and PCSK9 plasma levels in dyslipidemic cynomolgus monkeys: effects of LDL lowering by ezetimibe in the absence of statins. Atherosclerosis. 2013; 231: 84-90.

90. Dong B, Wu M, Cao A, et al. Suppression of Idol expression is an additional mechanism underlying statin-induced up-regulation of hepatic LDL receptor expression. Int J Mol Med. 2011; 27: 103-10.

91. Xiao HB, Sun ZL, Zhang HB, et al. Berberine inhibits dyslipidemia in C57BL/6 mice with lipopolysaccharide induced inflammation. Pharmacol Rep. 2012; 64: 889-95.

92. Poirier S, Prat A, Marcinkiewicz E, et al. Implication of the proprotein convertase NARC-1/PCSK9 in the development of the nervous system. J Neurochem. 2006; 98: 838-50.

93. Кухарчук ВВ, Бажан СС. Пропротеин конвертаза субтилизин/кексин типа 9 (PCSK9) - регулятор экспрессии рецепторов липопротеинов низкой плотности. Атеросклероз и дислипидемии. 2013; 2: 19-26.

94. Chen YQ, Troutt JS, Konrad RJ. PCSK9 is present in human cerebrospinal fluid and is maintained at remarkably constant concentrations throughout the course of the day. Lipids. 2014; 49: 445-55.

95. Rousselet E, Marcinkiewicz J, Kriz J, et al. PCSK9 reduces the protein levels of the LDL receptor in mouse brain during development and after ischemic stroke. J Lipid Res. 2011;52:1383-1391.

96. Qi Wu, Zhi-han Tang, Juan Peng, et al. The dual behavior of PCSK9 in the regulation of apoptosis is crucial in Alzheimer's disease progression (Review). Biomed Rep. 2014; 2(2): 167-71.

97. Levy E, Ben Djoudi OA, Spahis S, et al. PCSK9 plays a significant role in cholesterol homeostasis and lipid transport in intestinal epithelial cells. Atherosclerosis. 2013; 227: 297-306.

98. Rashid S, Tavori H, Brown PE, et al. Proprotein convertase subtilisin kexin type 9 promotes intestinal overproduction of triglyceride-rich apolipoprotein B lipoproteins through both low-density lipoprotein receptor-dependent and -independent mechanisms. Circulation. 2014; 130: 431-41.

99. European Guidelines on cardiovascular disease prevention in clinical practice. European Heart Journal. 2016: 37, 2315-2381.

100. Angeli E., Vanzulli A., Venturini M. et al. The role of radiology in the diagnosis and management of Takayasu's arteritis // J. Nephrol. - 2001. -Vol. 14. - № 6. - Р. 514 - 524.

101. Fraga A., Medina F. Takayasu's arteritis // Curr. Rheumatol. Rep. -2002. -Vol. 4, № 1. - P. 30 - 38.

102. McCutloch M., Andronikou S. Angiographic features of 26 Children with Takayasu's arteritis // Pediatr Radiol. - 2003. - Vol.33, № 4. - P. 230-235

103. Kalashyan H., Saqqur M., Shuaib A. et al. Comprehensive and rapid assessment of carotid plaques in acute stroke using a new single sweep method for three-dimensional carotid ultrasound // Echocardiography. - 2013. - Vol.30 (4). - P.414-418.

104. Porto I., Dato I., Todaro D. et al. Comparison of two- and threedimensional quantitative coronary angiography to intravascular ultrasound in the 144 assessment of intermediate left main stenosis // Am. J. Cardiol. -2012. - Vol.109 (11). - P.1600-1607.

105. Al Shali K., House A.A., Hanley A.J. et al. Differences between carotid wall morphological phenotypes measured by ultrasound in one, two, and three dimensions // Atherosclerosis. - 2005. - Vol. 178. - P. 319-325.

106. НАЦИОНАЛЬНЫЕ РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ВЕДЕНИЮ ПАЦИЕНТОВ С ЗАБОЛЕВАНИЯМИ БРАХИОЦЕФАЛЬНЫХ АРТЕРИЙ. Российский согласительный документ. 2013г.

107. Kagawa R, Moritake K, Shima T, et al. Validity of B-mode ultrasonographic findings in patients undergoing carotid endarterectomy in comparison with angiographic and clinicopathologic features // Stroke. - 1996. -Vol.27 (4). - P.700-705.

108. Лелюк ВГ., Лелюк СЭ. Дуплексное сканирование в диагностике поражений дуги аорты и основания мозга // Ультразвуковая допплеровская диагностика сосудистых заболеваний / Под ред. Никитина Ю.М., Труханова А.И. - М.: Видар, 1998. - С. 128-163.

109. Zwiebel WJ. Introduction to vascular ultrasonography. - NY, 2000. -

505 p.

110. Тимина ИЕ, Бурцева ЕА, Скуба НД. и др. Сопоставление структуры атеросклеротической бляшки в сонной артерии по данным комплексного ультразвукового и гистологического исследований. Ультразвуковая и функционал. диагн. 2004; (3): 81-87.

107

111. Lorenz MW, Markus HS, Bots ML, et al. Prediction of clinical cardiovascular events with carotid intima-media thickness: a systematic review and meta-analysis. Circulation. 2007 Jan 30; 115(4):459-67.

112. Zhu YM, Anderson TJ, Sikdar K, et al. Association of Proprotein Convertase Subtilisin/Kexin Type 9 (PCSK9) with Cardiovascular Risk in Primary Prevention. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 2015 Oct;35(10):2254-9.

113. Xie W, Liu J, Wang W, et al. Association between plasma PCSK9 levels and 10-year progression of carotid atherosclerosis beyond LDL-C: A cohort study. Int J Cardiol. 2016 Jul 15;215:293-8.

114. Chan DC, Pang J, McQuillan BM, et al. Plasma Proprotein Convertase Subtilisin Kexin Type 9 as a Predictor of Carotid Atherosclerosis in Asymptomatic Adults. Heart Lung Circ. 2016 May;25(5):520-5.

115. Leander K, Mälarstig A, Van't Hooft FM, et al. Circulating Proprotein Convertase Subtilisin/Kexin Type 9 (PCSK9) Predicts Predicts Future Risk of Cardiovascular Events Independently of Established Risk Factors. Circulation. 2016 Mar 29;133(13):1230-9.

116. Ridker PM, Rifai N, Bradwin G, et al. Plasma proprotein convertase subtilisin/kexin type 9 levels and the risk of first cardiovascular events. Eur Heart J. 2016 Feb 7;37(6):554-60.

117. Lee CJ, Lee YH, Park SW, et al. Association of serum proprotein convertase subtilisin/kexin type 9 with carotid intima media thickness in hypertensive subjects. Metabolism. 2013 Jun; 62(6):845-50.

118. Yang SH, Du Y, Li S , et al. Plasma PCSK9 level is unrelated to blood pressure and not associated independently with carotid intima-media thickness in hypertensives. Hypertens Res. 2016 Aug;39(8):598-605.

119. Werner C, Hoffmann MM, Winkler K, et al. Risk prediction with proprotein convertase subtilisin/kexin type 9 (PCSK9) in patients with stable coronary disease on statin treatment. Vascul Pharmacol. 2014 Aug;62(2):94-102.

120. Li JJ, Li S, Zhang Y, Xu RX, Guo YL, Zhu CG, et al. Proprotein convertase subtilisin/kexin type 9, C-reactive protein, coronary severity, and outcomes in patients with stable coronary artery disease: A prospective observational cohort study. Medicine 2015; 94: e2426.

121. Gencer B, Montecucco F, Nanchen D, et al. Prognostic value of PCSK9 levels in patients with acute coronary syndromes. Eur Heart J. 2016 Feb 7;37(6):546-53.

122. Rogacev KS, Heine GH, Silbernagel G, Kleber ME, Seiler S, Emrich I, et al. PCSK9 plasma concentrations are independent of GFR and do not predict cardiovascular events in patients with decreased GFR. PLoS One 2016; 11:e0146920.

123. Xiao Y, Peng C, Huang W, Zhang J, Gao Y, Kim JH, Yeoh EK , Su X. Circulating Proprotein Convertase Subtilisin/Kexin Type 9 (PCSK9) Concentration and Risk of Cardiovascular Events - Systematic Review and Meta-Analysis of Prospective Studies. Circ J. 2017 Apr 11. doi: 10.1253/circj.CJ-16-1142.

124. Бенимецкая К.С. Связь пропротеиновой конвертазы субтилизин-кексинового типа 9 с показателями нарушения липидного обмена в российской популяции на примере г. Новосибирск. 2016.

125. Trialists C, Baigent C, Blackwell L, et al. Efficacy and safety of more intensive lowering of LDL cholesterol: a meta-analysis of data from 170,000 participants in 26 randomised trials. Lancet. 2010- 376(9753):1670-1681

126. Trialists C, Mihaylova B, Emberson J, et al. The effects of lowering LDL cholesterol with statin therapy in people at low risk of vascular disease: meta-analysis of individual data from 27 randomised trials. Lancet. 2012. 380(9841):581-590

127. Latimer J, Batty JA, Neely RD, Kunadian V. PCSK9 inhibitors in the prevention of cardiovascular disease. J Thromb Thrombolysis. 2016 0ct;42(3):405-19. doi: 10.1007/s11239-016-1364-1.

109

128. Giugliano RP, Desai NR, Kohli P, Rogers WJ, Somaratne R, Huang F, et al. Efficacy, safety, and tolerability of a monoclonal antibody to proprotein convertase subtilisin/kexin type 9 in combination with a statin in patients with hypercholesterolaemia (LAPLACE-TIMI 57): a randomised, placebo-controlled, dose-ranging, phase 2 study. Lancet. 2012;380(9858):2007-2017.

129. Koren MJ, Scott R, Kim JB, Knusel B, Liu T, Lei L, et al. Efficacy, safety, and tolerability of a monoclonal antibody to proprotein convertase subtilisin/kexin type 9 as monotherapy in patients with hypercholesterolaemia (MENDEL): a randomised, double-blind, placebo-controlled, phase 2 study. Lancet. 2012;380(9858):1995-2006.

130. Raal F, Scott R, Somaratne R, Bridges I, Li G, Wasserman SM, et al. Low-density lipoprotein cholesterol-lowering effects of AMG 145, a monoclonal antibody to proprotein convertase subtilisin/kexin type 9 serine protease in patients with heterozygous familial hypercholesterolemia: the reduction of LDL-C with PCSK9 inhibition in heterozygous familial hypercholesterolemia disorder (RUTHERFORD) randomized trial. Circulation. 2012;126(20):2408-2417.

131. Sullivan D, Olsson AG, Scott R, et al. Effect of a monoclonal antibody to PCSK9 on low-density lipoprotein cholesterol levels in statin-intolerant patients: the GAUSS randomized trial. JAMA. 2012;308(23):2497-2506.

132. Hirayama A, Honarpour N, Yoshida M, et al. Effects of evolocumab (AMG 145), a monoclonal antibody to PCSK9, in hypercholesterolemic, statin-treated Japanese patients at high cardiovascular risk-primary results from the phase 2 YUKAWA study. Circ J. 2014;78(5):1073-1082.

133. McKenney JM, Koren MJ, Kereiakes DJ, et al. Safety and efficacy of a monoclonal antibody to proprotein convertase subtilisin/kexin type 9 serine protease, SAR236553/REGN727, in patients with primary hypercholesterolemia receiving ongoing stable atorvastatin therapy. J Am Coll Cardiol. 2012;59(25):2344-2353.

134. Roth EM, McKenney JM, Hanotin C, et al. Atorvastatin with or without an antibody to PCSK9 in primary hypercholesterolemia. N Engl J Med. 2012;367(20):1891—1900.

135. Stein EA, Gipe D, Bergeron J, et al. Effect of a monoclonal antibody to PCSK9, REGN727/SAR236553, to reduce low-density lipoprotein cholesterol in patients with heterozygous familial hypercholesterolaemia on stable statin dose with or without ezetimibe therapy: a phase 2 randomised controlled trial. Lancet. 2012;380(9836):29-36.

136. Farnier M, Kastelein JJP, Roth E, et al. Relationship between alirocumab, PCSK9 and LDL-C levels: results from the odyssey mono phase 3 trial of alirocumab 75 mg every 2 weeks. Atherosclerosis. 2014;235(2):e34-e35.

137. Kereiakes DJ, Robinson JG, Cannon CP, et al. (2015) Efficacy and safety of the PCSK9 inhibitor alirocumab among high cardiovascular risk patients on maximally tolerated statin therapy: the ODYSSEY COMBO I study. Am Heart J

138. Colhoun HM, Robinson JG, Farnier M, et al. Efficacy and safety of alirocumab, a fully human PCSK9 monoclonal antibody, in high cardiovascular risk patients with poorly controlled hypercholesterolemia on maximally tolerated doses of statins: rationale and design of the ODYSSEY COMBO I and II trials. BMC Cardiovasc Disord. 2014;14(1):121.

139. Robinson JG, Farnier M, Krempf M, et al. Efficacy and safety of alirocumab in reducing lipids and cardiovascular events. N Engl J Med. 2015;372(16):1489—1499.

140. Blom DJ, Hala T, Bolognese M, et al. A 52-week placebo-controlled trial of evolocumab in hyperlipidemia. The New England journal of medicine. 2014;370(19):1809-1819.

141. Robinson JG, Nedergaard BS, Rogers WJ, et al. Effect of evolocumab or ezetimibe added to moderate- or high-intensity statin therapy on LDL-C lowering in patients with hypercholesterolemia: the LAPLACE-2

randomized clinical trial. JAMA. 2014;311(18):1870-1882.

111

142. Stroes E, Colquhoun D, Sullivan D, et al. Anti-PCSK9 antibody effectively lowers cholesterol in patients with statin intolerance: the GAUSS-2 randomized, placebo-controlled phase 3 clinical trial of evolocumab. J Am Coll Cardiol. 2014;63(23):2541-2548.

143. Koren MJ, Lundqvist P, Bolognese M, et al. Anti-PCSK9 monotherapy for hypercholesterolemia: the MENDEL-2 randomized, controlled phase III clinical trial of evolocumab. J Am Coll Cardiol. 2014;63(23):2531-2540.

144. Raal FJ, Stein EA, Dufour R, et al. PCSK9 inhibition with evolocumab (AMG 145) in heterozygous familial hypercholesterolaemia (RUTHERFORD-2): a randomised, double-blind, placebo-controlled trial. Lancet. 2015;385(9965):331-340.

145. Sabatine MS, Giugliano RP, Wiviott SD, et al. Efficacy and safety of evolocumab in reducing lipids and cardiovascular events. N Engl J Med. 2015;372(16):1500—1509.

146. Raal FJ, Honarpour N, Blom DJ, et al. Inhibition of PCSK9 with evolocumab in homozygous familial hypercholesterolaemia (TESLA Part B): a randomised, double-blind, placebo-controlled trial. Lancet. 2015;385(9965):341-350.

147. E.A. Stein, S. Mellis, G.D. Yancopoulos, et al. Effect of a monoclonal antibody to PCSK9 on LDL cholesterol N Engl J Med, 366 (2012), pp.1108-1118

148. C.S. Dias, A.J. Shaywitz, S.M. Wasserman, et al. Effects of AMG 145 on low-density lipoprotein cholesterol levels: results from 2 randomized, double-blind, placebo-controlled, ascending-dose phase 1 studies in healthy volunteers and hypercholesterolemic subjects on statins J Am Coll Cardiol, 60 (2012), pp. 1888-1898

149. European Commission Approves Amgen's New Cholesterol-Lowering Medication Repatha™ (evolocumab), the First PCSK9 Inhibitor To

Be Approved in the World, for Treatment of High Cholesterol.

112

http://www.amgen.com/media/media_pr_detail.jsp?releaseID=2069405&. Accessed 2015.

150. FDA approves Praluent to treat certain patients with high cholesterol.

http://www.fda.gov/newsevents/newsroom/pressannouncements/ucm4558 83.htm. Accessed 2015.

151. C.M. Ballantyne, J. Neutel, A. Cropp, et al. Results of bococizumab, a monoclonal antibody against proprotein convertase subtilisin/kexin type 9, from a randomized, placebo-controlled, dose-ranging study in statin-treated subjects with hypercholesterolemia Am J Cardiol, 115 (2015), pp. 1212-1221

152. N.R. Budha, M. Leabman, J.Y. Jin, et al. Modeling and simulation to support phase 2 dose selection for RG7652, a fully human monoclonal antibody against proprotein convertase subtilisin/kexin type 9 Aaps J, 17 (2015), pp.881-890

153. J. Kastelein, S. Nissen, D. Rader, et al. Safety and efficacy of Ly3015014, a new monoclonal antibody to proprotein convertase subtilisin/kexin type 9 (Pcsk9) with an inherently longer duration of action, in patients with primary hypercholesterolemia: a randomized, placebo-controlled, dose-ranging, phase 2 study. J Am Coll Cardiol, 65 (2015), p. A1591 Abstract

154. Stein EA, Raal F. Reduction of low-density lipoprotein cholesterol by monoclonal antibody inhibition of PCSK9. Annu Rev Med. 2014;65:417-31.

155. Cicero AF, Tartagni E, Ertek S. Safety and tolerability of injectable lipid-lowering drugs: a review of available clinical data. Exp Opin Drug Saf. 2014. 13(8):1023-1030.

156. Roth EM, Taskinen MR, Ginsberg HN, et al. Monotherapy with the PCSK9 inhibitor alirocumab versus ezetimibe in patients with hypercholesterolemia: results of a 24 week, double-blind, randomized Phase 3 trial. Int J Cardiol. 2014. 176(1):55-61

157. The Institute for Clinical and Economic Review (ICER) (2015) PCSK9 inhibitor therapies for high cholesterol: effectiveness, value, and value-

113

based price benchmarks (draft). The Institute for Clinical and Economic Review (ICER), Boston

158. Umans-Eckenhausen MA, Defesche JC, Sijbrands EJ, Scheerder RL, Kastelein JJ. Review of first 5 years of screening for familial hypercholesterolemia in the Netherlands. Lancet. 2001;357(9251):165-8.

159. European Carotid Surgery Trialists' Collaborative Group. MRC European Carotid Surgery Trial: interim results for symptomatic patients with severe (70-99%) or with mild (0-29%) carotid stenosis. Lancet. 1991; 337: 1235-43.

160. Stein J.H., Korcarz C.E., Hurst R.T., et al. American Society of Echocardiography Carotid Intima-Media Thickness Task Force. Use of carotid ultrasound to identify subclinical vascular disease and evaluate cardiovascular disease risk: a consensus statement from the American Society of Echocardiography Carotid Intima-Media Thickness Task Force. Endorsed by the Society for Vascular Medicine. J Am Soc Echocardiogr 2008; 21: 93-111.

161. Афанасьева ОИ, Адамова ИЮ, Беневоленская ГФ, Покровский С.Н. Иммуноферментный метод определения липопротеида(а). . Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. . 1995 г., Т. 120(10), стр. 398-401.

162. Инструкция тест-системы «Human Proprotein Convertase 9/PCSK9 Immunoassay» (R&D Systems, USA).

163. Endo A. The discovery and development of HMG-CoA reductase inhibitors. Journal of Lipid Research.1992;33:1569-1582r.

164. Rashid S, Curtis DE, Garuti R, et al. Decreased plasma cholesterol and hypersensitivity to statins in mice lacking Pcsk9. Proc Natl Acad Sci U S A. 2005 Apr 12; 102(15):5374-9.

165. Maxwell KN, Soccio RE, Duncan EM, et al. Novel putative SREBP and LXR target genes identified by microarray analysis in liver of cholesterol-fed mice. J Lipid Res. 2003 Nov; 44(11):2109-19.

166. Horton JD, Shah NA, Warrington JA, et al. Combined analysis of oligonucleotide microarray data from transgenic and knockout mice identifies direct SREBP target genes. Proc Natl Acad Sci USA. 2003 Oct 14; 100(21):12027-32.

167. Betteridge DJ. Cardiovascular endocrinology in 2012: PCSK9—an exciting target for reducing LDL-cholesterol levels. Nat Rev Endocrinol, 9 (2) (2013), pp. 76-78 [Epub 2013/01/09]

168. Urban D, Pöss J, Böhm M, et al. Targeting the proprotein convertase subtilisin/kexin type 9 (PCSK9) for the treatment of dyslipidemia and atherosclerosis. J Am Coll Cardiol, 62 (16) (2013), pp. 1401-1408

169. Berge KE, Ose L, Leren TP. Missense mutations in the PCSK9 gene are associated with hypocholesterolemia and possibly increased response to statin therapy. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 2006 May; 26(5):1094-100.

170. Dubuc G, Tremblay M, Paré G, et al. A new method for measurement of total plasma PCSK9: clinical applications. J Lipid Res. 2010 Jan; 51(1):140-9.

171. Stein EA, Giugliano RP, Koren MJ, et al. PROFICIO Investigators. Efficacy and safety of evolocumab (AMG 145), a fully human monoclonal antibody to PCSK9, in hyperlipidaemic patients on various background lipid therapies: pooled analysis of 1359 patients in four phase 2 trials. Eur Heart J. 2014 Sep 1; 35(33):2249-59.

172. Arsenault BJ, Pelletier-Beaumont E, Alméras N, et al. PCSK9 levels in abdominally obese men: association with cardiometabolic risk profile and effects of a one-year lifestyle modification proram [J] Atherosclerosis. 2014;236(2):321-326.

173. Brouwers MCGJ, van Greevenbroek MMJ, Konrad RJ, et al. Circulating PCSK9 is a strong determinant of plasma triacylglycerols and total cholesterol in homozygous carriers of apolipoprotein s2 [J] Clin Sci (Lond) 2014;126(9):679-684.

174. Chan DC, Wong ATY, Pang J, et al. Inter-relationships between proprotein convertase subtilisin/kexin type 9, apolipoprotein C-III and plasma apolipoprotein B-48 transport in obese subjects: a stable isotope study in the postprandial state[J] Clin Sci (Lond) 2015;128(6):379-385.

175. Kwakernaak AJ, Lambert G, Dullaart RPF. Plasma proprotein convertase subtilisin-kexin type 9 is predominantly related to intermediate density lipoproteins[J] Clin Biochem. 2014;47(7-8):679-682.

176. Tibolla G., Dhyani A., Baragetti A. et al. Plasma proprotein convertase subtilisin kexin type 9 (PCSK9) and plasma lipids in a free living population: results from The plic study. // Abstracts / Atherosclerosis. - 2014. -№235. - e60.

177. Mayne J, Ooi TC, Raymond A, et al. Differential effects of PCSK9 loss of function variants on serum lipid and PCSK9 levels in Caucasian and African Canadian populations[J] Lipids Health Dis. 2013;12(70)[PMC free article] [PubMed]

178. Sullivan S, Fabbrini E, Horton JD, et al. Lack of relationship between plasma PCSK9 concentrations and hepatic lipoprotein kinetics in obese people[J] Trans Res. 2012;158(5):302-306.

179. Cui Q., Ju X., Yang T., et al. Serum PCSK9 is associated with multiple metabolic factors in a large Han Chinese population. // Atherosclerosis. - 2010. - № 213 (2). - P. 632-636.

180. Mayne J., Raymond A., Chaplin A., et al. Plasma PCSK9 levels correlate with cholesterol in men but not in women. // Biochem. Biophys. Res. Commun. - 2007. - №361. -P. 451-456.

181. Wilhelmsen L, Johansson S, Rosengren A, et al. Risk factors for cardiovascular disease during the period 1985-1995 in Göteborg, Sweden. The GOT-MONICA Project. J Intern Med. 1997 Sep; 242(3):199-211.

182. P.M. Smith, A. Cowan, B.A. White - The low-density lipoprotein receptor is regulated by estrogen and forms a functional complex with the

estrogen-regulated protein ezrin in pituitary GH3 somatolactotropes Endocrinology, 145 (2004), pp. 3075-3083)

183. G.E. Croston, L.B. Milan, K.B. Marschke, et al. Androgen receptor-mediated antagonism of estrogen-dependent low density lipoprotein receptor transcription in cultured hepatocytes. Endocrinology, 138 (1997), pp. 37793786).

184. Huijgen R, Boekholdt SM, Arsenault BJ, et al. Plasma PCSK9 levels and clinical outcomes in the TNT (Treating to New Targets) trial: a nested case-control study. J Am Coll Cardiol. 2012 May 15; 59(20):1778-84.

185. E. de Groot, G.K. Hovingh, A. Wiegman, et al. Measurement of arterial wall thickness as a surrogate marker for atherosclerosis Circulation, 109 (2004), pp. III33-III38

186. P. Pauletto, P. Palatini, S. Da Ros, et al. Factors underlying the increase in carotid intima-media thickness in borderline hypertensives. Arterioscler Thromb Vasc Biol, 19 (1999), pp. 1231-1237

187. G. Vaudo, S. Marchesi, D. Siepi, et al. Metabolic syndrome and preclinical atherosclerosis: focus on femoral arteries Metabolism, 56 (2007), pp. 541-546