Структура углеводсвязывающих участков лектинов бобовых растений как детерминанта специфичности взаимодействия с клубеньковыми бактериями тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.12, доктор биологических наук Баймиев, Алексей Ханифович

• Баймиев, Алексей Ханифович
• доктор биологических наук
• 2007

Оглавление диссертации доктор биологических наук Баймиев, Алексей Ханифович

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

ЧАСТЬ 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Глава 1. Становление бобово-ризобиального симбиоза: 20 специфичность инфекции и клубенькообразования

1.1. Происхождение бобово-ризобиального симбиоза

1.2. Механизмы инфекции и клубенькообразования

1.3. Сигналлинг между ризобией и бобовым растением

Глава 2. Структура и функции лектинов бобовых растений

2.1. Общая характеристика лектинов растений

2.2. Структура лектинов бобовых растений

2.3. Функции лектинов

Глава 3. Роль лектина в бобово-ризобиальном симбиозе

Глава 4. Клубеньковые бактерии: современная систематика и 59 особенности организации генома.

4.1. Современная систематика клубеньковых бактерий

4.2. Особенности организации генома клубеньковых бактерий 82 ЧАСТЬ 2. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

Глава 5. Объекты исследований 86 5.1. Краткая характеристика объектов исследований

Глава 6. Методы исследований

6.1. Выделение и очистка ДНК растений

6.2. Выделение ДНК растений для проведения ПНР

6.3. Выделение и очистка ДНК ризобий

6.4. Выделение и очистка плазмидной ДНК

6.5. Выделение и электрофоретическое разделение мегаплазмидной 94 ДНК ризобий

6.6. Выделение и очистка одноцепочечной фагмидной ДНК

6.7. Расщепление ДНК рестрикционными эндонуклеазами

6.8. Аналитический гель-электрофорез ДНК в неденатурирующих 98 условиях

6.9. Препаративный гель-электрофорез ДНК в неденатурирующих 100 условиях

6.10. Элюция ДНК из агарозных и полиакриламидных гелей

6.11. Перенос ДНК из агарозных гелей на мембранные фильтры

6.12. Радиоактивное мечение препаратов ДНК

6.13. Блот-гибридизация ДНК

6.14. Подготовка компетентных клеток Е.coli

6.15. Трансформация компетентных клеток E.coli плазмидной ДНК

6.16. Секвенирование ДНК ферментативным методом

6.17. Электрофоретическое фракционирование ДНК в 109 полиакриламидном геле в денатурирующих условиях (секвенирующий гель-электрофорез)

6.18. Радиоавтография

6.19. Секвенирование ДНК на автоматическом секвенаторе

6.20. Компьютерный анализ нуклеотидных последовательностей

6.21. Полимеразная цепная реакция

6.22. Клонирование амплифицированных фрагментов генов 116 лектинов бобовых растений

6.23. Обработка ДНК щелочной фосфатазой и 117 полинуклеотидкиназой фага Т

6.24. Экспрессия белка в клетках Е. coli и его выделение

6.25. Электрофоретическое фракционирование белков в 120 денатурирующих условиях

6.26. Агглютинация эритроцитов лектинами и ее подавление моно- и 121 дисахарами

6.27. Закладка опытов по исследованию конкурентоспособности 122 штаммов Я. galegae

6.28. Экзогенная обработка лектинами клубеньковых бактерий в 123 ризосфере бобового растения

6.29. Идентификация клубенек-образующего штамма

Глава 7. Реактивы и материалы

7.1. Бактериальные штаммы, плазмидные и фагмидные векторы

7.2. Олигонуклеотидные праймеры, использованные при проведении 126 ПЦР и сайт-направленном мутагенезе генов лектинов

7.3. Реактивы и материалы

7.4. Составы использованных стандартных растворов 130 ЧАСТЬ 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

Глава 8. Сравнение углеводсвязывающих пептидов лектина бобовых 132 растений в связи с их различной хозяйской специфичностью при образовании симбиоза с клубеньковыми бактериями

8.1. Компьютерный анализ нуклеотидных и аминокислотных 133 последовательностей и амплификация участка гена лектина у различных представителей бобовых растений

8.2. Клонирование и секвенирование фрагментов гена лектина 136 различных представителей бобовых растений

8.3. Клонирование и секвенирование полноразмерного гена лектина 146 гороха посевного сорта «Неосыпающийся-1»

8.4. Сравнительный анализ нуклеотидных последовательностей 149 секвенированных фрагментов генов лектина

8.5. Сравнительный анализ аминокислотных последовательностей 156 лектинов бобовых растений

8.6. Взаимосвязь между строением лектинов и хозяйской 165 специфичностью бобового растения

8.6.1. Углеводсвязывающие последовательности лектинов клеверов Trifolium repens, Т. pratense и Т. trichocephalum 8.6.2. Углеводсвязывающие последовательности лектинов козлятников восточного и лекарственного 8.7. Взаимосвязь между строением УСП лектина, его специфичностью к углеводам и видовым составом ризобий, вступающих в симбиоз с бобовым растением, несущим данный белок.

Глава 9. Создание гибридных белков лектинов и анализ их углеводсвязывающих свойств

9.1. Создание химерных конструкций гена лектина

9.2. Синтез лектинов в клетках E.coli и их выделение

9.3. Анализ углеводной специфичности гибридных лектинов

Глава 10. Филогения и генетическое разнообразие клубеньковых 214 бактерий

10.1. Филогения и генетическое разнообразие клубеньковых 215 бактерий, вступающих в симбиоз с астрагалом нутовым

10.2. Генетическое разнообразие и филогения клубеньковых 220 бактерий, вступающих в симбиоз с эспарцетом песчаным

10.3. Симбиоз козлятника восточного с клубеньковыми бактериями 226 Rhizobium galegae: специфичность и конкурентоспособность

10.3.1. Специфичность симбиоза козлятника восточного с 228 клубеньковыми бактериями R. galegae

10.3.2. Конкурентоспособность клубенек-формирующих 231 штаммов R. galegae, применяемых для производства промышленных препаратов ризоторфина

10.3.3. Влияние загрязнения субстрата кадмием на симбиоз 237 козлятника восточного с R. galegae

10.4. Разработка метода для идентификации и паспортизации 245 микроорганизмов на примере штаммов ризобий R. galegae

Глава 11. Анализ влияния природных и гибридных лектинов на взаимодействие бобовых растений с ризобиями

11.1 Экзогенная обработка лектинами бактерий в ризосфере 257 бобовых растений

11.2 Влияние лектинов PSL, GOL и PSL/MAL на симбиоз Astragalus 262 cicer и Galega orientalis с ризобиями

11.3. Влияние лектинов PSL, PSL/AGL на симбиоз Medicago sativa с ризобиями

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Структура углеводсвязывающих участков лектинов бобовых растений как детерминанта специфичности взаимодействия с клубеньковыми бактериями»

Актуальность темы. Усвоение молекулярного азота воздуха (азотфиксация) является одним из важнейших биологических процессов, от которых во многом зависит жизнь на нашей планете. Азот является важнейшим элементом, оказывающим огромное влияние на плодородие почвы и урожайность сельскохозяйственных культур. Химические азотные удобрения, применяемые обычно в качестве источника азота в сельском хозяйстве, могут быть вредны с точки зрения экологии, и, кроме этого их производство требует значительных затрат энергоресурсов. Организмы-азотфиксаторы усваивают свободный азот воздуха в процессе своей жизнедеятельности, используя, в том числе дармовую энергию солнца. Особый интерес представляет фиксация атмосферного азота бобовыми растениями в симбиозе с клубеньковыми бактериями. Проблема симбиотической азотфиксации привлекает внимание ученых всего мира в связи с возможностью практического применения результатов исследований в данной области, значение которых трудно переоценить (Тихонович, 1997; Спайнк и др., 2002). Одним из критических моментов становления бобово-ризобиального симбиоза является стадия взаимного "узнавания" микроорганизма и растения-хозяина. Этот процесс характеризуется сложным обменом сигналами между макро- и микросимбионтом в ризосфере растения-хозяина еще до инвазии клубеньковых бактерий. Показано, что специфичность образования бобово-ризобиального симбиоза определяется в первую очередь растением-хозяином, диктующим способ формирования, характеристику структуры и развития азотфиксирующего клубенька (ВгоищЫоп й а1., 2000; СиаШеп е1 а1., 2000). Однако в отличие от ризобиальных факторов клубенькообразования, растительные компоненты, участвующие в инициации симбиоза изучены не так хорошо.

Несомненно, что в данный процесс вовлечены лектины бобовых, которые, как показано, могут обеспечивать избирательные взаимодействия растений с ризобиями благодаря своим углеводсвязывающим свойствам (Brill et al., 2004). В литературе содержатся сведения о расшифрованных последовательностях аминокислот лектинов бобовых, представленных преимущественно видами из различных родов тропических растений, произрастающих в разных географических регионах и обычно имеющих довольно широкий круг способных их инфицировать бактериальных микросимбионтов. Значительно больший интерес для изучения формирования специфичности азотфиксирующего симбиоза представляет выяснение строения лектинов бобовых растений умеренного климата, характеризующихся строгой специфичностью по отношению к своим ризобиальным партнерам. Подавляющее большинство этих растений, как показано Проворовым (1992), не формирует группы перекрестной инокуляции, образуя строго специфичный симбиоз только с определенным штаммом ризобий. В свою очередь, клубеньковые бактерии, вступающие в симбиоз с этими бобовыми, также проявляют строгую специфичность по отношению к своему растению-хозяину.

Знания о ключевых аминокислотах углеводсвязывающего участка, закономерностях формирования углеводной специфичности лектинов, могут быть использованы в моделировании белков с новыми и заданными углеводсвязывающими свойствами. Заменяя функционально значимые аминокислоты или области углеводсвязывающих участков можно создавать лектины с заданной специфичностью к сахаридам (а, следовательно, и функциями) которые можно применять для решения целого ряда задач биотехнологии, таких как получение высокоочищенных углеводов, создание биочипов и т.д. Кроме этого, возможно, что создание модифицированных или гибридных лектинов заметно облегчит исследование их роли в становлении бобово-ризобиального симбиоза. и

Интродукция чужеродных лектинов в другие бобовые растения может способствовать расширению группы клубеньковых бактерий, из которых макросимбионт в данных почвенно-климатических условиях сможет выбрать наилучшего партнера для симбиоза. Это, в конечном счете, должно привести к более высокому уровню азотфиксации и, соответственно, к увеличению урожайности сельскохозяйственных культур.

Эксперименты с трансгенными растениями, несущими различные гены лектинов, позволяют оценивать роль этих белков, однако такого рода исследования довольно сложны и, кроме того, процедура трансформации бобовых растений представляет собой достаточно трудоемкий процесс. Один из вариантов решения данной проблемы заключается в изучении симбиотической роли лектинов при экзогенной обработке ими растений и микроорганизмов. Так, удобным инструментом для подобных исследований являются лектины бобовых, полученные с применением прокариотических экспрессионных систем. Такие системы позволяют нарабатывать сконструированные гибридные лектины с заданными свойствами для исследования функционально значимых углеводсвязывающих областей, определяющих возможность формирования бобово-ризобиальных отношений.

Цель работы заключалась в выявлении закономерностей строения углеводсвязывающих участков лектинов бобовых растений умеренного климата, создании на их основе гибридных лектинов и исследовании роли гибридных лектинов в становлении бобово-ризобиального симбиоза.

Задачи исследования:

1. Амплификация, клонирование и секвенирование фрагментов генов лектинов бобовых растений умеренного климата;

2. Анализ нуклеотидных и выведенных из них аминокислотных последовательностей секвенированных фрагментов генов лектинов, включающих углеводсвязывающий участок исследуемых видов бобовых растений;

3. Исследование взаимосвязи между строением углеводсвязывающего участка лектинов, их специфичностью к простым сахарам и таксономическим составом ризобий, вступающих в симбиоз с бобовым растением, несущим данный белок;

4. Конструирование гибридных лектинов с измененной специфичностью к углеводам на основе полноразмерного гена лектина гороха, путем замещения углеводсвязывающего участка этого белка гомологичными участками генов лектинов других бобовых растений;

5. Подбор условий для экспрессии гибридных генов лектинов в клетках Е. coli, синтез и выделение функционально активных белков;

6. Исследование углеводсвязывающих свойств гибридных лектинов;

7. Исследование филогении и генетического разнообразия клубеньковых бактерий, вступающих в симбиоз со взятыми в исследование видами бобовых растений;

8. Разработка методов идентификации и паспортизации штаммов клубеньковых бактерий;

9. Оценка влияния природных и гибридных лектинов на становление симбиоза бобовых растений с различными ризобиями.

Научная новизна. Клонированы и секвенированы участки генов лектинов, кодирующие углеводсвязывающие последовательности (УСП) данного белка у 22 видов бобовых растений, относящихся к 17 родам. На основании сравнительного анализа секвенированных нуклеотидных и выведенных из них аминокислотных последовательностей лектинов построены древа сходства данных белков. Выведена консенсусная последовательность УСП Asp-Tre-Phe-Xxx-Asx-Xxx-Xxx-Trp-Asp-Pro-Xxx-Xхх-Ins!Del-Аrg-Hi s лектинов бобовых растений умеренного климата. У представителей рода Caragana обнаружено три класса различных генов лектина, причем внутри каждого из классов выявлен ряд генов, кодирующих более близкие лектины. Существенно отличающиеся друг от друга гены лектинов секвенированы и у солодки голой. Показано, что гены одного класса лектинов разных растений могут быть филогенетически ближе, чем гены лектина разных классов у одного и того же вида растений. У клеверов Trifolium repens, Т. pratense и Т. trichocephalum, входящих в одну группу перекрестной инокуляции, секвенированы фрагменты генов лектинов, имеющих разные по структуре аминокислотной последовательности УСП.

Показано, что УСП лектинов, специфичных к одному и тому же моносахариду, могут существенно отличаться по последовательности и составу включенных в процесс связывания сахара аминокислот. Обнаружено, что растения, вступающие в симбиоз с одними и теми же ризобиями, содержат лектины со схожим строением УСП и сходной специфичностью к простым сахаридам. В УСП лектинов растений, входящих в одну группу инокуляции, показано наличие консервативных аминокислот, характерных только для данной группы лектинов бобовых.

Показано, что лектины близких видов растений козлятников восточного и лекарственного, вступающих тем не менее в симбиоз с разными биоварами клубеньковых бактерий Rhizobium galegae (bv. orientalis и bv. ojficinalis, соответственно), значительно различаются при высокой гомологии Nod факторов их ризобий. Данный факт можно рассматривать как свидетельство в пользу независимого влияния этих двух факторов специфичности на формирование бобово-ризобиального симбиоза. Показана генетическая удаленность штаммов R. galegae, нодулирующих козлятник восточный, от штаммов, вступающих в симбиоз с козлятником лекарственным.

С помощью специально разработанной оригинальной методики сайт-направленного мутагенеза созданы уникальные химерные конструкции, кодирующие полноразмерный лектин гороха Pisum sativum (PSL) с углеводсвязывающим участком, замещенным на таковые лектинов растений клевера лугового Trifolium pratense (psl/tpl), эспарцета песчаного Onobrychis arenaria (psl/oal), донника белого Melilotus albus {psl/mal) и астрагала солодколистного Astragalus glycyphyllos (psl/agl). Показано, что синтезируемые в клетках Е. coli гибридные лектины способны связывать сахариды и вызывать агглютинацию эритроцитов, что указывает на корректность их пространственной укладки и ассоциации субъединиц. Замещение УСП лектина гороха на УСП лектинов М. albus и A. glycyphyllos привело к изменению специфичности к моно- и дисахаридам, что свидетельствует о формировании углеводсвязывающим пептидом лектинов аффинности к простым сахаридам. Анализ углеводсвязывающих свойств гибридов показал, что специфичный к Man/Glc лектин PSL с участком лектина М. albus приобрел слабую аффинность к Gal/GalNAc, а при замещении на таковой A. glycyphyllos - к Gal, заметно ослабив аффинность к Man. Таким образом, у гибридного белка PSL/AGL обнаружена совмещенная специфичность к Gal и Glc, что нехарактерно для лектинов бобовых растений.

Впервые в клубеньках астрагала нутового Astragalus cicer обнаружены бактерии, филогенетически близкие по последовательностям генов 16S рРНК к Agrobacterium tumefaciens strain IAM 14 (GenBank Ac. No. D13294), a в клубеньках эспарцета песчаного - к Phyllobacterium trifolii (GenBank Ac. No. AY786080).

Впервые показано, что лектины бобовых растений, синтезированные в бактериях, сохраняют свойства, вызывающие специфические реакции симбиоза. При обработке гибридным лектином PSL/AGL бактерий из клубеньков Astragalus cicer (филогенетически близких по генам 16S рРНК к Agrobacterium tumefaciens) в ризосфере люцерны, впервые наблюдали нетипичные симбиотические отношения с образованием инфицированных клубеньков. Это свидетельствует о том, что лектин относится к критическим факторам в данной симбиотической системе.

Практическая значимость работы. Полученные результаты расширяют представление о строении молекул лектинов бобовых растений и демонстрируют неоднородность их углеводсвязывающих пептидов, а также способствуют более полному пониманию формирования специфичности данных белков к углеводам и принципов образования групп перекрестной инокуляции бобовых растений. Разработан и запатентован метод цифровой паспортизации микроорганизмов и создания по ним электронных баз данных. Исследована конкурентоспособность используемых в изготовлении промышленных препаратов ризоторфина штаммов ризобий козлятника восточного в почвенно-климатических условиях Башкортостана.

Полученные новые сведения о закономерностях формирования углеводной специфичности лектинов, обусловленной их структурными особенностями, могут быть использованы в моделировании белков с заданными углеводсвязывающими свойствами. Разработанная нами стратегия изменения углевосвязывающих свойств лектинов позволяет моделировать лектины с разнообразной специфичностью, что может найти применение в различных областях биотехнологии. Гибридные лектины, полученные нами путем модификации их углеводсвязывающих сайтов, способны вызывать симбиотические реакции у бобовых растений. Более того, они расширяют (напримкр, Р8Ь/АСЬ) специфичность растений к ризобиям, возможно за счет расширения у гибридов специфичности к углеводам. Исследования роли лектинов в бобово-ризобиальном симбиозе, благодаря созданию и использованию в них гибридных лектинов из разных растений с разными углеводсвязывающими свойствами, могут значительно упроститься и стать гораздо информативнее. Кроме того, гены таких гибридных лектинов как PSrM.Gr, можно интродуцировать в бобовые растения с целью увеличения группы клубеньковых бактерий, из которых растения в данных почвенно-климатических условиях могут выбрать наилучшего партнера для симбиоза, что, в конечном счете, может привести к более высокому уровню азотфиксации, и, соответственно, к росту биологической урожайности сельскохозяйственных культур.

Положения, выносимые на защиту.

1. Углеводсвязывающие последовательности (УСП) лектинов бобовых растений умеренного климата имеют консенсусную последовательность Азр-Тге-РЬе-Ххх-Азх-Ххх-Ххх-Тгр-Азр-Рго-Ххх-Ххх-/я$/1)е/- А^-Кэ.

2. Бобовые растения, вступающие в симбиоз с одними и теми же ризобиями, характеризуются близким строением УСП лектинов со сходной специфичностью к простым сахаридам.

3. В УСП лектинов растений, инокулирующихся одними и теми же ризобиями, имеются консервативные, характерные только для данной группы лектинов, аминокислоты.

4. Заменяя функционально значимые аминокислоты или области углеводсвязывающих участков, можно создавать лектины с измененной специфичностью к сахаридам.

5. Лектины бобовых растений, синтезированные в бактериях, сохраняют свойства, обеспечивающие специфические реакции симбиоза.

6. Гибридные лектины, полученные путем модификации их углеводсвязывающих сайтов, способны расширять круг перекрестной инокуляции бобовых растений.

Конкурсная поддержка работы. Исследования были поддержаны грантами РФФИ (№ 04-04-48884), РФФИ-Агидель (№ 02-04-97903) и грантами Программы поддержки ведущих научных школ РФ (96-1598061; 00-15-97810; НШ-2217.2003.4; НШ-1003.2006.4).

Апробация работы. Материалы диссертации были доложены на X Международном конгрессе по азотфиксации (Санкт-Петербург, 1995); на 3-м ежегодном симпозиуме "Физико-химические основы физиологии растений и биотехнология" (Москва, 1997); на Научной конференции студентов и молодых ученых биологического факультета БашГУ (Уфа, 1997); на Конференции посвященной 30-летию журнала "Молекулярная биология" (Москва, 1997); на XI Международном конгрессе федерации европейского научного общества по физиологии растений (Варна, Болгария, 1998); на 18-ой международной конференции "Мег1ес18" (Портсмут, Великобритания, 1999); на конференции молодых ученых «Молодые ученые Волго-Уральского региона на рубеже веков» (Уфа, 2001); на 6-ой конференции молодых ученых «Биология - наука 21-го века» (Пущино, 2002); на III съезде Биохимического общества (Санкт-Петербург, 2002); на 5-ой Европейской конференции по фиксации азота (Норвич, Великобритания, 2002); на XVI зимней молодежной научной школе «Перспективные направления физико-химической биологии и биотехнологии» (Москва, 2004); на международной конференции «Наука и бизнес: Поиск и использование новых биомолекул: биоразнообразие, окружающая среда, биомедицина» (Пущино, 2004); на международной школе-конференции молодых ученых «Биотехнология будущего» (Санкт-Петербург, 2006); на III Республиканской научно-практической конференции студентов, аспирантов и молодых ученых «Научное и экологическое обеспечение современных технологий» (Уфа, 2006); на международной конференции «Генетика в России и мире» посвященной

40-летию Института общей генетики им. Н.И. Вавилова РАН (Москва, 2006); на III Межрегиональной конференции молодых ученых «Стратегия взаимодействия микроорганизмов и растений с окружающей средой» (Саратов, 2006); на IV съезде Общества биотехнологов России им. Ю.А. Овчинникова (Пущино, 2006); на Международной школе-конференции «Генетика микроорганизмов и биотехнология», посвященной 100-летию со дня рождения С.И. Алиханяна (Москва, 2006).

Публикации. Основные материалы диссертации изложены в 35 печатных работах, а также депонированы в международных банках данных БВВ1/ЕМВЬ/ОепВапк.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 330 страницах, содержит 45 рисунков и 10 таблиц и состоит из введения, обзора литературы, описания объектов и методов исследований, результатов исследований и их обсуждения, заключения, выводов и списка цитированной литературы, включающего 419 работ.

Заключение диссертации по теме «Физиология и биохимия растений», Баймиев, Алексей Ханифович

ОСНОВНЫЕ ВЫВОДЫ

1. Амплифицированы, клонированы и секвенированы участки генов лектинов протяженностью 261 - 379 пн, кодирующие углеводсвязывающие последовательности данного белка у 22 видов бобовых растений, относящихся к 17 родам.

2. На основании множественного выравнивания выведена консенсусная последовательность углеводсвязывающих пептидов лектинов бобовых растений умеренного климата, выражающаяся последовательностью аминокислот Asp Tre Phe Ххх Asx Ххх Ххх Тгр Asp Pro Ххх Ххх Ins/Del Arg His.

3. Обнаружена взаимосвязь между образованием групп бобовых, вступающих в симбиоз с одним и тем же видом ризобий, и схожестью строения углеводсвязывающих последовательностей (УСП) молекул их лектинов. В УСП этих растений показано наличие консервативных, характерных только для данной группы растительных лектинов, аминокислот.

4. На основании сравнительного анализа секвенированных нуклеотидных и выведенных из них аминокислотных последовательностей лектинов построены древа сходства данных белков, отражающие родственные взаимоотношения несущих их бобовых растений.

5. У караганы древовидной, караганы кустарниковой и солодки голой обнаружено по несколько различных генов лектина. При этом у представителей рода Caragana выявлено три различных класса лектиновых генов, причем внутри каждого из классов имеется ряд генов, кодирующих более близкие лектины. Показано, что гены одного класса лектинов разных растений филогенетически ближе, чем гены лектина разных классов у одного и того же вида бобовых.

6. Лектины близких видов растений козлятника восточного и лекарственного значительно различаются при высокой гомологии Nod-факторов их ризобий. Данный факт можно рассматривать как свидетельство в пользу независимого влияния этих двух факторов специфичности на формирование бобово-ризобиального симбиоза, и что лектин является одним из критических факторов, обуславливающих существование двух групп инокуляции G. officinalis - R. ga/egae bv. officinalis и G. oriental is - R. galegae bv. oriental is.

7. Созданы химерные конструкции на основе гена лектина гороха Pisum sativum {psi) с углеводсвязывающим участком, замещенным на таковые лектинов Onobrychis arenaria {psl/oal), Trifolium pratense(psl/tpl), Astragalus glycyphyllos (psl/agl) и Melilotus albus (psl/mal).

8. Синтезируемые в клетках E.coli гибридные лектины способны связывать сахариды и вызывать агглютинацию эритроцитов, что указывает на их корректную пространственную укладку и ассоциацию субъединиц. Замещение УСП лектина Р. sativum PSL на УСП лектинов A. glycyphyllos (PSL/AGL) и M albus (PSL/MAL) привело к изменению специфичности к моно- и дисахаридам.

9. В клубеньках астрагала нутового Astragalus cicer обнаружены бактерии, филогенетически близкие по последовательностям генов 16S рРНК к Agrobacterium tumefaciens strain I AM 14, а в клубеньках эспарцета песчаного к Phyllobacterium trifolii.

10. Выявлена заметная генетическая удаленность штаммов Rhizobium galegae, нодулирующих козлятник восточный, от штаммов, вступающих в симбиоз с козлятником лекарственным.

11. На основе метода КМРФ разработан и запатентован метод цифровой паспортизации микроорганизмов и создания по ним электронных баз данных.

12. Обработка находящихся в ризосфере Medicago sativa ризобий R. leguminosarum bv. viciae синтезированным в Е. coli лектином PSL привела к образованию неинфицированных клубеньков, что свидетельствует о сохранении у лектинов, наработанных в прокариотической экспрессионной системе, симбиотических функций.

13. При обработке гибридным лектином PSL/AGL клубеньковых бактерий Astragalus cicer в ризосфере М. sativa обнаружены нетипичные симбиотические отношения с образованием инфицированных клубеньков. Таким образом, гибридные лектины, полученные путем модификации их углеводсвязывающих сайтов, способны вызывать симбиотические реакции у бобовых растений. Более того, они расширяют (PSL/AGL) специфичность растений к ризобиям, возможно, за счет расширения у гибридов специфичности к углеводам.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Усвоение атмосферного азота клубеньковыми микроорганизмами рода ЯЫхвЫит в симбиозе с бобовыми растениями является объектом пристального внимания ученых всего мира. Изучение механизма образования подобного симбиоза, факторов специфичности, определяющих возможность формирования азотфиксирующих клубеньков штаммом ризобий на конкретном растении, имеет вместе с теоретическим, также и огромный практический интерес. Создание небобовых трансгенных растений, способных фиксировать азот атмосферы, позволит в какой то мере решить «проблему азота», являющуюся одним из основных препятствий на пути эволюции органического мира. Кроме того, результаты исследований формирования углеводной специфичности лектинов, обусловленной их структурными особенностями, могут быть использованы в моделировании белков с новыми и заданными углеводсвязывающими свойствами, которые можно применять для решения ряда задач биотехнологии и фармакологии.

С целью изучения строения лектинов бобовых растений, являющихся одной из детерминант формирования специфичности симбиоза нами был проведен компьютерный анализ известных из литературы и баз данных на момент начала работы аминокислотных последовательностей лектинов бобовых растений. На протяжении белковых цепей лектинов было выявлено наличие нескольких высококонсервативных участков, практически не отличающихся у сравниваемых видов по последовательностям составляющих их аминокислот. Далее по нескольким известным нуклеотидным последовательностям генов лектина были выведены консенсусные мотивы данных высококонсервативных областей уже на нуклеотидном уровне, к которым были подобраны несколько олигонуклеотидных праймеров для проведения ПЦР, с таким расчетом, чтобы продукт амплификации включал последовательности, кодирующие углеводсвязывающий пептид данных белков. С использованием подобранных праймеров нами амплифицированы, клонированы в фагмидных векторах и секвенированы нуклеотидные последовательности участков генов лектина протяженностью 261-379 пн из 22 видов бобовых растений относящихся к 17 родам. У представителей рода Caragana обнаружено три класса различных генов лектина, причем внутри каждого из классов имеется ряд генов, кодирующих более близкие лектины, формирующие подклассы. Весьма характерным является то, что гены одного класса лектинов разных растений оказываются филогенетически ближе, чем гены лектина разных классов у одного и того же вида растений. У солодки голой также секвенировано два гена лектина, сильно отличающиеся друг от друга. Проведенный компьютерный анализ последовательностей с помощью пакета прикладных программ Lasergene позволил построить филогенетическое древо исследуемых лектинов, отражающее их родственные и эволюционные взаимоотношения и предсказать аминокислотные последовательности данного участка молекулы белка. Получены уникальные данные о строении углеводсвязывающих участков лектина ряда родов бобовых растений умеренного климата, характеризующихся большой вариабельностью и имеющих консенсусную последовательность Asp Tre Phe Ххх Asx Ххх Ххх Lrp Asp Pro Ххх Ххх Ins!Del Arg His, в которой сосредоточено большинство как замен, так и вставок/делеций аминокислот. 31 нуклеотидная и аминокислотная последовательности фрагментов генов лектина зарегистрированы в международных банках данных EMBL/GenBank/DDBJ.

Исследования показали, что УСП лектинов, специфичных к одному и тому же моносахариду, достаточно сильно отличаются по последовательности и составу включенных в процесс связывания сахара аминокислот. Лектины разных бобовых растений могут связывать одинаковые сахара с помощью различных сочетании активных аминокислотных остатков, тем самым' еще более повышая поливариантность строения углеводсвязывающего домена для образования тонкой специфичности белка к олигосахариду.

Обнаружена взаимосвязь между образованием групп бобовых * • растений, подчас из разных родов и триб, вступающих в симбиоз с одним и тем же видом 'ризобий H схожестью строения углеводсвязывающих участков молекул лектина этих растений. В организации генов лектинов растений, входящих в одну группу инокуляции, выражено наличие ч консервативных, характерных только для данной группы растительных лектинов, аминокислот. При этом, лектины растений одной группы инокуляции имеют сходную специфичность к простым сахаридам, то есть специфичность к моносахаридам является необходимым, но не достаточным условием, чтобы лектины специфично связывались с поверхностными полисахаридами ризобий. Секвенирование фрагментов генов, кодирующих углеводсязывающие участки лектинов морфологически близких видов растений козлятника восточного и лекарственного, вступающих тем не менее в симбиоз с разными биоварами клубеньковых бактерий Rhizobium galegae (bv. oriental is и bv. officinalis, соответственно) показало, что их лектины значительно различаются, при высокой гомологии Nod факторов их ризобий, являющихся детерминантами специфичности бобово-ризобиальной системы Galega sp. - R. galegae. Этот факт указывает на то, что лектин может являться одним из критических факторов, обуславливающих существование двух групп инокуляции G. officinalis - R. galegae bv. officinalis и G. orientalis - R. galegae bv. orientalis, но не является рецептором Nod факторов ризобий.

Опираясь на полученные данные с помощью оригинальной методики сайт-направленного мутагенеза, позволяющей заменять протяженные участки молекул ДНК, созданы уникальные химерные конструкции, представляющие собой полноразмерный ген лектина гороха с замещенным углеводсвязывающим участком (УСП) участками генов Trifolium pratense (psl/tp¡), Onobrychis arenaria (psl/oal), Melilotas albus (psl/mal) и Astragalus glycyphyllos (psl/agl). Показано, что синтезируемые в клетках Е. coli гибридные лектины способны связывать сахариды и вызывать агглютинацию эритроцитов, что указывает на корректность их пространственной укладки и полимеризации субъединиц.

Анализ углеводсвязывающих свойств гибридных белков показал, что специфичный к Man/Glc PSL с участком лектина Melilotus albus приобрел слабую аффинность к Gal/GalNAc, а при замещении на таковой Astragalus glycyphyllos - к Gal, заметно ослабив аффинность к Man. Таким образом, разработанная нами стратегия изменения углевосвязывающих свойств лектинов позволяет моделировать лектины с разнообразной специфичностью, которые могут найти применение в таких биотехнологических процессах как тонкая очистка углеводов и т.д.

К сожалению, исследования формирования специфичности групп перекрестной инокуляции бобовых растений умеренного климата к отдельным видам и штаммам ризобий связаны с определенными трудностями, вследствие недостаточной изученности данных микроорганизмов. Многие клубеньковые бактерии, почв средней полосы России, в настоящий момент даже не имеют видового статуса.

Анализ бактерий из клубеньков астрагала нутового и эспарцета песчаного, произрастающих на горе Чесноковская Уфимского района Республики Башкортостан показал, что секвенированный фрагмент генов 16S рРНК клубеньковых бактерий астрагала, полностью идентичен таковому Agrobacterium tumefaciens strain I AM 14 (Dl 3294), описанному Yanagi и Yamasato, а бактерии эспарцета по последовательности генов 16S рРНК имеют 99,9% гомологии с Phyllobacterium trifolii, описанным Valverde с соавторами.

Одной из причин неизученности ризобий является практическое отсутствие морфологических различий между штаммами клубеньковых бактерий, инфицирующих то или иное растение. Вследствие чего идентификация штамма, образовавшего клубенек на конкретном бобовом растении, с помощью нумерических методов сопряжена с определенными трудностями.

Для решения данной проблемы нами был рассмотрены методы молекулярной биологии, способные с довольно высокой чувствительностью на генетическом уровне выявлять различия близкородственных штаммов бактерий. Исследована эффективность применения таких современных методов идентификации микроорганизмов как RAPD и КМРФ для обнаружения и паспортизации штаммов азотфиксирующих клубеньковых бактерий Rhizobium galegae, вступающих в симбиоз с козлятником. Выявлена генетическая отдаленность штаммов ризобий, нодулирующих козлятник восточный, от штаммов, специфичных к козлятнику лекарственному.

Рассмотрены сильные и слабые стороны каждого метода и даны рекомендации по их использованию. Особое внимание уделено относительно новому методу КМРФ, позволяющему с высоким разрешением не только идентифицировать, но и паспортизировать штаммы ризобий. На основе данного метода разработан метод цифровой паспортизации микроорганизмов путем присвоения им индивидуальных штрих кодов, выведенных на основании уникального набора длин фрагментов их рестрицированной ДНК. На метод получен международный патент РСТ WO 03/066899 AI "Digital identification of genetic materials and methods for acquiring data for it".

При обработке ризобий \egummosarum Ьу. \iciae лектином гороха в ризосфере люцерны обнаружены неинфицированные клубеньки необычайно больших размеров, имевшие особенную гроздеподобную форму, не наблюдавшиеся в других вариантах.

При инокуляции люцерны неспецифичными для нее бактериями А. скег и обработке гибридным лектином РБЬ/АвЬ, на корнях сформировались в небольшом количестве клубеньки. Рассев содержимого клубеньков на питательную среду выявил наличие в них бактерий, которые по ЯАРЭ ДНК-анализу оказались идентичны бактериям из клубеньков А. сгсег. Таким образом, в данном варианте наблюдались нетипичные симбиотические отношения между люцерной и клубеньковыми бактериями астрагала с образованием инфицированных клубеньков.

Гибридные лектины, полученные нами путем модификации их углеводсвязывающих сайтов, способны вызывать симбиотические реакции у бобовых растений. Более того, они расширяют (РБЬ/АСЬ) специфичность растений к ризобиям, возможно за счет расширения у гибридов специфичности к углеводам. Исследования роли лектинов в бобово-ризобиальном симбиозе, благодаря созданию и использованию в них гибридных лектинов из разных растений с разными углеводсвязывающими свойствами, могут значительно упроститься и стать гораздо информативнее. Кроме того, гены таких гибридных лектинов как РБЬ/АвЦ сочетающих в себе углеводсвязывающие качества нескольких лектинов, можно интродуцировать в бобовые растения с целью увеличения группы клубеньковых бактерий, из которых растения в данных почвенно-климатических условиях могут выбрать наилучшего партнера для симбиоза, что, в конечном счете, может привести к более высокому уровню азотфиксации, а, стало быть и к росту биологической урожайности сельскохозяйственных культур.

Список литературы диссертационного исследования доктор биологических наук Баймиев, Алексей Ханифович, 2007 год

1. Андронов Е.Е., Румянцева М.Л., Симаров Б.В. Генетическое разнообразие природной популяции Sinorhizobium me/iloti, выявленное при анализе криптических плазмид и IS Rm20\ 1-2-фингерпринтов // Генетика. 2001. - Т.37, № 3. - С. 610-616.

2. Белимов A.A., Кунакова A.M., Сафронова В.И., Степанок В.В., Юдкин Л.Ю., Алексеев Ю.В., Кожемяков А.П. Использование ассоциативных бактерий для инокуляции ячменя в условиях загрязнения почвы свинцом и кадмием // Микробиология. 2004. - Т.73. - С. 118-125.

3. Доросинский Л.М. Клубеньковые бактерии и нитрагин. Л.: Колос, 1970. 191С.

4. Лахтин В.М. Молекулярная организация лектинов // Мол. биология. 1994. - Т. 28, № 2. - С. 245-273.

5. Мишустин E.H., Шильникова В.К. Клубеньковые бактерии и инокуляционный процесс. М.: Наука, 1973. 288 С.

6. Новикова H.H. Современные представления о филогении и систематике клубеньковых бактерий // Микробиология. 1996. - Т. 65, № 4.-С. 437-450.

7. Новикова H.H., Сафронова В.И., Павлова Е.А. О характере взаимодействия клубеньковых бактерий козлятника Rhizobium galegae с бобовыми растениями // С.-х. биология. 1992. - № 5. - С. 105-110.

8. Парийская А.Н., Клевенская И.Л. Распространение в природе и возможные пути эволюции азотфиксирующего симбиоза // Успехи микробиол. 1979.-Т. 14.-С. 124-147.

9. Проворов H.A. Взаимосвязь между таксономией бобовых и специфичностью их взаимодействия с клубеньковыми бактериями // Ботан. журнал. 1992. - Т. 77, № 8. - С. 21-32.

10. Проворов H.A. Коэволюция бобовых растений и клубеньковых бактерий: таксономические и генетические аспекты // Журнал общей биологии. 1996. - Т. 57. № 2. - С. 52-77.

11. Проворов H.A. Специфичность взаимодействия клубеньковых бактерий и бобовых растений и эволюция симбиоза // С.-х. биология. -1985.-№3.-С. 34-47.

12. Проворов H.A., Борисов А.Ю., Тихонович H.A. Сравнительная генетика и эволюционная морфология симбиозов растений с микробами-азотфиксаторами и эндомикоризными грибами // Журнал общей биологии. 2002. - Т. 63. № 6. - С. 451 -472.

13. Родынюк И.С., Клевенская И.Л. Клубеньковые образования травянистых растений Сибири. Новосибирск: Наука, 1977.- 174 С.

14. Симаров Б.В., Аронштам A.A., Новикова H.H. Генетические основы селекции клубеньковых бактерий. Л.: Агропромиздат, 1990. 192 С.

15. Спайнк Г., Кондороши А., Хукас П. Rhizobiaceae, молекулярная биология бактерий взаимодействующих с растениями: Пер. с англ. / Под ред. Тихоновича H.A., Проворова H.A. Санкт-Петербург, - 2002. - 567 С.

16. Тахтаджян А.Л. Система магнолиофитов. Л.: Наука, 1987. 439 С.

17. Тихонович H.A. Повышение эффективности симбиотической азотфиксации у бобовых // Микробиол. журнал. 1997. - Т. 59, № 4. - С. 14-22.

18. Феник С.И., Трофимяк Т.Б., Блюм Я.Б. Механизмы формирования устойчивости растений к тяжелым металлам // Усп. совр. биол. 1995. -Т.1 15. - С. 261-275.

19. Чернова Т.А., Аронштам A.A., Симаров Б.В. Изучение генетической природы невирулентных штаммов СХМ1-125 и СХМ1126 Rhizobium meliloti II Генетика. 1986. - Т. 22. №.8. - С. 2066-2073.

20. Яковлев Г.П. Бобовые земного шара. Л.: Наука, 1991. - 144 С.

21. Abe M., Kawamura R., Higashi S., Mori S., Shibata M., Uchiumi T. Transfer of the symbiotic plasmid from Rhizobium leguminosarum bv. trifolii to Agrobacterium tumefaciens II J. Gen. Appl. Microbiol. 1998. - V. 44, N 1.- P. 65-74.

22. Abe M., Sherwood J.E., Hollingsworth R.I., Dazzo F.B. Stimulation of clover root hair infection by lectin-binding oligosaccharides from the capsular and extracellular polysaccharides of Rhizobium trifolii II J. Bacteriol. 1984. -V. 160. - P. 517-520.

23. Adar R., Sharon N. Mutational studies of the amino acid residues in the combining site of Erythrina corallodendron lectin // Eur. J. Biochem. 1996. -V. 239. P. 668-674.

24. Adar R., Streicher H., Rozenblatt S., Sharon N. Synthesis of soybean agglutinin in bacterial and mammalian cells // Eur. J. Biochem. 1997. - V. 249, N 3. - P. 684-689.

25. Allen O.N., Allen E.K. The Leguminosae. A source book of characteristics, uses and nodulation // Madison: Univ. Wisconsin Press, 1981. 800 P.

26. Al-Mallah M.K., Davey M.R., Cocking E.C. Enzymatic treatment of clover root hairs removes a barrier to Rhizobium host specificity // Biotechnol.- 1987. V. 5, N 8. - P. 1319-1322.

27. Al-Mallah M.K., Davey M.R., Cocking E.C. Formation of nodular structures on rise seedlings by rhizobia // J. Exper. Bot. 1989. - V. 40. - P. 473-478.

28. Armitage J.P., Gallager A., Johnston A.W.B. Comparison of the chemotactic behaviour of Rhizobiwn leguminosarum with and without the nodulation plasmid // Molec. Microbiol. 1988. - V. 2, N 6. - P. 743-748.

29. Badenoch-Jones J., Flanders D.J., Rollfe B.G. Association of Rhizobium strains with roots of Trifolium repens II Appl. Environ. Microbiol. 1985. - V. 49, N6.-P. 1511-1520.

30. Banfalvi Z., Sakanyan V., Koncz C., Kiss A., Dusha I., Kondorosi A. Location of nodulation and nitrogen fixation genes on a high molecular weight plasmid of R. meliloti II Mol. Gen. Genet. 1981.-V. 184. - P. 334-339.

31. Barbour W.M., Hatterman D.R., Stacey G. Chemotaxis of Bradyrhizobium japonicum to soybean exudates // Appl. Environ. Microbiol. -1991. V. 57. - P. 2635-2639.

32. Bauer W.D. Infection of legumes by rhizobia // Annu. Rev. Plant Physiol. 1981. - V. 32. - P. 407-409.

33. Baumann C., Rudiger H., Strosberg A.D. A comparison of the two lectins from Vicia cracca II FEBS Lett. 1979. - V. 102. - P. 216-218.

34. Baumann C„ Strosberg A.D., Rudiger H. Purification and characterization of a mannose/glucose-specific lectin from Vicia cracca II Eur. J. Biochem. 1982. - V. 122. - P. 105-1 10.

35. Becking J.H. The Rhizobium symbiosis with the nonlegume Parasponia // In: Biol. Nitrogen Fixation (Stacey G., Burris R.H., Evans H.J., Ed.). 1992. -P. 497-559.

36. Bhuvaneswari T.V., Bauer W.D. Role of lectins in plant-microorganism interactions // Plant Physiol. 1978. - V. 62. - P. 71-74.

37. Bhuvaneswari T.V., Mills K.K., Crist D.K., Evans W.R., Bauer W.D. Effect of culture age on symbiotic infectivity of Bradyrhizobium japonicum II J. Bacterid. 1983,-V. 153.-P. 443-451.

38. Bhuvaneswari T.V., Pueppke S.G., Bauer W.D. Role of lectins in plant-microorganisms interactions. I. Binding of soybean lectin to rhizobia // Plant. Physiol. 1977. - V. 60. - P. 486-492.

39. Birnboim H.C., Doly J. A rapid alkaline extraction procedure for screening recombinant plasmid DNA // Nucl. Acids Res. 1979. - V. 7. - P. 1513-1523.

40. Bohlool B.B., Schmidt E.L. Lectins: a possible basis for specificity in the Rhizobium-legume symbiosis // Science. 1974. - V. 185. - P. 269-275.

41. Boogerd F.C., van Rossum D. Nodulation of groundnut by Bradyrhizobium: a simple infection process by crack entry // FEMS Microbiology Reviews. 1997. - P. 5-27.

42. Booij P., Demel R.A., De Pater B.S., Kijne J.W. Insertion of pea lectin into a phospholipid monolayer // Plant. Mol. Biol. 1996. - V. 31. - P. 169-173.

43. Bouckaert J., Hamelryck T., Wyns L., Loris R. Novel structures of plant lectins and their complexes with carbohydrates // Curr. Opin. Struct. Biol. -1999.-V. 9, N 5.-P. 572-577.

44. Brelles-Marino G., Costa G.A., Boiardi J.L. Enhancement of infection thread formation by Rhizobium etli incubated with bean seed lectin // Microbiol. Res. 1996. - V. 151. - P. 243-246.

45. Brewer C.F. Multivalent lectin-carbohydrate cross-linking interactions // Chemtracts: Biochem. Mol. Biol. 1996. - V. 6. - P. 165-179.

46. Brill L. M., Fujishige N. A., Hackworth C. A., Hirsch A. M. Expression of MsLECl transgenes in alfalfa plants causes symbiotic abnormalities // Mol. Plant Microbe Interact. 2004. - V. 17, N 1. - P. 16-26.

47. Brom S., Martinez E., Davila G., Palacios R. Narrow- and broad-host-range symbiotic plasmids of Rhizobium spp. strains that nodulate Phaseolus vulgaris.// Appl. Environ. Microbiol. 1988. - V. 54. - P. 1280-1283.

48. Brom S., Santos A.G., Stepkowsky T., Flores M., Davila G., Romero D., Palacios R. Different plasmids of Rhizobium leguminosarum bv. phaseoli are required for optimal symbiotic performance // J. Bacteriol. 1992. - V. 174, N16. - P. 5186-5189.

49. Broughton W.J., Jabbouri S., Perret H. Keys to symbiotic harmony// J. Bacteriol. 2000. P. 5641 -5652.

50. Broughton W.J., Samrey U., Stanlay J. Ecological genetics of Rhizobium meliloti: symbiotic plasmid transfer in the Medicago sativa rhisosphere // FEMS Microb. Lett. 1987. - V. 40, N 2. - P. 251-255.

51. Bunker T.W. // Ph.D thesis, University of California. // Plant Physiol. -1995. -V. 76. P. 879-884.

52. Burd G.I., Dixon D.G., Glick B.R. Plant growth promoting bacteria that decrease heavy metal toxicity in plants // Can. J. Microbiol. 2000. - V. 46. -P. 245-247.

53. Caetano-Anolles G., Joshi P., Gresshoff P. Nodulation in the absence of Rhizobium // In: Plant Biotech. Development (Gresshoff P., Ed.). London. -1992. P. 61-70.

54. Caetano-Anolles G., Wrobel-Boerner E., Bauer W.D. Growth and movement of spot inoculated Rhizobium meliloti on the root surface of alfalfa // Plant Physiol. 1992.-V. 98. - P. 1181-1189.

55. Callaham D.A., Torrey J.G. The structural basis for the infection of root hairs in Trifolium repens by Rhizobium II Can. J. Bot. 1981. - V. 59. - P. 1647-1664.

56. Carlson R.W. Heterogeneity of Rhizobium lipopolisaccharides // J. Bacterid. 1984. - V. 158. - P. 1012-1017.

57. Carlson R.W., Kalembasa S., Tunoroski D., Packori P., Noel K.D. Characterisation of the lipopolysaccharide from a Rhizobium phaseoli mutant that is defective in infection thread development // J. Bacteriol. 1987. - V. 169.-P. 4923-4928.

58. Casida L.E. Ensifer adhaerens gen. nov., sp. nov.: A bacterial predator of bacteria in soil. // Int. J. Syst. Bacteriol. 1982. -.V. 32, - P. 339-345.

59. Chen W.X., Li G.S., Wang E.T., Yuan H.L., Li J.L. Rhizobium huakuii sop. nov. isolated from the root nodules of Astragalus sinicus II Internat. J. Systen. Bacteriol. 1991. - V. 41, N 2. - P. 275-280.

60. Chen W.X., Wang E.T, Kuykendall L.D. Genus Mesorhizobium // In: Bergey's Manual of Systematic Bacteriology, 2nd ed., (Garrity G.M., Ed.) -New York, Springer-Verlag. 2003. - V. 2.

61. Chen W.X., Yan G.H., Li J.L. Numerical taxonomic study of fast-growing soybean rhizobia and a proposal that Rhizobium fredii be assigned to Sinorhizobium gen. nov. // Intern. J. Systen. Bacteriol. 1988. - V. 38, N 4. - P. 392-397.

62. Chervenak M.C., Toone E.J. Calorimetric analysis of the binding of lectins with overlapping carbohydrate-binding ligand specificities // Biochemistry. 1995.-V. 34, N 16.-P. 5685-95.

63. Chrispeels M.J., Raikhel N.V. Lectins, lectin genes and their role in plant defence//Plant Cell. 1991.-V. 3. P. 1-9.

64. Clewell D.B., Helinski D.R. Supercoiled circular DNA-protein complex in Escherichia coli: purification and induced conversion to an open circular DNA form // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1969. - V. 62, N 4. - P. 1159-1166.

65. Cobbett C.S. Phytochelatin biosynthesis and function in heavy metal detoxification // Curr. Opini. Plant Biology. 2000a. - V. 3. - P. 211-216.

66. Cobbett C.S. Phytochelatins and their roles in heavy metal detoxification // Plant Physiol. 2000b. - V. 123. - P. 825-832.

67. Cocking E.C., Davey M.R. Nitrogen from the air for non-legume crops // Chem. Industry. 1991. - P. 831-835.

68. Cohen S.N., Chang A.C.Y., Hsu L. Nonchromosomal antibiotic resistance in bacteria Genetic transformation of E. coli by R-factor DNA. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. - 1972. - V. 69. - P. 2110-21 14.

69. Cote F., Hahn M.G. Oligosaccharins: Structures and signal transduction // Plant Mol. Biol. 1994.-V. 26. - P. 1379-1411.

70. Cullimore J.V., Ranjeva R., Bono J.J. Perception of lipo-chitooligosaccaridic Nod factors in legumes // Elsevier Science Ltd. 2001. -P. 1360-1385.

71. Dazzo F. B., Brill W. J. Receptor site on clover and alfalfa roots for Rhizobiumll Appl. Environ. Microbiol. 1977.-V. 33.-P. 132-136.

72. Dazzo F.B., Brill W.J. Regulation by fixed nitrogen of host-symbiont recognition in the rhizobium-clover symbiosis // Plant Physiol. 1978. - V. 62. -P. 18-21.

73. Dazzo F.B., Hubbel D.H. Cross-reactive antigens and lectin as determinants of symbiotic specificity in the Rhizobium-clovev association // Appl. Microbiol. 1975. - V. 30. - P. 1017-1021.

74. Dazzo F.B., Napoli C.A., Hubbell D.H. Adsorption of bacteria to roots as related to host specificity in the Rhizobium-clover symbiosis // Appl. Envir. Microbiol. 1976.-V. 32, N l.-P. 166-171.

75. Dazzo F.B., Truchet G.L, Sherwood J.E. Alteration of the trifolin A-binding capsule of Rhizobium trifolii -0403 by enzymes released from clover roots // Appl. Environ. Microbiol. 1982. - V. 44. - P. 478-490.

76. Dazzo F.B., Truchet G.L. Interactions of lectins and their saccharide receptors in the Rhizobium-legume symbiosis // J. Membr. Biol. 1983. - V. 73. -P. 4-11.

77. De Moranville C.J., Kaminski A.R., Barnett N.M., Bottino P.J., Blevins D.G. Substancies from cultured soybean cells which stimulate or inhibit acetylene reduction by free-living Rhizobium japonicum II Physiol. Plant. -1981.-V. 42, N 1.-P. 53-58.

78. Deasey M. C., Matthysse A. G. Interactions of wild type and a cellulose-minus mutant of Agrobacterium tumefaciens with tobacco mesophyll and tobacco tissue culture cells // Phytopathology. 1984. - V. 74. - P. 991-994.

79. Denarie I., Cullimore J. Lipo-oligosaccharide nodulation factors: a new class of signalling molecules mediating recognition and morphogenesis // Cell. 1993. -V. 74. - P. 951-954.

80. Denarie I., Debelle F., Prome J.C. Rhizobium lipo-chitooligosaccharide nodulation factors: signaling molecules mediating recognition and morphogenesis // Annu. Rev. Biochem. 1996. - 65. - P. 503-535.

81. Di Virgilio S.N.A. High performance lectin affinity chromatography for fractionation and sequence determination of oligosaccharides // University of Georgia. 1998.

82. Diaz C.L., Logman T.J.J., Stam H.C., Kijne J.W. Sugar-binding activity of pea lectin expressed in white clover hairy roots // Plannt Physiol. 1995. -V. 109.-P. 1167-1177.

83. Diaz C.L., Melchers L.S., Hooykaas P.J.J., Lugtenberg B.J.J., Kijne J.W. Root lectin as a determinant of host-plant specificity in the Rhizobium-\Qgume symbiosis //Nature. 1989. - V. 338. - P. 579-581.

84. Diaz C.L., Spaink H.P., Kijne J.W. Heterologous rhizobal lipochitin oligosaccharides and chitin oligomers induce cortical cell divisions in red clover root, transformed with the pea lectin gene // Mol. Plant Microbe Interact. 2000,-V. 13.-P. 268-276.

85. Diaz C.L., Van Spronsen P.C., Bakhuizen R., Logman G.J.J., Lugtenberg B.J.J., Kijne J.W. Correlation between infection by Rhizobium leguminosarum and lectin on the surface of Pisum sativum L. roots // Planta. 1986. - V. 168. -P. 350-358.

86. Dixon R.A., Paiva N.L. Stress-induced phenylpropanoid metabolism // Plant Cell. 1995.- V. 7.-P. 1085-1097.

87. Djordjevic M.A., Zurkowski W., Shine J., Rolfe B.G. Sym plasmid transfer to various symbiotic mutants of Rhizobium trifolii, R. leguminosarum and R. meliloti II J. Bacteriol. 1983.-V. 156, N3.-P. 1035-1045.

88. Dobert R.C., Breil B.T., Triplett E. DNA sequence of the common nodulation genes of Bradyrhizobium elkanii and their phylogenetic relationship to those of other nodulating bacteria // Mol. Plant-Microbe Interact. 1994. -V. 7,N5.-P. 564-572.

89. Dooley J.J., Harrisson S.P., Mytton L.R., Dye M., Cresswell A., Scot L., Beeching J.R. Phylogenetic grouping and identification of Rhizobium isolates based on random amplified polymorphic DNA profiles // Can. J. Microbiol. -1993. V. 39. - P. 665-673.

90. Dreyfus B., Dommergueas Y.R. Nitrogen-fixing nodules induced by Rhizobium on the stem of the tropical legume Sesbania rostrata II FEMS Microbiol. Letts. 1981. -V. 10. - P. 313-317.

91. Dreyfus B., Garcia J.L., Gillis M. Characterization of Azorhizobium caulinodans gen. nov., sp. nov., a stem-nodulating nitrogen-fixing bacteriaisolated from Sesbania rostrata II Internat. J. Systen. Bacteriol. 1988. - V. 38, N1.-P. 89-98.

92. Duxbury T., Bicknell B. Metal tolerant bacterial populations from natural and metal-polluted soil // Soil. Biol. Biochem. 1983. - V. 15. - P. 243-250.

93. Dye M., Scot L., Mytton L.R., Harrison S.P., Dooley J.J., Cresswell A. A study of Rhizobium leguminosarum biovar trifolii populations from soil extracts using randomly amplified polymorphic DNA profiles // Can. J. Microbiol. 1995. - V. 41. - P. 336-344.

94. Dylan T. Rhizobium meliloti genes required for nodule development are related to chromosomal virulence genes in Agrobacterium tumefaciens II Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1986. - V. 83. - P. 4403-4407.

95. Eardly B.D., Materon L.A., Smith N.H., Johnson D.A., Rumbaugh M.G., Selander R.K. Genetic structure of natural populations of the nitrogen-fixing bacterium Rhizobium meliloti II Appl. Environ. Microbiol. 1990. - V. 56, N 1. -P. 187-194.

96. Ebeling S., Kundig C., Hennecke H. Discovery of a rhizobial RNA that is essential for symbiotic root nodule development // J. Bacteriol. 1990. - V. 173, N. 20.-P. 6373-6382.

97. Eckhardt T. A rapid method for the identification of plasmid desoxyribonucleic acid in bacteria// Plasmid. 1978. - V. 1. - P. 584-588.

98. Elgavish S., Shaanan B. Chemical characteristics of dimer interfaces in the legume lectin family // Protein Science. 2001. - V. 10. - P. 753-761.

99. Etzler M.E. Plant lectins: Molecular biology, synthesis, and function // In Glycoconjugates: Composition, structure and function. 1992. - P. 521 -539.

100. Etzler M.E. Production of a lectin in tissue cultures of Dolichos biflorus II Annu. Rev. Plant Physiol. 1985. - V. 36. - P. 209-234.

101. Etzler M.E. The Lectins: Properties, functions and applications in biology and medicine // New York, Academic Press. 1986.- P. 371-435.

102. Etzler M.E., Marilynn E. From structure to activity: new insights into the functions of legume lectins // in Glycoscience and Glycotechnology. 1998. -V. 10,N53-P. 247-255.

103. Etzler M.E., Murphy J.B. Do legume vegetative tissue lectins play roles in plant-microbial interactions? // In: Biology of Plant-Microbe Interactions (Stacey G., Mullin B, Gresshiff P.M., Eds). St. Paul, ISMPMI. - 1996. - P. 105-110.

104. Feinberg A.P., Vogelstein B. A technique for radiolabeling DNA restriction endonuclease fragments to high specific activity // Anal. Biochem. -1983.-V. 132.-P. 6-13.

105. Finan T.M., Hirsch A.M., Leigh J.A., Johansen E., Kuldau G.A., Deegan S., Walker G.C., Signer E.R. Symbiotic mutants of Rhizobium meliloti that uncouple plant from bacterial differentiation // Cell 1985. - V. 40. - P. 869877.

106. Finan T.M. Evolving insights: Symbiosis islands and horizontal gene transfer. // J. Bacteriol. 2002. - V. 184. - P. 2855-2856.

107. Foriers A., de Neve R., Kanarek L., Strosberg A.D. Common ancestor for concanavalin A and lentil lectin? // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1978. - V. 75. -P. 1136-1139.

108. Franssen H.J., Vijn I., Yang W.C., Bisseling T. Developmental aspects of the Rhizobium-legume symbiosis // Plant. Mol. Biol. 1992. - V. 19. - P. 89107.

109. Fraysse N., Couderc F., Poinsot V. Surface polysaccharide involvement in establishing the rhizobium-legamQ symbiosis // Eur. J. Biochem. 2003. -V. 270. - P. 1365-1380.

110. Freiberg C., Fellay R., Bairoch A., Brouchton W.J., Rosen-thai A., Perret X. Molecular basis of symbiosis between Rhizobium and legumes. // Nature. -1997.-V. 387. P.394-401.

111. Gadd G.M. Heavy metal accumulation by bacteria and other microorganisms // Experientia. 1990. - V. 46. - P. 834-840.

112. Gao J., Terefework Z., Chen W., Lindstrom K. Genetic diversity of rhizobia isolated from Astragalus adsurgens growing in different geographical regions of China // J. Biotechnol. 2001. - V. 91. - P. 155-168.

113. Gao J.L., Sun J.G., Wang E.T., Chen W.X. Numerical taxonomy and DNA relatedness of tropical rhizobia isolated from Hainan province, China // Intern. J. System. Bacteriol. 1994. - V. 44, N 1. - P. 151-158.

114. Garoff, H., Ansorge, W. Improvements of DNA sequencing gels // Anal. Biochem. 1981. - V. 115. - P.450-457.

115. Gatehouse J.A., Bown D., Evans I.M., Gatehouse L.N., Jobes D., Preston P., Croy R.R.D. Sequence of the seed lectin from pea (Pisum sativum L.) // Nucl. Acids Res. 1987. - V. 15, N 18. - P. 7642.

116. Gaunt M.W., Turner S.L., Rigottier-Gois L., Lloyd-Macgilp S.A., Young J.P.W. Phylogenies of atpD and recA support the small subunit rRNA-based classification of rhizobia. // Int. J. Syst. Evol. Microbiol. 2001. - 51. - P. 2037-2048.

117. Gegg C.V., Roberts D.D., Segel I.H., Etzler M.E. Characterization of the adenine binding sites of two Dolichos biflorus lectins // Biochemistry. 1992. -V. 31,N30.-P. 6938-42.

118. Geremia R.A., Mergaert P., Geelen D., Van Montagu M., Holsters M. The NodC protein of Azorhizobium caulinodans is an N-acetylglucosaminyltransferase // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1994. - V. 91. -P. 2669-2673.

119. Geurts R., Franssen H. Signal transduction in Rhizobium-'mducQd nodule formation // Plant Physiol. 1996. - V. 112. - P. 447 - 453.

120. Goethals K., Van Den Eede G., Van Montagu M., Holsters M. Identification and characterization of a functional nodD gene in Azorhizobium caulinodans ORS571 // J. Bacteriol. 1990. - V. 172. - P. 2658-2666.

121. Goossens A., Geremia R., Bauw G., van Montagu M., Angenon G. Isolation and characterisation of arcelin-5 proteins and cDNAs // Eur. J. Biochem. 1994. - V. 225. - P. 787-795.

122. Gottfert M., Rothlisberger S., Kundig C., Beck C., Marty R., Hennecke H. Potential symbiosis-specific genes uncovered by sequencing a 410-kilobase DNA region of the Bradyrhizobium japonicum chromosome // J. Bacteriol. -2001.-V. 183.-P. 1405-1412.

123. Go vers F., Moerman M., Downie J. A. Rhizobium nod-genes are involved in inducing on early nodulation gene // Nature. 1986. - V. 323. - P. 564-566.

124. Graham D.E. The isolation of high molecular weight DNA from whole organisms or large tissue masses // Anal. Biochem. 1978. - V. 85, N 2. - P. 609-613.

125. Gualtieri G., Bisseling T. The evolution of nodulation // Plant Mol. Biol.- 2000. V. 42.-P. 181-194.

126. Guo W., Zhang X.X., Zhang Z.M., Li F.D. Characterization of Astragalus sinicus rhizobia by restriction fragment length polymorphism analysis of chromosomal and nodulation gene regions // Curr. Microbiol. -1999.-V. 39. P. 358-364.

127. Hagen M.J. Hamrick J.L. A hierarchical analysis of population genetic structure in Rhizobium leguminosarum bv. trifolii II Mol. Ecol. 1996. - V. 5. -P. 177-186.

128. Hall J.L. Cellular mechanisms for heavy metal detoxification and tolerance // J. Exp. Botany. 2002. - V. 53. - P. 1-11.

129. Halverson L.J., Stacey G. Effect of lectin on nodulation by wild-type Bradyrhizobium japonicum and a nodulation-defective mutant // Appl. Environ. Microbiol. 1986. - V. 51. - P. 753-760.

130. Halverson L.J., Stacey G. Signal exchange in plant-microbe interactions // Microbiol. Rev. 1986. - V. 50, № 2. - P. 193-225.

131. Hamblin J., Kent S.P. Possible role of phytohemagglutinin in Phaseolus vulgaris L. // Nature New Biol. 1973. - V. 245. - P. 28-29.

132. Hamelryck T. W., Poortmans F., Goossens A., Angenon G., Van Montagu M., Wyns L., Loris R. Crystal Structure of Arcelin-5, a Lectin-like Defense Protein from Phaseolus vulgaris II J. Biol. Chem. 1996; - V. 271, N 51.-P. 32796-32802.

133. Hamelryck T.W., Loris R., Bouckaert J., Wyns L. From structure to activity: new insights into the functions of legume lectins // Trends Glycosci. Glycotech. 1998. - V. 10, N 53 - P. 247-255.

134. Hara-Nishimura I., Inoue K., Nishimura M. A unique vauolar processing enzyme responsible for conversion several proprotein precursors into the mature forms // FEBS Letters. 1991. - V. 294. - P. 89-93.

135. Hartwig U.A., Joseph C.M., Phillips D.A. Flavonoids released naturally from alfalfa seeds enhance growth rate of Rhizobium meliloti II Plant Physiol. -1991. -V. 95, N. 3. P. 797-803.

136. Haukka K., Lindstrom K. Pulsed-field gel electrophoresis for genotypic comparison of Rhizobium bacteria that nodulate leguminous trees // FEMS Microbiol. Lett. 1994. - V. 119. - P. 215-220.

137. Haukka K., Lindstrom K., Young J.P.W. Three phylogenetic groups of nodA and nifH genes in Sinorhizobium and Mesorhizobium isolates from leguminous trees growing in Africa and Latin America // Appl. Environ. Microbiol. 1998. - V. 64. - P. 419-426.

138. He X.G. Signal molecules of plant-induced of gene expression of bacteria // Acta Bot. Sin. 1990. - V. 32, N 11. - P. 896-900.

139. Heidstra R., Geurts R., Franssen H., Spaink H.P., van Kämmen A., Bisseling T. Root hair deformation activity of nodulation factors and their fate in Vicia sativa H Plant Physiol. 1994. - V. 105. - P. 787-797.

140. Hess D., Schatzle H., Dressler K. In vitro associations of tomato plants and Rhizobium: induction of nitrogenase activity // Experientia. 1981. - T. 37, N 9. - C. 961-962.

141. Higgins D.G., Sharp P.M. Fast and sensitive multiple sequence alignments on a microcomputer // CAB/OS. 1989. - V. 5, N 2, - P. 151-153

142. Higgins T. J. V., Chandler P. M., Zurawski G., Button S.C., Spencer D. The biosynthesis and primary structure of pea seed lectin // J. Biol. Chem. -1983. V. 258. - P. 9544-9549.

143. Hirsch A.M., Brill L.M., Lim P.O., Scambray J., Van Rhijn P. Steps toward defining the role of lectins in nodule development in legumes // Symbiosis. 1995. - V. 19. - P. 155-173.

144. Hirsch A.M., Drake D., Jacobs T.W., Long S.R. Nodules are induced on alfalfa roots by Agrobacterium tumefaciens and Rhizobium trifolii containing small segments of the Rhizobium meliloti nodulation region // J. Bacteriol. -1985.-V. 161,N 1.-P. 223-30.

145. Hirsch A.M., Wilson K.J., Jones J.D., Bang M., Walker V.V., Ausubel F. M. Rhizobium meliloti nodulation genes allow Agrobacterium tumefaciens and Escherichia coli to form pseudonodules on alfalfa // J. Bacteriol. 1984.- V. 158, N. 3.-P. 1133-1143.

146. Hirsch A.M. Role of lectins (and rhizobial exopolysaccharides) in legume nodulation // Plant Biol. 1999. V. 2. - P. 320-326.

147. Ho S.K., Kijne J.W. Lectins in Rhizobium-legume symbiosis // Lectin Revievs (Kilpatrick D.S., van Driessche E., Bog-Hansen T.C., Eds.). St. Louis, Sigma Chem. Comp. 1991.-V. l.-P. 171-181.

148. Hoedemaker F., van Eijsden R., Diaz C. Mutational analysis of legume lectins // 16thInterlec Conference (Toulouse). 1995. - V. 7.

149. Honeycutt R.J., McClelland M., Sobral B.W.S. Physical map of the genome of Rhizobium meliloti 1021 // J. Bacteriol. 1993. - V. 175, N 21. - P. 6945-6952.

150. Honma M.A., Ausubel F.M. Rhizobium meliloti has three functional copies of nodD symbiotic regulatory gene // Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. -1987. V. 84, N23. - P. 8558-8562.

151. Hooykaas P.J.J., Klapwijk P.M., Nuti M.P., Schilperoort R.A., Rosen A. Transfer of the Agrobacterium tumefaciens Ti plasmid to avirulent agrobacteria and to Rhizobium explanta // J. Gen. Microbiol. 1977. - V. 98. - P. 477-485.

152. Hooykaas P.J.J., Snijdewint F.G.M., Shilperoort. Identification of the Sym plasmid of Rhizobium leguminosarum strain 1001 and its transfer to and exspression in other rhizobia and Agrobacterium tumefaciens II Plasmid. -1982.-V. 8.-P. 73-82.

153. Hooykaas P.J.J., van Brüssel A.A.N., Dulk-Ras H.D., Von Slogteren G.M.S., Schilperoort. Sym-plasmid of Rhizobium trifolii expressed in defferent rhizobial species and Agrobacterium tumefaciens II Nature. 1981. - V. 291. -P. 351-353.

154. Hornik C.L., Karush F. From structure to activity: new insights into the functions of legume lectins// Immunochemistry. 1972. - V. 9. - P. 325-340.

155. Horvath B., Heidstra M., Lados M., Moerman M., Spaink H.P., Prome J.S., van Kämmen A., Bisseling T. Lipo-oligosaccharides of Rhizobium induce infection related early nodulin gene expression in pea root hairs // Plant J. -1993.-V. 4.-P. 727-733.

156. Hubac C., Ferran J., Tremolieres A., Kondorosi A. Luteoline uptake by Rhizobium meliloti: evidence for several steps including an active extrusion process // Microbiology. 1994. - V. 140, N 10. - P. 2769-2774.

157. Hungria M., Joseph C.M., Phillips D.A. Anthocyanidins and flavonols, major nod-genes inducers from seeds of a black-seeded common bean (Phaseolus vulgaris L.) // Plant Physiol. 1991. - V. 97, N. 2. - P. 751-758.

158. Jacobs M., Ruberry H.P. Naturally occuring auxin transport vegetators // Science. 1988,-V. 241.-P. 346-349.

159. Jarvis B.D.W., Gillis M., De Ley J. Intra- and intergeneric similarities between the ribosomal ribonucleic acid cistrons of Rhizobium and Bradyrhizobium species and some related bacteria // Intern. J. System. Bacterid. 1986. - V. 36, N 2. - P. 129-138.

160. Jarvis B.D.W., Pankhurst C.E., Patel J.J. Rhizobium loti, a new species of legume root nodule bacteria // Intern. J. System. Bacteriol. 1982. - V. 32, N 3.- P. 378-380.

161. Jayaraman V., Das H.R. Interaction of peanut root lectin (PRAII) with rhizobial lipopolysaccharides // Biochim. Biophys. Acta. 1998. - V. 1381, N. 1. -P. 7-11.

162. John M., Rohrig H., Schmidt J., Wieneke U., Schell J. Rhizobium NodB protein involved in nodulation signal synthesis is a chitooligosaccharide deacetylase // Proc. Natl. Acad. Sei. USA. 1993. - V. 90. - P. 625-629.

163. Jordan D. C Genus I. Rhizobium, Genus II. Bradyrhizobium. II In: Bergey's Manual of Systematic Bacteriology (Krieg N.R., Holt J.G., Eds.). Baltimore, Williams and Wilkins. 1984. - V.l. - P. 1235-244.

164. Jordan D.S. Family III. Rhizobiaceae II In: Bergey's Manual of Systematic Bacteriology (Krieg N.R., Holt J.G., Eds.). Baltimore, The Williams and Wilkins Co. - 1984. - V. 1. - P. 234-242.

165. Jordan D.S. Transfer of Rhizobium japonicum, Buchanan 1980 to Bradyrhizobium gen. nov., a genus of slow growing root nodule bacteria of leguminous plants // Intern. J. System. Bacteriol. 1982. - V. 32, N 1. - P. 136139.

166. Jorrdan E.T., Goldstein I.J. The sequence of second member of the Lima Bean lectin gene family and the expression and characterization of recombinant lectin in Escherichia coli H J. Biol. Chem. 1993. - V. 269, N 10. - P. 76747681.

167. Joshi P.A., Caetano-Anolles G., Graham E.T., Gresshoff P.M. Ontogeny and ultrastructure of spontaneous nodules in alfalfa (Medicago sativa) II Protoplasma. 1991,-V. 162, N. l.-P. 1-11.

168. Journet J.P., Pichon N., Dedieu A., de Billy F., Truchet G., Barker D.G. Rhizobium meliloti Nod factors elicit cell-specific transcription of the Enodl2 gene in transgenic alfalfa // Plant J. 1994. - V. 6. - P. 241-249.

169. Judd A.K., Scheider M., Sadowsky M., de Bruijn F.J. Use of repetitive sequences and the polymerase chain reaction to classify genetically related Bradyrhizobium japonicum seroclaster 123 strains // Appl. Environ. Microbiol. 1993.-V. 59.-P. 1702-1708.

170. Jumas-Bilak E., Michaux-Charachon S., Bourg G., Ramuz M., Allardet-Servent A. Unconventional genomic organization in the alpha subgroup of the Proteobacteria II J. Bacteriol. 1998. - V. 180. - P. 2749-2755.

171. Kaijalainen S., Lindstrom K. Restriction fragment length polymorphism analysis of Rhizobium galegae strains // J. Bacteriol. 1989. - V. 171. - P. 5561-5566.

172. Kalsi G., Babu C.R., Das R.H. Localisation of peanut (Arachis hypogaea) root lectin (PRAII) on root surface and its biological significance // Glyciconjugate J. 1995. - V. 12. - P. 45-50.

173. Kamagata Y., Fulthorpe R.R., Tamura K., Takami H., Forney L.J., Tiedje J.M. Pristine environments harbor a new group of oligotrophic 2,4-dichlorophenoxyacetic acid-degrading bacteria // Appl. Environ. Microbiol. -1997. V. 63. - P. 2266-2272.

174. Kardailsky I.V., Sherrier D.J., Brewin N.J. Identification of a new pea gene, PsNlecl, encoding a lectin-like glycoprotein isolated from the symbiosomes of root nodules // Plant Physiol. 1996. - V. 111, N. 1. - P. 49-60.

175. Kato G., Maruyama Y., Nakamura M. Involvement of lectins in Rhizobium--pea recognition // Plant Cell Physiol. 1981. - V. 22. - P. 759-771.

176. Kersters K., De Ley J. Genus Agrobacterium. II In: Bergey's Manual of Systematic Bacteriology (Krieg N.R., Holt J.G., Eds.). Baltimore, Williams and Wilkins. 1984.-V.l.-P. 244-254.

177. Kijne J.W., Bauchrowitz M.A., Diaz C.L. Root lectin and Rhizobia II Plant Physiol. 1997. - V. 115. - P. 869-973.

178. Kijne J.W., Diaz C.L., Pater S. Lectins in the symbiosis between Rhizobia and leguminous plants // Advances in Lectin Research (Franz H.,van Driessche E., Kasai K.J., Eds.). Berlin, Ullstein Mosby. 1992. - P. 15-50.

179. Kinkle B.K., Schmidt E.L. Transfer of pea symbiotic plasmid pJB5JI in non-sterile soil // Appl. Environt. Microbiol. 1991. - V. 57, N11. - P. 32643269.

180. Konami Y., Yamamoto K., Osawa T., Irimura T. The primary structure of the Cytisus scoparius seed lectin and a carbohydrate-binding peptide // J. Biochem. 1992. - V. 112. - P. 366-375.

181. Konami Y.,Yamamoto K., Toyoshima S. The primary structure of the Laburnum alpinum seed lectin // FEBS Letters. 1991. - V. 286. - P. 33-38.

182. Kondorosi E., Banfalvi Z., Kondorosi A. Physical and genetic analysis of a symbiotic region of Rhizobium meliloti: identification of nodulation genes // Mol. Gen. Genet. 1984. - V. 193. - P. 445-452.

183. Kundig C., Beck C., Hennecke H., Gottfert M. A single rRNA gene region in Bradyrhizobium japonicum. II J. Bacteriol. 1995. - V. 177. - P. 5151-5154.

184. Küster E., Grun I. Cadmium and soil microorganisms // Angew. Botanik. 1984. -V. 58. -P. 31-38.

185. Kuykendall L.D. Genus Azorhizobium. II In: Bergey's Manual of Systematic Bacteriology, 2nd ed., (Garrity G.M., Ed.) New York, SpringerVerlag. - 2003b. - V. 2.

186. Kuykendall L.D. Genus Bradyrhizobium. II In: Bergey's Manual of Systematic Bacteriology, 2nd ed., (Garrity G.M., Ed.) New York, SpringerVerlag. - 2003a. - V. 2.

187. Kuykendall L.D., Dazzo F.B. Genus Allorhizobium. II In: Bergey's Manual of Systematic Bacteriology, 2nd ed., (Garrity G.M., Ed.) New York, Springer-Verlag. - 2003. - V. 2.

188. Kuykendall L.D., Hashem F.M., Wang E.T. Genus Sinorhizobium. II In: Bergey's Manual of Systematic Bacteriology, 2nd ed., (Garrity G.M., Ed.) -New York, Springer-Verlag. 2003a. - V. 2.

189. Kuykendall L.D., Saxena B., Devine T.E., Udell S.E. Genetic diversity in Bradyrhizobium japonicum Jordan 1982 and a proposal for Bradyrhizobium elkanii sp. nov. II Canad. J. Microbiol. 1992. - V. 38, N6. - P. 501-505.

190. Malek W. The role of motility in the efficiency of nodulation by Rhizobium meliloti II Arch. Microbiol. 1992. - V. 158. - P. 26-28.

191. Marchuk D., Drumm M., Saulino A., Collins F.S. Construction of T-vectors, a rapid and general system for direct cloning of unmodified PCR products // Nucl. Acids Res. 1991. - V. 19. - P. 1154.

192. Martinez E., Palacios R., Sanchez F. Nitrogen-fixing nodules induced by Agrobacterium tumefaciens harboring Rhizobium phaseoli plasmids. // J. Bacteriol. 1987. -V. 169. - P. 2828-2834.

193. Martinez E., Romero D., Palacios R. The Rhizobium genome. // Crit. Rev. Plant Sei. 1990. - V. 9. - P. 59-93.

194. Martinez-Romero E. Recent developments in Rhizobium taxonomy // Plant Soil. 1994. - V. 161, N. l.-P. 11-20.

195. Martinez-Romero E., Romero D., Palacios R. The Rhizobium genome // Crit. Rev. Plant. Sei. 1990. - V. 9. - P. 59-63.

196. Martinez-Romero E., Segovia L., Mercante F.M., Franco A.A.,Graham H., Pardo M.A. Rhizobium tropici, a novel species nodulating Phaseolus vulgaris L. beans and Leucaena sp. trees // Intern. J. System. Bacteriol. 1991. -V. 41, N. 3,- P. 417-426.

197. Matthysse A.G. Role of bacterial cellulose fibrils in Agrobacterium tumefaciens infections // J. Bacteriol. 1983. - V. 154. - P. 906-915.

198. Matthysse A.G., Holmes K.V., Gurlitz R.H.G. Elaboration of cellulose fibrils by Agrobacterium tumefaciens during attachment to carrot cells // J. Bacteriol. 1981.-V. 145.-P. 583-595.

199. McDermott T.R., Graham P.H. Bradyrhizobium japonicum inoculant mobility, nodule occupancy and acetylene reduction in the soybean root system // Appl. Environ. Microbiol. 1989. - V. 55. - P. 2493-2498.

200. Meinkoth J., Wahl G. Hybridization of nucleic acids immobilized on solid supports // Anal. Biochem. 1984. - V.132. - P.267- 284.

201. Mellor H.Y., Glenn A.R., Arwas R., Dilworth M.J. Symbiotic and competitive properties of motility mutants of Rhizobium trifolii TA1 // Arch. Microbiol. 1987. - V. 148. - P. 34-39.

202. Milner J.L., Araujo R.S., Handelsman J. Molecular and symbiotic characterization of exopolysaccharide-deficient mutants of Rhizobium tropici strain CIAT899 // Mol. Microbiol. 1992. - V. 6. - P. 3137-3147.

203. Minamisawa K., Mitsui H. Genetic ecology of soybean bradyrhizobia // In: Soil Biochemistry (Bollag J.-M., Stotzky G., Marcel Dekker. Eds.). New York. -2000. - V. 10.-P. 152-180.

204. Mody B., Modi V. Peanut agglutinin induced alterations in capsular and extracellular polysaccharide synthesis and ex-planta nitrogenase activity of cowpea rhizobia // J. Biosci. 1987. - V. 12. - P. 289-296.

205. Mohnen D., Hahn M.G. Cell wall carbohydrates as signals in plants // Seminars in Cell Biol.- 1993. V. 4.- P. 93-102.

206. Moreira-Silva L.I.M., Sanz L., Cavada B.S., Calvete J.J. Characterization and structure of a lectin from Risum arvense seeds // Europ. J. Cell Biol. -1997. V. 74. Supplement 46. - P. 7.

207. Moulin L., Munive A., Dreyfus B., Boivin-Masson C. Nodulation of legumes by members of the ß-sub-class of Proteobacteria // Nature. 2001. -V. 411.-P. 948-950.

208. Nishiguchi M., Yoshida K., Sumizono T., Tazaki K. Studies by sitedirected mutagenesis of the carbohydrate-binding properties of a bark lectin from Robiniapseudoacacia II FEBS Lett. 1997. - V. 403. - P. 294-298.

209. Norel F., Desnoues N., Elmerich C. Characterization of DNA sequence homologous to Klebsiella pneumoniae nifll, D, K and E in the tropical Rhizobium ORS571 // Mol. Gen. Genet. 1985. - V. 199, N2. - P. 352-356.

210. Novikova N., Safronova V. Transconjugants of Agrobacterium radiobacter harbouring sym genes of Rhizobium galegae can form an effective symbiosis with Medicago sativa II FEMS Microbiol. Lett. 1992. - V. 93. - P. 261-268.

211. Novikova N.I., Pavlova E.A., Vorobjev N.I., Limeshchenko E.V. Numerical taxonomy of Rhizobium strains from legumes of the temperate zone // Intern. J. System. Bacteriol. 1994. - V. 44, N 4. - P. 734-742.

212. Olson E.R., Sadowsky M.J., Verma D.P.S. Identification of genes involved in the Rhizobium-\Qgume symbiosis by Mudi (Kan, Lac)-generated transcription fusions // Biotechnology 1985. - V. 3. - P. 143-149.

213. Osborn T.C., Blake T., Gepts P., Bliss F.A. Bean arcelin. Genetic variation, inheritance and linkage relationships of a novel seedprotein of Phaseolus vulgaris II Theor. Appl. Genet. 1986. - V. 71. - P. 847-855.

214. Palacios R., Brom S., Davila G. Gene amplification in Rhizobium U In: New Horizons Nitrogen Fixation (Palacios R., Newton W., Mora J., Ed.). -Dordrecht, Kluwer Academic Publishers. 1993. - P. 581-585.

215. Pankhurst C.E., McDonald P.E., Reves J.M. Enhanced nitrogen fixation and competitiveness for nodulation of Lotus pedunculatus by a plasmid-cured derivative of Rhizobium loti II J. Gen. Microbiol. 1986. - V. 132, N8. - P. 2321-2328.

216. Parker M. A., Lafay B., Burdon J. J., van Berkum P. Conflicting phylogeographic patterns in rRNA and nifD indicate regionally restricted gene transfer in Bradyrhizobium II Microbiology. 2002. - V. 148. - P. 2557-2565.

217. Parniske M., Ahborn B., Werner D. Isoflavonoid-inducible resistance to the phytoalexin glyceolin in soybean rhizobia // J. Bacteriol. 1991. - V. 173, N 11. - P. 3432-3439.

218. Peferoen M., Huybrechts R., De Loof A. Vacuum-blotting: a new simple and efficient transfer of proteins from sodium dodecylsulfate-polyacrylamide gels to nitrocellulose // FEBS Lett. 1982. - 145, N 2. - P. 369-372.

219. Peumans W.J., Barre A., Hao Q., Rouge P., van Damme, Els J.M. Higher plants developed structurally different motifs to recognize foreign glycans // Trends Glycoscience Glycotechnology. 2000. - V. 12, N 64. - P. 83-101.

220. Peumans W.J., van Damme E.J.M. Lectins as plant defense proteins // Plant Physiol. 1995.- V. 109. - P. 347-352.

221. Prakash R.K., Atherly A.G. Plasmids of Rhizobium II Internat. Rev. Cytol.- 1986. V. 104.-P. 1-24.

222. Prasad M.N.V. Cadmium toxicity and tolerance in vascular plants 11 Env. Exp. Botany. 1995. - V. 35. - P. 525-545.

223. Pretorius-Guth I.M., Puhler A., Simon R. Conjugal transfer of megaplasmid 2 between Rhizobium meliloti strains in alfalfa nodules // Appl. Environt. Microbiol. 1990. - V. 56, N8. - P. 2354-2359.

224. Prevost D., Bordeleau L.M., Antoun H. Symbiotic effectiveness of indigenous arctic rhizobia on a temperate forage legume: sainfoin 0Onobrychis viciifolia) II Plant Soil. 1987. - V. 104. - P. 63-67.

225. Pueppke S.G. Adsorption of slow- and fast-growing rhizobia to soybean and cowpea roots II Plant Physiol. 1984. - V.75. - P. 924-928.

226. Quinto C., de la Vega H., Flores M. Reiteration of nitrogen-fixation gene sequence in Rhizobium phaseoli II Nature. 1982. - V. 5885. - P. 724-726.

227. Rahbe Y., Sauvion N., Febvay G., Peumans W.J., Gatehouse A.M.R. Toxicity of lectins and processing of ingested proteins in the pea aphid Acyrthosiphonpisum II Entomol. Exp. Appl. 1995. -V. 76. P. 143-155.

228. Rao V.S.R., Lam K., Qasba P.K. Architecture of the sugar binding sites in carbohydrate binding proteins a computer modeling study // Int. J. Biol. Macromol. - 1998. - V. 23. - P. 295-307.

229. Rauser W.E. Phytochelatins and related peptides // Plant Physiol. 1995.-V. 109.-P. 1141-1149.

230. Rinaudo G., Orenga S., Fernandez M.P., Meungnier H., Bardin R. DNA homologies among members of the stem- and root- nodulating bacteria isolated from the tropical legume Sesbania rostrata II Intern. J. System. Bacteriol. -1991. -V. 41,N 1. -P. 114-120.

231. Rini J.M. Lectin structure // Annu. Rev. Biophys. Biomol. Struct. 1995. - V. 24.-P. 551-557.

232. Rodrigues-Quinones F., Judd A.K., Sadowsky M.J. Hyperreiterated DNA regions are conserved among Bradyrhizobium japonicum seroclaster 123 strains // Appl. Environ. Microbiol. 1992. - V. 58, N6. - P. 1878-1885.

233. Rogel M.A., Hernandez-Lucas I., Kuykendall L.D., Balkwill D.L, Martinez-Romero E. Nitrogen-fixing nodules with Ensifer adhaerens harboring Rhizobium tropici symbiotic plasmids // Appl. Environ. Microbiol. 2001. -V.67.-P. 3264-3268.

234. Rolfe B., Gresshoff P.M. Genetic analysis of legume nodule initiation // Annu. Rev. Plant Physiol. 1988. - V. 39. - P. 297-319.

235. Romero D., Brom S., Martinez-Salazar J. Amplification and deletion of a nod-nif region in the symbiotic plasmid of Rhizobium phaseoli II J. Bacterid. -1991. V. 173, N8. - P. 2435-2441.

236. Roopashree S., Singh S.A., LalithaR. Gowda L.R., Appu Rao A.G. Dual-function protein in plant defence: seed lectin from Dolichos biflorus (horse gram) exhibits lipoxygenase activity // Biochem. J. 2006. - V. 395. - P. 629-639.

237. Rosenberg C., Boistard P., Denarie J., Casse-Delbart F. Genes controlling early and late functions is simbyosis are located on a megaplasmid in R. meliloti II Mol. Gen. Genet. 1981. - V. 184. - P. 326-333.

238. Rosenberg C., Casse-Delbart F., Dusha I., David M., Boucher C. Megaplasmids in the plant-associated bacteria R. meliloti and Pseudomonas solanacearum II J. Bacteriol. 1982. - V. 150. - P. 402-406.

239. Rouge P., Cambillau C., Bourne Y. The three-dimensional structure of legume lectins // In: Lectin Revievs (Kilpatrick D.S., van Driessche E., BogHansen T.C., Eds.). St. Louis, Sigma Chem. Comp. 1991. - V. 1. - P. 143-159.

240. Rouge P., Pere D., Bourne Y. In vitro cleavage of the Lathyrus nissolia isolectin//Plant Sci. 1989.-V. 62. - P. 181-189.

241. Rouge P., Pere D., Bourne Y. Single- and two-chain legume lectins: a revisited question // In: Lectins: Biology, Biochemistry, Clinical Biochemistry (Kozourek J., Freed D., Eds.). St. Louis, Sigma Chem. Comp. 1990. - P. 105112.

242. Rudiger H. Purification and properties of blood group specific lectins from Vicia cracca II Eur. J. Biochem. 1977. - V. 72. - P. 317-322.

243. Rudiger H. Structure and function of plant lectins // In: Glycosciences (Gabius H.-J., Gabius S., Eds.). Weinheim, Capman&Hall. 1997. - P. 415438.

244. Rudiger H., Gabius H.-J. Plant lectins: Occurence, biochemistry, functions and applications // Glycoconj. J. 2001. - V. 18. - P. 589-613.

245. Rumjaneck N.G., Dobert R.C., van Bercum P., Triplett E. Common soybean inoculant strains in Brasil are members of Bradyrhisobium elkanii II Appl. Environt. Microbiol. 1993. - V. 59, N 12. - P. 4371-4373.

246. Rye P.D., Bovin N.V. Carbohidrate affmity-PAGE for the study of carbohydrate-binding proteins // BioTechniques. 1998. - V. 25. - P. 146-151.

247. Saito A., Mitsui H., Hattori R., Minamisawa K., Hattori T. Slow-growing and oligotrophic soil bacteria phylogenetically close to Bradyrhizobium japonicum IIFEMS Microbiol. Ecol. 1998. - V. 25. - P. 277-286.

248. Salema M.P., Parker C.A., Kidby D.K. Chatel D.L. Death of rhizobia on inoculated seed // Soil Biol. Biochem. 1982. - V. 14. - P. 13-14.

249. Sambrook J., Fritsch E.F., Maniatis T. Molecular Cloning: A laboratory manual // Second Edn. Cold Spring Harbor. Cold Spring Harbor Laboratory Press. 1989. - 1682 P.

250. Sanger F., Nicklen S., Coulson A.R. DNA sequencing with chain termination inhibitors // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1977. - V. 74. - P. 5463-5467.

251. Sanginga N., Abaidoo R., Dashiell K., Carsky R.J., Okogun A. Persistence and effectiveness of rhizobia nodulating promiscuous soybeans in moist savanna zones of Nigeria // Appl. Soil Ecol. 1996. - V. 3, - N. 3. - P. 215-224.

252. Sanita di Toppi L., Gabbrielli R. Response to cadmium in higher plants // Env. Exp. Botany. 1999. - V. 41. - P. 105-130.

253. Sawada H. Agrobacterium // In: Plant Pathogenic Bacteria: A Reference Guide. Wallingford. UK, CABI Publishing, a Division of CAB International. - 2003a.

254. Sawada H. Rhizobium // In: Plant Pathogenic Bacteria: A Reference Guide. Wallingford. UK, CABI Publishing, a Division of CAB International. -2003b.

255. Sawada H., Kuykendall L.D., Young J. M. Changing concepts in the systematics of bacterial nitrogen-fixing legume symbionts // J. Gen. Appl. Microbiol. 2003. - V. 49. - P. 155-179.

256. Scheres B., van Engelen F., van der Knaap E., van de Wiel C., van Kämmen A., Bisseling T. Sequential induction of nodulin gene expression in the developing pea nodule // Plant Cell. 1990. - V. 8. - P. 687-700.

257. Schlaman H.R.M., Okker R.J.H., Lugtenberg B.J.J. Regulation of nodulation gene expression by NodD in rhizobia // J. Bacteriol. 1992. - V. 174.-P. 5177-5182.

258. Schlaman H.R.M., Okker R.J.H., Lugtenberg B.J.J. Subcellular localization of the nodD gene product in Rhizobium leguminosarum H J. Bacteriol. 1989.-V. 171.-P. 4648-4653.

259. Schmidt P.E., Broughton W.J., Werner D. Nod factor of Bradyrhizobium japonicum and Rhizobium sp. NGR234 induce flavonoid accumulation in soybean root exudate // Mol. Plant-Microbe Interact. 1994. - V. 7. - P. 384390.

260. Scholia M., Elkan G.H. Rhizobium fredii sp. nov., a fast-growing species that effectively nodulates soybeans // Intern. J. System. Bacteriol. 1984. - V. 34, N4.-P. 484-486.

261. Scott M.P., Jung R., Muntz K., Nielsen N.C. A protease responsible for post-translational cleavage of a conserved Asn-Gly linkage in glycinin, the major seed storage protein of soybean // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1992. -V. 89. - P. 685-662.

262. Sealey P.G., Southern E.M. Gel electrophoresis of DNA // In: Gel electrophoresis of nucleic acids. A practical approach. IRL Press; Oxford, -1982.-P. 3976.

263. Segovia L., Pinero D., Palacios R., Martinez-Romero E. Genetic structure of a soil population of non-symbiotic Rhizobium leguminosarum II Appl. Environ. Microbiol. 1991. -V. 57. - P. 426-433.

264. Segovia L., Youn P., Martinez-Romero E. Reclassification of American Rhizobium leguminosarum bv. paseoli type I strains as Rhizobium etli sp. nov. // Intern. J. System. Bacteriol. 1993. - V. 43, N. 2. - P. 374-377.

265. Selenska-Trajkova S., Radeva G., Gigova L., Markov K. Localisation of the nif genes on large plasmids in Rhizobium galegae II Letts. Appl. Bacteriol. 1990. - V. 11, N1.-P. 73-76.

266. Sharma V., Surolia A. Analyses of carbohydrate recognition by legume lectins: size of the combining site loops and their primary specificity // J. Mol. Biol. 1997. - V. 267. - P. 433-445.

267. Sharon N. Lectin-carbohydrate complexes of plants and animals: an atomic view // Trends Biochem. Sei. 1993. - V. 18. - P. 221-226.

268. Sharon N., Lis H. Legume lectins a large family of homologous proteins // FASEB J. - 1990. - V. 4. - P. 3198-3208.

269. Singleton P.W., Tavares J.W. Inoculation response of legumes in relation to the number and effectiveness of indigenous Rhizobium populations // Appl. Environ. Microbiol. 1986. - V. 51. - P. 1013-1018.

270. Smit G., Kijne J.W., Lugtenberg J.J. Involvement of both cellulose fibrills and a Ca -dependent adhesin in the attachment of Rhizobium leguminosarum to pea root hair tips // J. Bacteriol. 1987. - V. 169. - P. 42944301.

271. Song B., Palleroni N.J., Haggblom M.M. Isolation and characterization of diverse halobenzoate-degrading denitrifying bacteria from soils and sediments // Appl. Environ. Microbiol. 2000. - V. 66. - P. 3446-3453.

272. Soto M.J., Zorzano A., Mercado-Blanco J., Lepek V., Olivares J., Toro N. Nucleotide sequence and characterization of Rhizobium meliloti nodulation competitiveness genes nfe //. J. Mol. Biol. 1993. - V. 229, - N 2. -P. 570-576.

273. Spaink H.P., Kondorosi A., Hooykaas P.J.J. The Rhizobiaceae. // Kluwer Academic Publishers. Dordrecht. The Netherlands. 1998. - 566 P.

274. Spaink H.P., Weinmann J., Djordjevic M.A., Wijffelman C.A., Okker R.J.H., Lugtenberg B.J.J. Genetic analysis and cellular localization of the

275. Rhizobium host specificity-determining NodE protein // EMBO J. 1989. - V. 8. - P. 2811-2818.

276. Sprent J.I., Raven J.A. Evolution of nitrogen-fixing symbiosis // In: Biol. Nitrogen Fixation (Stacey G., Burris R.H., Evans H.J., Eds.). New York; London, Chapman&Hall. - 1992. - P. 461-496.

277. Stacey G. Bradyrhizobium japonicum nodulation genetics // FEMS Microbiol. Lett. 1995. - V. 127, N 1-2. - P. 1-9.

278. Staehelin C., Schultze M., Kondorosi E., Mellor R.B., Boller T., Kondorosi A. Structural modifications in Rhizobium meliloti Nod factors influence their stability against hydrolysis by root chitinases // Plant J. 1994. -V. 5.-P. 319-330.

279. Stanley J., Brown G.G., Verma D.P.S. Slow-growing Rhizobium japonicum comprises two highly devergent symbiotic types // J. Bacteriol. -1985,-V. 163, N1,-P. 148-154.

280. Stubbs M. E., Carver J.P., Dunn R. J. Production of lectin in Escherichia coli II J. Biol. Chem. 1986. -V. 261, N 14. - P. 6141-6144.

281. Sujatha M.S., Balaji Petety V. Identification of common structural features of binding sites in galactose-specific proteins // Proteins: Structure, Function, and Bioinformatics. 2004. - V. 55. - P. 44-65.

282. Sullivan J.T., Patrick H.N., Lowther W.L., Scott D.B., Ronson C.W. Nodulating strains of Rhizobium loti arise through chromosomal symbiotic gene transfer in the environment // Proc. Natl. Acad. Sci. 1995. - V. 92. - P. 8985-8989.

283. Sullivan J.T., Ronson C.W. Evolution of rhizobia by acquisition of a 500-kb symbiosis island that integrates into a phe-tRNA gene // Proc. Natl. Acad. Sci. 1998.-V. 95.-P. 5145-5149.

284. Suominen L., Roos C., Lortet G., Paulin L., Lindstrom K. Identification and structure of the Rhizobium galegae common nodulation genes: Evidence for horizontal gene transfer // Mol. Biol. Evol. 2001. - V. 18. - P. 907-916.

285. Suzuki K., Hattori Y., Uraji M., Ohta N., Iwata K., Murata K., Kato A., Yoshida K. Complete nucleotide sequence of a plant tumor-inducing Ti plasmid // Gene. 2000. - V. 242. - P. 331-336.

286. Tan Z.Y, Kan F.L, Peng G.X, Wang E.T., Reinhold-Hurek B., Chen W.X. Rhizobium yanglingense sp. nov., isolated from arid and semiarid regions in China // Int. J. Syst. Evol. Microbiol. 2001. - V. 51. - P. 909-914.

287. Terefework Z., Giselle N., Suomalainen S., Paulin L., Lindstrom K. Phylogeny of Rhizobium galegae with respect to other rhizobia and agrobacteria // Intern. J. System. Bacteriol. 1998. - V. 48. - P. 349-356.

288. Terefework Z., Kaijalainen S., Lingstrom K. AFLP fingerprinting as a tool to study the genetic diversity of Rhizobium galegae isolated from Galega orientalis and Galega officinalis II J. Biotechnol. 2001. - V. 91. - P. 169-180.

289. Tlusty B., van Berkum P., Graham P.H. Characteristics of the rhizobia associated with Dalea spp. in the Ordway, Kellogg-Weaver Dunes, and Hayden prairies // Can. J. Microbiol. 2005. - V. 51. - P. 15-23.

290. Truchet G., Roche P., Lerouge J., Vasse J., Camut S., de Billy F., Prome J.-C., Denarie J. Sulphated lipo-oligosacharide signals of R. meliloti elicit root nodule organogenesis in alfalfa //Nature. 1991. - V. 351. - P. 670-673.

291. Truchet G., Rosenberg C., Vasse J., Julliot J.S., Camut S., Denarie J. Transfer of Rhizobium meliloti pSym genes into Agrobacterium tumefaciens: host-specific nodulation by atypical infection // J Bacteriol. 1984. - V. 157, N l.-p. 134-42.

292. Turgeon B.G., Bauer W.D. Ultrastructure of infection thread development during the infection of soybean by Rhizobium japonicum II Planta. 1985. - V. 163, N1. - P. 328-349.

293. Turner S.L., Young J.P.W. The glutamine synthetases of rhizobia: Phylogenetics and evolutionary implications // Biol. Evol. 2000. - V. 17. - P. 309-319.

294. Ueda T., Suga Y., Yahiro N., Matsuguchi T. Phylogeny of sym plasmids of rhizobia by PCR-based sequencing of a nodC segment // J. Bacteriol. 1995. -V. 177, N2.-P. 468-472.

295. Vesper S.J., Bauer W.D. Role of pili (fimbriae) in attachment of Bradyrhizobium japonicum to soybean roots // Appl. Environ. Microbiol. -1986. -V. 52. P. 134-141.

296. Vodkin L.O., Rhodes P.R. and Goldberg R.B. Ca lectin gene insertion has the structural features of a transposable element // Cell 1983. - V. 34. -P. 1023-1031.

297. Wedlock D.N., Jarvis B.D.W. DNA homologies between Rhizobum fredii, rhizobia that nodulate Galegae sp., and other Rhizobium and Bradyrhizobium species // Intern. J. System. Bacteriol. 1986. - V. 36, N 4. - P. 550-558.

298. Willems A., Collins M.D. Phylogenetic analysis of rhizobia and agrobacteria based on 16S rRNA gene sequences // Int. J. Syst. Bacteriol. -1993.-V. 43.-P. 305-313.

299. Willems A., Coopman R., Gillis M. Phylogenese and DNA-DNA hybridization analyses of Bradyrhizobium species // Int. J. Syst. Evol. Microbiol.- 2001a.-V. 51.-P. 111-117.

300. Willems A., Doignon-Bourcier F., Goris J., Coopman R., de Lajudie P., De Vos P., Gillis M. DNA-DNA hybridization study of Bradyrhizobium strains. //Int. J. Syst. Evol. Microbiol. 2001b.-V. 51.-P. 1315-1322.

301. Williams A., Westhead D.R. Sequence relationships in the legume lectin fold and other jelly rolls // Protein Engineering. 2002. - V. 15, N 10. - P. 771774.

302. Wong P.P. Interactions between rhizobia and lectins of lentil, pea, broad bean, and jackbean// Plant Physiol. 1980. -V. 65. - P. 1049-1052.

303. Wood S.M., Newcomb W. Nodule morphogenesis: the early infection of alfalfa (Medicago sativa) root hairs by Rhizobium meliloti II Can. J. Bot. -1989. -V. 67. P. 3108-3122.

304. Wycoff K.L., Van Rhijn P., Hirsch A.M. The ribosomal protein PO of soybean (Glycine max L. Merr.) has antigenic cross-reactivity to soybean seed lectin // Plant Mol. Biol. 1997. - V. 34. - P. 295-306.

305. Yamamoto K., Konami Y., Kusui K. Purification and characterization of a carbohydrate-binding peptide from Bauhinia purpurea lectin // FEBS Letters. 1991. -V. 281. - P. 258-262.

306. Yamamoto K., Konami Y., Osawa T. Alteration of the carbohydrate-binding specificity of the Bauhinia purpurea lectin trough the preparation of a chimeric lectin // J. Biochem. 1992a. - V. 111. - P. 87-90.

307. Yamamoto K., Konami Y., Osawa T. Carbohydrate-binding peptides from several anti-H(O) lectins // J. Biochem. 1992b. - V. 111. - P. 436-439.

308. Yanagi M., Yamasato K. Phylogenetic analysis of the family Rhizobiaceae and related bacteria by sequencing of 16S rRNA gene using PCR and DNA sequencer. // FEMS Microbiol. Lett. 1993. - V. 107. - P. 115-120.

309. Nod factors with a,(3-unsaturated iV-acyl substitutions // Mol. Microbiol. -1999.-V. 34.-P. 227-237.

310. Yao Z.Y, Kan R.L, Wang E.T., Wei G.H., Chen W.X. Characterization of rhizobia that nodulate legume species of the genus Lespedeza and description of Bradyrhizobium yuanmingense sp. nov. // Int. J. Syst. Evol. Microbiol. -2002.-V. 52.-P. 2219-2230.

311. Yelton M.M., Mulligan J.T., Long S.R. Expression of Rhizobium meliloti nod genes in Rhizobium and Agrobacterium backgrounds // J. Bacteriol. -1987.- V. 169, N 7. P. 3094-8.

312. Yokota A., Sakane T., Ophel K., Sawada H. Further studies on the cellular fatty acid composition of Rhizobium and Agrobacterium species // IFO Res. Commun. 1993. - V. 16. - P. 86-94.

313. Young J.M., Kerr A., Sawada H. Genus Agrobacterium // In: Bergey's Manual of Systematic Bacteriology, 2nd ed., (Garrity G.M., Ed.) New York, Springer-Verlag. - 2003. - V. 2.

314. Young J.P.W. Molecular phylogeny and evolution of rhizobia // In: The Nitrogen Fixation and its Research in China (Hond G.F., Ed.). Berlin, Springer-Verlag. - 1992. - P. 365-381.

315. Young J.P.W. Molecular phylogeny of rhizobia and their relatives // In: New Gorizons Nitrogen Fixation (Palacios R., Newton W., Mora J., Ed.). -Dordrecht, Kluwer Academic Publishers. 1993. - P. 587-592.

316. Young J.P.W. Phylogenetic classification of nitrogen-fixing organisms // In: Biol. Nitrogen Fixation (Stacey G., Burris R.H., Evans H.J., Ed.). New York; London, Chapman&Hall. - 1992. - P. 43-86.

317. Young J.P.W., Haukka K.E. Diversity and phylogeny of rhizobia // New Phytol. 1996. - V. 133. - P. 87-94.

318. Young J.P.W., Johnston A.W.B. The evolution of specificity in the legumQ-Rhizobium symbiosis // Trends Ecol. Evolut. 1989. - V. 4, N 11. - P. 341-349.

319. Young N.M., Oomen R.P. Analysis of sequence variation among legume lectins: a ring of hypervariable residues forms the perimeter of the carbohydrate-binding site // J. Mol. Biol. 1992. - V. 228. - P. 924-934.

320. Zahran H.H. Rhizobia from wild legumes: diversity, taxonomy, ecology, nitrogen fixation and biotechnology // J. Biotechnol. 2001. - V. 91. - P. 143153.

321. Zhang X.X., Turner S.L., Guo X.W., Yang H.J. The common nodulation genes of Astragalus sinicus rhizobia are conserved despite chromosomal diversity // Appl. Environ. Microbiol. 2000. - V. 66. N7. - P. 2988-2995.

322. Zou X., Li R., Chen H. Characteristics of plasmids in Rhizobium huakuii II Curr. Microbiol. 1997. - V. 35. - P. 215-220.

323. Zurkovski W. Molecular mechanism for loss of nodulation properties of Rhizobium trifolii II J. Bacteriol. 1982. - V. 150, N3. - P. 999-1007.