Стабилизация биологически активных соединений методом включения их в структуру природных биоразлагаемых полимерных материалов тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.01.06, кандидат биологических наук Волосова, Елена Владимировна

  • Волосова, Елена Владимировна
  • кандидат биологических науккандидат биологических наук
  • 2011, Ставрополь
  • Специальность ВАК РФ03.01.06
  • Количество страниц 133
Волосова, Елена Владимировна. Стабилизация биологически активных соединений методом включения их в структуру природных биоразлагаемых полимерных материалов: дис. кандидат биологических наук: 03.01.06 - Биотехнология (в том числе бионанотехнологии). Ставрополь. 2011. 133 с.

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Волосова, Елена Владимировна

ПЕРЕЧЕНЬ СОКРАЩЕНИЙ, УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ,

СИМВОЛОВ И ЕДИНИЦ.

ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

5 1.1. Анализ методов получения, свойств биоразлагаемых композитов и их применение в качестве основы для иммобилизации биокатализаторов.

1.2. Иммобилизация биологически активных веществ на носители различной природы.

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ, ОБРОРУДОВАНИЕ И МЕТОДЫ ИС

СЛЕДОВАНИЯ.

2 • 1 • Материалы и реактивы.

2.2. Оборудование.

2.3. Методы исследования.

2.3.1. Определение удельной активности растворимого трипсина.

2.3.2. Приготовление фосфатного буферного раствора.

2.3.3. Метод определения прочности полимерных материалов при деформации растяжения.

2.3.4. Определение степени набухания полимерных материалов из жидкой фазы воды.

2.3.5. Количественное определение белка в растворе.

2.3.6. Количественное определение удельной активности

Р-гиалуронидазы.

2.3.7. Определение активности лизоцима.

2.3.8 Проведение апробации биоразлагаемых пленочных материалов на экспериментальных животных.

2.3.9. Методы математической и статистической обработки материалов.

Глава 3. КОНСТРУИРОВАНИЕ БИОРАЗЛАГАЕМЫХ МАТЕРИАЛОВ С ИММОБИЛИЗОВАННЫМИ ФЕРМЕНТАМИ 3.1 Синтез биоразлагаемых полимеров как основы для иммобилизации ферментов.

3.2. Иммобилизация фермента р - гиалуронидазы.

3.2.1 Влияние рН среды на удельную активность растворимого и иммобилизованного фермента (3 - гиалуронидазы.

3.2.2. Влияние температуры на удельную активность растворимого и иммобилизованного фермента Р - гиалуронидазы.

3.2.3. Изучение кинетики ферментативной реакции.

3.3. Иммобилизация фермента трипсина.

3.3.1. Влияние рН среды на удельную активность растворимого и иммобилизованного фермента трипсина.

3.3.2. Влияние температуры на удельную активность растворимого и иммобилизованного фермента трипсина.

3.3.3. Влияние времени постановки ферментативной реакции и количества фермента на изменение удельной активности растворимого и иммобилизованного фермента трипсина.

3.4. Иммобилизация фермента лизоцима и исследование факторов, влияющих на активность растворимого и иммобилизованного фермента лизоцима.

3.4.1. Влияние рН среды на удельную активность растворимого и иммобилизованного фермента лизоцима.

3.4.2. Влияние температуры на удельную активность растворимого и иммобилизованного фермента лизоцима.

3.4.3. Изучение влияния времени постановки ферментативной реакции на изменение удельной активности растворимого и иммобилизованного фермента лизоцима.

3.5. Апробация биоразлагаемых материалов с иммобилизованным трипсином на экспериментальных животных.

Рекомендованный список диссертаций по специальности «Биотехнология (в том числе бионанотехнологии)», 03.01.06 шифр ВАК

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Стабилизация биологически активных соединений методом включения их в структуру природных биоразлагаемых полимерных материалов»

Одна из наиболее перспективных задач современной биотехнологии - создание биокатализаторов на основе иммобилизованных ферментов. Преимущество иммобилизованных ферментов перед растворимыми заключается в большей их стабильности, возможности регенерирования и отделения иммобилизованного фермента от продукта реакции. В качестве таких катализаторов могут использоваться ферменты, включенные в пленочные покрытия.

Современные тенденции при разработке композиционных материалов, как основы для иммобилизации, состоят в придании им ряда положительных свойств: способность подвергаться разложению в естественных условиях среды, низкий уровень неспецифических взаимодействий с примесями и биологически активными веществами; механическая устойчивость, наличие функциональных групп, пригодных для селективной химической модификации; экологическая чистота процесса получения (Новиченко А.Н., Новикова Т.П., Зеленко И.Н., Мазолевский Д.М., Бондаренко А.П., 2006).

Очевидно, что применение научных подходов, направленных на создание данных материалов с заранее заданными свойствами и функциями на основе иммобилизованных биологических лигандов (ферментов, микробных клеток, антител и нуклеотидов), может способствовать их использованию в медицине, биохимии, фармакологии.

Работы по биоразлагаемым материалам актуальны и востребованы, о чем свидетельствует проведение первой Международной конференции по биоразла-гающимся полимерам и соответствующим композитам (Дербишер В.Е., Герма-шев И.В., Дербишер Е.В., 2008; Заиков Г.Е., Арцис М.И., 2008; Савостова Т.Л., Бирюков А.Л., Саркисов П.Д., 2008; Ткачев А.Г., Михалева З.А., Рыбкин C.B., Долгова О.В., 2008).

Технологии создания композиционных материалов включают в себя ряд открытий последних лет в области химии и физики высокомолекулярных систем и структур (Володькин Д.В, 2005; Тулинов А.Б., Корнеев A.A.,

Овчаренко Л.В., Гармаш И.И., 2007; Андрианова Г.П., 2010; Буниятзаде И.А., Мамедов Г.Г., Азизов A.A., Алосманов P.M., Магеррамов A.M., 2010; Межи-ковский С.М., 2010; Олтаржевская Н.Д., Коровина М.А., 2010).

Включение ферментов в структуру природных биоразлагаемых полимеров продиктовано необходимостью создания лекарственных повязок нового поколения с регулируемым сроком службы и высоким процентом сохранения активности биологической субстанции (Чернобаева М.В., Салим Хусам, Скат-ков С.А., Демина Н.Б., 2010). В отличие от обычных сорбционных перевязочных средств (марлевых, ватно-марлевых, нетканых материалов, полимерных губок), у которых устанавливается динамическое равновесие концентрации микрофлоры на границе «повязка-рана», биологически активные гелевые повязки обеспечивают пластифицирующее воздействие на ткани раны, размягчают некротические образования, диффундируют под них, облегчая механическое удаление нежизнеспособных тканей, и предотвращают развитие инфекции на поверхности раны под струпом (Юданова Т.Н., 2004).

В последние два десятилетия отмечается неуклонное увеличение доли острых гнойно-воспалительных заболеваний. Это связано в основном с неудовлетворительным состоянием экологии во многих регионах, низким социально-экономическим уровнем жизни значительной части населения, со снижением факторов неспецифической противомикробной резистентности, с развитием интегральных гормонально-метаболических нарушений в организме на фоне хронических соматических болезней (Легонькова О.А, 2007; Шавырин В.А., Квасенков О.И., 2008; Ухарцева И.Ю., 2009).

На сегодняшний день, параллельно с применением антибиотиков, возрастает число антибиотико-резистентных штаммов бактерий, частота и тяжесть инфекционных осложнений, попутно изменяющих свои клинические черты. Таким образом, очевидно, что, несмотря на все достижения современной медицины, инфекция не без основания остается «камнем преткновения» в лечении ч различных ран. Возникает необходимость в создании принципиально новых препаратов при их лечении.

Альтернативным решением данных проблем могут выступать препараты системной энзимотерапии, относящиеся к группе гидролаз и представленные высокоочищенными протеиназами животного и растительного происхождения, а также фиксированные на различных раневых покрытиях ферментные препараты для местного лечения ран (Ефименко Н.А., 2005).

Цель диссертационной работы: стабилизация биологически активных соединений посредством включения их в структуру природных биоразлагаемых полимерных материалов.

Основные задачи исследования:

1. Синтезировать биоразлагаемые пленочные материалы на основе высокомолекулярного природного полисахарида, белкового комплекса и пластификатора.

2. Исследовать свойства полученного пленочного материала (спектры поглощения в УФ - области, предел прочности, влагоёмкость).

3. Разработать метод иммобилизации фермента Р - гиалуронидазы и исследовать влияние различных факторов (рН среды, температуры) на его активность. Изучить кинетику ферментативной реакции, динамику потери удельной активности при хранении в различных температурных условиях.

4. Иммобилизовать фермент трипсин в пленочные материалы и исследовать влияние некоторых факторов на его активность (рН среды, температуры, количество субстрата), изучить влияние времени постановки реакции, динамику потери удельной активности при хранении в течение в различных температурных условиях.

5. Разработать метод иммобилизации лизоцима и исследовать влияние рН среды, температуры, времени постановки ферментативной реакции и длительности хранения в различных температурных условиях на его активность.

6. Провести апробацию биоразлагаемых материалов с иммобилизованным трипсином на экспериментальных животных.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА РАБОТЫ

Впервые получены принципиально новые пленочные материалы, подвергающиеся самостоятельной деградации в естественных условиях. Подобран оптимальный состав для получения биоразлагаемых пленок, обладающих следующими преимуществами: прозрачность, пластичность, прочность структуры при разрывном напряжении.

Проведена иммобилизация ферментных препаратов в структуру биоразлагаемых пленочных материалов с высоким процентом сохранения удельной активности.

Проведены исследования, направленные на изучение факторов, влияющих на снижение удельной активности ферментов при их иммобилизации в структуру биоразлагаемых пленочных материалов.

Впервые получены пленочные покрытия с иммобилизованными ферментами р - гиалуронидазой, трипсином, лизоцимом, которые могут быть использованы в качестве раневых покрытий в медицине и косметологии.

Приоритетность выполненных исследований подтверждена 1 патентом РФ на изобретение.

ТЕОРЕТИЧЕСКАЯ И ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ РАБОТЫ

Получены биоразлагаемые пленочные материалы с иммобилизованными в их структуру ферментами, способствующими процессу ранозаживления.

Разработаны методические приёмы по определению активности ферментов р - гиалуронидазы и лизоцима по прототипу определения амилазной активности слюны. Упрощена методика определения активности лизоцима относительно ранее известной.

Разработаны технологические основы получения пленочных материалов, обладающих ферментативным действием.

Материалы диссертации используются в лекциях и практических занятиях на курсах «Высокомолекулярные соединения» (Лекция «Биоразлагаемые полимерные материалы как основа для иммобилизации фермента»), «Введение в на-нотехнологии» (Лекция «Структура и свойства наноматериалов») ФГБОУ ВПО

СГУ. В лаборатории микробиотехнологии Научно-образовательного центра «Технологии живых систем и биологические материалы» проведены испытания биодеградируемых пленок (протокол от 28 марта 2008 г.).

ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ

1. Научно-методические подходы к получению биоразлагаемых полимерных материалов.

2. Методы иммобилизации ферментов в структуру пленочных покрытий.

3. Свойства полученных биодеградируемых пленок и раневых покрытий на основе иммобилизованных ферментов.

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ Основные результаты диссертационной работы были представлены на Московской международной конференции «Мир биотехнологии» (Москва,

2008), XX симпозиуме «Современная химическая физика» (Туапсе, 2008), V съезде Общества биотехнологов России им. Ю.А. Овчинникова (Москва, 2008), Московской международной конференции «Мир биотехнологии» (Москва,

2009), V ежегодной научной конференции студентов и аспирантов базовых кафедр южного научного центра РАН (Ростов-на-Дону, 2009), 54-научно-практической конференции «Университетская наука - региону» (Ставрополь, 2009), 55-научно-практической конференции «Университетская наука - региону» (Ставрополь, 2010), IV Международной конференции "Актуальные проблемы биологии, нанотехнологий и медицины"(Ростов-на-Дону, 2011), 5 научно-практической конференции «Университетская наука - региону» (Ставрополь, 2011).

ЛИЧНЫЙ ВКЛАД АВТОРА

Диссертационная работа выполнена самостоятельно. Отдельные этапы работы были выполнены совместно с кандидатом биологических наук Воробьевой О.В., аспирантом Ивановой A.M. (ФГБОУ ВПО СГУ).

ПУБЛИКАЦИИ

Основное содержание диссертации отражено в 14 опубликованных работах (в ведущих научных журналах, рекомендуемых ВАК - 3 статьи), имеется 1 патент РФ на изобретение.

СТРУКТУРА И ОБЪЁМ РАБОТЫ Диссертация состоит из введения, трех глав, заключения, выводов, списка использованной литературы и приложения. Работа изложена на 133 страницах, содержит 14 таблиц и 33 рисунка. Список литературы включает 148 отечественных и зарубежных литературных источников.

Похожие диссертационные работы по специальности «Биотехнология (в том числе бионанотехнологии)», 03.01.06 шифр ВАК

Заключение диссертации по теме «Биотехнология (в том числе бионанотехнологии)», Волосова, Елена Владимировна

выводы

1. В результате проведенных исследований получены биодеградируемые пленочные материалы на основе высокомолекулярного природного полисахарида метилцеллюлозы, белкового комплекса желатина и пластификатора -глицерина.

2. Установлено, что при увеличении массовой доли пластификатора в составе пленочного материала увеличивается светопоглощение в УФ - области спектра. Прочность разработанных пленочных материалов, на разрыв по длине и ширине соответствует прочности полиэтилена при одинаковых условиях и составляет 15,20 и 15,26 Мпа соответственно.

Показано влияние на влагоёмкость пленочного материала пластификатора -глицерина, введение которого в структуру пленочного материала в количестве 10,28 масс. %, повышает гидрофильность системы и увеличивает степень набухания на 32 %.

3. Разработан метод иммобилизации фермента Р - гиалуронидазы и исследовано влияние факторов на его активность. Определены оптимальные параметры, при которых фермент Р - гиалуронидаза, иммобилизованный в пленки, проявлял наибольшую удельную активность 216 мэкв/г: рН среды - 6,9; температура - 37 °С; время постановки ферментативной реакции - 40 минут. Установлено, что скорость ферментативной реакции для иммобилизованного фермента выше скорости реакции для растворимого фермента в три раза. Показана динамика потери удельной активности при хранении иммобилизованного препарата в течение четырех месяцев. Установлено, что при температуре 4 °С удельная активность фермента составила 66 %, а при температуре 18-25 °С-10%.

4. Проведена иммобилизация трипсина в пленочные материалы и определен оптимум рН, температуры и времени постановки ферментативной реакции. Установлено, что трипсин, иммобилизованный в пленки, проявлял наибольшую удельную активность - 171,5 мэкв/г при рН среды - 8,15 и температуре -37 °С, время постановки ферментативной реакции - 20 минут. Определено, что оптимальное массовое соотношение компонентов в системе субстрат-фермент при постановке ферментативной реакции следующее: 1 мг казеина на 0,025 мг фермента (40:1). На основании результатов исследования установлено, что иммобилизованный трипсин, хранящийся при температуре 4 °С, к четвертому месяцу хранения имел стабильный процент сохранения биокаталитической активности, а хранящийся при температуре 20 °С, потерял свою активность на 80%.

5. Установлено влияние рН и температуры на активность растворимого и иммобилизованного лизоцима. Определено, что лизоцим, иммобилизованный в пленки, проявлял наибольшую удельную активность 290 мг крахмала/г фермента при рН среды - 6,9 и температуре - 37 °С, при этом время постановки ферментативной реакции составило 4 часа. Показано, что пленки с иммобилизованным лизоцимом, при температуре 4 °С к третьему месяцу хранения имели стабильный процент сохранения биокаталитической активности - 80 %.

6. В ходе апробации полученных биоразлагаемых материалов с иммобилизованным трипсином на экспериментальных животных (крысах) в качестве ранозаживляющих покрытий, установлено, что скорость заживления была стабильно высокой с начала эксперимента с максимальным значением заживления в первые трое суток, что свидетельствует об эффективности разработанных материалов при лечении ран различной этиологии. Раневой процесс с пленкой с трипсином характеризовался достоверным уменьшением площади раны в абсолютных значениях и отмечался с третьих суток эксперимента по сравнению с контролем и пленкой без фермента.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Создание биоразлагаемых материалов с иммобилизованными в их структуру протеолитическими ферментами представляет большой интерес с точки зрения использования в медицине в качестве ранозаживляющих повязок.

Синтезированы пленочные материалы на основе природного полисахарида метилцеллюлозы с использованием глицерина как реагента-пластификатора и белкового комплекса желатина для модификации реологических характеристик с иммобилизованными в их структуру ферментами класса протеаз. В ходе выполнения исследований было доказано, что иммобилизованные ферменты имеют большую способность к деструкции субстрата, чем растворимые.

Структурные особенности пленочных материалов были подтверждены исследованием физико-химических свойств.

Данные сравнительного анализа спектров поглощения в УФ - области разработанных и традиционных пленочных материалов свидетельствуют о повышении барьера поглощения, что может быть связано с повышением плотности упаковки в аморфных областях МЦ за счет модификации структуры молекулами глицерина и желатина. Модификация МЦ молекулами желатина может осуществляться путем ковалентного связывания боковых аминокислотных остатков полипептидных цепей последнего с функциональными группами МЦ.

Прочностные характеристики материала-основы обеспечивают их практическое применение. Полученные данные по величинам прочности на разрыв по длине и ширине - 15,2 и 15,26 (МПа) соответственно обусловлены изменением потенциальной энергии межмолекулярного взаимодействия, преимущественно потенциальной энергии вращения вокруг ковалентных связей монозвеньев МЦ.

Влагопоглощение оценивали по степени набухания исследуемых образцов. Увеличение массы глицерина в структуре материала повышает гидро-фильность системы и тем самым увеличивает степень набухания на 32 %.

Данное свойство может быть использовано для разработки раневых покрытий на основе биологически активных веществ для применения в медицинской практике.

Разработан и оптимизирован метод иммобилизации фермента Р - гиалу-ронидазы тестикулярного типа в биоразлагаемые пленки и метод определения активности растворимого и иммобилизованного фермента, где в качестве субстрата использовали крахмал. Удельная активность иммобилизованного фермента - 216 мэкв/г, что составляет 240 % от удельной активности растворимого.

Анализ влияния рН среды на удельную активность растворимого и иммобилизованного фермента р - гиалуронидазы показал, что наибольшая удельная активность растворимого и иммобилизованного фермента Р - гиалуронидазы наблюдалась при рН = 6,9 и составила 90 мэкв/г и 216 мэкв/г соответственно.

С целью анализа влияния температуры на удельную активность фермента был поставлен ряд экспериментов, которые показали, что растворимый и иммобилизованный фермент р - гиалуронидаза имеют максимальную удельную активность 80,95 мэкв/г и 134 мэкв/г соответственно при температуре 37 °С.

Была изучена кинетика ферментативной реакции растворимого и иммобилизованного фермента Р - гиалуронидазы. При достаточно высоких концентрациях субстрата ферментативный процесс не может контролироваться диффузией субстрата, и, следовательно, реакция протекает в кинетической области. Этот факт подтверждается прямолинейной зависимостью Лайнуивера

1 1

Берка в координатах — +. Кроме того, характер температурной зависимости ферментативной реакции с использованием фермента Р - гиалуронидазы подтверждает выше изложенное высказывание, т.к. повышение температуры должно способствовать переводу реакции из кинетической области в диффузную и активность фермента растворимого и иммобилизованного не должна уменьшаться, чего на практике не происходит.

Полученные данные по константам Михаэлиса-Ментен свидетельствуют о том, что фермент, иммобилизованный в пленки увеличивает скорость ферментативной реакции в 1,3 раза, кроме того его активность выше растворимого в два раза. Увеличение активности связано со стерическим фактором, отвечающим за беспрепятственное перемещение молекул субстрата к активным центрам фермента.

Важным аспектом является вопрос сохранения активности фермента в процессе хранения. В результате хранения иммобилизованного препарата в течение четырех месяцев при температуре 4 °С удельная активность фермента составила 66 %, а при температуре +18 °С - 10 %. Следует отметить, что ферменты, являясь биологически активными субстанциями, способны терять активность в процессе хранения.

Для иммобилизации трипсина в структуру пленочного материала была разработана методика определения удельной активности растворимого и иммобилизованного ферментов.

Для образцов полученных пленочных материалов были проанализированы спектры поглощения в УФ области. Появление дополнительного пика поглощения при длине волны 280 нм связано с присутствием фермента трипсина в структуре пленки. Этот факт может быть использован для определения содержания фермента в структуре пленки.

Анализ влияния рН среды и температуры на удельную активность растворимого и иммобилизованного трипсина показал, что максимальное значение ферментативной активности наблюдалось при рН 8,15 и температуре 37 °С и составило 47,5 мэкв/г и 215 мэкв/г соответственно. Предполагается, что высокая удельная активность иммобилизованного фермента может сохраняться при повышении температуры. Установлено, что время постановки ферментативной реакции составляет 20 минут.

Определено, что оптимальное массовое соотношение компонентов в системе субстрат-фермент при постановке ферментативной реакции следующее: 1 мг казеина на 0,025 мг фермента (40:1).

Анализ полученных данных показал, что удельная активность иммобилизованного фермента выше растворимого в среднем в 4 раза, кроме того, иммобилизованный фермент проявляет высокую ферментативную активность в процессе длительного хранения.

Было изучено влияние сроков хранения и температурных условий на сохранение удельной активности фермента, иммобилизованного в пленки. Иммобилизованный трипсин, хранящийся при температуре 4 °С к четвертому месяцу хранения имел стабильный процент сохранения биокаталитической активности, а хранящийся при температуре 20 °С, потерял свою активность на 78 %. При включении протеолитических фермента в пленочные покрытия можно добиться стабилизации их против автолиза за счет изменения микроокружения.

Пленки с иммобилизованным ферментом трипсином отличаются гидро-фильностью, эластичностью, прозрачностью и способностью к деградации путем гидролиза основных связей макромолекул основы при взаимодействии с физиологической средой. Это позволяет получить ферментный препарат пролонгированного действия, который может найти применение в медицине и косметологии.

При иммобилизации лизоцима (муколитического, протеолитического фермента), в структуру биоразлагаемых пленок была разработана методика определения удельной активности растворимого и иммобилизованного фермента, где в качестве субстрата использовали крахмал. Предлагаемый метод прост в использовании, экспрессен.

Доказано, что растворимый и иммобилизованный в пленки фермент ли-зоцим проявлял наибольшую удельную активность при рН 6,9 и температуре 37 °С, которая составила 83,4 мэкв/г и 290 мэкв/г соответственно.

Разработанные пленочные материалы с иммобилизованным в его основу ферментом трипсином прошли апробацию на животных, по результатам которых можно сделать следующие выводы.

Раневой процесс с использованием разработанных пленок характеризовался достоверным уменьшением площади раны в абсолютных значениях в сравнении с контролем с девятого дня исследования. Скорость заживления была стабильно высокой с начала эксперимента с максимальным значением первые три дня. Повышенная скорость сохранялась на различных этапах эксперимента до девятого дня в сравнении с контролем. Так же достоверно подтверждено, что пленка без фермента обладает слабой ранозаживляющей активностью проявляющейся к концу эксперимента.

Таким образом, включение в состав основы биоразлагаемых пленок биологически активных веществ, в том числе различных ферментов, обладающих определенным набором свойств, делает возможным расширить спектр представленных на рынке ранозаживляющих материалов.

111

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Волосова, Елена Владимировна, 2011 год

1. Аверко-Антонович И.Ю., Бикмуллин Р.Т. Методы исследования структуры и свойств полимеров: Учебное пособие. Казань: КГТУ, 2002. - С. 45-49.

2. Адамян Р.Т., Зелянин A.C. Современные подходы к разработке эффективных перевязочных средств, шовных материалов и полимерных им-плантатов // Материалы III межд. конф. М.: МЗ РФ, 1998. - С. 368.

3. Алейникова Т.Д., Рубцова Г.В. Руководство к практическим занятиям по биологической химии. М.: Высшая школа, 1988. - С. 44-69.

4. Александров A.A., Стрекалова Г. Р. Новые полимерные материалы с биодеградабельными свойствами // Успехи в химии и химической технологии. Вып.13. Тез. докл. 13-й Междунар. конф. мол. по химии и хим. технол. МКХТ 99. -Ч. 2. - Москва: 1999. - С. 35.

5. Андреев Д.Ю., Парамонов Б.А., Мухтарова A.M. Современные раневые покрытия. Часть 2 // Вестник хирургии им. И.И. Грекова. 2009. -Т. 168.№ 4.-С. 109-112.

6. Андреев Д.Ю., Парамонов Б.А., Мухтарова А.М. Современные раневые покрытия. Часть 1 // Вестник хирургии им. И.И. Грекова. 2009. -Т. 168. № 3.-С. 98-102.

7. Андрианова Г.П, Физико-химические основы создания и модификации многослойных композиционных пористых и волокнисто-пористых полимерных материалов // Дизайн и технологии. 2010. - № 17. - С. 7081.

8. Балабушевич Н.Г., Сухоруков Г.Б., Ларионова Н.И. Включение белков вполиэлектролитные микрокапсулы из декстрансульфата, протамина и меламин формальдегид // Вестник Московского университета. 2002. -Серия 2. Химия. - Т. 43. № 6. - С. 374-377.

9. Белов A.A., Филатов В.Н., Белова E.H., Лебедева А.Н. Разработка и исследование свойств текстильных материалов, содержащих протеоли-тические ферменты // Химические волокна. 2008. - № 5. - С. 52-54.

10. Березин И.В., Киесов A.A., Швядас В.К. и др. Инженерная энзимология. М.: Высшая школа, 1987. - 144 с.

11. Березин И.В., Мартынек K.M. Введение в прикладную энзимолоппо. -М.: МГУ, 1982. С. 26-100 с.

12. ОНПО «Пластполимер», 1989. С. 42-49.

13. Богомольный В .Я., Даурова Т.Т., Афиногенов Г.Е. и др. Антимикробные пленки на основе поливинилового спирта // Тез. докл. VI всесоюз. симп. «Синтетические полимеры медицинского назначения». Алма-Ата: 1983. -С. 111-113.

14. Богуш JI.K., Шварцман Л.Я. Применение протеолитических ферментов при туберкулезе легких. М.: Медицина, 1970. - 128 с.

15. Большаков И.Н., Кириченко А.К., Еремеев A.B., Власов A.A. Применение коллаген- хитозанового раневого покрытия с культурой эмбриональных фибробластов при местном лечении глубоких ожогов // Фундаментальные исследования. 2008. - № 10. - С. 59-60.

16. Бородина Т.Н. Получение и исследование биодеградируемых полиэлектролитных микрокапсул с контролируемым выходом белков, ДНК и других биоактивных соединений: автореф. дис. канд. хим. наук: 03.00.23.-М., 2008.-20 с.

17. Бородина Т.Н., Румш Л.Д., Кунижев С.М., Сухоруков Г.Б., Ворожцов Г.Н., Фельдман Б.М., Марквичева Е.А. Полиэлектролитные микрокапсулы как системы доставки биологически активных веществ // Биомедицинская химия. 2007. - Т. 53. № 5. - С. 557-565.

18. Воронин А.М. Имобилизация клеток микроорганизмов: биотехнологические аспекты // Микробиология. 1999. - Т.68. - № 6. - С. 809-815.

19. Будневский C.B. Новые раневые покрытия, содержащие серотонин и трипсин, в лечении экспериментальных гнойных ран (экспериментальное исследование): автореф. дис. канд. мед. наук: 14.01.17. Москва,2006. 20 с.

20. Буниятзаде И.А., Мамедов Г.Г., Азизов A.A., Алосманов P.M., Магер-рамов А.М. Магнитный сорбент для удаления тонких нефтяных пленок // Известия вузов. Химия и хим. технология. 2010. - Т. 53. Вып. 4.1. С. 114-117.

21. Буряк В.П. Биополимеры настоящее и будущее // Полимерные материалы. - 2005. - №12 (79). - С. 22-27.

22. Валуев И.Л., Талызенков Ю.А., Обыденнова И.В., Валуев Л.И., Платэ H.A. Синтез и функциональные свойства термочувствительных полимерных производных белков // Высокомолекулярные соединения.2007.-Т. 49.№ 6.-С. 1131-1135.

23. Васильева Т.С., Субботко O.A. Перевязочный материал с пролонгированным лечебным действием. Патент RU 2101033, А61 L 15/22. Опубл. 10.01.98, Бюл.№1.

24. Введение в прикладную энзимологию иммобилизованные ферменты / Под ред. И. В. Березина, К. Мартинека. - М.: Изд-во МГУ, 1982. - С.383.

25. Берниковский В.В., Степанова Э.Ф. Иммобилизованные протеазы для очищения раневых поверхностей // Российский химический журнал. -2010.-Т. 54.№ 6.-С. 94-100.

26. Берниковский В.В., Степанова Э.Ф.Иммобилизация трипсина в некоторых мазевых основах // Вестник новых медицинских технологий. -2006. T. XIII. № 4. - С. 130-132.

27. Вилкинсон Д., Диксон М., Уэбб Э. Принципы и методы диагностической энзимологии. Т. 1-3. - М.: Ферменты, пер. с англ., 1982.1. С. 289-295.

28. Вилкинсон Д., Диксон М., Уэбб Э. Принципы и методы диагностической этимологии. Т. 1-3. - М.: Ферменты, пер. с англ., 1982. - С. 486488.

29. Во Тхи Хоай Тху, Аксенова Т.И., Сдобникова O.A., Самойлова Л.Г. Принципы создания биоразлагаемого биобезопасного полимерного материала // 7-ая международная специализированная выставка «Мир биотехнологии 2009». Москва: 2009. - С. 250-251.

30. Волова Т.Г. Биотехнология. Новосибирск: Изд-во Сибирского отделения Российской Академии наук, 1999. - С. 106.

31. Володысин Д.В. Иммобилизация белков в микрочастицы, сформированные методом последовательной адсорбции противоположно заряженных полиэлектролитов: автореф. дис. . канд. хим. наук: 02.00.15, 03.00.23.-М., 2005.-24 с.

32. Воробьева О.В. Биосорбенты для иммобилизации белковых комплексов ферментных препаратов // Биотехнология. 2004. - № 2. - С. 70.

33. Воробьева О.В., Аванесян С.С., Волосова Е.В., Филь A.A., Каданова A.A., Андрусенко С.Ф. Биодеградируемые материалы на основе полисахаридов и белковых компонентов // Перспективные разработки науки и техники. Przemyst, Польша. 2008. - С. 42-46.

34. Воробьева О.В., Иванова А.М., Аванесян С.С., Волосова Е.В., Андрусенко С.Ф. Модификация природных полимеров для синтеза материалов подвергающихся биодеградации // Химия в интересах устойчивого развития. 2011. - №19. с. 137-140.

35. Воронин A.C. Применение раневых покрытий в комплексном лечении ран и раневой инфекции кожи и мягких тканей // Аспирантский вестник Поволжья.-2010.- № 7-8.-С. 158-161.

36. Гайда A.B. Модифицированные кремнеземные носители в биотехнологии // Вестник химического общества им. Д.И. Менделеева. 1989.1. Т. 34, № 3.-С. 350-361.

37. Гальбрайх JI.C., Скокова И.Ф., Талаленкова О.С., Юданова Т.Н. Получение и свойства полимерных композиций, содержащих лизоцим и протеазу С // Антибиотики и химиотерапия. 2003. - № 2. - С. 67-71.

38. Гафаров М.Р., Юсупов P.A., Михайлов О.В. Сорбция ионов Ag(I) Агар-агар иммобилизованными метасульфидами // Тезисы Поволжской конференции по аналитической химии. Химия и компьютерное моделирование. Бутлеровские сообщения. - 2002. - № 8. - С. 45.

39. Глухов В. Химия и бизнес. 1997. - № 25. - С. 34-35.

40. Голованова П. М., Евстафьева Е. А., Тузова Н. Н., Макарова JL Р., Добыт С. В. О разработке раневых покрытий на основе биосинтетических полимеров // Все о мясе: Состояние. Проблемы. Перспективы. -2005.-№1.-С. 57-58.

41. ГОСТ 11262-80 (CT СЭВ 1199-78) «Пластмассы. Методы испытания на растяжение». Постановлением Государственного комитета СССР по стандартам от 21 ноября 1980 г. № 5521 срок введения установлен с 01.12.80. М.:- 11 с.

42. Гусейнов А.И. Раневые покрытия с протеолитической и антиоксидант-ной активностью в лечении гнойных ран: автореф. дис. канд мед. наук: 14.00.27 . Москва, 2006. - 20 с.

43. Давыдова Г.А., Селезнева И.И., Савинцева И.В., Гаврилюк Б.К. Биосинтетические раневые покрытия субстраты для роста клеток // Клеточные технологии в биологии и медицине. - 2008. - № 1. - С. 52-58.

44. Дегтярева С.Н., Донцова Э.П., Жаренкова О.А., Кириллова Т.Н. Саморазрушающиеся полимерные пленки // Пластические массы. 1999. -№ 10.-С. 12.

45. Дербишер Е.В., Гермашев И.В., Дербишер В.Е. Нечеткие множества в химической технологии // Известия вузов. Химия и хим. технология. -2008. Т. 51. Вып. 1. - С. 104-110.

46. Дорофейчук В.Г. Определение активности лизоцима нефелометриче-ским методом // Лабораторное дело. 1968. - № 1. - С. 28-30.

47. Досон Р., Эллиот Д., Эллиот У., Джонс К. Справочник биохимика. -М.: Мир, 1991.-464 с.

48. Досон Р., Эллиот Д., Эллиот У., Джонс К. Справочник биохимика. -М.: Мир, 1991.- С. 154.

49. Егоров Н.М. Практикум по микробиологии. Москва: МГУ, 1976. -С. 58.

50. Жагарт Р.А. Иммобилизация ферментов на силикатных носителях // Успехи биологической химии. 1977. - Т.18. - С. 140-158.

51. Заиков Г.Е., Арцис М.И. Первая международная конференция по био-разлагающимся полимерам и соответствующим композитам // Известия вузов. Химия и хим. технология. 2008. - Т. 51. Вып. 1. - С. 123125.

52. Зуев Ю.Ф., Захарченко Н.Л., Ступишина Е.А., Файзуллин Д.А., Вы-легжанина Н.Н. Особенности иммобилизации субстрата и каталитическая активность трипсина в обращенной микроэмульсии // Вестник s МГУ: Серия 2. Химия. 2003. - Т. 44. - С. 13-15. i

53. Игнатюк Т.Е., Медушева О.Е, Белов А.А. Перевязочные материалы сметаллокомплексами на основе иммобилизованного трипсина // Тез. доклада IV симпозиума «Химия протеолитических ферментов». М.: ИБХ РАН, 1997. - С. 146.

54. Икоев Т.М., Синицына Н.И., Лебедев А.П. Ранозаживляющий препарат и хирургическая ранозаживляющая салфетка. Патент RU 2114639, А 61 L 15/44. Опубл. 10.07.98, Бюл. №19.

55. Иммобилизованные клетки и ферменты. Методы. Под ред. Дж. Вудвор-да. М.: Мир, 1988.-215 с.

56. Кивман Г.Я., Ляшенко Ю.В., Рабинович Э.З., Флейдерман Л.И. Гидроколлоидные покрытия новое поколение средств для лечения ран и ожогов // Химико-фармацевтический журнал. 1994. - Т. 28. № 9 .1. С. 58-61.

57. Ковалева Т.А., Кожокина О.М., Багно О.П., Трофимова О.Д., Беленова A.C. Иммобилизация гидролитических ферментов на анионитах // Сорбционные и хроматографические процессы. 2008. - Т. 8. № 6.1. С. 1035-1041.

58. Коровина М.А. Разработка технологии получения лечебных текстильных материалов для хирургии и онкологии: автореф. дис. канд. техн. наук: 05.19.03. М., 2000. - 32 с.

59. Котельникова Н.Е., Михайлова С.А., Власова E.H. Иммобилизация протеолитических ферментов трипсина и а-химотрипсина на целлюлозной матрице // Журнал прикладной химии. 2007. - Т. 80. № 2. - С. 323-330.4, Д.

60. Кулиш Е.И., Чернова В.В., Володина В.П., Колесов C.B. Биодеградация пленочных полимерных покрытий на основе хитозана // Вестник Башкирского университета. 2008. - Т. 13. № 1. - С. 23-26.

61. Кумарев В.П. Иммобилизация белков и ферментов на альдегидосило-хромах // Биоорганическая химия. 1976. - Т. 2. №5. - С. 700-705.

62. Купцова C.B. Получение, свойства и применение композитных полимерных гидрогелей с иммобилизованными белками и пептидами: авто-реф. дис. канд. хим. наук: 03.00.04. М., 2000. - 24 с.

63. Ларионова Н.И., Торчилин В.П. Применение иммобилизованных физиологически активных веществ белковой природы в медици-не.Введение в прикладную энзимолоппо. М.: МГУ, 1982. - С. 284-305.

64. Ларионова Н.И., Торчилин В.П. Современное состояние и перспективы использования в медицине иммобилизованных физиологически активных ве ществ белковой природы // Хим. фарм. журн. 1980. - № 4.1. С. 21-36.

65. Легонькова O.A. Биоразлагаемые полимерные материалы в пищевой промышленности // Пищевая промышленность. 2007. - № 6. - С. 2628.

66. Лисичкин Г.В. Достижения, проблемы и перспективы химического модифицирования поверхности минеральных веществ // Журн. Всесоюз. хим. общества им. Д.И. Менделеева. 1989. - Т. 34. № з. с. 291 -297.

67. Масько A.A. Иммобилизация трипсина на углеволокнистых носителях, различающихся структурой, пористостью и химией поверхности // Прикладная биохимия и микробиология. 19992. - Т. 28, № 2. - С. 211 -216.1. А λ.и122 1I

68. Масько A.A., Морозова A.A., Лыга Л.К., Галушко H.A. Иммобилизация hтрипсина на углеволокнистых носителях, различающихся текстурой, ||-Япористостью и химией поверхности // Прикладная биохимия и микро- !биология. 1994. - Т. 28. № 2. - С. 211-216. $г

69. Медушева Е.О., Филатов В.Н., Рыльцев В.В. Новые изделия медицинского назначения на основе модифицированной целлюлозы с иммобилизованными лекарственными средствами // Материалы конгресса. -Москва: Ч. 1,2005. С. 52 -54.

70. Межиковский С.М Об истории создания и 50-летней деятельности отдела полимеров и композиционных материалов // Клеи. Герметики. Технологии. 2010. - № 9. - С. 3-8.

71. Методические рекомендации под редакцией Главного хирурга МО РФ, профессора Ефименко H.A. Полиферментные препараты в гнойной хирургии. 150 с.

72. Мирзарахметова Д.Т., Дехконов Д. Б., Рахимов М.М. Свойства инвер-тазы, ковалентно иммобилизованной на активированном угле // Прикладная биохимия и микробиология. 2009 . - Т. 45. № 3. - С. 287-291.

73. Моисеева A.A. Разработка технологии получения текстильных лечебных материалов с адгезионными свойствами: автореф. дис. . канд. техн. наук: 02.00.06. М., 1998. - 34 с.

74. Мосс Д. Ферменты. «Мир» - М.: Мир, 1970. - С. 63-65.

75. Муродов Э.А., Уринов Э.У., Тураев A.C. Молекулярно-массовые и конформационные характеристики карбоксиметилцеллюлозы и ее нит-роэфиров // Пластические массы. 2010. - № 5. - С. 17-19.

76. Николаев А Я. Биологическая химия. М.: Мир, 1989. - С. 76-77.

77. Новиченко А.Н., Новикова Т.П., Зеленко И.Н., Мазолевский Д.М.,

78. Бондаренко А.П. Применение новых отечественных раневых покрытий для местного лечения ожоговых ран // Скорая медицинская помощь. -2006.-№3.-С. 127-128.

79. Олтаржевская Н.Д., Коровина М.А. Текстиль для медицины: новые лечебные композиционные материалы // Текстильная промышленность. -2010.-Т. 5.-С. 58-62.

80. Практическая химия белка / пер. с англ. / под ред. А. Дарбре М: Мир, 1989.-С. 22-23.

81. Прямые инвестиции // Наука и жизнь. 2006. - № 11(55). - С. 59.

82. Раны и раневая инфекции. Под ред. М.И. Кузина и Б.М. Косиоченко // М., Медицина. - 1990.- С. 592 .

83. Реброва О.Ю. Статистический анализ медицинских данных. Применение пакета прикладных программ. М.: Медиа Сфера. - 2006. - 312 с.

84. Савинцева И.В., Селезнева И.И., Давыдова Г.А., Гаврилюк Б.К. Нано-композитные биосинтетические раневые покрытия субстраты для роста клеток // Альманах клинической медицины. - 2008. - № 17-2. -С. 350-353.

85. Савостова Т.Л., Бирюков А.Л., Саркисов П.Д. Управление интеллектуальными ресурсами основа инновационной деятельности // Известия вузов. Химия и хим. технология. - 2008. - Т. 51. Вып. 1. - С. 114-119.

86. Скобелева В.Б., Руденская Г.Н., Руденская Ю.А. Изучение энзиматиче-ской активности иммобилизованной морикразы // Вестник Московского университета. Серия 2. Химия. 2000. - № Т. 41. № 6. - С. 395-398.

87. Скуч Д., Уэст Д. Основы аналитической химии. М.: Мир, 1979. -Т. 1. - С.71- 73. с.

88. Смирнова Е.А. Термодинамика совместимости компонентов и реологические свойства смесей синтетических полимеров с полисахаридами: автореф. дис. канд. хим. наук: 02.00.04. Екатеринбург, 2006. - 24 с.

89. Солдатенкова В.Н. Лазерное изучение и новая микроволокнистая форма иммобилизованного трипсина в комплексном лечении гнойных ран. Москва: Государственный Научный Центр лазерной медицины Министерства здравоохранения РФ, 2005. - С. 17-65.

90. Солдатова Л.С., Бабич О.О. Повышение каталитической активности и стабильности химотрипсина за счет ковалентной иммобилизации на магнитных наночастицах Рез04 // Техника и технология пищевых производств. 2010. - Т. 16. № 1. - С. 69.

91. Способ получения иммобилизованной пероксидазы / Брыкалов A.B., Воронина О.В., Несмеянова И.В., Маслова И.В. // RU N2005784 С 1, кл. С. 12, №11/14.-1994.

92. Страйер Л. Биохимия. Т.1 изд. - М.: Мир, 1984. - 227 с.

93. Суворова А.И., Тюкова И.С., Труфанова Е.И. Биоразлагаемые полимерные материалы на основе крахмала // Успехи химии. 2000. - № 5. -С. 494-504.

94. Сыновей A.C., Левицкий А.П. Ингибиторы протеолитических ферментов в медицине. Киев: Здоровье, 1979. - 78 с.

95. Тамбовцев Е.П., Ахметкалиев С.Г., Пятницкий Н.П. Методы статистической обработки результатов серологических реакций // Журнал микробиологии. -1969. № 10. - С. 26-31.

96. Ткачев А.Г., Михалева З.А., Рыбкин C.B., Долгова О.В. Создание катализаторов для производства углеродных нанотрубок // Известия вузов.

97. Химия и химическая технология. 2008. - Т. 51. Вып. 1. - С. 86-90.

98. Тривен М. Иммобилизованные ферменты. М.: Мир, 1983. - С. 208.

99. Троицкий A.B. Дис. канд. мед. наук. Новосибирск, 1998. - 109 с. Разработка способа получения лекарственных препаратов на основе иммобилизованных протеаз Вас. Subtilis: автореф. дис. канд. мед. наук: 14.02.03. - Новосибирск, 1998. - 24 с.

100. Устинов М.Ю., Артеменко С.Е., Овчинникова Г.П., Вихорева Г.А., Гу-зенко А.Н. Состав и свойства биодеградируемых полимеров // Химические волокна. 2004. - № 3. - С. 25-28.

101. Ухарцева И.Ю. Самодеструктируемые полимерные материалы // Пластические массы. 2009. - № 6. - С. 45-48.

102. Фармокопейная статья предприятия // ФГУП НПО «Микроген» -Томск, 1995. С. 6-9.

103. Халгаш Я. Биокатализаторы в органическом синтезе. М.: Мир, 1991. -204 с.

104. Хигтинс И., Бест Д., Джонс Дж. Биотехнология. Принципы и применение. М.: Мир, 1988. - 480 с.

105. Хирургия тяжёлых гнойных // Под ред. Е.Г. Григорьева, A.C. Когана. -Новосибирск: Наука, 2000. С. 314.

106. Чернобаева М.В., Салим Хусам, Скатков С.А., Демина Н.Б. Пленочные покрытия пероральных лекарственных форм // Фармация. 2010. -№8.-С. 45-51.

107. Чудо пленка, или Слово о бактериальной целлюлозе // Электронная версия журнала. - СПб., 2007. - №3 (3751)

108. Шавырин В.А., Квасенков О.И. Экологическая безопасность тары и упаковки // Хранение и переработка сельхозсырья. 2008. - № 12.1. С. 61-63.

109. Шаскольский Б.Л. Биотехнология // Теоретический и научно-практический журнал. 2009. - № 1. - С. 71-80.

110. Шеховцова Т.Н., Мугинова C.B., Веселова И.A. Enzymatic methods of analysis: novel approaches and applications // Известия Российской академии наук. Серия химическая. 2007. - № 4. - С. 583.

111. Шкутина И.В., Стоянова О.Ф., Селеменев В.Ф. Применение волокнистых полиэлектролитов в качестве носителей а -амилазы // Журнал прикладной химии. 2005. - Т. 78. № 6. - С. 1003-1005.

112. Юданова Т.Н. Полимерные раневые покрытия с ферментативным и антимикробным действием: автореф. дис. . д-ра хим. наук: 02.00.06. -Москва, 2004.

113. Юданова Т.Н., Решетов И.В. Современные раневые покрытия: получение и свойства. П. Раневые покрытия с иммобилизованными протеоли-тическими ферментами (обзор) // Химико-фармацевтический журнал.2006.-Т.40.№ 8.-С.24-31.

114. An environment for healing: the role of occlusion / Ed. by T J.Ryan. London, The Royal Society of Medicine, 1985. 158 p.

115. Baaden В., Carnevale K. Production and consumption of polypropylene fibers and filaments move on // The Chemical Journal. 2005. - № 6-7.1. P. 43.

116. Beyond occlusion: wound care proceedings / Ed. by T J.Ryan. London, The Royal Society of Medicine Services, 1988. 141 p.

117. Cao, L. Immobilised enzymes. / L. Cao, L. van Langen, R.A. Sheldon // Curr. Opinion in Biotehnol.-2003. -V. 11.-N.14. P. 387-394.

118. Chen Zun. Исследование по иммобилизации глюкоамилазы на привитой крахмальной подложке / Chen Zun, Kong Wei, Zhou Hui, Li Wei, Shen Jia-Cong //Shengwu huaxue zazhi. Chin. Biochem.j. 1995. - V.ll, №2. - P. 150-154.

119. Chonde, Y. Acrylate based adsorbent resin for the immobilization of enzymes / Chonde, Y., Paul, M.A. // Pat. 4897352. USA С 12 № 11/08. -1990. P. 168.

120. Jchijo Hisao, Nagasawa Junichi, Yamauchi Aizo. Immobilization of bio-catalysis with poly (vinyl alcohol) supports //J.Biotechnol. 1990. - V.I 4, №2.-P. 169-178.

121. Kabanov V.A., Skobeleva V.B., Rogacheva V.B. and Zezin A.B. Sorption of Proteins by Slightly Cross-Linked Polyelectrolyte Hydrogels: Kinetics and Mechanism. J. Phys. Chem. B, 2004, v. 108, - P. 1485-1490.

122. Nakasaki K. et al. Kagaku Kogaku / Chem. Eng., Jap., 1995. V.59, - № 7, -P.496-497.

123. Nano Letters., 2003, -3(6), P. 829-832.

124. S. abuek, Polymery / S. abuek, J. Pajk, B. Nowak, E. Majdiuk., 2002. Vol. 47, № 4. - P. 256 - 261.

125. Schlicht R. Kunststoffe., 1998. B. 88, № 6. - P. 888-890.

126. Sinclair R.G. J. Macromol. Sci. A., 1996. V. 33, № 5, - P. 703.

127. T. Kagaku to Kogyo / Chem. And Chem. Ind., 1997. V.50, № 7, - P. 1024.

128. Tailleur J.-P. Usine nouv., 1998. Hors serie nov. P. 76-77.

129. Walters M.P., Littlewood J.M., 1996. P. 196-200.

130. Wang Jing et al. Huanjing kexue / Chin. J. Environ. Sei., 1998. V. 19, № 5, -P. 52.

131. Wang Jing et al. Huanjing kexue / Chin. J. Environ. Sei., 1998. V. 19, №12, - P.57.

Обратите внимание, представленные выше научные тексты размещены для ознакомления и получены посредством распознавания оригинальных текстов диссертаций (OCR). В связи с чем, в них могут содержаться ошибки, связанные с несовершенством алгоритмов распознавания. В PDF файлах диссертаций и авторефератов, которые мы доставляем, подобных ошибок нет.