Получение и свойства ферментсодержащих материалов медицинского назначения на основе композиций поливинилового спирта и амфифильных полимеров тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 05.17.06, кандидат химических наук Ермакова, Анна Александровна

• Ермакова, Анна Александровна
• кандидат химических наук
• 2010

Оглавление диссертации кандидат химических наук Ермакова, Анна Александровна

Введение.

1 Литературный обзор.

1.1 Иммобилизация ферментов в полимерных системах.

1.1.1 Комплексообразование как способ иммобилизации ферментов при получении раневых покрытий.

1.2 Свойства полиэтиленоксида и его использование при создании лекарственных средств.

1.3 Свойства блок-сополимера полиэтиленоксида и полипропиленок-сида.

1.4 Влияние полиэтиленоксида и блок-сополимера полиэтиленоксида и полипропиленоксида на свойства белков.

1.5 Ассоциация белков и ее влияние на активность ферментов.

1.5.1 Влияние способности ферментов к ассоциации на протекание интерполимерных реакций и свойства иммобилизованных ферментов

2 Методический раздел.

3 Основные результаты и их обсуждения.

3.1 Исследование влияния полиэтиленоксида на активность и стабильность трипсина и террилитина в растворе.

3.2 Исследование влияния условий формования на свойства иммобилизованных в структуре пленок ферментов.

3.3 Исследование структуры полимерных систем, содержащих проте-олитический фермент и полиэтиленоксид.

3.4 Исследование закономерностей иммобилизации трипсина и террилитина в полимерных композициях, содержащих симметричный три-блок-сополимер полиэтиленоксида и полипропиленоксида.

3.5 Исследование биокаталитических свойств и структуры пленочных материалов, полученных из композиций поливинилового спирта, трипсина и амфифильных полимеров.

3.6 Физико-химические свойства иммобилизованных ферментов.

3.7 Исследование стабильности иммобилизованных ферментов при хранении.

3.8 Физико-механические свойства пленок, содержащих протеазу и амфифильный полимер.

3.9 Исследование закономерностей иммобилизации трипсина и терри-литина в композициях с амфифильными полимерами на волокнистых матрицах.

Выводы.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Получение и свойства ферментсодержащих материалов медицинского назначения на основе композиций поливинилового спирта и амфифильных полимеров»

В настоящее время кардинально изменился и расширился арсенал перевязочных средств, однако большинство из них не обладают биологической активностью или являются антимикробными. Несмотря на значительное число работ, посвященных получению полимерных материалов с протеолитиче-ской активностью, практически реализованы единицы. Вероятно, это обусловлено тем, что недостаточно только осуществить иммобилизацию, иммобилизованный в структуре полимерного носителя фермент должен быть устойчивым к стерилизации и длительному хранению (в течение 3-5 лет), что достигается не всегда. Поэтому исследование новых полимерных систем для включения в них ферментов с целью разработки новых перевязочных материалов для энзимотерапии гнойных ран является актуальным. Использование таких материалов необходимо для повышения эффективности лечения (снижения аллергенного действия, стоимости лечения за счет уменьшения расхода фермента и повышения его стабильности, качества медицинского обслуживания благодаря удобству использования).

Одним из путей регулирования свойств иммобилизованных ферментов является включение их в структуру комплексов, образованных с участием неионогенных полимеров, например амфифильных полимеров. При этом не происходит химическое модифицирование белковых глобул, а стабилизация протеаз достигается за счет водородных связей и гидрофобных взаимодействий. Использование в составе матрицы дешевых и доступных синтетических биодеградируемых полимеров медико-биологического назначения является предпосылкой для разработки технологичных способов переработки полимерных композиций в пленочные покрытия и композиционные материалы на волокнистой основе. К числу таких полимеров относятся поливиниловый спирт, полиэтиленоксид и триблок-сополимер полиэтиленоксида и полипро-пиленоксида. Симметричный триблок-сополимер интересен тем, что способен к самоорганизации с образованием структур различного типа. Системы, содержащие белки и полиэтиленоксид с молекулярной массой от нескольких сотен до тысяч, активно исследуются. Однако необходимо учитывать некоторые ограничения, которые связаны с осаждением белков при высоких концентрациях растворов полиэтиленоксида (более 5%). В литературе в основном представлены работы, посвященные исследованию характера продуктов интерполимерного взаимодействия полиэтиленоксида и белков. Следует ожидать, что варьирование состава компонентов системы может привести к формированию различных структур, а, следовательно, и свойств иммобилизованного фермента.

Целью работы является разработка методов получения раневых покрытий пленочного и волокнистого типа с использованием композиций протео-литических ферментов — трипсина и террилитина и синтетических биосовместимых биодеградируемых полимеров - полиэтиленоксида и/или симметричного триблок-сополимера полиэтиленоксида и полипропиленоксида.

Для достижения поставленной цели было необходимо:

- установить закономерности иммобилизации трипсина и террилитина в структуре поливинилспиртовых пленок, а также целлюлозных или полиэти-лентерефталатных волокнистых материалов с использованием полиэтиленоксида и/или симметричного триблок-сополимера полиэтиленоксида и полипропиленоксида;

- установить влияние структуры полимерных систем на свойства иммобилизованных ферментов;

- установить влияние состава полимерных систем на физико-химические свойства иммобилизованных ферментов и физико-механические свойства биоактивных материалов;

- определить состав многокомпонентной полимерной системы, обеспечивающей высокую активность и стабильность протеаз.

Методы исследования: химические, физико-химические, реологические, УФ- и видимая спектроскопия, нефелометрия, электронная микроскопия, атомно-силовая микроскопия, дифференциальная сканирующая калориметрия. Расчет термодинамических характеристик полимеров выполнен с б использованием программного обеспечения дифференциально-сканирующего калориметра DSC Q10 "ТА Instruments" (ГОУ ВПО "МГТУ им. А.Н.Косыгина").

Научная новизна полученных результатов:

- Установлены особенности структурообразования в полимерных системах, содержащих поливиниловый спирт, трипсин или террилитин и полиэтил еноксид и/или симметричный триблок-сополимер полиэтиленоксида и полипропиленоксида, которое заключается в пластификации полимерной матрицы или фазовом разделении системы, а его направление определяется содержанием и типом амфифильного полимера и фермента, а также температурой системы.

- Показано, что способность фермента к ассоциации имеет решающее значение, определяющее тип локализации фермента при его иммобилизации в структуре целлюлозной или полиэтилентерефталатной волокнистой матрицы в составе композиции с полиэтиленоксидом.

- Установлена взаимосвязь между активностью и стабильностью иммобилизованного трипсина и террилитина и характером распределения фермента в структуре полимерной матрицы пленочного или волокнистого типа, содержащей полиэтиленоксид и/или симметричный триблок-сополимер полиэтиленоксида и полипропиленоксида.

- Установлено повышение активности трипсина, иммобилизованного в структуре поливинилспиртовых пленок, содержащих полиэтиленоксид или симметричный триблок-сополимер полиэтиленоксида и полипропиленоксида, при длительном хранении, что свидетельствует о протекании в полимерных системах релаксационных процессов.

Практическая значимость. Предложены новые пути регулирования свойств раневых покрытий на основе композиции полимеров медико-биологического назначения для энзимотерапии ран.

Разработано асимметричное раневое покрытие на основе поливинилового спирта, содержащее полиэтиленоксид, симметричный триблоксополимер полиэтиленоксида и полипропиленоксида и трипсин, обладающее высокой активностью, стабильностью и удовлетворительной паропроницае-мостью.

Полученные результаты могут быть использованы при разработке полимерных материалов с ферментативной активностью.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 4 статьи, в том числе 3 - в журналах, включенных в перечень ВАК, 1 — в зарубежном журнале и 6 тезисов докладов на научных конференциях.

Объем работы. Диссертационная работа состоит из введения, литературного обзора, методической части, главы, посвященной изложению основных результатов и их обсуждению, выводов, списка использованной литературы.

Заключение диссертации по теме «Технология и переработка полимеров и композитов», Ермакова, Анна Александровна

Выводы

1. С целью получения ферментсодержащих материалов медицинского назначения на основе композиций с полиэтиленоксидом и/или симметричным триблок-сополимером полиэтиленоксида и полипропиленоксида исследованы закономерности иммобилизации протеолитических ферментов трипсина и террилитина в структуре поливинилспиртовой пленки и волокнистых материалов - целлюлозного и полиэтилентерефталатного.

2. На основании реологических и нефелометрических исследований растворов ферментов с полиалкиленоксидами установлено протекание интерполимерных реакций, приводящих к разрушению ассоциатов трипсина и повышению стабильности.

3. Установлено влияние способа получения формовочного раствора на относительную активность и стабильность иммобилизованного трипсина и определена оптимальная последовательность введения компонентов в раствор поливинилового спирта, при которой фермент вводится в полимерную композицию последним.

4. В результате реологических, калориметрических и микроскопических исследований полимерных систем разного состава установлено, что добавки полиэтиленоксида или триблок-сополимера полиэтиленоксида и полипропиленоксида в раствор поливинилового спирта оказывают на полимерную матрицу пластифицирующее действие. Для систем с террилитином выявлена симбатная зависимость между эффективной вязкостью и молекулярной массой полиэтиленоксида.

5. Установлено, что в полимерных системах, содержащих фермент и триб-лок-сополимер, а также в некоторых системах, содержащих полиэтиленок-сид, увеличение содержания трипсина, полиалкиленоксида и температуры способствует фазовому разделению в результате усиления гидрофобных взаимодействий. Показано, что центрами структурообразования при фазовом разделении являются гидрофобные частицы трипсина.

6. С использованием принципов пластификации и фазового разделения получена ассиметричная поливинилспиртовая пленка, содержащая трипсин, полиэтиленоксид и триблок-сополимер, с высокой активностью, стабильностью и паропроницаемостью.

7. Установлено влияние состава пленок на уровень их паропроницаемости, которая имеет колебательный характер.

8. Установлено, что иммобилизация не оказывает существенного влияния на зависимость активности ферментов от температуры и рН. рН-Профиль иммобилизованного террилитина расширяется в щелочную область со сдвигом с 7,5 до 8,0-8,5. Температурный оптимум иммобилизованных ферментов сдвигается с 50 °С до 40-45 °С.

9. На основании анализа активности полимерных материалов при хранении в течение 1 года при комнатной температуре установлено повышение активности иммобилизованного трипсина и снижение активности террилитина.

10. Показана возможность использования полимерных композиций на основе полиэтиленоксида или триблок-сополимера, содержащих трипсин и тер-рилитин, для иммобилизации на целлюлозной и полиэфирной волокнистых матрицах. Методом атомно-силовой микроскопии установлено, что высокая активность иммобилизованного трипсина обусловлена локализацией частиц фермента на поверхности волокон.

Список литературы диссертационного исследования кандидат химических наук Ермакова, Анна Александровна, 2010 год

1.Ф., Ларионова Н.И., Торчилин В.П. Ферменты и белковые препараты в медицине // Биотехнология. М.: Наука, 1984. С. 113-125.

2. Толстых П.И., Гостищев В.К., Арутюнян Б.Н. и др. Протеолитические ферменты, иммобилизованные на волокнистых материалах, в хирургии. Ереван: Айстан, 1990. 136 с.

3. Назаренко Г.И., Сугурова И.Ю., Глянцев С.П. Рана. Повязка. Больной.-М.: Медицина.- 2002.- 472 с.

4. Юданова Т.Н. Полимерные раневые покрытия с ферментативным и антимикробным действием: Дисс. . .докт. хим. наук.- М., 2004.- 328 с.

5. Филатов В.Н., Рыльцев В.В. Биологически активные текстильные материалы. Т.1. Терапевтические системы «Дальцекс — трипсин».- М.: Инфор-мэлектро, 2002.- 248 с.

6. Юданова Т.Н., Решетов И.В. Современные раневые покрытия: получение и свойства (Обзор). 2. Раневые покрытия с иммобилизованными протео-литическими ферментами / Химико-фарм. журнал.- 2006.- Т.40.- №8.-С.24-48.

7. Николаев А.Ф., Мосягина Л.П. Поливиниловый спирт и сополимеры винилового спирта в медицине // Пластические массы. 2000. - №3. — С.34-42.

8. Полищук А .Я., Заиков Г.Е., Мадюскин Н.Н. Биоразлагаемые полимеры и их применение в современной медицине // Пластические массы. — 2000. -№2. С.28-33.

9. Ruizcardona L., Sanzgiri Y.D., Benedetti L.M., et al. Application of benzyl hyaluronate membranes as potential wound dressing evalution of water-vapor and gas permeabilities // J. Biomaterials. - 1996.- V. 17 (16).- P. 1639-1643.

10. Choi Y.S., Hong S.R., Lee Y.M., et al. Studies on gelatin-containing artificial skin. II. Preparation and characterization of cross-linked gelatin-hyaluronate sponge // J. Biomed. Mater. Res.- 1999.- V. 48 (5).- P. 631-639.

11. Tomihata К., Burczak К., Shiraki К., Irada Y. Cross-linking and biodégradation of native and denatured collagen // ACS Symposium Series.- 1994.-V.540.- P. 275-286.

12. Hong S.R., Lee S.J., Shim J.W., et al. . Study on gelatin-containing artificial skin. IV. A comparative study on the effect of antibiotic and EGF on cell proliferation during epidermal healing // J. Biomaterials.- 2001.- V. 22 (20).- P. 2777-2783.

13. Ulubayram K., Cakar A.N., Korkusuz P., et al. EGF containing gelatin based wound dressings // J. Biomaterials.- 2001.- V. 22 (11).- P. 1345-1356.

14. Tucci M.G., Ricotti G., Mattiolibelmonte M. et al. Chitosan and gelatin as engineered dressing for wound repair // J. of Bioactive and Compatible Polymers." 2001.- V. 16.- № 2.- P. 145-157.

15. Кулиш Е.И., Кузина Л.Г., Чудин А.Г., Мударисова Р.Х., Колесов C.B., Свойства пленок на основе хитозана // Энцикл. инж.-химика.- 2007.- №9.-С.9-11.

16. Choi Y.S., Hong S.R., Lee Y.M. et al. Study on gelatin-containing artificial skin. I. Preparation and characteristics of novel gelatin-alginate sponge // Biomaterials.- 1999.- V.20.- № 5.- P. 409-417.

17. Draye J.P., Delaey В., Vandevoorde A. et al. In vitro and in vivo biocompati-bility of dextran dialdehyde cross-linked gelatin hydrogel films // Biomaterials.- 1998.-V. 19.-№18.-P. 1677-1687.

18. Платэ H.А., Васильев A.E. Физиологически активные полимеры.- M.: Химия, 1986.-296 с.

19. Коршак В.В., Штильман М.И. Полимеры в процессах иммобилизации и модификации природных соединений. — М.: Наука, 1984.- 261 с.

20. Введение в прикладную энзимологию. / Под ред. Березина И.В., Марти-нека К.М. -М.: Изд-во МГУ, 1982.- 384 с.

21. Кабанов В.А., Зезин А.Б., Изумрудов В.А. Синтетические полиэлектролиты как регуляторы ферментативных реакций // Итоги науки и техники. Биотехнология / Под ред. Егорова Н.С., Самуилова В.Д. М.: Высшая школа, 1987. - Т.4.- С.159-192.

22. Мартинек К., Березин И.В. Стабилизация ферментов — ключевой фактор при внедрении биокатализа в практику // Успехи химии.- 1980.- №5.-С.737-770.

23. Изумрудов В.А. Зезин А.Б., Кабанов В.А. Кинетика макромолекулярного обмена в растворах комплексов глобулярных белков с полиэлектролитами // Докл. АН СССР.- 1986.- Т.291.- №5.- С. 1150-1154.

24. Изумрудов В.А., Лим С.Х. Контролируемые фазовые разделения в растворах комплексов полиметакрилатного аниона и глобулярных белков // Высокомол. соед.- 2002.- Т.44.- №5.- С.793-801.

25. Комисарова A.JL, Якубович B.C., Толстых П.И. и др. Получение пористого материала на основе альгиновой кислоты, содержащей иммобилизованный террилитин // Антибиотики и химиотерапия.- 1988.- №10.- С.735-739.

26. Вихорева Г.А., Хомяков К.П., Сахаров И.Ю., Гальбрайх JI.C. Иммобилизация протеолитических ферментов в пленках и губках карбоксиметилхи-тина// Химические волокна,- 1995.- №5.- С. 34-37.

27. Бабаев М.С., Кулиш Е.И., Мударисова Р.Х., Колесов C.B. Изучение взаимодействия хитозана с трипсином // Тезе. докл. Пятой Всероссийской Каргинской Конференции «Полимеры 2010» - МГУ.- 2010.- С.137.

28. Хомяков К.П., Кильдеева Н.Р., Богомольный В.Я. и др. Терриплен фер-ментсодержащая пленка из поливинилового спирта для лечения гнойныхран / Гидрофильные полимеры медицинского назначения: Сб. науч. тр. -JL: ОНПО «Пластполимер», 1989.- С.49-53.

29. Богомольный В.Я., Бодунова E.JL, Афиногенов Г.Е. и др. Антисептические поливинилспиртовые пленки для закрытия ран и ожогов / / Гидрофильные полимеры медицинского назначения: Сб. науч. тр. -JL: ОНПО «Пластполимер», 1989.- С.42-49.

30. Биологически активные перевязочные средства в комплексном лечении гнойно-некротических ран / Под. ред. В.Д.Федорова, И.М. Чижа.- М.: МЗ РФ, 2000.- 36 с.

31. Пат. RU 2174847, Чиссов В.И., Решетов И.В., Юданова Т.Н., Скокова И.Ф. Повязка для лечения ран, приор. 01.03.2000, опубл. 20.10.2001.

32. Решетов И.В., Юданова Т.Н., Маторин О.В., Морозов Д.С. Пленочное покрытие, содержащее хлоргексидин и лизоцим, для лечения ран // Химико-фармацевтический журнал.- 2004.- Т.38.- №7.- С.41-43.

33. Ухарцева И.Ю. Влияние температурных воздействий на структуру и физико-химические свойства наполненных гелей поливинилового спирта // Пластические массы.- 2002.- №8.- С. 15-17.

34. Химический энциклопедический словарь / Под ред. Кнунянц И.Л.- М.: Сов. энциклопедия, 1983.- 792 с.

35. Dhawan S., Dhawan К., Varma М. and Sinha V.R. Application of Polyethylene oxide) in drug delivery systems Part II // Pharmaceutical tech152nology.- 2005.- P.82-96.

36. Рабинович И.М. Применение полимеров. Д.: Медицина, 1972.- 197 с.

37. Гаврилин М.В., Компанцева Е.В., Ушакова JI.C. и др. Изучение возможности использования геля полиэтиленоксида в фармации // Фармация.-1998,-№2.- С.20-21.

38. Гаврилин М.В. Применение полимеров и сополимеров производных акриловой кислоты и этиленоксида в фармации // Химико-фарм. журнал.-2001.- Т.35.- №1.- С.33-36.

39. Jacob Israelachvili The different faces of poly(ethylene glycol) // Proc. Nat. Acad. Sci. USA.- 1997.- V. 94.- P. 8378-8379.

40. Boualem Hammouda, Derek L.Ho and Steve Kline Insight into clustering in poly (ethylene oxide) solutions // Macromolecules.- 2004.- №37.- P.6932-6937.

41. Boualem Hammouda, Derek L.Ho Insight into chain dimensions in PEO/water solutions // Journal of polymer Science.- 2007.- №45.- P. 2196-2200.

42. Масимов Э.А., Аббасов Х.Ф. О взаимодействии макромолекул с молекулами растворителя в системе полиэтиленгликоль вода // Журнал Университета Кавказа.- 2008.- №23.- С. 59-61.

43. Масимов Э.А., Пашаев Б.Г., Гасанов Г.Ш., Гусейнова С.В. Структурные особенности водных растворов полиэтиленгликолей // Вестн. Бакин. унта. Сер. физ-мат. н.- 2007.- №1.- С.101-108.

44. Макарова В.В., Герасимов В.К., Терешин А.К., Чалых А.Е., Куличихин В.Г. Диффузионное и фазовое поведение системы гидроксипропилцеллю-лозы полиэтиленгликоль // Высокомолекулярные соединения.- 2007.-Т.49.- №4.- С.663-673.

45. Сытник О.Ю., Ефимова Н.В., Красноперова А.П. Объемные свойства сис153темы поэтиленгликоль-400 — 1,2-пропандиол // Вестник Харьковского национального университета.- 2008.- №820.- С.299-302.

46. Gayet J.C., Fortier G. High Water-Content BSA-Peg Hydrogel for Controlled-Release Device Evaluation of the Drug-Release Properties // J. of Controlled Release.- 1996.- V. 38.- Iss 2-3.- P. 177-184.

47. Higa O.Z., Rogero S.O., Nachado L.D.B., Mathor M.B., Lugao A.B. Biocom-patibility Study for PVP Wound Dressing Obtained in Different Conditions // Radiation Physics and Chemistry.-1999.-V.55.- Iss 5-6.- P.705-707.

48. Yoshii F., Zhanshan Y., Isobe К et al. Electron-Beam Cross-Linked PEO and PEO PVA Hydrogels for Wound Dressing // Radiation Physics and Chemistry.- 1999.- V. 55.- Iss 2.- P. 133-138.

49. Hilmy N., Darwis D., Hardiningsih L. Poly(N-Vinylpyrrolidone) Hydrogels. 2. Hydrogel Composites as Wound Dressing for Tropical Environment // Radiation Physics and Chemistry.- 1993.- V. 42,- Iss 4-6.- P. 911-914.

50. Пат. RU 2170590, A 61 L 15/38. Способ получения альгинатного материала, обладающего ранозаживляющим действием / Бронштейн Б.Ю., Комиссарова А.Л., Якубович B.C.; Опубл. 20.07.2001.

51. Рамбиди Н.Г., Березкин А.В. Физические и химические основы нанотех-нологий.- М.: ФИЗМАТЛИТ, 2008.- 456 с.

52. Buchholz В.А., Shi W., Barron A.E. MicroChannel DNA sequencing matrices with switchable viscosities // Electrophoresis.- 2002.- № 23.- P. 1398-1409.154

53. Ruzette A.V., Leibler L. Block copolymers in tomorrow's plastics // Nature materials.- 2005.- №4.- P. 19-31.

54. Bohorquez, M., Koch, C., Trygstad, Т., and Pandi, N., A Study of the Temperature-dependent micellization of Pluronic F-127, J. Colloid Interface Sci.- 1999.-V.216.- P.34-40.

55. Escobar-Chavez J.J., Lopez-Cervantes, Naik A. et al. Applications of thermo-reversible Pluronic F-127 gels in pharmaceutical formulations // J.Pharm Pharmaceut Sci.- 2006.-V.9.- №3.- P.339-358.

56. Bromberg L.E., Ron E.S. Temperature-responsive gels and thermogelling polymer matrices for protein and peptide delivery // Advanced Drug Deliver Reviews. 1998.-№ 31.-P. 197-221.

57. Kyu Hyun, Jung Gun Nam, Manfred Wilhellm, Kyung Hyun Ahn and Seung Jong Lee Large amplitude oscillatory shear behavior of PEO-PPO-PEO triblock copolymer solutions // Rheol Acta.- 2006.- №45.- P.239-249.

58. Yun-Seok Rhee, Young-Hee Shin et al. Effect of flavors on the viscosity and gelling point of aqueous poloxamer solution // Arch Pharm Res.- 2006.- V.29.-№12.- P.l 171-1178.

59. Indrajeet D. Gonjari, Amrit B. Karmarkar, Pramod V. Kasture In vitro evaluation of different transnasal formulations of sumatriptan succinate: A comparative analysis // Drug Discov Ther.- 2009.- V.3.- №6.- P. 266-271.

60. EP0481600 A2 (GB) A61 L 15/28. Materials useful in human and veterinary medicine / Payne Nicholas Ian, Gibson Mark, Taylor Peter Mark.; Опубл. 22.04.92.

61. Nagarajan R. Solubilization of Hydrocarbons and Resulting Aggregate Shape Transitions in Aqueous Solutions of Pluronic (PEO-PPO-PEO) Block Copoly155mers // Colloids and Surfaces B: Biointerfaces.- 1999.- V.16.- P.55-72.

62. Liang Guo, Ralph H. Colby Micellar structure changes in aqueous mixtures of nonionic surfactants // J. Rheol.- 2001.- V.45.- №5.- P.1223-1243.

63. Daly S.M., Przybycien T.M., Tilton R.D. Adsorption of poly(ethylene glycol)-modified lysozyme to silica // Langmuir.- 2005.- №21.- P. 1328-1337.

64. Rawat S., Raman Suri C., Sahoo D.K. Molecular mechanism of polyethylene glycol mediated stabilization of protein // Biochem. biophys. res. commun.-2010.- №4.- P.561-566.

65. Kulkarni A.M., Chatterjee A.P., Schweizer K.S., and Zukoski C.F. Effects of polyethylene glycol on protein interactions // J. Chem. Phys.- 2000.- V.113.-№21.-P. 9863-9873.

66. Annunziata O., Asherie N., Lomakin A., Pande J., Ogun O., Benedek G.B. Effect of polyethylene glycol on the liquid-liquid phase transition in aqueous protein solutions //Proc. Nat. Acad. Sci. U S A.- 2002.- № 99,- P. 14165-14170.

67. Hermans J. Excluded-volume theory of polymer-protein interactions based on polymer chain statistics // J. Chem. Phys.- 1982.- № 77.- P. 2193-2204.

68. Чеботарева H.A., Курганов Б.И., Ливанова Н.Б. Биохимические эффекты молекулярого краидинга // Биохимия.- 2004.- Т.69.- №11.- С. 1522-1536.

69. Schnell S., Turner Т.Е. Reaction kinetics in intracellular environments with macromolecular crowding: simulations and rate laws // Progress in Biophysics & Molecular Biology.- 2004.- № 85,- P. 235-260.

70. Топчиева И.Н. Водные растворы олигомеров на основе окиси этилена (обзор) // Химико-фарм. журн.- 1989.- т.23, №3.- С.261-267.

71. Топчиева И.Н., Ефремова Н.В., Курганов Б.И. Аддукты белков с водорастворимыми полиалкиленоксидами // Успехи химии.- 1995.- Т.64.- № 3.- С. 293-307.

72. Сорокина Е.М., Ефремова Н.В., Топчиева И.Н. Нековалентные комплексы а-химотрипсина с полиалкиленоксидами // IV симпоз. Химия протеоли-тических ферментов. Тез.докл. и стенд, сообщ.- М.: ИБХ РАН.- 1997.-С.120.

73. Сакодынская И.К., Сорокина E.M., Ефремова H.B., Топчиева И.Н. Ферментативная активность комплексов полимер-белок в смешивающихся с водой органических растворителях // Биоорганическая химия.- 1999.- Т. №25.-№6.- С. 439-443.

74. Yi X., Batrakova Е., Banks W., Vinogradov S., Kabanov A. Protein Conjugation with Amphiphilic Block Copolymers for Enhanced Cellular Delivery // Bioconjugate Chem.- 2008.- №19.- P.1071-1077.

75. Мосолов B.B. Протеолитические ферменты. M.: Наука, 1971.- 404 с.

76. Gottschalk Michael, Venu Kandadai, Halle Bertil Protein self-association in solution: the bovine pancreatic trypsin inhibitor decamer // Biophysical Journal.-2003.- №84.- P.3941-3958.

77. Ramakrisha Т., Pandit M.W. Self-association of a-chymotrypsin: effect of amino acids //Journal Biosciece.- 1988.- V.13.- №3,- P. 215-222.

78. Турманидзе Ц.С., Квеситадзе Г.И., Миканадзе Ю.С., Шанидзе М.Г., JIo-ладзе М.Ж., Биркадзе Т.В., Алибегашвили М.Г., Выделение и физико -химические свойства стафилококковой гиалуронидазы // Прикладная биохимия и микробиология. 1996.-№5 Т.32. - С.519-523.

79. Ruiz-Репа M.,Comas-Rojas Н., Rodnguez-Calvo S., Perez-Gramatges A. Self-association behaviour of protein : surfactant systems in alcohol/water mixtures //Nanobiotechnology.- 2005.- V.152.- №5.- P. 177-181.

80. John S. Philo, Tsutomu Arakawa. Mechanisms of protein aggregation // Current pharmaceutical biotechnology.- 2009.- № 10.- P.348-351.

81. Snoussi Karim, Halle Bertil Protein self-association induced by macromolecu-lar crowding: a quantitative analysis by magnetic relaxation dispertion // Biophysical journal.- 2005.- V.88.- №4.- P.2855-2866.

82. Курганов Б.И. Физико-химические механизмы регуляции активности ферментов. -М.: Химия, 1992. — 54 с.

83. Lowry О.Н., Rosebrogh N.J., Randal R.J. Protein measurement with Folin phenol reagent // J. Biol. Chem.- 1951.- V.193.- P.265-275.

84. Васильева Р.П., Евтихов Н.П., Богород Г.В. Соотношение величин активности протеиназ, полученных двумя способами измерения // Микробиол. пром-сть.- 1976.- №4.- С.23-26.

85. Березин И.В., Клесов А.А. Практический курс химической и ферментативной кинетики.-М.: МГУ, 1976. 320 с.

86. Геллер Б.Э., Геллер А.А., Чиртулов В.Г. Практическое руководство по физикохимии волокнообразующих полимеров. М.: Химия, 1996. - 432 с.

87. Методические указания к лабораторным работам по курсу «Химия и фи-зико-химия полимеров» / Под ред. Л.С.Гальбрайха М.: МТИ, 1990.-С.31-35.

88. ГОСТ 14236-81. Пленки полимерные. Методы испытания на растяжение. Введен 01.07.1981. -М.: Госстандарт, 1981.

89. Гордон А., Форд Р. Спутник химика / Под ред. Беленькой И.С., Селище-вой И.В.-М.: Мир. 1976.- С. 512-524.

90. Практикум по высокомолекулярным соединениям / Под ред. Кабанова В.А.-М.: Химия.- 1985.- С.115-139.

91. Madaisy Cueto, М. Jesús Dorta, Obdulia Mungu'ia , Mat'ias Llabrés New approach to stability assessment of protein solution formulations by differential scanning calorimetry // International Journal of Pharmaceutics.- 2003.- № 252.-P.159-166.

92. Bruylants G., Wouters J., Michaux C. Differential Scanning Calorimetry in Life Science: Thermodynamics, Stability, Molecular Recognition and Application in Drug Design // Current Medicinal Chemistry.- 2005.- №12.- P.2011-2020.

93. Юданова Т.Н., Скокова И.Ф., Талаленкова O.C., Гальбрайх JI.C. Получение и свойства полимерных композиций, содержащих лизоцим и протеазу С / Антибиотики и химиотерапия.- 2003.- т.48.- №4.- С. 7-10.

94. Перепелкин К.Е. Физико-химические основы процессов формования химических волокон. М.: Химия.- 1978. - 320 с.

95. Липатов Ю.С. Физико-химические основы наполнения полимеров.- М.: Химия.- 1991.- 262 с.

96. Малкин А .Я., Исаев А.И. Реология: концепции, методы, приложение. -СПб.: Профессия.- 2007.- 560 с.

97. Шрам Г. Основы практической реологии и реометрии / Пер. с англ. И.А.Лавыгина; Под ред. В.Г.Куличихина -М.: КолосС.- 2003. 312 с.

98. Кулезнев В.Н., Шершнев В.А. Химия и физика полимеров. М.: Высшая школа.- 1988.-312 с.

99. Агеев Е.П., Секачева Н.В. Автоколебательный режим проницаемости и селективности асимметричной мебраны из поливинилтриметилсилоксана //Высокомол. соед.- 1985,- Т. 27 Б.- №3.- С.163-164.

100. Пат. RU 2157243, А 61 L 15/22. Гидрогелевая композиция и перевязочные средства из нее для лечения ран различной этиологии / Валуев Л.И., Сытов Г.А., Адамян А.А.и др.; Опубл. 10.10.2000, Бюл. №28.

101. Капуцкий Ф.Н., Юркштович Т.Д. Лекарственные препараты на основе производных целлюлозы. — Минск: Университетское, 1989.- 111 с.