Научные основы получения волокнистых и пленочных биокатализаторов из белкосодержащих формовочных дисперсий тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 05.17.15, доктор химических наук Кильдеева, Наталия Рустемовна

• Кильдеева, Наталия Рустемовна
• доктор химических наук
• 1998

Оглавление диссертации доктор химических наук Кильдеева, Наталия Рустемовна

СОДЕРЖАНИЕ

стр.

ВВЕДЕНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ГЛАВА 1. МЕТОДЫ ПОЛУЧЕНИЯ ВОЛОКОН И ПЛЕНОК, СОДЕРЖАЩИХ ИММОБИЛИЗОВАННЫЕ ФЕРМЕНТЫ

1.1. Химическое присоединение ферментов к волокнистым материалам

1.2. Включение ферментов в химические волокна и пленки

1.3. Перспективы использования волокнистых и пленочных биокатализаторов

ГЛАВА 2. ИММОБИЛИЗАЦИЯ НАТИВНЫХ И МОДИФИЦИРОВАННЫХ ФЕРМЕНТОВ В СТРУКТУРЕ ВОЛОКОН И ПЛЕНОК

2.1. Иммобилизация в структуре волокон и пленок немодифи-цированных ферментов

2.2. Иммобилизация в структуре волокон и пленок модифицированных ферментов

2.3. Изучение возможности модифицирования ферментов в процессе получения ферментсодержащей формовочной дисперсии

ГЛАВА 3. ИЗУЧЕНИЕ ПРОЦЕССА МОДИФИЦИРОВАНИЯ ФЕРМЕНТА ГЛУТАРОВЫМ АЛЬДЕГИДОМ

3.1. Кинетика взаимодействия фермента с глутаровым альдегидом

3.2. Кинетика инактивации р-галактозидазы в процессе взаимодействия с глутаровым альдегидом

3.3. Структурирование в системе р-галактозидаза - глутаровый альдегид

ГЛАВА 4. РЕОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ФОРМОВОЧНЫХ ДИСПЕРСИЙ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ВОЛОКНИСТЫХ И ПЛЕНОЧНЫХ БЙОКАТАЛИЗАТОРОВ

4.1. Свойства дисперсий на основе растворов триацетата целлюлозы в метиленхлориде, содержащих ^модифицированный белок

4.2. Реологические свойства адсорбционных слоев на границе раздела фаз раствор триацетата целлюлозы в метиленхлориде-раствор белка

4.3. Влияние объемной доля дисперсной фазы на реологические свойства формовочной дисперсии

4.4. Математическое моделирование процесса приготовления формовочных дисперсий для получения волокнистых биокатализаторов

4.5. Реологические свойства формовочных дисперсий, содержащих модифицированные ферменты

4.6. Изменение реологических свойств формовочных дисперсий

во времени

ГЛАВА 5. ЗАКОНОМЕРНОСТИ ФОРМИРОВАНИЯ СТРУКТУРЫ ВОЛОКНИСТЫХ БИОКАТАЛИЗАТОРОВ

5.1. Влияние белоксодержащей дисперсной фазы на структуру триацетатных волокон, полученных по мокрому способу

5.2. Изучение возможности регулирования структуры фермент-

содержащих триацетатных волокон

ГЛАВА 6. ОСОБЕННОСТИ КИНЕТИКИ ГЕТЕРОГЕННОГО БИОКАТАЛИЗА С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ФЕРМЕНТОВ, ВКЛЮЧЕННЫХ В СТРУКТУРУ ВОЛОКНА

6.1. Влияние внутридиффузионных факторов на свойства ферментов, иммобилизованных в структуре волокон и

пленок

6.2. Определение путей снижения влияния диффузионных затруднений на кинетику гетерогенно-каталитического процесса

ГЛАВА 7. ИЗУЧЕНИЕ ЭФФЕКТИВНОСТИ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ ВОЛОКНИСТЫХ БИОКАТАЛИЗАТОРОВ В БИОТЕХНОЛОГИЧЕСКИХ ПРОЦЕССАХ

7.1. Физико-химические параметры процессов гидролиза специфических субстратов под действием ферментов, включенных в структуру триацетатного волокна

7.2. Изучение способов организации биотехнологического процесса с использованием волокнистого биокатализатора

ГЛАВА 8. РАЗРАБОТКА ВОЛОКНИСТЫХ И ПЛЕНОЧНЫХ БИОКАТАЛИЗАТОРОВ МЕДИЦИНСКОГО НАЗНАЧЕНИЯ

фармакодинамических свойств ферментсодержащих волокон

и пленок

8.2. Исследование эффективности применения волокон и пленок, содержащих протеолитические ферменты, в

гнойной хирургии

ВЫВОДЫ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

ПРИЛОЖЕНИЯ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Научные основы получения волокнистых и пленочных биокатализаторов из белкосодержащих формовочных дисперсий»

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы. Развитие прогрессивных методов лечения и потребности новых технологий ставят проблему получения материалов с различной направленностью биологического действия и, в первую очередь, ферментсодержащих материалов, в число наиболее актуальных задач современной науки.

Многообразие ферментов в природе, их исключительно высокая каталитическая активность, а также совершенствование методов выделения этих уникальных белков открывают перспективы их использования для создания новых биотехнологических процессов и лечения целого ряда заболеваний. В то же время для нативных ферментов характерен ряд недостатков (низкая стабильность, приводящая к быстрой потере активности, сложность отделения от реакционной среды), снижающих технико-экономическую эффективность каталитических процессов с их участием и ограничивающих их применение в биотехнологии и медицинской практике. Иммобилизация ферментов в структуре полимеров-носителей позволяет осуществить переход к нерастворимым формам иммобилизованных ферментов, сохраняющим свойства нативного предшественника, но выгодно отличающимся от него стабильностью и меньшей подверженностью биологическому воздействию. Нерастворимые производные ферментов легко отделять от продуктов реакции, что обеспечивает возможность многократного применения в биокаталитических процессах превращения специфических субстратов.

В решении этих задач важное место занимает разработка методов получения волокон и пленок, содержащих иммобилизованные ферменты. Целесообразность использования волокон и пленок в качестве носителей для иммобилизации ферментов обусловлена рядом причин. Высокая удельная поверхность волокна способствует интенсивному массообмену в гетерогенном катализе, а хорошие физико-механические свойства наряду с удобной физической формой обеспечивают широкие возможности аппаратурно-технологического оформления биотехнологических процессов. Биокатализаторы в виде волокон и пленок, содержащих протеоли-

тические ферменты, могут быть использованы для создания полимерных покрытий на рану, шовных нитей и иных хирургических средств, оказывающих лечебно-профилактическое действие.

Наиболее простым методом придания химическим волокнам специальных свойств, в том числе биологической активности, является формование химических волокон из композиций, включающих в качестве наполнителей соответствующие соединения. Метод получения волокнистых материалов, содержащих иммобилизованные ферменты, включенные в структуру волокна в процессе формования, может рассматриваться как один из вариантов получения наполненных волокон. Однако специфические свойства ферментов, такие как химическая природа белка, бифиль-ность его макромолекулы, лабильность ферментов при экстремальных значениях температуры и рН и действии органических растворителей, растворимость ферментов в реакционной среде (водные растворы) и высокие скорости превращения специфических субстратов требуют специальных подходов при разработке технологии получения волокон, содержащих иммобилизованные ферменты. Эти обстоятельства, а также острая потребность отечественной медицины в эффективных хирургических средствах и ряда отраслей промышленности в продуктах, которые можно получить только путем биокатализа, обусловливают необходимость разработки научных основ процессов иммобилизации в структуре волокон и пленок ферментов с разными физико-химическими свойствами, различной специфичностью и эффективностью катализа.

Цель и задачи исследования. Целью работы являлось комплексное решение научных и технологических проблем создания высокоэффективных волокнистых и пленочных биокатализаторов для биотехнологии и медицины с использованием белоксодержащих формовочных дисперсий и композиций. В связи с этим были поставлены следующие задачи:

- на основе анализа факторов, определяющих стабильность иммобилизованного фермента и кинетику его десорбции из волокнистого биокатализатора, осуществить обоснованный выбор метода модифицирования фермента;

- изучить структурно-механические свойства белоксодержащих дисперсий на основе растворов триацетата целлюлозы в метиленхлориде;

- исследовать структуру волокнистых биокатализаторов и возможности направленного регулирования ее параметров;

- изучить влияние диффузионных факторов на кинетику превращения специфических субстратов в гетерогенно-каталитических процессах с использованием волокнистых биокатализаторов;

- изучить кинетику выделения нативных ферментов и их полиэлектролитных комплексов из волокон и пленок в модельные среды;

- на основе проведенных исследований разработать волокнистые и пленочные биокатализаторы и изучить возможность их использования в биотехнологических процессах и в медицине при создании новых хирургических средств.

Научная новизна работы заключается в реализации нового подхода к получению ферментсодержащих наполненных волокон и пленок, включающего модифицирование фермента непосредственно в формовочной дисперсии, обеспечивающего получение материалов с заданными свойствами.

На основе комплексного изучения кинетики процессов, протекающих в белоксодержащих дисперсных системах, и взаимосвязи физико-химических характеристик этих систем сформулированы научно обоснованные принципы включения ферментов в структуру химических волокон, что позволило получить высокоактивные и стабильные волокнистые и пленочные биокатализаторы.

В результате изучения особенностей макромолекулярных реакций в многокомпонентных ферментсодержащих полимерных системах показана возможность необратимой фиксации ферментов в структуре волокон и пленок и увеличения стабильности волокнистых биокатализаторов в условиях биотехнологических процессов. Рассчитаны кинетические и термодинамические характеристики реакции взаимодействия глутарово-го альдегида с (3-галактозидазой и установлена корреляция между степенью превращения аминогрупп и степенью инактивации фермента, что

обеспечило возможность выбора основных параметров процесса модифицирования белка.

Выявлены особенности реологического поведения дисперсных систем на основе растворов триацетата целлюлозы в метиленхлориде, содержащих водные растворы белка. Сформулированы представления об изменении прочности и состава межфазного адсорбционного слоя как основных факторах, наряду с объемным содержанием дисперсной фазы, влияющих на реологические свойства дисперсных систем. Получено уравнение, отражающее взаимосвязь основных характеристик дисперсий, используемых для получения волокнистых биокатализаторов.

Установлены закономерности формирования пористой структуры волокна в присутствии дисперсной фазы. Показана роль агрегации макромолекул триацетата целлюлозы на границе раздела фаз в образовании дополнительных центров структурообразования и ускорении распада системы на фазы. Определены пути направленного регулирования структуры волокнистых биокатализаторов за счет изменения объемной доли дисперсной фазы, состава межфазного адсорбционного слоя, скорости фазового распада и введения полимера-порообразователя.

На основании анализа кинетики ферментативных реакций с участием волокон и пленок, содержащих иммобилизованные ферменты, полученных с использованием разработанных методов, установлена количественная взаимосвязь каталитических и диффузионных характеристик волокнистых биокатализаторов, позволяющая прогнозировать эффективность иммобилизации в структуре волокна ферментов с различными каталитическими свойствами.

С учетом результатов изучения кинетики выделения нативных белков и их полиэлектролитных комплексов из волокон и пленок выявлены пути регулирования фармакодинамических и медико-биологических свойств ряда материалов медицинского назначения.

Новизна предложенных решений подтверждена 15 авторскими свидетельствами и патентами РФ.

Практическая значимость работы. Разработаны способы и научные основы технологических процессов получения высокоактивных и ста-

бильных волокнистых биокатализаторов для биотехнологических процессов и волокнистых и пленочных материалов для медицинского применения. Полученные результаты были использованы при разработке технического задания и проекта установки для выпуска волокнистых биокатализаторов различных типов. В соответствии с разработанным технологическим регламентом был осуществлен выпуск укрупненных опытных партий биокатализаторов, содержащих модифицированные (3-галактозидазу и пенициллинамидазу, показатели которых соответствовали требованиям технических условий.

Использование волокнистого биокатализатора, содержащего иммобилизованную Р-галактозидазу, в биотехнологическом процессе гидролиза лактозы в молочной сыворотке обеспечивает получение сахаристых веществ из нетрадиционных источников сырья, утилизацию сыворотки, решение экологических проблем производства молочной продукции. Волокнистый биокатализатор, содержащий иммобилизованную пенициллинамидазу, может найти применение при модернизации существующей технологии получения 6-аминопенициллановой кислоты за счет организации процесса гидролиза бензилпенициллина в аппаратах колонного типа.

Проведенные исследования позволили разработать ассортимент ферментсодержащих хирургических средств, обладающих выраженным лечебно-профилактическим действием: покрытия на рану, дренажи, шовные нити, использование которых в экспериментальной и клинической хирургии позволяет сократить сроки лечения ран и ожогов и уменьшить расход дорогостоящих ферментных препаратов.

Полимерное покрытие на рану "Терриплен", содержащее терри-литин, для которого были проведены все необходимые предклинические исследования и клинические испытания, был рекомендован Комитетом по новой медицинской технике МЗ РФ к производству и применению в качестве средства для лечения гнойных ран и ожогов.

Основные результаты работы внедрены на опытном заводе НПО "Химволокно", Охтинском НПО "Пластполимер", в учебном процессе

(курсы "Основы биотехнологии", "Полимерные материалы в медицине и биотехнологии") на кафедре технологии химических волокон МГТА.

На защиту выносятся:

а) научно-обоснованные принципы получения волокнистых и пленочных биокатализаторов из ферментсодержащих дисперсий, являющиеся основой создания нового поколения высокоэффективных полимерных материалов для биотехнологии и медицины;

б) совокупность установленных закономерностей и обобщений, позволяющая осуществить направленное регулирование свойств химических волокон и пленок, полученных из формовочных композиций, содержащих биологически активные белки;

в) разработанные методы модифицирования ферментов в процессе приготовления формовочных дисперсий.

Апробация работы. Основные положения диссертационной работы докладывались и обсуждались на Международных симпозиумах по химическим волокнам (Калинин, 1981 и 1990 гг.), Международных симпозиумах по контролируемому выделению биологически активных веществ (Бостон, 1995 г. и Стокгольм, 1997 г.), Международных конференциях "Современные подходы к разработке эффективных перевязочных средств, шовных материалов и полимерных имплантантов" (Москва, 1992, 1995 и 1998 гг.), Международном хирургическом конгрессе (Тель-Авив, 1994 г.), Международной научно-технической конференции "Актуальные проблемы химии и химической технологии" (Иваново, 1997 г.), Корейско-Российском семинаре по химической технологии (Москва, 1997 г.), Всесоюзных симпозиумах по получению и применению иммобилизованных ферментов (Ленинград, 1980 г., Киев, 1983 г., Кобулетти, 1985 г., Москва, 1991 г., Суздаль, 1995 г.), Менделеевском съезде по общей и прикладной химии (Ташкент, 1989 г.), Всесоюзном симпозиуме "Синтетические полимеры медицинского назначения" (Алма-Ата, 1983 г.), Всесоюзном симпозиуме по медицинской энзимологии (Астрахань, 1979 г.), Всесоюзном симпозиуме "Методы получения высокоочищенных ферментов" (Вильнюс, 1978 г.), Всесоюзных совещаниях "Химия и технология производных целлюлозы" (Владимир, 1980 г., Суздаль, 1990 г.),

Всесоюзном совещании "Биологически активные вещества гидробионтов - новые лекарственные препараты" (Владивосток, 1991 г.), Всесоюзной конференции "Проблемы модификации природных и синтетических во-локнообразующих полимеров" (Москва, 1991 г.), Межреспубликанской научно-технической конференции "Интенсификация процессов химической и пищевой технологии" (Ташкент, 1993 г.), Всероссийской конференции "Современные достижения биотехнологии" (Ставрополь, 1996 г.), Конгрессе химиков-текстильщиков и колористов (Иваново, 1996 г.), Симпозиуме по химии протеолитических ферментов (Москва, 1997 г.), Всероссийской научно-технической конференции "Современные технологии текстильной промышленности" (Москва, 1997 г.), Международной конференции "Биокатализ-98" (Пущино, 1998 г.).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 77 научных работ, получено 15 авторских свидетельств СССР и патентов РФ.

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, восьми глав, выводов, списка литературы (286 наименований) и приложений, включающих акты об испытаниях и другую научно-техническую документацию.

Во введении дана общая характеристика работы, обоснована актуальность научного направления, поставлена цель исследования. Первая глава посвящена рассмотрению состояния проблемы разработки волокон и пленок, содержащих иммобилизованные ферменты. Анализ перспектив использования различных методов получения волокнистых и пленочных биокатализаторов позволил сформулировать основные задачи исследования.

Во второй главе на основании изучения иммобилизации в структуре волокон и пленок нативных и модифицированных ферментов показана возможность модифицирования фермента в формовочной дисперсии и обоснована целесообразность выбора в качестве модифицирующего реагента глутарового альдегида. В третьей главе представлены результаты исследования кинетики реакции взаимодействия аминогрупп белка с глу-таровым альдегидом и сопровождающих ее процессов структурирования и инактивации фермента. Данные, полученные при изучении реологиче-

ских свойств белоксодержащих дисперсий на основе растворов триацетата целлюлозы в метиленхлориде на разных стадиях их получения, приведены в четвертой главе. Пятая глава посвящена обсуждению роли белок-содержащей дисперсной фазы при формировании структуры волокнистого биокатализатора и возможностей направленного изменения ее параметров. В шестой главе рассмотрены особенности кинетики реакций гидролиза специфических субстратов с использованием ферментов, включенных в структуру триацетатного волокна. Седьмая и восьмая главы посвящены разработке волокнистых биокатализаторов для биотехнологических процессов и волокнистых и пленочных материалов с протеоли-тической активностью для хирургии.

Основной текст диссертации изложен на 276 страницах, включая 64 рисунка и 58 таблиц.

Работа выполнена на кафедре технологии химических волокон Московской государственной текстильной академии в рамках совместных исследований с кафедрой химической энзимологии МГУ, Всероссийским научно-исследовательским институтом полимерных волокон, Научно-исследовательским институтом антибиотиков, Охтинским НПО "Пластполимер", Институтом элементоорганических соединений РАН, Московской медицинской академией имени И.М.Сеченова, Научно-исследовательским физико-химическим институтом имени А.Я.Карпова, Научно-исследовательским молочным институтом в соответствии с Координационными планами АН СССР, Комплексной целевой программой ОЦ 015, Государственной научно-технической программой "Новейшие методы биоинженерии" по направлению "Инженерная энзимология", Межвузовской научной программой "Университеты России".

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

АБ - альбумин

АЛ Г - альгиновая кислота

АТЭЭ - этиловый эфир Ы-ацетил-Ь-тирозина

БАЭЭ - этиловый эфир М-бензоил-Ь-аргинина

ВАЦ - вторичный ацетат целлюлозы

ВБК - волокнистый биокатализатор

ГА - глутаровый альдегид

ГЛ - р-галактозидаза

ГД - голубой декстран

И ПС - изопропиловый спирт

КМД - карбоксиметилдекстран

КМЦ - карбоксиметилцеллюлоза

МАС - межфазный адсорбционный слой

НФТМА - п-нитрофенилтриметилацетат

ОПИ - основной панкреатический ингибитор протеаз

ПА - пенициллинамидаза

ПААГ - полиакриламидный гель

ПВС - поливиниловый спирт

ПР-С - протеаза С

ПЭГ - полиэтиленгликоль

ТАЦ - триацетат целлюлозы

ТЕР -террилитин

ТР -трипсин

УБ - универсальный буфер

ХТР - химотрипсин

ЭЦ - этил целлюлоза

1. МЕТОДЫ ПОЛУЧЕНИЯ ВОЛОКОН И ПЛЕНОК, СОДЕРЖАЩИХ ИММОБИЛИЗОВАННЫЕ ФЕРМЕНТЫ

Для придания химическим волокнам специальных свойств, в том числе биологической активности, используются, в основном, три метода: химическое присоединение соответствующих соединений к волокну кова-лентными или ионными связями, физическая адсорбция на поверхности и включение в структуру волокон в процессе формования (введение препаратов в прядильные растворы или расплавы) [1-7]. Эти методы модификации свойств химических волокон могут быть использованы, и в ряде случаев уже эффективно используются, для получения волокнистых и пленочных материалов, обладающих ферментативной активностью [813].

В результате иммобилизации фермент должен сохранить каталитическую активность, которая определяется наличием в макромолекуле белка активного центра, состоящего из определенных функциональных групп, взаимное расположение которых поддерживается конформацией полипептидной цепи [14, 15]. Конформация макромолекулы белка зависит от степени ионизации основных и кислотных группировок, поэтому фермент находится в "активной" конформации в довольно узком интервале рН. Кроме того повышение температуры, ионной силы раствора, действие ряда растворителей, введение поверхностно-активных веществ может приводить к денатурации белка и необратимой потере активности [7]. Иными словами, ферменты - очень лабильные соединения, чувствительные к внешним воздействиям. Это составляет серьезную проблему, которая существенно ограничивает возможности методов модификации химических волокон применительно к задачам получения материалов с ферментативной активностью. Решение этой проблемы возможно только с учетом специфических свойств ферментов, то есть иммобилизация на волокне должна быть проведена в условиях, исключающих инактивацию

фермента. В этом смысле сам метод иммобилизации имеет значение только с точки зрения возможности сохранения ферментативной активности.

Наряду с общими подходами к получению ферментсодержащих волокон или пленок существуют особенности, определяемые конкретным назначением биокатализатора. Так, например, к полимерным материалам с протеолитической активностью, предназначенным для местного применения в хирургии, предъявляются требования биологической инертности, гидрофильности, адгезии к раневой поверхности и т.п. В то же время фиксация фермента в полимерном материале должна обеспечивать пролонгированное действие лекарственного вещества, что не исключает постепенного выделения фермента в раневую среду.

Использование волокнистых биокатализаторов в биотехнологических процессах, напротив, предполагает полное исключение десорбции фермента из носителя и загрязнения белком продуктов реакции. Кроме того, для эффективного и длительного катализа необходимо включение в состав волокна больших количеств фермента, который должен быть стабилизирован в "активной" конформации. Совершенно очевидно, что для получения волокнистых или пленочных биокатализаторов медицинского назначения или для целей гетерогенного биокатализа типы полимеров-носителей и методы получения ферментсодержащих материалов должны быть различными. То есть выбор способа придания волокну ферментативной активности определяется назначением разрабатываемого материала и, безусловно, свойствами ферментного препарата.

В этой главе проанализированы возможности существующих методов получения волокон и пленок, содержащих иммобилизованные ферменты, при разработке материалов различного назначения с использованием ферментов разных классов, осуществляющих катализ превращения соответствующих специфических субстратов.

1.1. ХИМИЧЕСКОЕ ПРИСОЕДИНЕНИЕ ФЕРМЕНТОВ К ВОЛОКНИСТЫМ МАТЕРИАЛАМ

В макромолекуле фермента, как и любого белка, содержится значительное количество аминогрупп, которые чаще всего и используются для присоединения к носителю ионными или ковалентными связями. Кроме того макромолекула белка содержит концевые карбоксильные группы, в составе остатков некоторых аминокислот полипептидной цепи группировки кислотного характера: сульфо-группы, сульфгидрильные группы и т.п. Изменяя рН реакционной среды выше или ниже изоэлектрической точки белка, можно изменять реакционную способность функциональных групп макромолекулы фермента и использовать носители, имеющие различные заместители.

Ферменты присоединяют к волокнам как ионными, так и ковалентными связями. Способ иммобилизации, основанный на присоединении ферментов ионными связями к нерастворимым в воде полимерам, в том числе и к волокнам, прост и в определенной степени имитирует естественные процессы, происходящие в клетках живого организма. Этот метод был использован для создания первой установки, где в качестве биокатализатора применялся иммобилизованный фермент [7]. Простота осуществления процесса присоединения к ионообменным волокнам, доступность и относительно невысокая стоимость сорбентов, сохранение в большинстве случаев ферментами достаточно высокой каталитической активности - факторы, определяющие широкое использование этого способа получения ферментсодержащих волокон [2, 5, 6, 8]. Недостаток этого метода иммобилизации ферментов заключается в том, что при изменении ионной силы раствора, его рН и концентрации субстрата фермент может десорбироваться с ионообменного волокна.

Иммобилизация ферментов путем присоединения к полимерам, в том числе и к волокнам, ковалентными связями является в настоящее

время одним из основных способов получения биокатализаторов [2, 5, 68, 10-13]. Биокатализатор, полученный при ковалентном присоединении фермента к полимеру, как правило, более стабилен, чем биокатализатор, полученный при фиксации фермента ионными связями, и изменение ионной силы и рН реакционной среды при эксплуатации не приводит к десорбции фермента из волокна. Однако этот метод иммобилизации, изменяя химическую структуру фермента, может в большой степени влиять и на его активность, так как, во-первых, в реакцию могут быть вовлечены аминокислотные остатки макромолекулы белка, участвующие в ферментном катализе, во-вторых, в результате иммобилизации может произойти существенное изменение конформации макромолекулы фермента. Присоединение ферментов к волокнистым материалам ковалентными связями с технологической точки зрения является более сложным процессом, чем ионное присоединение.

Как известно, волокна не содержат значительного количества реак-ционноспособных групп, которые могут быть использованы для присоединения белка, поэтому чтобы использовать волокно в качестве носителя для иммобилизованного фермента, его необходимо модифицировать.

Следует отметить, что в научной и патентной литературе описано присоединение ферментов разных классов химическими связями к волокнистым материалам, содержащим различные типы реакционноспособ-ных функциональных групп [3, 6]. В исследованиях, проведенных в Ленинградском институте технологии и дизайна, для присоединения ферментов были использованы волокна из поливинилового спирта, солей альгиновой кислоты, гидратцеллюлозы, поликапроамида и коллагена.

Для получения волокон-носителей, предназначенных для присоединения ферментов за счет ионных или ковалентных связей, были разработаны методы модификации волокон [2, 14-34]. Характеристика волокон-носителей приведена в таблице 1. В работе [35] установлено, что модифицирование волокон происходит, в основном, в аморфных участках во-

локна и приводит к его дополнительной аморфизации. Соответственно в аморфных областях волокна и присоединяются ферменты.

В результате исследования влияния различных факторов (рН среды, концентрации ферментов в растворе, продолжительности и температуры обработки) были выявлены условия получения ферментсодержащих волокон, позволяющие максимально сохранить активность присоединенных ферментов (таблица 2). Наиболее существенное влияние на относительную активность оказывают рН среды: максимальное сохранение протеолитической активности ферментов на указанных волокнах-носителях наблюдалось при проведении реакции при рН, близком к оптимуму рН действия нативных протеолитических ферментов. По мнению авторов указанных работ, в этом случае макромолекулы ферментов фиксируются на волокне в определенной оптимальной конформации, которая наиболее выгодна для взаимодействия фермента с субстратом на волокне.

Выбор температуры процесса модифицирования обусловлен необходимостью максимального сохранения активности и предотвращения инактивации в результате автолиза протеолитических ферментов.

При изучении взаимодействия волокнистых катионитов в протеа-зами было показано, что ионообменное равновесие для всех типов волокон устанавливается в течение 1-3 часов.

Процесс иммобилизации протеолитических ферментов на ионообменных волокнах благодаря высокой скорости реакции, в отличие от иммобилизации на гранулированных ионитах, не сопровождается автолизом фермента в растворе, и снижение активности фермента при присоединении к волокну зависит только от способа фиксации фермента и его пространственного расположения на полимерном материале [27].

Заключение диссертации по теме «Технология химических волокон и пленок», Кильдеева, Наталия Рустемовна

ВЫВОДЫ

На основании результатов комплексного исследования процесса модифицирования ферментов в водном растворе и в формовочной дисперсии, данных изучения реологических свойств белоксодержащих дисперсий на основе растворов ТАЦ в метиленхлориде, установленных закономерностей формирования структуры триацетатного волокна в присутствии белоксодержащей дисперсной фазы и выявленных особенностей кинетики гетерогенного биокатализа с использованием ВБК разработаны научные основы технологии получения волокнистых и пленочных биокатализаторов из белоксодержащих дисперсий.

1. Предложен и реализован принципиально новый подход к решению задачи получения волокнистых и пленочных биокатализаторов, основанный на модифицировании ферментов в процессе включения в структуру полимерного, материала, обеспечивающий придание им комплекса свойств для эффективного использования в качестве гетерогенных биокатализаторов или изделий медицинского назначения.

2. Установлена взаимосвязь основных параметров процессов, протекающих при модифицировании фермента глутаровым альдегидом (взаимодействия белка с глутаровым альдегидом, инактивация фермента в результате реакции и структурирования в системе белок-глутаровый альдегид). Предложено уравнение, описывающее инактивацию фермента в процессе взаимодействия с глутаровым альдегидом.

3. С учетом выявленных особенностей реологического поведения белоксодержащих дисперсных систем с высокой степенью наполнения и кинетики формирования межфазных адсорбционных слоев на границе водный раствор белка - раствор триацетата целлюлозы в метиленхлориде сформулированы представления о механизме структурообразования на границе раздела фаз формовочной дисперсии.

4. Установлена количественная взаимосвязь основных характеристик дисперсий, используемых для получения ВБК - вязкости дисперсионной среды (раствора ТАЦ в метиленхлориде), объемной доли дисперсной фазы (раствора фермента) и вязкости дисперсии перед модифицированием, позволяющая решить технологическую задачу определения условий приготовления формовочной дисперсии, обеспечивающих коалес-ценцию диспергированных растворов модификатора и фермента и достижение степени превращения аминогрупп белка, необходимой для стабилизации фермента и исключения его десорбции из волокна.

5. Выявлена роль частиц ферментсодержащей дисперсной фазы в процессе формирования пористой структуры ВБК как дополнительных центров структурообразования, ускоряющих распад системы на фазы. Показано, что в результате формирования по мокрому способу триацетатных волокон, содержащих иммобилизованные белки, образуется структура, характеризующаяся наличием переходных и макропор, параметры которой определяются адсорбционными взаимодействиями на границе раздела фаз формовочной дисперсии и скоростью распада системы на фазы. Разработаны способы направленного регулирования структуры ВБК путем изменения объемной доли дисперсной фазы, состава межфазного адсорбционного слоя, скорости фазового распада и введения полимера-порообразователя.

6. Определены пути снижения влияния диффузионных затруднений на кинетику гетерогенного биокатализа с использованием ферментов, включенных в структуру волокна. Реализован подход, позволяющий с использованием диффузионных модулей прогнозировать эффективность иммобилизации в структуре волокна, полученного в заданных условиях, ферментов с известными каталитическими свойствами.

7. Разработан метод и основные технологические параметры процесса получения ВБК на основе триацетата целлюлозы, в структуру которых включены модифицированные ферменты. Режимы получения ВБК проверены при выпуске в цехе №5 опытного завода НПО "Химволокно" опытных партий ВБК, содержащих иммобилизованные ферменты пени-циллинамидазу и (З-галактозидазу. Показана возможность применения разработанных ВБК для гидролиза бензилпенициллина и лактозы в молочной сыворотке.

8. Показана возможность направленного воздействия на структуру волокнистых и пленочных биокатализаторов и диффузионные характеристики биологически активных белков при включении ферментов в структуру волокон и пленок в процессе их формования, позволяющие в широких пределах регулировать фармакодинамические свойства фер-ментсодержащих материалов медицинского назначения.

Автор выражает благодарность научному консультанту профессору Л.С.Гальбрайху и профессору А.Д.Вирнику за большую помощь и внимание, оказанные при выполнении и оформлении диссертационной работы, а также признательность д.х.н. Н.Ф.Казанской и д.х.н. Н.И.Ларионовой за консультации и плодотворное сотрудничество.

Список литературы диссертационного исследования доктор химических наук Кильдеева, Наталия Рустемовна, 1998 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Роговин З.А., Гальбрайх Л.С. Химические превращения и модификация целлюлозы.- М.: Химия, 1979. - 208 с.

2. Вольф Л.А., Емец Л.В., Костров Ю.А. и др. Волокна с особыми свойствами.- М.: Химия, 1980. - 240 с.

3. Вирник А.Д. Биологически активные производные целлюлозы.// Успехи химии,- 1983.- Т.42,- Вып.З.- С.547-567.

4. Котецкий В.В. Исследование в области получения волокон со специальными свойствами для медицины и медицинской техники: Автореф. Дисс. ... докт.техн.наук,- Л., 1975,- 59 с.

5. Вирник А.Д. Химия медицинских волокон и тканей: успехи и проблемы.// Журн.Всесоюзн.хим.общ-ва им.Д.И.Менделеева.- 1985.- Т.30,-№4.- С.447-454.

6. Вольф Л.А. Модификация и проблемы создания волокон медицинского назначения.// Препринты Междунар.симп. по хим.волокнам.- Калинин, 1974,- Т.4.-С.133-141.

7. Иммобилизованные ферменты / Под ред.Березина И.В., Антонова В.К., Мартинека К,- М.: МГУ, 1976,- Т.1.- 294 с.

8. Вольф Л.А. Итоги работы кафедры технологии химических волокон ЛИТЛП им.С.М.Кирова за 1981-1985 г.г. и перспективы на двенадцатую пятилетку.// Хим.волокна.- 1987.-№1,- С. 13-16.

9. Вирник А.Д., Кильдеева Н.Р., Красовская С.Б. Научные и технологические основы создания и применения волокон-биокатализаторов.// Хим.волокна,- 1994,- №5.- С.28-36.

10. Инженерная энзимология и биоорганический катализ./Под ред. Кре-товича В.Л., Березина И.В. Итоги науки и техники. Биологическая химия,- М.: ВИНИТИ АН СССР, 1978,- Т.12,- 297 с.

11. Введение в прикладную энзимологию./ Под ред.Березина И.В., Мартинека К,- М.: МГУ, 1982,- 382 с.

12. Химическая энзимология./ Под ред.Березина И.В., Мартинека К.- М.: МГУ, 1983.- 278 с.

13. Коршак В.В., Штильман М.И. Полимеры в процесосах иммобилизации и модификации природных соединений.- М.: Наука, 1984.- 261 с.

14. Жоли М. Физическая химия и денатурация белка.- М.: Мир, 1968.486 с.

15. Попов Е.М. Проблемы белка.- М.: Наука, 1997,- Т.З.- 395 с.

16. Хорунжина С.И., Хохлова В.А., Котецкий В.В. и др. К вопросу получения ферментсодержащих волокон.// Промышл.хим.волокон. -1975.-№2,- С.36-38.

17. Хорунжина С.П., Хохлова В.А., Котецкий В.В. и др. Исследование процесса сорбции трипсина карбоксилсодержащими поливинилспир-товыми волокнами.//Журн.прикл.химии.- 1977.-№1.- С.195, 196.

18. Хорунжина С.И., Шамолина И.И., Хохлова В.А., Вольф Л.А. Иммобилизация папаина на волокнистом полимере из поливинилового спирта.// Прикл.биохим. и микробиол.- 1978.-Т. 12,-№1.-С. 11-14.

19. Вольф Л.А., Шамолина И.И., Хохлова В.А. Получение, свойства и применение волокон с ферментативной активностью.// Хим.волокна.-1979.- №4.- С.3-8.

20. Гончарова H.A., Гаврилова В.П., Шамолина И.И. и др. Волокнистые носители с привитой полиакриловой кислотой и ее эфирами для иммобилизации тромболитического фермента.// Тезисы докл. IV Всесо-юзн.науч.симп. "Синтетические полимеры медицинского назначения".- Дзержинск, 1979.- С.47-48.

21. Любич Л.С., Власов Г.П., Вольф Л.А. Иммобилизация папаина на вискозных и капроновых волокнах.// Хим.волокна.- 1979.- №5,- С.32-33.

22. Вольф Л.А., Раманаускас Р.И., Хохлова В.А. и др. Иммобилизация сычужного фермента на ионообменных волокнах.// Тезисы докл. III Всесоюзн.науч.симп. "Получение и применение иммобилизованных ферментов в научных исследованиях, промышленности и медицине".-Л., 1980.-С.229.

23. Степанова Л.С., Кудрявцева Т.В., Шамолина И.И. и др. Использование ферментсодержащих волокон в терапевтической стоматологии.// Там же. - С.230.

24. Гаврилова В.П., Федорова JI.H., Степанова JI.C. и др. Изучение стабильности ферментов, иммобилизованных в альгинатном волокне.// Там же.- С.232.

25. Вольф JI.A., Хохлова В.Н. Ферментоактивные волокна для пищевой промышленности и медицины.// В сб.: Получение и применение волокон со специфическими свойствами.- Мытищи: ВНИИВПроект, 1980.-С.98-101.

26. Хохлова В.А., Шамолина И.И., Калинина Т.Н. и др. Некоторые аспекты получения и использования ферментсодержащих волокон.// Препринты Ш Междунар.сипм. по хим.волокнам,- Калинин, 1981,-Т.5.- С.209-215.

27. Степанова Л.С. Разработка методов иммобилизации ферментов на химических волокнах и исследование свойств иммобилизованных ферментов.// Автореф.дисс. ... канд.техн.наук,- Л., 1979,- 24 с.

28. Любич Л.С., Власов Т.П., Вольф Л.А. Влияние медиаторов на свойства препаратов трипсина и пепсина, иммобилизованных на вискозном волокне.// Прикл.биохим. и микробиол,- 1980.- Т. 16.- №2.-С.218-221.

29. Степанова Л.С., Гаврилова В.П., Федорова Л.Н. и др. Стабильность протеолитических ферментов, связанных с ионообменными волокнами.// В кн.: Волокна, волокнистые и пленочные материалы со спе-цальными свойствами.- Черкассы, 1982.- Деп.в ОНИИТЭХим, №925ХП-Д82.

30. Горохова C.B., Свердлова Н.И., Хохлова В.А. Исследование процесса иммобилизации пепсина на карбоксилсодержащих поливинилепирто-вых волокнах марки КПАК-А методом математического планирования эксперимента,- Там же.

31. Любич Л.С., Власов Г.П. Полимерные материалы, содержащие ферменты протеолитического действия.// Тезисы докл.IV Всесоюзн.симп. "Синтетические полимеры медицинского назначения".- Алма-Ата, 1983,- С.172-173.

32. Любич Л.С., Власов Г.П., Вольф Л.А. Изучение стабильности и кинетических параметров трипсина и папаина, иммобилизованных на во-

локнах различной природы.// Тезисы доклЛУ Всесоюзн.симп. "Инженерная энзимология".- Киев, 1983.- Ч.2.- С.98.

33. Штягина Л.М., Спесивцев Ю.А., Кутушев Ф.Х. и др. Иммобилизованная галуронидаза для лечения больных острым гнойным лактационным маститом.// Там же.- С. 102.

34. Вольф Л.А., Гончарова H.A., Лобова А.Б., Шамолина И.И. и др. Иммобилизация ферментов на волокнистых носителях.// Прикл.биохим. и микробиол.- 1986,- Т.22,- №5,- С.664-668.

35. Любич Л.С. Иммобилизация трипсина и папаина на волокнах различной природы и исследование свойств модифицированных ферментов.// Автореф.дисс. ... канд.хим.наук.- Л., 1982,- 22 с.

36. Варфоломеев С.Д., Судьина Г.Ф. Кинетика реакций с иммобилизованными ферментами.// Итоги науки и техники. Сер.Биотехнология.-М.: ВИНИТИ АН СССР, 1986,- Т.5.- С.87-133.

37. Власов Л.Г., Стурчак C.B., Самойлова Т.И. и др. Получение производных целлюлозы, обладающих биологической активностью.// Тезисы докл. V Всесоюзн.конф. по химии и физике целлюлозы,- Ташкент, 1982.- Т.2.- С.43, 44.

38. Власов Л.Г. Влияние физической формы целлюлозной матрицы на процессы ее химических превращений.// Там же,- С.45, 46.

39. Власов Л.Г., Вирник Р.Б., Рыльцев В.В. и др. Исследование иммобилизации трипсина на текстильных материалах разной структуры с целью получения изделий медицинского назначения.// Тезисы докл. V Всесоюзн.симп. "Инженерная энзимология",- Киев, 1983.- Ч.2.- С.63.

40. Рыльцев В.В., Власов Л.Г. Кинетика обратимой инактивации иммобилизованного на диальдегидцеллюлозе трипсина при дегидратации.// Там же.- С.65.

41. Белов A.A., Игнатюк Т.Е., Ларионова Н.И., Казанская Н.Ф. Взаимодействие растворов трипсина с текстильными материалами, содержащими поливалентный ингибитор протеиназ.// В сб.: Исследования в области создания текстильных изделий медицинского назначения.-М.: ЦНИИТЭИЛегпром, 1991,- С.36-41.

42. Белов А.А., Рыльцев В.В. рН-Зависимость активности трипсина, иммобилизованного на диальдегидцеллюлозе.// В сб.: Исследования в области создания изделий медицинского назначения,- М.: ЦНИИТ-ЭИЛегпром, 1989.- С.50-54.

43. Власов Л.Г., Вирник Р.Б. Изучение рассасывающихся текстильных материалов с иммобилизованными ферментами.// Прикл.биохим. и микробиол,- 1988,- Т.24,- №2,- С.264-267.

44. Водолазская Л.В., Скокова И.Ф., Вирник А.Д. Получение целлюлозных волокон различных типов, содержащих иммобилизованный фермент аминоацилазу.// Тезисы докл. V Всесоюзн.конф. по химии и физике целлюлозы.- Ташкент, 1982,- Т.2.- С.49.

45. Водолазская Л.В., Скокова И.Ф., Вирник А.Д. Получение биокатализатора, содержащего иммобилизованный фермент аминоацилазу, с высокой активностью и стабильностью.// Изв.ВУЗов. Химия и хим.технология.- 1983,- №2.- С.259-260.

46. Вирник А.Д., Скокова И.Ф., Водолазская Л.В. и др. Влияние метода иммобилизации аминоацилазы в волокнистом материале на свойства биокатализатора.// Тез .докл. IV Всесоюзн.симп. "Инженерная энзи-мология",- Киев, 1983. - Ч.2.- С.59.

47. Водолазская Л.В., Скокова И.Ф., Вирник А.Д. Получение модифицированных целлюлозных волокон, содержащих химически связанный фермент аминоацилазу. - Черкассы, 1982.- Деп. В ОНИИТЭИХим №24ХП-Д82.

48. Водолазская Л.В., Скокова И.Ф., Вирник А.Д. Получение модифицированных волокон, содержащих иммобилизованный фермент аминоацилазу.//Хим.волокна.- 1983.- №2,- С.47.

49. Иванова М.В., Костанова Е.А., Высоцкая Е.П. Исследование иммобилизации трипсина и лизоцима на привитом сополимере целлюлозы и полиакриловой кислоты.// Прикл.биохим. и микробиол.- 1992.-Т.28,- №5,- С.703-710.

50. Virnik A.D., Skokova I.F., Yudanova T.N., Ivanova M.V., Khomyakov K.P., Visotskaya E.P., Kostanova E.A., Rozenfeld M.A. Immobilization

of enzymes on grapted cellulose copolymers containing ionizable groups.// Cellulose Chem. Technol.- 1993,- V.27.- №5.- P.477-488.

51. Вирник А.Д., Скокова И.Ф., Юданова Т.Н., Хомяков К.П., Иванова М.В., Седов А.В., Толстых П.И., Гостищев В.К., Арутюнян Б.Н. Получение волокнистых материалов, содержащих одновременно иммобилизованный протеолитический фермент и антимикробное вещество, и исследование их свойств.// Прикл.биохим. и микробиол.-1996.- Т.32.- №6,- С.615-619.

52. Вирник А.Д., Скокова И.Ф., Иванова М.В., Юданова Т.Н. Интерпо-лиэлектролитная реакция - метод получения ферментсодержащих волокнистых материалов с регулируемым составом и свойствами.// Текстильная химия,- 1994.- №1(5).- С.5-20.

53. Скокова И.Ф., Юданова Т.Н., Вирник А.Д. Исследование иммобилизации протеолитических ферментов на привитых сополимерах целлюлозы различного.строения.// Прикл.биохим. и микробиол.- 1997.-Т.ЗЗ.- №1.- С.38-42.

54. Юданова Т.Н., Скокова И.Ф., Вирник А.Д. Получение ферментсодержащих целлюлозных волокнистых материалов на основе привитых сополимеров, содержащих сульфогруппы.// Хим.волокна.- 1997.-№1.- С.10-13.

55. Клибанов A.M., Самохин Т.П., Мартинек К. и др. Механохимия каталитических систем. Регулирование механическим воздействием активности а-химотрипсина, химически присоединенного к капроновой нити.//ДАН СССР.- 197,- Т. 18,- С.715-718.

56. Мартинек К., Клибанов A.M., Самохин Т.П. и др. Регулирование механическим воздействием каталитической активности ферментов, присоединенных к полимерной нити.// Тез.докл. симп. По физиологически активным синтетическим и другим полимерам медицинского назначения,- М., 1975,- С.34-36.

57. Бердникова Л.П., Зенгер В.Г., Власов Л.Г. Перспективы использования на текстильных матрицах ферментов в качестве лечебных препаратов.// Тез.докл. IV Всесоюзн.науч.симп. "Синтетические полимеры медицинского назначения",- Дзержинск, 1979,- С.22, 23.

58. Власов JI.Г., Бердникова Л.П., Зенгер В.Г. и др. Текстильные фер-ментсодержащие аппликации.// Тез.докл. III Всесоюзн.науч.симп. "Получение и применение иммобилизованных ферментов в научных исследованиях, промышленности и медицине".- Л., 1980.- С.219.

59. Onyezili F.N., Onitiri A.C. Immobilization of invertase on modified nylon tubes.//Anal.Biochem.- 1981,- V.113.- P.203-206.

60. Чупов B.B., Валуев Л.И., Платэ H.A. Использование иммобилизованных ферментов для повышения гемосовместимости полимерных материалов.// Тез.докл. Всесоюзн.симп. "Синтетические полимеры медицинского назначения".- Дзержинск, 1979,- С.32-33.

61. Платэ H.A., Валуев Л.И., Егоров Н.С., Альнури М.А. Ковалентное связывание ацилированного трипсина с полимерным носителем.// Прикл.биохим. и микробиол.- 1977,- Т. 13.- С.673-676.

62. Платэ H.A., Валуев Л.И., Чупов В.В. Влияние способов иммобилизации протеолитических ферментов в полимерных гидрогелях на гемо-совместимость модифицированных полимерных материалов.// Высо-комол.соед,- 1980,-Т.22А.-№9,-С. 1963-1971.

63. Платэ H.A. Модификация синтетических полимеров физиологически активными веществами.// Рефераты докл.и сообщ. XII Менделеевского съезда по общей и прикладной химии.- М., 1981.- Вып.2,- С. 178.

64. Платэ H.A., Валуев Л.И. Химия медико-биологических полимеров.// Природа.- 1981,- №6.-С.22.

65. Чупов В.В., Бурдыгина И.Ф., Валуев Л.И. Исследования гемосовместимости полимеров, модифицированных трипсином и гепарином.// Тез.докл. Всесоюзн.симп. "Инженерная энзимология",- Киев, 1983.-Ч.2.-С.10.

66. Klibanov A.M., Samochin G.P., Martinek К. et al. Mekhanochemistry of catalitic systems.// Biochem.Biophys.Acta.- 1976,- У.438,- P.l-12.

67. Вирник А.Д., Красовская С.Б., Кильдеева Н.Р. и др. Получение волокнистых материалов, содержащих иммобилизованные ферменты.// Промышленность химических волокон. Обзор.инф.- М.: НИИТЭХим, 1985.- 58 с.

68. Дебриков М.И., Тенетова Е.Д., Шишкин Г.В. Ковалентная иммобилизация белков на светочувствительных капроновых мембранах для твердофазного иммуноанализа.// Биотехнология.- 1991.- №1.- С.8-84.

69. Севастьянова Е.В., Давиденко Т.И. Иммобилизация протеолитиче-ских ферментов на угольных материалах.// Биотехнология,- 1991.-№1.- С.12-17.

70. Мишунин И.Ф., Бородинская И.Н. Влияние физико-химических свойств аминокислот и белков на процесс их иммобилизации на АЦВМ.// Тез.докл. Всесоюзн.конф. "Методы получения, анализа и применения ферментов",- Юрмала, 1990,- С.42.

71. Dinelli D. Fibre-entrapped enzymes.// Process Biochem.- 1972,- V.7.- P.9-12.

72. Dinelli D., Morisi F. Fibre entrapped enzymes.// Enzyme Eng.- 1974,- N.-Y.-London, Plenum Press.- Y.2.- P.293-301.

73. Dinelli D., Marconi W., Morisi F. Entrapped enzymes.// Enzymology. Y.l. Immobilized Enzymes, Antigents, Antibodies and Peptides: Preparation and Characterization/ed. Ho ward H.W.- N.-Y.- 1975.- P.171-243.

74. Marconi W., Cecere F., Morisi F., Delia P.G., Rappuoli B. Hydrolysis of penicillin G to 6-aminopenicillanic acid by entrapped penicillin acylase.// J.Antiboit.- 1973,- V.26.- P.228-232.

75. Маркони В. Промышленное применение свободных и иммобилизованных ферментов.// Успехи химии.- 1976,- Т.4.- №11.- С.2077-2092.

76. Dinelli D., Marconi W., Morisi F. Entrapped enzymes.// Methods Enzymol.- N.-Y.: Plenum Press.- 1976,- V.44.- P.746-758.

77. Grazi E., Trombetta G., Morisi F. Properties of free and immobilized sucrose phosforilase.// J.Mol.Catal., 1977,- V.2- P.453-458.

78. Marani Z., Bartoli F., Morisi F. Leakage of enzyme from cellulose triacetate fibers.//Chim.Ind.- 1977,- V.59.- №4.- P.243-247.

79. Marconi W. Immobilized enzymes.// Enzyme Eng.- 1978.-V.4,- P. 179-186.

80. Pat.735046 (Belgium). Fibres contenant des enzymes, leur procede de fabrication et leur emploidans les reactions enzymatiques / D.Dinelli, F.Cognigni.-1969.

81. Pat. 1932426 (Germany). Enzyme-containing fibres for catalysis of enzymic reactions./ D.Dinelli, F.Cognigni.-1969.

82. Dinelli D. Preparation and properties of immobilized enzymes.// Method Enzymol.- 1976.- V.44.- P.226-242.

83. Marconi W. Immobilized enzymes in nutritional applications.// Enzyme Eng.-1980.- №6.- P.465-483.

84. Pat. 1224947/ Improvement in relating to structures containing enzymic material (England)./ Snam.Progetti, SPA.- 1969.

85. Вирник А.Д., Красовская С.Б., Седов А.А., Кильдеева Н.Р., Булычева М.С., Ныс Н.С., Савицкая Е.М. Получение и применение химических волокон, содержащих иммобилизованные ферменты.// Препринты III Междунар.симп. по хим.волокнам,- Калинин, 1981.- Т.5,- С.200-207.

86. Кильдеева Н.Р., Казанская Н.Ф., Вирник А.Д. Иммобилизация в структуре волокон и пленок протеолитических ферментов.// Изв.ВУЗов. Химия и хим.технология.- 1979,- Т.22.- Вып.2,- С,225-229.

87. Седов А.А., Вирник А.Д., Яковлев В.А., Роговин З.А. Получение из вторичного ацетата целлюлозы волокна, содержащего иммобилизованный фермент уреазу.// Хим.волокна.- 1977,- №4.-С.39-40.

88. Седов А.А., Вирник А.Д. Исследование различных методов получения волокон, обладающих ферментативной активностью.// Препринты II Междунар.симп.по хим.волокна.- Калинин, 1977.- Т.4.- С. 157167.

89. Седов А.А., Вирник А.Д., Роговин З.А., Яковлев В.А. Получение триацетатного волокна, обладающего ферментативной активностью, путем введения в прядильный раствор.// Хим.волокна.- 1977,- №3.-С.54.

90. Marconi W., Gulinelli S., Morisi F. Properties and use of invertase entrapped in fibers.// Biotechnol. Bioeng.- 1974,- V.16.- P.501-511.

91. Zaffaroni P., Vitobello V., Cecere F., Giaconizzi E., Morisi F. Synthesis of L-triptophan from indole and D,L-seryne by triptophan synthetase entrapped in fibers.//Agr.Biol.Chem.- 1974.- V.38(7).- P. 1335-1349.

92. Marconi W., Gulinelli S., Morisi F. Fibre entrapped enzymes.// Insolubilized enzymes.- N.-Y.: Raven Press, 1974,- P.51-64.

93. Saronio С., Salmona M., Mussini E., Garattini S. Biochemical studies of some fibre entrapped enzymes.// Там же,- P. 143-195.

94. Pat.4004980 (USA). Enzyme entrappment with cellulose acetate formulations./A.Emery, H.Lim, M.Kolaric.-1977.

95. Pat.3947325 (USA). Preparation of high permeability Cellulose fibers containing enzymes./ D/Dinelli, F.Bartoly, S.Gulinelli.-1976/

96. Pat.4100029 (USA). Method for improving the activity of oxireductase enzymes embeded in filamentary structure./ G.Prosperi, W.Marconi, S.Giovenco, F.Morisi.- 1978.

97.Кильдеева H.P., Казанская Н.Ф., Вирник А.Д. Иммобилизация в структуре ацетатных волокон и пленок протеолитических ферментов.// Изв.ВУЗов. Химия и хим.технология,- 1989.-№2,- С.225-229.

98. Pat. 176580 (Hungria)./ Nagy М„ Horkay F.- 1978.

99. Zinko Y.-Y., Poiola L., Viskary R., Zinko M. A simple entrappment method for immobilizing enzymes within cellulose fibres.// FEBS Letters.-1976,- V.62.- №1.- P.77-80.

100. Пат.52-57392 (Япония). Фиксация ферментов с использованием в качестве носителя фиброина./ Мияри Сатио,- 1977.

101. Пат.52-57391 (Япония). Фиксация ферментов с использованием твердого кератина в качестве носителя./ Мияри Сатио, Кицукава Масаё-си,- 1978.

102. Пат.52-139777 (Япония.) Фиксация ферментов на полимерной пленке./ Такахара Хидзаки.- 1977.

103. Brown С., Tran-Minh С., Thomos D., Domurado D., Selegni E. The use of protein and enzymatic coating and/or membranes for cxygenators.// Am.Soc.Artif.Int.Organs.- 1971.- V.17.- P.341-347.

104. Rony P.R. Multiphase catalysis.II. Hollow fiber catalysts.// Biotechnol. Bioeng.- 1971,- V.13.- P.431-447.

105. Korus R.A., Olson A.C. The use of a-galactosidase and invertase in hollow fibre reactors.// Biotechnol. Bioeng.- 1977,- V.19.- P. 1-8.

106. Chambers R.P., Cohen W., Baricos W.H. Physical immobilisation of enzymes by hollow fibre membranes.// Methods Enzymol.- 1976.- У.44-. P.201-218.

107. Devis J.С. Kinetics studies in a continuous steady state hollow fibre membranes.//Biotechnol. Bioeng.- 1974.- У.16.-Ж1.- P.l 113-1122.

108. Rony P.R. Hollow fiber. Enzymes reactors.// J.Am.Chem.Soc.- 1972.-V.94.-№23.- P.8247-8248.

109. Fink D.J., Rodwells V.W. Kinetics of a hollow fiber dehydrogenase reactor.// Biotechnol. Bioeng.- 1975,- V. 17,- P. 1029-1050.

110. Pat.4266026 (USA). Catalytic process utilising hollow fiber membranes./ B.R.Breslau.-1981.

111. Клесов А.А. Инженерная энзимология на промышленном уровне./ Биотехнология. Итоги науки и техники,- М.: ВИНИТИ АН СССР, 1989,-Т.18,- 184 с.

112. Березин И.В., Клесов А.А., Швядас В.К. Инженерная энзимология.-М.: Высшая школа, 1987,- 143 с.

113. Клесов А.А. Инженерная энзимология - успехи и уроки.// Антибиотики и мед.биотехнол.- 1986,- Т.2.- С.89-93.

114. Кестнер А.И. Гетерофазный биокатализ - цели и способы производства биохимических реактивов.// Тез.докл.Всесоюз.конф. "Методы получения, анализа и применения ферментов",- Юрмала, 1990.-С .115.

115. Ларионова Н.И., Торчилин В.П. Современное состояние и перспективы использования в медицине иммобилизованных биологически активных веществ белковой природы.// Хим.-фарм.журнал.- 1980.-Т.14,- №4.- С.21-36.

116. Kazanskaya N.F., Larionova N.I., Aisina R.B., Berezin I.У. Prolonged and targeted protein drugs.// Enzyme.-1987,- V.38.- №1,- P.36-39.

117. Торчилин В.П. Иммобилизованные ферменты в медицине. Аналитический обзор.- М.: ВИНИТИ, 1985,- 97 с.

118. Бартошевич Ю.Е., Ныс П.С., Швядас В.К., Навашин С.Н. Современное состояние и перспективы биокатализа в получении |3-лактамных антибиотиков.// Антибиотики и мед.биотехнол.- 1986.-№2,- С.98-104.

119. Pastore M., Morici F. Reduction of lactose in milk by entrapped ß-galactosidase.IV. Results of long term experiments with pilot plant.// Enzyne Eng.- 1975,- V.3.- P.537-542.

120. Morici F., Pastore M. Reduction of lactose of ß-galactosidase. I. Characteristics of ß-galactosidase from yeast and eacherihia coli.// J.Dairy Sei.- 1973,- V.56.- №9.- P.l 123-1127.

121. Pastore M., Morici F. Reduction of lactose in milk by entrapped ß-galactosidase. II. //J.Dairy Sei.- 1974,- V.57.- P.269-272.

122. Pastore M., Morici F., Zaccardelli D. Reduction of lactose in milk by entrapped ß-galactosidase.// Insolubilized Enzyme (M.Salmona, C,Saronio, Zarattini, eds.).- N.Y.-Rawen Press, 1974,- P.211-216.

123. naT.2303872 (Germany). Verfahren zur herstellung von fructose, sowie fructose and glucose./ D.Dinelli, F.Morisi, S.Giovenco, P.Pansolli.- 1973.

124. Giovenco S., Morisi F., Pansolli P. Properties of free and immobolized glucouse isomerase.// FEBS Letters.- 1973,- V.36.- P.57-60.

125. Marconi W., Bartoli F., Cecere F., Morisi F. Synthesis of penicillins and cephalosporins by penicillin acylase entrapped in fibers.// Agr.Biol.Chem.-1975,- V.39(l).- P.277-279.

126. Giacobbe F., Laconna A., Cecere F. Production of 6-APA in penicilline G fermentation plant by fiber- entrapped acylase.// Enzyme Eng.- 1978.-V.4.- P.245-252.

127. Pat.2134530 (France). Manufacture of semisynthetic penicillins by insoluble acylase./D.Dinelli, F.Morisi.- 1973.

128. Dinelli D., Marconi W., Cecere F., Galli G. A new method for the production of optically active aminoasids.// Enzyme Eng.- 1975,- V.3.-P.477-481.

129. Marconi W., Morici F., Mosti R. Properties and continuous use of microbial fumarase entrapped in fibers.// Agr.Biol.Chem.- 1975,- V.39.-№6,- P. 1323-1324.

130. Bartoli F., Bianci G., Zaccardelli D. Production of L-tryptophan. // Enzyme Eng.- 1978,- V.4.- P.279-280.

131. Laffaroni P., Vitohello V., Cecere F., Giacomozzi E., Morisi F. Synthesis of L-triptophan from indole and D,L-serine of L-triptophan synthetase entrapped in fibers.// Agr.Biol.Chem.- 1974,- V.38.- №7,- P. 1335-1349.

132. Marconi W., Gulinelli S., Morisi F. Properties and use of invertase entrapped in fibers.// Biotechnol. Bioeng.- 1974,- V.16.- P.501-511.

133. Волгин В.Д., Волкова Л.H., Чичков C.B. Очистка воды от мочевины с помощью иммобилизованной уреазы.// Тез.докл. I Всесоюз.конф. "Микробиологическая очистка воды",- Киев, 1982,- С.528, 529.

134. Гусарова Л.А., Гаврилова В.П., Шамолина И.И. Очистка сточных вод гидролизно-дрожжевого производства иммобилизованной по-лифеноксидазой.// Биотехнология.- 1989,- Т.5,- №5,- С.627-629.

135. Никовская Г.Н., Гвоздяк П.И., Шамолина И.И., Ставская С.С., Лобова А. Б. Иммобилизация деструктора бензолсульфонатов Pseudomous alcaligenes TS на синтетических волокнах.// Биотехнология,- 1990,- Т.6.- №2,- С.627-629.

136. Березина Н.П., Кононенко H.A., Ивина О.П., Витульская Н.В., Шамолина И.А. Исследование ферментативного разложения карбамида с помощью иммобилизованной уреазы.// ЖПХ,- 1990,- Т.63,- №2,-С.395-399.

137. Балин В.Н., Мадай Д.Ю., Шамолина И.И., Замыслова Т.И., Чуфа-ровская Т.И. Лечение гнойных ран различной локализации в условиях регулируемой активности раневых энзимов.// Нижегородский медицинский жунрал.- 1992,- №4,- С. 13-16.

138. Скокова И.Ф., Водолазская Л.В., Бирюков В.В. Иммобилизация модифицированной аминоацилазы в структуре волокна из триацетата целлюлозы.// Тезисы докл. IV Всесоюз.симп. "Инженерная энзимо-логия".- Киев, 1983,- Ч.2.- С,60.

139. Водолазская Л.В. Получение волокон и пленок, содержащих иммобилизованный фермент аминоацилазу.// Автореф.дисс. канд.техн.наук.- М., 1983,- 24 с.

140. Вольф Л.А., Шамолина И.И., Гончарова H.A., Лобова А.Б., Гаврилова В.П. Иммобилизация ферментов на волокнистых носителях.// Прикл.биохим.и микробиол.- 1986,- Т.22,- №5,- С.664-668.

141. Казанская Н.Ф., Ларионова Н.И., Кильдеева Н.Р., Сахаров И.Ю. Получение высокоочищенных модифицированных препаратов про-теолитических ферментов и панкреатического ингибитора трипсина с целью использования в медицинской практике.// Тез.докл. Всесо-юз.симп. "Методы получения высокоочищенных ферментов",- Вильнюс, 1978.- С.75-76.

142. Кильдеева Н.Р., Вирник А.Д., Толстых Л.И. и др. Дренирующий материал.// АС № 700138 (СССР).- 1979 (не публ.).

143. Гостищев В.К., Толстых П.И., Васильева З.Ф. и др. Полимерная композиция.// АС № 835140 (СССР).- 1990 (не публ.).

144. Современные подходы к разработке эффективных перевязочных средств и полимерных инплантантов.// Материалы I Муждуна-род.конф. -М., 1992.- Ч.1.- С.13-159.

145. Современные подходы к разработке эффективных средств, шовных материалов и полимерных имплантантов.// Материалы II Между -нар.конф,- М., 1995,- Ч.1.- С.21-172.

146. Глянцев С.П. Разработка современных ферментсодержащих перевязочных средств и совершенствование методов их применения в комплексном лечении гнойных ран.// Автореф.дисс. ... докт.мед.наук,-М„ 1993.-41 с.

147. Адомян A.A., Глянцев С.П. Пролонгированная многокомпонентная энзимотерапия - развивающееся направление в комплексном лечении гнойных ран.//Хирургия,- 1992,- №7-8,- С.105-114.

148. Вольф Л.А. Химические волокна медицинского назначения.// Тез.докл. V Всесоюз.симп. "Синтетические полимеры медицинского назначения".- Алма-Ата, 1983,- С. 173.

149. Толстых П.И., Гостищев В.К., Арутюнян Б.Н., Вирник А.Д., Берчен-ко Г.Н. // Протеолитические ферменты, иммобилизованные на волокнистых носителях, в хирургии,- Ереван: Айстан, 1990,- 92 с.

150. Удод В.М., Андрунь П.К., Лобова А.Б., Шамолина И.И. Применение перевязочных материалов с иммобилизованным папаином.// Клиническая хирургия,- 1989,- №1.- С.50-51.

151. Сторожук В.Т., Лобова А.Б., Шамолина И.И. Иммобилизованный папаин в лечении острого деструктивного лактационного мастита.// Вестник хирургии,- 1985,- Т.135.- №10,- С.42-46.

152. Ковман Г.Я., Ляшенко Ю.В., Рабинович Э.З., Флейдерман Л.И. Гидроколлоидные покрытия - новое поколение средств для лечения ран и ожогов.// Хим.фарм.журнал,- 1994,- Т.28,- №9,- С.21-27.

153. Лучевич Э.В., Иванян Л.А., Толстых Г.П., Олтаржевская Н.Д., Рыльцев В.В. Современные раневые покрытия.- М.-Смоленск, 1996.88 с.

154. Хромов Г.Л. Биорастворимые полимерные пленки в терапевтической стоматологии.// Тез.доклЛХ Всесоюз.симп. "Синтетические полимеры медицинского назначения".- Звенигород, 1990.- С.67.

155. Щетинин Б.В. Использование протеолитических ферментов, иммобилизованных на пленчатых материалах из поливинилового спирта в гнойной хирургии.// Там же.- С.77.

156. Комиссарова A.A., Якубович B.C., Толстых П.И., Скокова И.Ф., Вирник А.Д. Получение пористого материала на основе альгиновой кислоты, содержащей иммобилизованный террилитин.// Антибиотики и химиотерапия.- 1988.- №10.- С.735-739.

157. Скокова И.Ф., Юданова Т.Н. Полифункциональное полимерное покрытие пролонгированного действия, содержащее фермент гиалуро-нидазу.// Тез.докл. III Междунар.конф. "Современные подходы к разработке эффективных перевязочных средств, шовных материалов и полимерных имплантантов",- М., 1998,- С.88-89.

158. Вайнбург В.М., Виноградова Л.Е., Штягина Л.М. и др. Материал с высокой поглотительной способностью на основе поливинилового спирта.// Там же.- С.57-58.

159. Витульская Н.В. Получение и исследование синтетических волокон с включенными при формовании антимикробными и рентгенокон-трастными препаратами: Автореф.дисс. ... канд.техн.наук.-Л., 1971,24 с.

160. Красовская С.Б. Разработка методов получения антимикробных и рентгеноконтрастных волокон фторлон: Автореф.дис. канд.техн.наук.- М., 1977,- 22 с.

161. Полищук Б.О. Научное обоснование и разработка способов получения модифицированных эфироцеллюлозных волокон и пленок с комплексом улучшенных и специальных свойств.: Автореф.дис. ... докт.техн.наук.- М., 1995.- 42 с.

162. Попов Е.М. Проблемы белка,- М.: Наука, 1996,- Т.1.- 348 с.

163. Кочетов Г.А. Практическое руководство по энзимологии.- М.: Мир, 1971,- 352 с.

164. Schwert G.W., Takenake N.G. A spectrofotometric determination of trypsin and chymotrypsin.// Biochem.Biophys.Acta.- 1955.- V.16.- P.570-575.

165. Измайлова B.H., Ямпольская Г.П., Сумм Б.Д. Поверхностные явления в белковых системах.- М.: Химия, 1988.- 240 с.

166. Bender M.L., Kezdy E.J., Wedler F.G. a-Chymotrypsin: enzyme concentration and kinetics.// J.Chem.Education.- 1967.- V.44.- P.84-88.

167. Березин И.В., Варфоломеев С.Д. Биокатализ: История моделирования опыта живой природы.- М.: Наука, 1984.- 344 с.

168. Кушнер В.П. Конформационная устойчивость и денатурация биополимеров.- JL: Наука, 1977.- 307 с.

169. Полторак Д.М., Чухрай Е.С. Диссоциативная термоинактивация биокатализаторов.// Биотехнология. Итоги науки и техники.- М.: ВИНИТИ АН СССР, 1986,- Т.5.- С.50-84.

170. Мартинек К., Торчилин В.П. Основные принципы стабилизации ферменйз.// Биологическая химия. Итоги науки и техники.- М.: ВИНИТИ АН СССР, 1978.- Т.12,- С,17-48.

171. Berezin I.V., Ugarova N.N., Rozhkova C.D. Physico-chemical grounds of stabilization of soluble and immobilized enzymes.// J.Solid-Phase Biochem.- 1978,- Y.3.- P.l 19-131.

172. Березин И.В., Арене А.К., Куинс Ю.Ю. и др. Стабилизация ферментов путем подавления первичных обратимых стадий диссоциации и

денатурации нативных структур.// Доклады АН СССР.- 1985.-Т.283.-С.1212-1216.

173. Martinek К., Berezin I.V. General principles of enzyme stabilization.// J.Solid-Phase Biochem.- 1978,- V.2.- №4,- P.343-385.

174. Ларионова Н.И., Казанская Н.Ф., Сахаров И.Ю. Растворимые высокомолекулярные производные панкреатического ингибитора трипсина.// Биохимия,- 1973,- Т.43,- С.880-886.

175. Рабек Я. Экспериментальные методы химии полимеров: Пер./ под ред.Коршака В.В.- М.: Мир, 1983,- Т.1 и 2.

176. Слободянникова Л.С., Латов В.К., Беликов В.М. Иммобилизация протеаз Bacillus subtilis на сополимерах стирола с малеиновым ангидридом ковалентными и координационными связями.// Прикл » биохим. и микробиол.- 1979.- Т. 15,- №2.- С.262-268.

177. Васильева Р.П., Евтихов H.H., Богорад Г.В. Соотношение активностей протеиназы, полученных двумя способами измерения.// Микро-биол.пром.- 1976,- №4,- С.23-26.

178. Иммобилизованные клетки и ферменты. Методы./ Под ред. Дж.Вудворда,- М.: Мир, 1988,- 215 с.

179. Антонов В.К. Химия протеолиза,- М.: Наука, 1971,- 504 с.

180. Кестнер А.И., Крен М.И. Способ получения ферментов, иммобилизованных в структуре полимеризационных гелей. АС № 443902 (СССР).- 1977 (не публ.).

181. Седов A.A. Получение модифицированных ацетатных волокон и пленок, содержащих иммобилизованные ферменты уреазу и пени-циллинамидазу.- Дисс. ... канд.техн.наук.- М., 1980.- 166 с.

182. Morris E.R. Molecular interactions in Polysacharids Gelation.// British Polym.J.- 1986,- T.18.- Ж,- P.283-297.

183. Rees D.A. Structure conformation and mechanism in formation of polysacharide gels and networks./ In: "Advances in Carbohydrate С hem. and Biochem.- 1969.- V.24.- P.267-332 (ed.by M.L.Wolfrom and R.S.Tipson. Academic. N.-Y.).

184. Кузнецова Н.П., Самсонов Г.В. Кинетические исследования поликонденсации макромолекул биополимеров.// Высокомол.соед.- 1986.-Т.28(A).-№3.- С.643-648.

185. Кузнецова Н.П., Самсонов Г.В. Исследования поликонденсации макромолекул биополимеров.// Высокомол.соед.- 1985,- Т.27(A).-№2,- С.2611-2614.

186. Кузнецова Н.П., Кислин С.И., Волкова JI.A. и др. Поликонденсация биополимеров и морфология образующихся макромолекул.// Высокомол.соед.- 1989,- Т.31.- №7,- С.1539-1543.

187. Кузнецова Н.П., Гудкин Л.Р., Кольцова С.В. Особенности поликонденсации белков с глутаровым альдегидом.// Высокомол.соед.-1996,-Т.38 (А и Б).- №10,- С.1668-1673.

188. Кольцова С.В. Влияние электростатических взаимодействий на формирование и свойства растворимых гетеробелковых коньюгатов на основе протеолитических ферментов.// Биоорг.хим.- 1995,- Т.21.-№6.- С.408.

189. Валуев И.Л., Чупов В.В., Валуев Л.И., Платэ Н.А. О взаимодействии глобулярных белков с водорастворимыми карбодиимидами.// Прикл.биохим. и микробиол,- 1997,- Т.33,- №2,- С. 180-182.

190. Hopwood D.// Fixation in histochemistry./ Ed. Stoward P.J.- L.: Chaman and Hall, 1973,- P.47.

191. Acharya A.S., Suseman L.G., Manning J.M. Shift base adducts of glutaraldehyde with hemoglobin.// J.Biol.Chem.- 1983.- V.258.- №4,-P.2296-2302.

192. Fields R. The measurement of aminogroups in protein and peptides.// Biochem.J.- 1971.- Y. 124.- №3,- P.581 -590.

193. Корниш-Боуден Э. Основы ферментативной кинетики,- М.: Мир, 1979,- 280 с.

194. Frigeria N.A., Shaw M.Y. A simple method for determination of glutaraldehyde.//J.Histochem.Cytochem.- 1969,- V.17.- P. 176-181.

195. Полимерные смеси./ Под ред. Пола Д., Ньюмена С.- М.: Мир, 1981.-Т.1.- 550 с.

196. Полимерные смеси./ Под ред. Пола Д., Ньюмена С.- М.: Мир, 1981.-Т.2- 443 с.

197. Poul D.R. and Sperling L.H. Multicomponent polymer materials. -Washington: Amer.Chem.Soc., 1986,- 243 p.

198. Липатов Ю.С. Физико-химические основы наполнения полимеров.-М.: Химия, 1991,- 260 с.

199. Химические волокна, волокнистые и композиционные материалы технического назначения,- Сб.науч.трудов./ Под ред.О.И.На-чинкина, Г.И.Кузнецовой.- М.: НИИТЭХим, 1990,- 291 с.

200. Сигал М.Б., Козирова Т.Н. Синтетические волокна из дисперсий полимеров." М.: Химия, 1972.- 144 с.

201. Кулезнев В.Н. Смеси полимеров,- М.: Химия, 1980,- 304 с.

202. Воюцкий С.С. Курс коллоидной химии.- М.: Химия, 1976.- 512 с.

203. Эмульсии./ Под ред. Шермана Ф.- Л.: Химия, 1976.- 512 с.

204. Тагер A.A. Физико-химия полимеров.- М.: Химия, 1986.- 477 с.

205. Тагер A.A., Ботвинник Г.О. Активационные параметры вязкого течения и структура концентрированных растворов полимеров.// Вы-сокомол.соед.- 1974,- 16А,-№6,-С.1284-1288.

206. Ребиндер П.А. Поверхностные явления в дисперсных системах. Коллоидная химия. Избранные труды.- М.: Наука, 1978,- Т.1.- 366 с.

207. Ребиндер П.А. Поверхностные явления в дисперсных системах. Физико-химическая механика. Избранные труды.- М.: Наука, 1979.-Т.2.- 381 с.

208. Белки и пептиды./ Под ред. Антонова В.К,- М.: Наука, 1995.- Т.1.-426 с.

209. Шульц Г., Ширмер Р. Принципы структурной организации белков./ Под ред.Е.М.Попова,- М.: Мир, 1982,- 354 с.

210. Волкова Н.Г. Поверхностные и реологические свойства монослоев и адсорбционных слоев ферментов. Автореф.дис. ... канд.хим.наук,-М.: МГУ, 1986,- 24 с.

211. Бабак В.Г. Физикохимия контактных взаимодействий в полимерсо-держащих дисперсных системах. Автореф.дис. ... докт.хим.наук,- Л., 1990,- 42 с.

212. Трапезникова A.A., Ребиндер П.А. В сб.: Новые методы физикохи-мических иследований поверхностных явлений.// Труды института фзической химии АН СССР,- 1950,- Вып.1.- С,36-39.

213. Ismailova V.N. Progress in Surface and membrane Science.- N.-Y.-London: Academic Press, 1979,- V.3.- P. 193-205.

214. Измайлова В.H., Ребиндер П.А. Структурообразование в белковых системах.- М.: Наука, 1974,- 268 с.

215. Виноградов Г.В., Малкин А .я. Реология полимеров,- М.: Химия,

1979,- 450 с.

216. Дубяга В.П., Перепечкин Л.П., Кагалевский Е.Е. Полимерные материалы.- М.: Химия, 1981.- 232 с.

217. Папков С.П. Физико-химические основы переработки растворов полимеров." М.: Химия, 1971.- 363 с.

218. Перепелкин К.Е. Физико-химические основы процессов формирования химических волокон.- М.: Химия, 1978.- 320 с.

219. Папков С.П. Студнеобразное состояние полимеров,- М.: Химия, 1974.- 255 с.

220. Липатов Ю.С., Шилова В.В. Фазовое разделение в многокомпонентных полимерных системах,- Черноголовка, 1985.- 32 с.

221. Липатов Ю.С. Будущее полимерных композиций,- Киев: Наук, думка, 1984,- 135 с.

222. Липатов Ю.С. Межфазные явления в полимерах.- Киев: Наук.думка,

1980.- 260 с.

223. Липатов Ю.С., Сергеева Л.М., Тодосийчук Т.Т., Хромова Т.С. Об особенностях адсорбции макромолекул из концентрированных растворов.//ДАН СССР.- 1974,- Т.218,- №5,- С.1144-1146.

224. Каргин В.А. Избранные труды. Проблемы науки о полимерах,- М.: Наука, 1986,- 278 с.

225. Сергеева Л.М. Исследования взаимодействия полимеров с наполнителями.- Дис. ... канд.хим.наук,- Минск, 1963,- 115 с.

226. Лифшиц Е.М., Питаевский И.К. Физическая кинетика,- М.: Наука, 1979,- 527 с.

227. Экспериментальные методы в адсорбции и молекулярной хроматографии. / Под ред.Киселева A.B., Древинга В.П.- М.: МГУ, 1977.447 с.

228. Нечаева О.В., Цилипоткина М.В., Тагер A.A., Негиленко Т.Н. Применение метода ртутной порометрии для исследования пористой структуры полимеров.// Высокомол.соед.- 1975.- Т.17А.- №11.-С.2566-2573.

229. Хозина Е.В., Вартапетян Р.Ш., Волощук A.M. Особенности самодиффузии молекул воды и бензола в активных углях.// Кол-лиод.журн,- 1997,- V.59.- №2.- С.252-257.

230. Цилипоткина М.В., Тагер A.A., Маковская Э.Б., Партина В. Исле-дование влияния природы растворителя и осадителя и способа формования на пористую структуру полимеров.// Высокомол.соед,-1970,- Т.12А.- №5.- С.1082-1089.

231. Цилипоткина М.В., Скорнецких В.Л., Седов A.A. и др. Влияние пористости волокон из триацетата целлюлозы на ферментативную активность и стабильность иммобилизованной в них уреазы.// Изв.ВУЗов. Химия и хим.технология,- 1980,- Т.27,- №5.- С.607-612.

232. Тагер A.A., Цилипоткина М.В. Пористая структура полимеров и механизм сорбции.//Успехи химии.- 1978,- Т.47,- №1.- С.152-175.

233. Перепечкин Л.П. Процессы получения неионогенных волокон и пленок из эфиров целлюлозы для разделения растворов и коллоидов: Дис. ... докт.техн.наук,- М., 1977,- 292 с.

234. Кестинг P.E. Синтетические полимерные мембраны.- М.: Химия, 1991.- 336 с.

235. Параценко С.А., Бильдюкович A.B. Структура формовочных растворов и ее влияние на характеристики полимерных мембран.// Высокомол.соед.- 1994,- 36А,- №3,- С.457-460.

236. Пат.Японии № 54-35282, КИ 36(2)С05, 1979.

237. Marani L., Bartoli F., Bendoricho G., Morisi F. Leankage of enzyme from cellulose triacetate fibers.// Chem.Ind.- 1977,- V.59.-№4.- P.243-247.

238. Whang K., Thomas C.H., Healy K.E. A novel method to fabricate bioabsorbable scaffokds.// Polymer.- 1995,- V.36.- №4.- P.837-842.

239. Сидорова И.В. Регулирование реологического поведения растворов триацетата целлюлозы и разработка технологии снижения их вязкости в производстве пленки - основы кинофотоматериалов: Авто-реф.дис. ... канд.техн.наук.- Спб, 1992.- 25 с.

240. Варламов A.B., Новиков Д.В., Сидорова И.В., Мнацаканов С.С. Влияние малых добавок полибутираля на вязкость растворов, надмолекулярную структуру и физико-механические характеристики пленок из ТАЦ.// ЖПХ,- 1991.- Т.64.- №8.- С.1735-1739.

241. Державина Э.Д. Разработка способа интенсификации процесса пленкообразования триацетатной основы кинофотоматериалов: Дис. ... канд.техн.наук,- М., 1990,- 196 с.

242. Цилипоткина М.В. Пористая структура органических полимеров и ее роль в их взаимодействии с низкомолекулярным веществом: Ав-тореф.дис. ... докт.хим.наук.- М., 1980,- 45 с.

243. Зинченко В.Д. Исследование межмолекулярных взаимодействий в водных растворах полиэтиленгликолей, некоторых белков и аминокислот методом ЯМР: Дис. ... канд.физ.-мат.наук.- Харьков, 1978.209 с.

244. Мицеллообразование, солюбилизация и микроэмульсии./ Под ред.К.Митчела.- М.: Мир, 1980.- 598 с.

245. Современные проблемы биокинетики./ Под ред.С.Д.Варфоломеева.-М.:МГУ, 1987,- 256 с.

246. Березин И.В., Клесов A.A. Практический курс химической и ферментативной кинетики.- М.: МГУ, 1976.- 321 с.

247. Казанская Н.Ф., Айсина Р.Б. Диффузионные эффекты в кинетике действия микрокапсулированных ферментов.// Итоги науки и техники. Биол.химия,- М.: ВИНИТИ АН СССР, 1978.- Т.12,- С.115-139.

248. Бейли Дж., Оллис Д. Основы биохимической инженерии.- М.: Мир, 1989,- Т.1.- 692 с.

249. Иммобилизованные ферменты./ Под ред.Березина И.В., Антонова Б.К., Мартинека К.- М.: МГТУ, 1976,- Т.2.- 358 с.

250. Кильдеева H.Р. Получение волокон и пленок, содержащих иммобилизованные протеолитические ферменты, и изучение их свойств: Ав-тореф.дис. ... канд.техн.наук.- М., 1980,- 22 с.

251. Chase Т., Shaw E.L. p-Nitrophenyl-p'-guanidinnobensoate HCl: a new active site titrant for trypsin.// Biochem.Biophys.Res.Commun.- 1967.-V.29.- P.508-814.

252. Ныс П.С., Бирюков B.B. Интегральные критерии эффективности процесса иммобилизации ферментов.// Антибиотики.- 1981.- №5,-с.332-337.

253. Ныс П.С., Бирюков В.В. К вопросу об исходных показателях для расчета интегральных критериев эффективности процесоса иммобилизации ферментов.// Антибиотики.- 1981.- №6.- С.419-423.

254. Бейли Дж., Оллис Д. Основы биохимической инженерии.- М.: Мир, 1989,-Т.2.-486 с.

255. Матвеев Д.В. Шульчишин В.А., Скокова И.Ф., Вирник А.Д. Исследование гидродинамических характеристик волокна-биокатализатора в колонном аппарате.// Изв.ВУЗов. Химия и хим.технология.- 1988,- Т.31.- Вып.5.- С. 113-118.

256. Вирник А.Д., Красовская С.Б., Седов A.A. Получение и применение химических волокон, содержащих иммобилизованные ферменты.// Тез.докл. II Всесоюз.симп. по получению и применению иммобилизованных ферментов.- Абовян, 1997,- С.70.

257. Самошина Н.М., Лотменцева Е.Ю., Борисова В.Н., Нахапетян Л.А. Гидрофобная иммобилизация ß-галактозидаз на неорганическом носителе с карбоксильными группами.// Прикл.биохим. и микробиол.-1984,- Т.20,- №6.- С.817-822.

258. Шульчишин В.А., Матвеев Д.В., Вирник А.Д. Исследование кинетики гидролиза лактозы с участием биокатализатора на основе модифицированной грибной ß-галактозидазы, иммобилизоанной в структуре триацетатного волокна.// Прикл. биохим. и микробиол.-1993.- Т.29,- №1,- С.108-114.

259. Шульчишин В.А., Кильдеева Н.Р., Красовская С.Б., Хомяков К.П., Вирник А.Д. Математическая модель процесса гидролиза бензилпе-

нициллина с использованием волокна-биокатализатора, содержащего модифицированную пенициллинамидазу.// Хим.фарм.журнал.-1993.-№4,-С.52-54.

260. Шульчишин В.А. Расчет фильтрационных потоков жидкости через слой деформируемого волокнистого материала.// Изв.ВУЗов. Технология текстильной промышленности.- 1991,- Вып.2,- С.77-80.

261. Баева B.C., Тихомирова A.C., Шеломкова И.Я. Применение иммобилизованных ферментов в молочной промышленности. Обзорная информация,- М.: ЦНИИТЭИМясомолпром, 1982.- 29 с.

262. Gekae V., Lopes-Leiva М. Hydrolysis of lactose: a literature review.// Process Biochemistry.- 1985.-V.20.- №1.- P.2-12.

263. Нахапетян JI.А., Мотина Л.И. Получение глюкозо-галактозных сиропов из молочной сыворотки.// Биотехнология.- 1988,- Т.4,- №1.-С.4-21.

264. Толстых П.И., Гостищев В.К., Арутюнян Б.Н. и др. Протеолитиче-ские ферменты, иммобилизованные на волокнистых материалах, в хирургии.- Ереван: Айстан, 1990,- 136 с.

265. Толстых П.И., Гостищев В.К., Василькова З.Ф. и др. Применение иммобилизованных ферментов и их природных ингибиторов в хирургии.//Хирургия,- 1983,- №6,- С.94-98.

266. Ларионова Н.И., Торчилин В.П. Принципы иммобилизации и научные подходы к использованию ферментов и других физиологически активных соединений в медицине.// В кн.: Химическая энзимология,-М.: МГУ, 1983,- С.115-153.

267. Ларионова Н.И., Торчилин В.П. Применение иммобилизованных физиологически активных веществ белковой природы в медицине.// В кн.: Введение в прикладную энзимологию./ Под ред.И.В.Березина, К.Мартинека.- М.: МГУ, 1982,- С.284-305.

268. Кильдеева Н.Р., Казанская Н.Ф., Вирник А.Д. Иммобилизация в структуре ацетатных пленок и волокон протеолитических ферментов.// Изв.ВУЗов. Химия и хим.технология.- 1979,- Т.22,- Вып.2,-С.225-229.

269. Вирник А.Д., Гостищев В.К., Кильдеева Н.Р. и др. Получение пленок и волокон, содержащих протеолитические ферменты.// Прикл.биохим. и микробиол.- 1987,- Т.23.- Вып.1.- С.78-83.

270. Тимохина В.И., Лапо В.Г., Ланина С.Я. Некоторые методические аспекты и результаты токсикологического получения антимикробных материалов.// В сб. Медико-технические проблемы индивидуальных средств защиты человека./ Под ред.Кащеева B.C.- М., 1982.-С.97-102.

271. Бессмертная Л.Я., Козлов Л.В., Антонов В.К. Причины изменения стабильности а-химотрипсина при модификации полиэлектролитами.// Биохимия,- 1977.- Т.42.- С.1825-1834.

272. Даценко Б.М., Белов С.Г., Тамм Т.Н. Гнойная рана.- Киев: Здоровья, 1985,- 136 с.

273. Стручков В.И., Григорян A.B., Гостищев В.К. Гнойная рана.- М.: Медицина, 1975,- 311 с.

274. Мосолов В.В. Белковые ингибиторы как регуляторы процессов про-теолиза.- М.: Наука, 1983,- 293 с.

275. Гостищев В.К., Затолокин В.Д., Сажин В.П. Бактериальные протеолитические ферменты в гнойной хирургии.- Воронеж: Воронежский ун-т, 1985,- 84 с.

276. Толстых П.И., Юнус Ю.М., Макушкин Р.З., Дербенев В.А., Сторо-жук В.П. Хирургичский дренаж в лечении гнойных послеоперационных ран и полостей (обзор литературы).// Хирургия.- 1989.- №5.-С.133-139.

277. Кузьмина Н.Л., Бибер Б.Л., Абакумова Г.Л., Бершадская Э.Н. Проблемы получения и применения хирургических шовных нитей.// Промышленность химических волокон. - М.: НИИТЭХим, 1982.77 с.

278. Буянов В.М., Егнев В.Н., Уротов O.A. Абдоминальная хирургия. Хирургический шов. Часть вводная.- М., 1993,- 100 с.

279. Гостищев В.К., Романченко И.М., Арутюнян Б.Н. Антисептические шовные материалы в профилактике послеоперационных гнойных осложнений.// Мат-лы III Междунар.конф. "Современные подходы к

разработке эффективных перевязочных средств, шовных материалов и полимерных имплантантов".- М., 1995.- С.312-313.

280. Кивман Г.Я., Лященко Ю.В., Рабинович Э.З., Флейдерман Л.И. Гидроколлоидные покрытия - новое поколение средств для лечения ран и ожогов (обзор).// Хим.фарм.журнал.- 1994,- №9.- Т.28,- С.21-27.

280. Глянцев С.П. Новые подходы к сравнительной оценке ферментсо-держащих перевязочных средств для раневого некроза.// Матер. II Междунар.конф. "Современные подходы к разработке эффективных перевязочных средств, шовных материалов и полимерных имплантантов",- М., 1995,-С.14-15.

281. Веременко К.П. Ферменты протеолиза и их ингибиторы в медицинской практике.- Киев: Здоровья, 1971.- С.

282. Журавлев А.Г., Ларионова Н.И. Профилактика панкреатита ингибиторами протеаз в эксперименте.// В сб.: Актуальные вопросы хирургической гастроэнтерологии.- Курск, 1985.- С. 118-119.

283. Kildeyeva N.R., Ovchinnikova IN., Yirnik A.D. Biodegradable film dressing containing immobilizes protease with controlled pharmacodynamic properties.// Proceed.Intern.Symp. Control. Rel. Bioact.Mater.- Stockholm, 1995,- у22.- P.486-487.

284. Вихорева Г.А., Гальбрайх Л.С., Горбачева И.Н. Химическое модифицирование полисахаридов гидробионтов.// Хим.волокна.- 1994.-№5,- С.37-45.

285. Нудьга Л.А. Биоматериалы на основе хитина и хитозана из пан-цирьсодержащих отходов криля и пути их использования,- М.: ВНИРО , 1992,- С.40-44.

286. Кильдеева Н.Р., Вихорева Г.А., Ларионова Л.С., Гальбрайх Л.С. Биологически активные сорбирующие пленки на основе хитозана.// Матер. III Междунар.конф. "Современные подходы к разработке эффективных перевязочных средств, шовных материалов и полимерных имплантантов. - М., 1998.- 367 с.

>