Роль белка Musashi 2 (Msi2) в регуляции сигнального пути фактора роста опухоли (TGF-β) и клаудинов при метастазировании легочной аденокарциномы тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.01.04, кандидат наук Денека Александр Ярославович

• Денека Александр Ярославович
• кандидат наук
• 2017

Оглавление диссертации кандидат наук Денека Александр Ярославович

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Немелкоклеточный рак легкого. Разнообразие форм данного вида опухолей

1.2 Генетические мутации как наиболее частые причины развития легочной аденокарциномы

1.3 Трансгенные мыши как модель исследования опухолей легкого

1.4 Роль стволовых клеток в развитии рака легкого

1.5 Эпителиально-мезенхимальный переход и его роль

в метастазировании опухолей

1.6 TGF-p/SMAD - один из основных сигнальных путей, активирующих процесс эпителиально-мезенхимального перехода

1.7 Плотные межклеточные контакты, их строение и роль

в эпителиально-мезенхимальном переходе

1.8 Эволюционно консервативные белки Мусаши - потенциальные регуляторы эпителиально-мезенхимального перехода

1.9 Основные мишени белков Мусаши, регулирующие рост и метастазировании опухолей

1.10 Заключение

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1 Реактивы и оборудование

2.2 Объекты исследования

2.2.1 Объекты исследования in vitro

2.2.2 Объекты исследования in vivo

2.3 Анализ экспрессии Msi2 в образцах ткани легкого с помощью

метода тканевых матриц

2.4 Подготовка и иммуногистохимическое окрашивание образцов опухолей и метастазов мышей

2.5 Количественный анализ препаратов, полученных in vivo

2.6 Анализ уровня экспрессии генов методом количественной ПЦР с обратной транскрипцией (ОТ-ПЦР)

2.7 Количественный анализ уровней белков с помощью метода протеиновых тест-систем обратной фазы (RPPA)

2.8 Трансфекция клеток малой интерферирующей РНК

2.9 Получение клонов нокдаунов Msi2

с помощью коротких шпилечных РНК и лентивирусов

2.10 Анализ жизнеспособности клеток in vitro

2.11 Анализ инвазивной способности клеток in vitro

2.12 Оценка роста клеток с помощью

метода выращивания трехмерных клеточных сфер

2.13 Анализ уровня экспрессии белков методом Вестерн блоттинга

2.14 Исследование клеток с помощью иммунофлюоресцентной микроскопии

2.15 Эксперименты со сверхэкспрессией генов

2.16 Исследование клеточного цикла с помощью проточной цитометрии

2.17 Статистическая обработка данных

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

3.1 Исследование экспрессии гена Msi2 в легочной аденокарциноме с высокой метастатической способностью

3.2 Исследование влияния экспрессии Msi2 на инвазивную способность клеток легочной аденокарциномы с высоким метастатическим потенциалом in vitro

3.3 Опухоли с пониженной экспрессией Msi2 демонстрируют меньшую метастатическую активность in vivo

3.4 Определение основных белков-мишеней Msi2 в опухолях легкого

3.5 Исследование влияния Msi2 на трансляцию белков-мишеней, регулирующих инвазию

3.6 Влияние уровня Msi2 на изменение межклеточных контактов и фенотип смешанного эпителиально-мезенхимального перехода

3.7 Msi2 регулирует инвазию, влияя на сигнальный путь TGF-P и экспрессию клаудинов

3.8 М$12 оказывает влияние на механизмы репарации ДНК и является потенциальным маркером эффективности химиотерапии рака легкого

ГЛАВА 4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ

ВЫВОДЫ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

АК - аденокарцинома

ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота

кДНК - комплементарная дезоксирибонуклеиновая кислота

КП - консенсусная последовательность

кшРНК - короткая шпилечная рибонуклеиновая кислота

мРНК - матричная рибонуклеиновая кислота

мшРНК - малая шпилечная рибонуклеиновая кислота

миРНК - малая интерферирующая рибонуклеиновая кислота

ОТ-ПЦР - полимеразная цепная реакция с обратной транскрипцией

ОРФ - открытая рамка считывания

ПК - плотный контакт

ПЦР - полимеразная цепная реакция

РИП - рибосомная иммунопреципитация

РНК - рибонуклеиновая кислота

РСП - мРНК связывающая последовательность

ТГМ - трансгенные мыши

ТТФ 1 - тиреоидный транскрипционный фактор

ФСБ - фосфатно-солевой буфер

ЭБС - эмбриональная бычья сыворотка

ЭМП - эпителиально-мезенхимальный переход

ALK - aplastic lymphoma kinase

APC - аденоматозный полипоз толстого кишечника

AQUA - автоматический количественный анализ

CCLE - энциклопедия опухолевых клеточных линий

EGFR - рецептор фактора роста эндотелия

FGFR - рецептор фактора роста фибробластов

HRP - пероксидаза хрена

Msil - Musashil - белок Мусаши

Msi2 - Musashi2 - белок Мусаши

NTRK1 - нейротрофический рецептор тирозин киназ

RPPA - метод белковых тест-систем обратной фазы

SCID - тяжелый комбинированный иммунодефицит

SDS - sodium dodecyl sulfate - додецил сульфат натрия

TCGA - атлас генома опухолей человека

TGF-в - трансформирующий ростовой фактор бета

TGF-PR - рецептор трансформирующего ростового фактора

TMA - метод тканевых матриц

ZO - zonula occludens - плотный межклеточный контакт

ВВЕДЕНИЕ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Роль белка Musashi 2 (Msi2) в регуляции сигнального пути фактора роста опухоли (TGF-β) и клаудинов при метастазировании легочной аденокарциномы»

Актуальность проблемы

В настоящее время в большинстве развитых стран мира рак легкого занимает лидирующее место по распространенности у мужчин и второе у женщин (Siegel et al., 2013). Пятилетняя выживаемость при заболевании немелкоклеточным раком легкого составляет около 16% (Howlader et al., 2013). Ведущей причиной такой высокой смертности являются распространенные метастазы, наличие которых приводит к изменению биологических свойств опухолевых клеток и сопровождается все возрастающей резистентностью к применяемым традиционным методам лечения.

Наиболее частыми причинами возникновения немелкоклеточного рака легкого у человека являются активирующая мутация K-Ras (около 30%) (Mitsudomi et al., 1991), а также потеря аллеля p53 (около 60% случаев) (Takahashi et al., 1989). Обнаружение этих мутаций позволило создать удобный инструмент для изучения роста и метастазирования немелкоклеточного рака легкого - трансгенную K-RasLA1/+ lp53R172HAg/+ (K-Ras/p53) мышиную модель, которая уже хорошо изучена и описана в литературе (Jackson et al., 2009). У этих мышей мутантный аллель р53 (p53R172H/jg) сочетается с активирующей мутацией K-Ras аллеля K-RasLA1 (Zheng et al., 2007), что приводит к развитию опухолей в легком, обладающих свойствами, схожими с аденокарциномой человека. Метастазы мышиных K-Ras/p53 опухолей обнаруживаются в тех же органах, что и у пациентов с немелкоклеточным раком легкого (Zheng et al., 2007). Описанные выше свойства, трансгенной K-Ras/p53 мышиной модели позволяют использовать ее в качестве удобного инструмента для изучения биологических процессов, лежащих в основе развития и метастазирования аденокарциномы, в частности - эпителиально-мезенхимального перехода (ЭМП) опухолевых клеток.

ЭМП играет определяющую роль в развитии метастатического процесса (Hay et al., 1995; Kalluri, Weinberg et al., 2009).

Во-первых, за счет изменения нормального функционирования таких внутриклеточных белковых сигнальных путей, как, например, сигнальный путь фактора роста опухолей бета (TGF-в).

Во-вторых, за счет смены фенотипа опухолевых клеток с эпителиального на мезенхимальный, а затем обратно на эпителиальный (Zavadil et al., 2005; Taylor et al., 2010).

Эти процессы регулируются определенными внутриклеточными белками, гены которых в норме экспрессируются на этапах эмбрионального развития, а затем в стволовых клетках. Одними из таких белков являются эволюционно консервативные белки Мусаши (Msil и Msi2). Они кодируются генами Msil и Msi2 и имеют большой процент гомологии, в частности, в РНК связующих последовательностях. Мусаши описаны в литературе как регуляторы трансляции мРНК большого количества белков-мишеней, оказывающие таким образом влияние на множество биологических процессов, включая деление стволовых клеток (Sakakibara et al., 2001; Siddal et al., 2006) и клеточный цикл (Park et al., 2014).

Больше всего изучен белок Msi1, описанный в литературе как регулятор прогрессирования опухолей толстого кишечника (Li et al., 2011), рака молочной железы (Wang et al., 2010) и глиобластом (Muto et al., 2012). Его гомолог, Msi2, на данном этапе хорошо изучен лишь в контексте лейкозов (Park et al., 2014; Ito et al., 2010; Kharas et al., 2011). При остром миелолейкозе повышенный уровень Msi2 ассоциировался с ухудшением клинического прогноза, развитием кризиса бластных клеток и более злокачественным течением заболевания.

Учитывая выше изложенное, в работе была поставлена цель -определить механизм, посредством которого белок Msi2, уровень которого

повышен в опухолях, может оказывать влияние на рост и метастазирование легочной аденокарциномы.

Для достижения этой цели были поставлены следующие задачи.

1. Провести скрининг и измерить уровни экспрессии генов стволовых клеток в мышиных клеточных линиях рака легкого для определения тех маркеров, уровень которых повышен в клетках с высоким метастатическим потенциалом.

2. Измерить уровень белка мб12 в образцах опухолевой и нормальной ткани пациентов с немелкоклеточным раком легкого.

3. Исследовать биологическую роль белка мб12 на примере мышиной модели рака легкого.

4. Определить сигнальные пути и белки-мишени, воздействуя на которые белок мб12 проявляет свой биологический эффект.

Научная новизна

В работе был впервые описан механизм регуляции метастазирования легочной аденокарциномы белком мб12. Показано, что у пациентов с немелкоклеточным раком легкого повышен уровень этого трансляционного регулятора. Это приводит к нарушению онкогенных сигнальных путей и усилению метастазирования легочной аденокарциномы. Был определен механизм этого усиления - установлены белки-мишени мб12: клаудины -3, -5, -7, ТОБ-РЮ и БМЛОЗ. Показано, что путем патологической активации сигнального пути ТОБ-р/БЫЛО и уменьшения количества плотных контактов в клетках мб12 усиливает метастазирование легочной аденокарциномы, тем самым способствуя ее злокачественному распространению.

Научно-практическая значимость работы

Полученные результаты способствуют более детальному пониманию внутриклеточных процессов, лежащих в основе метастазирования рака легкого, приводящих к возникновению резистентности к лечению, которой зачастую

сопровождается появление метастазов этого вида опухолей. При этом открываются новые возможности улучшения современных методов диагностики, прогнозирования течения и терапии данного заболевания в профильных научно-исследовательских центрах, таких как Российский онкологический научный центр им. Н.Н. Блохина, Московский научно-исследовательский онкологический институт им. П.А. Герцена, а также онкологических стационарах.

Описанные механизмы белок-белковых взаимодействий являются важными для понимания связей между сигнальными путями в клетке. Таким образом, полученные данные представляют интерес как с практической точки зрения, в качестве создания новых стратегий терапии, так и с точки зрения фундаментальных дисциплин: молекулярной биологии и биохимии.

Положения, выносимые на защиту:

1. Уровень маркера стволовых клеток Msi2 повышен в мышиных клетках рака легкого с высоким метастатическим потенциалом и образцах опухолевой ткани пациентов с легочной аденокарциномой.

2. Уменьшение экспрессии гена Msi2 вследствие его выключения in vitro уменьшает инвазивную способность клеток легочной аденокарциномы с высоким метастатическим потенциалом in vitro иметастазирование in vivo.

3. Msi2 способен регулировать инвазию опухолевых клеток опосредованно путем активации сигнального пути TGF-ß/SMAD.

4. Msi2 способен усиливать процесс эпителиально-мезенхимального перехода опухолевых клеток за счет снижения количества плотных межклеточных контактов и уменьшения уровня клаудинов.

Апробация работы

Результаты исследования докладывались на трех международных научно-практических конференциях: на двух ежегодных конференциях

Американской ассоциации исследования опухоли (Филадельфия, 2015 и Новый Орлеан, 2016, США) и на ежегодной конференции Американского общества изучения биологии клетки (Филадельфия, США, 2015). Также результаты докладывались на 18-ой, 19-ой и 20-й ежегодных конференциях онкологического института Фокс Чейз (Филадельфия, США, 2013, 2014, 2015).

Публикации

По теме диссертации опубликовано 13 научных работ, среди которых 2 публикации в рецензируемых журналах, включенных в список ВАК и 8 публикаций в журналах базы SCOPUS.

Структура и объем диссертации

Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, результатов, их обсуждения, выводов и списка цитированной литературы. Работа изложена на 99 страницах машинописного текста, включает 33 рисунка и 2 таблицы. Библиография включает 153 наименования.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Немелкоклеточный рак легкого. Разнообразие форм данного вида

опухолей

По смертности рак легкого занимает первое место в мире среди онкологических заболеваний (Gemal et al., 2011; Siegel et al., 2013). Около 85% всех случаев рака легкого составляет немелкоклеточный рак (NSCLC), пятилетняя выживаемость при котором - 15.9% - величина постоянная, которая не изменяется на протяжении уже нескольких десятилетий (Ettinger et al., 2013).

Совершенствование методик исследования, таких как секвенирование, получение новых моделей рака легкого на трансгенных мышах (ТГМ), создание множественных баз данных, описывающих молекулярные особенности человеческих опухолей, кардинально изменили подход к классификации рака легкого. Теперь можно на клеточном уровне определить не только гистопатологические особенности разных опухолей легкого, но и охарактеризовать их молекулярные и генетические свойства.

Интегрируя полученные знания с другими областями науки - например, биологией стволовых клеток, иммунологией, становится возможным на более детальном уровне описывать механизмы развития опухолей, возникновения гетерогенности клеток, а также взаимодействия между опухолевыми клетками и их окружением.

Классификация немелкоклеточного рака легкого в настоящее время основана на гистологических характеристиках (Ольховская и соавт., 1982).

Две формы встречаются в подавляющем большинстве случаев: это аденокарцинома (АК, около 50%) и плоскоклеточная карцинома (около 40%) (Пальцев и соавт., 2001; Davidson et al., 2013; Langer et al., 2010).

Аденокарцинома чаще локализуется в дистальных отделах дыхательных путей, тогда как плоскоклеточная карцинома - в более проксимальных, встречаясь чаще у курильщиков и пациентов с хроническим воспалительным процессом легких (Davidson et al., 2013; Langer et al., 2010). АК зачастую имеет железистую морфологию и экспрессирует биологические маркеры периферической легочной ткани, такие, как тиреоидный транскрипционный фактор 1 (ТТФ 1), также известный как NKX2-1, и кератин 7 (KRT7) (Davidson et al., 2013; Langer et al., 2010).

Для плоскоклеточной формы наоборот, характерна плоскоклеточная дифференцировка, более характерная для чешуйчатого эпителия бронхов и трахеи (Davidson et al., 2013; Rock et al., 2010). Также плоскоклеточная карцинома отличается от АК тем, что гистологически окрашивается на цитокератин 5 и 6, и транскрипционные факторы SRY-box 2 (SOX2) и p63 (Коган и соавт., 2000; Davidson et al., 2013; Langer et al., 2010; Lu et al., 2010).

Наименее часто встречающимся видом немелкоклеточного рака легкого является крупноклеточная карцинома, при которой не экспрессируются маркеры, характерные для АК и плоскоклеточной карциномы.

Однако до сих пор остается открытым вопрос, является ли крупноклеточная карцинома генетически отличной от первых двух (Davidson et al., 2013). Некоторые виды нейроэндокринных опухолей, вызывающих паранеопластический синдром, также относят к немелкоклеточному раку легкого, самый аггресивный вид которых выделяют в отдельную группу -мелкоклеточный рак (Пальцев и соавт., 2000; Davidson et al., 2013).

1.2 Генетические мутации как наиболее частые причины развития легочной

аденокарциномы

Несмотря на то, что гистологические особенности по прежнему являются основой классификации рака легкого, развитие методов

секвенирования и скринингов с одновременной обработкой большого количества данных, позволило исследовать генетические мутации, которые приводят к возникновению опухолей легких.

Вслед за открытием мутаций K-Ras и BRAF (Davies et al., 2002; Santos et al., 1984) были обнаружены мутации рецептора эпидермального фактора роста (EGFR), что позволило использовать таргетное лечение ингибиторами данного фактора у пациентов с АК (Lynch et al., 2004; Paez et al., 2004; Pao et al., 2004; Shepherd et al., 2005). В дальнейшем в АК легкого были обнаружены другие мутации, которые выступили в роли потенциальных мишеней таргетной терапии. Одними из них являются HER2 (известна также как ERBB2), MET, рецептор фактора роста фибробластов 1 (FGFR1) и FGFR2, ген киназы апластической лимфомы (ALK), рецептор тирозин киназы ROS1, нейрегулин 1, рецептор нейротрофической киназы 1 (NTRK1) и RET (Engelman et al., 2007;

Oran дп.

Adenocarcinoma

50%

Sqiurncwt csa

Сквамозно-клегочнаи карцинома

OOR2.24

Р1ЮСА mutation 15%

Unknown mutation. 2ÜS

PIK3CA amplification. 354

Аденокарцинома

HElUlMEK. 2\ IKAF/HKIC*. J4_ Í*

ALU. 5%

Unknown mutation 40*,.

EOFR. 154

Рис 1. Гистологическая классификация и основные мутации немелкоклеточного рака легкого. (Bryan et al., 2015)

Kohno et al., 2012; Rikova et al., 2007; Vaishnavi et al., 2013).

Эти мутации встречаются в подавляющем большинстве случаев АК легкого (рис. 1) и определяют чувствительность опухолей к химиотерапии (Коган и соавт., 2003; Ding et al., 2008; Imielinski et al., 2012; Heist et al., 2012).

Большинство из них (кроме тех, которые являются мутациями генов сигнального пути киназы PI3K) в доклинических исследованиях описаны как ведущие - определяющие возникновение опухоли (Weiss et al., 2010; Guagnano et al., 2012; Hammerman et al., 2011).

Определение роли соматических мутаций в раке легкого стало возможным благодаря развитию новых технологий. Например, анализ данных библиотек, составленных путем использования скринингов с помощью малых шпилечных РНК, позволил определить гены, способствующие опухолевой трансформации клеток, такие как ^-^оу-активирующие мутации и инактивация р53. Благодаря этому стало возможным использование потенциально новых терапевтических мишеней, таких как TANK-связывающая киназа (TBK1) (Barbie et al., 2009). Аналогично, использование масс-спектрометрии при изучении метаболических, белковых и фосфокиназных сигнальных путей позволило открыть такие явления, как ROS1 слияние генов, а также потенциально новый диагностический и прогностический маркер изоцитрат дегидрогеназу 1 (Sun et al., 2013; Tan et al., 2012).

За счет последних достижений и новых подходов к исследованию, быстрыми темпами растет понимание биологических процессов, лежащих в основе развития немелкоклеточного рака легкого, а также его метастазирования.

1.3 Трансгенные мыши как модель исследования опухолей легкого

Использование моделей трансгенных мышей (ТГМ) упростило исследование немелкоклеточного рака легкого, так как не всегда представляется

возможным получить для изучения достаточное количество образцов ткани пациентов или получить клеточные линии из нее. Это особенно важно при проведении доклинических испытаний препаратов, изучении процессов метастазирования, трансплантации опухолевых клеток (Xu et al., 2014; Curtis et al., 2010; Chen et al., 2012; Ji et al., 2006). На сегодняшний день используются ТГМ модели основных ведущих мутаций в немелкоклеточном раке, таких, как K-Ras, EGFR и ALK, и, несмотря на то, что в генетическом плане они не столь разнообразны, как человеческие опухоли, они все же обладают в достаточной степени сходством, как на микроскопическом уровне, так и при ответе на различные виды терапии (Chen et al., 2012).

ТГМ-модели очень информативны при изучении эффектов мутации определенных генов, последствий изменения экспрессии различных генов in vivo. Например, мышиная модель с конститутивным K-RasG12D нокаутом позволяет исследовать все этапы развития опухоли, начиная с самых ранних и заканчивая процессами ее метастазирования (Jackson et al., 2005). Ее с легкостью можно использовать для сопутствующего получения двойных и

G12D

более нокаутов. Опухоли у K-Ras нокаутных мышей развиваются очень медленно, и, зачастую, останавливаются в развитии на этапе аденом, однако при

G12D

комбинировании нокаута K-Ras с p53 этот процесс значительно ускоряется, и опухоли прогрессируют до состояния аденокарциномы и начинают метастазировать гораздо быстрее (Jackson et al., 2005; Oliver et al., 2010).

Изучая процесс возникновения опухолей в ТГМ - моделях, стало возможным также охарактеризовать механизмы, лежащие в основе онкогенной трансформации клеток человека (Kwon et al., 2013). Первичные изменения наблюдались тогда, когда в результате повреждения (воспаления, воздействия аденовируса, таких веществ, как нафталин) происходила делеция р53 в ТГМ (Kim et al., 2005; Desai et al., 2014; Mainardi et al., 2014; Rowbotham et al., 2014).

Клеточные линии, полученные из K-Ras/p53 нокаутной мышиной модели, благодаря удобству и ее сходству как на геномном, так и на клеточном уровне с человеческой аденокарциномой, были активно использованы в данном исследовании.

1.4 Роль стволовых клеток в развитии рака легкого

Для опухолевых клеток немелкоклеточного рака легкого характерна повышенная экспрессия маркеров стволовых клеток (Arasada et al., 2014; Singh et al., 2012). Согласно существующей гипотезе, стволовые клетки в дифференцированных тканях становятся опухолевыми потому, что только они живут достаточно долго для того, чтобы накопить определенный набор мутаций, повреждений генов, необходимых для роста опухоли (Visvader et al., 2011). Кроме этого, стволовые клетки имеют большую способность к самовоспроизведению и не нуждаются в активном эпигенетическом перепрограммировании. Однако, даже дифференцированные клетки с ограниченной способностью самовоспроизведения за счет приобретения свойств стволовых клеток в ответ на повреждения генов, изменение условий окружающей их ткани и повышение экспрессии маркеров стволовых клеток, могут становиться опухолевыми и носить злокачественный характер, в дальнейшем метастазируя (Tata et al., 2013; Chaffer et al., 2011).

1.5 Эпителиально-мезенхимальный переход и его роль в метастазировании опухолей

Успех метастазирования опухолевых клеток напрямую зависит от инвазии клеток в межклеточный матрикс, попадания в системный крово- и лимфоток, диссеминации и закрепления во вторичных очагах роста. Важную роль в обретении опухолевыми клетками способности диссеминировать играет процесс эпителиально-мезенхимального перехода (ЭМП). Во время ЭМП закрепленные эпителиальные клетки меняют свои свойства, теряя

межклеточные контакты, полярность, и приобретают свойства мезенхимальных клеток, в частности - подвижность и способность к инвазии (Hay et al., 1995).

На биохимическом уровне клетки перестают экспрессировать эпителиальные маркеры, такие, как белок межклеточных контактов Е-кадгерин и катенины, и начинают экспрессировать мезенхимальные маркеры, такие, как виментин и фибронектин.

В исследованиях, проведенных на моделях опухолевых ксенотрансплантатов и клеточных культур, показано, что ЭМП способствует отделению клеток друг от друга и метастазированию в дистальные органы (рис. 2) (Hay et al., 1995; Kalluri, Weinberg et al., 2009; Thiery et al., 2009).

MeieHMiMa.ii.iiati клетка

Рис 2. За счет ЭМП опухолевые клетки подвергаются функциональной адаптации к процессам инвазии и миграции. Под воздействием факторов, усиливающих ЭМП, эпителиальные клетки с инвазивного конца теряют межклеточные контакты, таким образом в меньшей степени подвергаясь воздействию эпителиальных факторов, и это ускоряет процесс приобретения мезенхимальных свойств от клеток стромы и дальнейшего метастазирования (Tam, Weinberg., 2013).

В опухолях человека первичные метастазирующие клетки обладают мезенхимальными свойствами, а на этапе прикрепления в дистальных органах -эпителиальными (Peinado et al., 2007). В литературе до сих пор ведутся активные дискуссии, действительно ли ЭМП играет важную роль в метастазировании опухолей (Garber, 2008; Ledford, 2011; Tarin et al., 2005; Thompson et al., 2005).

Очевидно, необходимо учитывать тот факт, что ЭМП не является перманентным процессом, и на поздних этапах метастазирования он сменяется обратным процессом - мезенхимально-эпителиальным переходом (МЭП) (Thiery et al, 2002). В промежутке между этими двумя процессами может наблюдаться картина смешанного мезенхимально-эпителиального фенотипа, за счет преобладания эпителиальных либо мезенхимальных факторов.

Эта гипотеза нашла подтверждение в нашем исследовании, однако для ее более полного понимания необходимо дальнейшее изучение.

1.6 TGF-ß/SMAD - один из основных сигнальных путей, активирующих процесс эпителиально-мезенхимального перехода

ЭМП в клетках возникает за счет активации различных сигнальных путей, как аутокринных, так и паракринных. Сигнальный путь TGF-ß в литературе описан как основной индуктор ЭМП при прогрессировании опухолей (Zavadil et al., 2005; Taylor et al., 2010). TGF-ß активирует сигнальный путь за счет воздействия на два вида рецепторов, сопряженных с тирозин киназами - TGF-ßR1 и TGF-ßR2, которые затем фосфорилируют цитоплазматические белки SMAD2 и SMAD3. Активированные SMAD2 и SMAD3 образуют комплекс с белком SMAD4, который после формирования комплекса транслоцируется в ядро и регулирует экспрессию генов, определяющих клеточную детерминацию. Сигнальный путь TGF-ß гиперактивирован в различных видах опухолей, в том числе и раке легкого, и

способен усиливать их инвазию и метастазирование (Han et al., 2005; Lehmann et al., 2000; Oft et al., 1998).

Таким образом, ингибирование сигнального пути TGF-ß потенциально способно уменьшить процесс ЭМП и прогрессирование опухоли в целом.

Сигнальный путь TGF-ß, в частности белки SMAD2 и SMAD3, ассоциируется с эпигенетическими регуляторами, такими как TRIM33, которые устраняют репрессивные модификации гистонов, облегчая доступ различных транскрипционных факторов к промотерам (Xi et al., 2011), меняя, таким образом, экспрессию генов и, как следствие, способствуя активации и усилению ЭМП (рис. 3). Основными транскрипционными факторами, которые играют важную роль в развитии ЭМП, являются Twistl (Yang et al., 2004), SNAIL1/2 (Batlle et al., 2000; Cano et al., 2000; Hajra et al., 2002), Zeb1/2 (Comijn et al., 2001; Eger et al., 2005), и FOXC2 (Mani et al., 2007).

Fibronectin Vimentin

MMP-2 MMP-9

МАРК PAR6

RhoA -* CREB PI3K -»• TWIST

ID 1 *

GSK-3h -»• SNAIL1 Wnt SNAIL2

SIP1

BMP-7

iiU

Smad1/S/8, Smad4

Smad6

Id 2/3

E2A

Л

н

E-Cadherin

Zona Occludins-1

Desmoplakin

Cytokeratin

Мезенхимальный фенотип

Эпителиальный фенотип

Рис 3. Внутриклеточные мишени сигнального пути TGF-P и их роль в эпителиаьно-мезенхимальном переходе. См. детальное описание в тексте. (Park et al., 2014)

В итоге, за счет активации генов SNAIL и SLUG, клетки оказываются способными отвечать на различные внеклеточные сигналы. Так, показано, что в процессе эмбриогенеза во время формирования нервного гребня у мышиных эмбрионов, при костной морфогенной активации белка SMAD1 наблюдается его колокализация с промотором гена SLUG, в результате чего возникает прецизионная миграция нервных клеток (Hardy et al., 2010).

Все вышесказанное позволяет сделать вывод о важной роли сигнального пути TGF-ß в процессах приобретения клетками мезенхимальных свойств при эмбриогенезе и злокачественной трансформации.

1.7 Плотные межклеточные контакты, их строение и роль в эпителиально-мезенхимальном переходе

Эпителиальные и мезенхимальные клетки имеют ряд признаков, отличающих их друг от друга, о чем упоминалось ранее (Rastaldi et al., 2006; Lee et al., 2006). Важными свойствами эпителиальных клеток являются наличие плотных межклеточных контактов, а также базально-апикальной полярности. Они могут быть подвижными, однако при нормальных физиологических условиях эпителиальные клетки в подавляющем большинстве данной способностью не обладают (Коган и соавт., 1995; Lee et al., 2006; Thiery et al., 2006). У мезенхимальных клеток полярности нет ввиду отсутствия организующего базального слоя.

Плотный контакт (ПК) - разновидность межклеточных контактов. ПК расположены в апикальной части большинства клеток эпителиальной и эндотелиальной ткани. ПК состоит из интегральных трансмембранных и цитоплазматических белков. Оклюдин, трицеллюлин и клаудины (которых в литературе описано 27 разновидностей) являются членами семейства белков тетраспанинов, N- и C-концы которых находятся в цитозоле, а две петли - в

межклеточном пространстве; при их участии и происходит заякоривание клеток.

Цитоплазматических адапторных белков плотных контактов существует несколько разновидностей (ZO-1, -2, -3). Они участвуют в сопряжении трансмембранных белков с актиновыми филаментами и другими белками цитоскелета.

Традиционно считалось, что ПК в клетках выполняют барьерную функцию (Farquhar et al., 1963; van Meer et al., 1986), однако последние исследования указывают на то, что ПК также участвуют в процессах клеточного роста, трансформации и метастазирования. Так, активация сигнального пути TGF-ß в эпителиальных клетках почечных канальцев собаки была способна вызвать процесс ЭМП, который сопровождался потерей клаудина-1, -2, оклюдина, а также белка другого межклеточного контакта (адгезивного) Е-кадгерина (Medici et al., 2006).

Транскрипцинный фактор SNAIL, активность которого увеличивается при ЭМП во время активации сигнального пути TGF-ß/SMAD, напрямую связывается с промоторами генов клаудинов-3, -4, -7, вызывая их супрессию, а следовательно уменьшая общий уровень этих белков (Vincent et al., 2009). Данный механизм снижения экспрессии клаудинов был описан при развитии опухолей молочной железы. Примечательно, что похожего эффекта на другой белок ПК - ZO-1 - SNAIL не оказывает (Ikenouchi et al., 2003), и в литературе есть сведения о том, что ZO-1 может быть вовлечен в процессы дифференцировки и роста опухолей. Так, эксперименты с увеличением уровня ZO-1 в эпителиальных клетках почечных канальцев собаки приводили к снижению в них количества эпителиальных маркеров (с соответствующим увеличением мезенхималных маркеров) и образованию опухолей в мышиных моделях с тяжелым комбинированным иммунодефицитом (Reichert et al., 2000).

Таким образом, можно сделать вывод о том, что в процессе роста и дальнейшего метастазирования опухолей важную роль играет активация процессов эпителиально-мезенхимального перехода клеток и уменьшение количества межклеточных контактов, благодаря чему опухолевые клетки становятся способными к инвазии в окружающие ткани и метастазированию.

Поэтому важной задачей является выявление регуляторных белков, которые способны модулировать, усиливать эти процессы. Одними из таких регуляторов являются белки семейства Мусаши - одни из важнейших трансляционных регуляторов в клетке.

1.8 Эволюционно консервативные белки Мусаши - потенциальные регуляторы эпителиально-мезенхимального перехода

Первый представитель семейства трансляционных регуляторов Мусаши был впервые описан при изучении процессов асимметричного деления клеток щетинок у дрозофил японским ученым Накамура и соавт. в 1994 году и назван им в честь японского самурая Миямото Мусаши, который владел боем на двух мечах (Какашига е! а1., 1994). Поводом для столь экзотического названия послужило следующее: в ходе экспериментов Накамура обнаружил, что нокдаун Мусаши вызывал фенотипическую картину расщепления щетинок дрозофил, напоминавшую самурая с двумя мечами (рис. 4).

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Денека Александр Ярославович, 2017 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Габитова Л.Р. Роль ферментов биосинтеза холестерина в подавлении развития КРАБ-опосредованного онкогенеза / Л. Р. Габитова // Автореферат диссертации на соискание степени кандидата биологических наук. Авторефераты РГБ. - 2015.

2. Горин А.О. Роль биосинтеза стеролов в чувствительности опухолевых клеток к блокаторам рецептора эпидермального фактора роста / А.О. Горин // Автореферат диссертации на соискание степени кандидата биологических наук. Авторефераты РГБ. - 2013.

3. Коган Е.А. Межклеточные взаимодействия при опухолевом росте / Е.А. Коган, М.А. Пальцев, А.А. Иванов // М.: Медицина. - 1995. - С. 127 - 189.

4. Коган Е.А. Морфологические и молекулярно-биологические особенности процессов кератинизации и апоптоза в плоскоклеточном раке легкого / Е.А. Коган, Д.А. Угрюмов, Г. Жак // Арх. Пат. - 2000. - Т.62, №3. - С. 16 - 21.

5. Коган Е.А. Молекулярная патология предрака и рака легкого / Е.А. Коган // Вестник РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН. - 2003. - Т.14, №1. - С. 13 -21.

6. Ольховская И.Г. Опухоли легких // Патологоанатомическая диагностика опухолей человека. М. - 1982. - С. 129 - 135.

7. Пальцев М.А. Мелкоклеточный рак и карциноиды легких / М.А. Пальцев, С.А. Демура, Е.А. Коган // Арх. Пат. - 2000. - Т.62, №5. - С. 11 - 18.

8. Пальцев М.А., Аничков Н.М. Патологическая анатомия, том 1. // М.: Медицина. - 2001. - С. 468-476.

9. Северин Е.С. Проблемы и перспективы современной противоопухолевой терапии / Е.С. Северин, А.В. Родина // Успехи биологической химии. -2006. - № 46. - С. 43-64.

10. Akhurst, R.J. Targeting the TGF-^eta signalling pathway in disease/ R.J. Akhurst, A. Hata //Nat Rev Drug Discov.- 2012.-УоШ,№10.-Р.790-811.

11. Arasada R.R. EGFR blockade enriches for lung cancer stem-like cells through Notch3-dependent signaling / R.R. Arasada, J.M. Amann, M.A. Rahman, S.S. Huppert, D.P. Carbone // Cancer Res. - 2014. - Vol. 74 (19). - P. 5572-5584.

12. Arumugam K. Enforcing temporal control of maternal mRNA translation during oocyte cell-cycle progression. / K. Arumugam, Y. Wang, L.L. Hardy, M. C. Macnicol and A. M. Macnicol // EMBO J. - 2010. - Vol. 29. - P. 387-397.

13. Asai R. Correlation between Musashi-1 and c-hairy-1 expression and cell proliferation activity in the developing intestine and stomach of both chicken and mouse. / R. Asai, H. Okano, and S. Yasugi // Dev. Growth Differ. - 2005. -Vol. 47. - P. 501-510.

14. Barbie D. A. Systematic RNA interference reveals that oncogenic KRAS-driven cancers require TBK1. / D. A. Barbie et al. // Nature. - 2009. - Vol. 462. - P. 108-112.

15. Barretina J. The Cancer Cell Line Encyclopedia enables predictive modelling of anticancer drug sensitivity. / J. Barretina et al. // Nature. -2012. - Vol. 483 (7391). - P. 603-607.

16. Batlle E. The transcription factor snail is a repressor of E-cadherin gene expression in epithelial tumour cells. / E. Batlle, E. Sancho, C. Franci', D. Domi'nguez, M. Monfar, J. Baulida, A. Garci'a De Herreros // Nat. Cell Biol. -2000. - Vol. 2. - P. 84-89.

17. Beck T.N. Bioinformatic approaches to augment study of epithelial-to-mesenchymal transition in lung cancer. / T.N. Beck, A.J. Chikwem, N.R.

Solanki, E.A. Golemis. // Physiol Genomics. - 2014. - Vol. 46 (19). - P. 699724.

18. Bertolini G. Highly tumorigenic lung cancer CD133+ cells display stem-like features and are spared by cisplatin treatment. / G. Bertolini , L. Roz , P. Perego, M. Tortoreto , E. Fontanella , L. Gatti , G. Pratesi , A. Fabbri , F. Andriani , S. Tinelli , E. Roz , R. Caserini , S. Lo Vullo , T. Camerini , L. Mariani , . Delia , E. Calabro , U. Pastorino , S. G ozzi // Proc Natl Acad Sci U S A. - 2009. - Vol. 106 (38). - P. 16281-16286. doi: 10.1073/pnas.0905653106. Epub 2009 Sep 10.

19. Bruna A. TGF-^eta induces the formation of tumour-initiating cells in claudin low breast cancer. / A.Bruna, W. Greenwood, J. Le Quesne, A. Teschendorff, D. Miranda-Saavedra, O.M. Rueda, J.L. Sandoval, A.T. Vidakovic, A. Saadi, P. Pharoah, J. Stingl, C. Caldas // Nat Commun.- 2012.-Vol. 3:1055. doi: 10.1038/ncomms2039.

20. Bryan A. C. Targeted therapy for non-small cell lung cancer: current standards and the promise of the future. / A. C. Bryan, G.M. Hughes // Translational Lung Cancer Research. - 2015. - Vol 4. (1): 36-54. doi: 10.3978/j.issn.2218-6751.2014.05.01.

21. Cano A. The transcription factor snail controls epithelial-mesenchymal transitions by repressing E-cadherin expression. / A.Cano, M.A. Pe'rez-Moreno, I. Rodrigo, A. Locascio, M.J. Blanco, M.G. del Barrio, F. Portillo, M.A. Nieto // Nat. Cell Biol. - 2000. Vol. 2. - P. 76-83.

22. Chaffer C. L. Normal and neoplastic nonstem cells can spontaneously convert to a stem-like state. / C.L. Chaffer, I. Brueckmann, C. Scheel, A.J. Kaestli, P.A. Wiggins, L.O. Rodrigues, M. Brooks, F. Reinhardt, Y. Su, K. Polyak, L.M. Arendt, C. Kuperwasser, B. Bierie, R.A.Weinberg // Proc. Natl Acad. Sci. -2011. - Vol. 108. - P. 7950-7955. 23. Charlesworth, A. Musashi regulates the temporal order of mRNA translation during Xenopus oocyte maturation. / A. Charlesworth, A. Wilczynska, P.

Thamp, L. Cox, A. M. Macnicol // EMBO J. - 2006. - Vol. 25. - P. 2792-2801.

24. Chen Z. A murine lung cancer co-clinical trial identifies genetic modifiers of therapeutic response. / Z Chen, Cheng K, Walton Z, et al. // Nature. - 2012. -Vol. 483. - P. 613-617. doi: 10.1038/nature 10937

25. Choi W. Intrinsic basal and luminal subtypes of muscle-invasive bladder cancer. / W. Choi , B. Czerniak, A. Ochoa, X. Su, A. Siefker-Radtke, C. Dinney, D.J. McConkey // Nat Rev Urol. - 2014. - Vol. 11(7). - P. 400-410. doi:10.1038/nrurol.2014.129.

26. Comijn, J. The twohanded E box binding zinc finger protein SIP1 downregulates E-cadherin and induces invasion. / J. Comijn, G. Berx, P. Vermassen, K. Verschueren, L. van Grunsven, E. Bruyneel, M. Mareel, D. Huylebroeck, F. van Roy // Mol. Cell. - 2001. - Vol. 7. - P. 1267-1278.

27. Creighton C.J. Residual breast cancers after conventional therapy display mesenchymal as well as tumor-initiating features. / C.J. Creighton, X. Li, M. Landis, J.M. Dixon, V.M. Neumeister, A. Sjolund et al. // Proc Natl Acad Sci USA. - 2009. - Vol. 106 (33). - P. 13820 - 13825, doi: 10.1073/pnas.0905718106

28. Curtis S. J. Primary tumor genotype is an important determinant in identification of lung cancer propagating cells. / S. J. Curtis, K. W. Sinkevicius, D. Li, A. N. Lau, et al. // Cell Stem Cell. - 2010. - Vol. 7. - P. 127-133, doi:10.1016/j.stem.2010.05.021

29. Davidson M. R. The pivotal role of pathology in the management of lung cancer. / M. R. Davidson, A. F. Gazdar, B. Clarke // E.J. Thorac. Dis. - 2013. -Vol. 5. - P. S463-S478.

30. Davies H. Mutations of the BRAF gene in human cancer. / D. H. Bignell, G.R. Cox, C. Stephens, P. et al. // Nature. - 2002. - Vol. 417. - P. 949-954.

31. de Sousa Abreu R. Genomic analyses of musashi1 downstream targets show a strong association with cancer-related processes. / R. de Sousa Abreu, P. C.

Sanchez-Diaz, C. Vogel, S. C. Burns, D.Ko et al. // J. Biol. Chem. - 2009. -Vol. 284. - P. 12125-12135. 32. Desai T. J. Alveolar progenitor and stem cells in lung development, renewal and cancer. / T. J. Desai, D. G. Brownfield , M.A. Krasnow // Nature. - 2014. - Vol. 507. - P. 190-194.

33. Ding L. Somatic mutations affect key pathways in lung adenocarcinoma. / L. Ding, G. Getz, D.A. Wheeler, et al. // Nature. - 2008. - Vol. 455. - P. 10691075, doi: 10.1038/nature07423

34. Dituri F. Differential Inhibition of the TGF-ß Signaling Pathway in HCC Cells Using the Small Molecule Inhibitor LY2157299 and the D10 Monoclonal Antibody against TGF-ß Receptor Type II. / F. Dituri, A. Mazzocca, F. Juan Peidro, P. Papappicco, I. Fabregat, F. De Santis, A. Paradiso, C. Sabba, G. Giannell// PLoS One. - 2009. - Vol. 8(6). - e67109. http://dx.doi.org/10.1371/journal.pone.0067109

35. Eger A. DeltaEF1 is a transcriptional repressor of E-cadherin and regulates epithelial plasticity in breast cancer cells. / A. Eger, K. Aigner, S. Sonderegger, B. Dampier, S. Oehler, M. Schreiber, G. Berx, A. Cano, H. Beug, R. Foisner // Oncogene. - 2005. - Vol. 24. - P. 2375-2385.

36. Engelman J. A. MET amplification leads to gefitinib resistance in lung cancer by activating ERBB3 signaling. / J.A. Engelman, K. Zejnullahu, T. Mitsudomi, et al. // Science. - 2007. - Vol. 316. - P. 1039-1043. DOI: 10.1126/science.1141478

37. Ettinger D. S. Non-Small Cell Lung Cancer, Version 2.2013. / D. S. Ettinger, W. Akerley, H.Borghaei et al. // J. Natl Compr. Canc. Netw. - 2013. - Vol. 11. - P. 645-653; quiz 653.

38. Farquhar M.G. Junctional complexes in various epithelia. / M.G. Farquhar, G.E. Palade // J Cell Biol. - 1963. - Vol. 17. - P. 375-412.

39. Gaponova A. SN-38 drug conjugate demonstrates striking efficacy in small cell

lung cancer. / A. Gaponova, A. Nikonova, A. Deneka, et al. // International journal of radiation oncology, biology, physics. - 2014. - Vol. 90 (5). - P. S64-S65.

40. Gaponova A. A novel HSP90 inhibitor-drug conjugate to SN38 is highly effective in small cell lung cancer. / A. Gaponova, A. Nikonova, A. Deneka, et al. // Clinical Cancer Research. - 2016. - Vol. 22 (20). - P. 5120 - 5129.

41. Gibbons D.L. Contextual extracellular cues promote tumor cell EMT and metastasis by regulating miR-200 family expression. / D.L. Gibbons, W. Lin, C.J. Creighton et al. // Genes Dev. - 2009. - Vol. 23 (18). - P. 2140-2151.

42. Gotte M. Increased expression of the adult stem cell marker Musashi-1 in endometriosis and endometrial carcinoma. / M. Gotte, M. Wolf, A. Staebler, O. Buchweitz, R. Kelsch et al. // J. Pathol. - 2008. - Vol. 215. - P. 317-329.

43. Griner L. N. Aggressive myeloid leukemia formation is directed by the Musashi 2/Numb pathway. / L. N. Griner, G. W. Reuther // Cancer Biol. Ther. - 2010. -Vol. 10. - P. 979-982.

44. Guagnano V. FGFR genetic alterations predict for sensitivity to NVP-BGJ398, a selective pan-FGFR inhibitor. / V. Guagnano, A. Kauffmann, S. Wöhrle et al. // Cancer Discov. - 2012. - Vol. 2. - P. 1118-1133.

45. Hajra K.M. The SLUG zinc-finger protein represses E-cadherin in breast cancer. / K.M. Hajra, D.Y. Chen, E.R. Fearon // Cancer Res. - 2002. - Vol. 62. - P. 1613-1618.

46. Han G. Distinct mechanisms of TGF-ß1-mediated epithelial-to-mesenchymal transition and metastasis during skin carcinogenesis. / G. Han, Sh.-L. Lu, A.G. Li et al. // J. Clin. Invest. - 2005. - Vol. 115. - P. 1714-1723. . doi: 10.1172/JCI24399

47. Hardy K.M. ErbB/EGF signaling and EMT in mammary development and breast cancer. / K.M. Hardy, B.W. Booth, M.J. Hendrix, D.S. Salomon, L. Strizzi // J. Mammary Gland Biol. Neoplasia. - 2010. - Vol. 15. - P. 191-199.

48. Hassan K.A.. Notch pathway activity identifies cells with cancer stem cell-like properties and correlates with worse survival in lung adenocarcinoma. / K.A. Hassan, L. Wang , H. Korkaya et al. // Clin Cancer Res. - 1980. - Vol. 19 (8). - P. 1972-1980.

49. Hay E.D. An overview of epithelio-mesenchymal transformation. / E.D. Hay // Acta Anat. (Basel). - 1995. - Vol. 154. - P. 8-20.

50. Heist R. S. Snapshot: non-small cell lung cancer. / R. S. Heist, J. A. Engelman // Cancer Cell. - 2012. - Vol. 21. - P. 448-448.

51. Hennessy B.T. Characterization of a naturally occurring breast cancer subset enriched in epithelial-to-mesenchymal transition and stem cell characteristics. / B.T. Hennessy, AM Gonzalez-Angulo, K Stemke-Hale, et al. // Cancer Res. - 2009. - Vol. 69 (10). - P. 4116-4124.

52. Howlader N.A. SEER Cancer Statistics Review 1975-2010. / N Howlader, AM Noone, M Krapcho, et al. // MD: National Cancer Institute. - 2013.

53. Iadevaia S. Identification of optimal drug combinations targeting cellular networks: integrating phospho-proteomics and computational network analysis. / S. Iadevaia, Y. Lu, F.C. Morales, G.B. Mills, P.T. Ram // Cancer Res. - 2010. - Vol. 70 (17). - P. 6704-6714.

54. Ikenouchi J. Regulation of tight junctions during the epitheliummesenchyme transition: direct repression of the gene expression of claudins/occludin by Snail. / J. Ikenouchi, M. Matsuda, M. Furuse, S. Tsukita // J Cell Sci. - 2003. - Vol. 116. - P. 1959-1967.

55. Imai T. The Neural RNA-binding protein Musashi1 translationally regulates mammalian numb gene expression by interacting with its mRNA. / T. Imai, A. Tokunaga, T. Yoshida et al. // Mol. Cell. Biol. - 2001. - Vol. 21. - P. 38883900.

56. Imielinski M. Mapping the hallmarks of lung adenocarcinoma with massively parallel sequencing. / M. Imielinski, A.H. Berger, P.S. Hammerman et al. //

Cell. - 2015. - Vol. 150. - P. 1107-1120. doi: 10.1016/j.cell.2012.08.029.

57. Ito T. Regulation of myeloid leukaemia by the cell-fate determinant Musashi. / T. Ito, H.Y. Kwon, B. Zimdahl et al. // Nature. - 2010. -Vol. 466 (7307). - P. 765-768. doi: 10.1038/nature09171

58. Jackson E. L. The Differential effects of mutant p53 alleles on advanced murine lung cancer. / E. L. Jackson, K.P. Olive, D.A.Tuveson et al. // Cancer Res. -2005. - Vol. 65. - P. 10280-10288. DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-05-2193

59. Jemal A. Global cancer statistics. / A. Jemal, F. Bray, M.M. Center et al. // CA Cancer J. Clin. - 2011. - Vol. 61. - P. 69-90.

60. Ji H. The impact of human EGFR kinase domain mutations on lung tumorigenesis and in vivo sensitivity to EGFR-targeted therapies. / H. Ji, D .Li, L Chen et al. // Cancer Cell. - 2006. - Vol. 9. - P. 485-495.

61. John T. Overview of molecular testing in non-small-cell lung cancer: mutational analysis, gene copy number, protein expression and other biomarkers of EGFR for the prediction of response to tyrosine kinase inhibitors. / T. John, G. Liu, M.S. Tsao // Oncogene. - 2009. - Vol. 28 (S1). - P. 14-23.

62. Kale V.P. Molecular mechanisms behind the dosedependent differential activation of MAPK pathways induced by transforming growth factor-beta1 in hematopoietic cells. / V.P. Kale, A.A. Vaidya // Stem Cells Dev. - 2004. - Vol. 13. - P. 536-547.

63. Kalluri R. The basics of epithelial-mesenchymal transition. / R. Kalluri, R.A. Weinberg // J. Clin. Invest. - 2009. - Vol. 119. - P. 1420-1428.

64. Kaneko Y. Musashi1: an evolutionally conserved marker for CNS progenitor cells including neural stem cells. / Y. Kaneko, S. Sakakibara, T. Imai, A. Suzuki, Y. Nakamura et al. // Dev. Neurosci. - 2000. - Vol. 22. - P. 139-153

65. Kanemura Y. Musashi1, an evolutionarily conserved neural RNA-binding protein, is a versatile marker of human glioma cells in determining their cellular origin, malignancy, and proliferative activity. / Y. Kanemura, M. Yamasaki, K.

Mori, H. Fujikawa, H. Hayashi et al. // Differentiation. - 2001. - Vol. 68. - P. 141-152.

66. Katz Y. Musashi proteins are post-transcriptional regulators of the epithelial-luminal cell state. / Y. Katz, F. Li, N.J. Lambert, E.S. et al. // Elife. - 2014. -Vol. 7(3). - e03915. doi: 10.7554/eLife.03915

67. Kharas M.G. Musashi-2 regulates normal hematopoiesis and promotes aggressive myeloid leukemia. / M.G. Kharas, C.J. Lengner, F Al-Shahrour et al. // Nature Medicine. - 2010. - Vol. 16 (8). - P. 903-908.

68. Kim C. Identification of bronchioalveolar stem cells in normal lung and lung cancer / C. Kim, E.L. Jackson, A.E. Woolfenden et al // Cell. - 2005. - Vol. 121. - P. 823-835.

69. Kohno T. KIF5B-RET fusions in lung adenocarcinoma. / T. Kohno, H. Ichikawa, Y. Totoki et al. // Nature Med. - 2012. - Vol. 18. - P. 375-377.

70. Kornblau S.M. Functional proteomic profiling of AML predicts response and survival. / S.M. Kornblau, R. Tibes, Y.H. Qiu et al. // Blood. - 2009. - Vol. 113 (1). - P. 154-164.

71. Kwon M. Mouse models for lung cancer. / M. Kwon, A. Berns // Mol. Oncol. -

2013. - Vol. 7. - P. 165-177. 72. Kwon M.J. Emerging roles of claudins in human cancer 69 / M.J. Kwon // Int J Mol Sci. - 2013. - Vol. 14 (9). - P. 18148-18180.

73. Lan L. Natural product (-)-gossypol inhibits colon cancer cell growth by targeting RNA-binding protein Musashi-1 / L. Lan, C. Appelman, L. Xu et al. // Mol Oncol. - 2015. - Vol. 9 (7). - P. 1406-20.

74. Langer C. J. The evolving role of histology in the management of advanced non-small-cell lung cancer. / C. J. Langer, B. Besse, A. Gualberto, E. Brambilla, J. Soria // J. Clin. Oncol. - 2010. - Vol. 28. - P. 5311-5320.

75. Lee J.M. The epithelial-mesenchymal transition: new insights in signaling, development, and disease. / J.M. Lee, S. Dedhar, R. Kalluri, E.W. Thompson // J

Cell Biol. - 2006. - Vol. 172. - P. 973-981

76. Lehmann K. Raf induces TGFP production while blocking its apoptotic but not invasive responses: a mechanism leading to increased malignancy in epithelial cells. / K. Lehmann, E Janda., C. E. Pierreux et al. // Genes Dev. - 2000. - Vol. 14. - P. 2610-2622.

77. Li D. Msi-1 is a predictor of survival and a novel therapeutic target in colon cancer. / D. Li, X. Peng , D. Yan, H. Tang, F. Huang, Y. Yang , ZPeng // Ann Surg Oncol. - 2011. - Vol. 18 (7). - P. 2074-2083.

78. Licciulli S. Notch1 is required for Kras-induced lung adenocarcinoma and controls tumor cell survival via p53. / S. Licciulli, J. L. Avila, L. Hanlon et al. // Cancer Res. - 2013. - Vol. 73 (19). - P. 5974-5984.

79. Liu W. The melanoma-associated antigen A3 mediates fibronectin-controlled cancer progression and metastasis. / W. Liu, S. Cheng, S.L. Asa, S. Ezzat // Cancer Res. - 2008. - Vol. 68 (19). - P. 8104-8112.

80. Liu J. Suppression of SCARA5 by Snail1 is essential for EMT-associated cell migration of A549 cells. / J. Liu et al. // Oncogenesis. - 2013. - Vol. 2. - e73.

81. Lowry, O. H. Protein measurement with the Folin phenol reagent / O. H. Lowry, N. J. Rosebrough, A. L. Farr, R. J. Randall // The Journal of biological chemistry. - 1951. - Vol. 193. - P. 265-275.

82. Lu Y. Evidence that Sox2 overexpression is oncogenic in the lung. / Y. Lu , Ch. Futtner , J. R. Rock et al. // PLoS ONE. - 2010. - Vol. 5. - e.1371 http://dx.doi.org/10.1371/journal.pone.0011022 83. Lu Z. Claudin-7 inhibits human lung cancer cell migration and invasion through ERK/MAPK signaling pathway. / Z. Lu et al. // Exp Cell Res. - 2011. - Vol. 317 (13). - P. 1935-1946. 84. Lynch T. Activating mutations in the epidermal growth factor receptor underlying responsiveness of non-small-cell lung cancer to gefitinib. / T.J. Lynch, D.W. Bell, R. Sordella et al. // N. Engl. J. Med. - 2004. - Vol. 350. - P.

2129-2139.

85. Mainardi S. Identification of cancer initiating cells in K-Ras driven lung adenocarcinoma. / S. Mainardi, N. Mijimolle, S. Francoz et al. // Proc. Natl Acad. Sci. USA. - 2014. - Vol. 111. - P. 255-260. doi: 10.1073/pnas.1320383110. 86. Mani S.A. Mesenchyme Forkhead 1 (FOXC2) plays a key role in metastasis and is associated with aggressive basal-like breast cancers. / S.A. Mani, J. Yang, M. Brooks, G. Schwaninger, A. Zhou, N. Miura, J.L. Kutok, K. Hartwell, A.L. Richardson, R.A. Weinberg // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. - 2007. - Vol. 104. -P.10069-10074.

87. Massague J. TGF-ßeta signalling in context / J. Massague // Nat Rev Mol Cell Biol. - 2012. - Vol. 13, №10. - P. 616-630. doi: 10.1038/nrm3434

88. McDonald O.G. Genome-scale epigenetic reprogramming during epithelial-to-mesenchymal transition. / O.G. McDonald, H. Wu, W. Timp, A. Doi, A.P. Feinberg // Nat. Struct. Mol. Biol. - 2011. - Vol. 18. - P. 867-874.

89. Medici D. Cooperation between snail and LEF-1 transcription factors is essential for TGF-ß1-induced epithelial-mesenchymal transition. / D. Medici, E.D. Hay, D.A. Goodenough // Mol Biol Cell. - 2006. - Vol. 17. - P. 18711879.

90. Meerbrey K.L. The pINDUCER lentiviral toolkit for inducible RNA interference in vitro and in vivo. / K.L. Meerbrey, G. Hu, J.D. Kessler et al. // Proc Natl Acad Sci USA. - 2011. - Vol. 108 (9). - P. 3665-3670. doi: 10.1073/pnas.1019736108

91. Melosky B. Treatment algorithms for patients with metastatic non-small cell, non-squamous lung cancer // Front Oncol. - 2014. - Vol. 29 (4). - P. 256. doi: 10.3389/fonc.2014.00256

92. Mineta K. Predicted expansion of the claudin multigene family. / K. Mineta, Y. Yamamoto, Y. Yamazaki, H. Tanaka, Y. Tada, K. Saito, A. Tamura, M.

Igarashi, T. Endo, K. Takeuchi, S. Tsukita // FEBS Lett. - 2011. - Vol. 585. - P. 606-612

93. Mitsudomi T. Mutations of ras genes distinguish a subset of non-small-cell lung cancer cell lines from small-cell lung cancer cell lines. / T. Mitsudomi, J. Viallet, J.L. Mulshine, R.I. Linnoila, J.D. Minna, A.F.Gazdar // Oncogene. -1991. - Vol. 6 (8). -P. 1353-1362

94. Murayama M. Musashi-1 suppresses expression of Paneth cell-specific genes in human intestinal epithelial cells. / M. Murayama, R. Okamoto, K. Tsuchiya, J. Akiyama, T. Nakamura et al. // J. Gastroenterol. - 2009. - Vol. 44. - P. 173182.

95. Muto J. RNA-Binding Protein Musashi1 Modulates Glioma Cell Growth through the Post-Transcriptional Regulation of Notch and PI3 Kinase/Akt Signaling Pathways. / J. Muto, T. Imai, D. Ogawa, et al. // Plos One. - 2012. -Vol. 7(3).- e33431. doi: 10.1371/journal.pone.0033431.

96. Nakamura M. Musashi, a neural RNA-binding protein required for Drosophila adult external sensory organ development. / M. Nakamura, H. Okano, J.A. Blendy, C. Montell // Neuron. - 1994. - Vol. 13. - P. 67-81/

97. Oft M. TGFß signaling is necessary for carcinoma cell invasiveness and metastasis. / M. Oft, K.H. Heider, H. Beug // Curr. Biol. - 1998. - Vol. 8. - P. 1243-1252.

98. Okabe M. Translational repression determines a neuronal potential in Drosophila asymmetric cell division. / M. Okabe, T. Imai, M. Kurusu, Y. Hiromi, H. Okano // Nature. - 2001. - Vol. 411. - P. 94-98

99. Oliver T. G. Chronic cisplatin treatment promotes enhanced damage repair and tumor progression in a mouse model of lung cancer. / T.G. Oliver, K.L. Mercer, L. C. Sayles,et al. // Genes Dev. - 2010. - Vol. 24. - P. 837-852.

100. Onn A. Development of an orthotopic model to study the biology and therapy of primary human lung cancer in nude mice. / A. Onn, T Isobe, S Itasaka, W Wu,

MS O'Reilly, W Ki Hong, IJ Fidler, RS Herbst // Clin Cancer Res. - 2003. -Vol. 9 (15). - P. 5532-5539.

101. Oskarsson T. Breast cancer cells produce tenascin C as a metastatic niche component to colonize the lungs. / T. Oskarsson, S Acharyya, XH Zhang et al. // Nat Med. - 2011. - Vol. 17 (7). - P. 867-874.

102. Paez J. G. EGFR mutations in lung cancer: correlation with clinical response to gefitinib therapy. / J.G. Paez, PA Jänne, JC Lee, et al. // Science. - 2004. - Vol. 304. - P. 1497-1500.

103. Pao W. EGF receptor gene mutations are common in lung cancers from "never smokers" and are associated with sensitivity of tumors to gefitinib and erlotinib. / W. Pao, V. Miller, M. Zakowski et al. // Proc. Natl Acad. Sci. USA. - 2004. -Vol. 101. - P. 13306-13311.

104. Park C.Y. An novel inhibitor of TGF-ß type I receptor, IN-1130, blocks breast cancer lung metastasis through inhibition of epithelial-mesenchymal transition. / C.Y. Park, K.N. Min, J.Y. Son, S.Y. Park, J.S. Nam, D.K. Kim, Y.Y. Sheen // Cancer Lett. - 2014. - Vol. 351 (1). - P. 72-80. doi: 10.1016/j.canlet.2014.05.006

105. Park S.M. Musashi-2 controls cell fate, lineage bias, and TGF-ß signaling in HSCs. / S.M. Park, R.P. Deering, Y. Lu et al. // J Exp Med. - 2014. - Vol. 211 (1). - P. 71-87. doi: 10.1084/jem.20130736.

106. Peinado H. Snail, Zeb and bHLH factors in tumour progression: an alliance against the epithelial phenotype? / H. Peinado, D. Olmeda, A. Cano // Nat. Rev. Cancer. - 2007. - Vol. 7. - P. 415-428.

107. Prat A. Genomic analyses across six cancer types identify basal-like breast cancer as a unique molecular entity. / A. Prat, B. Adamo, C. Fan et al. // Sci Rep. - 2013. - Vol. 3. - P. 3544. doi: 10.1038/srep03544.

108. Rastaldi M.P. Epithelial-mesenchymal transition and its implications for the development of renal tubulointerstitial fibrosis. / M.P. Rastaldi / J Nephrol. -

2006. - Vol. 19. - P.407-412. 109. Reichert M. The PDZ domains of zonula occludens-1 induce an epithelial to mesenchymal transition of Madin-Darby canine kidney I cells. Evidence for a role of betacatenin/Tcf/Lef signaling. / M. Reichert, T. Muller, W. Hunziker // J Biol Chem. - 2000. - Vol. 275. - P. 9492-9500

110. Rezza A. The overexpression of the putative gut stem cell marker Musashi-1 induces tumorigenesis through Wnt and Notch activation. / A. Rezza , S. Skah, C. Roche, J. Nadjar, J. Samarut, M. Plateroti // J Cell Sci. - 2010. - Vol. 123 (Pt 19). - P.3256-3265.

111. Rikova K. Global survey of phosphotyrosine signaling identifies oncogenic kinases in lung cancer. / K. Rikova, G.Ailan, Z. Qingfueng et al. // Cell. - 2007.

- Vol. 131. - P. 1190-1203.

112. Rock J. R. Airway basal stem cells: a perspective on their roles in epithelial homeostasis and remodeling. / J. R. Rock, S. H. Randell, B. L. Hogan et al. // Dis. Model. Mech. - 2010. - Vol. 3. - P. 545-556.

113. Rowbotham S. P. Diverse cells at the origin of lung adenocarcinoma. / S. P. Rowbotham, C. F. Kim // Proc. Natl Acad. Sci. USA. - 2014. - Vol. 111. - P.

4745-4746.

114. Saeed A.I. TM4: a free, open-source system for microarray data management and analysis. / A.I. Saeed, V. Sharov, J. White et al. // Biotechniques. - 2003.

- Vol. 34 (2). - P. 374-378.

115. Sakakibara S. Rna-binding protein Musashi2: developmentally regulated expression in neural precursor cells and subpopulations of neurons in mammalian CNS. / S. Sakakibara, Y. Nakamura, H. Satoh, H. Okano // J Neurosci. - 2001. - Vol. 21 (20). - P. 8091-8107. 116. Sánchez-Tilló E. ß-catenin/TCF4 complex induces the epithelial-to-mesenchymal transition (EMT)-activator ZEB1 to regulate tumor invasiveness. / E. Sánchez-Tilló, O. de Barrios, L. Siles, M. Cuatrecasas, A. Castells A.,

Postigo // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. - 2011. - Vol. 108. - P. 19204-19209. 117. Santos E. Malignant activation of a K-ras oncogene in lung carcinoma but not in normal tissue of the same patient. / E. Santos, D. Martin-Zanca, E.P.Reddy et al. // Science. - 1984. - Vol. 223. - P. 661-664. 118. Shamir E.R. Adhesion in mammary development: novel roles for E-cadherin in individual and collective cell migration. / E.R. Shamir, A.J. Ewald // Curr Top Dev Biol. - 2015. - Vol. 112. - P. 353-382. 119. Shepherd F. A. Erlotinib in previously treated non-small-cell lung cancer. / F. A. Shepherd, P. J. Rodrigues, T. Ciuleanu et al. // N. Engl. J. Med. - 2005. - Vol. 353. - P. 123-132.

120. Siddall N.A. The RNA-binding protein Musashi is required intrinsically to maintain stem cell identity. / N.A. Siddall, E.A. McLaughlin, N.L. Marriner, G.R. Hime // P Natl Acad Sci USA. - 2006. - Vol. 103. - P. 8402-7

121. Siegel R. Cancer statistics, 2013. / R. Siegel, D. Naishadham, A. Jemal // Cancer J Clin. - 2013. - Vol. 63 (1). - P. 11-30.

122. Singh A. EMT, cancer stem cells and drug resistance: an emerging axis of evil in the war on cancer. / A. Singh, J. Settleman // Oncogene. - 2010. - Vol. 29 (34). - P. 4741-4751.

123. Sitnicka E. Transforming growth factor beta 1 directly and reversibly inhibits the initial cell divisions of long-term repopulating hematopoietic stem cells. / E. Sitnicka, F.W. Ruscetti, G.V. Priestley, N.S. Wolf, S.H. Bartelmez // Blood. -1996. - Vol. 88. - P. 82-88

124. Spears E. A novel double-negative feedback loop between adenomatous polyposis coli and musashi1 in colon epithelia. / E. Spears, K. L. Neufeld // J. Biol. Chem. - 2011. - Vol. 286. - P. 4946-4950.

125. Sun N. Isocitrate dehydrogenase 1 is a novel plasma biomarker for the diagnosis of non-small cell lung cancer. / N. Sun, Z. Chen, F. Tan et al. // Clin. Cancer Res. - 2013. - Vol. 19. - P. 5136-5145.

126. Sureban S.M. Knockdown of RNA binding protein musashi-1 leads to tumor regression in vivo. / S.M. Sureban, R. May, R.J. George, et al. // Gastroenterology. - 2008. - Vol. 134 (5). - P. 1448-1458.

127. Takahashi T. p53: a frequent target for genetic abnormalities in lung cancer. / T. Takahashi, M.M. Nau, I.Chiba et al. // Science. - 1989. - Vol. 246 (4929). - P. 491-494

128. Tam W.L. The epigenetics of epithelialmesenchymal plasticity in cancer. / W.L. Tam, R.A. Weinberg // Nat Med. - 2013. - Vol. 19 (11). - P. 1438-49.

129. Tan F. Identification of isocitrate dehydrogenase 1 as a potential diagnostic and prognostic biomarker for non-small cell lung cancer by proteomic analysis. / F Tan, Y Jiang, N Sun, et al. // Mol. Cell Proteomics. - 2012. - Vol. 11. - M. 111008821.

130. Tata P. R. Dedifferentiation of committed epithelial cells into stem cells in vivo. / P.R. Tata, H Mou, A Pardo-Saganta, et al. // Nature. - 2013. - Vol. 503. - P. 218-223.

131. Taylor M.A. The pathophysiology of epithelial-mesenchymal transition induced by transforming growth factor-ß in normal and malignant mammary epithelial cells. / M.A. Taylor, J.G. Parvani, W.P. Schiemann // J. Mammary Gland Biol. Neoplasia. - 2010. - Vol. 15. - P. 169-190. 132. Thiery J.P. Complex networks orchestrate epithelial-mesenchymal transitions. / J.P. Thiery, J.P. Sleeman // Nat Rev Mol Cell Biol. - 2006.-Vol.7(2).-P.131-142.

133. Thiery J.P. Epithelial-mesenchymal transitions in tumour progression. / J.P. Thiery // Nat. Rev. Cancer. - 2002. - Vol. 2. - P. 442-454.

134. Thiery J.P. Epithelialmesenchymal transitions in development and disease. / J.P. Thiery, H. Acloque, R.Y. Huang, M.A. Nieto // Cell. - 2009. - Vol. 139. - P. 871-890.

135. Tibes R. Reverse phase protein array: validation of a novel proteomic

technology and utility for analysis of primary leukemia specimens and hematopoietic stem cells. / R. Tibes, Y.H. Qiu, Y. Lu, et al. // Mol Cancer Ther. - 2006. - Vol. 5 (10). - P. 2512-2521.

136. Tirino V. TGF-ß1 exposure induces epithelial to mesenchymal transition both in CSCs and non-CSCs of the A549 cell line, leading to an increase of migration ability in the CD133+ A549 cell fraction. / V. Tirino , R. Camerlingo, K. Bifulco, et al. // Cell Death Dis. - 2013. - Vol. 4. - e620. doi: 10.1038/cddis.2013.144.

137. Urtreger A.J. Fibronectin is distinctly downregulated in murine mammary adenocarcinoma cells with high metastatic potential. / A.J. Urtreger, S.E. Werbajh, F. Verrecchia, et al. // Oncol Rep. - 2006. - Vol. 16 (6). - P. 14031410.

138. Vaishnavi A. Oncogenic and drug-sensitive NTRK1 rearrangements in lung cancer. / A. Vaishnavi, M. Capelletti, A.T. Le, et al. // Nature Med. - 2013. -Vol. 19. - P. 1469-1472.

139. van Meer G. The tight junction does not allow lipid molecules to diffuse from one epithelial cell to the next. / G. van Meer, B. Gumbiner, K. Simons // Nature. - 1986. - Vol. 322. - P. 639-641.

140. Vincent T. A SNAIL1-SMAD3/4 transcriptional repressor complex promotes TGF-ß mediated epithelial-mesenchymal transition. / T. Vincent, E.P. Neve, J.R. Johnson et al // Nat Cell Biol. - 2009. - Vol. 11. - P. 943-950.

141. Visvader J. E. Cells of origin in cancer. / J. E. Visvader // Nature. - 2011. - Vol. 469. - P. 314-322.

142. Wang S. Transformation of the intestinal epithelium by the MSI2 RNA-binding protein. / S. Wang , N Li, M. Yousefi et al. // Nat Commun. - 2015. -Vol. 6. - P. 6517.

143. Wang X.Y. Musashi1 regulates breast tumor cell proliferation and is a prognostic indicator of poor survival. / X.Y. Wang, L.O. Penalva, H.Y. Yuan,

R.I. Linnoila, J.C. Lu, H. Okano, R.I. Glazer // Mol Cancer. - 2010. - Vol. 9

144. Weiss J. Frequent and focal FGFR1 amplification associates with therapeutically tractable FGFR1 dependency in squamous cell lung cancer. / J. Weiss, M.L. Sos, D. Seidel, et al. // Sci Transl. Med. - 2010. - Vol. 2. - P. 62. doi: 10.1126/scitranslmed.3001451.

145. Xi Q. A poised chromatin platform for TGF-ß access to master regulators. / Q. Xi, Z. Wang, A.I. Zaromytidou, et al. // Cell. - 2011. - Vol 147. - P. 1511-1524.

146. Xu C. Loss of Lkb1 and Pten leads to lung squamous cell carcinoma with elevated PD-L1 expression. / C. Xu, C.M. Fillmore, S. Koyama et al. // Cancer Cell. - 2014. - Vol. 25. - P. 590-604.

147. Yamamoto T. Reduced expression of claudin-7 is associated with poor outcome in non-small cell lung cancer. / T. Yamamoto, T.i Oshima, K. Yoshihara et al. // Oncol Lett. - 2010. - Vol. 1 (3). - P. 501-505.

148. Yamazaki S. Nonmyelinating Schwann cells maintain hematopoietic stem cell hibernation in the bone marrow niche. / S. Yamazaki, H. Ema, G. Karlsson, T. Yamaguchi, H. Miyoshi, S. Shioda, M.M. Taketo, S. Karlsson, A. Iwama and H. Nakauchi. // Cell. - 2011. - Vol. 147. - P. 1146-1158.

149. Yang J. Twist, a master regulator of morphogenesis, plays an essential role in tumor metastasis. / J. Yang, S.A. Mani, J.L. Donaher, S. Ramaswamy S et al. // Cell. - 2004. - Vol. 117. - P. 927-939.

150. Yi M. A fibronectin fragment inhibits tumor growth, angiogenesis, and metastasis. / M. Yi, E. Ruoslahti // Proc Natl Acad Sci USA. - 2001. - Vol. 98 (2). - P. 620-624.

151. Zavadil J. TGF-ß and epithelial-to-mesenchymal transitions. / J. Zavadil, E.P. Bottinger // Oncogene. - 2005. - Vol. 24. - P. 5764-5774.

152. Zhang X. Upregulated microRNA-143 transcribed by nuclear factor kappa B enhances hepatocarcinoma metastasis by repressing fibronectin

expression. / X. Zhang , S. Liu, T. Hu, S. Liu, Y. He, S. Sun.// Hepatology. -2004. - Vol. 50 (2). - P. 490-499. 153. Zheng S. A genetic mouse model for metastatic lung cancer with gender differences in survival. / S. Zheng, A.K. El-Naggar, E.S. Kim, J.M Kurie, G. Lozano // Oncogene. - 2007. - Vol. 26 (48). - P. 6896-6904.