Создание рекомбинантного аденовируса птиц CELO, экспрессирующего ген фибера вируса ССЯ-76 тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 16.00.03, кандидат ветеринарных наук Капитонов, Андрей Владимирович

• Капитонов, Андрей Владимирович
• кандидат ветеринарных наук
• 2004

Оглавление диссертации кандидат ветеринарных наук Капитонов, Андрей Владимирович

ПРИНЯТЫЕ СОКРАЩЕНИЯ б

ВВЕДЕНИЕ

1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Синдром снижения яйценоскости кур (ССЯ-76)

1.1.1. Описание заболевания и история открытия ССЯ

1.1.2. Эпизоотологические особенности

1.1.3. Экспериментальная инфекция

1.1.3.1. Патогенез

1.1.3.2. Передача возбудителя

1.1.3.3. Вирусоносительство и вирусовыделение

1.1.3.4. Симптомы

1.1.3.5. Патологоанатомические изменения

1.1.4. Антигенная активность вируса ССЯ

1.1.5. Профилактика синдрома снижения яйценоскости

1.2. Структурно-функциональная организация аденовирусов

1.2.1. Гексон

1.2.2. Пентон

1.2.3. Другие структурные белки (Ilia, V,

VII, VIII, IX, X-XII)

1.3. Аденовирус птиц CELO

1.3.1. Общая характеристика аденовируса

1.3.2. Структурно-функциональная организация генома аденовируса CELO

1.3.3. Эукариотические векторы на основе генома аденовируса птиц CELO

2.МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1. Материалы

2.1.1. Вирусы и бактериальные штаммы

2.1.2. Клеточные линии

2.1.3. Плазмидные векторы

2.1.4. Ферменты и другие реактивы

2.1.5. Животные

2.2. Методы

2.2.1. Выделение и очистка плазмидной ДНК

2.2.2. Выделение аналитических количеств плазмидной ДНК

2.2.3. Гидролиз ДНК специфическими эндодезоксирибонуклеазам

2.2.4. Фракционирование фрагментов ДНК методом электрофореза в агарозном

2.2.5. Препаративное разделение фрагментов ДНК и элюция их из геля

2.2.6. Лигирование фрагментов ДНК 52 & 2.2.7. Трансформация клеток Е. Coli

2.2.8. Определение нуклеотидной последовательности ДНК

2.2.9. Полимеразная цепная реакция

2.2.10. Синтез дезоксиолигонуклеотидов 55 'Ь 2.2.11. Трансфекция клеток линии LMH для получения рекомбинантных аденовирусов

2.2.12. Накопление вирусов

2.2.13. Очистка и концентрирование аденовирусов

2.2.14. Титрование вирусов

2.2.15. Выделение вирионной ДНК

2.2.16. Выделение ДНК из клеток, зараженных аденовирусом

2.2.17. Гидрофобная хроматография

2.2.18. Реакция гемагглютинации

2.2.19. Реакция торможения гемагглютинации

2.2.20. Получение гипериммунной сыворотки

2.2.21. Электрофорез белков в ПААГ-ДСН

PAGE -SDS)

2.2.22. Иммуноблоттинг (WESTERN BLOT IMMUNOASSAY)

2.2.23. Непрямой иммуноферментный анализ (Indirect ELISA)

3.РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ 65 3.1. Конструирование рекомбинантного аденовируса на основе генома СЕЮ

3.1.1. Получение гена фибера

3.1.2. Получение экспрессирующей кассеты, содержащей ген фибера

3.1.3. Получение и очистка рекомбинантного вируса CELO, несущего экспрессирующую кассету, содержащую ф ген фибера

3.1.4. Наращивание вируса CELO-Фибер в препаративных количествах

3.2. Разработка иммуноферментной системы детекции фибера ССЯ

3.2.1. Получение очищенного белка фибера ССЯ-7 6 методом ионообменной хроматографии

3.2.2. Анализ полученной фракции очищенного белка фибера ССЯ

3.2.3. Получение гипериммунной сыворотки и проверка ее специфичности

Щ 3.3. Экспрессия фибера ССЯ-7 6 рекомбинантным аденовирусом CELO-Фибер

3.4. Исследование гуморального иммунного ответа в организме лабораторных животных при инъекции им рекомбинантного вируса CELO-Фибер

4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ

ВЫВОДЫ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Создание рекомбинантного аденовируса птиц CELO, экспрессирующего ген фибера вируса ССЯ-76»

Актуальность проблемы.

Серьезной проблемой современного промышленного птицеводства являются заболевания, протекающие без ярко выраженных клинических признаков. К такой группе относится заболевание, возбудителем которого является утиный аденовирус, поражающий кур-несушек мясных и мясояичных пород в возрасте 24-32 недели. Данный вирус вызывает широко распространенное латентное заболевание кур-несушек, сопровождающееся снижением яйценоскости на 15-40 % и размягчением скорлупы яиц, что наносит огромный экономический урон птицеводческим хозяйствам. Со времени подробного описания болезни синдрома снижения яйценоскости - ССЯ (EDS - Egg drop syndrome-76), сделанного Eck и др., и открытия самого вируса появились многочисленные сообщения о вспышках этой болезни во многих странах мира: Нидерландах, Северной Ирландии, Японии, Англии, Франции, Бельгии, Италии, США, Ираке и нашей стране. В настоящее время профилактика против данного вида заболевания осуществляется за счет применения комплекса санитарно-гигиенических мер, а также использования специфических препаратов отечественного и зарубежного производства.

Для профилактики различных инфекционных заболеваний в ветеринарии используется вакцинация. В настоящее время широко распространены вакцины, полученные традиционными методами (живые вакцины, инактивированные вакцины, субъединичные антигены и др.). Однако наиболее привлекательной для ученых всего мира является возможность получения живой генно-инженерной вакцины. Рекомбинантный вирусный либо бактериальный вектор, содержащий смысловой ген, который при введении в организм обеспечивает экспрессию большого количества протективного антигена.

В настоящее время в качестве векторов для экспрессии генов в клетках млекопитающих in vivo и in vitro широко применяются аденовирусы (Ад) . Исследуется применение векторов на основе Ад человека и животных в качестве живых рекомбинантных вакцин против для ветеринарии. В последние годы были осуществлены попытки создания векторов на основе Ад животных, в частности, на базе генома аденовируса птиц 1 серотипа CELO. Данная векторная система представляется перспективной, поскольку вирус CELO обеспечивает эффективную доставку генов в клетки птиц, которые являются для него пермиссивной системой, не является патогенным для кур и не вызывает заболеваний при экспериментальном заражении. Важным достоинством CELO является его способность к высокопродуктивной инфекции в куриных эмбрионах, что позволяет осуществлять технологичное наращивание аденовируса в препаративных количествах.

Для практического применения вектора большое значение имеет высокая пакующая емкость генома CELO, а также возможность направленной модификации элементов капсида вируса для повышения тропности CELO по отношению к различным типам клеток.

Цель и задачи исследования

Целью настоящей работы являлось создание рекомбинантного вируса CELO, содержащего ген фибера вируса ССЯ-7 6 под контролем CMV-промотора, анализ экспрессии и антигенных свойств рекомбинантного белка, изучение гуморального иммунного ответа в организме лабораторных животных после введения им рекомбинантного вируса.

В процессе работы предстояло решить следующие задачи:

1. Конструирование экспрессирующей плазмидной кассеты, несущей ген фибера ССЯ-7 6

2. Создание челночной плазмидной конструкции для получения вектора на основе аденовируса птиц CELO

3. Получение рекомбинантного аденовируса CELO-Фибер

4. Получение и характеристика очищенного белка фибера ССЯ-7 6

5. Разработка иммуноферментной тест-системы для определения антигена фибера вируса ССЯ-7 6.

6. Детекция рекомбинантного антигена вируса ССЯ-7 6 в аллантоисе куриных эмбрионов, зараженных вирусом CELO-Фибер

7. Определение уровня специфических антител к фиберу ССЯ-7 6 в организме лабораторных животных при введении им рекомбинантного вируса CELO-Фибер.

Научная новизна и практическая значимость.

В результате проведенной работы впервые получен рекомбинантный вирус CELO-Фибер.

Создан банк плазмид, содержащих ген фибера в различных прокариотических и эукариотических плазмидных векторах.

Впервые получен препарат белка фибера ССЯ-7 6, очищенный методом двухстадийной гидрофобной хроматографии, определена его молекулярная масса и локализация в полипептидном спектре вируса ССЯ-7 6.

Впервые разработана иммуноферментная тест-система для определения антигена фибера вируса ССЯ-7 6.

В ходе работы была показана эффективная экспрессия и функциональная активность гена фибера, встроенного в геном CELO.

Показана способность рекомбинантного аденовируса CELO-Фибер индуцировать гуморальный иммунный ответ на экспрессируемый ген белка фибера

Работа представляет не только научный интерес, но и предполагает использование полученного рекомбинантного аденовируса CELO-Фибер для профилактики синдрома снижения яйценоскости у кур. Кроме того, векторы на основе CELO могут быть использованы для создания живых генно-инженерных вакцин для профилактики других инфекционных заболеваний птиц.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

7.7. Синдром снижения яйценоскости кур (ССЯ-76)

Заключение диссертации по теме «Ветеринарная эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология», Капитонов, Андрей Владимирович

выводы

1.Впервые сконструирован рекомбинантный аденовирус птиц CELO, экспрессирующий ген белка фибера вируса ССЯ-7 6. Показана экспрессия белка фибера ССЯ-76 в аллантоисной жидкости куриных эмбрионов, зараженных рекомбинантнтным вирусом CELO-Фибер.

2.Отработаны условия получения рекомбинантного вируса CELO-Фибер в куриных эмбрионах в препаративных количествах и технология очистки вирусной суспензии (титр очищенного препарата рекомбинантного вируса CELO-Фибер - 1-5-Ю10БОЕ/мл)

3. Впервые выделен в препаративных количествах и очищен белок фибера вируса ССЯ-7 6. Определена молекулярная масса белка и идентифицировано его положение в электрофоретическом спектре белков вируса ССЯ-76

4. Разработана иммуноферментная система детекции антигена фибера вируса ССЯ-7 6

5. Показано наличие специфических антител к белку фибера ССЯ-76 в сыворотке крови лабораторных животных (мыши линии Balb/c) иммунизированных рекомбинантным вирусом CELO-Фибер. Титр антител при однократной инъекции составил 1:1600 - 1:3200

Список литературы диссертационного исследования кандидат ветеринарных наук Капитонов, Андрей Владимирович, 2004 год

1. Белоусова Р.В., Третьякова И.В., ЛобоваТ.П., Исакова В. Р. Иммуноферментный метод диагностики аденовирусной инфекции крупного рогатого скота. // Достижения науки и техники АПК, М.:Агропромиздат, 1990, - стр.25-27.

2. Бурцев В. И. и др. Ветеринария, М. - 1985, - 175

3. Григорьев В.П., Хилько С.Н., Тихоненко Т. И. Условия стабильности четвертичной структуры и антигенная активность гексона аденовирусов. // Биохимия 1985 - т.50, - стр.258-263

4. Дебабов В. Г. ДНК-вакцинация и генотерапия на основе транзиетной экспрессии нуклеиновых кислот в соматических клетках человека и животных. // Молекулярная биология 1997 т. 31 № 1 стр. 209-215

5. Дяченко Н.С., Нас И., Беренчи Д. и др. Аденовирус, клетка, организм. // Киев: Наук, думка,1988, стр.23

6. Иванов А.Е.,Верховская Л.В.,Хилько С.Н.,Зубов В.П.: «Твердокаркасные широкопористые сорбенты для гидрофобной хроматографии белков»; биоорганическая химия, т 16, №8, 1990

7. Ковалишин Г.Г., Ванцак Н.П., Дяченко Н.С. и др. Сравнительное изучение гексонов некоторых аденовирусов рода Mastadenovirus.// Микробиол. журн., 1986, т.48, Т.2, стр.50-55.

8. Маниатис Т., Фрич Э., Сембрук Дж. Молекулярное клонирование. М.1984.

9. Орлова Т.Г., Я.С.Ляндесберг; под ред. В.Н.Сюрина. Диагностика вирусных болезней животных /пер с польского-Москва-Колос-1980-С. 121-127.

10. Фомина Н.В. Аденовирусные инфекции животных. М., Колос, 1995

11. Adair В.М. Differences in cytopathology between avian adenovirus serotypes. Avian Pat -1979 - v. 8 - p. 2 -133

12. Banchereau J., and Steinman R.M. Dendritic cells and the control of immunity. Nature 1998 - v. 392, - p. 245-252

13. Bartha A. et. al Avian Pathol, 1982, - v. 11, - p. 3 -511

14. Baxendale W. et. al Proc Meet Ital - Avian Pathol, - 1979, - p. 12-13.

15. Baxendale, W., D. Lutticken, R. Hcin, and I. McPher-son. The results of field trials conducted with an inac-tivated vaccine against the egg dropsyndrome 76 (EDS 76) . Avian Pathol - 1980 -v.9 - p. 77-91.

16. Boulanger P., Lemay P., Blair G. Characterization of adenovirus protein IX.// J. Gen. Virology 1979, - v. 44, - p. 783-800.

17. Boulanger P.,Puvlon P. Large-scale preparation of soluble adenovirus hexon, penton and fiber antigens in highly purified form.// Eur. J. Blochem., 1973, - v. 39, N1 - p.37-42.

18. Bruno-Romera О. и соавт. PNAS 2001 - v. 98 - p. 11491-11496

19. Burnett R.M., GrutterM.G., White J.L. The structure of the adenovirus capsid. 1 An envelope model of hexon at 6 A resolution. // J. Mol. Biol., 1985 - v. 185, N1, - p. 105-142.

20. Chen S.C., Jones D.H., Fynan E.F., Farrar G.H., Clegg J.C., Greenberg H.B., and Herrmann J.E. J. Virol. 1998 - v. 72 - p. 5757-5761

21. Chiocca S., Identification of a novel antiapoptotic protein, GAM-1, encoded by the CELO adenovirus. /Adam Baker, Matt Cotten.//, Journal of Virology 1997 - v. 80, - p. 3168-3177.

22. Chiocca S., Kurzbauer R., Schaffner J., Baker A., Maunter V., Cotten M. The complete DNA sequence and genomic organization of the avian adenovirus CELO. // J. Virol., 1996, - v. 70, -p. 2939-2949.

23. Clarke B.E., Improved immunogeneticity of a peptide epitope after fusion to hepatits В core proteins /S.E.Newton, A.R.Carrol, M.J. Francis et. al//,- Nature 1987 - v. 330 - p. 381-384

24. Condon C., Watkins S.C., Celluzzi C.M., Thompson К., and Falo L.D. Nat. Med. - 1996 -v. 2 - p. 1122-1128

25. Cook, J.K.A., and J.H. Darbyshire. Epidemio-ilogical studies with egg drop syndrome 1976 (ССЯ-76) virus. Avian Pathol - 1980 - v. 9 - p. 437-443.

26. Cook, J.K.A., and J.H. Darbyshire. Longitudinal studies on the egg drop syndrome 1976 (EDS 76) in the fowl following experimental infection at 1-day old. Avian Pathol - 1981 -v. 10 - p. 449-459.

27. Cotten M, Chicken adenovirus (CELO virus) particles augment receptor-mediated DNA delivery to mammalian cells and yield exceptional levels of stable transformants./ Wagner E, Zatloukal K, Birnstiel ML.// J Virol 1993 v.- 67(7), p. 3777-3785

28. Cowen B, Avian adenoviruses: effect on egg production, shell quality, and feed consumption. /Calnek BW, Menendez NA, Ball RF.// Avian Dis., -1978, v. 22(3), - p. 459-470.

29. Devaux Ch., Crystallisation, enzymatic cleavage and polarity of the Ad2 fiber. /Calllet-Boudln M.L., Jacrot В., Boulangert P. // Virology 1987 -- v. 161 - p.121-128

30. Eisenbraun M.D., Examination of parameters affecting the elicitation of humoral immune responses by particle bombardment-mediated genetic immunization./ Fuller D.H., and Haynes J.R. //. DNA Cell Biol. 1993 - v. 12 - p. 791797

31. Fennelly GJ Mucosal DNA vaccine immunization against measles with a highly attenuated Shigella f lexneri vector /, Khan SA, Abadi MA, Wild TF, Bloom BR. //. J. Immunol. 1999 - v. 62, - p. 1603-10.

32. Francois A., Construction of avian adenovirus CELO recombinants in cosmids./ Eterradossi N., Delmas В., Payet V., Langlois P.// J Virol 2001 v.- 75, p. 5288-5301.

33. Frankel F.R. Induction of cell-mediated immune responses to human immunodeficiency virus type 1 Gag protein by using Listeria monocytogenes as a live vaccine vector. /Hegde S, Lieberman J, Paterson Y.//J. Immunol. 1995 -v. 155, - p. 4775-82

34. Fynan E.F., Webster R.G., Fuller D.H., Haynes J.R., Santoro J.C., and Robinson H.L. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 1993 v. 90, - p. 1147811482

35. Ginsburg H.S. Adenovirus structural proteins. // Comprehensive virology, 1979, - v. 13, New York, - p. 409-457

36. Gough R. E. et. al Vet Res, - 1982, - v. 110, # 12. - p. 275.

37. Graham F.L. and Prevec L. Manipulation of adenovirus vectors. // Methods in Mol.Biol 1994 - v.-7, - p. 109-127. (Ed.),

38. Graham F.L. and van der Eb A.J. A new technique for the assay of infectivity of human adenovirus 5 DNA.// Virology 1973 - v. 52, - p. 456-467

39. Green K.Y., Wold W.S.M. Human adenoviruses: growth, purification and transfection assay. // Methods Enzymology 1980 - v. 80, - p.425-431

40. Haas J., Park E.C., Seed В. Curr. Biol. -1996 - v. 6, - p. 315-324

41. Hanahan D. Studies of transformation of Escherichia coli with plasmids. // Journal of Molecular Biology, 1983, - v. 166, - p. 557580.

42. Hengge U.R., Chan E.F., Foster R.A., Walker P.S., and Vogel J.C. Nat. Genet. - 1995 - v. 10, - p. 161-166

43. Hess M., Blocker H., Brandt P. The complete nucleotide sequence of the egg drop syndrome virus: an intermediate between Mastadenoviruses and Aviadenoviruses // Virology. 1997. - Vol. 238. - P. 145-156

44. Hess M., Cuzange A., Ruigrok R.W.H., Chroboczek J., Jacrot B. The avian adenovirus penton: two fibres and one base. // J. Mol. Biol., 1995, v.- 252, pp.- 379-385.

45. Holmes D., Quigley M. A rapid boiling method for the preparation of bacterial plasmids. // Anal. Biochem., 1981, v.-114, p.- 193.

46. Ishlbashi M., Hiroshi Y. / Animal adenoviruses. In Ginsberg H.S. (ed)//New York: Plenum Press, 1984, - p. 497-562.

47. Iurov GK, . Related Articles, Links. Analysis of core virion polypeptides from the pathogen causing chicken egg-drop syndrome/ Dadykov VA, Neugodova GL, Naroditskii BS// Vopr Virusol. 1998 Sep-Oct; v. 43(5) - p. 232-5.

48. Iwasaki A, Torres C.A., Ohashi P.S., Robinson H.L., and Barber B.H. J. Immunol. 1997 v. 159,- p. 11 14

49. Jason Call "Ad5/7 capsid chimera: Fiber replacement alters receptor tropism without affective chimeri VN epitopes", journal Virorogy- 1996 p.2116-2123

50. Kaleta E T. et. al Avian Pathol -, 1980 -v. 9 (4) - p. 587

51. Kawaguchi T, . Establishment and characterization of a chicken hepatocellular carcinoma cell line, LMH. /Nomura K, Hirayama Y, Kitagawa T // Cancer Res 1987 - - v. 47(16), -p. 4460-4464.

52. Kohler H,Loupal G Zum Egg Drop Syndrom des Huhnes.2 Mittilunge, Pathologische, Anatomiz und Histopatholoie //Dt.tierarztl. Wschr. 1982. -v. 89. - p. 14-16

53. Kumar NS, Detection of egg drop syndrome 1976 virus by polymerase chain reaction and study of its persistence in experimentally infected layer birds./ Kataria JM, Koti M, Dhama K, Toroghi R.//Acta Virol. 2003 - v. 47(3) - p. 79-84

54. Kyhse-Andersen, J.: Electroblotting of multiple gels: a simple apparatus without buffer tank for rapid transfer of proteins frompolyacrilamide to nitrocellulose.// J Blophys Blochem Methods, 1984, - v. 10, - p. 203-209.

55. Laemmli U.K. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4. // Nature 1970 - v. 227, - p.680-685

56. Laver WG,. Purification and properties of chick embryo lethal orphan virus (an avian adenovirus). /Younghusband HB, Wrigley NG // Virology, 1971 - v. 45(3), - p. - 598-614.

57. Legerski R., Robberson D. Analysis and optimization of recombinant DNA joining reactions. // Journal of Molecular Biology, 1985, v. 181, - p. 297-312.

58. Lehrmann, H., and M. Cotten. Characterization of CELO virus proteins that modulate the pRb/E2F pathway. // J. Virol., - 1999, v.- 73, pp.-6517-6525.

59. Li P., Bellett A.J.D., Parish C.R. The structural proteins of chick embryo lethal orphan virus (fowl adenovirus type 1). // J. Gen. Virol., 1984, v.- 65, - p. - 1803-1815.

60. Malkinson, М., and Y. Weisman. 1980. Serological survey for the prevalence of antibodies to egg drop syndrome 1976 virus in domesticated and wild birds in Israel. Avian Pathol - v. 9 - p. 421-426.

61. Malkinson, M., and Y. Weisman. Serological survey for the prevalence of antibodies to egg drop syndrome 1976 virus in domesticated and wild birds in Israel. Avian Pathol - 1980 - v. 9 -p. 421-426.

62. Mar T. Essor и соавт. -. Vaccine 2003 - v. 21, - p. 419-430 ,

63. McCracken, R.M., and J.B. McFerran. Experimental reproduction of the egg drop syndrome 1976 with a hemagglutinating adenovirus. Avian Pathol - 1978 - v. 7 - p. 83-490.

64. McFerran, J.B., Studies on a depressed egg production syndrome in Northern Ireland. /R.M. McCracken, E.R. McKillop, M.S. McNulty, and D.S. Collins.//. Avian Pathol - 1978 - v. 7 - p. 3547.

65. Meulemans G., Isolation of an adeno-like virus from laying chickens affected by egg drop syndrome 1976. /D. Dekegel, J. Peeters, E. Van Meirhaeghe, and P. Halen. // Vlaams Diergeneeskd Tijdschr - 1979 - v. 2 - p. 151-157.

66. Michou A. Mutational analysis of the avian adenovirus CELO, which provides a basis for gene delivery vectors. /Lehrmann H., Saltik M., Cotten M // J Virol 1999 - v. 73, - p. 1399-1410.

67. Modugno G. Et.al. Riv Zootech evet, 1982, -v. 10, - p. 5-297.

68. Nichols W.W., Potential DNA vaccine integration into host cell genome. /Ledwith B.J., Manam S.V., and Troilo P.J. //. Ann. N.Y. Acad. Sci. 1995 v. 772, - p. 30-39

69. Okuda Y, Experimental infection of specific-pathogen-free chickens with serotype-1 fowl adenovirus isolated from a broiler chicken with gizzard erosions. /Опо M, Yazawa S, Shibata I, Sato S.// Avian Dis., 2001, - v. 45(1), - p. 19-25.

70. Okuda Y, Pathogenicity of serotype 1 fowl adenovirus in commercial broiler chickens. /Опо M, Yazawa S, Imai Y, Shibata I, Sato S.// Avian Dis., 2001, - v. 45(4), - p. 819-827.

71. Опо M, Epizootic outbreaks of gizzard erosion associated with adenovirus infection in chickens. /Okuda Y, Yazawa S, Shibata I, Tanimura N, Kimura K, Haritani M, Mase M, Sato S // Avian Dis., -2001, v. 45(1), - p. 268-275.

72. Raz E., Carson D.A., Parker S.E., Parr T.B., Abai A.M., Aichinger G., Gromkowski S.H., Singh M., Lew D., Yankauckas M/A. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. - 1994 - v. 91, - p. 9519-9523

73. Robinson H.LProtection against a lethal influenza virus challenge by immunization with a haemagglutinin-expressing plasmid DNA. / Hunt L.A., and Webster R.G.//. Vaccine 1993 v. 11, -p. 957-960

74. Robinson HL, Pertmer TM. DNA vaccines for viral infections: basic studies and applications.- Adv Virus Res. 2000 - v. 55 - p. 1-74

75. Rohn K., "Identification and characterization of penton base and pVIII protein of ССЯ-76 virus"; /C.Prussas, G.Monreal, M. Hess //, Virus Reseach 1997 - v. 47, - p. 59-65

76. Russel W.G., Precious B. Nuclelk acid binding properties of adenovirus structural polypeptides. // J.Gen. Virol., 1982, - v. 63,- p. 69-79.

77. Sanger F., DNA sequencing with chain-terminating inhibitors. /Nicklen S., Coulson A.//

78. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1977, - v. 74, - p. 5463-5467.

79. SatoY., Immnostimulatory DNA sequences necessary for effective intradermal gene immunization /Roman M, Tighe H. et al.// Science- 1996 v. 273 - p. 352-354

80. Schloer G.M et.al. Connection Annal., 1980,- v. 81, p. 5025 -189.

81. Shenk T. Adenoviridae: the viruses and their replication. // Fields virology. / Eds Fields B.N., Knipe D.M., Howley P.M. Fhiladelfhia: 3rd ed. Lippincott-Raven Publishers, 1996, - p. 2111-2148.

82. Smyth, J. A., A study of the pathogenesis of egg drop syndrome in laying /М. A. Flatten, and J. B. McFerran.// Avian Pathol - 1988 - v. 17 -, p. 653-666

83. Tacket C.O. и соавт. Clin. Immunol. 2000 v. 97, - p. 146-153,

84. Takai, S., M. Higashihara, and M. Matumoto. Purification and hemagglutinating properties of egg drop syndrome 1976 virus. Arch Virol -1984- v. 80 - p. 59-67.

85. Taniguchi, T, S. Pathological changes in laying hens inoculated with the JPA-1 strain of egg drop syndrome 197 6 virus. /Yamaguchi, M.

86. Maeda, H. Kawa-mura, andT. Horiuchi//.Natl Inst Anim Health Q (Tokyo) 1981 - v. 21, - p. 83-93

87. Ulmer J.В., Donnelly J.J., Parker S.E., Rhodes G.H., Feigner P.L., Dwarki V.J., Gromkowski S.H., Deck R.R., De Witt C.M., Friedman А., и соавт. Science - 1993 - v. 259, - p. 1745-1749

88. Van der Eb A.J., Structural properties of adenovirus DNAs. /van Kesteren J.W., van Bruggen E.F.J.// Biochem Biophys Acta 1969 v.- 182, p.-530-541

89. Washietl S., Eisenhaber F. Reanotation of the CELO genome characterizes a set of previously unassigned open reading frames and points to novel modes of host interaction in avion adenoviruses. // BMC Bioinformatics, 2003

90. Wigand R, Adenoviridae: second report./Bartha A, Dreizin RS, Esche H, Ginsberg HS, Green M, Hierholzer JC, Kalter SS, McFerran JB, Pettersson U, Russell WC, Wadell G.// Intervirology. 1982;- v. 18 (4) p. 169-76.

91. Wolff J. A., Direct gene transfer into mouse muscle in vivo. /Malone R.W., Williams P., Chong W., Acsadi G., Jani A., and Feigner P.L.// Science 1990 v. 247, - p. 1465-1468

92. Xiang Z., and Ertl H.C. Manipulation of the immune response to a plasmid-encoded viral antigen by coinoculation with plasmids expressing cytokines. Immunity - 1995 - v. 2, - p. 129-135

93. Yamaguchi S, Imada T, Kawamura H, Taniguchi T, Kawakami M. Pathogenicity and distribution of egg-drop syndrome-1976 virus (JPA-1) in inoculated laying hens. Avian Dis, 1981, v. 25,- p. 3 -642.

94. Yamaguchi S,. Survey on antibody against egg drop syndrome-1976 virus among chicken flocks in Japan. /Imada T, Kawamura H, Horiuchi //T Natl1.st Anim Health Q (Tokyo) . 1982 Summer; v. 22(2) - p. 88-9.

95. Yates VJ, Fry DE. Observation on a chicken embryo lethal orphan (CELO) virus. // Am J Vet Res, 1957, v.- 18, pp.- 657-660.

96. Zanella A, The first stable variant of erythrocyte glucose-phosphate isomerase associated with severe hemolytic anemia. /Izzo C, Rebulla P, Perroni L, Mariani M, Canestri G, Sansone G, Sirchia G.// Am J Hematol. - 1980; -v. 9(1) - p. 1-11.

97. Zur Megede J., И соавт. Increased expression and immunogenicity of sequence-modified human immunodeficiency virus type 1 gag gene. /Chen M.C., Doe В., Schaefer M., Greer C.E., Selby M.//. J. Virol. 2000 v. 74, - p. 2628-2635