Создание новой эукариотической системы экспрессии бета-интерферона человека на основе рекомбинантного аденовируса птиц тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.07, кандидат биологических наук Черентаева, Евгения Александровна

• Черентаева, Евгения Александровна
• кандидат биологических наук
• 2009

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Черентаева, Евгения Александровна

ПРИНЯТЫЕ СОКРАЩЕНИЯ

ВВЕДЕНИЕ

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Вирусные системы доставки генов в клетки эукариот

1.2. Общая характеристика аденовирусов и их использование в качестве векторов для переноса генетической информации

1.2.1. Общая характеристика и классификация аденовирусов

1.2.2. Аденовирусы как векторы для переноса генетической информации

1.2.2.1. Векторы на основе аденовирусов человека

1.2.2.2. Векторы на основе аденовирусов животных и птиц

1.2.3. Аденовирус птиц CELO, его особенности, использование в качестве вектора

1.3. Общая характеристика бета-интерферона, механизмы действия, свойства и технология получения

1.3.1. Бета-интерферон и его функции

1.3.2. Производство бета-интерферона.

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ 41 2.1. МАТЕРИАЛЫ

2.1.1. Вирусы и бактериальные штаммы

2.1.2. Клеточные линии

2.1.3. Плазмидные векторы

2.1.4. Ферменты и другие реактивы

2.1.5. Лабораторные животные

2.1.6. Лабораторное оборудование 43 2.2. МЕТОДЫ

2.2.1. Выделение аналитических количеств плазмидной ДНК

2.2.2. Выделение препаративных количеств плазмидной

2.2.3. Гидролиз ДНК специфическими эндодезоксирибонуклеазами рестрикции

2.2.4. Обработка Фрагментом Кленова

2.2.5. Лигирование фрагментов ДНК

2.2.6. Трансформация клеток Е.соП

2.2.7. Приготовление компетентных клеток

2.2.8. Приготовление электрокомпетентных клеток Е.соН

2.2.9. Гомологичная рекомбинация в Е.соИ

2.2.10. Получение рекомбинантных аденовирусов

2.2.11. Накопление аденовирусов

2.2.12. Очистка и концентрирование аденовирусов

2.2.13. Титрование вирусов

2.2.14. Выделение ДНК из клеток, зараженных аденовирусом

2.2.15. Выделение вирионной ДНК

2.2.16. Окраска клеток метиленовым синим

2.2.17. Определение биологической активности бета-интерферона человека

2.2.18. Электрофорез белков в ПААГ-ДСН

2.2.19. Иммуноблотинг

2.2.20. Дегликозилирование рекомбинантного белка бета-интерферона человека

2.2.21. Количественное определение продукции белка бета-интерферона человека методом сэндвич-ИФА

2.2.22. Выделение бета-интерферона человека на №-ЫТА-агарозе

2.2.23. Выделение бета-интерферона человека на голубой сефарозе

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Исследование токсичности бета-интерферона человека для культуры клеток птиц

3.2. Получение рекомбинантных аденовирусов птиц СЕЬО-ИФН-Р и СЕШ-ИФН-РЫб

3.2.1. Создание челночных плазмидных конструкций, содержащих исходный и модифицированный ген бета-интерферона человека в составе экспрессирующей кассеты под контролем CMV-промотора

3.2.2. Получение плазмиды, несущей геном рекомбинантного аденовируса СЕЬО-ИФН-ß методом гомологичной рекомбинации в Е. coli

3.2.3. Получение аденовируса СЕЬО-ИФН-ß и CELO-ИФН

3.3. Продукция рекомбинантного бета-интерферона человека in vitro

3.3.1. Экспрессия гена бета-интерферона входящего в состав генома аденовирусов СЕШ-ИФН-ß и СЕЬО-ИФН-ßhis и накопление рекомбинантного белка бета-интерферона в культуре клеток LMH

3.3.2. Изучение динамики накопления и биологической активности рекомбинантного бета-интерферона человека продуцируемого в культуре клеток птиц

3.4. Выделение рекомбинантного белка бета-интерферона из культуральной жидкости методом аффинной хроматографии

3.4.1. Выделение рекомбинантного белка бета-интерферона из культуральной жидкости на Ni-NTA-агарозе

3.4.2. Выделение рекомбинантного белка бета-интерферона из культуральной жидкости на голубой сефарозе

3.5. Анализ физико-химических и антигенных свойств бета-интерферона человека, продуцируемого в клетках птиц

3.6. Продукция рекомбинантного белка бета-интерферона человека in ovo

3.6.1. Продукция и накопление рекомбинантного белка бета-интерферона человека в куриных эмбрионах, инфицированных рекомбинантным аденовирусом CELO-ИФН-Р

3.6.2. Изучение биологической активности бета-интерферона продуцируемого в аллантоисной жидкости куриных эмбрионов

3.7. Исследование возможности использования рекомбинантного аденовируса CELO-ИФН-р для генной терапии in vivo

ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ

ВЫВОДЫ

СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

ПРИНЯТЫЕ СОКРАЩЕНИЯ

Ад — Аденовирус

БОЕ - бляшкообразующая единица

ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота ед. к. - единица карты т.п.о. — тысяч пар оснований

ПЦР - полимеразная цепная реакция

РКА — репликативно-компетентный аденовирус

ЦПД — цитопатическое действие

CAR — coxsackie adenovirus receptor - коксакивирусный-аденовирусный рецептор

CELO - Chicken Embryo Lethal Orphan FAV1 (fowl adenovirus type 1) аденовирус птиц типа p — Plasmid - плазмида

PBS - фосфатный солевой буфер

SPF — specific pathogen free - свободный от вирусных и бактериальных контаминаций трис - гидроксиметиламинометан ЭДТА - этилендиаминтетраацетат CMV - цитомегаловирус человека ORF — открытая рамка считывания polyA — сигнал полиаденилирования ИФН-Р - бета-интерферон

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Создание новой эукариотической системы экспрессии бета-интерферона человека на основе рекомбинантного аденовируса птиц»

Актуальность проблемы. В настоящее время рекомбинантные аденовирусы (Ад) широко используются в молекулярно-биологических, биомедицинских и микробиологических исследованиях. Аденовирусные векторы являются удобным инструментом для исследования, например, антигенов микроорганизмов in vitro и in vivo, а также служат основой для разработки нового поколения генно-инженерных вакцин. В последние годы разрабатывается новое направление получения рекомбинантных белков с использованием Ад векторов. При этом подходе ген целевого белка клонируют в рекомбинантный аденовирусный вектор, с помощью которого осуществляется доставка гена в эукариотические клетки для продукции белка. Большой интерес при этом вызывает возможность создания векторных систем на основе геномов аденовирусов животных и птиц.

В последнее время была продемонстрирована возможность создания векторов на основе генома Ад птиц CELO (Chicken Embryo Lethal Orphan) [Logunov D. и др.2004]. Интерес к данному вирусу как векторной системе объясняется наличием свойств, позволяющих предположить возможность разработки эффективной эукариотической векторной системы на его основе для продукции рекомбинантных белков in vitro и in ovo: большая пакующая емкость, более высокая физическая стабильность вирионов и способность трансдуцировать клетки птиц. Последнее свойство данного аденовируса используется для создания эукариотических систем экспрессии целевых белков на основе клеток птиц, в частности в куриных эмбрионах, которые являются хорошо изученным и безопасным объектом биотехнологии, что обеспечивает чистоту получаемых продуктов от примесей различных патогенов. Таким образом, рекомбинантные аденовирусы CELO могут найти широкое применение в качестве вектора для разработки новых эукариотических систем экспрессии рекомбинантных белков, в частности интерферона бета.

Интерферон бета (ИФН-ß) относится к семейству интерферонов I типа, и подобно альфа-интерферону индуцирует множество биологических событий, включая ингибирование вирусной репликации, стимуляцию иммунной системы и ингибирование пролиферации клеток. Препараты рекомбинантного ИФН-ß нашли применение в медицине при широком спектре патологий. Это лечение, в первую очередь, рассеянного склероза, различных вирусных инфекций (вирусные гепатиты, герпесвирусные заболевания), а также злокачественной меланомы, рака молочных желез и шейки матки, волосатоклеточной лейкемии и других не менее опасных заболеваний. Однако, несмотря на безусловно доказанную медицинскую значимость этого препарата, биологически активный белок ИФН-ß производится в недостаточном количестве.

Для производства рекомбинантного белка интерферона бета человека в настоящее время используются как прокариотические, так и эукариотические системы экспрессии. Однако эти системы имеют определенные недостатки. В частности, ИФН-ß человека, синтезированный в Escherichia coli имеет низкую биологическую активность и может быть загрязнен токсичными веществами или пирогенами. Белок интерферона бета, полученный с помощью эукариотической системы экспрессии, идентичен природному по своим биохимическим, физическим и функциональным свойствам, но является токсичным для клетки-продуцента, что требует разработки более сложных систем продукции.

Таким образом, изучение возможности создания новых эукариотических систем экспрессии рекомбинантного белка ИФН-ß на основе аденовируса CELO, является актуальным направлением исследований.

Цель исследования. Целью данной работы являлась разработка новой системы экспрессии бета-интерферона человека на основе рекомбинантного Ад птиц CELO, изучение экспрессии и биологических свойств рекомбинантного белка.

В связи с этим, в процессе работы предстояло решить следующие задачи:

1. Исследование устойчивости клеток птиц к цитотоксическому действию бета-интерферона человека.

2. Получение рекомбинантного Ад птиц CELO, несущего ген ИФН-ß человека методом гомологичной рекомбинации в Е. coli.

3. Изучение экспрессии гена ИФН-ß человека, находящегося в составе рекомбинантного аденовируса в линии клеток LMH, и динамики накопления биологически активного рекомбинантного бета-интерферона в культуральной среде.

4. Исследование возможности использования рекомбинантного аденовируса CELO-ИФН-Р для получения биологически активного секретируемого белка бета-интерферона человека in ovo в куриных эмбрионах.

5. Выделение и характеристика секретируемого рекомбинантного белка бета-интерферона человека из культуральной среды клеток LMH, трансдуцированных аденовирусом СЕЬО-ИФН-ß методом аффинной хроматографии.

6. Исследование возможности использования рекомбинантного аденовируса CELO-ИФН-Р в генной терапии сформированных опухолей in vivo.

Научная новизна. Нами впервые были получены рекомбинантные аденовирусы птиц CELO, несущие и экспрессирующие модифицированный и исходный гены бета-интерферона человека, методом гомологичной рекомбинации в Е. coli.

Была показана экспрессия гена ИФН-ß человека, находящегося в составе рекомбинантного аденовируса птиц CELO, накопление рекомбинантного белка бета-интерферона в культуральной среде трансдуцированных клеток LMH и в аллантоисной жидкости зараженных куриных эмбрионов, а также определеа его биологическая активность. Белок ИФН-ß человека при этом был получен в препаративных количествах и отработаны условия его выделения из культуральной среды методом аффинной хроматографии.

Впервые показана возможность использования рекомбинантного аденовируса птиц СЕЬО-ИФН-ß для генной терапии аденокарциномы А431 in vivo.

Полученные результаты демонстрируют возможность создания новой эукариотической системы экспрессии бета-интерферона человека на основе клеток птиц с использованием рекомбинантного аденовируса птиц CELO; и конструирование нового генотерапевтического препарата ИФН-ß для терапии различных заболеваний человека, в том числе — онкологических.

Практическая значимость. Работа представляет не только научный, но и практический интерес. Была получена новая система экспрессии рекомбинантного бета-интерферона человека in vitro на основе аденовируса птиц CELO. Апробирован способ выделения секретируемого рекомбинантного белка ИФН-ß из культуральной среды от клеток LMH, инфицированных аденовирусом СЕЬО-ИФН-ß методом аффинной хроматографии. Была показана возможность получения препарата биологически активного рекомбинантного белка ИФН-ß in ovo.

Перспективным может быть применение рекомбинантного вектора СЕЬО-ИФН-ß в генной терапии рака in vivo, так как была показана эффективная экспрессия доставляемого с помощью него гена интерферона в клетках опухоли.

Препарат рекомбинантного бета-интерферона человека, экспрессированного в культуре клеток LMH с использованием аденовирусного вектора СЕЬО-ИФН-ß, и препарат рекомбинантного аденовируса СЕЬО-ИФН-ß подготовлены к предклиническим испытаниям.

Результаты, полученные в ходе выполнения диссертации, вошли в патент Российской Федерации RU 2 326 942 С1 (МПК C12N 7/01 (2006.01) от 13 июня 2007 года «Способ создания рекомбинантного аденовируса птиц для вакцинации и генной терапии».

Материалы диссертации используются в лекциях для студентов ГОУ ВПО «Московский государственный университет прикладной биотехнологии» в рамках курса молекулярной биотехнологии.

Апробация работы. Результаты диссертационной работы были доложены и обсуждены на IV международной научной конференции студентов и молодых учёных «Живые системы и биологическая безопасность населения» (Москва, 2005), международной юбилейной научно-практической конференции, посвящённой 110-летию Курской биофабрики и агробиологической промышленности России (Курск, 2006), V международной научной конференции студентов и молодых учёных «Живые системы и биологическая безопасность населения» (Москва, 2006), IV Московском международном конгрессе «Экспо-биохим-технологии» (Москва, 2007), VI международной научной конференции студентов и молодых учёных «Живые системы и биологическая безопасность населения» (Москва, 2007), совместном заседании отдела генетики и молекулярной биологии бактерий, отдела медицинской микробиологии и отдела интерферонов 11 ноября 2008 г. ГУ НИИ ЭМ им. Н.Ф.Гамалеи РАМН.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 7 научных работ, в том числе 2 в журналах, рекомендованных ВАК, и 5 статей в сборниках международных конференций.

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 108 страницах машинописного текста и включает введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение результатов исследований, выводы и список используемой литературы (158 источников, из которых 4 отечественных и 154 иностранных). Работа содержит 5 таблиц и 18 рисунков.

Заключение диссертации по теме «Микробиология», Черентаева, Евгения Александровна

ВЫВОДЫ

1. Сконструирован рекомбинантный аденовирус птиц CELO, содержащий ген бета-интерферона человека, который экспрессировался в составе рекомбинантного аденовируса CELO-ИФН-Р в линии клеток LMH, полученный рекомбинантный белок бета-интерферона был биологически активен. Уровень экспрессии гена бета-интерферона составил 10 мкг/106 клеток.

2. Продемонстрирована экспрессия гена ИФН-Р человека в куриных эмбрионах (in ovo), зараженных рекомбинантным аденовирусом CELO-ИФН-р. Рекомбинантный белок ИФН-Р накапливается в аллантоисной жидкости в о количестве 1,7-2 мкг/мл (5x10° МЕ/мл).

3. Разработан способ выделения биологически активного рекомбинантного белка ИФН-Р человека, из культуральной среды клеток LMH, трансдуцированных рекомбинантным аденовирусом CELO-ИФН-Р с использованием метода аффинной хроматографии на колонке с голубой сефарозой. Выход белка ИФН-Р составил 70%.

4. Впервые показано, что рекомбинантный бета-интерферон человека, синтезируемый в клетках птиц, представлен гликозилированным полипептидом с молекулярной массой 22,5 кДа, который аутентичен природному бета-интерферону, и обладает высокой удельной биологической активностью 1,2x1011 МЕ/мг.

5. Продемонстрирована возможность применения рекомбинантного аденовируса птиц CELO-ИФН-Р для терапии опухолей ш vivo. При множественных внутриопухолевых инъекциях рекомбинантного аденовируса CELO-ИФН-Р in vivo наблюдали замедление роста (в 7 раз) сформированных подкожных ксенотрансплантатов аденокарциномы А431 (у голых мышей линии D2&I).

6. Показано, что бета-интерферон, синтезированный в клетках опухоли, трансдуцированных рекомбинантным аденовирусом CELO-ИФН-р, значительно эффективнее (в 4,5 раза) подавляет рост опухоли по сравнению с препаратом ИФН-(3 вводимого в виде очищенного белка.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Черентаева, Евгения Александровна, 2009 год

1. Глик Б., Пастернак Дж. Молекулярная биотехнология. Принципы и применение. Пер. с англ. — М.: Мир, 2002. — 589 с.

2. Грин М. Трансформация и онкогенез, ДНК-содержащие вирусы. // "Вирусология" под ред. Филдс, "Мир", 1989.

3. Попов В.Ф., Попов О. В. // "Лекарственные формы интерферонов" — М.: Триада-Х, 2002, - 230 с.

4. Хорвиц М.С. Аденовирусы и их репликация. // "Вирусология" под ред. Филдс, "Мир", 1989.

5. Barnett B.G., Crews C.J., Douglas J.T. Targeted adenovirus vectors. // Bioch. et Bioph. Acta 2002 V.-1575, pp. 1-14.

6. Babiuk L.A., Tikoo S.K. Adenoviruses as vectors for delivering vaccines to mucosal surfaces. // J Biotechnol 2000 v.-83(l-2), pp. 105-13.

7. Baxi M.K., Robertson J., Babiuk L.A., Tikoo S.K. Mutational analysis of early region 4 of bovine adenovirus type 3. //Virology 2001 v.-290(l), pp.153-63.

8. Baxi M.K., Deregt D., Robertson J., Babiuk L.A., Schlapp Т., Tikoo S.K. Recombinant bovine adenovirus type 3 expressing bovine viral diarrhea virus glycoprotein E2 induces an immune response in cotton rats. // Virology 2000 v. -278(1), pp. 234-243.

9. Bergelson J.M., Krithivas A., Celi L., Droguett G., Horwitz M.S., Wickham Т., Crowell R.L., Finberg R.W. The murine CAR homolog is a receptor for coxsackie В viruses and adenoviruses. // J. Virol. 1998 v. 72(1), pp. 415-419.

10. Berkner K.L. (1988). Development of adenovirus vectors for the expression of geterologous genes. Biotechniques, 6, 616-629. ICTVdB The universal virus database, http://www.ncbi.nlm.nih.gov/ ICTVdB/

11. Bett A .J., Haddara W., Prevec L., Graham F.L. An efficient and flexible system for construction of adenovirus vectors with insertions or deletions in early regions 1 and 3.//Proc. Natl. Acad. Sci. USA., 1994, v.-91, pp.-8802-8806.

12. Blomer U., Naldini L., Kafri T., Trono D., Verma I.M., Gage F.H. Highly efficient and sustained gene transfer in adult neurons with a lentivirus vector. // J Virol 1997 v. 71(9), pp. 6641-9.

13. Buchen-Osmond C., (2003) 00.001. Adenoviridae. In: ICTVdB The Universal Virus Database, version 3. ICTVdB Management, The Earth Institute and Department of Epidemiology, Mailman School of Public Health, Columbia University, New York, NY, USA.

14. Both G.W. Ovine adenovirus: a review of its biology, biosafety profile and application as a gene delivery vector. // Immunol Cell Biol 2004 v. 82(2), pp. 189-95.

15. Bouri K., Feero W.G., Myerburg M.M., Wickham T.J., Kovesdi I., Hoffman E.P., Clemens P.R. Poly lysine modification of adenoviral fiber protein enhances muscle cell transduction. // Hum. Gene Ther., 1999, v. 10, pp. 1633-1640.

16. Buchschacher G.L., Jr, Wong-Staal F. Development of lentiviral vectors for gene therapy for human diseases. // Blood 2000 v. (8), pp. 2499-2504.

17. Buller R.M., Chakrabarti S., Cooper J.A., Twardzik D.R. and Moss B. Deletion of the vaccinia virus growth factor gene reduces virus virulence. // J Virol 1988 v. -62, pp. 866-874.

18. Cao J.X., Krell P.J., Nagy E. Sequence and transcriptional analysis of terminal regions of the fowl adenovirus type 8 genome. // J Gen Virol 1998 v. 79, pp. 2507-16.

19. Chu G., Hayakawa H., Berg P. Electroporation for the efficient transfection of mammalian cell with DNA. // Nucleic Acids Res 1987 v. 15, pp. 1311-1326.

20. Chen C., Okayama H. High-efficiency transformation of mammalian cells by plasmid DNA. //Mol. Cell. Biol 1991 v. 7, pp. 2745-2752.

21. Chiocca S., Kurzbauer R., Schaf&ier J., Baker A., Maunter V., Cotten M. The complete DNA sequence and genomic organization of the avian adenovirus CELO. // J Virol 1996 v. 70, pp. 2939-2949.

22. Chiocca S., Baker A., Cotten M. Identification of a novel antiapoptotic protein, GAM-1, encoded by the CELO adenovirus. // J Virol 1997 v. 71, pp. 3168-3177.

23. Chiocca S., Kurtev V., Colombo R., Boggio R, Sciurpi M.T., Brosch G., Seiser C., Draetta G.F., Cotten M. Hystone Deacetylase 1 inactivation by an adenovirus early gene product. // Curr. Biol 2002 v. 12, pp. 594-98.

24. Child S.J., Palumbo G.J., Buller R.M., Hruby D.E. Insertional inactivation of the large subunit of ribonucleotide reductase encoded by vaccinia virus is associated with reduced virulence in vivo. // Virol 1990 v. -174, pp. 625-29.

25. Chen H.H., Mack L.M., Kelly R., Ontell M., Kochanek S., Clemens P.R. Persistence in muscle of an adenoviral vector that lacks all viral genes. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1997 v. 94(5), pp. 1645-1650.

26. Chillon M., Kremer E.J. Trafficking and propagation of canine adenovirus vectors lacking a known integrin-interacting motif. // Hum Gene Ther 2001 v. -12(14), pp. 1815-1823.

27. Clemens P.R., Kochanek S., Sunada Y., Chan S., Chen H.H., Campbell K.P., Caskey CT. In vivo muscle gene transfer of full-length dystrophin with an adenoviral vector that lacks all viral genes. // Gene Ther 1996 v. 3(11), pp. 965972.

28. Cowen B., Calnek B.W., Menendez N.A., Ball R.F. Avian adenoviruses: effect on egg production, shell quality, and feed consumption. // Avian Dis 1978 v. -22(3), pp. 459-470.

29. Cotten M., Wagner E., Zatloukal K., Birnstiel M.L. Chicken adenovirus (CELO virus) particles augment receptor-mediated DNA delivery to mammalian cells and yield exceptional levels of stable transformants. // J Virol 1993 v. 67(7), pp. 3777-3785.

30. Damdinsuren B., Nagano H., Sakon M. // Ann. Surg.Oncol 2003 v. 10,pp. 1184-1190.

31. Davison A.J., Benko M., Harrach B. Genetic content and evolution of adenoviruses. // J Gen Virol 2003 v. 84, pp. 2895-908.

32. Dinesh S.B., Suresh K.M. Development of nonhuman adenoviruses as vaccine vectors. // Vaccine 2006 v. 24, pp. 849-862.

33. Douglas J.T., Rogers B.E., Rosenfeld M.E., Michael S.I., Feng M., Curiel D.T. Targeted gene delivery by tropism-modified adenoviral vectors. // Nature Biotechnology 1996 v. 14, pp. 1574-1578.

34. Douglas J.T., Miller C.R., Kim M., Dmitriev I., Mikheeva G., Krasnykh V., Curiel D.T. A system for the propagation of adenoviral vectors with genetically modified receptor specificities. // Nat Biotechnol 1999 v. 17(5), pp. 470-4.

35. Douglas J.T. Adenoviral vector for gene therapy. // Mol Biothechnol 2007 v. -36, pp. 71-80.

36. Engelhardt J.F., Ye X., Doranz B., Wilson J.M. Ablation of E2A in recombinant adenoviruses improves transgene persistence and decreases inflammatory response in mouse liver. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1994, v. 91, pp. 6196-6200.

37. Evans PS, Benko M, Harrach B, Letchworth GJ. Sequence, transcriptional analysis, and deletion of the bovine adenovirus type 1 E3 region. // Virology 1998 v.-244(l), pp. 173-85.

38. Feigner P.L. Improvements in cationic liposomes for in vivo gene transfer. // Hum Gene Ther 1996 v. 7, pp. 1791-1793.

39. Ferrari F.K., Samulski T., Shenk T., Samulski RJ. Second-strand synthesis is a rate-limiting step for efficient transduction by recombinant adeno-associated virus vectors. // J Virol 1996 v. 70(5), pp. 3227-3234.

40. Flotte T.R., Carter BJ. Adeno-associated virus vectors for gene therapy. // Gene Ther 1995 v. 2, pp. 357-362.

41. Francois A., Eterradossi N., Delmas B., Payet V., Langlois P. Construction of avian adenovirus CELO recombinants in cosmids. // J Virol 2001 v. 75, pp. 5288-5301.

42. Freund C.T., Sutton M.A., Dang T., Contant C.F., Rowley D., Lerner S.P. Adenovirus-mediated combination suicide and cytokine gene therapy for bladder cancer. // Anticancer Res 2000 v. 20(3A), pp. 1359-65.

43. Gall J., Kass-Eisler A., Leinwand L., Falck-Pedersen E. Adenovirus type 5 and 7 capsid chimera: fiber replacement alters receptor tropism without affecting primary immune neutralization epitopes. // J Virol 1996 v. 70(4), pp. 2116-2123.

44. Glotzer J.B., Saltik M., Chiocca S., Michou A.I., Moseley P., Cotten M. Activation of heat-shock response by an adenovirus is essential for virus replication. // Nature 2000 v. 407(6801), pp. 207-211.

45. Graham F.L., Smiley J., Russell W.C., Nairn R. Characteristics of a human cell line transformed by DNA from human adenovirus type 5. // J. Gen. Virol., 1977, v. -36(1), pp. 59-74.

46. Graham F.L. Transformation by and oncogenicity of human adenoviruses. // The Adenoviruses. ed.H.S.Ginsberg, 1984.

47. Hemminki A., Kaverna A., Kremer E.J., Bauerschmitz G.J., Smith B.F., Liu B. A canine conditionally replicating adenovirus for evaluating oncolytic virotherapy in a singeneic animal model. // Mol Ther 2003 v. 7(2), pp. 163-73.

48. Hess M., Cuzange A., Ruigrok R.W.H., Chroboczek J., Jacrot B. The avian adenovirus penton: two fibres and one base. // J Mol Biol 1995 v. 252, pp. 379385.

49. Hillerman M.R., Werner J.H. Recovery of new agents from patientes with acute respiratory illness. //Proc Soc Exp Biol Med 1954 v. 85, pp. 183-188.

50. Hofinann C., Loser P., Cichon G., Arnold W., Both G.W., Strauss M. Ovine adenovirus vectors overcome preexisting humoral immunity against human adenoviruses in vivo. // J Virol 1999 v. 73(8), pp. 6930-6.

51. Horiguchi Y., Larchian W.A., Kaplinsky R., Fair W.R, Heston W. Intravesical liposome-mediated interleukin-2 gene terapy in orthotopic murine bladder cancer model. // Gene Ther 2000 v. 7, pp. 844-851.

52. Imler J.L. Adenovirus vector as recombinant viral vaccines. // Vaccine 1995 v. -13, pp. 1143-1151.

53. Jacobs A., Breakefield X.O., Fraefel C. HSV-l-based vectors for gene therapy of neurological diseases and brain tumors: part II. Vector systems and applications. //Neoplasia 1999 v. 1, pp. 402-416.

54. Johnson M.A., Pooley C., Lowenthal J.W. Delivery of avian cytokines by adenovirus vectors. // DevCompImmunol 2000 v. 24(2-3), pp. 343-54.

55. Ju D.W., Wang B.M., Cao X. Adenovirus-mediated combined suicide gene and interleukin-2 gene therapy for the treatment of established tumor and induction of antitumor immunity. // J Cancer Res Clin Oncol 1998 v. 124(12), pp. 683-9.

56. Karlsson S., Van Doren K., Schweiger S.G., Nienhuis A.W., Gluzman Y. Stable gene transfer and tissue-specific expression of a human globin gene using adenoviral vectors. // EMBO J 1986 v. 5(9), pp. 2377-2385.

57. Karpusas M., Whitty L., Runkel L., Hochman P. The structure of human interferon beta implications for activity. // Cell. Mol. Life Sci. 1998 v. — 54, pp. 1203-1216.

58. Kawaguchi T., Nomura K., Hirayama Y., Kitagawa T. Establishment and characterization of a chicken hepatocellular carcinoma cell line, LMH. // Cancer Res 1987 v. 47(16), pp. 4460-4464.

59. Kaynor C., Xin M., Wakefield J., Barsoum J., Qin X.Q. Direct evidence that IFN-beta functions as a tumor-suppressor protein. // J. Interferon Cytokine Research 2002 v. 22, pp. 1089-1098.

60. Krasnykh V.N., Mikheeva G.V., Douglas J.T., Curiel D.T. Generation of recombinant adenovirus vectors with modified fibers for altering viral tropism. // J Virol 1996 v. 70(10), pp. 6839-6846.

61. Kremer E.J., Boutin S., Chillon M., Danos O. Canine adenovirus vectors: an alternative for adenovirus-mediated gene transfer. // J Virol 2000 v. 74(1), pp. 505-512.

62. Kundig T.M., Kalberer C.P., Hengartner H., Zinkernagel R.M. Vaccination with two different vaccinia recombinant viruses: long-term inhibition of secondary vaccination. // Vaccine 1993 v. -.11, pp. 1154-8.

63. Laver W.G., Younghusband H.B., Wrigley N.G. Purification and properties of chick embryo lethal orphan virus (an avian adenovirus). // Virology 1971 v. -45(3), pp. 598-614.

64. Lee R.J., Low P.S. Delivery of liposomes into cultured KB cells via folate receptor-mediated endocytosis. // J Biol Chem 1994 v. 269, pp. 3198-3204.

65. Lehrmarin H. and Cotten M. Characterization of CELO virus proteins that modulate the pRb/E2F pathway. // J Virol 1999 v. 73, pp. 6517-6525.

66. Leon R.P., Hedlund T., Meech S.J., Li S., Schaack J., Hunger S.P., Duke R.C., DeGregori J. Adenoviral-mediated gene transfer in lymphocytes. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA., 1998, v. 95(22), pp. 13159-13164.

67. Lewis P.F., Emerman M. Passage through mitosis is required for oncoretroviruses but not for the human immunodeficiency virus. // J Virol 1994 v. -68(1), pp. 510-6.

68. Li P., Bellett A.J.D., Parish C.R. The structural proteins of chick embryo lethal orphan virus (fowl adenovirus type 1). // J Gen Virol 1984 v. 65, pp. 1803-1815.

69. Lichtenberg D. Liposomes: preparation, characterization, and preservation. // Methods Biochem Anal 1988 v. 33, pp. 337-468.

70. Lieber A., He C.Y., Polyak S.J., Gretch D.R., Barr D., Kay M.A. Elimination of hepatitis C virus RNA in infected human hepatocytes by adenovirus-mediated expression of ribozymes. //J Virol 1996 v. 70(12), pp. 8782-8791.

71. Litzinger D.C., Huang L. Phosphatidylethanolamine liposomes: drug delivery, gene transfer and immunodiagnostic applications. // Biochim Biophys Acta 1992 v. 1113, pp. 201-227.

72. Loser P., Kumin D., Hillgenberg M., Both G.W., Hofmann C. Preparation of ovine adenovirus vectors. // Methods Mol Med 2002 v. 69, pp. 415-26.

73. Loser P., Hofmann C., Both G.W., Uckert W., Hillgenberg M. Construction, resque, and characterization of vectors derived from ovine atadenovirus. // J Virol 2003 v. 77(22), pp. 11941 -51.

74. Mathias P., Wickham T., Moore M., Nemerow G. Multiple adenovirus serotypes use alpha v integrins for infection. // J Virol 1994 v. 68(10), pp. 68116814.

75. Meager A. and Das R.G. // J. Immunol. Methods 2005 v. 306, pp. 1-15.

76. Medin J.A., Fowler D.H. Post-transduction events in retrovirus-mediated gene therapy involving hematopoietic stem cells: beyond efficiency issues. // Cell Biochem Suppl 2002 v. 38, pp. 46-54.

77. Michou A., Lehrmann H., Saltik M., Cotten M. Mutational analysis of the avian adenovirus CELO, which provides a basis for gene delivery vectors. // J Virol 1999 v. 73, pp. 1399-1410.

78. Misaki R. N-linked glycan structures of mouse interferon-beta produced by Bombyx mori larvae. // Biochem. Biophys. Res. Commun. 2003 v. 311(4), pp. 979-986

79. Mittal S.K., Prevec L., Graham F., Babiuk L.A. Development of a bovine adenovirus type 3-based expression vector. // J Gen Virol 1995 v.-76,pp.93-102.

80. Morrison M.D., Onions D.E., Nicolson L. Complete DNA sequence of canine adenovirus type 1. // J Gen Virol 1997 v. 78(4), pp. 873-8.

81. Morrison M.D., Reid D., Onions D., Spibey N., Nicolson L. Generation of E3-deleted canine adenoviruses expressing canine parvovirus capsid by homologous recombination in bacteria. // Virology 2002 v. 293(1), pp. 26-30.

82. Murata M., Nabeshima S., Kikuchi K. // Cytokine 2006 v. 33, pp. 121-128.

83. Naldini L., Blomer U., Gallay P., Ory D., Mulligan R., Gage F.H., Verma I.M., Trono D. In vivo gene delivery and stable transduction of nondividing cells by a lentiviral vector. // Science 1996 v. 272(5259), pp. 263-7.

84. Nemerow G.R., Stewart P.L. Role of alpha (v) integrins in adenovirus cell entry and gene delivery. // Microbiol Mol Biol Rev 1999 v.- 63(3), pp.725-734.

85. Nermut M.V. The architecture of adenoviruses. // The Adenoviruses, ed. By H.S. Ginsberg, 1984.

86. Nguyen J.T., Wu P., Clouse M.E., Hlatky L., Terwilliger E.F. Adeno-associated virus-mediated delivery of antiangiogenic factors as an antitumor strategy. // Cancer Res 1998 v. 58, pp. 5673-5677.

87. Okuda Y., Ono M., Yazawa S., Shibata I., Sato S. Experimental infection of specific-pathogen-free chickens with serotype-1 fowl adenovirus isolated from a broiler chicken with gizzard erosions. // Avian Dis 2001 v. 45(1), pp. 19-25.

88. Olsen J.C. Gene transfer vectors derived from equine infectious anemia virus. // Gene Ther 1998 v. 5, pp. 1481-1487.

89. Ono M., Okuda Y., Yazawa S., Shibata I., Tanimura N., Kimura K., Haritani M., Mase M., Sato S. Epizootic outbreaks of gizzard erosion associated with adenovirus infection in chickens. // Avian Dis 2001 v. 45(1), pp. 268-275.

90. Paoletti E., Taylor J., Meignier B., Meric C., Tartaglia J. Highly attenuated poxvirus vectors: NYVAC, ALVAC and TROVAC. // Dev Biol Stand 1995 v. -84, pp. 159-63.

91. Payet V., Arnould C., Picault J.P. // J. Virol 1998 v. 72, pp. 9278-9285.

92. Pestka S., Krause CD, Walter MR. //Immunological Reviews 2004 v. 202, pp. 8-32.

93. Pestka S. // J Biol Chem 2007 v. 282(28), pp. 20047-20051.

94. Poeschla E.M., Wong-Staal F., Looney D.J. Efficient transduction of nondividing human cells by feline immunodeficiency virus lentiviral vectors. // Nat Med 1998 v. 4(3), pp. 354-7.

95. Reddy P.S., Idamakanti N., Zakhartchouk A.N., Baxi M.K., Li J.B., Pyne C. Nucleotide sequence, genome organization, and transcription map of bovine adenovirus type 3. // J Virol 1998 v. 72(2), pp. 1394-402.

96. Reddy P.S., Idamakanti N., Zakhartchouk L.N., Babiuk L.A., Mehtali M., Tikoo S.K. Optimization of bovine coronavirus hemagglutinin-estrase glycoprotein expression in E3 deleted bovine adenovirus-3. // Virus Res 2000 v. -70(1-2), pp. 65-73.

97. Reddy P.S., Idamakanti N., Chen Y., Whale T., Babiuk L.A., Mehtali M., Tikoo S.K. Replication-defective bovine adenovirus type 3 as an expression vector. // J Virol 1999 v. 73(11), pp. 9137-9144.

98. Reddy P.S., Idamakanti N., Hyun B.H., Tikoo S.K., Babiuk L.A. Development of porcine adenovirus-3 as an expression vector. // J Gen Virol 1999 v. 80(3), pp. 563-570.

99. Reddy P.S., Idamakanti N., Babiuk L.A., Mehtali M., Tikoo S.K. Porcine adenovirus-3 as a helper-dependent expression vector. // J Gen Virol 1999 v. -80(11), pp. 2909-2916.

100. Rodriguez J., Spearman M., Huzel N., and Butler M. Enhanced Production of Monomelic Interferon Beta by CHO Cells through the Control of Culture conditions // Biotechnol. Prog. 2005 v. 21, pp. 22-30.

101. Romano G., Pacilio C., Giordano A. Gene transfer technology in therapy: current applications and future goals. // Stem Cells 1999 v. 17, pp. 191-202.

102. Rowe W.P., Huebner R .J., Gilmor L.K., Parrott R.H., Ward T.G. Isolation of a cytopathogenic agent from human adenoids undergoigs spontaneous degeneration in tissue culture. // Proc Soc Exp Biol Med 1953 v. 84, pp. 570-573.

103. Sandhya Rani M.R., Ransohoff R.M. // J. Interferon Cytokine Research 2005 v. 25, pp. 788-798.

104. Shayakhmetov D.M., Papayannopoulou T., Stamatoyannopoulos G., Lieber A. Efficient gene transfer into human CD34(+) cells by a retargeted adenovirus vector. // J. Virol., 2000, v. 74, pp. 2567-2583.

105. Shenk T. Adenoviridae: the viruses and their replication. // Fields virology. / Eds Fields B.N., Knipe D.M., Howley P.M. Fhiladelfhia: 3rd ed. Lippincott-Raven Publishers, 1996, pp. 2111-2148.

106. Sheppard M., Werner W., Tsatas E., McCoy R., Prowse S., Johnson M. Fowl adenovirus recombinant expressing VP2 of infectious bursal disease virus induces protective immunity against bursal disease. // Arch Virol. 1998 v. 143(5), pp. 915-930.

107. Shiau A.L., Lin C.Y., Tzai T.S., Wu C.L. Postoperative immuno-gene therapy of murine bladder tumor by in vivo administration of retroviruses expressing mouse interferon-gamma. // Cancer Gene Ther 2001 v. 8(1), pp. 73-81.

108. Smith G.L., Moss B. Infectious poxvirus vectors have capacity for at least 25 000 base pairs of foreign DNA. // Gene 1983 v. 25, pp. 21-28.

109. Straus S.E. Adenovirus infection in humans. // The Adenoviruses, ed. by HS.Ginsberg, 1984.

110. Tan P.K., Michou A., Bergelson J.M., Cotten M. Defining CAR as a cellular receptor for the avian adenovirus CELO using a genetic analysis of the two viral fibre proteins. //J Gen Virol 2001 v. 82, pp. 1465-1472.

111. Tartaglia J., Bonnet M.C., Berinstein N., Barber B., Klein M., Moingeon P. Therapeutic vaccines against melanoma and colorectal cancer. // Vaccine 2001 v. -19, pp. 2571-2575.

112. Tartaglia J., Perkus M.E., Taylor J., Norton E.K., Audonnet J.C., Cox W.I., Davis S.W., van der Hoeven J., Meignier B., Riviere M. NYVAC: a highly attenuated strain of vaccinia virus. // Virology 1992 v. 188, pp. 217-232.

113. Tomko R.P., Xu R., Philipson L. HCAR and MCAR: the human and mouse cellular receptors for subgroup C adenoviruses and group B coxsackieviruses. // Proc Natl Acad Sci USA 1997 v. 94(7), pp. 3352-3356.

114. Tuboly T., Nagy E. Sequence analysis and deletion of porcine adenovirus serotype 5 E3 region. // Virus Res 2000 v. 68(2), pp. 109-17.

115. Vile R.G. A marriage of viral vectors. // Nature Biotech 1997 v. 15, pp. 840841.

116. Vile R.G., Russell S.J., Lemoine NR. Cancer gene therapy: hard lesson and new courses. // Gene Ther 2000 v. 7, pp. 2-8.

117. Volpers C., Kochanek S. Adenoviral vectors for gene transfer and therapy. // J Gene Med 2004 v. 6, pp. 164-171.

118. Vrati S., Brookes D.E., Strike P., Khatri A., Boyle D.B., Both G.W. Unique genome arrangement of an ovine adenovirus: identification of new proteins and proteinase cleavage sites. // Virology 1996 v. 220(1), pp. 186-99.

119. Walling H.W., Swarthout J.T., Culver K.W. Bystander-mediated regression of osteosarcoma via retroviral transfer of the herpes simplex virus thymidine kinase and human interleukin-2 genes. // Cancer Gene Ther 2000 v. 7(2), pp. 187-96.

120. Wang G., Williams G., Xia H., Hickey M., Shao J., Davidson B.L., McCray P.B. Apical barriers to airway epithelial cell gene transfer with amphotropic retroviral vectors. // Gene Ther 2002 v. 9(14), pp. 922-31.

121. Wickham T.J., Mathias P., Cheresh D.A., Nemerow G.R. Integrins alpha v beta 3 and alpha v beta 5 promote adenovirus internalization but not virus attachment. // Cell 1993 v. 73(2), pp. 309-319.

122. Wickham T.J., Roelvink P.W., Brough D.E., Kovesdi I. Adenovirus targeted to heparan-containing receptors increases its gene delivery efficiency to multiple cell types. //Nat. Biotechnol., 1996, v. 14, pp. 1570-1573.

123. Wilderman M.J., Kim S., Gillespie C.T. // Molecul. Therapy 2005 v. 13(5), pp. 910-7.

124. Wilson D.R. Viral-mediated gene transfer for cancer treatment. // Current Pharm Biotechnol 2002 v. 3, pp. 151-164.

125. Wu S.C., Huang G.Y., Liu J.H. Production of retrovirus and adenovirus vectors for gene therapy: a comparative study using microcarrier and stationary cell culture. // Biotechnol Prog 2002 v. 18(3), pp. 617-22.

126. Yates V.J., Fry D.E. Observations on a chicken embryo lethal orphan (CELO) virus. // Am J Vet Res 1957 v. 18, pp. 657-660.

127. Zhou Y., Tikoo S.K. Analysis of early region 1 of porcine adenovirus type 3. // Virology 2001 v. 291(1), pp. 68-76.