Создание и исследование лекарственных форм, содержащих биологически активные вещества сушеницы топяной травы тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.04.01, кандидат фармацевтических наук Николашкин, Александр Николаевич

• Николашкин, Александр Николаевич
• кандидат фармацевтических наук
• 2013

Оглавление диссертации кандидат фармацевтических наук Николашкин, Александр Николаевич

ОГЛАВЛЕНИЕ

ВВЕДЕНИЕ-----------------------------------------------—-

ГЛАВА 1. Общие ботанические сведения о растении, химическом составе, биологической активности, методах стандартизации и технологии получения лекарственных форм из растительного сырья-----------------------------------------------------------------------------

1.1 Общие ботанические сведения о растении-------------------------------

1.2 Химический состав растений рода сушеницы---------------------------

1.3 Сушеница как средство фитотерапии-------------------------------------

1.4 Методы идентификации и количественного определения действующих веществ сушеницы------------------------------------------25

1.4.1 Способы выделения действующих веществ из сырья сушеницы -

1.4.2 Идентификация действующих веществ сырья сушеницы----------27

1.4.3 Методы количественного определения флавоноидов---------------33

1.5 Технологии получения экстракционных лекарственных форм из растительного сырья ------------------------------------------------------—

1.5.1 Изготовление водных извлечений--------------—

1.5.2 Производство настоек.-----------------------------------------------------42

1.5.3 Перспективы развития экстракционных лекарственных форм—

ГЛАВА 2. Материалы, объекты и методы исследования-

2.1 Материалы и объекты исследования--------------—---------------------55

2.2 Характеристика методов исследования -----------------------------------56

2.3. Изучение технологических показателей сырья сушеницы топяной

и обоснование выбора способов создания фитопрепаратов----------57

2.4 Методы исследования лекарственных препаратов из сырья

сушеницы топяной------------------------------------------------------------61

2.4.1 Характеристика методов исследования настойки и жидкого

экстракта сушеницы топяной-----------------------------------------------62

2.4.2 Подбор условий качественного определения флавоноидов в

сырье и изучаемых лекарственных препаратах--------------------

2.4.3. Исследования по разработке методов количественного определения флавоноидов в экстракционных препаратах сушеницы топяной------------------------------------------------------------70

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ.--------------------------------------------75

ГЛАВА 3. Совершенствование оценки качества травы сушеницы

топяной--------------------------------------------------------------------------75

3.1 Микроскопическое исследование травы сушеницы топяной---------75

3.2 Выбор методик количественного определения флавоноидов в

траве сушеницы топяной-----------------------------------------------------82

3.3 Исследование микробиологической чистоты травы сушеницы топяной--------------------------------------------------------------------------87

3.4 Радиологический контроль сырья сушеницы топяной-----------------89

3.5 Определение стабильности травы сушеницы топяной при хранении------------------------------------------------------------

ГЛАВА 4. Разработка технологии получения экстракционных форм из травы сушеницы топяной------------------------------------------------97

4.1 Характеристика настоя сушеницы топяной----------------

4.2 Изучение технологических показателей сырья сушеницы топяной

4.2.1 Измельченность сырья-----------------------------------------------------98

4.2.2 Поглощающая способность сырья и его набухаемость—

4.2.3 Коэффициент вымывания-------------------------------------------------101

4.3 Подбор экстрагента для извлечения действующих веществ сушеницы топяной-----------------------------------------------------------104

4.4 Определение количества сливов вытяжки из экстрактора при получении настойки сушеницы топяной--------------------------------106

4.5 Изучение режима экстрагирования как фактора в технологии

жидкого экстракта------------------------------------------------------------107

4.6. Оптимизация процесса экстрагирования травы сушеницы топяной с помощью метода однофакторного дисперсионного анализа

4.7 Очистка полученного извлечения в процессе приготовления настойки сушеницы топяной-----------------------------------------------112

4.8 Разработка показателей качества настойки сушеницы топяной —

4.9 Исследование стабильности настойки сушеницы топяной при длительном хранении и оценка показателей качества----------------118

4.10 Технологическая и аппаратурная схема получения настойки сушеницы топяной

4.11 Технология получения жидкого экстракта сушеницы топяной —

4.12 Определение показателей качества жидкого экстракта сушеницы топяной-------------------------------------------------------------------------132

ВЫВОДЫ---------------------------------------------------------------------------139

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ-------------------------------------------------------141

Приложения---------------------------------------------------------------------—

Проект фармакопейной статьи «Сушеница топяная трава»--------------164

Проект фармакопейной статьи «Сушеница топяная настойка»---------174

Проект фармакопейной статьи «Сушеница топяная жидкий экстракт»

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Создание и исследование лекарственных форм, содержащих биологически активные вещества сушеницы топяной травы»

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы. Несмотря на достигнутые успехи в области синтеза лекарственных веществ, лекарственные растения остаются важным источником для получения медицинских препаратов [102, 171, 178]. Более 30% применяемых в современной медицине препаратов получают из растительного сырья. Фитопрепараты применяются практически для лечения всех заболеваний, в том числе таких социально значимых, как сердечнососудистые, онкологические, инфекционные, заболевания желудочно-кишечного тракта и др. При этом следует отметить, что при лечении некоторых заболеваний используются преимущественно препараты растительного происхождения. Например, среди лекарственных препаратов для лечения сердечно сосудистой недостаточности доля фитопрепаратов составляет 80%, а для лечения заболеваний печени и желудочно-кишечного тракта - 75%о [170, 174, 175].

Несмотря на наличие многочисленных методов и средств для лечения артериальной гипертензии, сохраняется актуальность разработки и внедрения новых лекарственных препаратов [2, 5, 49]. В этом плане особое внимание привлекают к себе лекарственные средства растительного происхождения. Их преимущество состоит в способности включаться в обменные процессы, малой токсичности, возможности длительного применения без появления токсических эффектов. Кроме того, лекарства растительного происхождения по своей стоимости более доступны широким слоям населения. По литературным данным известно, что себестоимость курса лечения лекарствами из растительного сырья в 15-20 раз ниже, чем при лечении синтетическими аналогами [6,33].

В тоже время, в производстве фитопрепаратов имеются определенные проблемы. В частности, для некоторых групп препаратов растительное сырье до настоящего времени используется нерационально, отсутствуют готовые лекарственные формы такого сырья. Так, большое количество лекарственного растительного сырья, включенного в ГФ XI издания, применяю!ся только в виде настоев и отваров. Из литературы известно, что в водные извлечения (настои и отвары) переходит только 10-20% основных действующих веществ; 80-90% действующих веществ утилизируется. Кроме того, для оценки качества сырья требуется введение новых показателей, идентифицирующих сырье, и современных методик количественного определения действующих веществ.

Следовательно, разработка лекарственных форм, альтернативных водным извлечениям является актуальной задачей. Жизненно необходимой является также разработка лекарственных препаратов растительного происхождения для лечения социально-значимых болезней, в частности сердечно-сосудистых заболеваний, включая артериальную гипертензию.

В качестве объекта исследования нами выбрано официнальное лекарственное растшельное сырье-трава сушеницы топяной.

Сушеница топяная пользуется вниманием исследователей и клиницистов благодаря наличию таких целебных свойств как: сосудорасширяющее и гипотензивное действие, антибактериальная активность, способности ослаблять тонус гладкой мускулатуры, заживления ран, язв, ожогов, эрозий. Для создания фитопрепаратов на её основе имеется достаточная сырьевая база. Сырье содержит комплекс таких биологически активных веществ, как флавопоиды, дубильные вещества, фенолкарбоновые кислоты, каротиноиды и др.

Существующая нормативная документация на сушеницу топяную траву не в полной мере соответствует требованиям ОСТ 91500.05.001.00 «Стандарты качества лекарственных средств. Основные положения».

Поэтому, с целью обеспечения высокого качества разрабатываемой экстракционной формы из травы сушеницы топяпой, как базовой составляющей лекарственной формы, необходимо было провести углубленное анатомическое изучение травы сушеницы топяпой для расширения её анатомо-диагностических признаков, ввести новые показатели качества, отсутствующие в действующей нормативной документации.

В настоящий момент готовая экстракционная лекарственная форма из травы сушеницы топяной отсутствует. На фармацевтическом рынке сушеница топяная представлена в виде фасованного лекарственного растительного сырья в пачках для приготовления в экстемпоральных условиях водных извлечений, согласно инструкции на упаковке.

Цель и задачи исследования. Основной целью являлось создание и исследование готовой экстракционной лекарственной формы, содержащей биологически активные вещества сушеницы топяной травы.

Для достижения поставленной цели было необходимо решить следующие задачи:

- провести информационно-аналитическое исследование, посвященное вопросам химического состава, биологического действия, стандартизации сушеницы топяной травы, получению экстракционных препаратов из лекарственного растительного сырья.

- изучить технологические свойства травы сушеницы топяной, необходимые при разработке экстракционных форм.

- провести исследование по совершенствованию показателей качества травы сушеницы топяной, обусловленное технологическими особенностями сырья.

- изучить факторы, влияющие на экстрагируемость действующих веществ из травы сушеницы топяной.

- разработать состав, технологию, технологическую и аппаратурную схемы производства настойки и жидкого экстракта травы сушеницы топяной.

- разработать методики качественного и количественного определения флавоноидов в настойке и жидком экстракте травы сушеницы топяной.

- обосновать и экспериментально подтвердить показатели качества настойки и жидкого экстракта сушеницы топяной, изучить их стабильность при длительном хранении.

- на основе полученных результатов разработать проекты фармакопейных статей на траву сушеницы топяной, настойку и жидкий экстракт сушеницы топяной для включения в ГФ XII издания.

Решение поставленных задач осуществлялось путем обобщения данных литературы и проведением экспериментальных исследований.

Научная новизна. Впервые созданы и экспериментально обоснованы лекарственные формы - сушеницы топяной настойка и жидкий экстракт, на которые разработаны проекты фармакопейных статей.

Проведено углубленное анатомическое изучение сушеницы топяной травы с расширением анатомо-диагностических признаков. Усовершенствована методика количественного определения флавоноидов в пересчете на гнафалозид А в сушенице топяной траве. Па основании проведенных исследований разработан проект новой фармакопейной статьи на траву сушеницы топяной.

Впервые изучены технологические свойства травы сушеницы топяной и факторы, влияющие на экстрагируемость из неё действующих веществ.

Разработаны состав, технология, технологические и аппаратурные схемы производства настойки и жидкого экстракта травы сушеницы топяной.

Разработаны методики качественного и количественного определения флавоноидов в полученных настойке и жидком экстракте сушеницы топяной, с помощью которых изучена их стабильность при хранении.

Практическая значимость работы. На основании проведенных исследований разработаны проекты двух фармакопейных статей: «Сушеница топяная трава», «Сушеницы топяной настойка». Нормативная документация принята к рассмотрению Центром стандартизации лекарственных средств ФГУ «Научный центр экспертизы средств медицинского применения» на предмет включения в ГФ XII издания. Результаты диссертационного исследования внедрены в учебный процесс кафедры фармацевтической технологии ГБОУ ВПО РязГМУ Минздрава России.

Апробация диссертации. Основные положения диссертации представлены на III Международной (XII Всероссийской) Пироговской студенческой научной медицинской конференции (Москва, 2008); научн. конф. с междунар. участием Яросл. гос. мед. академии (Ярославль, 2009, 2011); научн.-практ. конф. молодых ученых РязГМУ (Рязань, 2004 - 2006г.г.); ежегодной научн. конф. РязГМУ имени академика И.П. Павлова (Рязань, 2005, 2007, 2009, 2010, 2011); межкафедральном совещании кафедр фармацевтической технологии, фармакогнозии с курсом ботаники, фармацевтической и токсикологической химии, общей химии с курсом биоорганической и органической химии, фармакологии с курсом фармации и фармакотерапии ФДПО ГБОУ ВПО РязГМУ Минздравсоцразвития России (Рязань, 2012).

Личное участие автора. Данные, приведенные в диссертации, получены при непосредственном участии автора как на этапах

постановки задач и разработки методических подходов к их выполнению, так и при наборе первичных фактических данных при проведении экспериментальных исследований, статистической обработке и анализе полученных результатов, написании публикаций, нормативной документации. Диссертация и автореферат написаны лично автором.

Соответствие диссертации паспорту научной специальности. Научные положения диссертации соответствуют формуле специальности 14.04.01 - «Технология получения лекарств». Результаты проведенного исследования соответствуют области исследования специальности, конкретно пунктам 3, 4 паспорта технологии получения лекарств.

Научные положения диссертации соответствуют формуле специальности 14.04.02 - «Фармацевтическая химия, фармакогнозия». Результаты проведенного исследования соответствуют области исследования специальности, конкретно пунктам 2, 3 паспорта фармацевтическая химия, фармаконозия.

Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтической науки. Диссертационная работа выполнена в соответствии с тематикой и планом Рязанского государственного медицинского университета имени академика И.П. Павлова «Создание и исследование лекарственных форм, содержащих биологически активные вещества сушеницы топяной травы» (№ государственной регистрации 012001 19320).

Положения, выносимые на защиту:

- результаты по созданию и исследованию сушеницы топяной настойки;

- результаты по созданию и исследованию сушеницы топяной жидкого экстракта;

- результаты по совершенствованию оценки качества сушеницы топяной травы;

методики качественного анализа и количественного определения флавоноидов и результаты анализа травы, настойки и жидкого экстракта сушеницы топяной.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 19 работ, в том числе 4 статьи в изданиях, рекомендованных ВАК Минобрнауки РФ, в которых отражено основное содержание работы.

Объем и структура диссертации. Работа изложена на

163 странице машинописного текста, содержит 20 таблиц и 21 рисунок.

Работа состоит из введения, обзора литературы, двух экспериментальных глав, списка литературы, включающего 178 источников, из которых 168 - отечественных, 10 - иностранных, приложения в котором представлены проекты разработанных фармакопейных статей.

Во введении раскрыта актуальность темы, определены цели и задачи исследования, сформулирована научная новизна и практическая значимость работы.

В первой главе на основании литературных источников систематизированы ботанические сведения о траве сушенице топяной, её химическом составе и применении в медицине. Представлено описание методов идентификации и количественного анализа действующих веществ сушеницы топяной; описание технологии получения экстракционных лекарственных форм из растительного сырья.

Во второй главе приведены основные характеристики объектов исследования, основные методики, используемые при проведении данного исследования.

Экспериментальная часть изложена в двух главах.

В третьей главе приведены результаты исследований травы сушеницы топяной.

В четвертой главе изложены результаты исследований по разработке экстракционных форм - настойки и жидкого экстракта сушеницы топяной.

В приложения вынесены проекты разработанных фармакопейных статей «Сушеницы топяной трава», «Сушеницы топяной настойка» и «Сушеницы топяной жидкий экстракт».

ГЛАВА 1. Общие ботанические сведения о растении, химическом составе, биологической активности, методах стандартизации и технологии получения лекарственных форм из растительного сырья

1.1 Общие ботанические сведения о растении

Сушеница топяная - ОпарИаПип и^товит Ь. - относится к сем. А51егасеае - астровые. Название " gnaphalium " происходит от греческого слова" gnaphalon ", означающего - шерсть ,войлок, что указывает на опушение растения. Видовое название " и^тоБит» -означает болотное - в связи с местом произрастания.

Сушеница топяная - однолетнее травянистое растение, сероватое от опушения, корни тонкие, короткие, стержневые. Стебли цилиндрические, от основания простертоветвистые, реже прямые, длиной обычно от 5 до 20 см. Листья мелкие, длиной от 0,5 до 2,5 см, шириной от 1 до 4 мм, очередные линейнопродолговатые с туповатой верхушкой и выдающейся главной жилкой, к основанию сужены в короткий черешок. Соцветия - яйце - или полу - шаровидные корзинки. Корзинки очень мелкие длиной в среднем 3-4 мм, плотно скручены небольшими клубочками на верхушках ветвей, окружены скрученными, лучисторасходящимися листьями, превышающими клубочки соцветий. Обвертка корзинки состоит из нескольких рядов черепитчато расположенных пленчатых листочков, наружные листочки яйцевидные, при основании войлочные, в верхней половине голые, темно-бурые, блестящие, остальные - продолговато яйцевидные, заостренные, темно-бурые, голые. Цветки мелкие,

трубчатые, пятизубчатые с хохолком, по размерам не превышают обвертку. Цветоложе голое, ячеистое. Плод - продолговатая семянка с хохолком. Запах слабый, ароматный, вкус солоноватый [17, 85, 128].

Сушеницу топяпую следует отличать от других видов сушеницы, произрастающих на территории СССР, не имеющих лечебного значения, что подчеркивает актуальность работ по её диагностике.

Сушеница лесная -Gnaphalium silvaticum L.- отличается неветвящимся более длинным стеблем (30-40 см), корзинки собраны в верхней части стебля в узкое колосовидное соцветие.

Сушеница желтовато-белая -Gnaphalium luteoalbum L. с неветвистым стеблей и желтовато-белыми листочками- обвертками, с корзинками в густых верхушечных клубочках.

Сушеница русская - Gnaphalium rossicum Kirp. - с соцветиями такими же, как у сушеницы топяной, но не окружены верхушечными листьями.

Сушеница норвежская - Gnaphalium norvegica Kirp. - с колосовидными соцветиями и пленчатыми голыми черно-бурыми листьями обертки.

Жабник полевой - Filago arvensis L., мелкое ветвистое беловойлочное растение 15-25 см высоты, в отличие от сушеницы топяной ветвящийся не от основания. Корзинки так же собраны мелкими клубочками. Обвертка корзинки двухрядная, наружные листочки травянистые, беловойлочные, при отцветании лучистооттопыренные, внутренние листочки перепончатые, беловойлочные (бурой окраски нет) [96, 118, 134, 137, 148].

Произрастает почти по всей Европейской части СНГ, в Западной и Восточной Сибири, на Кавказе и Дальнем Востоке.

Основные районы заготовок - центральные районы России. Основное

/

местообитание по сырым местам, по берегам и в поймах рек, на заливных лугах, около озер [35, 77, 96, 124, 137, 147].

В основном потребность в сушенице топяной удовлетворяется за счет дикорастущей травы. Кроме того, в районах достаточного увлажнения возможна культура растения, путем посева семян в грунт поздней осенью или ранней весной [29, 34, 62, 123].

Лекарственным растительным сырьем сушеницы топяной служит собранная во время цветения трава с корнями. Сбор сушеницы топяной проводят в августе-сентябре. При сборе следует оставлять для обсеменения 2-4 растения на 1 м" поросли. Растение вырывают, отряхивают землю и, не отрезая корня, сушат на открытом воздухе, часто переворачивая [134, 148, 158].

1.2 Химический состав растений рода сушеницы

Начиная с тридцатых годов прошлого столетия, сушеница топяная как лекарственное растение привлекла внимание ученых. Ряд исследований, посвященных изучению ее химического состава, позволили объяснить лечебное действие этого растения. В результате проведенных исследований ПЛ. Сеновым было установлено наличие следующих веществ в пересчете на абсолютно сухую массу травы: вещества, растворимые в эфире и алкоголе - 6,10%; вещества, растворимые в холодной и горячей воде - 28,26%; геммицеллюлоза -10,61%; целлюлоза - 13,77%; лигнин - 12,03%; белки, включая органические комплексы -19,97%), минеральные вещества - 6,22% [117]. В спиртово-эфирной вытяжке были обнаружены жировые вещества, смолы, эфирное масло, алкалоиды в виде оснований,

спирторастворимые гликозиды, каротиноиды (52-55 мг%) и др. [11]. В водной вытяжке обнаружены углеводы (моно- и дисахариды), витамины (кислота аскорбиновая и тиамин), азотистые вещества, водорастворимые гликозиды, горечи, жировые вещества - до 3,3%. Им же было выделено эфирное масло сушеницы топяной в количестве 0,05%. Масло имело желто-зеленый оттенок, при хранении быстро бурело. При экстракции 96% спиртом этиловым было выделено до 16% смолистых веществ, имевших густую вязкую консистенцию буро-зеленого цвета. В спиртово-эфирном извлечении из травы сушеницы топяной были обнаружены каротин, фитостерины, следы алкалоидов [117].

H.H. Никулиным и А.Н. Алмазовым при исследованиях травы был открыт новый алкалоид названный ими гнафалин и подтверждено наличие смол и фитостеринов [3]. На содержание витаминов (каротин, тиамин, кислота аскорбиновая) сушеница топяная трава исследовалась также P.A. Степанянц [138].

В связи с развитием научно-технического прогресса исследования по изучению химического состава травы сушеницы топяной приняли целенаправленный характер. Были подробно изучены фракции, полученные при последовательной дифференциальной экстракции с использованием различных экстрагентов. При анализе петролейно-эфирпого извлечения было подтверждено наличие каротиноидов, фитостеринов. Кроме того, в петролейно-эфирном извлечении были определены непредельные углеводороды белого цвета мазеобразной консистенции. В результате элементного анализа в них установлено наличие 86,03 % углерода и 13,97 % водорода [69]. С использованием спектрального анализа был изучен микроэлементный состав золы сушеницы топяной.

Обнаружены следы калия, натрия, кальция, марганца, магния, кремния, алюминия, ванадия, титана, никеля, меди, хрома. При определении микроэлементов без предварительного озоления, в пересчете на абсолютно сухое вещество, найдено марганца 17,0 мг%, железа 456,0 мг%, меди 1,96 мг%, алюминия 598,0 мг%, хрома 5,6 мг%.

При анализе спиртовых извлечений из травы сушеницы топяной H.A. Калошиной и В.И. Карповой было установлено наличие в них кумаринов и дубильных веществ пирокатехиновой группы [59J.

При анализе травы сушеницы топяной М.М.Коноплевой были выявлены флавоноиды (0,28-0,68%) [66, 127].

Подробно был изучен состав суммы флавоноидов, выделенных из травы сушеницы топяной. Для проведения исследований сырье экстрагировали 95% этиловым спиртом. Выделение комплекса флавоноидов осуществляли методом избирательной экстракции, многократной колоночной хроматографии и препаративной колоночной хроматографии. В итоге выделили семь веществ флавоноидной природы:

5,7,4'-триокси- 6,3'-диметоксифлавон;

5,7,3',4'-тетраокси-6-метоксифлавон (6-метоксилютеолин или эупафолин):

7-o-ß-O-ni юкопиранози до-5,6,3' ,4' -тетраоксифлавон 7-о-Р-О-глюкопиранозид 6-оксилютеолина; 7-о-Р-0-1люкогпиранозидо-5,6,4'-триоксифлавон (плантагинин); 7-о-р-0-глюкопиранозидо-3,5,3',4'-тетраоксифлавон (кверцимеритрин)

7-(6"-о-кофеил)-о-Р-0-глюкопиранозидо-5,4'-диокси-6,3'-диметоксифлавон (гнафалозид А);

7-(6"-о-кофеил)-о-р-0-глюкопиранозидо-5,3',4'-триокси-6-метоксифлавон (гнафалозид В).

Основными флавоноидами сушеницы топяной являются гнафалозиды А и Б.

Таким образом следует, что сушеница топяная содержит разнообразные вещества, изученность которых далеко не полная.

1.3 Сушеница как средство фитотерапии

Широкое применение сушеницы топяной как лекарственного растения в народной медицине, наличие в ней ряда фармакологически активных веществ доступность травы, все это послужило обоснованием для начала изучения возможности применения препаратов, выделенных из сушеницы топяной в научной медицине.

При изыскании новых лекарственных средств из отечественного сырья понижающих кровяное давление советскими учеными была изучена и трава сушеницы топяной, обладающая, как было указано выше, сосудорасширяющим действием [115, 151]. При исследовании сосудорасширяющего действия настоя и отвара сушеницы топяной Т.В. Кулиниченко получила следующие результаты. При введении кроликам (в хронических опытах) 10% отвара наблюдалось снижение кровяного давления на 60-70%, действие наступало через 10-30 минут после введения и продолжалось от 0,5 до 1 часа. Введение 10% отвара в ушную вену кролика вызывало расширение просветов изолированных сосудов уха кролика, которое зависело от концентрации извлечения. Кроме этого Т.В. Кулиниченко было

установлено, что цветы, стебли, корни, как и трава сушеницы топяной проявляют одинаковое сосудорасширяющее действие [72].

Изучение эффективности настоев и отваров сушеницы топяной на сердечно сосудистую систему проводилось на сердце нормальных (контрольных) лягушек, на угнетенном "гиподинамическом" сердце и на суженых сосудах. Настои и отвары оказывали сосудорасширяющее действие и усиливали сокращения "угнетенных" гиподинамических сердец [157]. Полученные результаты были подтверждены в опытах на морских свинках. Анализ электрокардиограмм показал, что отвар сушеницы топяной урежает ритм сердечных сокращений, увеличивает время систолы желудочков, замедляет антриовентрикулярпую проводимость [13, 72]. В результате курса лечения артериальное давление и венозное давление снизилось до нормы (опытная группа), в то время как у контрольной группы давление продолжало повышаться [157].

Сосудорасширяющий эффект сушеницы топяной при гипертонической болезни изучался в условиях клиники после одноразового и длительного применения. После одноразового применения отвара, настоя травы сушеницы топяной закономерностей снижения давления отмечено не было. При длительном применении -снижение артериального давления наблюдалось у 50% больных с неврогенной формой заболевания, со стабильной стадией заболевания лишь у отдельных больных наблюдалось слабовыраженное снижение давления [13, 113]. В литературе имеются данные о лечении препаратами сушеницы топяной больных с различными формами гипертонических заболеваний. По данным Д.М.Российского при лечении настоем больных с неврогенной формой гипертонии улучшение самочувствия происходило через две недели, а к концу

месяца лечения давление нормализовалось. Одновременно с внутренним применением настоя больным делали ножные ванны из травы сушеницы [115].

Успешно применялся для лечения вегетативной и склеротической форм гипертонии 10% настой травы сушеницы. У больных с вегетативной формой уменьшились церебральные явления (головокружение, шум в ушах), значительно улучшилось состояние. У больных со склеротической формой улучшились, в основном, мозговые явления без снижения общего кровяного давления [113].

Раздражение у подопытных животных электрическим током блуждающего нерва после приема препаратов сушеницы сопровождалось более длительной остановкой сердца [159].

Профессор Н.Н.Никулин и А. Н. Алмазов в опытах на лягушках установили, что вещество входящее в состав антиульцерина (спирто-масляный экстракт сушеницы топяной), добавленное к раствору Рингера, при воздействии вызывает расширение сосудов на 180-200%. Дальнейшие опыты проведенные на кроликах подтвердили полученные результаты. Таким образом, было показано непосредственное действие антиульцерина на сосуды; сосуды расширялись и более интенсивно питали данный участок живой ткани, что, по-видимому, и обуславливало пышную грануляцию. Расширение сосудов происходило при целости вышележащих нервных стволов, нарушение которых, например, перевязка по Молоткову, резко понижало действие антиульцерина. В этих случаях антиульцерин вызывал расширение местных кровеносных сосудов и обеспечивал приток крови к пораженному участку ткани. Другим важным свойством антиульцерина являлась способность стимулировать развитие молодой соединительной ткани.

Проведенные клинические наблюдения подтверждались гистологическими исследованиями. С использованием капиляроскопии (на перепонках пальцев рук) показано, что аптиульцерин вызывал расширение кровеносных сосудов и при неповрежденной коже [72].

Изучалось действия антиульцерина при комплексном лечении больных амфодоптозом. Отмечено, что кровоточивость десен прекращалась после 1-2 сеансов, гнойные выделения из десновых карманов в большинстве случаев не наблюдались после 4-5 сеансов, расшатанные зубы укреплялись после 5-6 аппликаций. Курс лечения в зависимости от формы заболевания продолжался от 2 до 4 недель [84].

В 1947 г. в фармакологической лаборатории ВИЛР, под руководством профессора В.В.Николаева для лечения язв желудка и двенадцатиперстной кишки, вызываемых расстройством нервной трофики, были предложены настой травы сушеницы в комбинации с отваром корней синюхи лазурной.

М.М. Панченков впервые применил этот метод лечения язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки в клинических условиях, у 65 из 70 больных после лечения были отмечены хорошие результаты. Продолжительность лечения до исчезновения основных язвенных симптомов составляла от одного до двух месяцев, в зависимости от характера язвенного процесса [101]. Лечение язвенной болезни настоем сушеницы и отваром корней синюхи проводилось также и на базе Главного военного госпиталя им. П.Л. Бурденко. У больных улучшился сон, аппетит, уменьшился период болевых ощущений, прибавился вес. В ряде случаев отмечено более быстрое исчезновение ниши [113, 119]. Несмотря на положительные клинические результаты, препарат широкого

применения не получил из-за отсутствия рациональной лекарственной формы. В 1957г. во Всесоюзном институте лекарственных растении были приготовлены и исследованы на активность и токсичность концентраты из корней синюхи голубой и травы сушенины топяной. Фармакологический комитет (25 июня 1955 года) разрешил применение таблеток сушеницы топяной и таблеток синюхи голубой для лечения язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки, а также при гипертонической болезни I и 2 стадии [130, 147].

Отвар сушеницы топяной успешно применялся при комплексном лечении дизентерии. Лечение проводилось у больных с острой и хронической дизентерией в течение одного месяца от начала заболевания. В первые пять дней у 60% больных наступала нормализация стула, причем у больных со сниженной кислотностью последняя нормализовалась. Различные диспепсические явления прекращались в среднем к 8 дню, а у контрольной группы в среднем на 11 день [41].

Имеются данные об использовании смеси порошка травы сушеницы топяной с коровьим маслом и медом для лечения поражений кожи. В годы Великой Отечественной войны эта «лекарственная форма» была усовершенствована в виде спиртово-масляного экстракта, который был испытан на больных с длительно незаживающими ранами и язвами, полученными в результате термических и химических ожогов. Клинические наблюдения показали, что экстракт способствовал успешному заживлению ран. Для лечения различных поражений кожи была предложена 20% масляная вытяжка из травы сушеницы топяной. Из вытяжки изготавливалась 10% мазь эмульсионного типа, которая применялась для лечения ран с чрезвычайно вялыми грануляциями.

Помимо этого настои и отвары сушеницы топяной применяются для лечения язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки, а также при гипертонической болезни [165].

В медицинской практике используются водные и масляные извлечения из травы сушеницы. Настой травы оказывает сосудорасширяющее действие и применяется при начальных стадиях гипертонической болезни, а также для лечения язвы желудка и двенадцатиперстной кишки. В народной медицине настой травы сушеницы употребляют при болях в животе, сердцебиениях, туберкулезе и диабете. Наружно его используют для лечения гнойных ран, язв, ожогов и эрозии шейки матки. Масляные вытяжки из травы сушеницы применяют при лечении труднозаживающих ран.

На основании данных народной медицины о применении травы сушеницы топяной для лечения язв, длительно не заживающих ран и ожогов профессором А.Н. Алмазовым предложено использовать смесь порошка травы сушеницы с коровьим маслом и медом для лечения поражений кожи [147]. В годы Великой Отечественной войны эта "лекарственная форма" была усовершенствована в виде спиртово-масляного экстракта, которому дали впоследствии разрешенное Фармакологическим комитетом название "Антиульцерин" [3, 72]. Экстракт был испытан в госпитальной хирургической клинике 1 Московского медицинского института и в других лечебных учреждениях. Под наблюдением были больные с длительно незаживающими ранами, язвами, полученными в результате термических и химических ожогов. У всех больных раны и язвы были с грязновато-гнойным налетом. Клинические наблюдения показали, что после 2-3 перевязок раны и язвы покрывались пышной грануляцией ярко-красного цвета. В конкретных случаях грануляция

являлась местом мобилизации собственной крови, что и способствовало успешному заживлению ран [160].

В литературе имеются данные об излечении антиульцерином сильного рентгеновского ожога, когда была поражена не только кожа, но и подкожная клетчатка, и нервные стволы. Масляный экстракт наложенный в виде повязки способствовал оживлению репарационных процессов поврежденной ткани, в основном соединительной, вызывая рост грануляций с последующей эпителизацией раневой поверхности [147]. Однако лечение антиульцерином трофических язв было противопоказано, поскольку действуя через вазомоторы он способствовал оживлению течения язвенного процесса [161].

При язвенных процессах с большим гнойным отделяемым успешно применяли водный отвар травы, при этом происходило усиление отделения гноя и вместе с тем прилив крови к пораженному участку. Так для лечения спонтанной гангрены, применяли ножные ванны с отваром сушеницы топяной [147]. Отвар сушеницы топяной применялся в виде примочек и ванн для лечения больных пиодермитами и экземой. Высокий терапевтический эффект наблюдался при лечении поверхностных стрептококковых пиодермитов, а также при глубоких стрептококковых язвах на конечностях. Согласно данным литературы, отвар обладал дезинфицирующим и вяжущим свойствами, способствовал эпителизации мокнущих эрозивных поверхностей и наряду с этим совершенно не раздражал кожу [136].

1.4 Методы идентификации и количественного определения действующих веществ сушеницы

1.4.1 Способы выделения действующих веществ из сырья сушеницы

Основными действующими веществами травы сушеницы топяной являются флавоноиды [35, 37, 66, 96, 117].

Для выделения флавоноидов проводят экстракцию растительного сырья одним из низших спиртов. Спиртовое извлечение упаривают, к остатку добавляют горячую воду и после охлаждения удаляют неполярные соединения (хлорофилл, жирные масла, эфирные масла и др.) из водной фазы хлороформом или четыреххлористым углеродом. Флавоноиды из водной фазы извлекают последовательно этиловым эфиром (агликоны), этилацетатом (в основном монозиды) и бутанолом (биозиды, триозиды и др).

Для разделения компонентов каждой фракции используют колоночную хроматографию на силикагеле, полиамидном сорбенте или целлюлозе. Элюирование веществ проводят смесью хлороформа с метиловым спиртом с возрастающей концентрацией метилового спирта, спирто-водными смесями с увеличением концентрации спирта если сорбентом служит полиамид, или 5-30% уксусная кислота в случае целлюлозы [153].

Для извлечения из сухого растительного сырья полярных биологически активных веществ наиболее широко используют водно-спиртовые смеси [23].

Экстрагент, действуя как активный компонент системы, влияет на скорость, полноту и качество экстракции биологически активных веществ из растительного материала. В качестве экстрагентов были использованы вода и этиловый спирт различной концентрации.

С увеличением концентрации этилового спирта количество экстрактивных веществ снижается, а выход суммы флавоноидов увел и ч и вается [44].

Независимо от характера экстрагента выход экстрактивных веществ и флавоноидов увеличивается пропорционально степени нагрева [154].

В процессе изучения условий очистки и сушки извлечений, растворимости конечного сухого остатка установлено, что с уменьшением концентрации спирта и при использовании горячей воды в качестве экстрагента извлекается комплекс высокомолекулярных соединений (пектины, слизи, воски), который затрудняет очистку и сушку извлечений, а также ухудшает растворимость конечного экстракта.

На примере экстакции сбора водой и 70% этиловым спиртом показано, что выход экстрактивных веществ и суммы флавоноидов увеличивается пропорционально нагреву [43, 114].

Содержание флавоноидов нарастает в зависимости от длительности экстракции и достигает максимального значения в течение трех часов экстракции [68].

При изготовлении водного извлечения главным фактором, оказывающим влияние на выход флавоноидов, является время нагревания и время настаивания. С увеличением времени нагревания при одинаковом времени растет полнота извлечения флавоноидов от 57,6 до 82,3%. При нагревании в течении 10 минут извлекается

примерно 60,8% флавоноидов, через 30 минут выход составляет 82,3%. При постоянном времени нагревания с увеличением времени настаивания полнота извлечения флавоноидов увеличивается от 65% до 68,9%, а при дальнейшем увеличении времени настаивания -уменьшается до 66,5%, что, по-видимому, связано с частичным разрушением флавоноидов [42].

1.4.2 Идентификация действующих веществ сырья сушеницы

Трава сушеницы топяной содержит в своем составе витамины (витамин С, каротиноиды), алкалоид гнафалин, дубильные вещества, флавоноиды и др.

Дубильные вещества — это смесь различных полифенолов, имеющих нередко сложную структуру, и очень лабильных, поэтому выделение и анализ индивидуальных компонентов представляет собой большие трудности [18, 96].

Дубильные вещества в растительном сырье определяют качественными реакциями, которые можно подразделить на две группы: реакции осаждения и цветные реакции [96].

К реакциям осаждения можно отнести следующие реакции: с раствором желатина, хинина хлоридом, с бромной водой. Более специфичной является реакция с железоаммонийными квасцами.

Для идентификации гидролизуемых дубильных веществ используется их способность взаимодействовать с формальдегидом.

Дубильные вещества обнаруживаются следующими цветными реакциями.

К 1 мл извлечения добавляют 2 мл раствора кислоты уксусной 10% и 1 мл средней соли свинца ацетата 10 % — гидролизуемые дубильные вещества образуют осадок. При наличии конденсированных дубильных веществ фильтрат окрасится в черно-зеленый цвет от прибавления 5 капель раствора железоаммониевых квасцов 1 % и 0,1 г свинца ацетата.

К 2 мл извлечения прибавляют несколько кристаллов натрия нитрата и 2 капли 0,1 н. кислоты хлористоводородной. При наличии гидролизуемых дубильных веществ появляется коричневое окрашивание.

Для обнаружения алкалоидов в растительном сырье чаще всего используют общие (осадочные) реакции и хроматографию. Кроме того, учитывают еще некоторые свойства алкалоидов: их растворимость в кислотах и выпадение в осадок после подщелачивания, щелочную реакцию спиртовых растворов оснований алкалоидов и др. С целью идентификации алкалоидов проводят специфические (цветные) реакции, микрокристаллоскопические реакции и хроматографический, спектроскопический, люминесцентный анализы и т. д.

Общие реакции на алкалоиды (реакции осаждения).

Реакции осаждения позволяют установить наличие алкалоидов даже при незначительном их содержании. Основаны они на том, что алкалоиды при взаимодействии с некоторыми веществами образуют нерастворимые в воде соединения. Это главным образом соли тяжелых металлов, комплексные иодиды, комплексные кислоты и некоторые органические соединения кислотного характера. Для проведения качественных реакций из растительного сырья обычно готовят кислотное извлечение. При добавлении соответствующих реактивов в присутствии алкалоидов тотчас или через некоторое

время образуется осадок. Обилие осадка зависит как от количественного содержания алкалоидов, так и от чувствительности их к реактиву. Однако следует учитывать, что с общими реактивами образуют осадки еще и некоторые другие органические соединения, которые могут содержаться в неочищенных извлечениях (холин, бетаин, белки, продукты их разложения и др.). Поэтому, чтобы получить более достоверные результаты, общие реакции проводят еще и с очищенными извлечениями.

Ввиду того, что чувствительность различных алкалоидов к «осадочным реактивам» неодинакова, реакции обычно проводят не с одним каким-либо реактивом, а с несколькими (5—7) различными реактивами. Наиболее часто используются следующие реактивы: Майера (раствор ртути дихлорида и калия иодида), Вагнера и Бушарда (растворы иода в растворе калия иодида), Драгендорфа (раствор висмута основного цитрата и калия иодида с добавлением уксусной кислоты), Марме (раствор кадмия иодида в растворе калия иодида); раствор танина, растворы кремневольфрамовой, фосфорномо-либдеповой, фосфорновольфрамовой, пикриновой кислот и др.)

Основной группой действующих веществ в траве сушеницы топяной являются флавоноиды.

Флавоноиды и ксантоны являются соединениями, имеющими в своих молекулах группы -С=0, -ОН, -С=С-, -С-Н, а также такие основные фрагменты как у-пироновый цикл и бензольные кольца. Наличие в молекуле общих и специфических групп, а в ряде случаев и сахарных компонентов, обусловливает проявление этими соединениями общих физико-химических свойств: слабо выраженные кислотные свойства, плохая растворимость в воде, способность вступать в реакции комплексообразования, окисления, восстановления,

люминесценции и способность поглощать при различных длинах волн [18].

Для идентификации флавоноидов используют их физико-химические свойства:

1. Определение температуры плавления.

2. Определение удельного вращения.

3. Сравнение УФ, ИК, ГТМР, масс-спектров со спектрами стандартных образцов.

С раствором аммиака флавоны, флаваноны, флавонолы, флаванонолы дают желтое окрашивание, при нагревании переходящее в оранжевое или красное.

Тем не менее, существуют качественные реакции, которые могут подвердить наличие флавоноидных соединений в исследуемом растительном сырье или фитопрепарате. К таким реакциям относят:

1. Цианидиновая проба.

К 2 мл извлечения прибавляют 5-7 капель концентрированной кислоты хлористоводородной и 10-15 мг металлического магния и цинка, через 3-5 минут наблюдается красное, оранжевое, розовое окрашивание. Для ускорения реакции и усиления окрашивания рекомендуется (2-3 мин) подогреть смесь на кипящей водяной бане.

2. Реакция с раствором основного свинца ацетата.

К 1 мл извлечения добавляют 3-5 капель раствора основного свинца ацетата 2 %. Появление желто-оранжевого окрашивания свидетельствует о наличии флавоноидов [153].

Следует отметить, что цианидиновая проба характерна для флавоноидов и З-О-гликозилфлававоноидов.

3. Реакция с спиртовым раствором алюминия хлорида

В делительную воронку вместимостью 200 мл помещают 25 мл препарата, 10 мл петролейного эфира и 20 мл раствора натрия хлорида 10 %. Содержимое воронки перемешивают в течение 3 мин, затем отстаивают до полного расслоения фаз и нижний слой сливают (раствор А).

В две одинаковые химические пробирки помещают по 2 мл раствора А, затем в одну из пробирок добавляют 0,5 мл спиртового раствора алюминия хлорида 2 % (анализируемый раствор), а во вторую - 0,5 мл 95 % спирта (раствор сравнения), содержимое пробирок перемешивают. Через 20 минут в обе пробирки прибавляют по 10 мл воды очищенной, перемешивают содержимое и просматривают на белом фоне. Анализируемый раствор должен иметь желтый цвет и по интенсивности окраски заметно превосходить раствор сравнения (флавонопды).

В последнее время для идентификации флавоноидов широко используется хроматографические методы анализа [50, 53, 65, 91, 116, 146]. Обнаружение компонентов осуществляется просматриванием хроматограмм в УФ свое. При этом флавоноиды, флавонол-3-гликозиды, флаваноны, халконы обнаруживаются в виде коричневых пятен; флаванолы и их 7-гликозиды - в виде желтых или желто-зеленых пятен; ксантоны в виде оранжевых пятен. Изофлавоны при этом не проявляются. После просматривания в УФ свете хроматограммы можно обработать одним из реактивом (спиртовым растворов алюминия хлоридом 5 % с последующим нагреванием при 105°С в течение 3-5 минут; раствором сурьмы (III) хлоридом 5 % в четыреххлористом углероде; спиртовым растворе щелочи 2 %), что позволяет получить зоны с более яркой флуоресценцией в УФ свете.

Определение флавоноидных соединений в растительном материале состоят из двух основных стадий: подготовки извлечения из растительного сырья и собственно качественных реакций.

Стадия подготовка извлечений из растительного сырья Измельченное сырье массой 1 г помещают в колбу вместимостью 25 мл и добавляют 10 мл спирта этилового (95%). Колбу соединяют с обратным холодильником и нагревают на водяной бане в течение 10 мин с момента закипания спирта в колбе. После охлаждения полученное извлечение фильтруют через бумажный фильтр [153].

Был предложен метод обнаружения флавоноидных соединений с помощью хроматографии в тонком слое сорбента (ТСХ) на силикагеле: на линию старта на расстоянии 1 см от края пластины «Сорбфил» наносят микрошприцом 10 мкл раствора А, пластину с нанесенной пробой помещают в вертикальную камеру (насыщение камеры пе менее 24 часов) со смесью растворителей п-бутанол -ледяная уксусная кислота - вода (4:1:2) и хроматографируют восходящим методом. Когда фронт растворителей пройдет около 14 см, пластинку вынимают из камеры и сушат на воздухе в течение 5 минут. Хроматограмму обрабатывают раствором алюминия хлорида (Ш) 1 % в этиловом спирте 95% и просматривают в УФ-свете (365 нм). Наблюдается одна зона на уровне зоны раствора стандартного образца кверцетина (0,01%) раствора кверцетина в 95% этиловом спирте), а также три менее выраженные зоны зеленовато-желтого и коричневого цвета в интервале Rt-0,3-0,8 [56, 60].

При использовании системы растворителей н-бутанол -уксусная кислота - вода (4:1:5). Со свидетелями были идентифицированы рутин (Rf- 0.50), кверцетин (Rf- 0,82), алоэмодин (Rf - 0,89) и хризофлавановая кислота (R,- - 0,97) [46, 112].

Изучение состава флавоноидов проводили с помощью тонкослойной хроматографии с использованием следующих подвижных фаз: этилацетат-муравьиная кислота-вода (10:2:3), хлороформ-метанол (8:2), хлороформ-метанол-вода (61:32:7), этилацетат - метанол - хлороформ (4:1:1)

Хроматограммы после высушивания проявляли спиртовым раствором алюминия хлорида [22, 64].

При изучении флавоноидного состава растений и анализа лекарственных препаратов, содержащих смеси этих веществ, самым трудоемким процессом является разделение и очистка этих соединений.

В ходе исследования было установлено, что величина молекулярного веса флавоноида не оказывает существенного влияния на скорость прохождения его через сефадекс. При использовании в качестве элюата воды флавонолы более прочно удерживались сефадексом, чем флавоны. Диглизиды передвигались быстрее, чем монозиды [8].

1.4.3 Методы количественного определения флавоноидов

Поскольку в траве сушеницы топяной основными действующими веществами являются флавоноиды, то в данном разделе нами приведены методы количественного определения флавоноидов: спектрофотометрия, фотометрия, комбинированные методы, а также метод титрования в среде неводных растворителей. Сравнительно редко применяют полярографию и метод амперометрического титрования [86, 153].

Применение метода кислотно-основного титрования в среде неводных растворителей (ацетоне, диметилформамиде, диметилсульфоксиде) основано на проявлении флавоноидными соединениями слабо выраженных кислотных свойств, что обусловлено наличием в молекуле фенольных гидроксилов.

Титрование осуществляется потенциометрическим методом с использованием в качестве титрантов гидроокиси тетраэтиламмония или натрия.

Данный метод имеет преимущество перед спектральным в точности определения и не требует наличия стандартных веществ для проведения количественного определения [19, 153].

В последние годы все большее распространение получают различные физико-химические методы анализа, которые имеют ряд существенных преимуществ в сравнении, например, с титрометрическими методами. К таким преимуществам относятся быстрота и точность воспроизведения, обнаружение даже незначительных количеств исследуемых веществ и, что особенно важно, возможность выделения отдельных флавоноидов из лекарственных препаратов. К таким методам относятся фотоэлектроколориметрия, спектрофотометрия, денситометрия с использованием хроматографии на бумаге и тонком слое сорбента [153].

Для устранения влияния окрашенных сопутствующих веществ, на практике довольно часто применяют метод дифференциальной спектрофотометрии [73, 116, 152]. В данном случае исследуемое вещество находится как в анализируемом, так и растворе сравнения. Метод дифференциальной спектрофотометрии с использованием раствора алюминия хлорида применяется для определения

содержания флавоноидов в цветках боярышника (Х=430 нм с использованием ГСО кверцетина) [116] и препаратах из плодов боярышника (А=407 нм с использованием ГСО рутина) [152], в траве одуванчика (А=365 нм с использованием лютеолина-стандарта), в цветках бессмертника 411 нм с использованием ГСО рутина), в препаратах бадана (Х=410 нм с использованием ГСО ру тина), в сборе "Гепафит" (Я=415 нм с использованием ГСО рутина) [132], в траве звездчатки (Я=390 нм с использованием ГСО рутина), в цветках арники (А,=410 нм с использованием ГСО рутина) в траве горца (А=410 нм с использованием ГСО рутина) и многих других [45, 78].

Спектрофотометрическое определение по максимумам собственного поглощения в разновидности прямой или дифференциальной спектрофотометрии - один из наиболее распространенных методов анализа всех исследуемых соединений.

При высокой чувствительности метод не селективен, так как не контролирует содержание каждого из веществ одного класса соединений и не позволяет судить о количестве флавоноидов при их совместном присутствии [19].

Фотоколориметрический метод количественного определения флавоноидов основан на цветных реакциях флавоноидов с солями различных металлов (алюминия, циркония, титана, хрома, сурьмы), с лимонно-борным реактивом и на реакции восстановления цинком или магнием в кислой среде. Известна цветная реакция флавонидов с азотнокислым и уксуснокислым уранилом, позволяющая количественно определить рутин в смеси с кверцетином [153].

Для спектрофометрического определения использовалось определение оптической плотности продуктов реакции диазотирования. Данная реакция чувстительная, но не избирательная,

так как наряду с флавоноидами эту реакцию дают фенольные соединения, кумарины, пирозолоны и другие классы соединений. Применение метода ограничено неспецифичностью его и внутри каждой из групп флавоноидов из-за прохождении реакции только по кольцу А при наличии свободного орто положения по отношению к фенольному гидроксилу у 7-го углеродного атома. Поэтому даже итоговые определения не показывают истинного содержания исследуемых веществ как в суммарных фитохимических препаратах, так и в исходном растительном сырье [19, 86].

Большей чувствительностью обладают методики определения флавоноидов по цветным комплексным соединениям с алюминия хлоридом, цирконием хлоридом, галлием азотнокислым [19].

В фармацевтической практике наиболее часто используется спектрофотометрирование окрашенных соединений с алюминия хлоридом [22, 42, 132, 168].

Известно, что алюминия хлорид образует комплексные соединения с флавоноидами и другими полифенолами по орто-дигидрокси, пери-гидрокси-оксо и орто-гидрокси-оксо группировкам (рис. 1), что сопровождается батохромным смещением полос УФ-спектра.

При добавлении хлористоводородной кислоты нестабильные комплексы по орто-дигидроксигруппировкам разрушаются, а комплексы между карбонилом при С-4 и гидроксильными группами при С-3 и С-5 сохраняются, вызывая характерный батохромный сдвиг полос в УФ-спектре, что позволяет выделить именно флавоноиды из суммы полифенолов [22, 42, 121, 125, 132].

Для получения более воспроизводимых результатов комплексообразование рекомендуется проводить в уксусно-

уротропиновом буферном растворе в среде 40-50% этилового спирта [42, 125, 152].

Так как исходное извлечение до реакции образования комплексных соединений обладает определенным оптическим поглощением, то для компенсации этого поглощения используют прием дифференциальной спектрофотометрии. При этом раствор сравнения включает в себя все компоненты, что и испытуемый, за исключением алюминия хлорида [22, 42, 121, 168].

О-

К—v

/К

а

]

-At—а

-о

.о.

о с)

У \

а а

,0,

Е -

1 1

Ai—CI

1

Cf

A

в

Рисунок 1 Комплексные соединения алюминия с флавоноидами А- орто-дигидрокси группировка, Б - пери-гидрокси-оксо группировка В -орто-гидрокси-оксо группировка

Данный метод нашел применение при установлении общего содержания флавоноидов в сырье и суммарных фитохимических препаратов [19].

В настоящее время в анализе широкое распространение получили комбинированные методы, включающие предварительное хроматографическое разделение веществ с последующим определением их в элюатах хроматограмм, а также непосредственное

сканирование хроматограмм на денситометре или определением площади пятна на хроматограмме.

Одним из таких методов является хромато-спектрофотомегрия. Сущностью данного метода является определение оптической плотности флавоноидов после предварительного их разделения с помощью колоночной хроматографии на полиамидном сорбенте.

Особенно ценным из комбинированных методов считается хроматоденситометрический метод. Сущность данного метода заключается в выделении и разделении флавоноидов с непосредственной количественной денситометрической оценкой окрашенной зоны на хроматограмме.

Метод имеет преимущества в быстроте проведения анализа и точности определения, так как в данном случае исключается стадия элюирования [19, 152].

1.5 Технологии получения экстракционных лекарственных форм из растительного сырья

1.5.1 Изготовление водных извлечений

Водные извлечения - это сложные дисперсные системы. Они могут быть представлены истинными растворами низкомолекулярных и высокомолекулярных веществ (неограниченно и ограниченно набухающих), коллоидными растворами, суспензиями и эмульсиями, комплексами связанных друг с другом веществ в различных сочетаниях. Состав водных извлечений сложен и не всегда поддается полной качественной и количественной характеристике [140, 149].

В настоящее время водные извлечения представлены в виде настоев и отваров, слизей.

Настои и отвары - это жидкие лекарственные формы, представляющие собой водные извлечения из лекарственного растительного сырья, а также водные растворы сухих или жидких экстрактов - концентратов [24].

В древности основные приемы изготовления водных извлечений были сходны с приемами приготовления пищи: измельчение, вымачивание, отваривание и др.

В средневековой Руси водные извлечения готовили, отваривая на открытом огне. Некоторые извлечения готовили, настаивая сначала без нагревания или в теплой печи, после чего варили. Сроки изготовления точно не указывали. Отдельные извлечения варили, выпаривая до 1/3 или Уг объема. Упаренные водные извлечения смешивали с медом или другими компонентами [149].

Согласно ГФ VII издания (1925г.) настои приготавливали обливанием растительного сырья кипящей очищенной водой и погружением инфундирки в кипящую водяную баню на 5 минут, после чего охлаждали жидкость в течение 40 минут и процеживали. При этом не давалось указаний о степени измельченности сырья, ограничиваясь лишь общим замечанием, что растительное сырье предварительно измельчают.

ГФ VIII издания внесла некоторую конкретизацию в вопрос об измельченности сырья, установив, что для приготовления настоев и отваров части растений измельчают и просеивают: листья, цветы и трава через сито №6 (диаметр отверстий 3 мм), плоды и семена -через сито №4 (диаметр отверстий 0,33 мм).

Согласно ГФ VIII издания настои стали готовиться обливанием холодной водой и настаиванием tía кипящей водяной бане 15 минут. При этом предполагается, что поскольку температура вытяжки будет повышаться постепенно, протеины, камеди и пектиновые веществ успеют раствориться и продиффундировать раньше, чем свернуться или набухнут, и тем самым будет облегчена диффузия действующих веществ. К тому же предполагалось, что пятиминутный срок настаивания вообще недостаточен и обеспечивает лишь размягчение сырья и частичное извлечение действующих веществ. По истечении указанного срока настаивания (15 минут) настои охлаждают в течение 45 минут до полного охлаждения. Затем настой процеживают, остаток выжимают и всю жидкость пропускают через вату; последнюю затем промывают водой до получения требуемого количества жидкости.

В ГФ IX издания впервые вводится поправка на количество воды, необходимое для получения настоя. Так, «измельченный растительный материал помещают в фарфоровый, эмалированный или из нержавеющей стали сосуд (инфупдирку), обливают водой комнатной температуры, взятой с учетом потерь, происходящих при приготовлении...» Однако в фармакопее не указывается величина потерь воды.

ГФ X издания конкретизирует характер потерь воды при приготовлении настоев и отваров и вводит термин «коэффициент водопоглощения», приводится таблица коэффициентов водопоглощения для различных видов растительного сырья.

В примечании указывается компоненты объема воды, необходимого для приготовления водного извлечения. Так, объем воды, необходимый для приготовления требуемого количества настоя или отвара, определяется суммированием количества извлечения,

указанного в рецепте, и дополнительного количества воды для компенсации адсорбции жидкости сырьем. Показано, что необходимый объем воды рассчитывается путем умножения прописанного веса сырья на коэффициент водопоглощепия.

Также ГФ X издания предписывает при приготовлении настоев объемом от 1000 до 3000 мл увеличивать время нагревания до 25 минут.

Но длительное нагревание имеет и свои минусы: возможно разрушение термолабильных веществ, гликозидов, эфирных масел, а также увеличение выхода балластных веществ [94, 140].

Учитывая вышесказанное, ГФ XI издания предлагает следующий общий вариант технологии водных извлечений. Для приготовления настоев и отваров измельченное лекарственное растительное сырье заливают водой комнатной температуры, взятой с учетом коэффициента водопоглощения, настаивают в инфундирном аппарате или в соответствующей емкости на кипящей водяной бане при частом помешивании: настои в течение 15 минут, отвары - в течение 30 минут, затем охлаждают при комнатной температуре: настои - не менее 45 минут, отвары - 10 минут, процеживают (отжимая растительное сырье) и прибавляют воду до требуемого объема извлечения.

В зависимости от природы действующих веществ, содержащихся в сырье ГФ XI допускает и другие варианты горячего и холодного настаивания и охлаждения вытяжки.

При изготовлении настоя или отвара с использованием экстракта - концентрата, последний берут в количестве, соответствующем количеству лекарственного растительного сырья [24].

Настои и отвары являются нестабильными в микробиологическом плане лекарственными формами, поэтому ГФ допускает использование консервантов.

Указанная информация по настоям и отварам диктует необходимость разработки более совершенной и более стабильной лекарственной формы. В связи с этим представляет большой практический интерес такие лекарственные формы, относящиеся к группе галеновых препаратов, как настойки и жидкие экстракты.

1.5.2 Производство настоек.

Настойки являются одной из старейших лекарственных форм, которая не утратила своей актуальности до настоящего времени

Термин "Настойки" произошел от латинского "Tincture", что значит "окрашивать или впитывать цвет". Настойки были введены в медицинскую практику в XIII веке благодаря усилиям Raymond Lull и Arnold Villanova [172]. В Российскую Фармакопею настойки были включены, начиная с 1-го издания. В 1866 году их насчитывалось 70 наименований. По данным государственного реестра в Российской Федерации зарегистрировано 57 отечественных (45 простых, 12 сложных) и 12 импортных настоек (7 простых, 5 комплексных) [25].

Согласно ГФ XI издания "Настойки представляют собой разбавленные окрашенные жидкие спиртовые или водно-спиртовые извлечения из лекарственного растительного сырья, получаемые без нагревания и удаления экстрагента [24].

Настойки классифицируют на простые (из сырья одного растения) - настойка боярышника, настойка женьшеня, настойка

пустырника и др., сложные (из сырья нескольких растений) -ландышево-валериановые капли, горькая настойка и др. [97], которые могут включать в себя и субстанции лекарственных веществ (настойка мяты, капли Зеленина и др.).

В качестве сырья используют сырье растительного, животного или минерального происхождения, а также полученное путем биосинтеза. Измельченность сырья должна быть указана в частных фармакопейных статьях. Для получения настоек используют в основном высушенное сырье, реже - свежее. Если нет указаний в частных статьях, то из 1 части сырья получают 5 объемных частей готового продукта, из сильнодействующего - 10 частей извлечения [24, 169, 173, 177]. Для сложных настоек, которые могут быть получены смешиванием простых настоек в разнообразных пропорциях и концентрациях, данное соотношение не может быть выдержано, поэтому рекомендуется состав компонентов и порядок их смешивания указывать в частных статьях [55, 97].

Технологическая схема производства настоек включает следующие стадии:

- подготовка сырья и экстрагента с операциями измельчения сырья, отсеивания его от пыли, замачивания, укладки в экстрактор, настаивания, приготовление необходимого объема экстрагента с определенной концентрацией.

- экстрагирование до получения определенного объема или весового количества вытяжки

- очистка по методике ГФ XI издания: отстаивание при температуре не выше 10°С до получения прозрачной жидкости не менее двух суток с последующем фильтрованием

- стандартизация по показателям ОСТ «Стандарты качества лекарственных средств. Основные положения»

- фасовка и упаковка

Согласно ГФ XI, для получения настоек могут быть использованы такие способы, как: мацерация; дробная мацерация; мацерация с принудительной циркуляцией экстрагента; вихревая экстракция; перколяция и др. [24].

Выбор способа экстрагирования определяется эффективностью производства готового продукта и зависит от свойств экстрагента и растительного материала, а также от структуры последнего.

Мацерация является статическим методом экстрагирования и заключается в настаивании в мацерационном баке необходимого для получения настойки количества лекарственного растительного сырья с рассчитанным объемом экстрагента (спирта этилового) при комнатной температуре в течение 7 суток. После этого сырьё отжимают и замеряют объем вытяжки. Так как часть экстрагента удерживается в шроте, то его промывают чистым экстрагентом в количестве, равном оставшемся в сырье. Шрот повторно отжимают и обе порции извлечения объединяют. Если полученная вытяжка не соответствует заданному объему готового продукта, то добавляют чистый экстрагент.

Метод мацерации имеет ряд недостатков, ограничивающих использование данного метода экстрагирования в современном фармацевтическом производстве. Процесс экстракции протекает медленно и идет в основном за счет молекулярной диффузии. Растительный материал большую часть времени находится в неподвижном состоянии, при этом коэффициент конвективной диффузии невелик. Биологически активные вещества не достаточно

полно извлекаются в вытяжку, так как процесс извлечения протекает до установления динамического равновесия системы твердое тело -жидкость. В вытяжку переходит большое количество балластных веществ, благодаря большой продолжительности настаивания. Поэтому в классическом варианте метод мацерации применяется крайне редко, в основном при экстрагировании ' свежего растительного сырья.

Для устранения указанных недостатков и повышения качества готового продукта в производстве фитопрепаратов прибегают к динамизации процесса экстрагирования.

Дробная мацерация. Процесс дробной мацерации используют для ускорения процесса экстракции и повышения выхода биологически активных веществ из сырья.

Общее количество экстрагепта делят на 3-4 части и последовательно настаивают сырье в первой части экстрагепта, затем во второй, третьей и четвертой, каждый раз сливая вытяжки. Время настаивания подбирается индивидуально в зависимости от свойств растительного материала и экстрагента. Дробная подача экстрагепта позволяет, при меньшей затрате времени на извлечение, полнее истощить лекарственное растительное сырьё, уменьшить потери на диффузии [141].

В настоящее время на фармацевтических предприятиях используется производственный вариант дробной мацерации, позволяющий получить извлечение из растительного сырья в течение 48 часов. При этом сырье настаивают с экстрагентом в течение 24 часов, а затем получают четыре слива в количестве '/) от массы сырья с интервалом в 1,5 часа. Полученную вытяжку далее подвергают очистке, фильтрованию и стандартизации.

Мацерация с принудительной циркуляцией экстрагеита. Проводится в мацерационном баке с ложным (перфорированным) дном на которое укладывается фильтрующий материал и сверху растительное сырье. Экстрагент, отделенный от сырья фильтрующим материалом прокачивается через него с помощью насоса несколько раз до достижении равновесной концентрации. При данном способе время настаивания сокращается в несколько раз [109].

Для ускорения процесса экстрагирования применяют перемешивание. В настоящее время внедряются интенсивные методы экстракции, в основе которых лежит метод передачи системе вибраций, пульсаций, колебаний различных амплитуд, частот и интенсивностей. Среди импульсных методов обработки материалов распространены: механические, гидравлические, электроимпульсные, магнитоимпульсные [105, 131, 167].

Вихревая экстракция. Впервые метод вихревой экстракции был предложен М. Мелихаром, Б. Рузеком и Н. Солих, которые отметили сокращение до 540 минут стадии экстрагирования действующих веществ горечавки, аира, красавки, хинного дерева. Метод основан на интенсивном перемешивании (4000-45000 об/мин),

сопровождающимся измельчением сырья с помощью быстроходных мешалок пропеллерного типа с острыми лопастями Размол сырья увеличивает поверхность соприкосновения фаз, а также интенсификация осуществляется за счет максимальной разности концентраций при возникновении конвекции, турбулизации потоков, пульсации жидкости, отпрессовывания частиц [176]. При изучении кинетики вихревой экстрации для различных по анатомическому строению видов сырья (п=5000 об/мин) установлено, что для листьев красавки время достижения равновесия составляет 15 минут, травы

зверобоя - 25 минут, листьев ландыша - 20 мин, корней валерианы -60 минут [87, 88, 89]. К недостаткам данного метода нужно отнести повышение температуры при работе мешалок и излишнее измельчение сырья [83]. Вытяжка получается мутной и необходимо затратить много времени на ее отстаивание.

Впервые в нашей стране виброэкстракция была применена Л.С. Казарновским и С.М. Коганом, предложившими использовать вибратор [58]. Переменное магнитное поле вызывает вибрацию якоря, которая усиливается пружинными амортизаторами. Колебания якоря передаются вибрационной головке, конструктивно выполненной в виде тарелок, посаженных на шток, свободно перемещающийся вверх-вниз. Обычно используют вибраторы с частотой колебаний 50 Гц. Процесс экстракции сокращается до 1-2 часов [52, 58, 88, 129, 164]. Применение виброэкстракции показано также Т.К. Гончаренко и др. [21, 92]. В промышленных условиях наибольший эффект был достигнут при применении виброэкстракции на шнековых установках для получения настоек боярышника, логахилуса, красавки и др. [92, 109].

Перколяцж. Экстрагирование методом перколяции отличается от экстрагирования методом мацерации тем, что после непродолжительного настаивания при экстракции создается максимальная разность концентраций благодаря постепенному вытеснению извлекателя чистым экстрагентом. Перколяция - это процеживание экстрагента через плотный слой растительного материала. Метод перколяции включает три последовательно протекающие стадии: намачивание и набухание сырья, настаивание, собственно перколяция. При этом слив перколята и подача сверху

экстрагента проводится со скоростью, не превышающей 1/24или 1/48 части используемого объема перколятора за 1 час.

Полученная вытяжка далее проходит стадию очистки в соответствии требований ГФ XI, приведенных выше [10, 24, 30, 81, 109, 110, 141].

1.5.3 Перспективы развития экстракционных лекарственных форм

В настоящее время существует довольно значительный ассортимент лекарственного растительного сырья, выпускаемого различными производителями в пачках, брикетах и фильтр-пакетах с указанием способа приготовления на упаковке. Как правило, из таких форм растительного сырья больной должен самостоятельно в домашних условиях получить лекарство в виде водного извлечения.

Приготовленное таким образом лекарственное средство далеко не всегда обладает должной фармакологической активностью. Это связано с неполным высвобождением биологически активных веществ растения в водное извлечение или высвобождением балластных веществ.

В связи с этим наблюдается тенденция к сокращению номенклатуры данных препаратов и переход на производство лекарственных форм промышленного производства в частности в виде настоек и экстрактов.

Многие традиционные методы экстрагирования, получившие практическое применение, не оптимальны, а потери действующих веществ и связанные с ними потери лекарственного сырья из-за несовершенства технологии весьма существенны [90, 98].

Вышеуказанное определяет пути совершенствования производства экстракционных средств. Это, прежде всего, расширением ассортимента настоек, особенно для лечения социально значимых заболеваний, совершенствование технологического процесса производства настоек, а также внедрение безотходных технологий производства лекарственных средств.

Расширение ассортимента настоек связано с более полным и рациональным использованием лекарственного растительного сырья. Например, предлагается для производства препаратов женьшеня использовать как листья [79, 133], так и биомассу женьшеня [54] вместо использовавшихся ранее корней. В работе Ильясовой С.М. показано соответствие качественного и количественного содержания иридоидов и кислоты аскорбиновой в коре и листьях калины обыкновенной и калины гордовины. На основании полученных данных предлагается использовать ранее не применяемое лекарственное растительное сырье - кору калины гордовины наряду с корой калины обыкновенной для получения настойки калины [48].

Важным аргументом в расширении ассортимента выпускаемых настоек служит тот факт, что для некоторого лекарственного растительного сырья не разработана его готовая экстракционная форма. Примерами таких экстракционных препаратов могут служить настойка маакии [47], разработанная нами настойка сушеницы топяной, жидкий и сухой экстракт брусники [14], густой экстракт водянки [142], сухой экстракт касатика [143] и ряд других препаратов.

Технологический процесс получения настойки включает в себя подготовку сырья и экстрагента, экстракцию растительного материала, очистку полученной вытяжки, стандартизацию настойки.

Основная задача процесса измельчения сырья - максимальное разрушение клеточных структур с целью увеличения поверхности контакта экстрагента с сырьем. В данном случае сводятся к минимуму диффузионные процессы, связанные с переходом экстрактивных веществ через мембраны клеточных стенок в растворитель.

В случаях когда биологически активные вещества разрушаются при традиционных методах измельчения и сушки, применяют технологию криогенного измельчения и сушки свежего лекарственного растительного сырья. Криогенная переработка растительного сырья позволяет полностью сохранить нативную структуру биологически активных веществ. Так, для получения экстракционных препаратов родиолы розовой рекомендуется применять метод мокрого разлома и криогенной сушки растительного сырья. Получаемый при этом мелкодисперсный порошок с размером частиц менее 100 мкм обладает повышенной экстрактивной способностью [16].

Актуальным является разработка новых высокоэффективных способов экстрагирования лекарственного растительного сырья, увеличивающих выход биологически активных веществ из растения и ускоряющих процесс экстракции. При этом необходимо стремиться к максимальному сохранению биологически активных веществ в нативном состоянии [21, 31, 39, 71, 139, 166].

Наиболее приоритетным направлением интенсификации процесса экстрагирования является управление гидродинамическими условиями процесса на основе факторов, ускоряющих массообмен внутри частиц сырья и в свободном экстрагенте. Предложены низкочастотная обработка лекарственного растительного сырья, обеспечивающая вибрацию сырья, пульсацию экстрагента через слой

сырья, в частности с использованием ультразвука и роторно-пульсационных аппаратов. Импульсная обработка сырья, проводимая с помощью электро-, магнито-, оптикоимпульспых устройств, вызывает ударные волны, создающие высокое импульсное давление. Перечисленные методы обеспечивают более полный контакт экстрагента с лекарственным растительным сырьем. Например, если при противоточной экстракции участвует 20-25% всей поверхности сырья, то здесь активная поверхность частиц приближается к 100% [20, 26, 92, 95].

Даже беглое знакомство с литературой показывает крайнюю неравномерность в разработке методов количественного определения действующих веществ в растительном сырье и препаратах из него. Для некоторых лекарственных растений и препаратов из них качественный анализ действующих веществ разработан недостаточно, а количественный не предусмотрен ни в сырье, ни в препарате. Поэтому является актуальным совершенствование методов стандартизации и контроля качества, как исходного лекарственного растительного сырья, так и его лекарственных форм по основным группам биологически активных веществ.

Однако только около 60% из общего числа фитопрепаратов стандартизируют по содержанию действующих веществ химическими и биологическими методами.

Загрязнение окружающей среды при производстве экстракционных лекарств (использование минеральных удобрений и пестицидов для выращивания растительного сырья, широкое использование вредных химических экстрагентов и растворителей, загрязнение вод и выбросы в атмосферу) играет немаловажную роль в общей проблеме экологии и взаимоотношений человека с природой.

Проблема защиты окружающей среды решается, помимо прочего, комплексным использованием растительного сырья и внедрением безотходной технологии производства лекарств [9, 15, 28, 32, 93, 108].

Химико-фармацевтическая промышленность России

перерабатывает ежегодно несколько десятков тысяч тонн растительного сырья, сумма извлекаемых веществ из него невелика и составляет 10-15% от массы растительного материала. В результате производства остаются тысячи тонн шрота, который практически не используется [135]. Сегодня в организации производства лекарственных средств на основе малоотходной ресурсосберегающей технологии актуальное значение имеет разработка комплексных процессов, обеспечивающих эффективную переработку лекарственного растительного сырья.

В литературе имеются сведения по изучению таких растительных отходов как листья подорожника большого после производства плантаглюцида, корни и корневища солодки после производства ликвиротона, жом плодов облепихи после извлечения масла, корни левзеи при производства настойки [36, 144], шрот плодов расторопши при производстве препарата "Силибор", шрот соцветий бессмертника после производства препарата «Фламин», шрот соцветий календулы после производства препарата «Калефлон» [36], шрот зверобоя после производства новоиманина, шрот листьев мяты [61], шрот листьев крапивы [145]. Все перечисленные отходы предлагаются для использования в качестве кормовых добавок, высокую усвояемость которых связывают с тем, что после экстракции растительный материал приобретает новые свойства: происходит набухание и разрыхление клетчатки, увеличение объема

субмикроскопических капилляров, что способствует хорошему перевариванию добавок.

В ходе исследований было выявлено, что после получения настойки календулы в шроте остается большая часть гидрофильных соединений, в том числе полисахаридов. При этом именно полисахариды обусловливают широкий спектр фармакологической активности: противоязвенную, кровоостанавливающую,

противовоспалительную, иммуномодулирующую. Таким образом, шрот цветков ноготков следует рассматривать не как отход производства, а как источник получения нового лекарственного препарата - экстракта ноготков сухого [12].

Для более полного комплексного использования сырья расторопши пятнистой изучена возможность получения препарата «Расторопши настойка» из плодов растения, а также из обезжиренных измельченных плодов и плодов-отходов производства жирного масла расторопши. Кроме экономической целесообразности использования, шрот и жом обезжиренных плодов имеет ряд преимуществ перед необезжиренным сырьем: большие сроки хранения (минимизирован процесс прогоркания жирного масла, меньшая загрязненность аппаратов, лучшая сыпучесь и т.д. [1].

Коллективом ученых во главе с Д.И. Цыбиновой установлено, что экстракт шрота облепихи содержит каротиноиды, токоферолы, витамины Р и К, обеспечивающие противоязвенное действие. Ими же выделена полифенольная фракция из отходов облепихи, представлющая собой смесь лейкоантоцианидов малой степени конденсации, обладающих капилляроукрепляющим действием [155, 156]. Разработана безотходная технология препарата из листьев алоэ, включающая переработку шрота [38].

В результате комплексной переработки шрота после получения настойки "Биоженьшень" предложен новый отечественный энтеросорбент "Панасорб", превосходящий по ряду показателей такие известные сорбенты как полифепан и микрокристаллическая целлюлоза (МКЦ) [163, 164].

В завершении литературного обзора можно отметить следующее:

Обзор литературных источников показал, что трава сушеницы топяной является перспективным лекарственным растением, широко используемым в официальной и народной медицине. Наличие в литературе сведений о целебных свойствах травы сушеницы топяной (гипотензивное, противовоспалительное, противоязвенное действие) позволяет считать целесообразным исследование по созданию лекарственных препаратов на её основе.

Согласно данных литературы, методики анализа для контроля качества и стандартизации травы сушеницы топяной разработаны недостаточно; лекарственные формы, кроме настоев, в доступной литературе не описаны, что в значительной степени осложняет использование указанного сырья в лечебной практике.

На основании выше изложенного следует, что необходимы дополнительные исследования по усовершенствованию надежности идентификации травы сушеницы топяной, методик анализа, создание и исследование лекарственных препаратов на основе травы сушеницы топяной.

Заключение диссертации по теме «Технология получения лекарств», Николашкин, Александр Николаевич

ВЫВОДЫ

1. Проведенное информационно-аналитическое исследование показало перспективность растения и полное отсутствие её лекарственных форм промышленного производства.

2. Определены технологические характеристики лекарственного растительного сырья, необходимы при разработке экстракционных лекарственных форм, такие как пористость, порозность, сыпучесть, измельченность, набухаемость, поглощающая способность сырья, коэффициент вымывания.

3. Проведено углубленное анатомо-диагностическое исследование, усовершенствованы методики количественного определения флавоноидов в сырье сушеницы топяной. Уточнены показатели качества травы сушеницы топяной, представленные в ФС 51 ГФ XI издания; разработаны новые показатели качества, которые включены в проект ФС.

4. Изучены факторы, влияющие на выход действующих веществ из травы сушеницы топяной в извлечение: измельченность сырья, концентрация спирта этилового, плотность укладки сырья в перколятор, продолжительность предварительного настаивания, количество циркуляций вытяжки при настаивании, количество сливов. Определены оптимальные значения данных факторов. С помощью дисперсионного анализа, проводимого на программном комплексе SPSS, установили, что все исследуемые факторы, кроме измельченности, достоверно влияют на выход флавоноидов из травы сушеницы топяной в извлечение.

5. Впервые разработаны составы и технология получения настойки и жидкого экстракта сушеницы топяной. Составлены технологические и аппаратурные схемы получения данных экстракционных препаратов.

6. Подобраны условия, разработаны методики определения подлинности и количественного определения флавоноидов в разработанных лекарственных формах - настойке и жидком экстракте сушеницы топяной. Полученные результаты обработаны статистически: методики количественного определения флавоноидов обладают достаточной точностью и воспроизводимостью, относительная ошибка определения при достоверной вероятности 0,95 не превышает ± 5 %.

7. Впервые разработаны показатели качества настойки и жидкого экстракта сушеницы топяной, изучена стабильность и установлен срок годности настойки - 2 года.

8. На основе проведенных исследований составлены проекты фармакопейных статей на траву сушеницы топяной; на впервые разработанные настойку и жидкий экстракт травы сушеницы топяной. Проекты фармакопейных статей «Сушеницы топяная трава» и «Сушеницы топяной настойка» направлены и приняты Центром стандартизации лекарственных средств ФГУ «Научный центр экспертизы средств медицинского применения» для рассмотрения, утверждения и последующего включения в Государственную фармакопею 12 издания.

Список литературы диссертационного исследования кандидат фармацевтических наук Николашкин, Александр Николаевич, 2013 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Авдеева Е.В. Получение галеновых препаратов из плодов расторопши пятнистой / Е. В. Авдеева // Фармация . - 2006. - № 6 . -С. 43-46.

2. Алабердин C.B. Суточная динамика диастолического артериального давления у больных инциденталомами надпочечных желез протекающих с синдромом артериальной гипертонии / C.B. Алабердин, В.А. Дульский // Циклы. Материалы Пятой Международной конференции / Северо-Кавказский государственный технический университет. - Ставрополь, 2003. - Т.4.- С. 177.

3. Алмазов А.Н. Антиульцерин и применение его при запущенных ранах и язвах / А.Н. Алмазов // Военно-санит. дело. - 1942. - № 4-5. - С. 27-32.

4.Алюшин М.Т. Основные направления развития фармацевтической науки в области технологии лекарственных форм / М.Т. Алюшин, И.С. Гриценко, Л.Г. Нужина // Актуальные проблемы фармацевтической технологии. - М., 1994. - С. 3-9.

5. Артериальная гипертония / под ред. И.К. Шхвацабая, Дж. JTapa-М.: Медицина, 1979.-416 с.

6. Астраханова М.М. Современные аспекты применения фитопрепаратов в медицине /М.М. Астраханова, В.Ф. Охотникова //сб. Развитие систем фармацевтического обеспечения нужд Российского здравоохранения: Материалы конф. в рамках Х1Х-го Российского Национального конгресса «Человек и лекарство». М.: ЭкООнис, 2012.-С.101-105

7.Бабаскин B.C. Антигипертензивное действие суммы флавоноидов клевера лугового / B.C. Бабаскин, B.C. Добрянский, М.В. Киселевский // Фармация. - 1993. - № 2. - С. 56-57.

8.Бандюкова В.А. Хроматография флавоноидов на сефадексах / В.А. Бандюкова, Г.Н. Земцова // Хроматографические и электрофоретические методы исследования биологически активных веществ.- Свердловск, 1976 - С. 75-76.

9. Бекетов Б.Н. Разработка новых лекарственных препаратов на основе биологически активных веществ травы полыни горькой / Б.Н. Бекетов, Т.А. Смагина, JI.H. Малютина // Актуальные проблемы фармацевтической технологии (Науч. тр.- Т. 32).- М., 1994,- С. 159— 161.

10. Блинникова A.A. Сравнительная характеристика методов количественного определение этанола в жидких экстрактах / A.A.

Блинникова // Успехи в изучении природных и синтетических

t

лекарственных средств - Томск, 1982-С. 89-90.

11. Богданова Л.С. Жирорастворимые вещества Gnaphalium uliginosum / Л.С. Богданова // Растительные ресурсы - 1984.- №3.- С. 400-403.

12. Бурцева И.В. Исследование нового вида сырья - шрота цветков ноготков / И.В. Бурцева // Фармация.- 2004 - № .— С. 16 — 19.

13. Бутурлин В.В. Опыт применения болотной сушеницы у больных гипертонической болезнью / В.В. Бутурлин // Сов. медицина,- 1953.-№3,-С. 40-42.

14. Васильев И.Б. Разработка технологии и норм качества жидкого и сухого экстрактов листьев брусники: автореф. дис. ... канд. фармац. наук/И.Б. Васильев. Пятигорск, 1997. -21с.

15. Верещагина В.В. Разработка ресурсосберегающей

технологии и норм качества экстракта аралии жидкого: автореф. дис.

i

... канд. фармац. паук / В.В. Верещагина. Пятигорск, 1999. -23 с.

16. Гаврилов A.C. Новые лечебно-профилактические препараты родиолы розовой / A.C. Гаврилов // Химико-фармацевтический журн. - 2003. - №12. -С. 18-21.

17. Гаммерман А.Ф. Дикорастущие лекарственные растения СССР / А.Ф. Гаммерман, И.И. Грам.-М.: Медицина, 1976.-325 с.

18. Георгиевский В.Г1. Биологически активные вещества лекарственных растений/ В.П. Георгиевский, Н.Ф. Комиссаренко, С.Е. Дмитрук. - Новосибирск: Наука, Сиб. отделение, 1990 - 333 с.

19. Георгиевский В.П. Физико-химические и аналитические характеристики флавоноидных соединений / В.П. Георгиевский, А.И. Рыбаченко, A.JI. Казаков - Ростов: Изд-во Ростовского университета, 1988,- 144 с.

20. Голованчиков А.Б. Экстрагирование активных компонентов из лекарственных растений в электрическом поле / А.Б. Голованчиков, М.В. Попов // Хим.-фармац. журн. .- 1998 - №8 - С. 31-34.

21. Гончаренко Г.К. Пути интенсификации процесса экстракции лекарственных веществ из растительного сырья / Г.К. Гончаренко, Е.И Орлова // Мед. пром. СССР,- 1966,- №6,- С. 43-45.

22. Горбачева И.А. Количественное определение флавоноидов в траве сухоцвета однолетнего / И.А. Горбачева, Д.А. Муравьева //

Актуальные проблемы создания новых лекарственных препаратов растительного происхождения: Материалы VII Международного съезда Фитофарм 2003 (Санкт-Перетербург - Пушкин, 3-5 июля 2003 г.).- СПб, 2003,- С.332-336.

23. Горшкова A.B. Экстрагирование травы зверобоя

*

растворителями, применяемыми в, Составе лекарственных и

г

jч

косметических средств / A.B. Горшкойа, В.А. Вайнштейн, И.Х. Хаззаа // Актуальные проблемы создания новых лекарственных препаратов растительного происхождения: Материалы VII Международного съезда Фитофарм 2003 (Санкт-Перетербург - Пушкин, 3-5 июля 2003 г.).-СПб, 2003.- С. 29-32.

24. Государственная фармакопея СССР / МЗ СССР. - XI изд., доп. - М.: Медицина, 1997,- Вып. 1,2.

25. Государственный реестр лекарственных средств-М.,1998 - 1007 с.

26. Грачева Н.В. Исследование возможности интенсификации экстракции чаги электрическим полем постоянного тока /Н.В. Грачева, А.Б. Голованчиков //Химико-фармацевтический журн.-2010.-№11 .-С.22-24.

27. Гунар О.В. Требования к микробиологическому качеству лекарственных средств и процедур испытания в различных фармакопеях. Часть I / О.В. Гунар, К.А. Каграмонова, Н.Г. Сахно // Фармация.-2010.-№6.-С. 9-15.

28. Денисенко Ю.О. Технология эхинацеи пурпурной экстракта жидкого ресурсосберегающим методом /. Ю.О. Денисенко, Е. П. Федорова, И.Н. Андреева // Сб. Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб.

науч. тр. / под ред. М.В. Гаврилина. - Пятигорск: Пятигорская ГФА, 2012.-Вып. 67.-C.I57- 158.

29. Дощинская Н.В. Выявление и использование запасов дикорастущих лекарственных растений Томской области / Н.В. Дощинская // Труды первого всесоюзного съезда фармацевтов-Москва, 1970,-С. 396-398.

30. Дюкова В.В. Изучение процесса отстаивания жидких галеновых препаратов / В.В. Дюкова, Е.Г. Преференская // Совершенствование методов приготовления лекарств, М., 1979.- С. 156-163.

31. Дюкова В.В. К вопросу об экстракции растительного сырья с подогревом / В.В. Дюкова, О.И. Белова // Совершенствование методов приготовления лекарств (Науч. тр., Т. 17).- Москва, 1979 - С. 163-169.

32. Дюкова В.В. Совершенствование технологии и методов контроля жидкого экстракта валерй&ны / В.В. Дюкова, Д.Т. Берашвили, Д.М. Попов // Технологические аспекты создания лекарственных форм - М., 1986 - С. 78-85.

33. Егоров В.А. Организационно-экономические исследования в области создания новых отечественных препаратов на основе лекарственного растительного сырья: автореф. дис. ... доктора фармац. наук / В.А. Егоров. Москва - 2000 - 45с.

34. Егошина Т.Л. Запасы сырья и ресурсная характеристика некоторых лекарственных растений в северо-восточных районах Кировской области / Т.Л. Егошина // Растительные ресурсы.- 1989 г-вып. 2.-С. 173-180.

35. Жигар М.П. Мир целебных корней / М.П. Жигар, Л.В. Николайчук- Мн.: 1991 -176 с.

36. Заболотный В.А. Разработка технологии новых лекарственных средств и использовании отходов ряда их производств: Автореф. дис. ... канд. фармац. наук / В.А. Заболотный. Харьков, 1992,-29 с.

37. Завражнов В.И. Лекарственные растения: Лечебное и профилактическое использование / В.И. Завражнов, Р.И. Китаева, К.Ф. Хмелев - Воронеж, 1994. - 480 с.

38. Запорожченко О.М. Безотходная технология получения препаратов из листьев алоэ и перспективы использования в народном хозяйстве / О.М. Запорожченко, А.Б. Абрамова // Фармакологические и токсикологические аспекты применения лекарственны веществ в животноводстве: материалы Всесоюзной научной конференции - М., 1992,-с. 23-24.

39. Иванова С.А., Демченко Ю.Т., Каухова И.Е., Вайнштейн

B.А. Изучение особенностей экстрагирования липофильных веществ из растительного сырья двухфазной системой экстрагентов и органическими растворителями // Актуальные проблемы создания новых лекарственных препаратов растительного происхождения: Материалы VI Международный съезда. (Санкт-Петербург, 4-6 июля 2002 г.). СПб, 2002.- с. 42-46.

40. Иващенко Н.В. Современные требования к качеству настоек /Н.В. Иващенко, И.А. Самылина //Фармация.- 2913.-№1.-

C.49-51.

41. Изаксон К.А. Применение болотной сушеницы в комплексном лечении больных дизентерией / К.А. Изаксон // Военно-мед. жури.- 1954.-№4- С. 82.

42. Изучение влияния некоторых факторов на полноту извлечения флавоноидов в отвар зверобоя / Л.И. Коваленко [и др.] // Успехи в изучении природных и синтетических лекарственных средств-Томск, 1982-С. 163-169.

43. Изучение процесса экстракции при получении антигепатотоксического средства растительного происхождения / Г.И. Российская [и др.] // Фармация.- 1988.- №4- С. 27-29.

44. Изучение стадии экстрагирования при получении сухого экстракта каштана конского / H.A. Постоюк [и др.] //Фармация.-2012.-№4.-С.32-34

45. Изучение флавоноидного состава сырья травы люцерны хмелевидной / Простодушева Т.В. [и др.] // Фармация.- 1998 - №3 - С. 30-31.

I

46. Изучение химического состава нового фитопрепарата

*

«Бальзам Первопрестольный» 2. ,Флавоноидные соединения / Тюкавкина H.A. [и др.] // Фармация.- 1997.-№3.- С. 22-23.

47. Изучение элементного состава листьев и настойки маакии амурской /Л.И. Моисеенко [и др.] // Фармация - 2009 - №1С. 22-24.

48. Ильясова С.М. Сравнительное исследование сырья и фитопрепаратов калины обыкновенной и калины гордовины: автореф. дис. ... канд. фармац. наук / С.М. Ильясова Москва.-2006-25 с.

49. Исмаилов С. И. Терапия артериальной гипертензии у больных сахарным диабетом / С. И. Исмаилов, K.M. Яфасов, Н.З. Сорожиддинова // Проблемы эндокринологии - 2003 - №2- С. 17-23.

50. Использование физико-химических методов в анализе лекарственных средств растительного происхождения / Маркова О.М. [и др.] // Вестник ВГУ. Серия химия, биология, фармация - 2003-№ 1.- С. 99-101.

51. Испытания микробиологического качества лекарственных средств по российской и европейской фармакопеям: сравнение методик / О.В. Гунар [и др.] // Фармация.- 2011 ,-№2.-С. 47-50.

52. Исследование процесса экстракции при получении фитопрепарата «Эликсир Демидовский» / Соколова Л.И. [и др.] // Фармация.- 2000,- №5-6.- С. 23-26.

53. Исследования качественного состава травы и корневищ с корнями пиона уклоняющегося / Ю.А. Качко [и др.] // Ресурсоведческое и фитохимическое изучение лекарственной флоры СССР.-М., 1991,- С. 144-150.

54. Исследования лекарственных форм настойки биоженьшеня / Олешко Л.Н. [и др.] // Актуальные проблемы фармацевтической технологии (Науч. труды, том 32).- Москва, 1994.-С. 147-151.

55. К вопросу разработки общей фармакопейной сатьи «Настойки» / В.Л. Багирова [и др.] // Актуальные проблемы создания новых лекарственных препаратов природного происхождения: Материалы III Международного съезда (Санкт-Петербург - Пушкин 29 июня - 1 июля 1999).- СПб, 1999.- С. 99-103.

56. Кабишев К.Э. Количественное определение суммы флавопоидных соединений в интраназальных лекарственных формах препарата «Оксофил» с полиэкстракторм из наземной части Oxytropis

oxyphylla (PALL) DC / К.Э. Кабишев, Е.И. Саканян // Растительные ресурсы,- 2002 - вып. 4,- С. 120-128.

57. Каграманова К.А. Изучение уровня микробиологической чистоты лекарственного растительного сырья и изготовленных из него отваров и настоев / К.А. Каграманова, О.В. Гунар // Фармация-1992,- №6,- С. 24-26.

58. Казарновский J1.C. Ускорение процесса экстрагирования с применением электромагнитного вибратора / Л.С. Казарновский, С.М. Коган//Мед. пром.- 1961.-№10,-С. 35-38.

59. Калошина H.A. Некоторые данные об исследовании растений семейства сложноцветных, произрастающих в БССР на содержание физиологически активных веществ / H.A. Калошина, В.И. Карпова // Сборник науч. трудов Витебского гос. мед. ин-та, 1969-вып. 13.-С. 60-64.

60. Карташова Г.С. Количественное определение флавоноидов в надземной части речника волосистого / Г.С. Карташова, Л.В. Судос // Хим.-фармац. журн- 1997 - №9 - С. 41-45.

61. Касимовская Н.И. Использование отходов мяты в качестве корма для скота / Н.И. Касимовская // Использование отходов промышленности в кормлении сельскохозяйственных животных-Киев, 1976.-С. 15-17.

62. Киселева Т.М. Запасы сырья лекарственных растений в западных и центральных районах Кировской области / Т.М. Киселева, Т.А. Шабалина // Растительные ресурсы - 1986 - № 1.- С. 45-50.

63. Ковтун Е.В. Разработка технологии и норм качества экстракта душицы обыкновенной жидкого: автореф. дис. ... канд. фармац. наук / Е.В. Ковтун. Пятигорск, 1999г.- 23 с.

64. Количественное определение суммы флавоноидов в сухом экстракте янтака (верблюжьей колючки) / Х.Х. Хамтбаев [и др.] // Хим.-фармац. журн.- 1987.-№11.-С. 1352-1355.

65. Количественное определение суммы флавоноидов и фенолкарбоновых кислот в соцветиях пижмы / Л.Т. Бондаренко [и др.] //Хим.-фармац. журн.- 1984-№9-С. 1091-1093.

66. Коноплева М.М. Исследование биологически активных соединений сушеницы топяной и разработка метода стандартизации лекарственного растительного сырья.: автореф. дис. ... канд. фармац. наук / М.М. Коноплева. Москва, 1980, ¿2 с.

67. Костенникова З.Г1. Количественное определение флавоноидов в настойке календулы методом УФ- спектрофотометрии / З.П. Костенникова, Г.А. Панова, Р. Дамбраускене // Фармация.-1984.- №6,- С. 33-35.

68. Костенникова З.П. Спектрофотометрическое определение флавоноидов в цветках арники / З.П. Костенникова, Г.А. Панова, P.M. Долотенкова //Фармация,- 1985.-№2-С. 51-53.

69. Котикова Н.М. Качественное фитохимическое исследование сушеницы топяной / Н.М. Котикова, A.M. Халецкий // Материалы науч. конф.-М., 1967-С. 88-90.

70. Коэффициенты водопоглощения и набухания лекарственного растительного сырья /И.А. Самылина [и др.] //Фармация.-2012.-№4.-С.З-6.

71. Кузьмина Т.С. Влияние поверхностно-активных веществ на извлечение производных хлорофилла и флавоноидов в процессе двухфазной экстракции травы зверобоя продырявленного и травы сушеницы топяной / Т.С. Кузьмина, И.Х. Хаззаа, В.А. Вайпштейн //

Актуальные проблемы создания новых лекарственных препаратов

растительного происхождения : Материалы VII Международного

съезда Фитофарм 2003 (Санкт-Перетербург - Пушкин, 3-5 июля 2003

f

г.). - СПб, 2003- С.62-64. !

72. Кулиниченко Т.В. К фармакологии сушеницы болотной: дис. ... доктора фармац. наук /Т.В. Кулиниченко. - Казань, 1954 -24 с.

73. Куркин В.А. Определение флавоноидов в прополисе / В.А. Куркин, В.Б. Браславский, Г.Г. Запесочн^я // Фармация - 1992 —№1 — С. 35-39.

74. Куркин В.А. Определение флавоноидов в сырье и препаратах гинкго двулопастного / В.А. Куркин, Д.Г. Буланкин // Фармация,-2011,-№2,-С. 13-17.

75. Куркина A.B. Методика определения суммы флавоноидов в цветках пижмы / A.B. Куркина, А.И. Хусаинова // Фармация,- 2010.-№3.-С. 21-25.

76. Куркина A.B. Перспективные направления в области стандартизации лекарственного растительного сырья, содержащего флавоноиды / A.B. Куркина //сб. Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб. науч. тр. / под ред. М.В. Гаврилина. - Пятигорск: Пятигорская ГФА, 2012. - Вып. 67. - С.60 - 63.

77. Курочкин Е.И. Организация рационального использования природных ресурсов дикорастущих лекарственных растений среднего Поволжья / Е.И. Курочкин, С.Г. Сбоева, A.A. Щербинин // Фармация-1988.-№2.-С. 13-16.

78. Ланина Н. Е. Разработка технологии настойки из травы касатника молочно-белого и ее стандартизации:, дис. ... канд. фармац. наук / Н.Е. Ланина. С-Пб, 2003. - 163с.

79. Легостева А.Б. Фитохимическое изучение листьев женьшеня, получение и анализ препаратов, содержащих панаксозиды: автореф. дис. ... канд. фармац. наук / А.Б. Легостеева. Л, 1989. - с. 22

80. Листов С.А. О содержании тяжелых металлов в лекарственном растительном сырье / С.А. Листов, Н.В. Петров, А.П. Арзамасцев // Фармация. 1990 - №2 - С. 19-25.

81. Листов С.А. Содержание тяжелых металлов в настоях и отварах из лекарственного растительного сырья / С.А. Листов, Г.А. Непесов, Э.С. Сахатов // Фармация.- 1992.- №4.- С. 37-41.

82. Литвинов В.Л. Взаимосвязь основных технологических параметров при экстракции из растительного сырья / В.Л. Литвинов, П.П. Ветров // Фармация,- 1982,- №4 - С. 465-467.

83. Мелихар М. Повышение температуры в системе при вихревой экстракции / М. Мелихар // Фармация - 1964 - №19 - С. 410-417.

84. Мерсон М.И. Опыт применения антиульцерина -масляной вытяжки сушеницы при стоматитах / М.И. Мерсон // Стоматология.- 1950.- №2.- С. 20-21.

85. Минаева В.Г. Лекарственные растения Сибири / В.Г. Минаева-Новосибирск: Наука Сиб. отделение, 1991.-431 с.

86. Минина С.А. Общая характеристика гликозидов. Химическая структура, свойства и технология флавоноидных гликозидов и сапонинов (текстлекций)/С.А. Минина- С-Пб., 1992-С. 3-25.

87. Минина С.А. Оптимизация процесса экстрагирования корня женьшеня / С.А. Минина, Л.В. Шигарова, В.А. Вайнштейн // Хим.-фармац. журн. 1998-№7,-С. 42-46.

88. Минина С.А. Теория и аппаратурное офомление процесса экстракции / С.А. Минина, Л.И. Громова.- Л.: ЛХФИ, 1985 - 39 с.

89. Минина С.А. Технология и критерии качества ряда алкалоидных фитопрепаратов и готовых лекарственных форм: автореф. дис. ... докт. фармац. наук / С.А. Минина. М.: МОЛМИ, 1989.-24 с.

90. Минина С.А. Химия и технология фитопрепаратов / С.А. Минина, И.Е. Каухова. - М.: ГЕОТАР-МЕД, 2004,- 560 с.

91. Моисеев Д.В. Идентификация флавоноидов в растениях методом ВЭЖХ /Д.В. Моисеев, Г.Н. Бузук, В.Л. Шелюто //Химико-фармацевтический журн.-2011.-№1.-С.35-38.

92. Молчанов Г.И. Интенсивная обработка лекарственного растительного сырья / Г.И. Молчанов - М.: Медицина, 1981 - 208 с.

93. Муравьев И. А. Разработка технологии суммарного водорастворимого препарата из крапивы / И.А. Муравьев, Л.П. Летнева // Фармация - 1986 - №6 - с. 17-20.

94. Муравьев И.А. Технология лекарств. Изд. 3-е Т.2, М.: Медицина, 1980.-704 с.

95. Муравьев И.А. Учебник технологии лекарств и галеновых препаратов / И.А Муравьев. - М.: Медгиз, 1961.- С. 438-455.

96. Муравьева Д.А. Фармакогнозия. Москва, 1991.- С. 560.

97. Настойки, экстракты, эликсиры и их стандартизация / под. ред. проф. В.Л. Багировой, проф. В.А. Северцева- СПб.: СпецЛит, 2001.-С. 76.

98. Нишанов H. Сравнительная оценка методов получения настоек / Н. Нишанов, А.И. Генгринович // Медицинский журнал Узбекистана.- 1981-№10.-С. 62-64.

99. Одегова Т.Ф. Микробиологическая чистота - один из основных параметров стандартов GMP и GLP / Т.Ф. Одегова, О.В. Гунар // Фармация.- 2010.- №5.- С. 8-10.

100. ОСТ 91500.05.001.00 «Стандарты качества лекарственных средств. Основные положения». М.- 2000.

101. Панченко М.М. Комбинированное лечение язвенной болезни сушеницей и синюхой / М.М. Панченко // Клиническая медицина.- 1950,-№3,-С. 92-93.

102. Пашинский В.Г. Особенности создания фитопрепаратов / В.Г. Пашинский, Д.В. Рейхард // Российские аптеки - 2003 - №10 - с. 48-50.

103. Петринченко В.М. Определение суммы флавоноидов в траве марьянника лугового / В.М. Петринченко, Е.Е Галишевская. // Фармация,- 2004 №1,- С. 24-25.

104. Плюснин А.Н. Кинетика набухания лекарственного сырья растительного происхождения. Набухание горечавки крупнолистной в воде и водно-спиртовой смеси / А.Н. Плюснин, Л.А. Тихонова // Хим.-фармац. журн,- 1996.-№2,-С. 30-42.

105. Пономарев В.Д. Экстрагирование лекарственного сырья / В.Д. Пономарев - М.: Медицина, 1976.-204 с.

106. Потанин Д.А. Фармакотерапевтическая эффективность комплексного растительного средства при экспериментальных гипертензиях: автореф. дис. ... докт. фармац. наук / Д.А. Потанин 1999,- 23с.

107. Потанина О.Г. Совершенствование требований к разработке общих фармакопейных методов анализа лекарственного растительного сырья / О.Г. Потанина, И.А. Самылина // Фармация.-2011.- №3.- С. 46-48.

108. Приступа Е.А. Совершенствование технологии

приготовления и контроля качества витаминных чаев / Е.А. Приступа,

Д.М. Попов // Актуальные проблемы фармацевтической технологии

(Науч. труды, том 32).- Москва, 1994,- С. 151-159.

. *

109. Промышленная технология лекарств: (Учебник в 2 т. Том

2/ В.И. Чуешов, J7.M. Хохлова и др.) под ред. В.И. Чуешова- X.:

i

МТК-Книга; Издательство НФАУ, 2002,- 716 с.

110. Пугинян Е.А. Сравнительная оценка методов определения концентрации спирта в настойках / Е.А. Пугинян, И.Г. Редько, O.P. Фринк // Вопросы фармакологии и фармации - Ташкент, 1980 - С. 2934.

111. Пшуков Ю.Г. Методика одновременного определения коэффициентов поглощения, образования внутреннего сока и увеличения объема при растворении экстрактивных веществ / Ю.Г. Пшуков // Фармация.- 1990.-№4,- С. 24-28.

112. Разработка и стандартизация растительной композиции иммуномодулирующего действия / М.Ш. Курдикидзе [и др.] // Ресурсоведческое и фитохимическое изучение лекарственной флоры СССР.- M., 1991.- С. 205-211.

113. Раппопорт Д.М. Болотная сушеница при лечении гипертонической и язвенной болезни/ Д.М. Раппопорт, А.И. Чувакина // Труды Ижевского гос. мед. ин-та- Ижевск, 1951- т. 10 - С. 187195.

114. Российская Г.И. Установление времени достижения равновесия при экстрагировании сбора, состоящего из шести компонентов / Г.И. Российская, Т.Д. Даргаев, Л.И. Брутко // Фармация.- 1984.-№5.-С. 14-16.

115. Российский Д.М. Новые гипотензивные препараты из лекарственных растений / Д.М. Российский // Советская медицина-1953.-т. 17 - №1- С.29-30.

116. Самылина И.А. Использование алюминия хлорида для определения суммы флавоноидов в цветках боярышника / И.А. Самылина, О.В. Евдокимова, М.В. Кашникова // Фармация - 1994 — №4 - С.23-25.

I

117. Сенов П.Л. К фитохимическому изучению травы болотной сушеницы / П.Л. Сенов // Фармация,- 1940,- № 2-3.- С. 11-15.

118. Серых Е.А. Фармакогностическое исследование сушениц / Е.А. Серых //Успехи в изучении природных и синтетических лекарственных средств-Томск, 1982- С. 56-57.

119. Симанков В.А. Лечение язвенной болезни болотной сушеницей / В.А. Симанков // Военный медицинский журнал - 1951 .№3- С. 33-34.

120. Синтез, гипотензивные и антиаритмические свойства 2,9—

»

дизамещенных 3-алкоксикарбонилимида£о-[1,2-а]бензимидазолов / В.А. Анилимова [и др.] // Хим.-фармац. журн. - 1999 . - №7. - С. 2123.

121. Смирнова Л.П. Количественное определение суммы флавоноидов в цветках бессмертника песчаного / Л.П. Смирнова, Л.Н. Первых // Хим.-фармац. журн - 1998-№6 - С. 35-39.

122. Смирнова М.М. Стандартизация травы фиалки и экстракта сухого, полученного на её основе: автореф. дис. ... канд. фарм. наук / М.М. Смирнова. Пермь, 2004 - 25 с.

123. Соболева JI.C. Распространение сушеницы топяной. Ресурсы лекарственных растений Татарии, их использование и охрана / Л.С. Соболева // Ресурсоведческое и фитохимическое изучение лекарственной флоры СССР М., 1991.- С. 27-33.

124. Соболева Л.С. Ресурсы лекарственных растений Татарии, их использование и охрана / Л.С. Соболева // Ресурсоведческое и фитохимическое изучение лекарственной флоры СССР М., 1991- С. 27-33.

125. Совершенствование анализа и технологии настоев и отваров, содержащих флавоноиды / О.Г. Аносова [и др.] // Фармация. - 1994,- №1. - С. 30-34.

126. Совершенствование стандартизации травы сушеницы топяной / ATI. Николашкин [и др.] // Фармация. - 2010. -№2. - С. 1215.

127. Содержание флавоноидов в сушенице топяной / М.М. Коноплева [и др.] // Хим.-фармац. журн - 1981.—№1.- С. 72-76.

128. Соколов С.Я. Справочник по лекарственным растениям / С.Я. Соколов, И.П. Замотаев. - М. Медицина, 1984 - 464с.

129. Соколова Л.И. Экстрагирование природного сырья (Обзор) / Л.И. Соколова, В.А. Вайнштейн, А.Н. Шиков // Актуальные проблемы создания новых лекарственных препаратов природного происхождения: Материалы III Международного съезда (СПб-Пушкин 29 июня-1 июля 1999).-СПб., 1999.-С. 252-262.

130. Солдатова Т.Г. Таблетки из сухого экстракта сушеницы и

синюхи / Т.Г. Солдатова // Фармакология и токсикология.- 1956-

№2,- С. 60-61. ' i,

t'

131. Соловьев H.A. Сравнительная бденка ряда пульсационных экстракторов / H.A. Соловьев, В.Н. Дqpoнин, H.H. Поникаров // Машины и аппараты химической технологии - 1977-№5 - С. 40-42.

132. Спектрофотометрическое определение флавоноидов в сборе «Гепафит» / Миназова Г.И. [и др.] // Фармация - 1997 - №1.- С. 27-28.

133. Способ приготовления и фармакологические свойства настойки из листьев женьшеня / Минина С.А. [и др.] // Хим.-фармац. журн,- 2000,- №9.- С. 31-34.

134. Справочник по заготовкам лекарственных растений / Д.С. Ивашин [и др.].- 6-е изд., испр. и доп.- К.: Урожай, 1989 - 288 с.

135. Сравнительное изучение химического состава шрота

цветков календулы лекарственной и исходного сырья / И.В.

Крапивина [и др] // Актуальные проблемы фармацевтической науки и

!

образования: итоги и перспективы. - Материалы науч.-практ. конф. -

»

Пермь, 2001.-49с.

136. Староверова JI.A. Использование местных растительных средств для лечения кожных болезней / Л.А. Староверова // Вопросы дермато-венерологии- Курск, 1952-С. 65-67.

137. Степанова Т.А. Виды флоры Дальнего Востока России, викарные и офиинальные. Сообщение 1. Анализ проблемы и перспективы использования викариантов / Т.А. Степанова // Растительные ресурсы - 1997.-№3.-С. 12-14.

138. Степанянц P.A. Фармакологическое исследование болотной сушеницы / P.A. Степанянц // Фармация.- 1940. - № 12 - С. 29-35.

139. Терёшина Н.С. Ферментация и получение лекарственных препаратов /Н.С. Терёшина, H.A. Самылина, З.Г1. Костенникова //Фармация.- 2012.-№3.-С.53-57.

140. Технология лекарственных форм: учебник в 2 т. /Р.В. Бобылев [и др.]; под ред. JI.A. Ивановой.- М.: Медицина, 1991- Т.2.-544 с.

141. Технология лекарственных форм: учебник в 2 т. /Т.С. Кондратьева [и др.]; под ред. Т.С. Кондратьевой - М.: Медицина, 1991,- Т. 1,- 496 с.

142. Технология получения густого экстракта водянки, его антиокислительная и антигипоксическая активность / Е.В. Ермилова [и др.] // Хим.-фармац. журн-2001 -№11.-С. 26-28.

143. Технология получения сухого экстракта из наземной части касатика молочно-белого / С.А. Минина [и др.] // Хим.-фармац. журн. .- 1999.- №4.- С. 40-43.

144. Тимофеев В.В. Оценка качества растительных отходов от производства некоторых фитохимических препаратов как кормовых продуктов / Тимофеев В.В., Пучкова Е.И. // ЦБНТИ: Медпром. сер. передовой опыт в химико-фармацевтической промышленности-1982,-№10,-С. 8-9.

145. Тимофеев В.В. Полезные вещества в растительных шротах / В.В. Тимофеев // ЦБНТИ: Медпром. сер. передовой опыт в химико-фармацевтической промышленности. 1983.-№10-С. 10-13.

146. Тонкослойная хроматография в анализе флавоноидов растительных объектов /A.A. Мальцева [и др.] //Фармация.- 2013.-№1.-С. 13-16.

147. Турова А.Д. Лекарственные растения СССР и их применение/ А.Д. Турова-М.: Медицина, 1971.-424 с.

148. Универсальная энциклопедия лекарственных растений / сост. И. Путырский, В. Прохоров - Мн.: Книжный дом; М.: Махаон, 2000.-656 с.

149. Фармацевтическая технология. Технология лекарственных форм: учебник / И.И. Краснюк [и др.]; под ред. И.И. Краснюка, Г.В. Михайловой - М.: Академия, 2007 - 592 с.

150. Федосеева Л.М. Изучение технологических свойств бурых листьев Бадана толстолистного / Л.М Федосеева. // Химия растительного сырья - 1999-№4-С. 85-87.

151. Фитотерапия с основами клинической фармакологии / под ред. В.Г. Кукеса-М.: Медицина, 1999 - 192 с.

152. Хакимова Д.Р. Пути повышения качества препаратов боярышника / Д.Р. Хакимова, Д.М. Попов // Фармация.- 1995.-№3-С. 31-32.

153. Химический анализ лекарственных растений / под ред. Гринкевич Н.И., Сафронич Л.Н. - М.: Высшая школа, 1983 - 176 с.

154. Хренова Д.Х. Изучение процесса экстракции при получении препарата растительного происхождения / Д.Х. Хренова, Т.Д. Даргаева, Л.И. Брутко // Технологические аспекты создания лекарственных форм.-М., 1986-С. 85-90.

155. Цыбинова Д.И. Химико-фармакологическая жирорастворимого комплекса из отходов облепихи / Цыбинова Д.И.,

Федотовская H.H., Держанова Г.Ж. // Новости в биологии, химии и фармакологии облепихи СО АН СССР - Новосибирск, 1991- С. 128136.

156. Цыбинова Д.И. Химико-фармакологическое исследование полифенольной фракции из отходов облепихи / Д.И. Цыбинова, С.М. Николаев, Г.Ж. Держанова // Новости в биологии, химии и фармакологии облепихи СО АН СССР - Новосибирск, 1991- С. 137140.

157. Чистик Г.А. К фармакологическому исследованию сушеницы болотной / Г.А. Чистик // Сборник трудов Курского гос. мед. ин-та.-Курск, 1955, вып. 2- С. 83-;84.

158. Чхве Тхэсон Лекарственные растения / Тхэсон Чхве- М.: Медицина, 1987.-608 с.

159. Шарапов М.И. К вопросу о действии болотной сушеницы на вегетативный отдел системы / М.И. Шарапов, Н.И. Морозова // Тезисы докладов восьмой Всесоюзной конференции фармакологов.-Тбилиси, i960.-С. 13-164.

160. Шасс Е.Ю. Поиски новых видов лекарственных растений, заменителей импортных / Е.Ю. Шасс // Советская медицина.- 1944 — №4-5,- С. 23-25.

161. Шасс Е.Ю. Сушеница болотная / Е.Ю. Шасс // Научно-практическая информация ДАНИИ №1- М.: Медгиз, 1944 - С. 10-11.

162. Шемерянкина Т.Б. Требования к стандартизации лекарственного растительного сырья и фитопрепаратов на его основе /Т.Б. Шемерянкина, Т.А. Сокольская, Т.Д. Даргаева //Вопросы биологической, медицинской и фармацевтической химии.-2010.-№3.-С.9-12.

163. Шиков А.Н. Биотехнология и новый энтеросорбент Панасорб / А.Н. Шиков, О.В. Ремезова // Первый национальный конгресс по профилактической медицине: Тез. докл.- СПб, 1994-т. III.-С. 84-85.

164. Шиков А.Н. Влияние различных факторов на выращивание биомассы женьшеня и разработка из нее малоотходной технологии готовых лекарственных средств: автореф. дис. ... канд. фарм. наук / А.Н. Шиков СПб.- 1995,- 23 с.

165. Шмерко Е.П. Лечение и профилактика растительными средствами. Болезни пищеварительной системы / Е.П. Шмерко, И.Ф. Мазан - Баку: 1992,- 320 с.

166. Экстрагирование полярных БАВ из травы зверобоя двухфазной системой экстрагентов в присутствии ПАВ / В.А. Вайнштейн [и др.] // Хим.-фармац. журн - 2004 - №5 - С. 25-28.

167. Электроимпульсная методика переработке надземной части женьшеня / К.В. Мартиросян [и др.] // Тез. докл. VI Российского национального конгресса «Человек и лекарство».- М., 1999 - С. 439440.

168. Ярцева И.Б. Количественное определение суммы флавоноидов в траве одуванчика лекарственного / И.Б. Ярцева, В.А. Куркин // Фармация,- 1996,-№4 - С. 24-27.

169. Britishe Pharmacopeia- London: Her Majesty stationery office, 1988.-1140 p.

170. Cheryl A. Thompson Herbal quality seems to be growing / A. Cheryl //Am. J. Health-Syst. Pharm.- 1998,- Vol. 55,- pp. 2341-2342.

171. Dechamp J-F. Herbal medical products and patients' needs in Europe / J-F. Dechamp // Drug Information Journal - 1999 - Vol. 33 - pp. 309-313.

172. Encyclopedia of Pharmaceutical Technology Ed. By J. Swarbrick and J.C. Baylan. M. Decker - N.-Y - v. HI - 375 p.

173. European Pharmacopeia. Third edition. Council of Europe.-Stratbourg. Cedex, 1997,- 1700 p.

174. Gruenwald J. The emerging role of herbal medicine in health care in Europe / J. Gruenwald // Drug Information Journal - 1998 - Vol. 32,-pp. 151-153.

175. Kayne S. Aspects of herbal regulation in Europe and the United States / S. Kayne, I. Caldwell // The Pharmaceutical Journal.-2002.- Vol. 269,-P. 403.

176. Muravov I.O. Comparative evaluation of the quality aqueous extractions obtained by the vortical metod and state pharmacopeia X metod / I.O. Muravov, L.O. Bcrzhna, G.G. Lebedeva //Fermatsevtichnii Zhurnal-1986.-41 (5).-P. 787-792

177. The United States Pharmacopeia. Twenty third revision // National Formulary, Rockville. 1995.-2391 p.

178. Wyndiiam M. Herbal products: good nanufactoring practice from raw material to finished product / M. Wyndiiam // The Pharmaceutical Journal.- 2001.- Vol. 261.- pp. 290-291.