Совершенствование эпидемиологического надзора и лабораторной диагностики арбовирусных инфекционных болезней тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.02.02, доктор биологических наук Щербакова, Светлана Анатольевна

• Щербакова, Светлана Анатольевна
• доктор биологических наук
• 2012

Оглавление диссертации доктор биологических наук Щербакова, Светлана Анатольевна

ОБОЗНАЧЕНИЯ И СОКРАЩЕНИЯ.

ВВЕДЕНИЕ.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

ГЛАВА 1 ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКИЕ И ЭКОЛОГИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ РАСПРОСТРАНЕНИЯ АРБОВИРУСОВ

1.1 Общая характеристика и эпидемиологическое значение арбовирусов.

1.2 Климатическое и антропогенное воздействие на паразитарные системы арбовирусов в регионе Нижнего Поволжья.

1.3 Организация эпидемиологического надзора арбовирусных инфекционных болезней.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

2.1 Места сбора и количество исследованных проб.

2.2 Использованные в работе вирусные и бактериальные штаммы.

2.3 Сбор, учет, хранение и доставка полевого материала.

2.4 Сбор, обработка и хранение сывороток крови людей и КРС.

2.5 Подготовка проб для исследований.

2.6 Определение инфекционной активности вируса Западного Нила путем титрации в культуре клеток.

2.7 Подбор праймеров для детекции вирусов ККГЛ и ЗН методом ОТ-ПЦР

2.8 Проведение ГЩР-анализа.

2.9 Создание стандартного образца предприятия и положительного контрольного образца.

2.10 Иммуноферментный анализ.

2.11 Статистическая обработка полученных данных.

2.13 Разработка методических подходов районирования территории.

ГЛАВА 3 РЕЗУЛЬТАТЫ ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКОГО МОНИТОРИНГА АРБОВИРУСНЫХ ИНФЕКЦИОННЫХ БОЛЕЗНЕЙ НА ТЕРРИТОРИИ САРАТОВСКОЙ И АСТРАХАНСКОЙ ОБЛАСТЕЙ.

3.1 Результаты энтомолого-эпизоотологического мониторинга арбовирусных инфекционных болезней на территории Саратовской области

3.2 Результаты энтомолого-эпизоотологического мониторинга арбовирусных инфекционных болезней на территории Астраханской области.

3.3 Результаты серологического мониторинга на территории Саратовской и Астраханской областей.

ГЛАВА 4 ОПТИМИЗАЦИЯ ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКОГО

МОНИТОРИНГА АРБОВИРУСНЫХ ИНФЕКЦИОННЫХ БОЛЕЗНЕЙ.

4.1 Разработка основных направлений оптимизации эпидемиологического мониторинга арбовирусных инфекционных болезней на примере Саратовской и Астраханской областей в современных условиях.

4.2 Разработка методического подхода дифференциации территорий по степени потенциальной эпидемической опасности заражения арбовирусными инфекционными болезнями и районирование территории Саратовской области.

4.2.1 Районирование Саратовской области по степени потенциальной эпидемической опасности заражения лихорадками Тягиня, Инко (СКЭ)

4.3.2 Районирование Саратовской области по степени потенциальной эпидемической опасности заражения лихорадкой Батаи.

4.3.3 Районирование Саратовской области по степени потенциальной эпидемической опасности заражения КГЛ.

4.3.4 Районирование Саратовской области по степени потенциальной эпидемической опасности заражения ЛЗН.

4.3.5 Районирование Саратовской области по степени потенциальной эпидемической опасности заражения лихорадкой Синдбис.

4.2.6 Районирование территорий Саратовской области по степени потенциальной эпидемической опасности заражения арбовирусными инфекционными болезнями.

ГЛАВА 5 СОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКИ

АРБОВИРУСНЫХ ИНФЕКЦИЙ.

5.1 Стандартизация лабораторной диагностики лихорадки Западного Нила и Крымской геморрагической лихорадки.

5.2 Конструирование тест-систем для выявления РНК вирусов Крымской-Конго геморрагической лихорадки и Западного Нила методом ОТ-ПЦР.

5.2.1 Подбор олигонуклеотидных праймеров.

5.2.2 Отработка оптимальных условий ПЦР.

5.2.3 Выбор метода выделения РЖ.

5.2.4 Создание стандартных образцов предприятия и положительных контрольных образцов к разрабатываемым тест-системам.

5.2.5 Характеристика тест-систем для выявления РНК вируса Крымской-Конго геморрагической лихорадки и вируса Западного Нила методом обратной транскрипции и полимеразной цепной реакции.

5.3 Определение диагностической ценности ОТ-ПЦР-тест-систем для выявления РНК вирусов Крымской-Конго геморрагической лихорадки и лихорадки Западного Нила - «ГенКонго» и «ГенНил».

5.4 Апробация разработанных тест-систем «ГенКонго» и «ГенНил».

5.4.1 Применение тест-систем «ГенКонго» и «ГенНил» для выявления циркуляции вирусов Крымской-Конго геморрагической лихорадки и лихорадки Западного Нила.

5.4.2 Апробация тест-систем «ГенКонго» и «ГенНил» при лабораторной диагностике Крымской геморрагической лихорадки и лихорадки Западного Нила.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Совершенствование эпидемиологического надзора и лабораторной диагностики арбовирусных инфекционных болезней»

Актуальность проблемы Актуальность оптимизации эпидемиологического надзора за арбовирусными инфекционными болезнями связана с эпидемиологической ситуацией, сложившейся в конце XX начале XXI веков. Глобальное потепление климата и антропогенная нагрузка на природные биоценозы обусловили расширение ареалов возбудителей целого спектра природно-очаговых инфекционных болезней, [Алексеев В.В. и др., 2004; Бутенко A.M., Ларичев В.Ф., 2004; Львов Д.К. и др., 2004], а недостаточный уровень организации и эффективности эпидемиологического надзора способствовали ухудшению эпидемиологической ситуации в Российской Федерации по инфекционным болезням, в том числе и арбовирусной природы [Онищенко Г.Г., 2000, 2006]. В частности, широкое распространение получила лихорадка Западного Нила (ЛЗН), вспышки которой, в том числе с летальными исходами, имели место в России, США, Канаде, Румынии, Израиле, Чехии, Италии [Львов Д.К. и др., 2004; Crichlow R., Bailey J., 2004; Goody R.J., 2008; Siddharthan V., 2009] и Крымская геморрагическая лихорадка (КГЛ), случаи заболевания которой ежегодно отмечаются на территории Южного федерального округа (ЮФО) Российской Федерации [Малецкая О.В. и др., 2010]. В целом за период 1999-2010 гг. зарегистрировано более 1300 случаев КГЛ и более 1500 случаев ЛЗН. При этом наибольшее количество случаев ЛЗН пришлось на регион Нижнего Поволжья.

Помимо вирусов Западного Нила (ЗН) и Крымской-Конго геморрагической лихорадки (ККГЛ), на территории Российской Федерации происходит активная циркуляция и других арбовирусов, о чем свидетельствуют результаты многолетних исследований [Бутенко А.М и др., 1989; Львов Д.К. и др., 2001], в частности, - это вирусы серогруппы калифорнийского энцефалита (СКЭ) - Тягиня, Инко, а также вирусы Батаи, Синдбис и др. Широкая распространенность, экологическая адаптивность, генетическая изменчивость, пантропность действия этих арбовирусов создают потенциальную опасность возникновения заболеваний среди людей [Львов Д.К. и др., 1989]. Разработка эффективных противоэпидемических и профилактических мероприятий, направленных на снижение заболеваемости, а также риска возникновения арбовирусных инфекционных болезней, возможна лишь на основе осуществления действенного эпидемиологического надзора, включающего все подсистемы информационного обеспечения, эпидемиологической диагностики, разработки и контроля реализации управленческих решений [Беляков В.Д., 1985; Черкасский Б.Л., 1990]. В настоящее время остаются не решенными ряд задач по организации и проведению эпидемиологического надзора по целому спектру арбовирусных инфекционных болезней, возбудители которых широко циркулируют на территории Российской Федерации. Одним из аспектов повышения эффективности эпидемиологического надзора за арбовирусными инфекционными болезнями является оптимизация эпидемиологического мониторинга.

Другой, не менее важной задачей, в рамках оптимизации эпидемиологического надзора является совершенствование лабораторной диагностики арбовирусных инфекционных болезней. Это связано в первую очередь с решением организационно-методических вопросов ее проведения на федеральном, региональном и территориальном уровнях в учреждениях здравоохранения и Роспотребнадзора, а также с разработкой и внедрением в практику современных диагностических препаратов.

Цель работы - оптимизация эпидемиологического мониторинга арбовирусных инфекционных болезней (на примере Саратовской и Астраханской областей) и совершенствование лабораторной диагностики Крымской геморрагической лихорадки и лихорадки Западного Нила.

Задачи исследования:

1. Определить территориальную приуроченность, характер распространённости и структурные особенности природных очагов арбовирусных инфекционных болезней на территории Саратовской и Астраханской областей. Оценить потенциальную эпидемиологическую значимость арбовирусов для данных регионов.

2. Разработать метод дифференциации территории по степени потенциальной эпидемической опасности заражения арбовирусными инфекционными болезнями и провести эколого-эпидемиологическое районирование Саратовской области.

3. Определить направления совершенствования эпидемиологического надзора за арбовирусными инфекционными болезнями на основе оптимизации эпидемиологического мониторинга в соответствии с полученными данными о степени эпидемиологической значимости отдельных арбовирусов (на примере Саратовской и Астраханской областей).

4. Разработать тест-системы для выявления РНК вирусов ККГЛ и ЗН методом обратной транскрипции и полимеразной цепной реакции (ОТ-ПЦР). Определить их диагностическую ценность и провести апробацию при мониторинге природных очагов арбовирусных инфекционных болезней.

5. Разработать подходы к стандартизации лабораторной диагностики ЛЗН и КГЛ на территориальном, региональном и федеральном уровнях в соответствии с трехуровневой организацией лабораторной диагностики в учреждениях, осуществляющих санитарно-эпидемиологической надзор.

Теоретическая значимость и научная новизна Разработаны теоретические основы совершенствования эпидемиологического надзора за арбовирусными инфекционными болезнями на основе комплексного изучения динамики пространственно-временных параметров их проявления, эпизоотологического и лабораторного обеспечения путем расширения арсенала диагностических средств, оптимизации функционирования трехуровневой системы эпидемиологического мониторинга возбудителей инфекционных болезней 1-П групп патогенности вирусной природы, новой методологии эпидемиологического районирования территорий по арбовирусным инфекциям.

Модельные исследования выполнены на примере Саратовской и Астраханской областей, системные разработки относительно функциональности всех трех уровней лабораторной сети - в масштабе Российской Федерации.

В результате мониторинга арбовирусных инфекционных болезней получены новые данные о современных ареалах арбовирусов, условиях их циркуляции и эпидемиологической значимости на территории Саратовской и Астраханской областей.

Анализ результатов эпидемиологического, эпизоотологического и экологического обследования за последние 10 - 12 лет (1999 - 2010 гг.) позволил выявить циркуляцию на территории Саратовской области вирусов СКЭ, Батаи, Синдбис, ЗН, ККГЛ, которая характеризуется меньшей интенсивностью по сравнению с Астраханской областью, где циркулируют вирусы СКЭ, Батаи, Синдбис, ККГЛ, ЗН, Дхори, Бханджа, Укуниеми.

Определена структура природных очагов арбовирусных инфекций и их территориальная приуроченность, уточнен спектр арбовирусов и выявлены основные эколого-эпидемиологические и биоценотические особенности их циркуляции, установлены систематические группы носителей и переносчиков арбовирусов, уровни иммунной прослойки населения и сельскохозяйственных животных к арбовирусам. Показано расширение границ ареалов вирусов ЗН и ККГЛ на юг Саратовской области. Впервые на территории Саратовской области на основании данных лабораторных исследований выявлен случай ЛЗН.

Разработан новый методический подход количественной оценки степени потенциальной эпидемической опасности заражения арбовирусными инфекционными болезнями, который основан на результатах корреляционного анализа, свидетельствующего о наличии статистически достоверной (р<0,05) связи каждого из используемых эпидемиологических параметров с циркуляцией арбовирусов - это природно-климатические условия на территории конкретного района; наличие основных переносчиков и природных резервуаров арбовирусов; выявление «маркеров» (антигены/РНК или антитела) арбовирусов в клещах, комарах, в органах мелких млекопитающих, в сыворотках крови людей и сельскохозяйственных животных. Такой подход позволил осуществить объективное эпидемиологическое районирование Саратовской области и выделить территории с высокой, средней и низкой степенью потенциальной опасности заражения арбовирусами.

Научно обоснованы основные направления оптимизации эпидемиологического мониторинга за арбовирусными инфекционными болезнями в зависимости от различной эпидемиологической значимости отдельных арбовирусов (на примере Саратовской и Астраханской областей).

Впервые обоснованы принципы организации и функционирования единой многоуровневой системы лабораторного обеспечения эпидемиологического надзора за инфекционными болезнями. Предложены подходы по стандартизации лабораторной диагностики инфекционных болезней в соответствии с трехуровневой системой (на территориальном, региональном и федеральном уровнях), разработаны основные требования к лабораториям, персоналу, методам и схемам лабораторной диагностики, осуществлению внутреннего контроля качества в соответствии с международными стандартами, действующими в Российской Федерации в качестве ГОСТ Р ИСО/МЭК 17025 «Общие требования к компетентности испытательных и калибровочных лабораторий», ИСО 9001:2000 «Система управления качеством. Требования», ИСО 5725-(1-6) - 2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений».

Разработаны ПЦР-тест-системы для выявления РНК вирусов ККГЛ и ЗН. Предложена схема комплексной лабораторной диагностики болезней, вызванных этими возбудителями, а также алгоритм исследования полевого материала.

Научная новизна и приоритетность выполненных исследований подтверждена патентом Российской Федерации на изобретение № 2324187

Способ подготовки проб для серологических исследований из сопряженных очагов чумы и арбовирусных инфекций» и свидетельством о государственной регистрации базы данных № 2011620585 «Нуклеотидные последовательности и характеристики геномов, вариабельных тандемных повторов, олигонуклеотидных праймеров и зондов штаммов возбудителей бактериальных и вирусных инфекций 1-П групп патогенности».

Практическая значимость и формы внедрения Результаты, представленные в работе, были использованы в отчетных материалах НИР, в рамках договоров с ФГУ НИИ вирусологии им. Д.И. Ивановского РАМН при выполнении Федеральной целевой научно-технической программы «Исследования и разработки по приоритетным направлениям развития науки и техники» на 2002 -2006 годы, а также совместных НИР: с ФГУЗ «Астраханская ПЧС» Роспотребнадзора и ФГУ НИИ вирусологии им. Д.И. Ивановского РАМН (шифр темы 038-1-00) «Мониторинг очагов арбовирусных инфекций на территории Астраханской области и разработка специфической диагностики и профилактики этих болезней»; с ФГУЗ Ставропольский НИПЧИ, ФГУЗ Астраханская ПЧС, ФГУЗ Элистинская ПЧС, ФГУЗ Причерноморская ПЧС, ФГУЗ ПЧС Приволжской железной дороги (г. Саратов) и ФГУ НИИ вирусологии им. Д.И. Ивановского РАМН (шифр темы 004-1-01) «Мониторинг очагов арбовирусных инфекций на территории юго-востока европейской части России и разработка системы специфической диагностики и профилактики»; НИОКР по Государственному контракту № 67-Д от 25.07.2011 г. «Разработка научно-методического обеспечения мониторинга, эпидемиологического расследования и лабораторной диагностики особо опасных, «новых» и «возвращающихся» инфекционных болезней на базе стационарных и мобильных лабораторий учреждений Роспотребнадзора» в рамках Федеральной целевой программы «Национальная щ ; система химической и биологической безопасности Российской Федерации

2009 - 2013 годы)» в 2011 г.

Материалы научных исследований нашли отражение в приведенных ниже документах:

- Методические указания «Организация и проведение мероприятий против Крымской геморрагической лихорадки» МУ 3.1.12488-09, утверждены Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации 26.02.2009 г.;

- Методические указания «Мероприятия по борьбе с лихорадкой Западного Нила на территории Российской Федерации» МУ 3.1.3.2600-10, утверждены Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации 19.04.2010 г.;

- Практическое руководство «Специфическая индикация патогенных биологических агентов» - М.: ЗАО «МП Гигиена», 2006 - 288 е.;

- Практическое руководство «Лабораторная диагностика опасных инфекционных болезней» - М: «Издательство «Медицина», издательство «Шико», 2009. - 472 е.;

- Санитарно-эпидемиологические правила «Профилактика лихорадки Западного Нила» (Представлены для утверждения в Федеральную службу по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека);

- Методические указания «Организация и проведение лабораторной диагностики лихорадки Западного Нила в лабораториях территориального, регионального и федерального уровней» (представлены для утверждения в Федеральную службу по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека);

- Методические указания «Организация и проведение лабораторной диагностики Крымской геморрагической лихорадки в лабораториях территориального, регионального и федерального уровней» (представлены для утверждения в Федеральную службу по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека);

- Методические рекомендации «Эпидемиологическое районирование Саратовской области по степени потенциальной эпидемической опасности заражения арбовирусными инфекционными болезнями» (утверждены директором ФГУЗ РосНИПЧИ «Микроб», протокол Ученого Совета ФГУЗ РосНИПЧИ «Микроб» № 4 от 28.06.2011).

Депонированы в Государственной коллекции патогенных бактерий «Микроб» (Саратов) генетически модифицированные штаммы Е. coli TGI (pCCHF) и Е. coli TGI (pWN ApR), используемые для разработки положительных контрольных образцов к тест-системам, стандартных образцов предприятия (СОПк+), применяемые для контроля чувствительности и специфичности препаратов на этапе производства.

Материалы научных исследований использованы при составлении Комплексного плана профилактических и противоэпидемических мероприятий по предупреждению заболеваний лихорадки Западного Нила среди населения Саратовской области на 2011 - 2012 гг., утвержденного Заместителем Председателя Правительства Саратовской области, а также информационных писем Министерства здравоохранения Саратовской области для врачей ЛПУ Саратовской области.

Проведены Государственные испытания разработанных тест-систем для выявления РНК вирусов ККГЛ и ЗН. Результаты Государственных испытаний одобрены на Ученом совете ГИСК им. Л.А. Тарасевича (протокол заседания Ученого Совета ГИСК им. Л.А. Тарасевича №14 от 19.1004 и № 1 от 17.01.06, соответственно). Получены рекомендации комитета МИБП о регистрации препаратов «Тест-система для выявления РНК вируса Крымской-Конго геморрагической лихорадки методом ОТ-ПЦР» и «Тест-система для выявления РНК вируса Западного Нила методом ОТ-ПЦР» в Российской Федерации и внедрении их в практику здравоохранения, а нормативной документации к ним - к утверждению в установленном порядке (протокол заседания комитета МИБП №5 от 28.07.05 и № 1 от 09.02.06, соответственно).

Научные и практически значимые результаты работы по эпидемиологии и лабораторной диагностике арбовирусных инфекционных болезней использованы в лекциях на курсах первичной специализации и повышения квалификации, проводимых в ФГУЗ РосНИПЧИ «Микроб» для специалистов учреждений Минздравсоцразвития, Роспотребнадзора и других ведомств, а также областных семинарах для специалистов Роспотребнадзора и ЛПУ Саратовской области.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Результаты мониторинга арбовирусных инфекционных болезней свидетельствуют о том, что на территории Саратовской области циркуляция арбовирусов носит менее интенсивный характер по сравнению с Астраханской областью. В настоящее время происходит расширение ареалов вирусов ЗН и ККГЛ на территории Саратовской области.

2. В циркуляцию арбовирусов на территории Саратовской и Астраханской областей вовлечены различные виды кровососущих членистоногих и мелких млекопитающих, что определяет особенности структуры природных очагов арбовирусных инфекционных болезней в этих регионах.

3. Разработан новый метод количественной оценки степени потенциальной эпидемической опасности заражения арбовирусными инфекционными болезнями, обеспечивающий объективное эпидемиологическое районирование Саратовской области с выделением территорий с различной (высокой, средней и низкой) степенью потенциальной опасности заражения арбовирусными инфекционными болезнями.

4. Использование дифференцированных подходов к организации эпидемиологического мониторинга в зависимости от степени эпидемиологической значимости арбовирусов для конкретных территорий позволяет оптимизировать эпидемиологический надзор за арбовирусными инфекционными болезнями на территории Саратовской и Астраханской областей.

5. В основу совершенствования организации и проведения лабораторной диагностики ЛЗН и КГЛ положены принципы функционирования трехуровневой системы эпидемиологического мониторинга и лабораторной диагностики инфекционных болезней.

6. Разработанные тест-системы для выявления РНК вирусов ЗН и ККГЛ методом ОТ-ПЦР могут быть использованы при мониторинге природных очагов и лабораторной диагностике арбовирусных инфекционных болезней.

Апробация работы

Материалы диссертации были представлены и обсуждены на:

- 1-й Всероссийской научно-практической конференции «Генная диагностика особо опасных инфекций» (Саратов, 2000);

- VIII съезде Всесоюзного общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов (Москва, 2002);

4 Научно-практичической конференции «Генодиагностика инфекционных заболеваний» (Москва, 2002);

- Всероссийской научно-практической конференции «Медицинская микробиология -XXI век» (Саратов, 2004);

- Международном совещании «Млекопитающие как компоненты аридных экосистем (ресурсы, фауна экология, медицинское значение и охрана) (Саратов, 2004);

- VI Межгосударственной научно-практической конференции Государств - участников СНГ «Санитарная охрана территорий государств участников содружества независимых государств: проблемы биологической безопасности и противодействия биотерроризму в современных условиях» (Волгоград, 2005);

VII Межгосударственной научно-практической конференции Государств - участников СНГ «Чрезвычайные ситуации международного значения в общественном здравоохранении в решениях Санкт-Петербургского саммита «Группа восьми» и санитарная охрана территорий государств -участников Содружества Независимых государств» (Оболенск, 2006);

- VII съезде врачей-инфекционистов «Итоги и перспективы диагностики и лечения инфекционных больных» (Н.Новгород, 2006);

- Расширенном пленуме проблемной комиссии «Арбовирусы» РАМН и научно-практической конференции «Арбовирусы и арбовирусные инфекции» (Астрахань, 2006);

IX съезде Всероссийского научно-практического общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов (Москва, 2007);

- Десятой Всероссийской медико-биологической конференции молодых исследователей «Человек и его здоровье»(Санкт-Петербург, 2007);

- Научно-практической конференции «Молекулярная диагностика инфекционных болезней» (Минск, 2007);

VIII Межгосударственной научно-практической конференции Государств - участников СНГ «Международные медико-санитарные правила и реализация глобальной стратегии борьбы с инфекционными болезнями в государствах-участниках СНГ» (Саратов, 2007);

- II Международной научной конференции «Зоологические исследования регионов России и сопредельных территорий» (Н. Новгород, 2007);

- X Межгосударственной научно-практической конференции Государств - участников СНГ «Актуальные проблемы предупреждения и ликвидации последствий чрезвычайных ситуаций в области санитарно-эпидемиологического благополучия населения государств-участников СНГ» (Ставрополь, 2010).

Публикации

По теме диссертационного исследования опубликованы 52 научные работы, в том числе 19 в периодических изданиях из перечня ведущих рецензируемых научных журналов.

Структура диссертации

Заключение диссертации по теме «Эпидемиология», Щербакова, Светлана Анатольевна

выводы

1. Анализ данных эпизоотологического мониторинга в динамике показал, что на территории Саратовской области осуществляется циркуляция вирусов СКЭ, Батаи, Синдбис, ЗН, ККГЛ; процессы циркуляции характеризуются меньшей интенсивностью по сравнению с Астраханской областью, на территории которой циркулируют вирусы СКЭ, Батаи, Синдбис, ККГЛ, ЗН, Дхори, Бханджа, Укуниеми.

2. Расширены представления и выявлены различия в популяционной структуре природных очагов арбовирусных инфекций на территории Саратовской и Астраханской областей и степени вовлеченности отдельных видов кровососущих членистоногих и мелких млекопитающих в циркуляцию арбовирусов. В Саратовской области циркуляция арбовирусов осуществляется с участием комаров родов Aedes (Ае. vexans, Ае. lepidonotus, Ае. cataphylla) и Culex (С. pipiens), клещей родов Dermacentor (D. marginatus, D.reticulatus), Rhipicephalus (R. schulzei, R. rossicus) к Ixodes (I. ricinus). Среди мелких млекопитающих в циркуляцию арбовирусов наиболее часто включаются видовые сообщества домовых, малых лесных мышей и обыкновенных полевок, а в Заволжье - популяции малого суслика и ондатры. На территории Астраханской области основное эпидемиологическое значение в циркуляции арбовирусов принадлежит популяциям комаров родов Aedes (Ае. caspius и Ае. vexans), Anopheles (An.maculipennis и An. hyrcanus) и Culex (С. pipiens), клещей родов Hyalomma (Н. marginatum) и Rhipicephalus (R. schulzei), а также видовым сообществам обыкновенных полевок, домовых мышей и гребенщиковых песчанок.

3. Результаты изучения иммунной прослойки к арбовирусам среди населения Саратовской области свидетельствуют о потенциальном эпидемическом значении вирусов ЗН, ККГЛ, Батаи, СКЭ, Синдбис для данного региона, при этом установлено, что наиболее высокие показатели уровня иммунной прослойки к вирусам Батаи и СКЭ зарегистрированы в

249 районах, приуроченных к степной и лесостепной зонам области, а к вирусам ЗН и ККГЛ - в районах, расположенных в степной и полупустынной зонах. Специфические антитела к вирусу КЭ выявлены только при исследовании сывороток крови людей, проживающих на территории лесостепной зоны области. Среди сельскохозяйственных животных определен популяционный иммунитет к вирусам ЗН, ККГЛ, Батаи, СКЭ и Синдбис. Высокий уровень иммунной прослойки среди населения Астраханской области к вирусам СКЭ, Батаи, ККГЛ, Синдбис, ЗН подтверждает их эпидемическую значимость. У сельскохозяйственных животных выявлена иммунная прослойка к вирусам СКЭ, Батаи, ККГЛ, ЗН, Синдбис, Бханджа, Дхори, Укуниеми, при этом наиболее высокие показатели уровня популяционного иммунитета зарегистрированы к вирусам СКЭ, Батаи, ККГЛ, ЗН, Синдбис и Дхори.

4. Выявлены тенденции к расширению ареалов вирусов ЗН и ККГЛ на территории Саратовской области, о чем свидетельствуют исследования иммунной прослойки населения и данные эпизоотологического мониторинга в динамике. На расширение границ природного очага ЛЗН указывает впервые выявленный в 2010 г на территории Саратовской области случай ЛЗН, диагностированный на основании четырехкратного увеличения титров специфических антител (^в и ^М) к вирусу ЗН при исследовании парных сывороток крови.

5. Впервые с использованием стандартизованных показателей -природно-климатические условия на территории конкретного района, наличие основных переносчиков и природных резервуаров арбовирусов, выявление «маркеров» (антигены/РНК или антитела) арбовирусов, проведено эпидемиологическое районирование Саратовской области и определены территории высокой, средней и низкой степени потенциальной опасности заражения арбовирусами. На основании данных ранжирования территории предложены схемы эпидемиологического мониторинга арбовирусных инфекционных болезней в отдельных административных образованиях области.

6. На основе данных о распространенности арбовирусов на территориях Саратовской и Астраханской областей, эпизоотической активности природных очагов арбовирусных инфекционных болезней и различной эпидемиологической значимости отдельных арбовирусов для этих регионов разработаны дифференцированные подходы и предложены пути оптимизации эпидемиологического мониторинга арбовирусных инфекционных болезней.

7. Разработаны основные принципы организации и проведения лабораторной диагностики инфекционных болезней, в том числе ЛЗН и КГЛ, в соответствии с трехуровневой системой (на территориальном, региональном и федеральном уровнях), что позволяет повысить надежность и качество диагностических исследований за счет дифференциации их объемов в зависимости от базовой оснащенности лабораторий и многоуровневой верификации получаемых результатов.

8. Показано, что разработанная тест-система для выявления РНК вируса ЗН методом ОТ-ПЦР «ГенНил» характеризуется чувствительностью 1-10 ГЭ/мл, специфичностью - 98,3 %, воспроизводимостью результатов -100 %, позволяет выявлять возбудитель ЛЗН в сыворотке (плазме) крови, суспензиях клещей, комаров, органов животных (мозг, селезенка) и может быть использована при проведении лабораторной диагностики ЛЗН, в том числе при мониторинге природных очагов этой арбовирусной инфекционной болезни.

9. Установлено, что разработанная тест-система для выявления РНК вируса ККГЛ методом ОТ-ПЦР «ГенКонго» характеризуется чувствительностью 5-103 ГЭ/мл, 100 % специфичностью и воспроизводимостью результатов, позволяет выявлять возбудитель КГЛ в сыворотке (плазме) крови, суспензиях клещей и органов животных (мозг, селезенка) и можЬт быть использована при проведении лабораторной диагностики КГЛ и мониторинге природных очагов этой арбовирусной инфекционной болезни.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Проблема инфекционных болезней с природной очаговостью, к которым относятся и арбовирусные инфекционные болезни, имеет особую актуальность для национальных и международных систем здравоохранения в связи с регистрацией новых очагов инфекций, риском заноса возбудителей на неэндемичные территории, активными миграционными процессами среди населения [Онищенко Г.Г., 2000, 2004].

Изменение климата и антропогенное вмешательство обусловили трансформации видовых сообществ носителей и переносчиков арбовирусов и послужили предпосылками расширения ареалов возбудителей ряда арбовирусных инфекционных болезней [Алексеев А.Н.; 2004; Бутенко A.M., Ларичев В.Ф., 2004; Львов Д.К. и др., 2004], что, в свою очередь, привело к резкому обострению эпидемической обстановки по ЛЗН и КГЛ на территории юга Российской Федерации в конце 20- начале 21 века. Эта ситуация была расценена как чрезвычайная в области общественного здравоохранения, одной из причин которой явились неудовлетворительное состояние эпидемиологического надзора за арбовирусными инфекционными болезнями [Онищенко Г.Г., 2000].

Повешение эффективности эпидемиологического надзора за арбовирусными инфекционными болезнями предполагает детальное и продолжительное (динамическое) изучение эпизоотологических и эпидемиологических особенностей очагов в различных регионах.

Нами был осуществлен мониторинг арбовирусных инфекционных болезней на территории Саратовской и Астраханской областей.

Для определения спектра арбовирусов, уточнения видового состава их основных переносчиков и носителей, изучения особенностей распространения и территориальной приуроченности природных очагов арбовирусных инфекций, было проведено комплексное исследование основных носителей и переносчиков арбовирусов - кровососущих

231 членистоногих, мелких млекопитающих, птиц, а также сывороток крови населения и сельскохозяйственных животных.

В ходе комплексного обследования Саратовской области были исследованы комары (5705 экземпляров, 12 видов), клещи (12292 экземпляров, 7 видов), мелкие млекопитающие (4055 экземпляров, 17 видов), птицы (204 экземпляров, 43 видов).

Комаров исследовали методом ИФА на наличие антигенов вирусов СКЭ, Батаи, Синдбис, ЗН. Выявлено 28 проб (17,7 %), содержащих антигены арбовирусов. В целом показана не высокая инфицированность комаров различными арбовирусами на территории Саратовской области. Антигены вируса ЗН выявлены в 3-х пробах (1,8 %), Батаи - в 8 (4,8 %), вирусов СКЭ -в 14 (8,5 %), Синдбис в 3-х (1,8 %).

Установлено, что наиболее часто антигены арбовирусов регистрировали в пулах, составленных из комаров рода Aedes, что позволяет предположить доминирующую роль комаров этого рода в распространении арбовирусов на территории Саратовской области.

Показано, что наиболее интенсивно циркуляция вирусов Батаи и СКЭ осуществляется в Правобережных районах области, относящихся к зоне степи, а антигены вирусов ЗН и Синдбис были выявлены в Левобережных районах области, относящихся к степной и полупустынной зонам.

При исследовании клещей (12292 экземпляров, 7 видов, объединенных в 791 пул), собранных на территории Саратовской области, в ИФА и ПЦР выявлены маркеры вирусов ЗН, ККГЛ и КЭ. Антигены вируса ЗН выявляли чаще всего в суспензиях клещей R. rossicus, R. schulzei и D. marginatus. Всего было выявлено 9 (1,1 % положительных проб). Антигены вируса ККГЛ (2,0 % положительных проб) были обнаружены в пробах клещей видов R. schulzei и D. marginatus. Все положительные пробы, содержащие антигены вирусов ЗН и ККГЛ, были сформированы из клещей, собранных на территории левобережных районов области (Ровенском, Александрово Гайском и Новоузенском районах), относящихся к полупустынной и степной зонам.

Антигены вируса КЭ (2,5 % положительных проб) были зарегистрированы при исследовании пулов, составленных из клещей /. ricinus и D.reticulatus, собранных на территории правобережных районов области в лесостепной и степной зонах.

Необходимо отметить, что ранее циркуляция вирусов ККГЛ, ЗН и КЭ в Саратовской области не отмечалась [Львов Д.К., 2001]. Однако, на территориях Волгоградской области и Республики Казахстан, которые граничат с южными районами Саратовской области выявлены природные очаги КГЛ и практически ежегодно отмечаются заболевания КГЛ [Смирнова Е.А. и др., 2009]. Также на территории Волгоградской области широко распространена ЛЗН [Путинцева Е.В. и др., 2010; Краснова Е.М., 2001], и выявление антигенов этих вирусов указывает на расширение ареалов вирусов ЗН и ККГЛ к северу, т.е. на территорию южных районов Саратовской области.

Результаты проведенных исследований указывают на то, что циркуляция вируса ККГЛ в южных районах Саратовской области происходит с участием клещей D. marginatus и R. schulzei. Кроме этого, в настоящее время отмечается расширение ареала клещей рода Hyalomma [Кутырев И.В., 2009], что также свидетельствует в пользу расширения границ вируса ККГЛ.

Полученные положительные результаты при тестировании проб клещей I. ricinus и D.reticulatus на наличие антигена вируса КЭ могут свидетельствовать о циркуляции этого возбудителя на территории Саратовской области, что, несомненно, требует дальнейшего изучения этого вопроса, тем более что клещи I. ricinus довольно широко распространены по территории Саратовской области. Этот вид обычен в пойменных участках рек, лесных опушках широколиственных лесов, лесопосадках в ряде районов области.

Для определения степени вовлеченности в циркуляцию арбовирусов мелких млекопитающих, обитающих в различных ландшафтно-экологических формациях, и изучения возможностей формирования эндемичных очагов арбовирусных инфекций на территории правобережных и левобережных районах Саратовской области, проведено эпизоотологическое обследовании территории, в ходе которого собраны мелкие млекопитающие, при этом пункты отлова находились в тех же зонах, где проводили сборы комаров и клещей. Всего в исследование было включено 4055 экземпляров мелких млекопитающих. Суспензии внутренних органов грызунов (1599 проб) исследовали на наличие антигенов или РНК вирусов Батаи, СКЭ (Тягиня, Инко), Синдбис, ЗН, ККГЛ с помощью ИФА или ПЦР. При исследовании материала от мелких млекопитающих выявлено 190 (11,9 %) положительных образцов, содержащих антигены арбовирусов Батаи, СКЭ, Синдбис, ЗН и ККГЛ, что свидетельствует о циркуляции указанных вирусов на территории области. Установлено, что среди грызунов, вовлекаемых в циркуляцию арбовирусов, наиболее важную роль играют домовые и лесные мыши. Определены основные экологические связи арбовирусов, циркулирующих на территории Саратовской области, с мелкими млекопитающими.

В результате комплексных исследований выявлена зависимость степени активности циркуляции арбовирусов от ландшафтно-экологических особенностей мест обитания основных носителей и переносчиков вируса. Показано, что максимального уровня интенсивность циркуляции арбовирусов на территории Саратовской области достигает в степной и полупустынной зонах, что подтверждается результатами, полученными при исследовании комаров, клещей и мелких млекопитающих.

Выявление большего количества положительных проб, содержащих антигены арбовирусов ЗН и ККГЛ в материале из Александрово Гайского и Новоузенского районов, может быть объяснено территориальной близостью указанных районов к Волгоградской области, где действуют эпидемически активные природные очаги этих инфекционных болезней [Краснова Е.М., 2001; Савченко Т.С. и др., 2007].

С целью определения возможности интродукции с птицами на территорию Саратовской области арбовирусов проведены исследования птиц, добытых в весенний период в Александрово Гайском и Новоузенском районах. Материал исследовали на наличие антигенов или РНК арбовирусов, в циркуляцию которых включаются птицы. Это вирусы СКЭ (Тягиня, Инко), ЗН, Синдбис.

При исследовании материала от птиц были выявлены антигены вирусов ЗН и Синдбис, а также РНК вируса ЗН, что указывает на принципиальную возможность заноса на территорию Саратовской области в период миграций птиц возбудителей арбовирусных инфекционных болезней. Видовой состав птиц, в образцах от которых были зарегистрированы маркеры арбовирусов, представлен как типично водоплавающими, так и птицами, обычными для антропургических биотопов.

Таким образом, проведенное комплексное эпизоотологическое обследование территории Саратовской области выявило циркуляцию арбовирусов СКЭ (Тягиня, Инко), Батаи, Синдбис, ЗН, ККГЛ, КЭ, что подтверждается многолетним обнаружением маркеров (антигенов, РНК) указанных возбудителей в пробах членистоногих, органов мелких млекопитающих и птиц. Установлено, что циркуляция арбовирусов наиболее интенсивно осуществляется в степной и полупустынной зонах области, о чем свидетельствуют показатели инфицированности членистоногих и мелких млекопитающих. Выявлены основные виды комаров и клещей, являющихся основными переносчиками арбовирусов на территории Саратовской области. Установлено, что наиболее часто антигены арбовирусов регистрировали в пулах, составленных из комаров рода Aedes. Показано, что на территории южных районов области возможна циркуляция вируса ККГЛ, которая происходит с участием клещей видов D. marginatus и R. schulzei, а в циркуляцию вируса ЗН включаются клещи R. rossicus, R. schulzei, D. marginatus. Впервые выявлены антигены вируса КЭ в клещах I.ricinus.

Среди мелких млекопитающих, вовлекаемых в циркуляцию арбовирусов, наиболее важную роль играют фоновые виды, и в первую очередь домовые и лесные мыши, в пробах от которых зарегистрированы антигены вирусов СКЭ, Батаи, Синдбис, КККГЛ, ЗН. Показана принципиальная возможность заноса на территорию Саратовской области в период миграций птиц возбудителей арбовирусных инфекционных болезней, в частности вирусов ЗН и Синдбис, маркеры которых были обнаружены при исследовании перелетных птиц, добытых на территории Саратовского Заволжья.

С целью изучения распространения арбовирусов на территории Астраханской области было проведено комплексное исследование комаров (76981 экз,7 видов), клещей (17020, 4 вида), мелких млекопитающих (969 экз, 10 видов).

При исследовании комаров, собранных на территории Астраханской области, выявлены антигены вирусов СКЭ, Батаи, ЗН, Синдбис, Укуниеми. Показано, что основное значение в качестве переносчиков арбовирусов имеют комары рода Аес1ез:Ае. саяртя, Ае. уехат, а также рода Сикх: С.р1ргет. Кроме этого, для вируса Батаи основными переносчиками являются комары Ап. кугсапт и Ап.тасиИрептз. Особого внимания заслуживает факт высокой инфицированности арбовирусами комаров С. р{р\ет (8,7 % положительных проб), синантропного вида, массово выпловаживающегося в подвалах жилых зданий. Именно это обстоятельство было одной из основных причин, приведших к вспышке ЛЗН в Астраханской области в 1999 г [Краснова Е.М., 2001]. Помимо этого выявлены высокие показатели инфицированности комаров Ае. сазршБ (11,9 % положительных проб) и Ае. \exans (24,5 % положительных проб) - доминирующих видов на территории Астраханской области.

Для изучения роли клещей в циркуляции арбовирусов на территории Астраханской области их исследовали методом ИФА на наличие антигенов вирусов ККГЛ, ЗН, Бханджа и Дхори. Анализ полученных результатов показывает, что наиболее вероятными переносчиками вирусов ККГЛ, ЗН, Бханджа и Дхори являются клещи вида H.marginatum. Кроме того, в циркуляцию вирусов Бханджа, Дхори, ККГЛ могут включаться видовые сообщества клещей Rh.schulze, о чем свидетельствуют единичные положительные находки антигенов указанных вирусов в клещах этого вида.

Высокие показатели инфицированности клещей вирусом ККГЛ, особенно H.marginatum - основного носителя и переносчика вируса, привели к осложнению эпидемической обстановки по КГЛ на территории южных районов области.

С целью выявления природных резервуаров арбовирусов на территории Астраханской области был исследован, с использованием ИФА, материал от мелких млекопитающих. Показано, что мелкие млекопитающие вовлечены в процесс циркуляции арбовирусов: Батаи, СКЭ, ККГЛ, Синдбис, ЗН, Укуниеми, Бханджа, Дхори.

Установлено, что вирус Батаи на территории области экологически связан с популяциями гребенщиковых песчанок, домовых мышей, полевых мышей и обыкновенных полевок. В круг циркуляции вирусов СКЭ вовлечены популяции обыкновенной полевки. В поддержании природных очагов ККГЛ участвуют видовые сообщества малого суслика и гребенщиковых песчанок, вирус ЗН связан с популяциями домовых мышей, что согласуется с предположением об антропургических очагах лихорадки ЗН на территории Астраханской области. Циркуляция вируса Синдбис поддерживается видовыми сообществами гребенщиковых песчанок. В циркуляцию вируса Дхори включаются видовые сообщества малого суслика, а вируса Бханджа - полевых мышей. Вирус Укуниеми экологически связан с популяциями гребенщиковых песчанок.

Комплексное исследование фоновых видов членистоногих и мелких млекопитающих показало, что на территории Астраханской области происходит весьма активная циркуляция арбовирусов, о чем свидетельствуют высокие показатели инфицированности всех сочленов паразитарной системы: вирус-членистоногое-млекопитающие. При этом в круг циркуляции арбовирусов происходит вовлечение синантропных видов, в частности комаров С. pipiens и домовых мышей, что является условием формирования антропургических очагов ряда инфекций и неизбежно приводит к осложнению эпидемической обстановки.

С целью определения эпидемического значения арбовирусов, степени контакта с возбудителями людей и сельскохозяйственных животных, территориальной распространенности арбовирусов проведено изучение уровня иммунной прослойки КРС и населения, проживающего на территориях Саратовской и Астраханской областей.

При исследовании 1473 образцов сывороток крови здоровых жителей г. Саратова и Саратовской области была выявлена иммунная прослойка среди населения области к арбовирусам: СКЭ, Батаи, Синдбис, ЗН, ККГЛ, КЭ. При этом выявлено 158 образцов (10,7 %) положительно реагирующих проб.

В целом, выявленный не высокий уровень иммунной прослойки к арбовирусам среди населения Саратовской области объясняется не значительным уровнем инфицированности комаров и клещей арбовирусами и еще раз подтверждает наше предположение о невысокой интенсивности циркуляции арбовирусов в этом регионе.

Анализ результатов проведенных серологических исследований позволил определить территориальную приуроченность арбовирусов. Так, наиболее высокий уровень иммунной прослойки ко всем арбовирусам зафиксирован в полупустынной зоне (13,4 %), что указывает на возможность эпидемических осложнений именно в районах этой зоны. Полученные данные свидетельствуют о циркуляции вирусов ККГЛ и ЗН преимущественно в полупустынной и степной зонах Саратовской области, а вируса КЭ - на территории лесостепной зоны.

В результате изучения сывороток крови КРС (223 образца), собранных на территории Саратовской области, установлено, что сельскохозяйственные животные имеют иммунную прослойку к вирусам СКЭ, Батаи, Синдбис, ЗН,

ККГЛ. При этом КРС наиболее часто инфицируются вирусами Батаи и СКЭ (8,9 и 7,6 % положительных проб, соответственно), а риск заражения наиболее высок в районах, относящихся к лесостепной и степной зонам. Заражение КРС вирусами ЗН и КЕТ Л наиболее вероятно в степной (4,0 и 2,0 %, соответственно) и полупустынной (2,9 и 2,8 %, соответственно) зонах области.

Сыворотки крови людей (470 проб), проживающих в Астраханской области, исследовали в ИФА для выявления специфических иммуноглобулинов к наиболее эпидемически значимым вирусам для этого региона - вирусам СКЭ, Батаи, ККГЛ, Синдбис, ЗН. В результате проведенных исследований выявлен значительно более высокий уровень иммунной прослойки среди населения (по сравнению с результатами серологического мониторинга в Саратовской области), преимущественно по отношению к вирусам СКЭ, Батаи и ЗН.

При тестировании сывороток крови людей, собранных в 1998 и 1999 гг. (до и после вспышки ЛЗН), было выявлено двукратное увеличение числа проб, содержащих нейтрализующие антитела к вирусу, что указывает на массовый характер вспышки ЛЗН и большое количество инаппарантных форм, т.к. среди обследованных не было лиц с диагнозом «ЛЗН» или перенесших в прошлом это заболевание.

В результате исследования сывороток крови КРС (279 образцов), собранных на территории Астраханской области, также был зарегистрирован высокий уровень иммунной прослойки среди сельскохозяйственных животных к арбовирусам (73,1 %), что свидетельствует о весьма интенсивной циркуляции на территории Астраханской области вирусов СКЭ, Батаи, ККГЛ, ЗН, Синдбис, Дхори.

Таким образом, по результатам комплексного исследования полевого материала, собранного на территориях Саратовской и Астраханской областей (суспензии комаров, клещей, органов мелких млекопитающих), а также сывороток крови людей и сельскохозяйственных животных, анализа данных, полученных другими исследователями в результате аналогичных работ [Журавлев В.И., 2002; Львов Д.К. и др., 2001], можно сделать заключение о том, что в Саратовской области осуществляется циркуляция вирусов СКЭ (Тягиня, Инко), Батаи, Синдбис, ЗН, ККГЛ, КЭ, а на территории Астраханской области - арбовирусов СКЭ (Тягиня, Инко), Батаи, ККГЛ, ЗН, Синдбис, Дхори, Бханджа, Укуниеми. Основными переносчиками этих вирусов являются фоновые виды комаров родов Aedes, Anopheles и Culex, клещи родов Hyalomma и Rhipicephalus, а в процесс циркуляции вовлекаются фоновые виды мелких млекопитающих из семейств Мышей {Muridae) и Хомякообразных (Cr/cei/tfoe).Эпизоотическая активность циркуляции арбовирусов значительно выше в Астраханской области, о чем свидетельствуют более высокие показатели инфицированности комаров, клещей и мелких млекопитающих, а также уровни иммунной прослойки среди населения и сельскохозяйственных животных. Показано расширение ареалов вирусов ЗН и ККГЛ на территорию юга Саратовской области.

Активизация природных очагов арбовирусных инфекционных болезней диктует необходимость организации и проведения эпидемиологического надзора. Одним из аспектов повышения эффективности эпидемиологического надзора за арбовирусными инфекционными болезнями является оптимизация эпидемиологического мониторинга. Получаемая в ходе эпидемиологического мониторинга за арбовирусными инфекционными болезнями информация должна обеспечить возможность определения состояния и тенденции развития эпидемического и эпизоотологического процессов, а также ретроспективного эпидемиологического анализа. В соответствии с этими задачами эпидемиологический мониторинг за арбовирусными инфекционными болезнями должен включать несколько уровней сбора информации: о состоянии заболеваемости, о циркуляции возбудителей среди основных носителей и переносчиков, о состоянии уровня коллективного иммунитета среди людей и животных к арбовирусам [Беляков В.Д., 1985].

Оптимизация информационного обеспечения в рамках эпидемиологического мониторинга должна идти по нескольким направлениям. Во-первых, необходимо оценить результативность диагностических методов, используемых на различных этапах эпидемиологического мониторинга за арбовирусными инфекционными болезнями (при проведении лабораторной диагностики арбовирусных инфекций, в ходе энтомолого-эпизоотологического обследования территорий и серологического мониторинга) и определить место этих методов в схемах диагностических исследований в рамках проведения эпидемиологического мониторинга. Во-вторых, требуют дифференциации объемы диагностических исследований, проводимых в рамках эпидемиологического мониторинга за различными арбовирусными инфекционными болезнями.

Нами проведен анализ информативности ряда методических подходов, используемых в ходе эпидемиологического мониторинга за арбовирусными инфекционными болезнями. Показано, что наибольшей результативностью при энтомолого-эпизоотологическом обследовании территории обладает ИФА (для выявления антигенов); при лабораторной диагностике арбовирусных инфекций - ИФА (для выявления 1§М и ^в) и ПЦР; при серологическом мониторинге - ИФА (для выявления ^й).

С целью реализации второго направления оптимизации эпидемиологического мониторинга - дифференциации объемов диагностических исследований, проводимых в рамках эпидемиологического мониторинга за различными арбовирусными инфекционными болезнями, нами проведена оценка эпидемической значимости различных арбовирусов, циркулирующих на территориях Саратовской и Астраханской областей и с учетом этого проведено их распределение на группы. За основу такого распределения взят методический прием, предложенный Е.И. Андаевым (2009). В первую группу отнесены те арбовирусные инфекционные болезни, заболеваемость которыми официально регистрируется на территории области и в отношении которых проводится эпидемиологический надзор. Ко второй группе инфекционных болезней мы отнесли арбовирусные инфекции, возбудители которых широко распространены на территории области, но их значение в инфекционной патологии требует дополнительного изучения. К третьей группе отнесены не представляющие серьезного эпидемиологического значения для этого региона арбовирусные инфекционные болезни. На основании различной эпидемической значимости отдельных арбовирусов предложены основные направления оптимизации эпидемиологического мониторинга за арбовирусными инфекционными болезнями с определением объемов и методических подходов, проводимых диагностических исследований.

Для оптимизации и повышения эффективности эпидемиологического мониторинга за арбовирусными инфекционными болезнями нами предложен методический подход дифференциации территорий по степени потенциальной эпидемической опасности заражения арбовирусными инфекционными болезнями и проведено районирование территории Саратовской области. Установлено, что территориями высокого потенциального риска заражения арбовирусными инфекционными болезнями являются Александрово-Гайский, Красноармейский, Ровенский, Краснокутский, Питерский и Новоузенский районы области. К группе районов со средней степенью потенциальной эпидемической опасностью заражения относятся Дергачевский, Воскресенский, Лысогорский, Озинский, Самойловский, Энгельсский и Саратовский районы области. Аткарский, Духовницкий, Федоровский, Базарно-Карабулакский, Хвалынский и Марксовский районы входят в группу территорий с низкой степенью потенциальной эпидемической опасности заражения арбовирусными инфекционными болезнями. Одним из основных приемов оптимизации стратегии и тактики эпидемиологического мониторинга должно стать периодически повторяемое районирования территории по степени потенциальной эпидемической опасности заражения арбовирусными инфекционными болезнями, так как ареалы арбовирусов в течение времени претерпевают изменения и активность природных очагов арбовирусных инфекций может существенно меняться.

С учетом данных районирования территории и результатов мониторинга за лихорадкой ЗН на территории Саратовской области разработан трехсторонний (Министерство Здравоохранения Саратовской области, Управление Роспотребнадзора по Саратовской области и ФГУЗ РосНИПЧИ «Микроб») «Комплексный план профилактических и противоэпидемических мероприятий по предупреждению заболеваний лихорадкой Западного Нила среди населения Саратовской области на 2011-2015».

Важной составляющей эпидемиологического надзора является лабораторная диагностика опасных инфекционных болезней. Нами предложены и обоснованы принципы организации и функционирования единой многоуровневой системы лабораторного обеспечения эпидемиологического надзора за инфекционными болезнями.

Лабораторную диагностику опасных инфекционных болезней, к которым относятся и арбовирусные инфекции, в Российской Федерации осуществляют учреждения Роспотребнадзора: центры гигиены и эпидемиологии и противочумные учреждения. В соответствии с приказом Роспотребнадзора от 17.03.2008 «О мерах по совершенствованию мониторинга за возбудителями инфекционных и паразитарных болезней» лабораторная диагностика инфекционных болезней осуществляется по трехуровневой схеме: в лабораториях учреждений территориального, регионального и федерального уровней. Организация лабораторной диагностики опасных инфекционных болезней по трехуровневой схеме требует разработки основных принципов проведения исследований, что позволит определить объемы проводимых исследований, схемы анализов и используемые методы в лабораториях на каждом из уровней. Такой подход дифференциации диагностических исследований в лабораториях территориального, регионального и федерального уровней позволит проводить верификацию получаемых результатов и повысить надежность и качество проводимых диагностических исследований. В целях совершенствования организации лабораторного обеспечения эпидемиологического надзора за инфекционными болезнями, предложены основные подходы, направленные на стандартизацию лабораторной диагностики возбудителей опасных инфекционных болезней, в том числе и таких арбовирусных инфекционных болезней как ЛЗН и КГЛ.

При выполнении работы в рамках Федеральной целевой программы «Химическая и биологическая безопасность Российской Федерации» (20092013 гг.) разработаны два проекта МУ: «Порядок организации и проведения лабораторной диагностики Лихорадки Западного Нила в лабораториях территориального, регионального и федерального уровней» и «Порядок организации и проведения лабораторной диагностики Крымской геморрагической лихорадки в лабораториях территориального, регионального и федерального уровней». Эти документы определяют основные требования к организации и проведению лабораторной диагностики ЛЗН и КГЛ в соответствии с трехуровневой структурой, формы взаимодействия различных учреждений, номенклатуру и объем лабораторных исследований.

При организации и проведении лабораторной диагностики в соответствии с трехуровневой системой должна осуществлятся дифференциация объемов и сложность используемых методических подходов для лабораторий каждого уровня. С повышением уровня организации лабораторной базы также должен повышатся и уровень ее оснащенности оборудованием, в том числе обеспечивающим более высокий уровень биологической безопасности при выполнении работ. Соответственно этому должны возрастать объемы и методический уровень исследований, в том числе и при работе с материалом, содержащим вирус в высоких концентрациях. Такой подход позволит обеспечить требуемый уровень биологической безопасности проводимых работ и рационального оснащения диагностических лабораторий. Реализация основных принципов организации и проведения исследований в соответствии с трехуровневой системой обеспечит функционирование многоступенчатой системы верификации получаемых результатов в ходе подтверждающего тестирования проб, что позволяет повысить надежность и качество лабораторной диагностики ЛЗН и КГЛ.

Одним из условий повышения надежности и качества диагностических исследований является использование зарегистрированных, в установленном порядке, препаратов. В настоящее время отсутствуют зарегистрированные ИФА- и ПЦР-тест-системы Российского производства для диагностики арбовирусных инфекций, в том числе и для проведения диагностики ЛЗН и КГЛ - наиболее актуальных арбовирусных инфекционных болезней для Российской Федерации. Для решения этой проблемы необходима разработка и внедрение в практику диагностических препаратов, в частности ПЦР-тест-систем для выявления РНК вируса ЗН и ККГЛ.

В результате проделанной работы нами был разработан метод детекции вирусов ККГЛ и ЗН с помощью ПЦР и предложены два диагностических препарата: «Тест-система для выявления РНК вируса Крымской-Конго геморрагической лихорадки методом обратной транскрипции и полимеразной цепной реакции «ГенКонго», «Тест-система для выявления РНК вируса Западного Нила методом обратной транскрипции и полимеразной цепной реакции «ГенНил», определены сроки и условия их хранения, разработана нормативная документация.

Для решения вопроса о целесообразности внедрения разработанных тест-систем «ГенКонго» и «ГенНил» в практику проведены Государственные комиссионные испытания, в ходе которых определена диагностическая ценность препаратов. Чувствительность тест-системы «ГенКонго» составила 5-10 ГЭ/мл, специфичность - 100 %, воспроизводимость результатов -100 %. Чувствительность ПЦР с тест-системой «ГенНил» составила

1-10Л ГЭ/мл, специфичность - 98,3%, воспроизводимость результатов - 100%. Продолжительность ПЦР-анализа составила 6-8 часов, что значительно меньше времени, требующегося для выделения вирусов на культуре клеток или при заражении биопробных животных.

В результате сравнительного анализа данных, полученных культуральным методом, ИФА и ПЦР, установлено, что ПЦР-анализ с использованием предложенных нами тест-систем превышает по чувствительности ИФА и не уступает по чувствительности методу выделения вирусов в организме биопробных животных или в культуре клеток. Таким образом, показано, что одним из преимуществ ПЦР-анализа с разработанными нами тест-системами, по сравнению с вирусологическими методами, является скорость получения результатов при исследовании штаммов вирусов и проб полевого и клинического материала.

Отчет о проведенных Государственных приемочных испытаниях тест-системы «ГенКонго» рассмотрен на Ученом Совете ГИСК им. Л.А. Тарасевича (протокол № 14 от 19.10.04) и утвержден Комитетом МИБП (протокол №5 от 28.07.05). Тест-система «ГенНил» также рекомендована Ученым советом ГИСК им. Л.А. Тарасевича (протокол № 1 от 17.01.06) и Комитетом МИБП (протокол № 1 от 09.02.06) к регистрации в Российской Федерации.

Для того, чтобы оценить разработанные нами препараты с точки зрения их эффективности, удобства применения в ходе эпизоотологического мониторинга природных очагов арбовирусных инфекционных болезней и лабораторной диагностики ЛЗН и КГЛ, провели их апробацию при исследовании полевого и клинического материала.

Диагностическую ценность тест-системы «ГенКонго» определяли при исследовании полевого материала, собранного на территориях, эндемичных по КГЛ - в Волгоградской и Астраханской областях, а также в южных районах Саратовской области. Материал тестировали в ПЦР и в ИФА. Совпадение результатов ПЦР-анализа с использованием тест-системы «ГенКонго» и ИФА при тестировании полевого материала составило 97,8 %.

Тест-система «ГенНил» была апробирована при исследовании полевого материала, собранного в 2006 г. (апрель и сентябрь-октябрь) при проведении эпизоотологического обследования эндемичной по ЛЗН территории Астраханской области и прилегающей к ней части территории Республики Калмыкия. Материал тестировали двумя методами: ОТ-ПЦР и ИФА. Совпадение результатов ИФА и ПЦР-анализа составило 98,5 %. При исследовании полевого материала, собранного на неэндемичной по ЛЗН территории Ставропольского края в 2005 - 2006 гг., совпадение результатов ИФА и ПЦР-анализа составило 96,0 %.

В 2006 г. тест-система «ГенНил» была апробирована при исследовании полевого материала, собранного при эпизоотологическом обследовании территории Саратовской области, неэндемичной по ЛЗН, но граничащей с Волгоградской областью, где сформирован стойкий природный очаг инфекции, а также с территорией Казахстана, которую охватывает ареал вируса ЗН. Совпадение результатов ИФА и ПЦР-анализа составило 99,6 %.

Таким образом, в ходе апробации разработанных нами тест-систем «ГенКонго» и «ГенНил» показано, что эти препараты обеспечивают достаточно высокую точность анализа и могут быть использованы при проведении эпизоотологического мониторинга природных очагов арбовирусных инфекций - КГЛ и ЛЗН, а также для выявления циркуляции возбудителей этих инфекций на неэндемичных территориях. Наибольшая эффективность отмечена при комплексном использовании двух подходов: ПЦР-анализа с разработанными диагностическими препаратами и ИФА, направленного на выявление антигенов вирусов ККГЛ и ЗН.

С целью изучения возможности использования тест-системы «ГенКонго» для диагностики КГЛ были исследованы в ПЦР 28 сывороток крови больных людей - жителей Ростовской, Астраханской областей и Ставропольского края - с диагнозом КГЛ, поставленным на основании клинико-эпидемиологических данных и подтвержденным, в ряде случаев, ИФА. Совпадение результатов ПЦР-анализа и «антигенного» варианта ИФА зарегистрировано в 63,0 % случаев, а ПНР и ИФА, направленного на выявление антител класса 1%М - в 30,4 % случаев. Показано, что для надежной и достоверной диагностики КГЛ целесообразно использовать несколько лабораторных методов.

С целью выяснения возможности применения сконструированной тест-системы «ГенНил» при диагностике ЛЗН исследовали 90 образцов крови больных, проживающих на эндемичной по этой инфекции территории - в Астраханской области. Апробация тест-системы «ГенНил» при исследовании клинического материала показала целесообразность ее применения в ранний период заболевания (первые 6 дней болезни) и наибольшую эффективность комплексного использования ПЦР-анализа и ИФА, направленного на выявление специфических антител класса /^М к возбудителю ЛЗН.

Таким образом, результаты проведенных исследований свидетельствуют о возможности использования ПЦР-анализа с разработанными диагностическими препаратами «ГенКонго» и «ГенНил» в комплексе методов лабораторной диагностики КГЛ и ЛЗН.

Список литературы диссертационного исследования доктор биологических наук Щербакова, Светлана Анатольевна, 2012 год

1. Нормативно-методические документы

2. Приказ Минздрава РФ от 22.11.2001 № 414 «Об утверждении годовых форм отраслевого статистического наблюдения»

3. Приказ Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека от 8.12. 2010 г. № 441 «Об утверждении формы отраслевого статистического наблюдения № 2-10 и инструкции по заполнению указанной формы»

4. Приказ Федеральной службы в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека № 88 от 17.03.08 г. «О мерах по совершенствованию мониторинга за возбудителями инфекционных и паразитарных болезней».

5. Постановление Главного государственного санитарного врача РФ № 27 от 11.05.2007 г. «О введении в действие Международных медико-санитарных правил (2005 г.)», зарегистрировано Министерством Юстиции РФ №9575 31мая 2007 г.

6. Протокол заседания коллегии Роспотребнадзора от 02.06.2010 г «О совершенствовании эпидемиологического надзора и профилактике клещевого вирусного энцефалита в Российской Федерации»

7. ГОСТ Р ИСО/МЭК 17025 «Общие требования к компетентности испытательных и калибровочных лабораторий».

8. ИСО 9001:2000 «Система управления качеством. Требования».

9. ИСО 5725-(1-6) 2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений».

10. СП 1.3.1285-03 «Безопасность работы с микроорганизмами 1-П групп патогенности (опасности)». М., 2003. - 144 с.

11. СП 3.1.3.2352-08 «Профилактика клещевого вирусного энцефалита». М., 2008. - 21 с.

12. МУ 3.1.3.2600-10 «Мероприятия по борьбе с лихорадкой Западного Нила на территории Российской Федерации». М., 2010. - 20 с.

13. МУ 3.1.3.2488-09 «Организация и проведение профилактических и противоэпидемических мероприятий против Крымской геморрагической лихорадки». М., 2009. - 22 с.

14. МУ 1.3.1794-03 «Организация работы при исследовании методом ПЦР материала, инфицированного микроорганизмами 1-П групп патогенности». М., 2003. - 18 с.1. Научные публикации

15. Азарян А.Р., Гришанова А.П., Бутенко А.М. и др., Серологическая диагностика арбовирусных инфекций в Астраханской области // Матер, науч.- практ. конф. «Арбовирусы и арбовирусные инфекции». Астрахань, 2007. - С. 115-120.

16. АтэИсЬепсо М.В., Щелканов М.Ю., Алексеев В.В. и др. Молекулярные маркеры патогенности вируса Западного Нила // Вопр. вирусол. 2010. - № 1. - С. 4-10.

17. Альховский С.В., Дерябин П.Г., Гафарова И.Э. и др. молекулярно-генетические методы детекции вирусов серокомплекса калифорнийского энцефалита // Молек. медицина. — 2010. № 5. - С. 21-26.

18. Андаев Е.И. Научно-организационные основы эпидемиологического надзора за природно-очаговыми и особо опасными вирусными инфекциями В Восточной Сибири: Автореф. дис. . докт. мед. наук. Иркутск, 2009. - 46 с.

19. Аристова В.А., Громашевский В.Д., Скворцова Т.М. и др. Изоляция вируса Батаи в центре Европейской части России // Итоги науки и техн. ВИНИТИ, Сер. вирусол. 1991. - Т.24. - С.47-48.

20. Аристова В.А., Колобухина JI.B., Щелканов М.Ю., Львов Д.К. Экология вируса Крымской-Конго геморрагической лихорадки и особенности ее клиники на территории России и сопредельных стран // Вопр. вирусол. 2001. - № 4. - С. 7-19.

21. Ашмарин И.П., Воробьев А. А. Статистические методы в микробиологических исследованиях. М.: Медгиз, 1962. 180 с.

22. Беляков В.Д. Эпидемиологический надзор основа современной организации противоэпидемической работы // ЖМЭИ, 1985. - № 5. - С. 5358.

23. Березин В.В., Чумаков М.П., Башкирцев В.Н. и др. Арбовирусные инфекции в дельте реки Волги // Вопр. мед. вирусол.: Тез. докл. М., 1971. -С. 137-138.

24. Березин В.В., Чумаков М.П., Столбов Д.Н. и др. К вопросу о естественных хозяевах вируса Крымской геморрагической лихорадки в Астраханской области //Труды ИПВЭ АМН СССР. М, 1975. T.XIX. - С.210 -217.

25. Бойко А.В., Ивлиев В.Г., Аюпов А.С. Иксодовые клещи в лесах Среднего Поволжья (лесостепная зона). Казань, 1982. -148 с.

26. Боярский А. Я., Шушерин П. П. Демографическая статистика. -М., 1955.

27. Бруммер-Корвенконтио М., Куусисто П. Болезь Погоста // Этиология, эпидемиология и профилактика. Карельская лихорадка Болезнь Погоста: Тез. междунар. симпозиума. - Петрозаводск, 1984. - 20 с.

28. Булычев В.П., Костюков М.А., Данияров О.А. и др. Выделение вируса Тягиня из комаров Anopheles hyrcanus и иммунологическая структура населения к вирусу Тягиня в Таджикистане // Экология вирусов: Сб. науч. тр. -М.Д975.-С. 113-117.

29. Булычев В.П., Костюков М.А., Данияров O.A. Кровососущие комары (Díptera, Culicidae) Таджикистана и их связь с арбовирусами // Экология вирусов: Сб. науч. тр. М., 1982. - С. 130-131.

30. Бутенко A.M. Материалы по изучению этиологии, лабораторной диагностики и иммунологии КГЛ: вопросы экологии вируса-возбудителя: Автореф. дис. . докт. биол. наук. М., 1970. - 24 с.

31. Бутенко A.M., Галкина И.В., Кузнецов A.A. и др. Изучение вирусов комплекса Калифорнийского энцефалита в РСФСР (серологические исследования) // Арбовирусы и арбовирусные исследования. Тез. докл. Междунар. симпоз. - М., 1989. - С. 10-11.

32. Бутенко A.M., Дерябин П.Г. Вирусы и вирусные инфекции группы Калифорнийского энцефалита // Вопр. вирусол. 1991. - № 4. - С. 349-350.

33. Бутенко A.M., Ковтунов А.И., Джаркенов А.Ф. и др. Эпидемиологическая характеристика лихорадки Западного Нила в Астраханской области // Вопр. вирусол. 2001. - № 4. - С. 34-35.

34. Бутенко A.M., Лещинская Е.В., Семашко И.В. и др. Вирус Дхори возбудитель заболевания человека. Пять случаев лабораторной инфекции // Воп. вирусол. 1987. - № 6. - С. 724-729.

35. Бутенко A.M., Столбов Д.Н. История изучения арбовирусных инфекций на территории Астраханской области // Вопр. риккетсиол. и вирусол. Астрахань. - М., 1996. - С.53-54

36. Бутенко A.M., Чумаков М.П., Башкирцев В.Н. и др. Выделение и изучение астраханского штамма «Дроздов» вируса крымской геморрагической лихорадки и материалы по серодиагностике этой инфекции

37. Матер. 15 науч. сесс. нн-та полиомиелита и вирусных энцефалитов АМН СССР. М., 1968. - В. 3. - С. 88-90.

38. Василенко В.А. Антитела к вирусу Инко у населения Эстонии //Итоги науки и техники: ВИНИТИ, Сер. вирусол. М., 1991. - Т. 24. - С.35-36.

39. Василенко Н.Ф. Опыт применения ИФА и ОТ-ПЦР в диагностике Крымской геморрагической лихорадки в Ставропольском крае в 2002 г. // ЖМЭИ. 2005. - № 4 (приложение). - С.90-93.

40. Василенко Н.Ф. Изучение распространения возбудителя крымской геморрагической лихорадки в отдельных регионах юга России // ЖМЭИ. 2005. - № 4. - С. 23-27.

41. Василенко Н.Ф., Афанасьев E.H., Тюменцева И.С., Ефременко В.И., Вышемирский О.И., Марков В.И., Евченко Ю.М., Бейер А.П. Лабораторная диагностика вспышки Крымской геморрагической лихорадки на юге России // ЖМЭИ. 2001. - №6 (приложение). - С.95-97.

42. Василенко Н.Ф., Бейер А.П., Чумакова И.В. и др. Циркуляция некоторых арбовирусов на территории Ставропольского края // РЭТ-инфо. -2007. -№1(61).-С. 15-17.

43. Василенко Н.Ф., Малецкая О.В., Бейер А.П. и др. Эпидемиологическая обстановка по лихорадке Западного Нила в Южном

44. Федеральном Округе в 2006 г. // Современные аспекты эпидемиологического надзора за особо опасными инфекционными заболеваниями на юге России: матер, науч.- практ. конф. (21-22 марта 2007, Ставрополь). Ставрополь, 2007.-Ч. I.-С. 64-67.

45. Васильев A.B., Щелканов М.Ю., Джаркенов А.Ф. и др. Заражаемость сельскохозяйственных животных вирусом Западного Нила в Астраханской области по данным серологического обследования (2001-2004 гг.) // Вопр. вирусол. 2005. - №6. - С. 36-41.

46. Венгеров Ю.Я., Фролочкина Т.Н. Жуков А.Н. и др. Инфекция, вызываемая вирусом лихорадки Западного Нила, как клиническая и эпидемиологическая проблема // Эпидемиол. и инф. болезни. 2000. - № 4. -С.-27-31.

47. Виноград И.А. Экология арбовирусов на территории Украины //Арбовирусы и арбовирусные инфекции Тез. докл. Международн. симпозиума. - М., 1989. - С.17-19.

48. Виноград И.А., Белецкая Г.В., Чумаченко С.С. и др. Экологические аспекты изучения арбовирусов в Украинской ССР // Экология арбовирусов и диагностика арбовирусных инфекций Сб. научн.тр. - М., 1989. - С.21-27.

49. Виноград И.А., Виговский А.И., Чумаченко С.С. и др. Новые изоляты арбовирусов на Украине и их биологические особенности //Арбовирусы: Сб. науч. тр. М., 1981. - С. 45^18.

50. Вышемирский О.И., Жуков А.Н., Прилипов А.Г. и др. Выделение вируса лихорадки Западного Нила от больного менингоэнцефалитом в Волгоградской области в 2000 г. // Вопр. вирусол. 2001. - №4. - С. 33-34.

51. Галкина И.В. Распространение арбовирусов в Поволжье: Автореф. дис. . канд. мед. наук. М., 1991. - 24 с.

52. Галкина И.В., Бутенко A.M., Кузнецов A.A. и др. Изучение циркуляции арбовирусов на территории Поволжья // Итоги науки и техники. ВИНИТИ. Сер. Вирусол. 1991. - Т.24. - С. 24-25.

53. Галкина И.В., Бутенко A.M., Кузнецов A.A. и др. Изучение циркуляции вирусов серогруппы Калифорнийского энцефалита на территории Поволжья // Итоги науки и техники. ВИНИТИ. Сер. Вирусол. -1992. -121.- С. 61-69.

54. Гаранина С.Б. Конструирование тест-системы, основанной на полимеразной цепной реакции, для детекции возбудителя бруцеллеза: Автореф. дис. . канд. биол. наук. Саратов, 1996. - 24 с.

55. Гордеева З.Е., Абдусалимов И.А., Костюков М.А. и др. Роль птиц в экологии арбовирусов в Таджикистане // Изв. АНТадж. ССР. Отд-ние биол. наук 1989. - № 2. - С. 28-33.

56. Горин О.З., Гусарова H.A., Жарская C.JI. и др. Результаты серологической разведки 7 в отношении вируса Батаи на юге восточной Сибири //Итоги науки и техн. ВИНИТИ. Сер. Вирусол. 1991. - Т.24. - С.37-38.

57. Горин О.З., Гусарова H.A., Жарская C.JI. и др. Результаты серологической разведки в отношении вируса Батаи на юге восточной Сибири. // Итоги науки и техн. ВИНИТИ. Сер. Вирусол. 1992. - Т. 27. - С. 25-30.

58. Гражданов А. К., АязбаевТ. 3., Белоножкина Л. Б и др. Первые сведения о проявлении в Казахстане Лихорадки Западного Нила //Карантинные и зоонозные инфекции в Казахстане № 1-2 (23-24), Алматы, 2011.-С. 58-61.

59. Гражданов А. К., Танитовский В.А., Белоножкина Л. Б и др. Новый природный очаг Крымской геморрагической лихорадки в Казахстане //Карантинные и зоонозные инфекции в Казахстане № 1-2 (23-24), Алматы, 2011.-С. 66-69.

60. Громашевский В. Л., Гайдамович С.Я., Червонский В.И. Выделение вируса лихорадки Западного Нила и Синдбис у птиц юго-восточного Азербайджана // Матер, симпоз. по изучению птиц в распространении арбовирусов. Новосибирск, 1972. - С. 232-238.

61. Давидович В.Ф. Экологические факторы природной очаговости туляремии в Саратовской области: Автореф. дис. . канд. биол. наук, Саратов, 1968., 25 с.

62. Данияров O.A., Халимов М.Х. Головко Э.Н. Выделение вируса Синдбис от туркменской крысы в Таджикистане // Экология вирусов: Сб. науч. тр.-М., 1980.-С. 130-138.

63. Демихов В.Г., Чайцев В.Г. Невролгическая характеристика заболеваний, вызываемых вирусами Инко и Тягиня // Вопр. вирусол. 1995. -№ 1. - С. 21-25.

64. Денисов A.A., Савченко С.Т., Лазоренко В.В. и др. Носители и переносчики крымской геморрагической лихорадки в Волгоградской области // ЖМЭИ. 2005. - № 4. - С. 119-121.

65. Дуров В.И., Донец М.А., Перелатов В.Д. Разведка очагов КГЛ на территории юго-востока Европейской части РСФСР (Краснодарский край, Ставропольский край и Калмыцкая АССР) // Акт. пробл. вирусол. и профилакт. вирусных забол. -М., 1972. С. 358-356.

66. Дятлов А.И., Котти Б.К. Теоретические аспекты природной очаговости крымской геморрагической лихорадки на юге России //ЖМЭИ. -2005.-№4. -С. 98.102.

67. Евченко Ю.М., Григорьев М.П., Грижебовский Г.М. Возможный подход к эпидемиологическому районированию Ставропольского края по крымской геморрагической лихорадке // ЖМЭИ. 2005. - № 4. - С. 45—48.

68. Еременко Е.И., Афанасьев E.H., Солодовников Б.В., Василенко Н.Ф. Диагностика методом ОТ-ПЦР Крымской геморрагической лихорадки в Ставропольском крае в 2001-2002 гг. // ЖМЭИ. 2005. -№ 4 (приложение). -С.82-85.

69. Жибурт Е.Б., Губанова М.Н., Максимов В. А. Гемотрансмиссивная передача вируса Западного Нила // Эпидемиол. и инф. болезни. 2007. - № 3. - С. 28-32.

70. Журавлев В.И. Эпидемиологические и экологические аспекты циркуляции арбовирусов на территории Астраханской области. Дис. . канд. мед. наук. Саратов, 2002. - 149 с.

71. Завьялов Е.В., Шляхтин Г.В., Табачишин В.Г. и др. Птицы севера Нижнего Поволжья. Кн.1. История изучения, общая характеристика и состав орнитофауны. Саратов: Изд-во Сарат. ун-та, 2005. 296 с.

72. Завьялов Е.В., Шляхтин Г.В., Табачишин В.Г. и др. Птицы севера Нижнего Поволжья. Кн. 2. Состав орнитофауны. Саратов: Изд-во Сарат. унта, 2005.-324 с.

73. Завьялов Е.В., Шляхтин Г.В., Табачишин В.Г. и др. Птицы севера Нижнего Поволжья. Кн. 3. Состав орнитофауны. Саратов: Изд-во Сарат. унта, 2007.-328 с.

74. Зимина Ю.В., Куликова А.Н., Салько В.Н., Ковтунов А.И. Иксодовые клещи Астраханской области, их роль в формировании природных очагов и передаче арбовирусов человеку //Вопр. риккетсиол. и вирусол. Астрахань - М., 1995. - С. 58-62.

75. Изотов В.К., Журавлева М.Г., Кузьминская О.П. Выделение трех штаммов вируса Укуниеми из клещей в Вологодской области // Актуал. пробл. вирусол. и профил. вирусных заболеваний. М., 1972. - С. 283-291.

76. Кандауров Е.К., Андреев В.П., Аристова В.А. и др. Арбовирусы в центральной части Русской равнины // Итоги науки и техн. ВИНИТИ. Сер. Вирусол. 1991. - Т. 24. - С 46-47.

77. Карась В.Ф. Арбовирусы Киргизии //Арбовирусы / Под ред. Д.К.Львова. М., 1978. - Вып. № 3. - С. 40-44.

78. Классификация и номенклатура вирусов позвоночных. Учебное пособие. Под ред. Луговцева В.Ю., Васильева Д.А. Ульяновск, 2002 - 268 с.

79. Кнороз М.Ю., Ермаков Н.М., Скворцова Т.М. и др. Изоляция вируса Батаи (Bunyaviridae, Bunyavirus, комплекс Буньямвера) на территории Саратовской области // Деп. в ВИНИТИ. Вып. 92. - № 362 - Саратов, 1991.

80. Ковтунов А.И., Юстратов В.Б. Никешина Н.Н. и др. Эпидемиология Крымской геморрагической лихорадки в Астраханской области // Матер, науч. практ. конф. «Арбовирусы и арбовирусные инфекции». - Астрахань, 2007. - С. 108-114.

81. Ковтунов А.И., Юстратов В.Б. Никешина Н.Н. и др. Эпидемиологическая характеристика лихорадки Западного Нила в Астраханской области // Матер, науч.- практ. конф. «Арбовирусы и арбовирусные инфекции». Астрахань, 2007. - С. 114-115.

82. Колобухина Л.В., Львов Д.К., Бутенко A.M. и др. Значение вирусов антигенного комплекса Калифорнийского энцефалита в патологии // Клин. мед. 1989. - Т. 67. - № 9. - С. 61-64.

83. Колобухина Л.В., Львов Д.К., Скворцова Т.М. и др. Заболевания в России, ассоциированные с вирусами серогруппы калифорнийского энцефалита // Вопр. вирусол. 1998. - № 1. - С. 14-17.

84. Кондратенко В.Ф. Значение иксодовых клещей в переносе и хранении возбудителя Крымской геморрагической лихорадки в очагах инфекции // Паразитология, 1976. Т. 10. - № 4. - С. 297-302.

85. Кононова Ю.В., Терновой В.А., Протопопова Е.В. и др. Генотипирование вируса лихорадки Западного Нила, вызвавшего заболевания в Новосибирской области в 2004 г. // Матер. IX съезда

86. Всероссийского науч.-практ. общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов (26-27 апреля 2007, Москва) М., 2007. - Т. 3. - С. 186-188.

87. Кормиленко И.В. Экологические и эпидемиологические аспекты Крымской геморрагической лихорадки, лихорадки Ку и иксодовых клещевых боррелиозов в Ростовской области: Дисс. . канд. биол. наук. Ростов-на-Дону., 2010.-179 с.

88. Кормиленко И.В., Мороз Н.В., Айдинов Г.В. Клинико-эпидемиологическая характеристика геморрагической лихорадки в Ростовской области // Эпидемиол. и инф. болезни. 2008. - № 2. - С. 23-27.

89. Короткое В.Б. Научно-организационные основы эпидемиологического надзора за зоонозными инфекциями в Саратовской области. Дис. в виде науч. докл. на соиск. уч. ст. докт. мед. наук. Саратов, 1997. - 79 с.

90. Костюков М.А. О роли летучих мышей в экологии арбовирусов в Таджикистане // Экология вирусов: Матер. X симпоз. по экологии вирусов. -Баку, 1976.-С. 92-93.

91. Костюков М.А., Гордееева З.Е., Бухачев В.П. и др. Озерная лягушка (Rana radibunda) один из прокормителей кровососущих комаров Таджикистана -резервуар вируса Западного Нила // Мед. паразитол. и паразитар. бол. - 1985. - № 3. - С. 49-53.

92. Костюков М.А., Данияров O.A., Булычев В.П.и др. Итоги и задачи изучения арбовирусов в Таджикистане // Арбовирусы: Тез. докл. пленума Всесоюз. пробл. комиссии. Таллин, 1984. - С. 20-21.

93. Краснова Е.М. Эпидемиологические особенности лихорадки Западного Нила в Волгоградской области и совершенствование еепрофилактики. Автореф. дис. канд. мед. наук. Саратов, 2001. - 21 с.

94. Кузнецов A.A., Бутенко A.M., Галкина И.В. и др. Изучение циркуляции некоторых арбовирусов в зонах смешанных и южно-таежных лесов Русской равнины и их роль в патологии человека // Итого науки и техн. ВИНИТИ. Сер. Вирусол. 1991. -Т.24. - С.26-27.

95. Куликова JI.H., Зимина Ю.В., Ковтунов А.И., Седова А.Г. Кровососущие комары Астраханской области видовой состав, численность, биология, возможная роль в передаче арбовирусов // Вопр. риккетсиол. и вирусол. - Астрахань-М., 1995. - С. 62-65.

96. Куклев Е.В. Количественная оценка эпидемиологического потенциала природных очагов чумы: Автореф. дис. докт. мед. наук. -Саратов, 1999 г.-219 с.

97. Кутырев И.В., Билько Е.А., Шарова И.Н. и др. Оценка роли фоновых видов мышевидных грызунов в сохранении возбудителей арбовирусных инфекций в полупустынной зоне Саратовского Заволжья // Проблемы ООИ. Саратов 2008 г. № 3. - с. 19-22.

98. Кутырев И.В. Особенности циркуляции возбудителей природно-очаговых инфекционных болезней (на примере арбовирусов) на территории Саратовской области. Автореф. дис.канд.мед.наук. Саратов, 2009. -22с.

99. Кутырев В.В. Актуальные проблемы особо опасных инфекционных болезней и санитарная охрана территории в современных условиях // Журн. микробиол. 2008. - № 1. - С. 17-23.

100. Кучерук В.В. Антропогенная трансформация окружающей среды и грызуны // Бюл. МОИП. 1976. - Вып. 81, № 2. - С. 5-19.

101. Кучерук В.В. Антропогенная трансформация окружающей среды и природно-очаговые болезни // Вест. АМН СССР. 1980. - № 10. - С. 24-32.

102. Лабораторная диагностика опасных инфекционных болезней. Практическое руководство /Под ред. академика РАМН, профессора Г.Г.Онищенко, чл.-корр. РАМН, профессора В.В.Кутырева. М.: ОАО «Издательство «Медицина», издательство «Шико», 2009. - 472 с.

103. Лавровский A.A., Денисов П.С., Добронравов В.П., Попов Н.В. Антропогенный ландшафт и чума// Акт.вопр. зоогеографии. Кишинев: Штиинца, 1975. - С. - 139-140.

104. Лебедев А.Д., Пак Т.П., Бируля Н.Б. и др. Экология вируса крымской геморрагической лихорадки // Деп. в ВИНИТИ. Сер. Мед. география. М., 1977. - Т. 8. - С. 122-168.

105. Лещинская Е.В. Клиника крымской геморрагической лихорадки и сравнение ее с геморрагическими лихорадками других типов. Автореф. дис. . докт. мед. наук. Москва, 1967. - 25 с.

106. Лещинская Е.В., Костюков М.А., Смирнова С.Е. Варианты клинического течения Крымской-Конго геморрагической лихорадки

107. Арбовирусы и арбовирусные инфекции. Международный симпозиум. М, 1989.-С. 30.

108. Лещинская Е.В., Чумаков М.П. Сравнительное изучение Крымской геморрагической лихорадки в разных эпидемиоологических очагах и сходных с ней заболеваний в Средней Азии // Тр. ИПИВЭ АМН СССР. М., 1965.-Вып. 7.-С. 315-323.

109. Лобанов А.Н. Савченко С.Т., Смелянский В.П. и др. Крымская геморрагическая лихорадка в Волгоградской области // Арбовирусы и арбовирусные инф. М., 2007. - С. 132-135.

110. Локтев В.Б. Флавивирусы как новые и вновь возникающие патогены // Матер. IX съезда Всероссийского науч.-практ. общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов (26-27 апреля 2007, Москва) М., 2007. - Т. 3. - С. 121-122.

111. Луговой А.Е. Птицы дельты Волги // Фауна и экология птиц дельты Волги и побережий Каспия: Тр. Астраханск. заповедника. -Астрахань: Волгарь, 1963. № 8. - С. 9-185.

112. Львов Д.К. Лихорадка Западного Нила // Вопр. вирусол. 2000. -№2.-С. 4-9.

113. Львов Д.К. Новые и вновь возникающие вирусные инфекции // Вопр. вирусол. 2000. - № 4. - С. 4-7.

114. Львов Д.К. Значение вновь возвращающихся инфекций в биобезопасности // Вопр. вирусол. 2002. - № 5. - С. 4-7.

115. Львов Д.К., Бутенко A.M., Вышемирский О.И. и др. Выделение вируса лихорадки Западного Нила от больных людей в период эпидемической вспышки в Волгоградской и Астраханской областях // Вопр. вирусол. 2000. - № 3. - С. 9-12.

116. Львов Д.К., Бутенко A.M., Гайдамович С .Я. и др. Эпидемическая вспышка менингоэнцефалита в Краснодарском крае и Волгоградской области, вызванная вирусом лихорадки Западного Нила // Вопр. вирусол. -2000.-№ 1.-С. 37-38.

117. Львов Д.К., Бутенко A.M., Скворцова Т.М. и др., Заболевания в России, ассоциированные с вирусами серогруппы Калифорнийского энцефалита //Вопр. вирусол. 1998. - № 1. - С. 14-17.

118. Львов Д.К., Дерябин П.Г. Флавивирусы (Flaviviridae) // Медицинская вирусология: Руководство /Под ред. Д.К.Львова. М.: ООО «Медицинское информационное агентство», 2008. - С. 228-235.

119. Львов Д.К., Дерябин П.Г., Аристова В. А. и др. Атлас распространения возбудителей природно-очаговых вирусных инфекций на территории Российской Федерации. М., Изд-во НПЦ ТМГ МЗ РФ, 2001. -192 с.

120. Львов Д.К., Джаркенов А.Ф., Львов Д.Н. и др. Изоляция вируса лихорадки Западного Нила от большого баклана Phalacrocorax carbo, вороны

121. Corvus corone и собранных с нее клещей Hyalomma marginatum в природных и синантропных биоценозах в дельте Волги (Астраханская область, 2001 г.) // Вопр. вирусол. 2002. - № 5. - С. 7-12.

122. Львов Д.К., Ильичев В.Д. Миграции птиц и перенос возбудителей инфекции (эколого-географические связи птиц с возбудителями инфекций). -М.: Наука, 1979.-271 с.

123. Львов Д.К., Клименко С.М., Гайдамович С.Я. Арбовирусы и арбовирусные инфекции. М.: Медицина, 1989. - 336 с.

124. Львов Д.К., Лебедев А.Д. Экология арбовирусов. М., 1974. -184 с.

125. Львов С. Д., Громашевский В. Л., Скворцова Т.М. и др. Циркуляция вирусов комплекса Калифорнийского энцефалита на северо-западе Русской равнины // Мед. паразитол. и паразитар. бол. 1989. - № 2. -С. 74-77.

126. Львов С.Д., Митчелл К.Д., Громашевский В.Л. и др. Природные очаги вирусов серогруппы Калифорнийского энцефалита в различных ландшафтных зонах средней и западной Сибири // Итоги науки и техники. ВИНИТИ. Сер. Вирусол. М., 1992. - Т. 27. - С. 30-38.

127. Малеев В.В., Галимзянов Х.М., Бутенко A.M., Черенов И.В. Крымская геморрагическая лихорадка. Москва-Астрахань, 2003. - 120 с.

128. Малецкая О.В., Бейер А.П., Агапитов Д.С. и др. Эпидемическая ситуация по крымской геморрагической лихорадке в Южном Федеральном округе // ЖМЭИ. 2009. - С. 51-54.

129. Малецкая О.В. Харченко Т.В., Брюханов Г.Д. и др. Эпидемическая ситуация и заболеваемость крымской геморрагической лихорадкой в Южном Федеральном округе в 2009 г. // ЗНиСО. М., 2010. -№5.-С. 35-37.

130. Мамонтов И.М. Отношение малого суслика (Citellus pygmaeus) к изменению условий его существования в животноводческих и земледельческих районах // Вопросы экологии. 1975. - Т. 2. - С. 190-220.

131. Маниатис Т., Фрич Э., Самбрук Дж. Молекулярноеклонирование. Перевод с англ. Под ред. Баева A.A., Скрябина К.Г. М: «Мир». - 1986. - 479 с.

132. Материалы к государственному докладу о состоянии окружающей природной среды РФ по Астраханской области за 1999 г. -Астрахань, 2001. 157 с.

133. Медицинская вирусология. Часть вторая / Под ред. Королюка A.M. и Сбойчакова В.Б. -ЭЛБИ-СПб, 2002. 164 с.

134. Медицинская вирусология: Руководство / Под ред. Д.К.Львова. -М.: ООО «Медицинское информационное агентство», 2008. 656 с.

135. Момыналиев К.Т., Говорун В.М. Перспективы применения методов ДНК диагностики в лабораторной службе. Часть 1 (лекция) //Клин, лаб. диагност. - 2000. - № 4. - С. 25-33.

136. Москвитина Э.А, Водяницкая С.Ю., Пичурина Н.Л. и др. Изучение современного состояния природного очага Крымской геморрагической лихорадки в Ростовской области // Пробл. особо опасных инф. Саратов, 2004. - Вып. 1 (87). - С. 34-37.

137. Москвитина Э.А., Забашта М.В., Ломов Ю.М., и др. Лихорадка I Западного Нила в Ростовской области. Результаты эпидемиологического с надзора // Матер, науч.- практ. конф. «Арбовирусы и арбовирусные инфекции». Астрахань, 2007. - С. 124-127.

138. Наркайтис Л.И. Разработка системы оценки и анализа предвестников осложнения эпидемиологической ситуации при кишечных инфекциях, связанных с водным фактором: Автореф. дис. . канд. мед. наук. Саратов, 2008. - 22 с.

139. Новикова В.П. Иксодовые клещи Карачаево-Черкесской республики и их эпидемиологическое значение. Автореф. дис. . канд. биол. наук. М., 2007.-20 с.

140. Онищенко Г.Г. Распространение вирусных природно-очаговых инфекций в Российской Федерации и меры по их профилактике // Эпидемиол. и инф. бол. 2000. - № 4. - С. 4-8.

141. Онищенко Г.Г. Борьба с инфекционными болезнями -приоритетная тема председательства Российской Федерации на саммите группы восьми в 2006 г. И Журн. микробиол. 2006. - № 7. - С. 3-7.

142. Онищенко Г.Г., Ефремов В.И., Байер А.П. Крымская геморрагическая лихорадка. Москва, ГОУ ВУНМЦ, 2005. - 269 с.

143. Опарин M.JL, Опарина О.С. Изменение природных комплексов Заволжских степей в связи с динамикой климата и антропогенным преобразованием // Поволжский экологический журнал. 2003. - № 1. - С. 31-40.

144. Остерман JI.A. Методы исследования белков и нуклеиновых кислот // Электрофорез и ультрацентрифугирование / Практ. пособие. М., «Наука», 1981.-288 с.

145. Пилипенко В.Г., Щекина Т.А. О влиянии сельскохозяйственной деятельности человека на природный очаг туляремии степного типа // Особо опасные инф. на Кавказе: Тез. Докл. 4-й краевой науч.- практ. конф. -Ставрополь, 1978. С. 67-69.

146. Пискунов В.В. Влияние изменений пограничных зон пойменных ландшафтов на структуру сообществ гнездящихся птиц Волгоградского водохранилища / Проблемы изучения краевых структур биоценозов //Тез. докл. Всерос. семинара. Саратов, 1997. С. 21—22.

147. Пискунов В.В. Антропогенная трансформация сообществ птиц в пойменных экосистемах Волгоградского водохранилища // Экологические проблемы крупных рек Тез. докл. Международной и молодежной конф. -Тольятти, 2003. - С.219-328.

148. Пискунова H.B. Актуальные проблемы и совершенствование мероприятий по санитарной охране территории Астраханской области в современных условиях: Дис.канд. мед. наук. Саратов, 2010. - 130 с.

149. Платонов А.Е., Карань Л.С., Тялина Ю.Ю. и др. ПЦР-диагностика лихорадки Западного Нила // Генодиагностика инфекционных заболеваний: сб. тезисов 4-й Всероссийской научно-практ. конф. (Москва, 22-24 октября 2002 г.). М., 2002. - С. 292-294.

150. Попов Н.В., Рогаткин А.К., Козлова Т. А. Букаева H.H. Цикличность эпизоотии чумы в регионе Северного и Северо-Западного Прикаспия и факторы ее определяющие. Астрахань, 1999. - 112 с.

151. Попов Н.В., Сурвилло A.B., Князева Т.В. и др. Биоценотические последствия антропогенной трансформации ландшафтов Черных земель // Биота и природная сеть Калмыкии. Элиста, 1995. - С. 211-221.

152. Попов Н.В., Яковлев С. А., Санджиев В.Б.-Х. и др. Эпизоотологические последствия орошения энзоотичных по чуме территорий Северо-Западного Прикаспия // Пробл. санитарно-эпидемиол. Охраны территории СНГ. Саратов, 1998. - С. 81-82.

153. Прилипов А.Г., Кинни Р., Самохвалов Е.И. и др. Филогенетический анализ новых вариантов вируса лихорадки Западного Нила // Вопр. вирусол. 2002. - №4. - С. 36^1.

154. Смирнова С.Е. Крымская-Конго геморрагическая лихорадка: этиология, эпидемиология и лабораторная диагностика. Автореф. дис. . докт. мед. наук. М, 2003. - 121 с.

155. Смирнова С.Е. К 60-летию изучения Крымской-Конго геморрагической лихорадки // Эпидемиол. и инф. болезни. 2005. - № 6. - С. 45-51.

156. Смирнова С.Е., Карань JI.C., Платонов А.Е., и др. Циркуляция вируса Крымской-Конго геморрагической лихорадки в районах северной границы ареала этой инфекции на территории республики Казахстан // Эпидемиол. и инф. болезни. 2009. - № 5. - С. 42-47.

157. Смирнова С.Е., Седова А.Г., Зимина Ю.В. Караванов A.C. О случаях Крымской-Конго геморрагической лихорадки в Астраханской области // Вопр. вирусол. 1990. - № 3. - С. 228-231.

158. Смирнова С.Я., Скворцова Т.М., Седова А.Г., и др. О вновь выделенных штаммах вируса Баткен // Вопр. вирусол. 1988. - № 3. - С. 360362.

159. Смирнова С.Е., Шалунова Н.В., Мартьянова Л.И. Клещевой энцефалит, геморрагические лихорадки и комариные арбовирусные инфекции. М., 1968. - С. 96-97.

160. Соколова Э.И., Мирзоева H.H., Кулиева Н.И., Султанова З.И. Участие птиц в циркуляции арбовирусов на территории Азербайджана // Экология вирусов: Сб. науч. тр. М., 1975. - С. 94-97.

161. Сюрин В.Н., Белоусова Р.В., Фомина Н.В. Ветеринарная вирусология. Учебник для студентов выс. с/х учебных зав. по спец. «Ветеринария». М. «Колос», 1984. - 375 с.

162. Терехин С.А. Гребенникова Т.В. Хуторецкая Н.В., Бутенко A.M. Филогенетический анализ штаммов вируса Батаи, выделенных из комаров в

163. Путинцева Е.В., Смелянский В.П., Антонов В.А. и др. Прогноз эпидемиологической ситуации по лихорадке Западного Нила на территории Российской Федерации на 2010 год // Пробл. особо опасных инф. Саратов, 2010.-№2.-С. 14-18.

164. Рогаткин А.К. Экологические аспекты обеспечения эпидемического благополучия по особо опасным и природноочаговыминфекциям на территории Астраханской области. Диссерт.канд. мед.наук. Волгоград, 1995. - 80 с.

165. Рубахова Ю.В. Распространение арбовирусов в субтропической зоне Краснодарского края и их роль в патологии человека. Автореф. дис. канд. мед. наук. М., 1994. - 22 с.

166. Рубахова Ю.П. Распространение арбовирусов в субтропической зоне Краснодарского края и их роль в патологии человека. Автореф. дис. . канд. мед. наук. Москва, 1994. - 22 с.

167. Русев И.Т. Иксодовые клещи северо-западного Причерноморья и их роль в циркуляции природно-очаговых арбовирусных инфекций // Вестник «СумДУ», сер. «Медицина». 2008. - №. 2, т. 1. - С. 82-100.

168. Сангаджиева Г.В. Сочетанные природные очаги чумы, туляремии и Крымской геморрагической лихорадки на территории Республики Калмыкия: Дис. канд. биол. наук. Саратов, 2009. - 152 с.

169. Сангаджиева Г.В., Санджиев В.Б.-Х., Подсвиров A.B. и др. Анализ эпизоотической и эпидемиологической ситуации по крымской геморрагической лихорадке в республике Калмыкия в 200-2007 годах // ЗНиСО.-М., 2009.-№ 1.-С. 12-16.

170. Санникова И.В., Ефременко В.И., Попов П.Н., Бейер А.П., Ковалевич Н.И., Еременко Е.И., Василенко Н.Ф., Солодовников Б.В.,

171. Колобухина JI.В. Диагностическая ценность лабораторных методов диагностики Крымской геморрагической лихорадки в клинической практике // ЖМЭИ. 2005. - № 4 (приложение). - С.27-32.

172. Саратовская область. Административно-территориальное деление. Саратов: из-во Саратовского СГУ. - 1985. - 205 с.

173. Свешникова М.О., Селецкая В.Л., Вершинский Б.В. и др. Арбовирусы и арбовирусные инфекции на северо-западе России // Итоги науки и техники. ВИНИТИ. Сер. Вирусол. М., 1991. - Т. 24. - С. 34-36.

174. Серегин C.B., Туманова И.Ю., Петрова И.Д. и др. Особенности S-сегмента генома вируса Крымской-Конго геморрагической лихорадки, циркулирующего в России и Болгарии // Вопр. вирусол. 2007. - № 3. - С. 25-32.

175. Семашко И.В., Матевосян К.Ш., Пиванова Г.П., Чумаков М.П. Изоляция вируса Бханджа (Bhanya) из клещей Dermacentir marginatus, собранных с овец в районе озера Севан, Армения // Тр. ИПВЭ АМН СССР, 1973. Т. 21. - № 2. - С. 160-164.

176. Скоферца П.Г., Степанова O.A. Арбо- и аренавирусы в Молдавской ССР // Итоги науки и техники. ВИНИТИ. Сер. Вирусол. М., 1991.-Т. 24.-С. 32-33.

177. Скоферца П.Г., Степанова O.A. Арбовирусные инфекции и лимфоцетарный хориоменингит в Молдове // Итоги науки и техники. ВИНИТИ. Сер. Вирусол. М., 1992. - Т. 27. - С. 97-101.

178. Скоферца П.Г., Яровой П.И., Прока Л.М., Степанова O.A. Некоторые результаты исследования на арбовирусы в Молдавии // Арбовирусы: Тез. докл. пленума Всесоюз. пробл. комиссии. Таллин, 1984. -С. 24-25.

179. Славский A.A., Щелканов М.Ю., Петренко М.С. и др. Применение Марковских цепей для описания миграционных путей птиц с целью прогнозирования заносов вирусных инфекций // Орнитологические

180. Волгоградской области, Западной Украине и Чешской республике // Молекул, генетика, микробиол. и вирусол. 2010. -№ 1. - С. 27-29.

181. Тинкер Ю.А., Пиликова О.М., Адимов B.JI. и др. Результаты обследования территории северо-западного Кавказа на арбовирусные инфекции // Итоги науки и техн. ВИНИТИ. Сер. Вирусол. 1991. - Т.24. -С.27-28.

182. Топорков В.П. Теоретические и практические аспекты информативности методов диагностики чумы при эпидемиологическом надзоре в природных очагах: Автореф. дис. докт. мед. наук. Саратов, 1997.-272 с.

183. Трансмиссивные инфекционные заболевания в Европе их распространение и влияние на общественное здравоохранение Всемирная организация здравоохранения // Сообщение ВОЗ, 2005 г. 158 с.

184. Туманова И.Ю., Серегин C.B., Вышемирский О.И. и др. Генетический мониторинг вируса Крымской-Конго геморрагической лихорадки в Казахстане и Таджикистане в период 2001-2003 гг. // Молекул, генетика, микробиол. и вирусология. 2006. - № 2. - С. 36-41.

185. Турцева М.А. Спонтанные микробиоценозы некоторых видов иксодовых клещей (Ixodidae) и слепней (Tabanidae). Автореф. . канд. Биол. наук. Саратов, 2005. - 20 с.

186. Чиров П.А., Турцева М.А. Иксодовые клещи (Ixodidae) Саратовской области // «Зоологические исследования регионов России и сопредельных территорий» Матер, междунар. науч. конф. Н.-Новгород, 2002. - С. 61-62.

187. Чумаков М.П. Новая вирусная клещевая болезнь геморрагическая лихорадка в Крыму // Крымская геморрагическая лихорадка. - Симферополь, 1945.-С. 13-43.

188. Чумаков М.П. Крымская геморрагическая лихорадка // Вирусные геморрагические лихорадки. Научный обзор. Сер. «Эпидемиология». М., 1979. -№3.- С. 10-33.

189. Чумаков М.П., Андреев С.К., Заводова Т.М. Вопросы экологии КГЛ в природных очагах этой инфекции в Крыму // Тр. ИПВЭ АМН СССР. -1974.-Т. 22, вып. 2.-С. 19.

190. А.Н.Северцова РАН / Под ред. Академика Д.С.Павлова. Саратов: Изд-во СГУ, 2005.-264 с.

191. Урбах В.Ю. Математическая статистика для биологов и медиков. -М., 1963.- 323 с.

192. Федоров H.A., Суханов Ю.С., Асади Мобархан А.Х., Артемьев М.И. Полимеразная цепная реакция (ПЦР) М.:, 1996.

193. Феоктистов А.З., Никулина H.A., Перевозчиков В.А. Роль перелетных птиц Байкала в распространении арбовирусов // Рекреации и охраняемые территории Матер. 5-го совещ. по прикладной географии. -Иркутск, 1988.-С. 92-95.

194. Феоктистов А.З., Чапоргина Е.А., Перевозчиков В.П. и др. Материалы изучения арбовирусов в Восточной Сибири // Итоги науки и техники. ВИНИТИ. Сер. Вирусол. М., 1991. - Т.24. - С. 12-14.

195. Харченко Т.В. Современные эпидемиологические особенности Крымской геморрагической лихорадки в Российской Федерации. Автореф. дис. . канд. мед. наук. Ставрополь, 2011. - 18 с.

196. Хубалек 3. Экология арбовирусов в Чехословакии // Арбовирусы и арбовирусные инфекции Тез. докл. Междунар. симпоз. - М., 1989. - С.11-12.

197. Черкасский Б.Л. Эпидемиологический надзор// Руководство по эпидемиологии инфекционных болезней Том 1., М.: «Медицина», 1993. -98 с.

198. Черкасский Б.Л. Эпидемиологический диагноз. Л. Медицина, 1990.-208 с.

199. Черкасский Б.Л. Справочник по ообо опасным инфекциям. М.: «Медицина», 1996. - 160 с.

200. Чумаков М.П., Беляева Н.К., Бутенко A.M., Мартьянова Л.И. Вирус Западного Нила в СССР // Эпидемиология вирусных инфекций. М., 1968. -Т. 12.-С. 373-376.

201. Чумаков М.П., Беляева А.П., Лещинская Е.В. Вирусная этиология заболеваний типа Крымской геморрагической лихорадки в Астраханской области // Тр. ИПИВЭ АМН СССР М., 1965. - Вып. 7. - С. 197-201.

202. Чумаков М.П., Заводова Т.М., Марьянова Л.И. Обнаружение вируса КГЛ у некоторых видов кровососущих клещей, собранных в 1973 г. на территории Киргизской и Узбекской ССР // Тр. ИПВЭ АМН СССР. -1974.-Т. 22, вып. 2.-С. 35.

203. Чумаков М.П., Рубин С.Г. Выявление природных очагов КГЛ в территории Азербайджанской ССР по данным серологического обследования животных // Вопр. эпидемиол. и профилакт. клещ, энцефалита. М., 1970. -С. 120-132.

204. Чунихин С.П., Леонова Г.Н. Экология и географическое распространение арбовирусов. М., 1985. -125 с.

205. Шахназарян С.А., Оганесян A.C., Манукян Д.В. и др. Выделение арбовирусов в Армянской ССР // Итоги науки и техники. ВИНИТИ. Сер. Вирусол. М., 1991. - Т. 24. - С. 22.

206. Шахназарян С.А., Оганесян A.C., Манукян Д.В. и др. Выделение арбовирусов на территории республики Армения // Итоги науки и техники. ВИНИТИ. Сер. Вирусол. М., 1992. - Т. 27. - С. 57-60.

207. Шишкина Е.О. Серологическая диагностика лихорадки Западного Нила: Автореф. дис. . канд. мед. наук. М., 2003. - 20 с.

208. Шляхтин Г.В., Аникин В.В., Завьялов Е.В. Волга как единый интразональный природный комплекс // Экологические проблемы крупных рек Тез.: докл. Межд. молодежной конф. - Тольятти, 2003. - С. 328-329.

209. Шопенская Т.А. Федорова М.Е., Карань Л.С. и др. Новый вариант вируса Западного Нила и его потенциальное эпизоотическое иэпидемиологическое значение // Эпидемиол. и инф. болезни. 2008. - № 5. -С. 38-44.

210. Щелканов М.Ю., Ананьев В.Ю., Львов Д.Н. и др. Комплексный эколого-вирусологический мониторинг на территории Приморского края в 2003-2006 гг. // Вопр. вирусол. 2007. - № 5. - С. 37-47.

211. Щелканов М.Ю., Колобухина Л.В., Москвина Т.М. и др. Выявление циркуляции вируса Крымской-Конго геморрагической лихорадки в предгорных степях Северного Кавказа // Вопр. вирусол. 2005. - № 5. - С. 9-15.

212. Щербакова С.А. Распространение и экология вирусов Батаи, Тягиня и Инко (сумейство Bunyaviridae) в Нижнем Поволжье. Автореф. дис. . канд. биол. наук. Саратов, 1997. - 26 с.

213. Anderson C.R. Resent advances in arthropod-borne virus research in India // Bull. Inst. Sci. India. 1963. - Vol. 24. - P.205-216.

214. Anderson C.R. et al. Oropouche virus: a new human disease agent from Trinidad // Amer. J. Trop. Med. And Hyg. 1961. - № 4. - P. 574-578.

215. Bakonyi Т., Hubalek Z., Rudolf I., Nowotny N. Novel Flavivirus or New Lineage of West Nile Virus, Central Europe // Emerg. Infect. Dis. 2005. -Vol. 11,No. 2.-P. 225-231.

216. Bardos V., Cupkova E. The Calovo virus -the second virus isolated from mosquitoes in Czechoslovakia. // J. Hyg. Epidemiol. Microbiol. Immunol. -1963. Vol. 6, N 3. - C. 255-260.

217. Bardos V., Danielova V. The Tahyna virus- a virus isolated from mosquitoes in Czechoslovakia // Hyg., Epid., Microb. Immunol., 1959. № 2. - P. 264-276.

218. Barr J.N., Elliott R.M., Dunn E.F., Wertz G.W. Segment- specific terminal sequences of Bunyamwera bunyavirus regulate genome replication. // Virology, 2003. Vol. 311. - p. 326-328.

219. Boom R, Sol C, Wertheim-van Dillen P. Rapid purification of ribosomal RNAs from neutral agarose gels //Nucleic Acids Res. 1990. - 18(8). -P. 2195.

220. Brummer-Korvenkontio M. Arboviruses of the California complex and the Bunyamwera group in Finland // Arboviruses of the California complex and the Bunyamwera group. Bratislava, 1969. - P. 131-133.

221. Brummer-Korvenkontio M. Bunyamvera arbovirus supergroup in Finland. A study of Inkoo and Batai viruses // Comment. Biolog. 1974. - V. 76. -P. 1-52.

222. Butenko A.M., Vladimirtseva E.A., Lvov S.D. California serogroup viruses from mosquitoes collected in the USSR //Am. J. Trop. Med. Hyg. 1991. -Vol. 45 (3), N 7 - P.366-370.

223. Butenko A., Lvov D., Kolobukhina L. Arboviruses of the Genus Bunyavirus (Family Bunyaviridae) and caused illnesses in the Former USSR // Sov. Med. Rev. E: Virology Reviews. 1993. - Vol. 5. - P. 77-135.

224. Burgdorfer W. et al. Isolation of California encephalitis virus from the blood of a snowshoe hare (Lepus americanus) in Western Montana // Amer. J. Hyg . 1961. - N 3. -P 344-349.

225. Calisher C.H. Taxonomy, classification and geographic distribution of California serogroup Bunyaviruses. In.: California serogroup viruses. New York: Publ. A.R. Liss Inc., 1993. - P. 1-16.

226. Crichlow R, Bailey J, Gardner C. Cerebrospinal fluid neutrophilic pleocytosis in hospitalized West Nile virus patients // American Board of Family Practice. 2004. - 17 (6). - P. 470-472.

227. Danielova V., Minar J., Rosicky B. Experimental survival of the virus Tahyna in 1968 //Am. J. Trop. Med. Hyg. -1969. Vol. 33, № 6. - P.1203-1215.

228. Epsmark A., Niklasson B. Ockelbo-disease in Sweden: epidemiol., clinical, and virodical data from the 1982 outbreak //Am. J. Trop. Med. Hyg. -1984. Vol. 33, N 6. - P.1203-1215.

229. Frese M. Weeber V., Weeber F. et al. MX1 sencitivity of Batken viruses an Orthomyxovirus // J. Gen. Virol. - 1997. - Vol. 78. - P. 205-216.

230. Gaidamovich S.Ya., Obukova V.R. Olyka an arbovirus of the Bunyamvera group in the USSR // Acta, virol. - 1973. - Vol. 17. - P. 444.

231. Goody RJ, Schittone SA, Tyler KL. Experimental reovirus-induced acute flaccid paralysis and spinal motor neuron cell death // Journal of neuropathology and experimental neurology. 2008. Mar; 67(3). - P. 231-239.

232. Gonzales J.P., Camicas J.L., Cotnet J.P. // Res.Virol. 1992. - Vol.143, N 1. -P.23-28.

233. Gordon S.W., Linthicum K.J., Moulton J.R.Transmission of Crimean

234. Congo hemorrhagic fever virus in two species of Hyalomma ticks from infected adults to cofeeding immature forms // J. Trop.Med.Hyg. 1993. - Apr; 48 (4). - P. 576-80.

235. Hayes E.B., Komar N., Nasci R.S et al. Epidemiology and transmission dynamics of West Nile virus disease // Emerg. Infect. Dis. 2005. -Vol.11,N. 8.-P. 1167-1173.

236. Hoogstraal H. The epidemiology of tick-born Crimean-Congo hemorrhagic fever in Asia, Europe and Africa. Review article // J.Med.entomology. 1979. - Vol. 15, N 4. -P. 307-417.

237. Hubalek Z., Halouzka J. West Nile fever a reemerging mosquito-borne viral disease in Europe // Emerg. Infect. Dis. - 1999. - Vol. 5, No. 5. - P. 643-650.272. http://www.cdc.gov.273. http://www.cdc.gov, 2004.

238. Jacobcon E.R., Ginn P.E., Troutman J.M. et al. // J. Yildlie Dis. -2005. Vol.41,N l.-P. 96-106.

239. Karabatsos N. International Catalogue of Arboviruses including certain other viruses of vertebrates. Amer. Soc. Trop. Med. Hyg., 1985. - 1146 p.

240. Kolman J.M. et al. Isolation of a presumably new virus from unengorged Ixodes ricinus ticks // Acta virol. 1966. - N 2. - P. 171-172.

241. Kuno Goro, Gwong-Jen J. Chang, K. Richard Tsuchiya et al. Phylogeny of the Genus Flavivirus // J. of Virology. 1998 . - Vol. 72, No. l.-P. 73-83

242. Lanciotti R.S., Roehrig J.T., Deubel V. et al. Origin of the West Nile virus responsible for an outbreak of encephalitis in the northern United States // Science. 1999. - Vol. 286. - P. 2333-2337.

243. Lim J.K., Lisco A., McDermott D.H. Genetic variation in OAS 1 is a risk factor for initial infection with West Nile virus in man // PLoS Pathog. 2009. -Vol. 5,N. 2.-P. 1-12.

244. Lvov D., Avershin A., Andreev V. et al. Surveillance for arboviruses in the Soviet Union: relationships between ecologic zones and virus distribution // Arch. Virol. 1990- Suppl.l. -. -P.259-266.

245. Lvov D.K. Karas F.R., Tsyrkin G.V. et al. Batken virus, a new arbovirus isolated from ticks and mosquitoes in Kirghis SSR // Arch. Ges. Virusforschung. 1974. - Bd. 44 - S. 70-73.

246. Mackenstein H., Pilaski J. Isolation of Tahyna-virus (Bunyaviridae) from mosquitoes collected in two different European natural foci // Zbl. Bakteriol. Mikrobiol. und Hyg. 1984. - Vol. 257, N 1. - P. 152.

247. Mälkovä D. Study of arboviruses in the region of Most from 1981 to 1982. Isolation of Tahyna viruses // Chesk Epidemiol Mikrobiol Imunol. 1984. -P. 33-88.

248. M.H.V. van Regenmortel, C.M. Fauquet, D.H.L. Bishop et al. Virus Taxonomy: The Classification and Nomenclature of Viruses // The Seventh Report of the International Committe on Taxonomy of Viruses. 2000. - Academic Press, SanDiego. - 1167 p.

249. Nashed N.W., Olson J.G., Ah. El-Tigani. Isolation of Batai virus (Bunyaviridae: Bunyavirus) from the blood of suspected malaria patients in Sudan // Am. J. Trop. Med. Hyg. 1993. - Vol. 48, N 5. - P. 676-681.

250. Niklasson B., Esmark A., Lundstrom J. Occurrence of artralgia and specific JgM antibodies three to four yers afte Ocelbo disease // J.Infect. Dis. -1988.-Vol. 157, N4.-P. 832-835.

251. Olson K., Trent D.W. Genetic and antigenic variations among geographical isolation of Sindbis virus // J. G. Virol. 1985. - Vol. 66. - P.797-810.

252. Ozkurt Z., Kiki I., Erol S. et al. Crimean-Congo hemorrhagic fever in Eastern Turkey: clinical features, risk factors and efficacy of ribavirin therapy // J. Infect. 2006. - Vol. 52, N 3. - P. 207-215. ^

253. Peleg J. Infection of mosquito larvae by arboviruses // Amer. J. Trop. Med. Hyg. 1965, Vol. 14, N 1. -p. 158-165.

254. Petersen, L.R. and A.A. Marfin. West Nile virus: a primer for the clinician. Ann. Inter. Med. 2002. - Vol -137: 173-179.

255. Pilaski J., Mackenstein H. Nachweisdes Tahyna-virus bei Stechmücken in zwei verseheidenen-europaisehen Naturherden. // Zbl. Bakteriol. -1985. Abt IB. - Vol. 180, N 4. - P. 394-420.

256. Senne DA, Pedersen JC, Hutto DL. et al. Pathogenicity of West Nile virus in chickens // Avian Dis. 2000. - 44(3). - P.642-649.

257. Shah K.V., Johnson H.N., Rao T. Isolation of five strains of Sindbis virus in India. // Ind. Med. Res. 1960. - Vol. 48, N 3. - P. 300-308.

258. Siddharthan V, Wang H, Motter NE, Hall JO et al. Persistent West Nile virus associated with a neurological sequela in hamsters identified by motor unit number estimation // J Virol. 2009. - May, 83(9). - P.4251-4261.

259. Smithburn K.S., Hughes T.P., Burke A.W., Paul J.H. A neurotropic virus isolated from the blood of a native of Uganda // Amer. J. Trop. Med. 1940. -Vol. 20,N. 4.-P. 471-493.

260. Stefan A., Banet-Noach C., Tal S. et al. // Emerg. Infect. Dis. 2003. -Vol. 9, N 7. - P 887-889.

261. Swayne DE, Beck JR, Smith CS, Shieh WJ, Zaki SR. Fatal encephalitis and myocarditis in young domestic geese (Anser anser domesticus) caused by West Nile virus // Emerg. Infect Dis. 2001. - 7(4):751-3.

262. Taylor R.M., Hurlbut H.S., Work T.H. et al. Sindbis virus: a newly recognized arhropodtransmitted virus // Amer. J. Trop. Med. Hyg. 1955. - Vol. 4,N5.-P. 844-862.

263. Yasuo M., Yuji I., Shigeyoshi H. A survey of antibodies to arthropod-borne viruses in Japanese cattle // Inst. Anim. Health. Quart. 1980. - V.5, N 4. -P. 277-282.

264. Unguraunu A., Popovici V., Nicolescu G. et al. Date preliminare privind raspindirea actuala a'unor arbovirusuri peteritoriul farii noastre //Bacterid., virusol., parazitol., epidemiol. 1988. - V. 33, N 4. - P.341-346.

265. WHO. Scientific Group, Technical Report Series. 1967. -N 369.

266. Woodall J.P., Williams M.C., Simpson D.L. Congo virus: a hither undescribed virus occurring in Africa. II. Identification studies // East. Afr. Med. -1967.-N44.-P. 93-98.