Совершенствование биотехнологий высокоочищенной α-циклодекстринглюканотрансферазы и α-циклодекстринов на основе новых штаммов рода Paenibacillus тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 05.18.10, кандидат технических наук Кузнецова, Оксана Владимировна

• Кузнецова, Оксана Владимировна
• кандидат технических наук
• 2008

Оглавление диссертации кандидат технических наук Кузнецова, Оксана Владимировна

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1 .ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Фермент микробного происхождения - циклодекстринглюкано-трансфераза.

1.2. Циклодекстриногенные бактерии.

1.2.1. Paenibacillus macerans.

1.2.2. Bacillus circulans.

1.2.3. Алкалофильные бациллы.

1.2.4. Продуценты ЦГТ-азы, развивающиеся при нормальных значениях рН.

1.2.5. Термотолерантные циклодекстриногены.

1.2.6. Продуценты ЦГТ-аз, не относящиеся к порядку Bacillales.

1.3. Выбор продуктивного штамма для процессов получения ЦГТ-азы.

1.3.1. Источники культур.

1.3.2. Накопительные среды.

1.3.3. Дополнительный анализ выделенных штаммов.

1.4. Питательные среды для культивирования микроорганизмов-продуцентов ЦГТ-аз.

1.4.1. Источники углерода.

1.4.2. Источники азота.

1.4.3. Источники фосфора.

1.5. Физико-химические свойства бактериальных ЦГТ-аз.

1.6 Структура ЦГТ-аз.

1.7. Реакции катализируемые ЦГТ-азами.

1.7.1. Реакция циклизации.

1.7.2. Реакция диспропорционирования.

1.7.3. Реакция связывания.

1.7.4. Гидролитическая (декстринизирующая) активность.

1.7.5. Суммарная схема реакции.

1.8. Методы выделения и очистки ЦГТ-аз.

1.8.1. Ультрафильтрация.

1.8.2. Осаждение органическими растворителями.

1.8.3 .Высаливание.

1.9. Хроматографические методы очистки ЦГТ-аз.

1.9.1. Гидрофобная хроматография.

1.9.2. Ионообменная хроматография.

1.9.3. Металлохелат аффинная хроматография.

1.9.4. Аффинная хроматография. Синтез аффинных сорбентов с использованием ЦД.

1.10. Строение, свойства, методы получения ЦД и комплексов включений.

1.10.1. Строение ЦД.

1.10.2. Свойства ЦД.

1.10.3. Методы получения ЦД.

1.10.3.1. Типы субстратов для получения ЦД.

1.10.3.2. Методы предобработки субстратов.

1.10.4. Комплексы-включения с ЦД.

1.10.4.1. Получение комплексов в водных растворах ЦД.

1.11. Применение ЦД в пищевой промышленности.

ГЛАВА 2.ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ.

2.1. Объекты, материалы и методы исследований.

2.1.1. Объект исследования.

2.1.2. Питательные среды.

2.1.3. Крахмал, используемый для циклизации.

2.1.4. Ферментные препараты.

2.1.5. Ароматические вещества, используемые для получения комплексов включений с а-ЦД.

2.1.6. Препарат а-ЦД.

2.1.7. Приборы.

2.1.8. Методы.

2.1.8.1. Определение вязкости растворов крахмала.

2.1.8.2. Определение РВ по методу Шомодьи-Нельсона.

2.1.8.3. Определение декстрозного эквивалента.

2.1.8.4. Определение белка по методу Лоури.

2.1.8.5. Определение содержания влаги в образцах навесок исследуемого вещества.

2.1.8.6. Методы определения ферментативных активностей.

2.1.8.6.1. Качественное определение а-ЦГТ-азной активности методом Тильдена-Хадсона.

2.1.8.6.2. Количественный метод определения активности а-ЦГТ-азы.

2.1.8.6.3. Определение амилолитической активности фотоколориметрическим методом.

2.1.8.6.4. Измерение активности р-ЦГТ-азы фенолфталеиновым методом.

2.1.8.6.5. Определение протеолитической активности (модифицированный метод Ансона).

2.1.8.7. Концентрирование культуральной жидкости методом ультрафильтрации.

2.1.8.8. Осаждение ферментов органическими растворителями.

2.1.8.9 Получение лиофилизированных ферментных препаратов.

2.1.8.10. Электрофорез.

2.1.8.10.1. Изучение степени чистоты фермента с помощью диск-электрофореза.

2.1.8.11. Диализ.

2.1.8.12. Методы определения физико-химических параметров а-ЦГТ-азы.

2.1.8.12.1. Определение рН-стабильности а-ЦГТ-азы.

2.1.8.12.2. Определение термостабильности а-ЦГТ-азы.

2.1.8.12.3. Определение рН - оптимумов действия а-ЦГТ-азы.

2.1.8.12.4. Определение температурного оптимума действия а-ЦГТ-азы.

2.1.8.12.5. Определение влияния ЭДТА и ионов металлов на активность а-ЦГТ-азы.

2.1.8.12.6. Определение аминокислотного состава белка.

2.1.8.13. Хроматографические методы очистки а-ЦГТ-азы.

2.1.8.13.1. Гидрофобная хроматография.

2.1.8.13.2. Синтез аффинных сорбентов а-ЦД - сефароза 4В.

2.1.8.13.3. Аффинная хроматография а-ЦГТ-азы.

2.1.8.14. Определение ЦД методом высокоэффективной жидкостной хроматографии.!.

2.1.9. Оптимизация состава питательной среды с использованием метода аддитивно-решетчатого математического описания объекта.:.

2.1.10. Рецептура кондитерских изделий (конфеты «Помадка сахарная» и «Помадка сливочная»), приготовленных с добавлением комплексов включений.

2.2. Результаты исследований и их обсуждение.

2.2.1 Скрининг ЦГТ-активных культур микроорганизмов из природных мест обитания.

2.2.2. Исследование фенотипических признаков бактериального штамма 1024.

2.2.3. Филогенетические особенности штамма 1024.

2.2.4. Питательные среды, оптимальные для культивирования, поддержания и хранения микроорганизма Paenibacillus macerans 1024.

2.2.4.1 .Хранение и поддержание культуры Paenibacillus macerans 1024.

2.2.4.2. Выращивание культуры Paenibacillus macerans 1024 на жидких питательных средах.

2.2.4.3. Изучение влияния рН исходной питательной среды на биосинтез а-ЦГТ-азы бактериями Paenibacillus macerans 1024.

2.2.4.4. Разработка способа получения посевного материала.

2.2.4.5. Изучение динамики биосинтеза фермента а-ЦГТ-азы бактериями Paenibacillus macerans 1024 на оптимизированной по составу питательной среде.

2.2.5. Определение физико-химических свойств неочищенной а-ЦГТ-азы Paenibacillus macerans 1024.

2.2.5.1.Определение рН-стабильности а-ЦГТ-азы Paenibacillus macerans

1024.

2.2.5.2.Определение рН-оптимума а-ЦГТ-азы Paenibacillus macerans

1024.

2.2.5.3.Определение температурного оптимума действия а-ЦГТ-азы

Paenibacillus sp. 1024.

2.2.5.4. Определение температурной стабильности а-ЦГТ-азы Paenibacillus macerans 1024.

2.2.6. Разработка технологии получения ферментного препарата а-ЦГТ-азы Г20Х из культуральной жидкости продуцента Paenibacillus macerans 1АМБ.

2.2.6.1.Подбор условий удаления балластных веществ из культуральной жидкости Paenibacillus macerans 1АМБ.

2.2.6.2.Разработка условий ультрафильтрации для очистки и концентрирования культуральной жидкости Paenibacillus macerans 1АМБ.

2.2.6.2.1 .Подбор мембраны для проведения процесса ультрафильтрации культуральной жидкости.

2.2.6.2.2. Влияние рабочего давления на процесс ультрафильтрации культуральной жидкости Paenibacillus macerans 1АМБ.

2.2.6.2.3. Влияние степени концентрирования раствора а-ЦГТ-азы Paenibacillus macerans 1АМБ на процесс ультрафильтрации.

2.2.6.3. Разработка условий получения осажденного ФП а-ЦГТ-азы Paenibacillus macerans 1АМБ.

2.2.6.3.1.Исследование влияния концентраций различных органических растворителей на выход препарата а-ЦГТ-азы Paenibacillus macerans 1АМБ.

2.2.6.3.2. Влияние различных концентраций этанола (об%) на выход препарата а-ЦГТ-азы из УК.

2.2.6.3.3. Влияние рН на осаждение а-ЦГТ-азы из УК культуральной жидкости Paenibacillus macerans 1АМБ.

2.2.6.4. Лиофилизация препарата а-ЦГТ-азы.

2.2.6.5. Исследование физико-химических характеристик ФП а-ЦГТ-азы Г20Х.

2.2.6.5.1 Г20Х.

2.2.6.5.2 Г20Х.

2.2.6.5.

Определение рН-оптимума действия препарата а-ЦГТ-азы

Определение рН-стабильности препарата а-ЦГТ-азы

Определение температурного оптимума действия препарата а-ЦГТ-азы Г20Х.

2.2.6.5.4. Определение термостабильности препарата а-ЦГТ-азы Г20Х.

2.2.6.6.Изучение динамики изменения а-ЦГТ-азной активности в процессе биоконверсии крахмала в а-ЦД.

2.2.6.7. Анализ микрофлоры ФП а-ЦГТ-азы Г20Х.

2.2.7. Разработка хроматографических приемов очистки а-ЦГТ-азы.

2.2.7.1. Влияние ионов металлов и этилендиаминтетраацетата на активность а-ЦГТ-азы Paenibacillus macerans 1АМБ.

2.2.7.2. Очистка а-ЦГТ-азы Paenibacillus macerans 1АМБ с использованием гидрофобной хроматографии.

2.2.7.3. Очистка а-ЦГТ-азы с использованием аффинной хроматографии.

2.2.7.4 Изучение свойств а-ЩТ-азыPaenibacillus macerans 1АМБ.

2.2.7.4.1. Определение молекулярной массы фермента.

2.2.7.4.2. Определение аминокислотного состава белка высокоочищенного препарата а-ЦГТ-азы.

2.2.8. Разработка условий ферментативной конверсии крахмала вальфа-ЦД.

2.2.8.1. Исследование поведения 2% растворов крахмала различного типа в процессе термообработки.

2.2.8.2. Определение выхода а-ЦЦ из различных видов крахмалов под действием а-ЦГТ-азы Paenibacillus macerans 1АМБ.

2.2.8.3. Исследование поведения картофельных крахмалов различных марок в процессе термообработки.

2.2.8.4.Выбор метода разжижения для приготовления концентрированных растворов картофельного крахмала.

2.2.8.4.1. Химический гидролиз крахмала.

2.2.8.4.2. Предобработка крахмала ультразвуком.

2.2.8.4.3. Ферментативная предобработка крахмала в биотехнологии ЦД.

2.2.8.4.3.1.Предобработка крахмала ферментными препаратами а-амилаз.

2.2.8.4.3.2. Предобработка крахмала солодовой вытяжкой.

2.2.8.4.3.3. Предобработка крахмала а-ЦГТ-азами.

2.2.8.5.Определение выхода а-ЦД из картофельного крахмала, предобработанного различными методами под действием а-ЦГТ-азы Paenibacillus macerans 1АМБ.

2.2.8.6. Интенсификация процесса получения ЦД с использованием комплексной предобработки крахмала.

2.2.8.6.1. Последовательная предобработка крахмального клейстера УЗ и а-ЦГТ-азами {Paenibacillus macerans 1024 и Paenibacillus macerans 1АМБ).

2.2.8.7. Лабораторная двухступенчатая схема получения а-ЦД с использованием УЗ и а-ЦГТ-азы Г10Х Paenibacillus macerans 1024 для предобработки крахмального клейстера и а-ЦГТ-азы Г20Х Paenibacillus macerans 1АМБ для циклизации.

2.2.9. Получение комплексов включений ароматических веществ с а-ЦД.

2.2.9.1 Получение комплекса включения а-ЦД с - кристаллическим ванилином.

2.2.9.2 Получение комплекса включения а-ЦД с эфирным маслом апельсина.

2.2.10. Апробация комплексов включений ароматообразователей с а-ЦД в технологии помадных конфет.

2.2.10.1.Приготовление кондитерских изделий по традиционной технологии с применением комплексов включений.

2.2.10.2. Характеристика кондитерских изделий при хранении.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Совершенствование биотехнологий высокоочищенной α-циклодекстринглюканотрансферазы и α-циклодекстринов на основе новых штаммов рода Paenibacillus»

Актуальность темы.

Циклодекстрины (ЦД) относятся к классу углеводов, точнее олигосахаридов, получаемых ферментативным путем из крахмала. Являясь представителями одного гомологического ряда, они различаются количеством звеньев глюкозы в макроциклах, и обозначаются буквами греческого алфавита -а, (3, у, 5 и т.д. в сторону увеличения длины кольца.

Для биохимической трансформации крахмала в ЦД используется фермент, циклодекстринглюканотрансфераза (ЦГТ-аза), относящийся к подклассу микробных трансфераз (К.Ф.2.4.1.19), а именно, к циклизующим трансферазам, осуществляющим реакцию переноса и присоединения остатков Сахаров на -ОН группы других Сахаров.

Молекулы ЦД имеют гидрофильную внешнюю поверхность (обусловливающую хорошую растворимость циклических олигосахаридов в воде) и сквозную гидрофобную полость, по своим размерам сопоставимую с величиной многих органических и неорганических соединений. Последние, попадая в растворы ЦД, проникают в полость, остаются там, удерживаемые силами гидрофобных и других взаимодействий, и меняют свои физико-химические свойства: нерастворимые субстанции становятся растворимыми, обладающие горьким вкусом - безвкусными, пахучие - лишенными запаха, летучие - нелетучими, а нестабильные - стабильными. Вследствие уникального строения ЦД широко используются за рубежом в самых различных отраслях промышленности. В пищевой промышленности они применяются для введения в рецептуры пищевых продуктов витаминов и ароматических веществ, повышая их растворимость в воде.

Среди ведущих компаний на мировом рынке ЦД бесспорное первенство принадлежит китайским, японским (Hayashibara Biochem. Lab., Rikagaku Kenkyusho, Hako Co, Kikkoman Corp. и др.) и американским фирмам (Corn Products Сотр., СРС Intern. Inc., American Maize Techn. Inc., Genetics Inst, и др.) Наиболее дешевым продуктом является бета-ЦД промышленного производства, доступный по ценам от 7 до 25 долларов США за килограмм, а а - и у-ЦД, имеют себестоимость (и, соответственно, цену) в десятки раз более высокую.

В России производство ЦД отсутствует, поэтому, разработка научно-обоснованных, высокоэффективных биотехнологий ЦГТ-аз и ЦД является актуальной проблемой.

Решению задач получения очищенного микробного ферментного препарата а-ЦГТ-азы, разработки биотехнологии ЦД и комплексов включений на их основе посвящена данная работа.

Цели и задачи исследования.

Основные цели диссертационной работы состояли в разработке технологии ферментного препарата а-ЦГТ-азы Г20Х с использованием штамма-продуцента Paenibacillus macerans 1АМБ, изучении его свойств и интенсификации биотехнологии а-ЦД на его1 основе с последующим получением комплексов включений с ароматическими веществами. Для достижения поставленных целей решались следующие задачи:

- скрининг микроорганизмов-продуцентов ЦГТ-аз, выделенных из природных мест обитания, с целью отбора термостабильного а-ЦГТ-активного штамма. Идентификация штамма-продуцента а-ЦГТ-азы на основании изучения совокупности его культуральных, морфологических, физиолого-биохимических и филогенетических особенностей;

- подбор оптимального состава питательной среды и условий культивирования с целью накопления максимальной активности а-ЦГТ-азы;

- разработка технологии получения ферментного препарата а-ЦГТ-азы Г20Х;

- изучение свойств фермента а-ЦГТ-азы;

- интенсификация биотехнологии а-ЦД;

- получение комплексов включений а-ЦД с ароматическими веществами и апробация полученных комплексов в технологии кондитерских изделий.

Работа выполнялась в рамках государственного контракта с Федеральным Агентством по науке и инновациям от 28 марта 2005 г № 02.434.11.3007 по теме: ЖС-12.4/004 «Ферментные системы и технологии получения цикло-декстринов».

Научная новизна работы.

На основе анализа данных, полученных экспериментальным путем, выявленных зависимостей накопления а-ЦГТ-азной активности штаммом Paenibacillus macerans 1АМБ от условий культивирования, параметров выделения и очистки, разработана технология ферментного препарата а-ЦГТ-зы Г20Х. На основании полученного путем скрининга нового штамма, продуцента термостабильной а-ЦГТ-азы, и экспериментально обоснованных зависимостей выхода а-ЦД от способов предварительной обработки крахмала, усовершенствована биотехнология получения а-ЦД. В результате экспериментально выявленных условий включения веществ в полость а-ЦД,, получены комплексы а-ЦД с ароматическими веществами.

Для экспериментального и теоретического обоснования путей создания биотехнологий а-ЦГТ-азы Г20Х, а-ЦД и получения комплексов включений на их основе, было произведено следующее:

- Проведен скрининг микроорганизмов, выделенных из различных видов почв, и получен новый термостабильный (topt = 65°С) штамм продуцент с о максимальной а-ЦГТ-азной активностью 37,0 едЦгА/см .

- На основании изучения совокупности морфологических, культуральных, физиолого-биохимических и филогенетических характеристик исследуемой культуры, новый галофильный штамм, продуцирующий а-ЦГТ-азу, идентифицирован как Paenibacillus macerans 1024.

- В результате изучения физиолого-биохимических особенностей штамма Paenibacillus macerans 1024 определены: оптимальный состав питательной среды и условия культивирования для максимального накопления в культуральной жидкости а-ЦГТ-азы.

- На основании определенных ранее зависимостей накопления а-ЦГТ-азы Paenibacillus macerans 1АМБ в культуральной жидкости и выявления условий сохранения ее активности от параметров всех процессов разработана технологическая схема получения ферментного препарата а-ЦГТ-азы степени очистки Г20Х.

- Изучены свойства а-ЦГТ-азы (термостабильность, рН-стабильность, температурный и рН-оптимумы действия, аминокислотный состав белка, его молекулярная масса).

- В результате изучения поведения различных видов крахмалов в процессе обработки химическими, физическими и ферментативными методами усовершенствована биотехнология а-ЦЦ.

- На основании установленных параметров процессов включения различных веществ в полость а-ЦД разработаны условия получения комплексов включений а-ЦД с кристаллическим ванилином и эфирным маслом апельсина и их применения в технологии кондитерских изделий.

Практическая значимость и реализация результатов работы.

Расширена лабораторная коллекция кафедры «Биотехнология» МГУПП, за счет новых микроорганизмов секретирующих а-, р- и у-специфичные ЦГТ-азы. Выделен новый термостабильный штамм продуцент а-ЦГТ-азы Paenibacillus macerans 1024. Для нового штамма оптимизированы условия процесса культивирования. Разработаны Лабораторный регламент получения а-ЦГТ-азы Г10Х и Технические условия на ферментный препарат а-ЦГТ-азу Г10Х. Осуществлена наработка препаратов а-ЦГТ-аз со степенью очистки 10Х в условиях опытного производства НТЦ «Лекбиотех». Полученные результаты подтверждены актом НТЦ «Лекбиотех».

Разработана технология получения, ферментного препарата а-ЦГТ-азы Г20Х с использованием ранее выделенного штамма Paenibacillus macerans 1АМБ. Разработаны Лабораторный регламент получения а-ЦГТ-азы Г20Х и Технические условия на ферментный препарат а-ЦГТ-азу Г20Х. Осуществлена наработка препаратов а-ЦГТ-аз со степенью очистки 20Х в условиях опытных производств НТЦ «Лекбиотех» и ОАО «Биохиммаш». Полученные результаты подтверждены актами НТЦ «Лекбиотех» и ОАО «Биохиммаш».

Усовершенствована биотехнология а-ЦД. Разработаны Технические условия на а-ЦД. Получена опытная партия препарата а-ЦД в условиях опытного производства НТЦ «Лекбиотех» (результаты подтверждены актом).

Разработаны Технические условия на комплексы включения а-ЦД с кристаллическим ванилином и эфирным маслом апельсина. Комплексы включения успешно прошли апробацию при изготовлении опытных партий кондитерских изделий на кафедре «Технология кондитерского производства» МГУПП. Полученные результаты подтверждены актом о приготовлении кондитерских изделий с добавлением в рецептуры комплексов включений.

Штамм бактерий Paenibacillus macerans 1АМБ - продуцент а-ЦГТ-азы, защищен патентом РФ № 2303062.

Проведен расчет экономической эффективности разработанных технологий а-ЦГТ-азы Г20Х и а-ЦД, который показал, что оптовая цена ферментного препарата находится на уровне мировых рыночных цен и1 составляет 1039,1 рублей за 1 кг. Цена а-ЦД при этом составила 656,6 рублей за 1 кг.

Апробация работы.

Основные положения работы докладывались на Российских и международных конференциях и симпозиумах: Всероссийской научно-технической выставке-конференции «Высокоэффективные пищевые технологии, методы и средства для их реализации» (Москва, 2005); на Третьем международном симпозиуме «Микробные биокатализаторы и перспективы развития ферментных технологий в перерабатывающих отраслях АПК» (Москва, 2006); V юбилейной школе-конференции с международным участием «Высокоэффективные пищевые технологии, методы и средства для их реализации» (Москва, 2007); на Международной научно-практической конференции «Биотехнология. Вода и пищевые продукты» в рамках московского международного конгресса «Биотехнология: состояние и перспективы развития» (Москва, 2008).

Публикации.

По материалам диссертации опубликовано 13 работ, в том числе 1 патент РФ, где отражены основные положения диссертации.

Структура и объем диссертации.

Диссертация состоит из введения, обзора литературы, экспериментальной части, выводов, библиографического списка, включающего 208 наименований, 13 приложений. Работа изложена на 221 странице компьютерного текста, включает 56 рисунков и 42 таблицы.

Заключение диссертации по теме «Технология чая, табака и биологически активных веществ и субтропических культур», Кузнецова, Оксана Владимировна

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ:

1. Проведенный скрининг микроорганизмов, выделенных из природных источников, позволил отобрать новый термостабильный штамм 1024 с а-ЦГТ-азной активностью 37,0 едЦгА/см .

2. Изучение совокупности морфологических, культуральных, физиолого-биохимических характеристик исследуемого микроорганизма, подтвердило отношение галофильного бактериального штамма-продуцента а-ЦГТ-азы, к роду Paenibacillus виду macerans.

3. Проведен сиквенс 16S ribosomal RNA и построено филогенетическое дерево, с точностью 97% подтверждающее идентификацию бактериального штамма 1024 как Paenibacillus macerans 1024. :

4. На основании анализа экспериментальных данных сконструирован оптимальный состав питательной среды и подобраны условия культивирования, обеспечивающие максимальное накопление фермента термостабильной а-ЦГТ-азы штаммом Paenibacillus macerans 1024 в лабораторных условиях.

5. Разработаны оптимальные условия выделения и очистки а-ЦГТ-азы Paenibacillus macerans 1АМБ: методом ультрафильтрации с использованием мембраны УПМ-20 фирмы «Владипор»; осаждением этанолом (соотношение объемов 75% этанол: УК = 4:1).

6. На основе разработанного Лабораторного регламента проведена наработка препаратов а-ЦГТ-азы Г10Х штамма, Paenibacillus macerans 1024 с активностью 2550 едЦгА/г (оптимум действия препарата: рН 6,2; t = 65° С) в условиях опытного производства НТЦ «Лекбиотех». Полученные результаты подтверждены актом НТЦ «Лекбиотех». Составлен проект Технических условий на ФП а-ЦГТ-аза Г10Х штамма Paenibacillus macerans 1024.

7. На основе разработанного Лабораторного регламента проведена наработка препаратов а-ЦГТ-азы Г20Х штамма Paenibacillus macerans 1АМБ с активностью 3040 едЦгА/г (оптимум действия препарата: рН 6,2; t 40° С) в условиях опытных производств НТЦ «Лекбиотех» и ОАО «Биохиммаш». Полученные результаты подтверждены актами НТЦ «Лекбиотех» и ОАО «Биохиммаш». Составлен проект Технических условий на ФП а-ЦГТ-аза Г20Х штамма Paenibacillus macerans 1АМБ.

8. Изучены свойства фермента а-ЦГТ-азы Paenibacillus macerans 1АМБ (термо- и рН-стабильность, рН- и температурный оптимумы действия), определены аминокислотный состав и молекулярная масса фермента'а-ЦГТ-азы (36 к Да).

9. Опытным путем определены оптимальные условия ферментативной биотрансформации крахмала в а-ЦД, обеспечивающие увеличение выхода целевого продукта на 50-60% по сравнению с непредобработанным сырьем (в качестве субстрата целесообразно использовать раствор крахмального клейстера, предобработанный последовательно с помощью УЗ и а-ЦГТ-азы Paenibacillus macerans 1024; синтез а-ЦД следует вести с использованием а-ЦГТ-азы Paenibacillus macerans 1АМБ). Составлены Технические условия на а-ЦД, произведена наработка препарата а-ЦД в условиях опытного производства НТЦ «Лекбиотех» (полученные результаты подтверждены актом).

10. Разработаны условия, согласно которым наработаны комплексы включения а-ЦД с кристаллическим ванилином и эфирным маслом апельсина, успешно прошедшие апробацию на кафедре «Технология кондитерского производства» МГУ 1111 при изготовлении помадных конфет. Полученные результаты подтверждены актом.

Список литературы диссертационного исследования кандидат технических наук Кузнецова, Оксана Владимировна, 2008 год

1. РОСТ 12575-86 Сахар. Методы определения редуцирующих веществ.

2. ГОСТ 16599-71 Ванилин. Технические условия.

3. ГОСТ 20264.1-89 Препараты ферментные. Методы определения органолептических, физико-химических и микробиологических показателей.

4. ГОСТ 4570-93 Конфеты. Общие технические условия.

5. Абелян В.А. Циклодекстрины: Получение и применение.- Ереван: Изд. Дом «Ван-Арьян», 2001.- 519 с.

6. Авторское свидетельство SU 1738852 А1. Штамм бактерий Bacillus sp. -продуцент бета-циклодекстринтрансферазы. Усанов Н.Г., Логинов О.Н., Мелентьев А.И., 1990.

7. Авторское свидетельство SU 18143313. Штамм бактерий Bacillus stearothermophilus продуцент циклодекстрингликозилтрансферазы и способ получения альфа-циклодекстрина. Абелян В.А. и др., 1989.

8. Авторское свидетельство РФ 2244742. Метод выделения и селекции микроорганизмов-продуцентов циклодекстринглюканотрансфераз, штамм продуцент Bacillus circulans В-65, 2005.

9. Бирюков В.В., Кантере В.М. Оптимизация периодических процессов микробиологического синтеза. М.: Наука, 1985.- 196 с.

10. Болдырев А.А. Матриксная функция биологических мембран.// Соросовский образовательный журнал, 2001, №7, с. 2-8.

11. П.Бутова С.Н., Типисева И.А., Эль-Регистан Г.И. Теоретические основы биотехнологии. Биохимические основы синтеза биологически активных веществ. М.:Элевар, 2003. - 554с.

12. Вокк Р. А., Пейпман Э.М. Биосинтез и применение циклодекстринглюканотрансферазы.//В. кн.: Биосинтез ферментовмикроорганизмами. Тезисы докладов 4 всесоюзной конференции.-Ташкент, 1988.- с. 187-188.

13. Волкова Д. А. Получение и изучение свойств высокоочищенной циклодекстринглюканотрансферазы из Bacillus sp.1070,модифицированных Р-циклодекстринов и комплексов включения на их основе.-Дисс.1санд.тех.наук.-М.:МГУПП, 2000.-100с.

14. М.Глик Б., Пастернак Дж. Молекулярная биотехнология. Принципы и применения. М. :МИР, 2002. - 590с.

15. Градова Н.Б., Бабусенко Е.С., Горнова И.Б. Лабораторный практикум по общей микробиологии. -М.:ДеЛи принт, 2004. 144с.

16. Грачев Ю.П., Плаксин Ю.М. Математические методы планиерования экспериментов. -М.: ДеЛи принт, 2005.- 296 с.

17. Грачева И.М., Грачев Ю.П., Мосичев М.С. и др. Лабораторный практикум по технологии ферментных препаратов.-М.:Легкая и пищевая промышленность, 1982.-240с.

18. Грачева И.М., Кривова А.Ю. Технология ферментных препаратов.-М.: Элевар, 2000.-512 с.

19. Громов Б.В. Поведение бактерий.//Соросовский образовательный журнал ,1997, №6.- с. 28-32.

20. Гусев М.В., Минеева Л.А. Микробиология. Учебник для студ. Биол. специальностей вузов. 4-е изд., стер. - М.:Издательский центр «Академия», 2003. - 464с.

21. Дерябин Д.Г. Функциональная морфология клетки. Учебное пособие. — М.:Книжный дом «Университет», 2005. 320с.

22. Димитриади Г.Г. О числе пар объектов, связанных отношением Парето-доминирования //Институт системного анализа РАН. Электронный журнал «Исследовано в России», 2000.

23. Добровольская Т.Г. Структура бактериальных сообществ почв.- М.: Книжный дом «Университет», 2002.

24. Досон Р., Элиот Д. и др. Справочник биохимика. -М.:МИР; 1991. 543с.

25. Иванова Л.А., Войно Л1И. Методические рекомендации к проведению лабораторных работ по технологии белковых препаратов, аминокислот и липидов.- М.: Издательский комплекс МГУ1111, 1985. 42 с.

26. Иванова Л.А., Войно Л.И. и др. Методические рекомендации к проведению лабораторных работ по дисциплине «Технология биоконверсии растительного сырья». — М.гИздательский комплекс МГУПП, 2002. -66с.

27. Иванова Л.А. и др. Ферментные системы и технологии получения циклодекстринов.//В мире науки, 2006, №11, с. 37-41.

28. Кислухина О.В. Ферменты в производстве пищи и кормов. — М.:ДеЛи принт, 2002. — 336с.

29. Кнорре Д.Г., Мызина С.Д. Биологическая химия. М.:Высшая школа. 2000. - 479с.

30. Комов В.П., Шведова В.Н. Биохимия: Учебник для ВУЗов. — М.:Дрофа,2004. 640с.

31. Компанцева Е.В., Гаврилин М.В., Ботезат-Белый Ю.К. и др. Исследование взаимодействия циклодекстринов с кортексонолом.//Хим.-фарм.,1990, т.2, с.81-82. ,

32. Кошелева Т. В. Разработка технологии ферментативного синтеза циклодекстринов. -Дисс. канд. тех. наук.- М., 1991. 160 с.

33. Крамер Ф. Соединения включения.//пер. с немецкого. -М.: Издательство иностранной литературы, 1958.- 169с.

34. Купянская В.Н. Получение и исследование соединения включения облепихового масла с бета-циклодекстрином.//Вестник ВГУ.Серия: Химия. Биология. Фармация. 2004, №2, с.222-224.

35. Кушакова Е.Е. Разработка технологии высокоочищенной цикло-декстринглюканотрансферазы из Bacillus macerans 506.- Дисс. канд. тех. Наук.-М.:МГУПП, 1990.-181 с.

36. Логинов О. Н. Физиолого-биохимические свойства представителей вида Bacillus macerans продуцентов циклодекстринглюканотрансфераз. Дисс. канд. биол. наук.- Киев, 1991.- 106 с.

37. Лопатин С.А., Варламов В.П., Рогожин С.В. Хроматографическое изучение участков связывания микробных рибонуклеаз с хелатированными ионами металлов.//Биотехнология, 1989, Т. 5(2).- с 183188.

38. Лопатин С.А., Варламов В.П., Даванков В.А. Лигандообменная хроматография белков и ферментов.//Биоорганическая химия, 1990, Т. 16(6).-с 725-750.

39. Мосичев М.С., Складнев А.А., Котов В.Б. Общая технология микробиологических производств. — М. .'Легкая пищевая промышленность, 1982. 264с.

40. Ноздрина В.А. Методические указания к выполнению курсового проекта на тему «Основные вопросы организации производства и планирования на предприятиях микробиологической промышленности» М: Издательский комплекс МГУПП, 1998.-18 с.

41. Определитель бактерий Берджи./ под ред. Дж. Хоулта и др. 9-е изд. В 2-х томах. -М.: МИР, 1997.48.0стерман Л.А. Хроматография> белков и нуклеиновых кислот. М.: Наука, 1985.-536 с.

42. Панова И.Г., Герасимов В.И., Топчиева И.Н. Структурообразование в системе а-циклодекстрин-полиэтиленоксид-вода.//ВМС сер.Б, Т.40(10), 1998, с. 1681-1686.

43. Папель К.Э., Дихтярев С.И., Сугробова Н.П. Особенности получения ЦД и образование комплексов включения. В кн.: Итоги науки и техники, сер. Микробиология. Циклодекстрины.- М., 1988, 21, с. 74-12751 .Патент РФ № 2244742, кл С 12 N 1/20, 2000.

44. Патент США № 6184001. Thermostable cyclodextrin glycosyl transferase and processes using it, 2001.

45. Патент США № 6472192. Cyclodextrin glycosyl transferases for producing gamma-cyclodextrin, 2002.

46. Патент США № 6960461. Gene coding for cyclodextrin glucanotransferase chiefly producing gamma -cyclodextrin and use thereof, 2005.

47. Патент США № 6924136. Cyclodextrin glucanotransferase and its method of manufacture, 2005.

48. Патент США № 6780624 B2. Glycosyl transferases for biosynthesis of oligosacchari-des, and genes encoding them, 2004.

49. Патент США № 6777215 B2. Cyclomaltodextrin glucano-transferase variants, 2004.

50. Патент США № 6570009. Region-selective method for preparing cyclodextrin C-6 monosulphonyl derivatives, 2003.

51. Патент США № 6482622. Amylolytic enzyme variants, 2002.

52. Патент ВОИС №01/90335. Nouvelle cyclodextrine glucanotransferase,tprocede de production de celle-ciet procede de production de cyclodextrine au moyen de cette enzyme, 2001.

53. Патент ВОИС №03/106502. Procede de production de dextrines au mouen d'enzymes, 2003.

54. Плохов А. Ю. Разработка биокаталитических процессов получения у-аминомасляной кислоты и (3-циклодекстрина. -Дисс. канд. тех. наук.-М., 1997.-111 с.

55. Полыгалина Г.В., Чередниченко B.C., Римарева JI.B. Определение активности ферментов. Справочник. М.:ДеЛи принт, 2003. - 375с.

56. Пруцакова Е.А., Терехова Е.Я., Усанов Н.Г. Измерение ферментативной активности ЦГТ-азы, К.Ф. 2.4.1.19.// Изучение и рациональное использование природных ресурсов. Тезисы докладов научной конференции.-Уфа, 1991.-е.108.

57. Райкис Б.Н., Пожарская В.О., Казиев А.Х. Общая микробиология свирусологией и иммунологией (в графическом изображении). Учебное пособие. М.:Тонада - X, 2002. - 352с.

58. Рис Э., Стернберг М. Введение в молекулярную биологию. М.:МИР, 2002. - 142с.

59. Романов А.С. Циклодекстрины — полифункциональные пищевые добавки. Кемерово :КТИПП, 1999.-147с.

60. Слюсаренко Т.П. «Лабораторный практикум по микробиологии пищевых прозводств». -М.: Легкая и пищевая пром., 1984.-208с.

61. Смирнова И.В., Кречетникова А.Н. Применение ультразвука в спиртовой1 промышленности.//Производство спирта и ликероводочных изделий.№2, 2004:- с.37-38.

62. Сто лет хроматографии.-М.:Наука, 2003.-744с.

63. Строева С.С. Выделение продуцента альфа-специфичной циклодекстринглюканотрансферазы из природных источников и разработка технологии ферментного препарата на его основе. Дис.канд. тех. наук. — М.: МГУПП, 2006.- 218 с. '

64. С.Н.Сычев, В.А.Гаврилина, Р.С.Музалевская. Высокоэффективная жидкостная хроматография как метод определения фальсификации и безопасности продукции. -М.:Де Ли принт, 2005.-148с.

65. Терехова Е. Я. Выделение продуцентов бета-специфичной циклодекстринглюканотрансферазы и получение ферментных препаратов на их основе. -Дисс. канд. тех. наук.-Уфа, 1999. 110 с.

66. Теппер Е.З., Шильникова В.К., Переверзева Г.И. Практикум по микробиологии: Учебное пособие для ВУЗов. М.:Дрофа, 2004. - 256с.

67. Тырсин Ю.А., Иванова Л.А., Кривова А.Ю. Методические указания к выполнению лабораторных работ по курсу «Специальная биохимия».-М.: Издательский комплекс МГУПП, 1993.- 66 с.

68. Усанов Н.Г., Гильванова Е.А., Елизарьев Е.А., Мелентьев А.И. Новыйциклодекстрин-продуцирующий, штамм Paenibacillus campinasensis IB-417.//Ферменты микроорганизмов: структура, функция, применение:f

69. Сборник докладов XIII международ, конф. 4-8 апреля, 2005, Казань. — с.I87.88.

70. Усанов Н.Г., Логинов О.Н., Пруцакова Е.А., Терехова Е.Я. Получение бета-ЦД из картофельного крахмала./ Тезисы докладов Всесоюзной конференции. -Черновцы, 1991-т. 1-е. 122.а

71. Усанов Н.Г., Е.А. Гильванова, П.А. Елизарьев, Е.А. Пруцакова, А.И. Мелентьев. Усовершенствованный метод фотометрического определения активности бета-циклодекстринглюканотрансферазы.// «Прикладная биохимия и микробиология», 2006.-C.21-25.

72. Усанов Н.Г. «Цикл о декстрины: биотехнология и применение» В кн.: «Биотехнология биологически активных веществ»./Под редакцией д.б.н., проф. МГУПП И.М. Грачевой и д.т.н., проф. МГУПП Л.А. Ивановой. -М., изд. НПО «Элевар», 2006. с.89-121.

73. Фаллер Дж., Шилдс Д. Молекулярная биология клетки. М.:Бином 2003. -268с.

74. Циклодекстрины / Под ред. Егорова Н. С.- Итоги науки и техники. ВИНИТИ. Серия Микробиология. 1988-1989. - Т. 20-21.

75. Шишкова Э.А., Войно Л.И. Методические рекомендации к выполнениюсамостоятельной работы по курсовому и дипломному проектированию1 t предприятий биотехнологической' промышленности. Ч.1.-М.:

76. Издательский комплекс МГУПП,2003.- 47 с.

77. Шлегель Г. Общая микробиология. -М.:МИР, 1987. 566с.t

78. Штейнман А.А. Циклодекстрины/ ЖВХО им. Менделеева, 1985, №5.- с. 34-38.

79. Щербаков В.Г. Биохимия: Учебник для ВУЗов. СП.б.:ГИОРД, 2003. -438с.

80. Borem Aluizio, Santos R. Fabricio, Bowen E. David. Understanding Biotechnology.//Prentice Hall PTR; US Ed edition. 2003. 220p.90:Anslyn V. Eric, Dennis A. Dougherty. Modern Physical Organic Chemistry.//University Science, 2005. ISBN 1-89138-931-9.

81. Bains William Biotechnology from A to Z.//Oxford University Press, USA; 3 edition. 2004. 424p.

82. Basic Biotechnology/ Colin Ratledge (Editor), Bjorn. Kristiansen (Editor)// Cambridge University Press, 2006.

83. Bergey's Manual of Systematic Bacteriology. Vol. 1: The Archaea and the Deeply Branching and Phototrophic Bacteria. / George M. Garrity (Editor), David R. Boone (Editor)/ Springer; 2 edition, 2001, 721 p.

84. Bergey's Manual of Systematic Bacteriology, Vol. 2 (Parts А, В & С; Three-Volume Set) / George M. Garrity (Editor)/ Springer; 2 edition, 2005, 2816p.

85. Biotechnology The Science and the Business. / Derek G. Springham (Editor), Vivian Moses (Editor), Ronald E. Cape (Editor)/ CRC, 1999.

86. Biwer A., Antranikian G., Heinzle E. Mini-Review Enzymatic production of cyclodextrins.//Appl. Microbiol. Biotechnol., 2002 Vol.59 p.609-617.

87. Bovetto L. J., Backer D. P., Villette J. R. et, al. Cyclomaltodextrin Glycosyltransferase from Bacillus circulans E 192. // Biotechnol. Appl. Biochem, 1992, V. 15, P. 48-58.

88. Bron, S., Meijer, W., Holsappel, S., Haima, P. Plasmid instability and molecular cloning kbBacillus subtilis.//Res.Microbiol. , 1992, V.142, p.875-883.

89. Buschmann. H.-J., Knittel D., Schollmeyer. E. New Textile Applications of Cyclodextrins.//Journal of Inclusion Phenomena and Macrocyclic Chemistry, 2001, Vol.40 p. 169-172.

90. Copeland R.A. Enzymes: A Practical Introduction to Structure, Mechanism, and Data Analysis. //Wiley-VCH, 2000, ISBN 0-47135-929-7.

91. Cyclodextrins and Their Complexes: Chemistry, Analytical Methods, Applications. / Helena Dodziuk (Editor)/ John Wiley & Sons, 2006, ISBN 352731-280-3.

92. De Pinto J. A, Campbell L. L. Purification and properties of the amylase of Bacillus macerans. // Biochemistry, 1968, V. 7, P. 114-120.

93. Deb. K. Multi-Objective Optimization Using Evolutionary Algorithms./ John Wiley, 2001.

94. Easton J. Christopher, Lincoln F. Stephen. Modified Cyclodextrins: Scaffolds and Templates for Supramolecular Chemistry.// World Scientific Publishing Company, 1999, ISBN 1-86094-144-3.

95. Egghe L., Rousseau R. A. Proposal to Define a Core of a Scientific Subject: A Definition Using Concentration and Fuzzy Sets. // Scientometrics. Vol'.54, No.l ,2002.-P.51-62.

96. Ehrlich, S.D. Replication and expression from Staphylococcus aureus in Bacillus subtilis. //Proc. Natl. Acad. Sci. USA74, 1977.-p. 1680-1682.

97. Ehrlich, S.D., Janniere L., Gruss A. Plasmid replication and structural stability in Bacillus subtilis. // Res. Microbiol., 1992, V.142,p. 869-873.

98. Felsenstein J. An alternating least squares approach to inferring phylogenies from pairwisedistances. //Syst Biol., 1998, V. 46, p. 101-111.

99. Fijiwara S., Kakihara H., Sakagichi K. et. al. Analysis mutation in cyclodextrin glucanotransferase form Bacillus stearothermophilus which affect cyclization characteristics and thermostability. //J. Bacteriol. 1992, V. 174, P. 7478-7481.

100. Fogarty W. M. Microbial amylases. //Microbial Enzymes and Biotechnology /Applied Science Publishers, Essex, U.K., 1983, P. 1-92.

101. Fromming K., Szejtli J. Cyclodextrins in Pharmacy (Topics in Inclusion Science) / Springer, 2006, ISBN 0-79232-139-1.

102. Fuwa, H.//J. Biochem (Tokyo), 1954. V.41. - P. 5.

103. Garces J.A., Gavin R.H. Using an inverse PCR strategy to clone large, contiguous genomic DNA fragments. //Methods Mol. Biol., 2001, V.161, p.3-8.

104. Glick Bernard R., Pasternak Jack J. Molecular Biotechnology: Principles and Applications of Recombinant DNA.//ASM Press; 3rd edition, 2003. 760p.

105. Gryczan T.J., Dubnau D. Construction and properties of chimeric plasmids in Bacillus subtilis. //Proc. Natl. Acad. Sci. USA 75, 1978.-p. 1428-1432.

106. Guerout-Fleury M., Frandsen N., Stragier P. Plasmids for ectopic integration' in Bacillus subtilis. //Gene, 1996, v. 180; p.57—61.

107. Jamuna R., Saswathi N., Sheela R. et. al. Synthesis of cyclodextrin glycosyl transferase by Bacillus cereus for the production of cyclodextrins. // Appl. Biocem Biotechnol. 1993, V. 43, P. 163-176.

108. Janecek S. Tracing the evolutionary lineages among a- amylases and cyclodextrin glycosytransferases: the question of so-called 'intermediary' enzymes.//Biologia (Bratislava), 1995, 50: 515-522.

109. Janecek S. a-Amylase family: molecular biology and evolution.// Prog. Biophys. Mol. Biol., 1997, 67: 67-97.

110. Janecek S. Structural features and evolutionary relationships in the a-amylase family. /Glycoenzymes, 2000, p. 19-54.

111. Jorgensen S., Tangney M., Starnes RL. Cloning and nucleotide sequence of a thermostable cyclodextrin glycosyltransferase gene from Thermoanaerobacter sp. ATCC 53627 and its expression in Escherichia coli.// Biotechnol. Lett'. , 1997, 19: 1027-1030.

112. Hall B. Phylogenetic Trees Made Easy: A How-To Manual, Second Edition.//Sinauer Associates, Inc., 2004, 22 lp.

113. Hennig W., Davis D., Zangerl R. Phylogenetic Systematics. University of Illinois Press; New Ed edition, 1999, 280p.

114. Horikoshi K. Enzymology and molecular genetics of cyclodextrin-forming enzymes. — In: 4th International Symposium on Cyclodextrins, Munich, 1988, p.7-17.

115. Horikoshi K., Nakamura N., Matzuzawa N., Yamamoto M. Industrial production of cyclodextrins. In: 1st International Symposium on Cyclodextrins, Budapest, 1981, p.25-39.

116. Hartl, В., Wehrl, W., Wiegert, Т., Homuth, G., Schumann, W. Development of a new integration site within the Bacillus subtilis chromosome andconstruction of compatible expression cassettes.// J. Bacterid., 2001, 183, 2696-2699.

117. Kim S.H., Ahn J., Kwak H.S., Handbook of Glycosyltransferases and Related Genes. // Springer, 2002.

118. Kitahata S., Okada S. Action of cyclodextrin glucanotransferase from Bacillus megaterium strain No 5 on starch.// Agr. Biol. Chem., 1974, v.38, N 12, p.2413-2417.

119. Kitahata S., Tsuyama N., Okada S. Purification and some properties of cyclodextrin glycanotransferase from Bacillus stearothermophillus TC-60. J. Jap. Soc. Starch Sci., 1982., v. 29, N 1, p. 7-12.

120. Kobayashi S., Kainuma K., Suzuki S. Purification and some properties of Bacillus macerans cycloamylose (cyclodextrin) glucanotransferase./ Carbohydr. Res., 1978, V. 61., N1., P. 229-238.

121. Koizumi K., Utamura Т., Kuroyanagi T. Analyses of branched cyclodextrins by high performance liquid and yhin-layer chromatography. J.Chromatogr. (1986) v.360, p.397-406.

122. Koneman Elmer W. Koneman's Color Atlas and Textbook of Diagnostic Microbiology. Lippincott Williams & Wilkins; 6th edition, 2005. 1736p.

123. Kenton S, Lai HS, Lin SP, Qian Y, Jia HG, Najar FZ, Ren Q, Zhu H, Song L, White J, Yuan X, Clifton SW, Roe В A, McLaughlin R (2001) Complete genome sequence of an Ml strain of Streptococcus pyogenes. Proc Natl Acad Sci USA 98:4658-4663.

124. Kimura К., Takano Т., Yamane K. Molecular cloning of the p-cyclodextrin synthetase gene from an alkalophilic Bacillus and its expression in Escherichia coli and Bacillus subtilis. // Appl. Microbiol. Biotechnol. 1987. - V.26, N 2. -P.149-153.

125. Kitahata S., Okada S. Action of cyclodextrin glucanotransferase from Bacillus megaterium strain No 5 on starch.// Agr. Biol. Chem., 1974, v.38, N 12, p.2413-2417.

126. Kitahata S., Tsuyama N., Okada S. Purification and some properties of cyclodextrin glycosyltransferase from strain of Bacillus species. // Agr. -Biol. Chem., 1974, v.38, N 2, p.387-393.

127. Kobayashi S., Kainuma K., Suzuki S. Purification and some properties of Bacillus macerans cycloamylose (cyclodextrin) glucanotransferase./ Carbohydr. Res., 1978, V. 61., N1., P. 229-238.

128. Kotz S., Balakrishnan N., Norman L. Johnson Continuous Multivariate Distributions, Volume 1, Models and Applications, end Edition. / Wiley, June 2000, ISBN: 0-471-18387-3.

129. Kwak H.S., Kim S.H., Kim J.H., Choi H.J., Kang J. CD's.// Arch. Pharm. Res., 27, 873-877, 2004.

130. Kwak H.S., Jung C.S., Shim S.Y., Ahn J., J. Some properties of cyclodextrin.//Agric. Food Chem., 50, 7293-7298, 2002.

131. Larichev O.I. Measurement of Differences in Preferences Expressed by a Simple Additive Rule. / in M. Katwan, J. Sprouk, J. Wallenius (Eds.) /Essays in Decision Making, Springer Verlas.- Berlin, 1997.

132. Lane A.G., Pirt S.J. Production of cyclodextrin glycosyltransferase of batch and chemostat culture of Bacillus macerans in chemically defined media. // J. Appl. Chem. Biotechnol., 1973, v.23, N 4, p.309-321.

133. Larsen K.L. et.al: Purification andchsrscterisation of cyclodextrin glycosyltransferase from Paenibacillus sp. F8// Carbohydr. Pi.es., 1998,V.310,P.211-219. ,

134. Manual of Industrial Microbiology and Biotechnology / editorsin chief, Arnold L. Demain, Julian E. Davies /ASM Press, 2001.

135. Makela J. Mauri, Korpela K. Timo, Puisto Juhani, and Laakso V. Simo Nonchromatographic cyclodextrin assays: evaluation .of sensitivity, specificity, and conversion mixture applications.// J. Agric. Food Chem. 1988/Vol. 36 pp 83-88.

136. Martin Del Valle E.M. Cyclodextrins and their uses: a review. //Process Biochemistry, 2004, v.39, p. 1033-1046.

137. Middleton, R., Hofmeister, A. New shuttle vectors for ectopic insertion of genes into Bacillus subtilis. //Plasmid, 2004.- 51, 238-245.

138. MacGregor EA, Janecek S, Svensson B' Relationship of sequence and: structure to specificity in the a-amylase family of enzymes.// Biochim. Biophys. , 2001, Acta 1546: 1-20:

139. Methods in Enzymology, Volume 358: Bacterial Pathogenesis, Part C: Identification, Regulation and Function of Virulence Factors (Methods in

140. Enzymology) / Virginia L. Clark (Editor), Patrik M. Bavoil (Editor)/ Academic Press, 2002, 527p.

141. Micro-organisms and Earth Systems (Society for General Microbiology Symposia) / Hilary Lappin-Scott (Editor), Geoff Gadd (Editor), Kirk Semple (Editor)/ Cambridge University Press, 2005, 388p.

142. Molecular Identification, Systematics, and Population Structure of Prokaryotes./Erko Stackebrandt (Editor)/ Springer; 1 edition, 2005, 320p.

143. Nakamura N., Horikoshi K. Characterization and some cultural conditions of a cyclodextrin glycosyltransferase-producing alcalophilic Bacillus species.//Agr. Biol. Chem., 1976, V. 40, N 4, P. 753-757.s

144. Nomoto M., Chen Ch.-Ch., Shen D. Purification and characterization of cyclodextrin glucanotransferase from an alkalophilic bacterium of Taiwan. // Agr. Biol. Chem., 1986, v.50, N11, p.2701-2707.

145. Nomoto M., Shew D.C., Chen S.J. et al. Cyclodextrin glucanotransferase from alkalophilic bacteria of Taiwan. // Agr. Biol. Chem., 1984, v.48, N 5, p.1337-1'338.

146. Nakamura N., Horikoshi K. Purification and properties of Cyclodextrin Glycosyltransferase of an Alkaiophilic Bacillus sp.// Agric. Biol. Chem., 1976, V/40, (5), P.145-153.

147. Nishijo J., Moriyama S., Shiota S., Chem. Pharm. Bull. (Tokio)., 51, 12531257,2003.

148. Nomoto M., Chen Ch.-Ch., Shen D. Purification and characterization of cyclodextrin glucanotransferase from an alkalophilic bacterium of Taiwan. // Agr. Biol. Chem., 1986, v.50, N 11, p.2701-2707.

149. Nomoto M., Shew D.C., Chen S.J. et al. Cyclodextrin glucanotransferase from alkalophilic bacteria of Taiwan. // Agr. Biol. Chem., 1984, v.48, N 5, p.1337-1338.

150. Penninga D., Strokopytov В., Rozeboom H. L. et al. Site-Directed

151. Mutation in Tyrosine 195 of Cyclodextrin Glycosyltransferase from Bacilluscirculans strain 251 Affect Activity and Product Specifisity. // Biochemistry.t1995, V. 34-P. 3368-3376.у

152. Penninga D, van der Veen В A, Knegtel RMA, van Hijum SAFT, Rozeboom5

153. HJ, Kalk KH, Dijkstra BW, Dijkhuizen L. The raw starch binding domain of cyclodextrin glycosyltransferasefrom Bacillus circulans strain 251.// J. Biol. Chem., 1996, 271: 32777-32784.

154. Pongswasdi P., Yagisawa M. Purification and some properties of cyclomaltodextrin glucanotransferase. // Agr. Biol. Chem., 1988, v.52, N 5, p.1099-1103.

155. Prescott Lansing M., Harley John P., Klein Donald A. Microbiology. McGraw./ZHill Science/Engineering/Math; 6 edition, 2004. 992p.

156. Proceedings of the Ninth International Symposium on Cyclodextrins, Santiago de Compostela, Spain, May 31 June 3, 1998, J.J. Torres Labandeira and J.L. Vila-Jato (Eds.). // Kluwer Academic Publishers, 1999.

157. Qi< Q., Zimmermann W. Cyclodextrin glucanotransferase: from gene to applications. // Appl. Microbiol. Biotechnol, 2005, 475-485.

158. Ramakrishna S. V., Saswathi H., Sheela et al. Evaluation of solid, slurry and submerged fermentations for the production of cyclodextrin glycosyltransferase by Bacillus cereus //Enzyme Microb, Technol., 1994, V. 16, P. 441-444.

159. Saito Y. et al.: Cyclodextrins in Chromatography. //Anal. Bioanal. Chem., 2004, v.379, p.6-7.

160. Schmiedel, D., Hillen, W., A Bacillus subtilis 168 mutant with increased xylose uptake can utilize xylose as sole carbon source./ FEMS Microbiol. Lett.,1996, 135, 175-178.

161. Schulz, A., Schwab, S., Versteeg, S., Schumann, W. The htpG gene ofi

162. Bacillus subtilis belongs to class III heat shock genes and is under negative control.//J. Bacteriol., 1997, 10, 3103-3109.

163. Schwimmer S., Garibaldi J.A. Further studies on the production, purification and properties of the Schardinger dextrintransferase of Bacillus macerans.// Cereal Chem., 1952, v.29, N 2, p.108-122.

164. Seo Т., Kajihara Т., Iijima T.//Macromol. Chem., 188, 2071-2075, 1987.

165. Shimotsu, H., Henner, D.J. Construction of a single-copy integration vector and its use in analysis of regulation of the trp operon of Bacillus subtilis.// Gene, 1986,43, 85-94.

166. Shim S.Y., Ahn J., Kwak H.S., J. Dairy Science., 86, 2767-2772, 2003.

167. Simon, D., Chopin, A. Construction of a vector plasmid family and its use formolecular cloning in Streptococcus lactis.lfQiochimiQ, 1988, 70, 559—566.i ■

168. Singh M., Sharma R., U.C. Banerjee Research review paper Biotechnological applications of cyclodextrins.//Biotechnology Advances, 2004, Vol.20 p.341-359180:Suh J., Lee S.H., Zoh K.D. (3-cyclodextrin. //J. Am. Chem. Soc., 114, 79167921, 1992.

169. Sumitra Т., Hidetoshi A., Fumitoshi H. Some pharmaceutical properties of new branched cyclodextrin 6-0-a(4-0-a-D-glucuronyl)-D-glucosil-P-CD.//Journal of Inclusion Phenomena and Macrocyclic Chemistry, 2002, 44, p. 391-394.

170. Schmid G. Cyclodextrin glycosyltransferase production: yield enhancement by overexpression of cloned genes. // Trends Biotechnol. 1989. - V.7, N 9. — P. 244-248.

171. Schwimmer, S. Evidence for the purity of Schardinger dextrinogenase.// Arch. Biochem. Biophys. 43 (1953) 108-117.

172. Sicard P., Sanies M. Biosynthesis of cyclodextrin glycosyltransferase and obtention of its enzymic reaction products. In: Cyclodextrins and Their Industrial Uses.- Paris, 1987, p.75-103.

173. Silva A.C. da, Ferro J.A., Reinach F.C., et al.Comparison of the genomes of two Xanthomonas pathogens with differing host specificities.// Nature, 2002, 417:459-463.

174. Stanbury P.F., A. Whitaker, S.J: Hall. Principles of Fermentation Technology. //Butterworth-Heinemann, 1999.

175. Svensson B. Protein* engineering in the a-amylase family: catalytic mechanism, substrate1 specificity, and stability.// Plant Mol. Biol., 1996, 25: 141-157.

176. Szejtli J. Cyclodextrins and their inclusion complexes. Akademiai Kiado. Budapest. 1982.

177. Szente L., Szejtli J. Cyclodextrins as food ingredients. Trends in Food Science & Technology (2004), vl5, p.137-142.

178. Szeitli J. Cyclodextrins in the Textile Industry.// Starch/Starke (2003) v.55 p.191-196.

179. Szeitli J. Cyclodextrin technology. //Kluwer academic publishers, 1989. 450 P

180. Tamer, Uyar. Nanostructuring polymers with cyclodextrins ~ Dissertation // ProQuest / UMI (April 1, 2006) , ISBN 0-54238-965-7.

181. Takano T, Fukuda M, Monma M, Kobayashi S, Kainuma K, Yamane К Molecular cloning, DNA nucleotide sequencing, and expression in Bacillus subtilis cells of the Bacillus macerans cyclodextrin glucanotransferase gene.// J Bacteriol, 1986, 1118- 1122.

182. Tilden E.B., Hudson C.S. The conversion of starch of crystalline dextrins byithe action of a new type of amylase separated from culture Aerobacillus macerans. //J. Am. Chem. Soc., 1939, v.61, N 9, p.2900-2902.

183. Tilden E.B., Hudson C.S. Preparation and properties of the amylases produced by Bacillus macerans and Bacillus polymixa. // J. Bacteriol., 1942, v.43, N 2, p.527-544.

184. Tonkova A. Bacterial cyclodextrin glucanotransferase.// Enzyme Microb. Technol., 1998, 22: 678-686.

185. Van der Veen B. A., Uitdehaag J. C, Penninga D. et al. Rational design of cyclodextringlycosyltransferase from Bacillus circulans strain 251 to increase alpha-cyclodextrin production. // J. Mol. Biol., 2000, V. 296 (4)< P. 1027-1038.

186. Wilkins C., Lay J., Winefordner J. Identification of Microorganisms by Mass Spectrometry (Chemical Analysis: A Series of Monographs on Analytical Chemistry and Its Applications). Wiley-Interscience, 2005, 352p.

187. Wong, S.-L. Advances in the use of Bacillus subtilis for the expression and secretion of heterologous proteins. //Curr.Opin. Biotechnol., 1995, 6, 517-522.

188. Wu, S.C., Wong, S.-L. Engineering of a Bacillus subtilis strain with adjustable levels of intracellular biotin for secretory production of functional streptavidin. //Appl. Environ.Microbiol., 2002, 68, 1102-1108.

189. Wu, X.-C., Lee, W., Tran, L., Wong, S.-L. Engineering a Bacillus subtilis expression-secretion system with a strain deficient in six extracellular proteases.//J. Bacterid., 1991, 173,4952-4958.

190. Xu E., Aoki H., Misawa M. New a-cyclodextrin producing thermostable cyclodextrin glucanotransferase. //Appl. Microbiol. Biotechnol., 1988, v.28, N 4-5, p.377-379.

191. Yong-Hoon Choi, Chul-Hak Yang, Hyun-Won Kim, Seunho Jung. Cyclodextrins.//Journal of Inclusion Phenomena and Macrocyclic Chemistry, 39,71-76,2001.