Разработка биотехнологического процесса получения комплексных ферментных препаратов термостабильной α-амилазы и протеазы на основе нового мутантного штамма Bacillus licheniformis 103 тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 05.18.07, кандидат технических наук Костылева, Елена Викторовна

• Костылева, Елена Викторовна
• кандидат технических наук
• 2003

Оглавление диссертации кандидат технических наук Костылева, Елена Викторовна

ВВЕДЕНИЕ.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Протеазы. Классификация, механизм действия и физико-химические свойства.

1.2. а-Амилаза. Физико-химические свойства и механизм действия

1.3. Продуценты щелочных сериновых протеиназ и термостабильной а-амилазы.

1.4. Физиологические функции протеаз и а-амилазы.

1.5. Регуляция биосинтеза протеаз и а-амилазы микроорганизмами.

1.6. Методы повышения активности штаммов.

1.7. Применение щелочных протеиназ, а-амилазы и комплексных препаратов в различных отраслях АПК.

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ.

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

2.1. Продуцент и условия хранения посевного материала.

2.2. Методы проведения мутагенеза.

2.3.1. Первый и третий этапы мутагенеза. Получение стрептомицино-устойчивых штаммов В. Искет/огт18 БТ-ЯО и В. Нскет/огтгз 103.

2.3.2. Второй этап мутагенеза. Получение штамма В.Искет/огт1$ К11.

2.4. Условия культивирования продуцента.

2.5. Получение ферментных препаратов.

2.6. Методы определения активности ферментов.

2.7. Характеристика ферментационных сред.

3. ПОЛУЧЕНИЕ ВЫСОКОАКТИВНОГО ШТАММА ВАСНЬШ иСНЕМРСЖМШ 103 МЕТОДАМИ МУТАГЕНЕЗА И СЕЛЕКЦИИ. ОПТИМИЗАЦИЯ СПОСОБА ВЕДЕНИЯ ПОСЕВНОГО МАТЕРИАЛА МУТАНТНОГО ШТАММА.

3.1. Мутагенез, селекция.

3.2. Исследование влияния условий хранения и ведения посевного материала на ферментативную активность мутантного штамма B.licheniformis 103.

3.2.1. Исследование морфологической изменчивости штамма B.licheniformis 103 при рассеве на разные виды агаризованных сред.

3.2.2. Влияние условий хранения посевного материала на ферментативную активность штамма B.licheniformis 103.

3.2.3. Влияние длительности хранения спорового посевного материала на ферментативную активность штамма B.licheniformis

3.2.4. Влияние способа длительного хранения спорового посевного материала на ферментативную активность штамма B.licheniformis 103 65 4. ОПТИМИЗАЦИЯ УСЛОВИЙ ГЛУБИННОГО КУЛЬТИВИРОВАНИЯ МУТАНТНОГО ШТАММА BACILLUSLICHENIFORMIS103. 67 4.1. Оптимизация состава питательных сред для глубинного культивирования продуцента.

4.1.1. Культивирование исходного и мутантного штаммов на средах с кормовыми дрожжами и различными источниками углерода.

4.1.2. Выбор оптимального комплексного источника органического азота для глубинного культивирования штамма В. licheniformis 103.

4.1.3. Влияние концентрации кукурузной муки на биосинтез ферментов штаммом В. licheniformis 103.

4.1.4. Культивирование штамма B.licheniformis 103 на ферментационных средах с различным соотношением кукурузной и соевой муки.

4.1.5. Культивирование штамма B.licheniformis 103 на ферментационных средах с полной и частичной заменой кукурузной муки пшеничной, ржаной и ячменной.

4.1.6. Влияние неорганических источников фосфора на биосинтез ферментов штаммом B.licheniformis 103.

4.1.7. Влияние способа ферментативной обработки среды для глубинного культивирования на биосинтез ферментов штаммом B.licheniformis 103.

4.2. Влияние условий культивирования на синтез ферментов штаммом B.licheniformis 103.

4.2.1 Влияние температуры культивирования и pH исходной ферментационной среды на биосинтез ферментов штаммом

B.licheniformis 103.

4.2.2. Влияние возраста и количества вегетативного посевного материала на синтез протеазы и а-амилазы штаммом B.licheniformis 103.

4.3. Направленное культивирование продуцента.

5. КУЛЬТИВИРОВАНИЕ ШТАММА BACILLUS LICHENIFORM1S 103 С ВНЕСЕНИЕМ В КУЛЬТУРАЛЬНУЮ ЖИДКОСТЬ ПОВЕРХНОСТНО-АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ.

5.1. Изучение локализации протеазы.

5.2. Добавление поверхностно-активных веществ в качестве индукторов биосинтеза протеазы.

5.3. Культивирование штамма B.licheniformis 103 с внесением в ферментационные среды промышленных поверхностно-активных веществ.

6. ПОЛУЧЕНИЕ КОНЦЕНТРИРОВАННЫХ ФЕРМЕНТНЫХ ПРЕПАРАТОВ АМИЛОПРОТОЛИХЕТЕРМГЮХ И Г20Х.

7. ИССЛЕДОВАНИЕ ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИХ СВОЙСТВ ФЕРМЕНТНОГО ПРЕПАРАТА АМИЛОПРОТОЛИХЕТЕРМ.

7.1. Влияние pH и температуры на протеолитическую и амилолитическую активность препарата Амилопротолихетерм Г20х 97 7.2. Стабильность протеолитических и амилолитических ферментов штамма В. Нскет/огтгх 103 при различных значениях рН и температуры.

7.3. Влияние промышленных поверхностно-активных веществ и 102 щелочных реагентов на протеолитическую и амилолитическую активность препарата Амилопротолихетерм.

7.3.1. Исследование влияния промышленных поверхностно-активных веществ на протеолитическую и амилолитическую активность препарата Амилопротолихетерм Гх.

7.3.2. Исследование влияния промышленных поверхностно-активных веществ на стабильность протеолитических ферментов препарата Амилопротолихетерм Г2 Ох.

7.3.3. Исследование влияния щелочных реагентов на стабильность протеолитических ферментов препарата Амшопротолихетерм Г20х

8. МАСШТАБИРОВАНИЕ ПРОЦЕССА КУЛЬТИВИРОВАНИЯ ШТАММА BACILLUSLICHENIFORMIS 103.

8.1. Культивирование штамма B.licheniformis в лабораторных ферментерах.

8.2. Культивирование штамма B.licheniformis 103 в полупроизводственных условиях.

8.3. Культивирование штамма B.licheniformis 103 в условиях МЭЗ.

9. ИСПЫТАНИЕ ПРЕПАРАТОВ АМИЛОПРОТОЛИХЕТЕРМ В

СПИРТОВОЙ И ДРУГИХ ОТРАСЛЯХ ПРОИЗВОДСТВА.

ВЫВОДЫ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Разработка биотехнологического процесса получения комплексных ферментных препаратов термостабильной α-амилазы и протеазы на основе нового мутантного штамма Bacillus licheniformis 103»

В настоящее время применение ферментных препаратов является неотъемлемой частью большинства технологических процессов промышленности и сельского хозяйства. В частности, протеолитические и амилолитические ферменты используются в пивоварении, хлебопечении, мясо-молочной и спиртовой промышленности, находят широкое применение в текстильной промышленности, в производстве детергентов, в качестве кормовых добавок в сельском хозяйстве, для переработки отходов мясной и птицеперерабатывающей промышленности.

Протеазы микробного происхождения широко используются при получении и переработке соевых продуктов, для создания продуктов диетического питания, для снижения горечи белковых гидролизатов. Протеолитические ферменты с определенной специфичностью действия используются для мягчения мяса, в качестве пищевых добавок, а также компонентов косметических средств (Mala В. Rao et al, 1998, Неклюдов А.Д. и др., 2000, Dhar S.C., Sreenivasulu S., 1984).

Микробные амилазы применяют в медицине, тонкой химической технологии, текстильной, бумажной и пищевой промышленности, в частности, в пивоварении, хлебопечении, крахмалопаточном, кондитерском и спиртовом производстве. В промышленном биокатализе наибольшую ценность представляют термостабильные амилазы, синтезируемые, как правило, термофильными микроорганизмами. Их использование позволяет внедрять в производство эффективные ресурсосберегающие технологии (Кислухина О. и др., 1997, Pandey A. et al., 2000).

Все большим спросом пользуются комплексные ферментные препараты, в состав которых одновременно входят гидролазы как амилолитического, так и протеолитического действия. Применение таких ферментных препаратов в спиртовой промышленности позволяет более полно использовать крахмалосодержащее сырье за счет разрушения высокомолекулярных белковых компонентов, входящих в состав оболочек гранул крахмала, дает дополнительное питание для дрожжей, сокращает сроки брожения (Римарева J1.B. и др., 1981, 1993). Комбинирование протеаз, амилазы и целлюлазы значительно повышает эффективность применения ферментных препаратов в моющих средствах и при получении гидролизатов микробной биомассы (Mala В. Rao et al, 1998, Римарева JI.B. и др., 2002).

В настоящее время существуют два способа получения комплексных ферментных препаратов: создание мультиэнзимных композиций (МЭК) путем комбинирования индивидуальных ферментов, выделенных из различных продуцентов, и получение препаратов с помощью микроорганизмов - продуцентов полиферментных систем. Второй способ имеет ряд значительных преимуществ:

1. Проведение ферментации одного микроорганизма и выделение целого комплекса ферментов из полученной культуральной жидкости значительно дешевле, чем культивирование нескольких продуцентов с последующей очисткой каждого фермента в отдельности.

2. Состав ферментного комплекса более сбалансирован по физико-химическим параметрам, таким как pH, температура действия и т.д.

3. Ферменты, находящиеся в едином комплексе, полученном из культуральной жидкости одного продуцента, более стабильны и менее агрессивны по отношению друг к другу.

4. В культуральной жидкости микроорганизмов, продуцентов комплекса ферментов, помимо основных гидролаз, как правило, присутствуют сопутствующие энзимы, синергизм действия которых повышает эффективность гидролиза сложных многокомпонентных субстратов (зерновое сырье, дрожжевая биомасса, мясо-костная мука и т.д.).

Известен ряд бактериальных продуцентов комплекса гидролитических ферментов, в состав которого входят а-амилаза и одна или несколько протеаз: B.subtilis, Bacillus sp., B.licheniformis (Mahmood A.U. et al., 2000, Ivanova V. et. al., 2001, Calik Р., Ozdamar TH., 2000). Имеется информация о получении рекомбинантных штаммов, продуцирующих комплекс гидролаз, на основе природных бактерий, синтезирующих лишь один из ферментов комплекса (Feng YY. et al., 2001, Zaghloul TL et al., 2000).

Исходя из анализа литературных данных, можно сделать предположение, что среди бактериальных микроорганизмов наиболее богатым и технологически ценным ферментативным комплексом обладает Bacillus licheniformis. Штаммы данного вида синтезируют одну или две а-амилазы (как правило, термостабильные), щелочные и нейтральные протеиназы, а также, в небольших количествах, ß-глюканазы, ксиланазы, пектиназы и другие карбогидразы, а также другие сопутствующие ферменты.

Одним из наиболее перспективных продуцентов комплекса литических ферментов является штамм Bacillus licheniformis ИМВ-234, выделенный из почвы Институтом микробиологии и вирусологии HAH Украины и депонированный под номером В-2986 во Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов (ВКПМ) (Патент РФ № 2001103). В.licheniformis ИМВ-234 обладает уникальным комплексом гидролитических ферментов, в состав которого входят три протеиназы: сериновая щелочная протеиназа, наиболее близкая по свойствам к субтилизинам типа Карлсберг (Павлова И.Н. и др., 1988), термостабильная металлозависимая аминопептидаза (Павлова И.Н. и др., 1989) и глутамил эндопептидаза, термостабильная а-амилаза, пуллуланаза (Кичакова H.A. и др., 1998) и небольшие количества ферментов карбогидраз (Павлова И.Н., Жолнер Л.Г., 1985). Следует, однако, подчеркнуть, что низкая продуктивность штамма препятствовала масштабированию процесса получения активных ферментных препаратов. Кроме того, не были оптимизированы условия для культивирования продуцента в лабораторных и производственных условиях, обеспечивающие максимальное накопление ферментов.

В связи с этим актуальны исследования, направленные на поиск высокопродуктивного штамма, синтезирующего комплекс активных гидролаз, включающий термостабильную а-амилазу, нейтральную и щелочную протеазы, с целью получения комплексных ферментных препаратов целевого назначения для повышения эффективности биотехнологических процессов в спиртовой, пивоваренной, крахмало-паточной, текстильной, кожевенной и других отраслях промышленности.

Для достижения данной цели были поставлены следующие задачи:

1. Повышение продуктивности штамма с использованием методов селекции и мутагенеза.

2. Выбор оптимальных условий для хранения стабильного посевного материала мутантного штамма.

3. Оптимизация условий глубинного культивирования нового продуцента для направленного синтеза протеолитических и амилолитических ферментов. Получение комплексных ферментных препаратов с различным соотношением ферментов протеолитического и амилолитического действия.

4. Изучение свойств полученных ферментных препаратов и возможности их применения в различных отраслях промышленности.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Большинство перерабатываемых в промышленности природных субстратов растительного, животного или микробного происхождения содержат высокомолекулярные вещества, состоящие из мономерных остатков: глюкозы (крахмал, гликоген, целлюлоза), аминокислот (белки), ксилозы, маннозы, арабинозы, галактозы, глюкуроновой и галактуроновой кислот (гемицеллюлозы, пектиновые вещества) и др. При ферментативном гидролизе подобных полимеров высвобождаются moho-, ди- и олигомеры, имеющие большую практическую ценность, появляется возможность получить продукт с заданными свойствами за счет избирательного гидролиза некоторых полимеров.

Среди гидролитических ферментов наибольшую практическую ценность имеют протеазы и амилазы.

Заключение диссертации по теме «Биотехнология пищевых продуктов (по отраслям)», Костылева, Елена Викторовна

ВЫВОДЫ

1. Методами мутагенеза и селекции получен новый активный штамм В.Нскет/огт18 103, протеолитическая активность которого увеличена в 2 раза по сравнению с исходным штаммом; амилолитическая — в 30 раз.

2. Исследованы физиологические особенности нового мутантного штамма и оптимизированы условия его глубинного культивирования, что позволило увеличить выход протеазы и амилазы на 40 - 50%.

3. Установлена возможность направленного культивирования В.Ыскет/огт18 103 с целью получения ферментных препаратов с различным соотношением амилолитической и протеолитической активности.

4. Проведено масштабирование лабораторной технологии глубинного культивирования В. Искет/огтй 103 в опытно-промышленных и производственных условиях; разработаны опытно-промышленный технологический регламент и ТУ на препарат Амилопротолыхетерм Гх.

5. Разработаны оптимальные параметры процесса получения концентрированных высокоактивных ферментных препаратов и наработаны опытные партии комплексного ферментного препарата Амилопротолыхетерм Г1 Ох и Г20х.

6. Исследованы физико-химические свойства а-амилазы и протеазы В. Искет/огтгя 103.

7. Показана высокая эффективность полученного комплексного ферментного препарата термостабильной а-амилазы и протеазы в различных отраслях АПК для интенсификации биотехнологических процессов.

Список литературы диссертационного исследования кандидат технических наук Костылева, Елена Викторовна, 2003 год

1. Алеева В.Д., Аравина Л.А. Влияние компонентов среды на биосинтез протеолитического фермента грибом Aspergillus terrícola. // Прикл. биохим. и микробиол. 1973. - 9, №4. - С. 554 - 558.

2. Ауэрбах Ш. Проблемы мутагенеза.// М.: Мир. 1978. — 464 с.

3. Балабан Н.П., Шарипова М.Р., Усманова А.М., Ицкович Е.Л., Лещинская И.Б. Щелочная внеклеточная протеиназа Bacillus intermedius. Выделение, очистка и некоторые свойства фермента.// Биохимия. 1993. - 58, №12.-С. 1923- 1928.

4. Бахматова И.В., Жарикова Г.Г. Физиолого-биохимические особенности вариантов Bacillus subtilis, образующих амилазу.// Микробиология. -1978. 47, №5. - С. 893 - 899.

5. Бахматова И.В., Жарикова Г.Г. Биосинтез ос-амилазы вариантами Bacillus subtilis-mesentericus.l7 Микробиология. 1979. - 48, №3. - С. 514 -522.

6. Безбородое А.М., Астапович Н.И. Секреция ферментов у микроорганизмов.// М.: Наука. 1984. - 58 с.

7. Бондарчук А.А., Колтукова Н.В., Василевская И.Я., Бурляй Л.В., Руденко А.В. Питательная среда для выделения протеаз бактерий рода Bacillus.ll Микробиол. журн. 1987. - 49, №3. - С. 110 - 112.

8. Бриан Л.Е. Бактериальная резистентность и чувствительность к химиотерапии.// М.: Медицина. 1984. - 270 с.

9. Гололобов М.Ю., Морозова И.П., Степанов В.М. Влияние температуры и рН на стабильность и каталитическую активность сериновой протеиназы Bacillus subtilis шт. 72JУ Биохимия. 1991.- 56, №1. - С. 33 -40.

10. Ю.Грачева И.М., Кривова А.Ю. Технология ферментных препаратов.// М.: Изд-во «Элевар». 2000. - 512 с.

11. П.Гребешова Р.Н., Сальседо-Торрес Л.Э., Идальго М.А. Сериновая протеаза Bacillus subtilis R. II Прикл. биохим. и микробиол. 1999. — 35, №2. -С. 150- 154.

12. Данилова М.В., Надирова И.М., Емцева Т.В. Зависимость жизнеспособности бактерий после диофилизации и при длительном хранении от величины остаточной влажности.// Изд. АНСССР, серия «Биология». 1980. - №3. - С. 449 - 451.

13. Дебабов В.Г. Современные селекционно-генетические методы получения промышленных микроорганизмов.// Ж. Всес. хим. о-ва. — 1982. 27, №6. - С. 968 - 972.

14. Дебабов В.Г., Лившиц В.А. Современные методы создания промышленных штаммов микроорганизмов. //Кн. 2 в Учеб. пособие для вузов. В 8 кн. под ред. Егорова Н.С., Самуилова В.Д. М.: Высш. шк. -1988.-208 с.

15. Диксон М., Уэбб Э. Ферменты, (в 3-х т)//М.: Мир. 1982.

16. Дунаевский Я.Е., Грубань Т.Н., Белякова Г.А., Белозерский М.А. Влияние состава среды на количественный и качественный состав внеклеточных протеаз микромицетов.// Микробиология. 1999. - 68, №3. - С. 324 - 329.

17. Егоров Н.С., Лория Ж.К., Брюкнер Б. Регуляция синтеза внеклеточных ферментов у микроорганизмов.// Успехи микробиологии. 1977. -№12. -С. 59-79.

18. Егоров Н.С., Лория Ж.К., Ландау Н.С. Протеолитические ферменты микроорганизмов в связи с их фибринолитической и коагулазной активностью.// в кн.: Биосинтез микроорганизмами нуклеаз и протеаз. -М.: Наука. 1979. - С. 146 - 197.

19. Егоров Н.С., Лория Ж.К., Юдина Т.Г. Влияние различных источников углерода и пуриновых нуклеотидов на синтез экзопротеазы Bacillus thuringiensis. II Микробиология. 1982. - 51, №1. - С. 43 - 47.

20. Егоров Н.С, Лория Ж.К, Юдина Т.Г. Влияние аминокислот на синтез экзопротеазы Bacillus thuringiensis. // Прикл. биохим. и микробиол. -1983(а). 19, №5.-С. 610-616.

21. Егоров Н.С, Лория Ж.К, Юдина Т.Г. О влиянии белков на синтез экзопротеазы Bacillus thuringiensis. II Микробиология. 1983(6). - 52, №4. - С. 569 - 572.

22. ЕмцеваТ.В, Коновалов С.А. Щелочные протеазы микробиологического происхождения. // Прикл. биохим. и микробиол. 1978. - 14, №5. - С. 661 -676.

23. Жолнер Л.Г, Павлова И.Н, Тиньянова Н.З. Протеазы и их роль в литической активности термофильного штамма Bacillus sp. 86.1/ Миробиол. журн. 1988. - т. 50, №1. - С. 20 - 25.

24. Захарова И.Я, Павлова И.Н, Коваленко Э.А, Жолнер Л.Г, Квасников Е.И, Тиньянова Н.З, Дрындина Л.П. Получение и характеристика литических ферментов термофильного штамма Bacillus sp. 86.II Микроб, журн. 1984. - 46, №3. -С. 21- 30.

25. Знаменская Л.В, Феоктистова Н.В, Лобашова И.Ф, Краснов С.И, Лещинская И.Б. Регуляция биосинтеза внеклеточных ферментов Bacillus intermedius 3S-19. II Прикл. биохим. и микробиол. 1995. - 31, №4. - С. 412-416.

26. Ицкович ЕЛ, Знаменская Л.В, Балабан Н.П, Ершова Т.А, Лещинская И.Б. Биосинтез щелочной внеклеточной протеиназы Bacillus intermedius.11 Микробиология. 1995. - 64, №5. - С. 623 - 629.

27. Каверзнева Е.Д. Стандартный метод определения протеолитической активности для комплексных препаратов протеаз. II Прикл. биохим. и микробиол. 1971. - 7, № 2. - С. 225-228.

28. Кислухина О, Кюдулас И. Биотехнологические основы переработки растительного сырья.// Каунас: Технология. 1997. - 184 с.

29. Кичакова Н.А., Павлова И.Н., Захарова И.Я. Очистка и идентификация амилолитических ферментов Bacillus licheniformis. // Прикл. биохим. и микробиол. 1998. - 34, №5. - С. 503 - 507.

30. Колев Д.А. Репрессия синтеза экзопротеиназ у штамма 90Я-формы Bacillus mesentericus аминокислотами. // Микробиология. 1986. - 55, №4.-С. 295-300.

31. Колтукова Н.В., Лугинина Т.Н. Диссоциация культуры Bacillus mesentericus и биосинтез гидролитических ферментов. // Микробиол. журн. 1989.-т. 51, №6.-С. 19-25.

32. Колтукова Н.В., Лугинина Т.Н., Коваленко Э.А. Биосинтез гидролаз морфологическими вариантами Bacillus mesentericus в зависимости от условий хранения. // Микробиол. журн. 1990. - т. 52, № 1. - С. 10 - 14.

33. Коршунов В.В., Казаков Г.А. Оптимизация состава и концентрации компонентов питательной среды для биосинтеза протеиназы Aspergillus terrícola 3-374. II Микробиология. 1972. - 41, №3. - С. 472 - 478.

34. Кузманова И.Н. Взаимосвязь между экзопротеазной активностью, спорообразованием, образованием кристаллов и вирулентностью бактерий группы Bacillus thuringiensis.il Прикл. биохим. и микробиол. 1976.- 12, №4.-С. 495-500.

35. Малый практикум по биохимии.// под ред. Юркевича В.В. изд-во Московского университета. - 1979. - 209 с.

36. Мосолова О.В., Руденская Т.Н., Степанов В.М., Ходова О.М., Цаплина И.А. Глутамин, аспарагин-специфичная протеиназа актиномицетов.// Биохимия. 1987. - 52, №3. - С. 414 - 422.

37. Неклюдов А.Д., Иванкин А.Н., Бердутина A.B. Получение и очистка белковых гидролизатов (обзор).// Прикл. биохимия и микробиология. -2000. 36, №4. - С. 371-379.

38. Неклюдов А.Д., Иванкин А.Н., Бердутина A.B. Свойства и применение белковых гидролизатов (обзор).// Прикл. биохимия и микробиология. -2000. 36, №5. - С. 525-534.

39. Нефедова Л.И., Устинников Б.А., Цурикова Н.В., Ермакова Г.Н. Получение активного варианта бактериальной культуры продуцента термостабильной альфа-амилазы.// Хранение и переработка сельхозсырья. - 1996, №2. - С. 42 - 43.

40. Нефедова Л.И., Устинников Б.А., Цурикова Н.В., Ермакова Г.Н., Кичакова H.A. Культивирование продуцента термостабильной альфа-амилазы.// Хранение и переработка сельхозсырья. 1996, №5. - С. 38 -39.

41. Новикова Т.М., Выборных С.Н., Егоров Н.С., Лория Ж.К. Внеклеточная протеаза Bacillus alvei В-724. II Прикл. биохим. и микробиол. 1986. -22, №6. - С. 772 - 777.

42. Номенклатура ферментов. Рекомендации международного биохимического союза.//М. 1974. - 321 с.

43. Павлова И.Н., Жолнер Л.Г. Исследование препарата литических ферментов Bacillus sp. 86.1/ Прикл. биохим. и микробиол. 1985. - 21, №5.-С. 649-655.

44. Павлова И.Н., Жолнер Л.Г., Захарова И.Я., Тиньянова Н.З., Честухина Г.Г., Степанов В.М. Сериновая протеиназа с литическими свойствами.// Микробиология. 1988. - 57, №3. - С. 398 - 404.

45. Павлова И.Н., Ротанова Т.В., Жолнер Л.Г. Аминопептидаза термофильного штамма Bacillus licheniformisJI Микробиол. журн. -1989.- 51, №2.-С. 47-52.47. Патент РФ №2001103. 1991.

46. Пащенко JT.П., Жеребцов Н., Тареева И.М. Получение и использование гидролизатов пера в технологии хлеба.// Хранение и переработка сельхозсырья. 1997. - №5. - С. 34 - 36.

47. Прист Ф. Внеклеточные ферменты микроорганизмов. // М.: Мир. 1987. - 112 с.

48. Римарева Л.В., Войнарский И.Н., Яровенко В.Л. Роль протеолитических ферментов в повышении активности солода и интенсификации спиртового брожения.// Ферментная и спиртовая пр-сть. — 1981. №3. — С. 27-30.

49. Римарева Л.В., Войнарский И.Н., Устинников Б.А., Яровенко В.Л., Коновалов С.А. Влияние протеолитических ферментов на физиологическое состояние и размножение дрожжей.// Ферментная и спиртовая пр-сть. 1983. - №2. - С. 36 - 39.

50. Римарева Л.В., Милюкова Т.Б. Влияние поверхностно-активных веществ на биосинтез протеаз и амилазы грибом Aspergillus oryzae. // Деп. ВИНИТИ. М,- 1991.-№7.-С. 75.

51. Римарева Л.В., Милюкова Т.В., Устинников Б.А., Яровенко В.Л. Использование протеолитического ферментного препарата из Aspergillus oryzae в спиртовом брожении.// Прикл. биохим. и микробиол. 1993. -29, №6. - С. 869 - 876.

52. Римарева Л.В., Оверченко М.Б., Трифонова В.В., Устинников Б.А. Получение пищевых добавок лечебно-профилактического действия.// Сб.: «Пища, экология, человек». Межд. н.-техн. конф. М. 1995. - С.25.

53. Римарева Л.В. Использование комплексного ферментного препарата Амилопротооризина для гидролиза дрожжевого белка.// Хранение и переработка сельхозсырья. 1996. - №2. - С. 39 - 40.

54. Руденская Г.Н. Глутамил эндопептидаза микроорганизмов новое подсемейство химотрипсиновых протеиназ.// Биоорг. химия. - 1998. -24, №4.-С. 256-261.

55. Руденская Г.Н. Новые подсемейства субтилизинов.// Биоорг. химия. -1994. 20, №5. - С. 475 - 484.

56. Синицын А.П., Гусаков A.B., Черноглазое В.М. Биоконверсия лигноцеллюлозных материалов: Учеб. пособие. М.: Изд-во МГУ. 1995. -224 с.

57. Тиньянова Н.З., Павлова И.Н., Жолнер Л.Г. Особенности биосинтеза литических ферментов споровыми термофильными бактериями. // Микробиол. журн. 1988. - 50, №1. - С. 15 - 19.

58. Цаплина И.А. Синтез нейтральных протеаз микроорганизмами. // в кн. Биосинтез микроорганизмами нуклеаз и протеаз. М.: Наука. - 1979. -С. 197-243.

59. Честухина Г.Г., Котова Т.С., Залунин И.А., Степанов В.М. Протеиназы в процессе роста и спорообразования Bacillus thuringiensis. II Биохимия. -1979. т. 44, №5. - С. 796 - 802.

60. Шагинян К.А., Изотова JI.C., Йомантас Ю.В., Стронгин А.Я., Степанов В.М. Металлопротеиназа из Bacillus subtilis внеклеточный и внутриклеточный ферменты. // Биохимия. - 1980. - 45, №11. - С. 2083 -2095.

61. Юркевич В.В., Зуева Е.С. Белки среды как факторы регуляции синтеза секретируемой протеиназы. // Биохимия. 1982. - 47, №10. - С. 1670 -1677.

62. Bajpai P., Sharma U. Production of a-amylase in a low cost medium by Bacillus licheniformis TCRDC-B13JI J. Ferm. Bioeng., 1989, V. 67(6), P. 422 -423.

63. Banerjee A., Ganesan K., Datta A. Induction of secretory acid proteinase in Candida albicans./! J. Gen. Microbiol., 1991, V. 137(Pt 10), P. 2455-2461.

64. Barett A.J. Proteolytic enzymes: serine and cysteine peptidases.// Methods Enzymol., 1994, V. 244, P. 1 15.

65. Barett A.J. Proteolytic enzymes: aspartic and metallopeptidases.// Methods Enzymol., 1995, V. 248, P. 183.

66. Bealin-Kelly F., Kelly СТ., Fogarty WM. The a-amylase of the caldoactive bacterium Bacillus caldovelox.il Biochem. Enzymol., 1990, 1, P. 149 158.

67. Ben Ali M., Mhiri S., Mezghani M., Bejar S. Purification and sequence analysis of the B.stearothermophilus US100.11 Enz. Microb. Technol., 2001, V. 28, P. 537-542.

68. Betzel C., Teplyakov A.V., Harutyunyan E.H., Saenger W., Wilson K.S. Termitase and proteinase K: a comparison of the refined three-dimensional structures of the native enzymes.// Protein Eng. 1990. - V.3, №3, - P. 161 -172.

69. Bose K., Das D. Thermostable alpha-amylase production using Bacillus licheniformis NRRL B14368JI Ind. J. Exp. Biol., 1996, Y. 34(12), P. 1279 -1282.

70. Böckle B., Galunsky B., Müller R. Characterization of a keratinolytic serine proteinase from Streptomyces pactum DSM 40530.// Appl. Environ. Microbiol, 1995, V. 61, № 10, p. 3705-3710.

71. Bressollier Ph., Letourneau F., Urdaci M., Verneuil B. Purification and characterization of a keratinolytic serine proteinase from Streptomyces albidoflavus. 1/ Appl. Environ. Microbiol., 1999, V. 65, №6, P. 2570 2576.

72. Calam C.T. Starting investigational and production cultures. // Process Biochem., 1976, V. 11, P. 7 12.

73. Calik P., Calik G., Ozdamar Th. Oxygen-transfer strategy and its regulation effects in serine alkaline protease production by Bacillus licheniformis. II Biotechnol. Bioeng., 2000, V. 69(3), P. 301 311.

74. Calik P., Ozdamar TH. Carbon sources affect metabolic capacities of Bacillus species for the production of industrial enzymes: theoretical analyses for serine and neutral proteases and alpha-amylase. 11 1369-703X, 2001, V. 8(1), P. 61 -81.

75. Chakraborty K., Bhattacharyya BK., Sen SK. Purification and characterization of a thermostable alpha-amylase from Bacillus stearothermophilus.il Folia Microbiol (Praha), 2000, V. 45(3), P. 207-210.

76. Chandrasekharan S., Dhar S.C. Multiple proteases from Streptomyces moderatus. I. Isolation and purification of five extracellular proteases.// Arch. Biochem. Biophys., V. 257, P. 395 404.

77. Cheng Sh-W., Hu H-M., Takagi H., Asano M., Tsai-Ch. Production and characterization of keratinase of a feather-degrading Bacillus licheniformis PWD-l.H Biosci. Biotech. Biochem., 1995, 59(12), P.2239-2243.

78. Czapinska R., Otlenski J. Structural and energetic determinants of the SI-site specifity in serine proteases// Eur. J. Bioch., 1999,-V.260. P.571-595.

79. Dancer B.N., Mandelstam, J. Production and possible function of serine protease during sporulation of Bacillus subtilis. //J. Bacteriol.,1975, V.121, P. 406-410.

80. De Marco A.C., Dick A.J. Aminopeptidase I activities in several microorganisms.// Can. J. Biochem., 1978, V. 56, P. 66-71.

81. Declerck N., Machius M., Wiegand G., Huber R., Gaillardin C. Probing structural determinants specifying high thermostability in Bacillus licheniformis alpha-amylase.// J. Mol. Biol., 2000, V. 301(4), P. 1041 1057.

82. Dhar S.C., Sreenivasulu S. Studies on the use of dehairing enzyme for its suitability in the preparation of improved animal feed. // Leather Science, 1984, V. 31(10), P. 261-267.

83. Drapeau G.R., Boily Y., Houmard J.J. Purification and properties of an extracellular protease of Staphilococcus aureus// J. Biol. Chem. — 1972, V. 247, №20, P.6720 6726.

84. Duran-Paramo E., Garcia-Kirchner O., Hervagault JF., Thomas D., Barbotin JN. Alpha-amylase production by free and immobilized Bacillus subtilis.// Appl. Biochem. Biotechnol., 2000, V. 84 86, P. 479 - 485.

85. Durham DR., Stewart DB., Stellwag EJ. Novel alkaline- and heat-stable serine proteases from alkalophilic Bacillus sp. strain GX6638J! J. Bacteriol., 1987, V. 169(6), P. 2762 2768.

86. Eijsink V.G.H., Vriend G., B. vanden Burg, Vriend G., Venema G. Increasing the thermostability of a neutral protease by replacing positively charged amino acids in the N-terminal turn of a-helixes.// Protein Eng., V. 5, P. 165- 170.r

87. Fagain C.O. Understanding and increasing protein stability.// Biochim. Biophy. Acta., 1995, P. 1 14.

88. Feng YY., Yang WB., Ong SL., Hu JY., Ng WJ. Fermentation of starch for enhanced alkaline protease production by constracting an alkalophilic Bacillus pumilus strain.// Appl. Microbiol. Biotechnol., 2001, V. 57(1-2), P. 153 160.

89. Fogarty WM., Bourke AC., Kelly CT., Doyle EM. A constitutive maltotetraose-producing amylase from Pseudomonas sp. IMD 353./1 Appl. Microbiol. Biotechnol., 1994, V. 42, P. 198 203.

90. Fujiwara N., Masui A., Imanaka T. Purification and properties of the highly thermostable alkaline protease from an alkaliphilic and thermophilic Bacillus sp./l J. Biotechnol. 1993. - V.30, №2 - P.245 - 265.

91. Gajju H., Bhalla T.C., Agarwal H.O. Thermostable alkaline protease from thermophilic Bacillus coagulans PB-77. II Ind. J. Microbiol., 1996, V. 36, 153 -155.

92. Gottesman S., Maurizi M.R. Regulation by proteolysis: energy-dependent proteases and their targets.// Microbiol. Rev., 1992, V. 56, P. 592 621.

93. Gron B., Meldal M., Breddam K. Extensive comparison of the substrate preferences of two subtilisins as determined with peptide substrate which are based on the principle of intramolecular quenching// Biochemistry. 1992. -V.31,-P.6011 -6018.

94. Haddaoui E., Chambert R., Petit-Glatron MF., Lindy O., Sarvas M. Bacillus subtilis alpha-amylase: the rate limiting step of secretion is growth phase-independent.// FEMS Microbiol. Lett., 1999, V. 173(1), P. 127 131.

95. Hanel H., Kalisch J., Keil M., Marsch WC., Buslau M. Quantification of keratinolytic activity from Dermatophilus congolensis./l Med. Microbiol. Immunol. (Berl), 1991; 180(1), P. 45-51.

96. Hayashi T., Akiba T., Horikoshi K. Production and purification of new maltohexaose-forming amylase from alkalophilic Bacillus sp. H-167.11 Agric. Biol. Chem., 1988, V. 52, P. 443-448.

97. Ingle M.B., Erickson R.J. Bacterial a-amylases.// Adv. Appl. Microbiol, 1978, V. 24, P. 257 279.

98. Ivanova V., Yankov D., Kabaivanova L., Pashkoulov D. Simultaneous biosynthesis and purification of two extracellular Bacillus hydrolases in aqueous two-phase systems.// Microbiol. Res., 2001, V. 156(1), P. 19-30.

99. Kalisz M.H. Microbial proteinases.// Adv. Biochem. Eng. Biotehcnol., 1988, V. 36, P. 17-55.

100. Kelly C.T., Bolton D.J., Fogarty W.M. Bi-phasic production of a-amylase of Bacillus flavothermus in batch fermentation.// Biotechnol. Lett., 1997, V. 19, №7, P. 675-677.

101. Kim I-Ch., Cha J-H., Kim J-R., Jang S-Y., Seo B-Ch., Cheong T-K., Lee D.S., Choi Y.D., Park K-H. Catalytic properties of the cloned amylase from Bacillus licheniformis.il J. Biol. Chem., 1992, 267(31), P. 22108 -22114.

102. Kim SH., Choi NS. Purification and characterization of subtilisin DJ-4 secreted by Bacillus sp. strain DJ-4 screened from Doen-Jang.// Biosci. Biotechnol. Biochem., 2000, V. 64(8), P. 1722 1725.

103. Kim SS., Kim YJ., Rhee IK. Purification and characterization of a novel extracellular protease from Bacillus cereus KCTC 3674./J Arch. Microbiol., V. 175(6), P. 458 461.

104. Klimova O.A., Borukhov S.I., Solovyeva N.I., Balaevskaya T.O., Strongin A. Ya. The isolation and properties of coolagenolytic proteases from crab hepatopancreas.// Biochem. Biophys. Res. Com., 1990; 166(3), P. 1411 — 1420.

105. Kraus E., Femfert U. Proteinase K from the mold Tritirachium album LIMBER. Specificity and mod of action. Hoppe-Seyler's Z. Physiol. Chem., 1976, V. 357: P.937-947.

106. Kruger S., Stulke J., Hecker M. Catabolite repression of beta-glucanase synthesis in Bacillus subtilis.l/ J.Gen. Microbiol, 1993, V. 139(Pt 9), P. 2047 -2054.

107. Lecadet M.M., Lescourret M., Klier A. Characterization of an intracellular protease isolated from Bacillus thuringiensis sporulating cells and able to modify homologous RNA polymerase.// Eur. J. Biochem., 1977, V. 79, P. 329-338.

108. Lee H., Suh DB., Hwang JH., Suh HJ. Characterization of a keratinolytic metalloprotease from Bacillus sp. SCB-3.II Appl., Biochem. Biotechnol., 2002, V. 97(2), P. 123 133.

109. Leighton T.J., Stock J.J. Biochemical changes during fungal sporulation and spore germination. I. Phenyl methyl sulfonyl fluoride inhibition of macroconidial germination in Microsporum gypseum.il J.Bacteriol., 1970, Y. 101, P. 931 940.

110. Lerner C.G., Goldman R.C. Stimuli that induce production of Candida albicans extracellular aspartyl proteinase.// J. Gen. Microbiol., 1993, V. 139 (Pt 7), P. 1649-1651.

111. Lesk A.M., Fordman W.D. Conservation and variability inn the structure of serine proteinases of the chymotrypsin family// J. Mol. Biol.1996, Y. 258, -P 501 -537.

112. Letourneau F., Soussotte V., Bressollier P., Branland P., Verneuil B. Keratinolytic activity of Streptomyces sp. S.K1-02: a new isolated strain.// Lett. Appl. Microbiol., 1998; 26(1), P. 77 80.

113. Liangqi Z., Jing Q., Jinyang G. A kinetics study on the production of alkaline proteinase by Bacillus licheniformis 2709.11 Chin. J. Biotechnol., 1998, V. 14(4), P. 241-247.

114. Liu Y., Baidoo S.K. Exogenous enzymes for pig diets: an overview.1997. Source: http://www.idrc.ca/books/focus/821/chpl l.html

115. Mabrouk S.S., Hashem A.M., El-Shayeb N.M.A., Ismail A.-M.S., Abdel-Fattah A.F. Optimization of alkaline protease productivity by Bacillus licheniformis ATCC 21415. // Bioresource Technol., 1999, Y. 69, P. 155 — 159.

116. Mahmood AU., Greenman J., Scragg AH. Effects of macromolecular growth substrates on production of extracellular enzymes by Bacillus species in continuous cultivation. // Microbios, 2000, 103(405), P. 85 96.

117. Makinen KK, Makinen PL. Purification and properties of an extracellular collagenolytic protease produced by the human oral bacterium

118. Bacillus cereus (strain Soc 67) JI J Biol. Chem, 1987; 262(26), P. 12488 -12495.

119. Mala B. Rao, Aparna M. Tanksale, Mohini S. Ghatge, Vasanti V. Deshpande. Molecular and Biotechnological Aspects of Microbial Proteases// Microbiol, and Mol. Biol. Rev, 1998, 62(3), P. 597 635.

120. Manachini P.L, Fortina M.G, Parini C. Thermostable alkaline protease produced by Bacillus thermoruber a new species of Bacillus. //Appl. Microbiol. Biotechnol, 1988, V. 28, P. 409-413.

121. Margot P, Karamata D. The wprA gene of Bacillus subtilis 168, expressed during exponential growth, encodes a cell-wall-associated protease.// Microbiology, 1996, V. 142 (Pt 12), P. 3437 3444.

122. Marquardt R.R, Bedford M.R. Recommendations for future research on the use of enzymes in animal feeds. 1997. - Source: http ://www. idrc .ca/books/focus/821 / chp 12 .html

123. Maurizi M.R, Switzer R. Proteolysis in bacterial sporulation.// Curr. Top. Cell. Regul. 1980. - 16. - P. 163 - 224.

124. Mehrotra S, Pandey P.K, Gaur R, Darmval N.S. The production of alkaline protease by a Bacillus species isolate. // Bioresource Technol, 1999, V. 67, P. 201 -203.

125. Michalik I, Szabova E, Polakova A, Urrninska D. Bacterial proteases: production, isolation and utilization in nutrition. // WMJ, 1997, 69(3), P. 28 -35.

126. Milner J.A, Martin D.J, Smith A. Two-stage inocula for the production of alpha-amylase by Bacillus amyloliquefaciens.il Enz. Microbiol. Technol, 1997, V. 21, P. 382 386.

127. Moravcova J., Chaloupka J. Repression of the synthesis of exocellular and intracellular proteinases in Bacillus megateriumJ/ Folia Microbial (Praha), 1984, V. 29, №4, P. 273 281.

128. Nakano M., Chaen H., Sugimoto T., Miyake T. Maltohexaose and maltopentaose-forming amylase, and its preparation and uses.// US Patent: 5.739.024, 1998.

129. Narang S., Satyanarayana T. Thermostable alpha-amylase production by an extreme thermophile Bacillus thermooleovorans.il Lett. Appl. Microbiol., 2001, V. 32(1), P. 31 35.

130. Okamoto M., Yonejima Y., Tsujimoto Y., Suzuki Y., Watanabe K. A thermostable collagenolytic protease with a very large molecular mass produced by thermophilic Bacillus sp. strain MO-1. II Appl. Microbiol. Biotechnol., 2001, V. 57(1-2), P. 103 108.

131. Ozcengiz G., Alaeddinnoglu N.G. Bacilysin production and sporulation in Bacillus subtilis.ll Curr. Microbiol., 1991, V. 23, P. 61 64.

132. Pandey A, Nigam P. Advances in microbial amylases.// Biotechnol. Appl. Biochem., 2000, Apr.; 31 (Pt2): P.135 152.

133. Phadatare S.U., Srinivasan M.C., Deshpande M.V. Evidence for the involvement of serine protease in the conidial discharge of Conidiobolus coronatus. //Arch. Microbiol., 1989, V. 153, P. 47-49.

134. Postemsky C.J., Dignam S.S., Setlow P. Isolation and characterization of Bacillus megaterim mutants containing decreased levels of spore protease.// J. Bacteriol., 1978, V. 135, P. 841 850.

135. Prestidge L., Gage V., Spizizen J. Protease activities during the course of sporulation in Bacillus subtilis. // J. Bacteriol., 1971, V. 107, №3, P. 815 -823.

136. Puri S., Beg QK., Gupta R. Optimization of alkaline protease production from Bacillus sp. by response surface methodology.// Curr. Microbiol., 2002, V. 44(4), P. 286 290.

137. Rozs M., Manczinger L., Vagvolgyi C., Kevei F. Secretion of a trypsin-like thiol protease by a new keratinolytic strain of Bacillus licheniformis. II FEMS Microbiol. Lett., 2001, V. 205(2), P. 221 224.

138. Rufo G.A., Sullivan B.J., Sloma A., Pero J. Isolation and characterization of a novel extracellular metalloprotease from Bacillus subtilis. // J. Bacteriol., 1990, V. 172, №2, P. 1019 1023.

139. Sampath P., Chandrakasan G. Physiological and nutritional factors affecting biosynthesis of extracellular protease by Streptomyces sp. Gl 57 JI Microbiology, 1998, V.21, №1, P. 55 63.

140. Santos RMDB, Firmino AAP, de Sa CM, Felix CR. Keratinolytic activity of Aspergillus fumigatusfresenius.il Curr. Microbiol., 1996; 33(6), P. 364-370.

141. Schmidt B.F., Woodhouse L., Adams R.M., Ward T., Mainzer S.E., Lad P.J. Alkalophilic Bacillus sp. strain LG-12 has a series of serine protease genes// Appl. Environ. Microbiol. 1995. - V.61, №12, P.4490 - 4493.

142. Sen S., Satyanarayana T. Optimization of alkaline protease production by thermophilic Bacillus licheniformis S-40. H Ind. J. Microbiol., 1993, 33(1), 43-47.

143. Sharipova MR., Shakirov EV., Gabdrakhmanova LA., Balaban NP., Kalacheva NV., Rudenskaya GN., Leshchinskaya IB. Factors influencing the cellular location of proteolytic enzyme oí Bacillus intermedius. II Med, Sei. Monit., 2000, V. 6(1), P. 8 12.

144. Sielecki A.R., Fujinaga M., Read R.J., James N.G. Refined structure of porcine pepsinogen at 1,8A resolution.// J. Mol. Biol., 1991, V. 219, P. 671 -692.

145. Siesenop U, Böhm KH. Comparative studies on keratinase production of Trichophyton mentagrophytes strains of animal origin.// Mycoses, 1995; 38(5-6), P. 205 209.

146. Singh CJ. Characterization of an extracellular keratinase of Trichophyton simii and its role in keratine degradation.// Mycopathologia, 1997; 137(1), P. 13-16.

147. Singh J., Vohra RM., Sahoo DK. Purification and characterization of two extracellular alkaline proteases from a newly isolated obligate alkalophilic Bacillus sphaericus.il J. Ind. Microbiol. Biotechnol., 2001, V. 26(6), P. 387-393.

148. Smeekens S.P. Processing of protein precursors by a novel family of subtilisin-related mammalian endoproteases.// Biotechnol., 1993, V. 11, P. 182- 186.

149. Sookkheo B., Sinchaikul S., Phutrakul S., Chen ST. Purification and characterization of the highly thermostable proteases from Bacillus stearothermophilus TLS33.II Protein. Expr. Purif., 2000, V. 20(2), P. 142 -151.

150. Stoll E., Weder H.G., Zuber H. Aminopeptidase II from Bac. Stearothermophilus.il Biochim. Biophys. Acta, V. 438, P. 212-220.

151. Stredansky M., Kremnicky L., Sturdik E., Feckova A. Simultaneous production and purification of Bacillus subtilis alpha-amylase.// Appl. Biochem. Biotechnol., 1993, V. 38(3), P. 269 276.

152. Suh HJ., Lee HK. Characterization of a keratinolytic serine protease from Bacillus subtilis KS-l.ll J. Protein Chem., 2001, V. 20(2), P. 165 169.

153. Suntornsuk W., Suntornsuk L. Feather degradation by Bacillus sp. FK 46 in submerged cultivation.// Bioresource Technology, 86, 2003, P. 239 -243.

154. Suzuki C.K., Rep M., Van Dijl J.M., Suda K., Grivell L.A., Schatz G. ATP-dependent proteases that also chaperone protein biogenesis.// Trends Biochem. Sci., 1997, V. 22, P. 118 123.

155. Svedsen I., Breddam K. Isolation and amino acid sequence of a glutamic acid specific endopeptidase from Bacillus licheniformis! / Eur. J. Biochem. 1992, V. 204, P. 165-171.

156. Takami H., Akiba T., Horikoshi K. Production of extremely thermostable alkaline protease from Bacillus sp. no. AH-101.!I Appl. Microbiol. Biotechnol., 1989, V. 30, P. 120 124.

157. Takami H., Nakamura S., Aono R., Horikoshi K. Degradation of human hair by a thermostable alkaline protease from alkaliphilic Bacillus sp. No. AH-101.il HSiosci. Biotech. Biochem., 1992, 56(10), P.1667-1669.

158. Takasaki Y. Production of maltohexaose by a-amylase from Bacillus circulans G-6.H Agric. Biol. Chem., 1982, V. 46, P. 1539- 1547.

159. Thomas P.G., Russel A J., Fersht A.R. Tailoring the pH-dependence of enzyme catalysis using protein engineering.// Nature, 1985, V. 28, P. 375 -376.

160. US Patent 5.171.682. Purified Bacillus licheniformis PWD-1 keratinase. 1992.

161. US Patent 5.352.603. Highly alkaline proteases. 1994.

162. US Patent 5.352.604. Alkaline proteolytic enzyme and method of production. 1994.

163. US Patent 5.358.865. Alkaline protease from Bacillus sp. J20. 1994.

164. US Patent 5.399.283. Thermally stable and pH stable subtilisin analogs and method for production thereof. 1995.

165. US Patent 5.478.742. Alkaline protease from Bacillus pumilus. 1995.

166. US Patent 5.532.007. Method for production of a meat hydrolyzate. 1996.

167. US Patent 5.565.348. Alkaline protease from Bacillus proteolyticus species. 1996.

168. US Patent 5.597.720. Alkaline protease from Bacillus sp. PD498, method of making and method of use. 1997.

169. US Patent 5.650.315. Alkaline protease obtainable from Bacillus sp. J A 16-38A. 1997.

170. US Patent 5.741.693. Alkalophilic Bacillus sp. AC13 and protease, xylanase, cellulase obtainable therefrom. 1998.

171. US Patent 5.801.038. Modified subtilisins having amino acid alterations. 1998.

172. US Patent 5.811.112. Oil-in-water cosmetic emultions containing a stabilized protease. 1998.

173. US Patent 5.837.516. Subtilisin variants capable of cleaving substrates containing basic residues. 1998.

174. US Patent 5.877.000. Keratinase produced by Bacillus licheniformis. 1999.

175. US Patent 5.888.797. Alkaline protease from Bacillus sp. ZI315. 1999.

176. US Patent 5.912.408. Dry cleaning with enzymes. 1999.

177. US Patent 5.928.929. Alkaline protease from Bacillus sp. 1612. 1999.

178. US Patent 5.976.859. Detergent-stable alkaline protease from Bacillus pumilus. 1999.

179. US Patent 5.981.255. Alkaline protease, process for the production thereof, use thereof and microorganism producing the same. 1999.

180. US Patent 6.008.026. Mutant alpha-amylase having introduced therein a disulfide bond. 1999.

181. US Patent 6.395.703. Solid detergents with active enzymes and bleach. 2002.

182. US Patent 6.436.696. Enzyme treatment to enhance wettability and absorbancy of textiles. 2002.

183. Van Melderen L., Thi M., Leechi P., Gottesman S., Couturier M., Maurizi M.L. ATP-dependent degradation of Ccd A by Lon protease.// J . Biol. Chem., 1996, V. 271, P. 27730 27738.

184. Watson R.R. Substrate specificities of aminopeptidases: a specific method for microbial differentiation.// Methods Microbiol., 1976, V. 9, P. 1 14.

185. Welker N.E., Campbell L.L. a) Effect of carbon sources on formation of a-amylase by Bacillus stearothermophilus. II J. Bacterid, 1963, V. 86, P. 681 -686.

186. Welker N.E., Campbell L.L. b) Induction of a-amylase by Bacillus stearothermophilus by maltodextrin.// J. Bacterid., 1963, V. 86, P. 687 -693.

187. Williams C.M., Richter C.S., MacKenzie J.M., Shih J. C.H. Isolation, identification and characterization of a feather-degrading bacterium. // Appl. Environ. Microbiol., 1990, V. 56, №6, P. 1509- 1515.

188. Yuguo Z., Zhao W., Xiaolong C. Alpha-amylase production by Bacillus subtilis with dregs in an external-loop airlift bioreactor.// 1369 703X, 2000, V. 5(2), P. 115-121.

189. Zaghloul Tl., Abdel Wahab AE., Mostafa MH. Enhanced alkaline protease production in addition to alpha-amylase via constructing a Bacillus subtilis strain.// Appl. Biochem. Biotechnol., 2000, 84-86, 319 327.139

190. Я хотела бы выразить глубокую благодарность д.т.н., проф. Римаревой Любови Вячеславовне за руководство при выполнении и написании диссертационной работы.

191. Выражаю глубокую и искреннюю признательность к.т.н. Цуриковой Нине Васильевне и д.х.н. Синицыну Аркадию Пантелеймоновичу за помощь и непосредственное руководство в выполнении диссертационной работы.

192. Глубокую благодарность выражаю Нефедовой Лидии Ивановне, Бурцевой Эльвире Ивановне, Веселкиной Татьяне Николаевне и Ефремовой Вере Федоровне за неоценимую помощь при получении экспериментальных данных для диссертационной работы.

193. Выражаю глубокую благодарность Воейковой Татьяне Александровне и коллективу «Лаборатории актиномицетов» ФГУП «ГНИИ Генетика» за проведенную работу по получению мутантного штамма.