Синтез биологически активных аналогов тимидина и их химическая модификация тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 02.00.10, кандидат химических наук Березовская, Юлия Владимировна

• Березовская, Юлия Владимировна
• кандидат химических наук
• 2003

Оглавление диссертации кандидат химических наук Березовская, Юлия Владимировна

Список сокращений

Введение

I Литературный обзор

1. Молекулярные системы комбинированной терапии на основе нуклеозидных ингибиторов обратной транскриптазы

1.1. Системы с ингибиторами протеазы

1.2. Системы с полисахаридами

1.3. Системы с пептидами

1.4. Другие системы

2. Молекулярные системы транспорта нуклеозидных ингибиторов обратной транскриптазы

2.1. Системы неспецифического транспорта

2.2. Системы направленного транспорта нуклеозидных ингибиторов обратной транскриптазы

2.2.1. Системы доставки нуклеозидов на основе никотиновой кислоты

2.2.2. Системы доставки нуклеозидов с аминокислотами, пептидами и белками

2.2.3. Системы доставки нуклеозидов с углеводами

II Обсуждение результатов

1. Синтез d4T (2',3'-дидегидро-3'-дезокситимидина)

2. Получение производных на основе синтонов с остатком акриловой кислоты

3. Получение производных на основе синтона с остатком хлоруксусной кислоты

4. Получение производных на основе синтонов с двухосновными кислотами

5. Изучение гидролиза производных

6. Изучение противовирусной активности препаратов

III Экспериментальная часть

IV Выводы

V Литература 121 Благодарности

Список сокращений

AZT З'-азидо-З'-дезокситимидин

Вое трет-бутилоксикарбонил

ВОР бензотриазол-1 -ил-окси-тер мс(диметил амино)фосфонийгексафторфосфат

СС50 50%-ная цитотоксическая доза: концентрация, которая необходима для уменьшения жизнеспособности инфицированных клеток на 50%

CDI 1Ч,М-карбонилдиимидазол d4T 2' ,3 '-дидегидро-3 '-дезокситимидин

DCC N,N' -дициклогексилкарбодиимид

DCHA дициклогексиламин

DIPCDI 1,3-диизопропилкарбодиимид

DIPEA диизопропилэтиламин

DMAP 4-Ы,М-диметиламинопиридин

DMF диметилформамид

DMSO диметилсульфоксид

ЕС50 5 0%-ная противовирусная эффективная доза: концентрация, которая уменьшает на 50% индуцируемый вирусом цитопатический эффект

FBS бычья эмбриональная сыворотка

FLT З'-фторо-З'-дезокситимидин

Fmoc флуоренилметоксикарбонил

HOBt N-гидроксибензотриазол

HOSu N-гидроксисукцинимид

MBzl napa-метоксибензил m-CPBA .ме/яа-хлорнадбензойная кислота

NAD никотинамидадениндинуклеотид

NADH восстановленная форма NAD

NIRT нуклеозидный ингибитор обратной транскриптазы

Nuc-OH нуклеозид

SI индекс селективности: отношение СС50 к ЕС50.

11/2 время полураспада

TBAF тетрабутиламмоний фторид

TBDMS га/?ет-бутилдиметилсилил

TBTU 0-( 1 Н-бензотриазол-1 ^)-N,N,N' ,N' -тетраметилуронийтетрафторборат

Tempo* свободный радикал: 2,2,6,6-тетраметил-1-пиперидинилокси

TFA трифторуксусная кислота

THF тетрагидрофуран

TMSC1 триметилсилилхлорид

ВИЧ вирус иммунодефицита человека

ГЭБ гематоэнцефалический барьер

МАТ моноклональное антитело

МТТ 3-(4,5-диметилтиазол-2-ил)-2,5-дифенилтетразолий бромид

СПИД синдром приобретенного иммунодефицита

ТСХ тонкослойная хроматография

ЯМР ядерный магнитный резонанс

При описании ЯМР-спектров: с синглет д дублет т триплет кв квартет м мультиплет дд дублет дублетов дт дублет триплетов уш. уширенный м.д. миллионная доля

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Синтез биологически активных аналогов тимидина и их химическая модификация»

Структурные аналоги природных нуклеозидов используются для лечения некоторых видов вирусных заболеваний и в частности заболеваний, вызванных ретровирусами (например, ВИЧ), а также онкологических заболеваний. Эти соединения не имеют гидроксильной группы в 3'-положении дезоксирибозидного цикла и поэтому являются ингибиторами обратной транскриптазы (NIRT) и синтеза нуклеиновых кислот. Специфичность их фармакологического действия зависит от химической структуры, наличия тех или иных заместителей в молекуле, при этом все они в той или иной степени токсичны. Сегодня в медицине для лечения ВИЧ-инфекции широко используются несколько NIRT, среди них наиболее часто: зидовудин (азидотимидин; З'-азидо-3'дезокситимидин; AZT, производитель - Glaxo Wellcome Inc.), ставудин (З'-дезокси-2'3'дидегидротимидин; d4T, производитель - Bristol-Myers Squibb Со.) и диданозин (2',3'-дидезоксиинозин, ddl), обладающие наилучшим в этом классе соединений индексом селективности. К сожалению, эти нуклеозиды являются гидрофильными соединениями, их способность к пассивному транспорту через клеточную мембрану невысока, поэтому требуется достаточно высокая, приближающаяся к токсической, терапевтическая концентрация препарата в плазме. Кроме того, эти препараты обладают еще одним существенным недостатком, а именно, при их постоянном применении возникают различные штаммы ВИЧ, резистентные к ним. Для решения этих проблем, помимо поиска новых активных аналогов, в последнее время также ведется интенсивный поиск новых производных перечисленных выше нуклеозидов. Проводят многочисленные химические модификации этих аналогов нуклеозидов, в том числе путем создания производных с различными гидрофобными остатками.

Как установлено, первой стадией метаболизма этих соединений в клетке является фосфорилирование по 5'-гидроксильной группе дезоксирибозильного кольца, а во взаимодействие с обратной транскриптазой или клеточными ДНК-полимеразами вступают 5'-трифосфаты нуклеозидов. Поэтому в течение длительного времени основной стратегией модификации было получение различных производных 5'-фосфатов этих соединений. К сожалению, многие из таких препаратов, демонстрируя превосходную активность in vitro, оказались малоактивными in vivo. Связано это, по-видимому, с тем, что, проникая в клетку, такие производные подвергаются дефосфорилированию клеточными ферментами, утрачивая, таким образом, свое преимущество над исходными препаратами. Кроме того, гидрофильная по природе фосфатная группировка никак не улучшает транспорт препарата через гидрофобные клеточные мембраны. Поэтому представляется перспективным использование других биодеградируемых модифицирующих групп, обладающих дополнительными возможностями транспорта через мембрану (например, сродством к тем или иным клеточным рецепторам) или дополнительными фармакологическими свойствами (стратегия так называемых double drug, «двойных лекарств»).

Настоящая работа посвящена разработке методов синтеза подобных препаратов, модифицированных по 5'-положению дезоксирибозидного цикла.

Использование различных по структуре производных нуклеозидов для создания систем комбинированной терапии ВИЧ, возможно, будет тормозить или блокировать возникновение резистентности вируса к лекарственному препарату. Гидрофобные производные легче диффундируют через клеточные мембраны, и, следовательно, требуют более низкой терапевтической концентрации, а производные, обладающие сродством к специфическим рецепторам, легче проникают через гематоэнцефалический барьер или целенаправленно доставляют препарат к другим органам-мишеням.

Работы этого направления активно развиваются в последние годы. Охватить весь их спектр в рамках одного литературного обзора весьма затруднительно, поэтому далее описываются только сложноэфирные и карбонатные производные наиболее широко применяемых NIRT - азидотимидина и ставудина.

Литературный обзор

Этиологическим агентом синдрома приобретенного иммунодефицита (СПИД) является вирус иммунодефицита человека (ВИЧ), относящийся к классу ретровирусов. В настоящее время для терапии ВИЧ-инфекции широко применяются две группы антиретровирусных препаратов, действующих на разных стадиях жизненного цикла вируса. В первую группу входят ингибиторы обратной транскриптазы вируса (эти агенты также делят на нуклеозидные и ненуклеозидные), а во вторую ингибиторы протеазы. Далее речь пойдет о различных производных нуклеозидных ингибиторов обратной транскриптазы (NIRT).

Исторически NIRT являются первыми лекарствами, применяемыми в терапии ВИЧ [1]. В 1987 году был зарегистрирован первый антиретровирусный препарат Азидотимидин (AZT, Зидовудин, 3'-азидо-2',3'-дидезокситимидин) [2-7], который применялся в терапии наиболее широко. Позднее фирма «Bristol Myers Squibb» выпустила на рынок препарат Ставудин (d4T; 2',3'-дидегидро-3'-дезокситимидин) [5, 8-11], обладающий менее выраженной токсичностью по отношению к стволовым клеткам костного мозга и в меньшей степени подавляющий репликацию митохондриальной ДНК.

В настоящее время в медицинской практике используют комбинированную терапию ВИЧ. Применяют различные комбинации NIRT и их сочетания с отличными по действию агентами. Так, наиболее широко распространенной комбинированной терапией является применение ингибиторов обратной транскриптазы в сочетании с ингибиторами протеазы. Также используют соединения, обладающие другими видами активности: иммуноактивные вещества (пептиды и полисахариды); соединения, влияющие на устойчивость вирусной частицы (например, бицикламы); антагонисты рецепторов клеток-мишеней ВИЧ (пептиды). Для комбинированной терапии предлагается использовать так называемые double drug, которые при попадании в физиологическую среду будут разрушаться клеточными ферментами на два действующих агента. Таким производным двух основных нуклеозидных ингибиторов обратной транскриптазы (AZT и d4T) посвящен первый раздел данного обзора.

Второй раздел содержит данные о другом виде модификации NIRT. AZT и d4T являются гидрофильными соединениями и не могут свободно проходить сквозь клеточные мембраны и, особенно, преодолевать гематоэнцефалический барьер (ГЭБ) и проникать в ткани мозга, а, следовательно, не могут подавлять репликацию вируса в этих клетках. Для увеличения проникающей способности гидрофильных молекул нуклеозидов и увеличения их терапевтической эффективности получают различные их производные. Такие соединения относят к классу prodrug, это означает, что такое соединение, преодолев биологический барьер, будет разрушено клеточными ферментами на активное лекарство и транспортный остаток, не обладающий ярко выраженным негативным физиологическим действием. Для модификации используют: а) гидрофобные молекулы, облегчающие свободную диффузию лекарства через мембраны; б) биологически активные соединения, использующие активные транспортные системы клеточных мембран.

Наиболее простым и удобным способом модификации является использование свободной 5'-гидроксильной группы нуклеозидов [12]. Поскольку после попадания такого производного в клетку исходное лекарство должно высвобождаться из транспортной формы или два лекарства должны отделиться одно от другого, то связь между нуклеозидом и модифицирующим остатком должна легко разрушаться клеточными ферментами. Описано значительное количество производных МЯТ, содержащих в 5'-положении фосфатную или фосфонатную группу, имитирующую природную структуру нуклеотида. Однако в данном обзоре речь пойдет о менее изученной группе производных по 5'-положению нуклеозида - сложноэфирных и карбонатных. Наиболее широко исследуется возможность применения сложноэфирной связи, так как последняя легко разрушается эстеразами с высвобождением лекарства/лекарств.

Заключение диссертации по теме «Биоорганическая химия», Березовская, Юлия Владимировна

Выводы

1. Разработан метод параллельного синтеза производных нуклеозидных ингибиторов обратной транскриптазы ВИЧ: зидовудина и ставудина.

2. Получены синтоны фармакологически активных нуклеозидов, зидовудина и ставудина, пригодные для параллельного синтеза.

3. На основе выбранных синтонов получены пять рядов новых производных зидовудина и ставудина с разной степенью гидрофобности.

4. Показано, что гидролиз сложноэфирных производных протекает быстрее в присутствии ферментов.

5. Получены предварительные результаты оценки противовирусной активности ряда синтезированных производных.

Список литературы диссертационного исследования кандидат химических наук Березовская, Юлия Владимировна, 2003 год

1. Rideout, J.L.; Barry, D.W.; Lehrman, S.N.; St. Clair, M.H.; Furman, P.A.; Beacham, L.M.,1.I; LeBlanc, H.S.; Freeman, G.A. Therapeutic nucleosides. 1986. Wellcome Foundation Ltd., UK. EP 199451.

2. Chen, B.-C.; Quinlan, S.L. Process for preparing AZT. 1995. Bristol-Myers Squibb Co., USA. EP 653437.

3. Czernecki, S.; Valery, J.M. Preparation of AZT (3'-azido-3'-deoxythymidine) and related compounds. 1991. Universite Pierre et Marie Curie, Fr. EP 427587.

4. Klaveness, J.; Rise, F.; Undheim, K.; Hatlelid, J. Preparation of 2',3'-dideoxy- or 3'-azido-2',3'-dideoxynucleosides for the treatment of human immunodeficiency virus (HIV) infection. 1990. Nycomed A/S, Norway. EP 362967.

5. Wilson, J.D. Preparation of 3'-azido-3'-deoxythymidine. 1990. Burroughs Wellcome Co., USA. US 4921950.

6. Wilson, J.D.; Almond, M.R.; Rideout, J.L. Preparation of zidovudine by improved processes not requiring thymidine. 1988. Wellcome Foundation Ltd., UK. EP 295090.

7. Chen, B.-C.; Stark, D.R.; Baker, S.R.; Quinlan, S.L. Preparation of 2',3'-didehydro-3'-deoxythymidine from 5-methyluridine. 1997. Bristol-Myers Squibb Co., USA. US 5672698.

8. Spector, R.H.; Chen, B.-C.; Quinlan, S.L. Preparation of d4T (2',3'-didehydro-3'-deoxythymidine) from 5-methyluridine. 1996. Bristol-Myers Squibb Company, USA. EP 735044.

9. Chen, B.-C.; Stark, D.R.; Baker, S.R.; Quinlan, S.L. Preparation of 2',3'-didehydro-3'-deoxythymidine D4T. 1995. Bristol-Myers Squibb Co., USA. EP 653436.

10. Kiso, Y.; Matsumoto, H.; Yamaguchi, S.; Kimura, T. Design of small peptidomimetic HIV-1 protease inhibitors and prodrug forms. Lett. Pept. Sci. 1999, 6(5-6), 275-281.

11. Kiso, Y.; Fujino, M. Preparation of multidrug-bonded compounds as anti-HIV agents. 2000. Takeda Chemical Industries, Ltd., Japan. JP 2000309598.

12. Van Calenbergh, S. and Nair, V. Synthesis of a nucleoside bioconjugate system as a potential anti-HIV agent. Nucleosides & Nucleotides, 1999, 18(4&5), 737-738.

13. Gao, Y., Katsuraya, K., Kaneko, Y., Mimura, T., Nakashima, H., and Uryu, T. Synthesis of azidothymidine-bound curdlan sulfate with anti-human immunodeficiency virus activity in vitro. Polymer Journal, 1998, 30(1), 31-36.

14. Gao, Y., Katsuraya, K., Kaneko, Y., Mimura, T., Nakashima, H., and Uryu, T. Synthesis, enzymatic hydrolysis, and anti-HIV activity of AZT-spaser-curdlan sulfates. Macromolecules, 1999, 32(25), 8319-8324.

15. Gao, Y., Katsuraya, K., Kaneko, Y., Mimura, T., Nakashima, H., and Uryu, T. Synthesis of azidothymidine-bound sulfated alkyl oligosaccharides and their inhibitory effects on AIDS virus infection in vitro. Polymer Journal, 1998, 30(3), 243-248.

16. Vlieghe, P.; Kraus, J.-L.; Clerc, T.; Salles, J.-P. Preparation of nucleoside-carrageenan conjugates as antiviral and antitumor agents. 2000. Laboratoires Laphal S.A., Fr. WO 0077019.

17. McDougal, J.S.; Kennedy, M.S.; Sligh, J.M.; Cort, S.P.; Mawle, A., and Nicholson, J.K.A. Binding of HTLV-III/LAV to T4+ T cells by a complex of the viral protein and the T4 molecule. Science, 1986, 231, 382-385.

18. Uchiyama, Т.; Yoshino, H.; Takemoto, M.; Achiwa, К. Synthesis of the 2',3'-dideoxynucleoside derivatives of the specific binding peptide part of CD4. Chem. Pharm. Bull. 1991,39(11), 3091-3093.

19. Ряховский, B.B.; Малекин, С.И.; Носова, B.M.; Кисин, А.В.; Кругляк, Ю.Л.; Курочкин, В.К. Конъюгаты 2',3'-дидегидро-3'-дезокситимидина с тимогеном. Синтез, анти-ВИЧ-активность. Биоорг. Химия, 1999, 25(7), 499-504.

20. Schols, D., Este, J.A., Henson, G., and De Clerq, E. Bicyclams, a class of potent anti-HIV agents are targeted at the HIV coreceptor Fusin/CXCR-4. Antiviral Res. 1997, 35(3), 147-156.

21. Dessolin, J.; Vlieghe, P.; Bouygues, M.; Medou, M.; Quelever, G.; Camplo, M.; Chermann, J.C., and Kraus, J.L. Tri-N-Boc-tetraazamacrocycle-nucleoside conjugates: synthesis and anti-HIV activities. Nucleosides & Nucleotides, 1998, 17(5), 957-968.

22. Dessolin, J.; Galea, P.; Vlieghe, P.; Chermann, J.-C., and Kraus, J.-L. New bicyclam AZT conjugates: design, synthesis, anti-HIV evaluation, and their interaction with CXCR-4 coreceptor. J. Med. Chem. 1999, 42, 229-241.

23. Cheng, Q.; Oritani, Т.; Horiguchi, Т.; Yamada, Т.; Mong, Y. Synthesis and biological evaluation of novel 9-functional heterocyclic coupled 7-deoxy-9-dihydropaclitaxel analogue. Bioorg. Med Chem. Lett. 2000, 10(5), 517-521.

24. Zahran, M.A.; Kovacs, L.; El Sakka, I.; Pedersen, E.B.; Nielsen C. The potential of aspirin in pro-drug synthesis. A new potential delivery system of AZT and FLT. Arch. Pharm. (Weinheim, Ger.) 1996, 329(8-9), 417-420.

25. Kawaguchi, Т.; Ishikawa, K.; Seki, Т.; Juni, K. Ester prodrugs of zidovudine. J. Pharm. Sci. 1990, 79(6), 531-533.

26. Seki, Т.; Kawaguchi, Т.; Juni, K. Enhanced delivery of zidovudine through rat and human skin via ester prodrugs. Pharm. Res. 1990, 7(9), 948-952.

27. Kawaguchi, Т.; Endoh, Т.; Seki, Т.; Juni, K. Plasma concentrations of zidovudinein rats via oral administration of its ester prodrugs. J. Pharm. Sci. 1991, 80(4), 404-405.

28. Parang, K.; Wiebe, L.I.; Knaus, E.E. In vitro anti-hepatitis B virus activities of 5-O-myristoyl analogue derivatives of 3'-fluoro-2',3'-dideoxythymidine (FLT) and 3'-azido-2',3'-dideoxythymidine (AZT). J. Pharm. Pharm. Sci. 1998, 1(3), 108-114.

29. Horrobin, D.F.; Stewart, J.C.M.; Winther, M.D. Preparation of fatty acid derivatives of nucleosides or acylic nucleosides as antiviral agents. 1990. Efamol Holdings PLC, UK. EP 393920.

30. Boerretzen, B.; Dalen, A.; Myhren, F.; Stokke, K.T. Preparation of nucleoside analog fatty esters as antiviral compounds. 1994. Norsk Hydro A/S, Norway. WO 9422887.

31. Bradley, M.O.; Shashoua, V.E.; Swindell, C.S.; Webb, N.L. Nucleoside analog compositions and uses thereof. 1999. Neuromedica, Inc., US. WO 9926958.

32. Yatvin, M.B.; Stowell, M.H. Covalent polar lipid conjugates with antimicrobial and antineoplastic drugs for targeting to biological protected sites. 2000. Oregon Health Sciences University, US. WO 0033883.

33. Aggarwal, S.K., Gogu, S.R., Rangan, S.R.S., and Agrawal, K.C. Synthesis and biological evaluation of prodrugs of zidovudine. J. Med. Chem. 1990, 33, 1505-1510.

34. Agrawal, K. AZT analogs for treatment of retrovirus infections. 1990. Tulane Educational Fund, Inc., USA. WO 9004969.

35. Bailey, J.M.; Nelson, K.A.; Lightfoote, M.; Mook, R.A. Antiviral action & tissue uptake of AZT-sterol dicarboxylates. Biochem. Soc. Trans. 1998, 26(4), S390.

36. Hussain, R., Toth, I., and Gibbons, W.A. Synthesis and structural elucidation of lipophilic azidothymidine conjugates. Liebigs Ann. Chem. 1992, 169-171.

37. Whittaker, R.G.; Bender, V.J.; Reilly, W.G.; Moghaddam, M. Therapeutic compound — fatty acid conjugates. 1999. Commonwealth Scientific and Industrial Research Organisation, Austral. US Pat. 5952499.

38. Sergheraert, C., Pierlot, C., Tartar, A., Henin, Y., and Lemaitre, M. Synthesis and anti-HIV evaluation of d4T and d4T 5'-monophosphate prodrugs. J. Med. Chem. 1993, 36, 826-830.

39. Hammer, K., Hatlelid, J., Grotli, M., Arukwe, J., Klaveness, J., Rise, F., and Undheim, K. Ether, carbonate and urethane deoxynucleoside derivatives as prodrugs. Acta Chem. Scand. 1996, 50, 609-622.

40. Pochet, S.; Kansal, V.; Destouesse, F.; Sarfati, S.R. Alkylglycoside carbonates of 3'-azido-3'-deoxythymidine. Tetrahedron Lett. 1990, 31(42), 6021-6024.

41. Vlieghe, P.; Kraus, J.-L.; Clerc, T.; Salles, J.-P. Preparation of esters derived from nucleosides as antiviral agents. 2001. Laboratoires Laphal S.A., Fr. WO 0104134.

42. Vlieghe, P.; Kraus, J.-L.; Clerc, T.; Salles, J.-P. Preparation of nucleosides as antiviral agents. 2000. Laboratoires Laphal S.A., Fr. WO 0077020.

43. Torrence, P.F.; Kinjo, J.; Lesiak, K.; Balzarini, J.; De Clercq, E. AIDS dementia: synthesis and properties of a derivative of 3'-azido-3'-deoxythymidine (AZT) that may become 'locked* in the central nervous system. FEBS Lett. 1988, 234(1), 135-140.

44. Agrawall, K. AZT analogs for treatment of retrovirus infections. 1990. Tulane Educational Fund, Inc., USA. WO 9004969.

45. Palomino, E.; Kessel, D.; Horwitz, J.P. A dihydropyridine carrier system for sustained delivery of 2',3'-dideoxynucleosides to the brain. J. Med. Chem. 1989, 32(3), 622625.

46. Lee, B.-H.; Lim, M.-K.; Shin, J.-H.; Jang, T.-S.; Park, J.-S.; Kang, S.-W. Synthesis and antitumor activity of 2',3'-didehydro-3'-deoxythymidine and its derivative. Bull. Korean Chem. Soc. 1997, 18(7), 711-714.

47. Gogu, S.R., Aggarwal, S.K., Rangan, S.R.S., and Agrawal, K.C. A pro-drug of zidovudine with enhanced efficacy against human immunodeficiency virus. Biochem. Biophys. Res. Commun. 1989, 160(2), 656-661.

48. Little, R.; Bailey, D.; Brewster, M.E.; Estes, K.S.; Clemmons, R.M.; Saab, A; Bodor, N. Improved delivery through biological membranes. XXXIII. Brain-enhanced delivery of azidothymidine (AZT). J. Biopharm. Sci. 1990, 1(1), 1-18.

49. Brewster, M.; Anderson, W.R.; Webb, A.I.; Pablo, L.M.; Meinsma, D.; Moreno, D.; Derendorf, H.; Bodor, N.; Pop, E. Evaluation of a brain-targeting zidovudine chemical delivery system in dogs. Antimicrob. Agents Chemother. 1997, 41(1), 122-128.

50. Pop, E.; Liu, Z.Z.; Vlasak, J.; Anderson, W.; Brewster, M.E.; Bodor, N. A dihydroisoquinoline targetor-based acid resistant chemical delivery system of azidothymidine (AZT). Drug Delivery 1993, 1(2), 143-149.

51. Pop, E.; Liu, Z.Z.; Vlasak, J.; Anderson, W.R.; Brewster, M.E.; Bodor, N.S. Synthesis and evaluation of a novel chemical delivery system of zidovudine with increased stability at lowpH. Pharm. Sci. 1995, 1(6), 265-269.

52. Han, H.-K.; Oh, D.-M.; Amidon, G.L. Cellular uptake mechanism of amino acid ester prodrugs in Caco-2/hPEPTl cells overexpressing a human peptide transporter. Pharm. Res. 1998, 15(9), 1382-1386.

53. Beauchamp, L.M.; Orr, G.F.; de Miranda, P.; Burnette, T.; Krenitsky, T.A. Amino acid ester prodrugs of acyclovir. Antiviral. Chem. Chemother. 1992, 3, 157-164.

54. Hidalgo, I.J.; Raub, T.J.; Borchardt, R.T. Characterization of the human colon carcinoma cell line (Caco-2) as a model system for intestinal epithelial permeability. Gastroenterology 1989, 96, 736-749.

55. De Bethune, M.P.; De Clercq, E.D.A.; Dejonghe, J.P.; Pauwels, R.W.J.; Trouet, A. 3'-Azido-3'-deoxythymidine (AZT) derivatives active against the AIDS virus. 1990. IRE-Celltarg S. A., Belg. EP 357495.

56. Tadayoni, B.M.; Friden, P.M.; Walus, L.R.; Musso, G.F. Synthesis, in vitro kinetics, and in vivo studies on protein conjugates of AZT: evaluation as a transport system to increase brain delivery. Bioconjugate Chem. 1993, 4, 139-145.

57. Friden, P.M., Walus, L., Musso, G., Taylor, M., Malfroy, В., and Starzyk, R. Anti-transferrin receptor antibody and antibody-drug conjugates cross the blood-brain barrier. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 1991, 88, 4771-4775.

58. Miles-Brown, J. Therapeutic agents, and intermediates for the synthesis thereof. 1991. Oxford Virogy PLC, GB. WO 9112021.

59. Pochet, S.; Kansal, V.; Destouesse, F.; Sarfati, S.R. Alkylglycoside carbonates of 3'-azido-3 '-deoxythymidine. Tetrahedron Lett. 1990, 31(42), 6021-6024.

60. Balkenhohl, F., von dem Bussche-Htinnefeld, С., Lansky, A., Zechel, C. Combinatorial synthesis of small organic molecules. Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 1996, 35, 2288-2337.

61. Nezi, A., Ostresh, J.M., Houghten, R.A. The current status of heterocyclic combinatorial libraries. Chem. Rev. 1997, 97, 449-472.

62. Ellman, J.A. Design, synthesis, and evaluation of small-molecule libraries. Acc. Chem. Res. 1996, 29, 132-143.

63. Gordon, E.M., Gallop, M.A., Patel, D.V. Strategy and tactics in combinatorial organic synthesis. Application to drug discovery. Acc. Chem. Res. 1996, 29, 144-154.

64. Terret, N.K. Combinatorial chemistry. 1998. Oxford University Rress.

65. Horwitz, J.P., Chua, J., Da Rooge, M.A., Noel, M., Klundt, I.L. The formation of 2',3'-unsaturated pyrimidine nucleosides via a novel p-elimination reaction. J. Org. Chem. 1966, 31, 205-211.

66. Бергман, Э.Д., Гинзбург, Д., Паппо, Р. Реакция Михаэля. Сборник «Органические реакции», 1963, М. «Издательство иностранной литературы», 10, 181.

67. Berezovskaya, Yu., Chudinov, М., Kirillova, Yu., Shastina, N., Shvets, V., Yurkevich, A. Design of the new molecular transport systems for the nucleosides-pharmacophores carrying. Nucleosides & Nucleotides. 1998,17(9-11), 2127-2133.

68. Berezovskaya, Yu., Chudinov, М., Yurkevich, A. Combinatorial optimization of antiviral prodrugs properties. Nucleosides, Nucleotides and Nucleic Acids. 2003, 22(5-8), 837-839.

69. Neises, В., Sterlich, W. Simple method for the esterification of carboxylic acids. Angew. Chem. Int. Ed. 1978,17(7), 522-524.

70. Castro, В., Dormoy, J.R., Evin, G., Selve, C. Tetrahedron Lett. 1975, 1219.

71. Castro, В., Evin, G., Selve, C., Seyer, R. Peptide coupling reagents; VIII. A high yield preparation of phenyl esters of amino acids using benzotriazolyloxytris-dimethylamino.phosphonium hexafluorophosphate (BOP reagent). Synthesis, 1977, 6, 413.

72. Meitzer, M.S., Skillman, D.R., Hoover, D.L., Hanson, B.D., Turpin, J.A., Kalter, D.C., Gendelman, H.E. Macrophages and the human immunodeficiency virus. Immunol. Today, 1990, 77,217-223.1. Благодарности

73. Автор выражает благодарность к.х.н. Чудинову М.В. за неоценимые консультации, компании "ChemBridge Corp." и лично Свиридову С.И., а также родителям за материальную поддержку в период выполнения работы.