Штаммы вируса Западного Нила, циркулирующие на территории дельты Волги тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.03, кандидат биологических наук Альховский, Сергей Владимирович

• Альховский, Сергей Владимирович
• кандидат биологических наук
• 2004

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Альховский, Сергей Владимирович

ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1 Экология вируса Западного Нила (ЗН) и его значение в инфекционной патологии человека.

1.1.1 Географическое распространение вируса

Западного Нила.

1.1.2 Филогенетические взаимоотношения различных изолятов вируса Западного Нила.

1.1.3 Значение членистоногих в экологии вируса Западого Нила.

1.1.4 Значение позвоночных в экологии вируса Западного Нила.

1.1.5 Клинические проявления лихорадки Западного Нила.

1.2 Молекулярно - генетическая организация вируса

Западного Нила.

Собственные исследования

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

2.1 Место сбора и объем полевого материала.

2.2 Методы сбора, транспортировки, хранения и подготовки полевых материалов.

2.3 Вирусологическое обследование.

2.4 Штаммы и нуклеотидные последовательности вируса Западного Нила, использованные в работе.

2.5 Выделение тотальной РНК из осветленной клеточной или тканевой суспензии.

2.6 Реакция обратной транскрипции.

2.7 Проведение полимеразной цепной реакции.

2.8 Электрофорез ДНК.

2.9 Секвенирование ДНК.

2.10 Компьютерная обработка данных.

Глава 3. ПОЛУЧЕННЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ.

3.1 Разработка ОТ-ПЦР тест - системы для детекции вируса ЗН.

3.1.1 Подбор праймеров.

3.1.2 Определение специфичности ОТ-ПЦР тест-системы.

3.1.3. Определение чувствительности ОТ-ПЦР тест - системы.

3.2 Зараженность вирусом Западного Нила птиц дельты Волги и

Волго - Ахтубинской поймы.

3.2.1 Выявление РНК вируса Западного Нила у птиц методом ОТ-ПЦР.

3.2.1.1 Зараженность вирусом ЗНптиц в различных природных зонах дельты Волги.

3.2.1.2 Зараженность вирусом ЗН диких и синантропных птиц дельты Волги.

3.2.1.3 Выявление РНК вируса ЗН у мелких позвоночных, в дельте Волги.

3.2.2. Вирусологическое обследование птиц дельты Волги.

3.3 Генетический анализ штаммов вируса ЗН, выделенных в дельте Волги от птиц в 2001 и 2002 гг.

3.3.1 Анализ нуклеотидных последовательностей.

3.3.2 Анализ предсказанных аминокислотных последовательностей.

3.3.3 Филогенетический анализ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Штаммы вируса Западного Нила, циркулирующие на территории дельты Волги»

Актуальность проблемы

Вирус Западного Нила (ЗН), являющийся этиологическим агентом лихорадки Западного Нила (ЛЗН), широко распространен практически по всем частям света. Ареал его распространения охватывает практически весь африканский континент, Юго-Западную и Южную Азию, Южную и некоторые центральные части Европы (Львов, 2000; Hublek, 1999). Начиная с 1999 г. вирус ЗН выявляется также на территории североамериканского континента (Lancotti et al., 1999). Для Австралийского континента топотипным является вирус Кунджин, который изначально рассматривался как самостоятельная нозологическая единица. Однако данные генетических и антигенных исследований позволяют рассматривать штаммы вируса Кунджин как топотипные, характерные для Австралии изоляты вируса ЗН, отнесенные к 1-ой филогенетической группе (Scherret et al., 2001; 2002; Hall et al., 2001).

Эпидемические вспышки JI3H различного масштаба и интенсивности регистрируются практически каждый год в странах Африки и Ближнего Востока, реже в Европе и Индии, иногда в Средней Азии (Львов, 2000; Murgue et al., 2002). Особую актуальность для здравоохранения вирус ЗН приобрел после ряда крупных, сопровождающихся высокой смертностью эпидемий ЛЗН, прошедших в конце 1990-х гг. в Румынии (1996), России и США (1999), Израиле (2000). Необычной, нехарактерной для ЛЗН особенностью данных вспышек явилось большое (до 30-40 %) число случаев с поражениями ЦНС в виде менингита и энцефалита, а также высокая смертность (в среднем 10 %). В Израиле и России заболеваемость ЛЗН фиксировалась и в последующие годы, но в меньшем масштабе (Петров и др., 2001; Ковтунов и др., 2003; Bin et al., 2001). В США в 2003 г. зарегистрировано более 9000 случаев заболеваний ЛЗН, из которых около 30 % с поражениями ЦНС (www.cdc.gov). Вследствие этих событий ЛЗН была причислена к проблемам новых и вновь возвращающихся инфекций, актуальность которых для мирового здравоохранения продолжает оставаться на высоком уровне (Львов, 2000).

Вирус ЗН принадлежит роду Flavivirus (семейство Flaviviridae) и является арбовирусом. Резервуаром вируса в природе являются птицы, а основными переносчиками служат комары, преимущественно рода Culex. Инфекция JI3H относится к природно-очаговым зоонозам поскольку имеет выраженный очаговый характер (Львов и др., 1989). Природная циркуляция вируса ЗН в очаге происходит в системе птицы - комары - птицы, при этом комары также эффективно заражают и других теплокровных, в том числе человека. Зараженность вирусом ЗН птиц является важным показателем активности природного очага и позволяет прогнозировать развитие эпидемической ситуации. Особенно важную роль при этом отводят синантропным птицам, массово заселяющих населенные пункты и их окрестности.

В нашей стране активные очаги ЛЗН, сохраняющиеся на протяжении десятилетий, расположены в Астраханской области, на территории дельты Волги. Здесь почти ежегодно фиксируется спорадическая заболеваемость ЛЗН, иногда эпидемические вспышки. Институтом вирусологии им. Д.И. Ивановского РАМН на территории Астраханской области проводится мониторинг циркуляции ЛЗН, который включает в себя наблюдения за вирусной активностью во всех звеньях экологической системы вирус -переносчики — позвоночные хозяева - переносчики - люди. Настоящая работа выполнена в рамках данного мониторинга и посвящена исследованию вовлеченности в циркуляцию вируса ЗН птиц в дельте Волги и Волго -Ахтубинской пойме.

Цель и задачи работы.

Цель настоящей работы заключалась в обследовании птиц дельты Волги и Волго - Ахтубинской поймы относительно зараженности вирусом ЗН и изучении генетических свойств циркулирующих здесь штаммов вируса

Западного Нила. Для достижения поставленной цели было необходимо решить следующие задачи:

1. Разработать тест - систему на основе ОТ-ПЦР для чувствительной и специфичной детекции вируса ЗН в биологических образцах.

2. С использованием разработанной ОТ-ПЦР тест - системы определить уровни зараженности вирусом ЗН птиц дельты Волги и Волго - Ахтубинской поймы в 2001 и 2002 гг.

3. Определить нуклеотидную последовательность структурной области генома штаммов вируса ЗН, выделенных от птиц дельты Волги и Волго - Ахтубинской поймы в 2001 и 2002 гг.

4. На основании полученных нуклеотидных последовательностей провести филогенетический анализ и определить генетические характеристики выделенных штаммов вируса ЗН.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Разработана чувствительная и высокоспецифичная ОТ-ПЦР тест - система для детекции вируса ЗН в биологических образцах.

2. Определены показатели зараженности вирусом ЗН птиц в дельте Волги и Волго - Ахтубинской поймы в 2001 и 2002 гг.

3. Определены молекулярно - генетические характеристики штаммов вируса ЗН, выделенных от птиц в дельте Волги в 2001 и 2002 гг.

Научная новизна и практическая ценность работы.

Разработана ОТ-ПЦР тест - система для специфичной детекции вируса ЗН в биологических образцах с чувствительностью до 50 БОЕ/мл. При разработке системы использовались нуклеотидные последовательности штаммов вируса ЗН, принадлежащие ко всем известным филогенетическим группам, что обеспечило максимально возможную, на данный момент, универсальность тест - системы. Использование разработанной системы целесообразно при проведении исследований, посвященных вирусу ЗН, в которых необходима быстрая и надежная детекция вируса в биологических образцах, в том числе и с диагностическими целями. Разработанная тест -система защищена патентом РФ №2199589 от 27.02.2003.

Впервые в России проведено масштабное исследование зараженности вирусом ЗН птиц в природных очагах дельты Волги и Волго - Ахтубинской поймы с использованием ПЦР. Всего обследовано более 1000 птиц, принадлежащих к 20 различным семействам, собранных как в диких, так и в антропогенных биоценозах. Согласно полученным результатам уровень зараженности вирусом ЗН птиц в дельте Волги составил 13,3 % и 9,6 % в 2001 и 2002 гг. соответственно. Зараженность птиц Волго - Ахтубинской поймы в 2002 г. не превысила 3,3 %. Зараженность вирусом ЗН синантропных птиц составила в 2002 г. в дельте Волги 16,9 %, а на территории Волго - Ахтубинской поймы 4,1 %.

В результате вирусологического обследования, от птиц дельты Волги и Волго - Ахтубинской поймы было выделено 12 штаммов вируса ЗН. При этом два штамма вируса были выделены в 2001 г. и 10 штаммов в 2002 г. Для изучения их молекулярно - генетических характеристик, у 11 выделенных штаммов были определены нуклеотидные последовательности 5'-концевой области генома, включающей в себя 5'-нетранслируемый регион и гены всех структурных белков. На основе сравнения полученных нуклеотидных последовательностей было показано, что выделенные штаммы вируса ЗН практически идентичны штамму Ast986, выделенному здесь в 1999 г. от больного во время крупной вспышки J13H, и несут в рассматриваемой области (по сравнению с ним) от 4 до 8 нуклеотидных и до 3 аминокислотных замен. Полученные результаты свидетельствует о тесной связи вирусной популяции, циркулирующей среди птиц, с эпидемическими штаммами вируса.

Показано, что сайт потенциального гликозилирования оболочечного белка Е у штаммов, выделенных в дельте Волги от птиц, представлен в четырех формах, при этом у двух штаммов, вследствие замены Asn(154)—»Ser, функциональная активность сайта элиминирована.

Заключение диссертации по теме «Молекулярная биология», Альховский, Сергей Владимирович

выводы

1. Разработана высокоспецифичная ОТ-ПЦР тест - система для детекции вируса Западного Нила в биологических образцах с чувствительностью до 50 БОЕ/мл. Разработанная тест — система защищена патентом РФ №2199589 от 27.02.2003 г.

2. Определены уровни зараженности вирусом Западного Нила птиц в дельте Волги и Волго - Ахтубинской пойме. По результатам обследования методом ОТ-ПЦР, зараженность птиц в дельте Волги составила 13,3% и 9,6% в 2001 и 2002 гг. соответственно. Зараженность птиц Волго - Ахтубинской поймы составила в 2002 г. 3,3 %. Полученные результаты отражают высокий уровень напряженности природных очагов вируса Западного Нила в дельте Волги и могут быть использованы для комплексной эпидемиологической оценки активности вируса Западного Нила в регионе.

3. Определена первичная структура 5'-концевой области (протяженностью 2400 н.о.) генома 11 штаммов вируса Западного Нила, выделенных в дельте Волги от птиц в 2001 и 2002 гг. Результаты сравнения первичной структуры 5'-нетранслируемого региона и генов белков вириона (core, ргеМ, Е) с аналогичными последовательностями изолятов вируса Западного Нила различного географического происхождения позволили отнести изученные штаммы к первой филогенетической группе.

4. Генетический анализ 11 штаммов вируса Западного Нила, выделенных в дельте Волги от птиц в 2001 и 2002 гг. показал их практически полную идентичность со штаммами Ast986 и Ast901, выделенными здесь в 1999 и 2000 гг. от больных во время вспышки лихорадки Западного Нила. Полученные данные свидетельствуют о тесной связи вирусной популяции, циркулирующей среди птиц, с эпидемическими штаммами вируса.

5. Структура сайта потенциального гликозилирования обол очечного белка Е (позиция 154 - 157 а.о.) у изученных штаммов вируса Западного Нила представлена в четырех формах. У 7 штаммов сайт представлен последовательностью 154NYST157. Два штамма несут здесь замену Ser(i56)—»Рго и Ser(i56)—»Туг соответственно. У двух штаммов (LEIV-Ast02-2-2044 и LEIV-Ast02-2-298), вследствие замены Asn(i54)—»Ser, функциональная активность сайта элиминирована.

Благодарности

Считаю своим приятным долгом выразить глубочайшую признательность директору Института вирусологии им. Д.И. Ивановского РАМН академику Д.К. Львову, оказавшего большую честь, предоставив возможность выполнения данной работы. Отдельно хотелось поблагодарить В. Л. Громашевского, М.Ю. Щелканова, В.А. Аристову и весь коллектив лаборатории экологии вирусов, за неоценимую помощь в выполнении работы и доброжелательное отношение. Также выражаю благодарность А.Г. Прилипову за ценные советы и помощь в работе с нуклеотидными последовательностями. Хотелось поблагодарить A.M. Бутенко, В.Ф. Ларичева, а также всех сотрудников Института вирусологии им. Д.И. Ивановского РАМН с кем мне посчастливилось общаться в ходе выполнения работы.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Альховский, Сергей Владимирович, 2004 год

1. Березин В.В., Решетников И.А. Вирус лихорадки Западного Нила у диких птиц (эксперементальные данные) // в кн.: Вирусы, экологически связанные с птицами. Омск. инст. проиродноочаг. инф.-Омск.-1971.-С.93-94.

2. Булычев В.П., Данияров А., Гордеева З.Е. Выделение вируса Западного Нила от комаров Culex pipiens в Таджикистане //в кн.: Арбовирусы.Инст.виросологии им.Д.И.Ивановского АМН СССР.-М.-1981,-с.95-96.

3. Бутенко A.M.,Чумаков М.П., Беляева А.П. Серологическая идентификация астраханского вируса из клещей //В кн.: Клещевой энцефалит, кемеровская клещевая лихорадка и другие арбовирусные инфекции / Под ред.М.П.Чумакова.-М.-1964.-С.7-9.

4. Бтенко A.M.,Чумаков М.П., Башкирцев В.Н. Новые данные об изучении инфекции Западного Нила в СССР // Материалы 15-й научн. сессии ИГТВЭ АМН СССР.-М,-1968.-Вып.3.-С. 175-176.

5. Бутенко A.M.,Чу маков М.П., Башкирцев В.Н. Выделение штамма вируса Западного Нила в Астраханской области из комаров и вороны // в кн.: Этиология, эпидемиология и клиника КГЛ и лихорадки Западного Нила / под ред. М.П. Чумакова.-Астрахань.-1969.- С.39-40.

6. Виноград И.А., Белетская Г.В., Чумаченко С.С., Ардаматская Т.Н., Рогочий Е.Г. Изоляция вируса Западного Нила в южной Украине // Вопр. вирус.-1982.-№5.-С.55-57.

7. Войнов И.Н., Рытик П.Г., Григорьев А.И. Арбовирусные инфекции в Белоруссии / Вирусы и вирусные инфекции человека.-М.-1981.-С.86-87.

8. B.Р. Обухова.-Новосибирск.:Наука.-1972.-С.229-313.

9. Жданов В.М., Львов Д.К. Эволюция возбудителей инфекционных болезней.-М. Медицина.-1984.-270 с.

10. Львов Д.К. Лихорадка Западного Нила // Вопр.вирусол.-2000.- №2. С.24-34.

11. Львов Д.К., Клименко С.М., Гайдамович С.Я. Арбовирусы и арбовирусные инфекции.-М. :Медицина.-1986.-336 с.

12. Львов Д.К., Лебедев А.Д. Экология арбовирусов.-М.:Медицина.-1974.-184 с.

13. Сиденко Б.Ф., Думина А.Л., Грекова B.C. Циркуляция вируса Западного Нила среди птиц Украинского Причерноморья // в кн.: Экология вирусов, вып I.-M.-1973.- с.164-169.

14. Ставицкий А.В. Изучение восприимчивости диких уток к вирусу Западного Нила // в кн.: Вирусы, экологически связанные с птицами. Омск. инст. проиродноочаг. инф.-Омск.-1971 .-с. 18-19.

15. Федотова Т.Н., Ставский А.В., Федоров В.Г. Лихорадка Западного Нила у эксперементально инифицированных грачей // в кн.: Вирусы, экологически связанные с птицами. Омск. инст. проиродноочаг. инф.-Омск.-1971.-С. 19-22.

16. Чумаков М.П., Беляева А.П., Бутенко A.M., Мартьянова Л.И. Вирус Западного Нила в СССР // Эпидемиология вирусных инфекций.-1968.-Т. 12.-С.365-373.

17. Чумаков М.П., Бутенко A.M., Башкирцев В.Н. Выделение вируса Западного Нила от больных людей в Астраханской области // Этиология, эпидемиология и клиника крымской геморрагической лихорадки и лихорадки Западного Нила.-Астрахань.-1969.-С.36-3 8.

18. Шишкина Е. О. автореф. дисс. на соискание степени канд. биол. наук.-М.-2003.

19. Adams S., Broom A., Sammels L., Harnett A., Howard M., Coelen R., Mackenzi J., Hall R. Glycosylation and antigenic variation among Kunjin virus isolates // Virology.-1995.-№206.-pp.49-56.

20. Anderson J.F., Andreadis T.G., Vossbrink C.R. Tirrel S., Wakem E.M., French R.A., Garmendia A.E., Van Kruiningen H.J. Isolation West Nile virus from mosquitoes, crow, and cooper's hawk in Conecticut // Science.-1999.-Vol.286.-pp.2331-2333.

21. Bernkopf H., Levine S., Nerson R. Isolation of West Nile virus in Israel // J. Infect. Dis.-1953 .-№93 .-pp.207-218.

22. Berthet F.X., Zeller H.G., Drouet M.T., Rauzier J., Digoutte J.P., Deubel V., Extensive nucleotide change and deletions within the elnvelope glycoprotein gene of Euro-African West Nile viruses // J.of General Virology.- 1997.-Vol.78.-pp.2293-2297.

23. Besselaar Т. G. and Blackburn N. K. Antigenic analysis of West Nile virus strains using monoclonal antibodies // Arch. Virol.-1988.-№99.-pp.75-88.

24. Blackwell J.L., Brinton M.A. Translation elongation factor-1 alpha nteracts with the 3' stem-loop region of West Nile virus genomic RNA // J. Virol.-1997.-Vol.71.-№9.-pp.6433-6444.

25. Blackwell J.L., Brinton M.A. BHK cell proteins that bind to the 3' stem-loop structure of the West Nile virus genom RNA // J. Virol.-1995.-Vol.69.-№9.-pp.5650-5658.

26. Brinton M.A., Dispoto J.H. Sequence and secondary structure analysis of the 5'-terminal region of flavivirus genome RNA // Virology.- 1988.-VoI.l62.-№2.-pp.290-299.

27. Brinton M.A., Fernandez A.V., Dispoto J.H. The 3'-nucleotides of flavivirus genomic RNA form a conserved secondary structure // Virology.-1986.-Vol. 151.-№l.-pp.l 13-121.

28. Briese Т., Jia X.Y., Huang C.,Grudy L.J., Lipkin W. Identification of Kunjin-West Nile like flavivirus in brains of patients with New York encephalitis (letter)// Lancet.-1999.-Vol.354.-pp. 1261 -1262.

29. Burt F.G., Grobbelaar A., Leman P., Anthony F., Gibson G., Swanepoel R. Phylogenetic relationships of Southern African West Nile virus isolates // Emerg. Infect. Dis.-2002.-Vol.8.-№8.-pp.820-826.

30. Campbell G., Marfin A., Lanciotti R., Gubler D. West Nile virus // Lancet.-2002.-Vol.2.-pp.519-529.

31. Chambers J., Halevy M., Nestorowicz A., Rice Ch., Lustig S. West Nile virus envelope proteins: nucleotide sequence analysis of strains differing in mouse neuroinvasiveness //J. of General Virology.-1998.-Vol.79.-pp.2375-2380.

32. Chomczynski P., Sacchi N. Single-step method of RNA isolation by acid guanidinium thiocyanate-phenol-chloroform extraction // Anal. Biochem.-1987.-Vol. 162.-№ 1 .-pp. 156-159.

33. Coia G., Parker M.D., Speighe G., Byrne M.E., Westaway E.G. Nucleotid and complete amino acid sequences of Kunjin virus: definitive gene order and characteristics of the virus specified proteins // J. of General Virology.-1988.-Vol.69.-№ 1 .-pp. 1-21.

34. Darwish M. and Ibrahim A. Prevalence of antibodies to arboviruses in Egypt // Am. J. Trop. Med. Hyg.-1975.-№24.-pp.981-985.

35. Eidson M., Komar N., Sorhage F., Nelson R., Talbot Т., Mostoshari F. Crow deaths as a sentinel surveillance system for West Nile virus in the northeastern United States, 1999//Emerg. Infect. Dis.-2001.-№7.-pp.615-620.

36. Eidson M., Kramer L., Stone W., Hagiwara Y., Schmit K. Dead bird surveillance as an early warning system for West Nile virus // Emerg. Infect. Dis.-2001.-№7.-pp.631-635.

37. Filipe A.R. and Pinto M.R. Survey for antibodies to arboviruses in serum of animals from Southern Portugal // Am. J. Trop. Med. Hyg.-1969.-№18.-pp.423-426.

38. Filipe A.R., Isolation in Portugal of West Nile virus from Anopheles Maculipennis II Acta Virol.-1972.-№16.-pp.361.

39. Filipe A.R., de Andrade H.R. Arboviruses in the Iberian Peninsula // Acta Virol.-1990.-Vol.34.-pp. 1057-1063.

40. Gonzales M.T. and Filipe A.R. Antibodies to arboviruses in Northwestern Spain // Am. J. Trop. Med. Hyg.-1977.-№26.-pp.792-797.

41. Hall R.A., Scherret J.H., Mackenzi J.S. Kunjin virus: an Australian variant of West Nile? // Ann. N Y Acad. Sci.-2001.-Dec.-№951.-pp. 153-60.

42. Hammam H. M., Clark D. H., Price W.H. Antigenic variations of West Nile virus in relation to geography // Am. J. Epid.-1965.-№82.-pp.40-55.

43. Hammam H. M. and Price W.H. Further observation on geographic variation in the antigenic character of West Nile and Japanese В encephalitis viruses // Am. J. Epid.-1966.-№83 .-p. 113.

44. Hannoun C., Panthier R., Mouchet J. Isolation in France of the West Nile virus fron patients and from the vector Culex modestus ficalbi // C. R. Acad. Sci. Paris.-1964.-№259.-pp.4170-4172.

45. Hayes C.G. West Nile fever // в кн.: The arboviruses epidemiology and ecology / под ред. Monath T.P.-CRC press.-1989.-pp.59-88.

46. Hubalek Z. West Nile fever a reemerging mosquito-borne viral disease in Europe //Emerging Infection Disease.-1999.-Vol.5.-№ 5.-pp.643-650.

47. Jia X.Y., Briese Т., Jordan I., Rambaut A., Chi H.C., Mackenzie J.S., Hall R.A., Scherret J., Lipkin W.I. Genetic analisis of West Nile New York 1999 encephalitis virus // Lancet.- 1999.-Dec 4.,-№354.,-pp. 1971-1972.

48. Jupp P.G., Mcintosh B.M. Qantitative experiments on the vector capability of Culex (Culex) pipiens Univittatus Theobald with West Nile and Sindbis virus // J. Med. Entomol.-1970.-№7.-pp.371 -373

49. Juricova Z and Hubalek Z. Arbovirological examination of free-living dirds in the Czech Republic // Proc. 2nd European Conf. Avian medicine and Surgery.-Utrecht.-1993.-pp.507-521.

50. Juricova Z., Pinowski J., Literak I., Hahm K., Romanowski J. Antibodies to alphavirus, flavivirus and bunyavirus in house sparrows (Passer domesticus) and tree sparrows (P. montanus) in Poland // Avian Dis.-1998.-№42.-pp.182-185

51. Goddard L., Roth A.E., Reisen W., Scott T.W. Vector competence of California mosquitoes for West Nile virus // Emerg. Infect Dis.-2002.-№8.-pp.l385-1391.

52. Goldblum N., Jasinka-Klingberg W., Klingberg M.A., Marberg K., Sterk V.V. The natural history of West Nile Fever. I. Clinical observations during an epidemic in Israel // Am. J. Hyg.-1956.-Nov.-Vol.64.-№3.-pp.259-69.

53. Katz G., Rannon L., Nili E., Danon Y.L. West Nile fever occurrence in a new endemic site in the Negev // Isr. J. Med. Sci.-1989.-№25.-pp.39-41.

54. Komar N., Langevin S., Hinten S., Nemeth N., Edwards E., Hettler D., Davis В., Bowen R., Bunning M. Experimental infection of North American birds with the Ney York 1999 strain of West Nile virus // Emerg. Infect. Dis.-2003.-Vol.9.-№3.-pp.311-322.

55. Kramer L., Bernard K. West Nile virus infection in birds and mammals // Ann. N. Y. Acad. Sci.-2001 .-№951 .-pp.84-93.

56. Lanciotti R.S., Kerst A.J. Nucleic acid sequence-based amplification assays for rapid detection of West Nile and St. Louis encephalitis viruses // J. Clin. Microbiol. 2001Vol.39.-№ 12.-pp.4506-4513.

57. Le Guenno В., Bougermouth A., Azzam Т., Bouakaz R. West Nile: a deadly virus? // Lancet.-1995 .-№348.-p. 1315.

58. Malkinson M., Bannet C., Weisman Y., Pokamunski S., King R., Drouet M. Introduction of West Nile virus in Middle east by migrating White Storks // Emerg. Infect. Dis. 2002.-№8.-pp.392-397.

59. Malkinson M, Banet C. The role of birds in the ecology of West Nile virus in Europe and Africa // Curr. Top. Microbiol. Immunol.-2002.-№267.-pp.309-322.

60. Mathiot C.C., Georges A.J., Deubel V. Comparative analysis of West Nile strains isolated from human beings and animal hosts using monoclonal antibodies and cDNA restriction profiles // Res. Virol.-1990.-№141.-pp.533-543.

61. Mcintosh B.M., McGilivray G., Dicknson D., Taljaard J.J. Ecological studies on Sindbis and West Nile viruses in South Africa. IV. Infection in a wild avian population // S. Afr. J. Med. Sci.-1968.-№33.-pp.l05-l 12.

62. Mcintosh B.M., Jupp P.G., Dos Santos, Meenehan G.E. Epidemics of West Nile and Sindbis viruses in south Africa with Culex (Culex) univittatus Theobald as vector // S. Afr. J. Sci.-1976.-№72.-pp.295-300.

63. McMinn P.C. The molecular basis of virulence of the encephalitogenic flaviviruses // J. of General Virology.-1997.-Vol.78.- pp.2711-2722.

64. Murgue В., Zeller H., Deubel V. The ecology and epidemiology of West Nile virus in Africa, Europe and Asia // Curr. Top. Microbiol. Immunol.-2002.-№267.-pp. 195-221.

65. Naficy K. and Saidi S. Serological survey on viral antibodies in Iran // Trop. Geogr. Med.-1970.-№22.-pp. 183-188.

66. Nir Y., Goldwasser R., Lasowski Y., Avivi A. Isolation of arboviruses from wild birds in Israel // Am. J. Epidem.-1967.-№86.-pp.372-378.

67. Nir Y., Avivi A., Lasowski Y., Margalit J., Goldwasser R. Arbovirus activity in Israel // Isr. J. Med. Sci.-1972.-№8.-pp 1695-1701.

68. Panella NA, Kerst AJ, Lanciotti RS, Bryant P, Wolf B, Komar N. Comparative West Nile virus detection in organs of naturally infected American Crows (Corvus brachyrhynchos) //Emerg. Infect. Dis.-2001. Vol.7.-№4.-pp.754-755.

69. Porter K.R., Summers P., Dubois D., Puri В., Nelson W., Henchal E., Oprandy J.J., Hayes C.G. Detection of West Nile virus by the polymerase chain reaction and analysis of nucleotide sequence variation // Am. J. Trop. Med. Hyg.-1993.-№48.~ pp.440-446.

70. Perelman A. and Stern J. Acute pancreatitis in West Nile fever // Am. J. Trop. Med. Hyg.-1974.-№23.-pp. 1150-1152.

71. Pierre V., Drouet M.T., Deubel V. Identification of mosquito-borne flavivirus sequences using universal primers and reverse transcription / polymerase chain reaction // Res. Virol.-1994.-№ 145.-pp.93-104.

72. Rice C.M., Strauss E.G., Strauss J.H. Structure of the flavivirus genome // В кн.: The Togaviridae and Flaviviridae / Под ред. M.J. Shlesinger.-New York.:Plenum.-1986.-pp.279

73. Rice C.M., Lenches E.M., Eddy S.R., Shin J., Sheets R.L., Strauss J.H. Nucleotide sequence of yellow fever vims: implications for flavivirus gene expression and evolution // Sciens.-1985.-№299.-pp.726-733.

74. Ryan M.D., Monaghan S., Flint M. Virus-encoded proteinases of the Flaviviridae // J.of General Virology.-1998.-Vol.79.-pp.947-959.

75. Sardelis M.R., Turell M.J., Dohm D.J., O'Guinn M. Vector competence of select North American Culex and Coquillettidia mosquitoes for West Nile virus // Emerg. Infect. Dis.-2001 .-№7-pp. 1018-1022.

76. Savage H.M., Ceianu C., Nicolescu G., Karabatsos N., Lanciotti R., Vladimirescu A., Laiv L., Ungureanu A., Romanca C., Tsai Т.Е.//Am. J. Trop. Med. Hyg.-1999.-Vol.61.-№.4.-pp.600-611.

77. Scherret J.H., Poidinger M., Mackenzie J.S., Broom A.K., Deubel V., Lipkin W.I., Briese Т., Gould E.A., Hall R.A. The relationships between West Nile and Kunjin viruses // Emerg. Infect. Dis.-2001.-Vol.7.-№4.-pp.697-705.

78. Scherret J.H., Mackenzie J.S., Hall R.A., Deubel V., Gould E.A. Phylogeny and molecular epidemiology of West Nile and Kunjin viruses // Curr. Top. Microbiol. Immunol.-2002.-№267.-pp.373-90.

79. Shi P.Y., Brinton M.A., Veal J.M., Zhong Y.Y., Wilson W.D. Evidence for the existence pseudoknot structure at the 3' terminus of the flavivirus genomic RNA // Biochemestry.-1996.-Vol.35.-№13.-pp.4222-4230.

80. Shi P.Y., Li W., Brinton M.A. Cell proteins bind specificalli to West Nile virus minus-strand 3' stem-loop RNA // J. Virol.- 1996.-Vol.70.-№9.-pp.6278-6287.

81. Smithburn K.C., Hughes T.P., Burke A.W., Paul J.H. A neurotropic virus isolated from the blood of a native of Uganda // Am. J. Trop. Med.- 1940.-№20.-pp.471-92.

82. Smithburn K.C. Differentiation of West Nile virus from the virus of St. Louis and Japanese В encephalitis // J. Immunol.-1942.-№44.-pp.25-31.

83. Steele K., Linn M., Schoepp R., Komar N., Geisbert Т., Manduca R. Pathology of fatal West Nile virus infection in native and exotic birds during the 1999 outbreak in New York sity, New York. // Vet. Pathol.-2000.-№37.-pp.208-224.

84. Taylor R.M., Work Т.Н., Hurlbut H.S., Rizk F. A study of the ecology of West Nile virus in Egypt// Am. J. Trop. Med.-1956.-№5.-pp.579-620.

85. Triki H., Murri S., Le Gueno В., Bouattours S., Bahri O., Hili K., Sidhom M., Dellagi K. West Nile viral meningo-encephalitis in Tunisia // Med. Trop. (French).-2001.-Vol.6 l.-№6.-pp.487-90.

86. Tsai T.F. Factors changing epidemiology of Japanese encephalitis and West Nile fever // Factors in the emergence of Arbovirus disease / под ред. J. Saluzzo, B. Dodet.-Elsevier, Paris.-1997.-pp. 179-189.

87. Tsai T.F., Popovici F., Cernescu C. West Nile encephalitis epidemic in southeastern Romania// Lancet.-1998.-Vol.352.-pp.767-771.

88. Turell M.J., O'Guinn M., Oliver J. Potential for New York mosquitoes to transmit West Nile virus // Am. J. Trop. Med. Hyg.-2000.-№62.-pp.413-414.

89. Wengler G., Castle E., Leidner U., Nowak T. Sequence analysis of the membrane protein V3 of the flavivirus and of its gene // Virology.-1985.-№147.-pp.264-274.

90. Work Т.Н., Hurlbut H., Taylor R. Isolation of the West Nile virus from hooded crow and rock pigeons in the Nile Delta // Proc. Soc. Expt. Biol. Med.-1953.-№84.-pp719-722.

91. Work Т.Н., Hurlbut H., Taylor R. Indigenous wild birds of the Nile delta as potential West Nile virus circulating reservoirs // Am. J. Trop. Med.-1955.-№4.-pp.872-888.

92. Victor T.J., Malathi M., ravi V., Palani G., Appavoo N.C. First outbreak of Japanese encephalitis in two villages of Dharmapuri district in Tamil Nadu // Indian. J. Med. Res.-2000.-№l 12.-pp.l93-197.

93. Yamshchikov V.F., Compans R.W. Regulation of the late events in the flavivirus protein processing and maturation // Virology.-1993.-Vol. 193.-№1.-pp.38-51.

94. Yamshchikov V.F., Trent D.W., Compans R.W. Upregulation of signalase processing and induction of prM-E secretion by the flavivirus NS2b-NS3 protease: roles of protease components // J. Virol.-1997.-Vol.7 l.-№6.-pp.4364-4371.