Исследование зараженности членистоногих переносчиков дельты Волги и Волго-Ахтубинской поймы вирусом Западного Нила и молекулярно-генетическая характеристика штаммов LEIV-Ast00-986-human и LEIV-Vlg99-27889-human ВЗН тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.03, кандидат биологических наук Воронина, Анна Георгиевна

• Воронина, Анна Георгиевна
• кандидат биологических наук
• 2005

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Воронина, Анна Георгиевна

ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1 Общая характеристика флавивирусов.

1.1.1 Общий план строения и трансляции генома флавивирусов.

1.1.1.2 Структура генома.

1.1.1.3 Репликация РНК.

1.1.1.4 Трансляция и процессинг.

1.1.1.5 Стратегия вирусного генома.

1.1.2 Белки флавивирусов и их функции.

1.1.2.1 Структурные белки флавивирусов.

1.1.2.2 Неструктурные белки флавивирусов.

1.2 Филогения различных изолятов вируса

Западного Нила.

1.3 Исследования ВЗН, проведенные в лаборатории Молекулярной генетики института Вирусологии РАМН.

1.4 Этиология и эпидемиология.

1.5 Клиника заболевания.

1.6 Резервуар вируса среди позвоночных.

1.7 Переносчики вирусной инфекции.

1.8 Сохранение вирусной популяции в межэпизоотический период.

1.9 Ареал распространения заболевания за рубежом.

1.10 Ареал распространения заболевания в России и странах СНГ.

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

2.1 Место сбора и объем полевого материала.

2.2 Методы сбора, транспортировки, хранения и подготовки полевых материалов.

2.3 Методы молекулярно-биологических исследований.

2.3.1. Выделение тотальной РНК из осветленной клеточной или тканевой суспензии.

2.3.2 Реакция обратной транскрипции.

2.3.3 Проведение полимеразной цепной реакции.

2.3.4. Электрофорез ДНК.

2.3.5. Секвенирование ДНК.

2.4 Компьютерная обработка данных.

Глава 3. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.

3.1.Определение полноразмерных нуклеотидных последовательностей геномов штаммов вируса ЗН LEIV-AstOO-986-human и LEIV-Vlg99-27889-human.

3.2. Создание ОТ-ПЦР тест системы для обнаружения РНК вируса JI3H в клинических образцах и пробах полевого материала

3.3 Определение специфичности и чувствительности ОТ-ПЦР тест - системы, лабораторная модификация системы.

3.4 Исследование комаров и клещей Астраханской области на наличие вируса ЗН при помощи ОТ-ПЦР системы.

3.4.1. Анализ зараженности видового состава комаров.

3.5. Нуклеотидный и филогенетический анализ 5'-концевой области генома вируса ЗН из полевых изолятов.

3.6. Обсуждение.

ВЫВОДЫ.

Благодарности.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Исследование зараженности членистоногих переносчиков дельты Волги и Волго-Ахтубинской поймы вирусом Западного Нила и молекулярно-генетическая характеристика штаммов LEIV-Ast00-986-human и LEIV-Vlg99-27889-human ВЗН»

Вирус ЗН принадлежит к семейству флавивирусов {Flaviviridae ) p. Flavivirus. Семейство флавивирусов ( Flaviviridae ) включает в себя ряд инфекционных вирусов, вызывающих опасные заболевания у человека и животных.

Актуальность проблемы.

Эпидемические вспышки лихорадки Западного Нила (JT3H) различного масштаба и интенсивности регистрируются практически каждый год в странах Африки и Ближнего Востока, реже в Европе и Индии, иногда в Средней Азии (Львов, 2000; Murgue et al., 2002).

Обширная эпидемическая вспышка JT3H возникла в июле-октябре 1996 г. в Юго-Восточной Румынии в южном течении Дуная. Заболеваемость достигла 12,4 на 100 тыс. и охватила 7 областей, включая Бухарест.

Вспышки лихорадки Западного Нила описывались в Израиле в период с 1950 по 1970 гг., однако продолжающиеся по сей день серологические и эпидемиологические исследования показывают, что циркуляция вируса в этом регионе продолжается. (Hindiyeh, 2001)

Эпидемическая вспышка J13H совершенно неожиданно возникла в конце июля-сентября 1999г. с пиком во второй половине августа в Нью-Йорке и его окрестностях. (Lancotti et al., 1999). В общей сложности выявлено 56 случаев (31 подтвержден лабораторно), из которых 7 с летальным исходом (12,5%). Вирус ЗН обнаружен в комарах Culex pipiens, отловленных в сентябре-октябре в Нью-Йорке, и округах Нассау и Суффолк, а с помощью ПЦР положительный результат получен с комарами Culex spp. и Aedes vexans, собранных в середине сентября в округе Хадсон, Нью

Джерси. С помощью ПЦР положительные результаты получены при обследовании мозга погибших птиц из Нью-Йорка (Бронис, Бруклин, Манхэттен, Квинс, о.Статен, а также из округов Нассау,Оранж,Рокленд,Саратога,Суффолк и Вестчестер), в штате Нью-Джерси (12 округов), в штате Коннектикут (три округа). (Ebel, 2001) (Lanciotti, 2002)

Начиная с 1999 г. существенно обострилась эпидемическая ситуация по лихорадке Западного Нила на юге России (Lvov, 2004). Возникшие в последние 4 года на юге России вспышки лихорадки Западного Нила (ЛЗН), свидетельствуют о приоритетной значимости проблемы новых и возвращающихся инфекций в системе биобезопасности. (Львов, 2000).

В связи с широким распространением заболевания возникает необходимость исследования причин. Все это обусловило необходимость разработки программы комплексного изучения природных и синантропных очагов инфекции.

Инфекция JT3H относится к природно-очаговым зоонозам поскольку имеет выраженный очаговый характер (Львов и др., 1989). Природная циркуляция вируса ЗН в очаге происходит в системе «птицы - комары - птицы», при этом комары также эффективно заражают и других теплокровных, в том числе человека. Зараженность вирусом ЗН комаров является важным показателем активности природного очага и позволяет прогнозировать развитие эпидемической ситуации.

В связи с широким распространением заболевания возникает необходимость исследования причин. Все это обусловило необходимость разработки программы комплексного изучения природных и синантропных очагов инфекции.

Цель и задачи работы.

Целью данной работы явилась разработка молекулярно-биологических подходов к обследованию полевых материалов и оценка эпидемической ситуации распространенности вируса ЗН в дельте Волги и Волго-Ахтубинской пойме

Для достижения поставленной цели было необходимо решить следующие задачи: Задачи:

Определение полноразмерной нуклеотидной последовательности штаммов LEIV-AstOO-986-human и LEIV-Vlg99-27889-human вируса ЗН, выделенных во время эпидемических вспышек 1999г. и 2000г., с целью использования этих данных при дизайне праймеров для ОТ-ПЦР диагностической тест-системы.

- Разработка ОТ-ПЦР системы для чувствительной и специфичной детекции РНК вируса ЗН в биологических образцах.

- С использованием разработанной ОТ-ПЦР системы исследовать пробы полевого материала (комары и клещи), собранные в местах вспышки J13H (дельта Волги и Волго-Ахтубинская пойма в 20012004гг.), на наличие в них РНК вируса Западного Нила, определение процента зараженности переносчиков.

- Нуклеотидный анализ фрагментов геномов вируса ЗН из проб полевого материала. На основании полученных нуклеотидных последовательностей с целью проведения филогенетического анализа и определения генетических характеристик выделенных штаммов вируса ЗН, циркулирующих в популяциях переносчиков в период вспышек 2001-2004гг.

Положения, выносимые на защиту

- Полные нуклеотидные последовательности геномов штаммов вируса ЗН, полученных от человека LEIV-AstOO-986-human и LEIV-Vlg99-27889-human.

- Разработка и оптимизация ОТ-ПЦР тест-системы для обнаружения РНК вируса ЗН в полевых образцах.

- Определение общего и видового процента зараженности вирусом ЗН комаров и клещей, обитающих в дельте Волги

- Типирование штаммов ЗН, циркулировавших среди переносчиков в период вспышек 2001-2004г. с помощью филогенетического анализа фрагментов РНК.

Практическое значение.

В результате проведенной работы были определены полные нуклеотидные последовательности геномов двух штаммов вируса, выделенных на территории Астраханской и Волгоградской областей, предоставленных институтом вирусологии им. Д. И. Ивановского.

Созданная в процессе работы ОТ-ПЦР тест-система является высокочувствительной и достаточно проста в применении, что позволит использовать эту систему непосредственно в местах сбора полевого материала. Разработанная тест-система способна детектировать РНК вируса ЗН, относящиеся ко всем четырем филогенетическим группам. Таким образом это обеспечило максимально возможную, на данный момент, универсальность тест -системы. Разработанная тест - система «Способ обнаружения вируса лихорадки Западного Нила» защищена патентом РФ №2199589 от

27.02.2003. (авторы изобретения: Воронина А.Г., Прилипов А.Г., Львов Д.К., Самохвалов Е.И., Садыкова Г.К., Альховский С.В.,)

Впервые в России проведено масштабное исследование зараженности вирусом ЗН членистоногих переносчиков в природных очагах дельты Волги и Волго - Ахтубинской поймы с использованием ПНР. Всего обследовано 284308 комаров и 7303 клещей, собранных как в диких, так и в антропогенных биоценозах за 2001-2004гг. Согласно полученным результатам, средний уровень зараженности вирусом ЗН за 2001-2004гг. среди комаров -0,028%, среди клещей - 0,74%. Также, в результате филогенетического анализа положительных ПЦР-фрагментов, были сделаны выводы относительно групповой принадлежности обнаруженных штаммов вируса ЗН. Нами было определено, что на обследуемой территории циркулировали 79 штаммов (91,86%) относящихся к 1-му генотипу, 4 штамма (4,65%) - ко II генотипу, ни одного к III, и 3 штамма (3,49%) относятся к IV генотипу.

Заключение диссертации по теме «Молекулярная биология», Воронина, Анна Георгиевна

ВЫВОДЫ

1. Определена полная нуклеотидная последовательность двух штаммов вируса Западного Нила, выделенных от человека (LEIV-AstOO-986-human и LEIV-Vlg99-27889-human), и установлено, что эти штаммы относятся к I генотипу.

2. Разработан и апробирован оригинальный метод, основанный на использовании специфических праймеров и условий реакции, позволяющий детектировать РНК вируса Западного Нила в биопробах комаров и клещей с высокой чувствительностью и специфичностью.

3. По результатам обследования биопроб (289782 комаров, 7303 клещей) методом ОТ-ПЦР, зараженность комаров, собранных в дельте Волги и Волго - Ахтубинской пойме составила за 2001-2004гг. 0,032%, клещей (2002-2003гг.) - 0,74%, что свидетельствует о высоком уровне напряженности природных очагов вируса Западного Нила в дельте Волги и Волго - Ахтубинской пойме.

4. На основании определения первичной структуры участков генома вируса Западного Нила ( 5-НТР -core) в 86 образцах ВЗН, установлено, что в дельте Волги и Волго - Ахтубинской пойме циркулируют вирусы ЗН, относящиеся к I, II и IV генотипу. Показано, что наибольшее распространение имеют штаммы первого генотипа (91,86%), штаммы второго и четвертого генотипа встречаются значительно реже (4,65% и 3,49% соответственно).

Благодарности

Считаю необходимым выразить глубочайшую признательность директору Института вирусологии им. Д.И. Ивановского РАМН академику Д.К. Львову, предоставившему возможность выполнения данной работы. Отдельную благодарность хочу выразить всему коллективу лаборатории молекулярной генетики за помощь в выполнении работы и доброжелательное отношение. Благодарю вед. научн. сотр., к.б.н. В.Л. Громашевского, ст. науч. сотрудника, к.б.н. Е.И. Самохвалова и весь коллектив лаборатории экологии вирусов. Также выражаю благодарность руководителю лаборатории биотехнологии д.б.н. профессору М.М. Гараеву за внимательное отношение и неоценимую помощь в подготовке диссертации, а также всех сотрудников Института вирусологии им. Д.И. Ивановского РАМН с кем мне посчастливилось общаться в ходе выполнения работы.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Воронина, Анна Георгиевна, 2005 год

1. Березин В.В., Решетников И.А. Вирус лихорадки Западного Нила у диких птиц (экспериментальные данные) // в кн.: Вирусы, экологически связанные с птицами.Омск. инст. природноочаг. инф.-Омск.-1971.-С.93-94.

2. Булычев В.П., Данияров А., Гордеева З.Е. Выделение вируса Западного Нила от комаров Culex pipiens в Таджикистане //в кн.: Арбовирусы.Инст.виросологии им.Д.И.Ивановского АМН СССР.-М.-1981.-с.95-96.

3. Бутенко A.M.,Чумаков М.П., Беляева А.П. Серологическая идентификация астраханского вируса из клещей //В кн.: Клещевой энцефалит, кемеровская клещевая лихорадка и другие арбовирусные инфекции / Под ред.М.П.Чумакова.-М.-1964.-С.7-9.

4. Бтенко A.M.,Чумаков М.П., Башкирцев В.Н. Новые данные об изучении инфекции Западного Нила в СССР // Материалы 15-й научн. сессии ИПВЭ АМН СССР.-М.-1968.-Вып.З .-С .175-176.

5. Бутенко A.M.,Чумаков М.П., Башкирцев В.Н. Выделение штамма вируса Западного Нила в Астраханской области из комаров и вороны // в кн.: Этиология, эпидемиология и клиника КГЛ и лихорадки Западного Нила / под ред. М.П. Чумакова.-Астрахань.-1969.- С.39-40.

6. Виноград И.А., Белетская Г.В., Чумаченко С.С., Ардаматская Т.Б., Рогочий Е.Г. Изоляция вируса Западного Нила в южной Украине // Вопр. вирус.-1982.-№5.-С.55-57.

7. Войнов И.Н., Рытик П.Г., Григорьев А.И. Арбовирусные инфекции в Белоруссии / Вирусы и вирусные инфекции человека.-М.-1981.-С.86-87.

8. B.Р. Обухова.-Новосибирск.:Наука.-1972.-С.229-313.

9. Жданов В.М., Львов Д.К. Эволюция возбудителей инфекционных болезней.-М. Медицина.-1984.-270 с.

10. Львов Д.К. Лихорадка Западного Нила // Вопр.вирусол.-2000 №2. - С.24-34.

11. Львов Д.К., Клименко С.М., Гайдамович С.Я. Арбовирусы и арбовирусные инфекции.-М.Медицина.-1986.-336 с.

12. Львов Д.К., Лебедев А.Д. Экология арбовирусов.-М. Медицина.-1974.-184 с.

13. Сиденко Б.Ф., Думина А.Л., Грекова B.C. Циркуляция вируса Западного Нила среди птиц Украинского Причерноморья // в кн.: Экология вирусов, вып I.-M.-1973.- с.164-169.

14. Ставицкий А.В. Изучение восприимчивости диких уток к вирусу Западного Нила // в кн.: Вирусы, экологически связанные с птицами. Омск. инст. проиродноочаг. инф.-Омск.-1971 .-с. 18-19.

15. Федотова Т.Н., Ставский А.В., Федоров В.Г. Лихорадка Западного Нила у эксперементально инифицированных грачей // в кн.: Вирусы, экологически связанные с птицами. Омск. инст. проиродноочаг. инф.-Омск.-1971.-С.19-22.

16. Чумаков М.П., Беляева А.П., Бутенко A.M., Мартьянова Л.И. Вирус Западного Нила в СССР // Эпидемиология вирусных инфекций.-1968.-Т. 12.-С.365-373.

17. Чумаков М.П., Бутенко A.M., Башкирцев В.Н. Выделение вируса Западного Нила от больных людей в Астраханской области // Этиология, эпидемиология и клиника крымской геморрагической лихорадки и лихорадки Западного Нила.-Астрахань.-1969.-С.36-38.

18. Шишкина Е. О. автореф. дисс. на соискание степени канд. биол. наук.-М.-2003.

19. Adams S., Broom A., Sammels L., Harnett A., Howard M., Coelen R., Mackenzi J., Hall R. Glycosylation and antigenic variation among Kunjin virus isolates // Virology.-1995 .-№206.-pp.49-56.

20. Anderson J.F., Andreadis T.G., Vossbrink C.R. Tirrel S., Wakem E.M., French R.A., Garmendia A.E., Van Kruiningen H.J. Isolation West Nile virus from mosquitoes, crow, and cooper's hawk in Conecticut // Science.-1999.-Vol.286.-pp.2331-2333.

21. Bernkopf H., Levine S., Nerson R. Isolation of West Nile virus in Israel // J. Infect. Dis.-1953.-№93.-pp.207-218.

22. Berthet F.X., Zeller H.G., Drouet M.T., Rauzier J., Digoutte J.P., Deubel V., Extensive nucleotide change and deletions within the elnvelope glycoprotein gene of Euro-African West Nile viruses // J.of General Virology.- 1997.-Vol.78.-pp.2293-2297.

23. Besselaar T. G. and Blackburn N. K. Antigenic analysis of West Nile virus strains using monoclonal antibodies // Arch. Virol.-1988.-№99.-pp.75-88.

24. Blackwell J.L., Brinton M.A. Translation elongation factor-1 alpha nteracts with the 3' stem-loop region of West Nile virus genomic RNA // J. Virol.-1997.-Vol.71.-№9.-pp.6433-6444.

25. Blackwell J.L., Brinton M.A. BHK cell proteins that bind to the 3' stem-loop structure of the West Nile virus genom RNA // J. Virol.-1995.-Vol.69.-№9.-pp.5650-5658.

26. Brinton M.A., Dispoto J.H. Sequence and secondary structure analysis of the 5'-terminal region of flavivirus genome RNA // Virology.-1988.-Vol.l62.-№2.-pp.290-299.

27. Brinton M.A., Fernandez A.V., Dispoto J.H. The 3'-nucleotides of flavivirus genomic RNA form a conserved secondary structure // Virology.-1986.-Vol. 151.-№l.-pp.l 13-121.

28. Briese Т., Jia X.Y., Huang C.,Grudy L.J., Lipkin W. Identification of Kunjin-West Nile like flavivirus in brains of patients with New York encephalitis (letter)// Lancet.-1999.-Vol.354.-pp. 1261-1262.

29. Burt F.G., Grobbelaar A., Leman P., Anthony F., Gibson G., Swanepoel R. Phylogenetic relationships of Southern African West Nile virus isolates // Emerg. Infect. Dis.-2002.-Vol.8.-№8.-pp.820-826.

30. Campbell G., Marfin A., Lanciotti R., Gubler D. West Nile virus // Lancet.-2002.-Vol.2.-pp.519-529.

31. Chambers J., Halevy M., Nestorowicz A., Rice Ch., Lustig S. West Nile virus envelope proteins: nucleotide sequence analysis of strains differing in mouse neuroinvasiveness //J. of General Virology.-1998.-Vol.79.-pp.2375-2380.

32. Chomczynski P., Sacchi N. Single-step method of RNA isolation by acid guanidinium thiocyanate-phenol-chloroform extraction // Anal. Biochem.-1987.-Vol. 162.-№ 1 .-pp. 156-159.

33. Coia G., Parker M.D., Speighe G., Byrne M.E., Westaway E.G. Nucleotid and complete amino acid sequences of Kunjin virus: definitive gene order and characteristics of the virus specified proteins // J. of General Virology.-1988.-Vol.69.-№ 1 .-pp. 1-21.

34. Darwish M. and Ibrahim A. Prevalence of antibodies to arboviruses in Egypt // Am. J. Trop. Med. Hyg.-1975.-№24.-pp.981-985.

35. Eidson M., Komar N., Sorhage F., Nelson R., Talbot Т., Mostoshari F. Crow deaths as a sentinel surveillance system for West Nile virus in the northeastern United States, 1999 // Emerg. Infect. Dis.-2001.-№7.-pp.615-620.

36. Filipe A.R. and Pinto M.R. Survey for antibodies to arboviruses in serum of animals from Southern Portugal // Am. J. Trop. Med. Hyg.-1969.-№18.-pp.423-426.

37. Filipe A.R., Isolation in Portugal of West Nile virus from Anopheles Maculipennis // Acta Virol.-1972.-№ 16.-pp.361.

38. Filipe A.R., de Andrade H.R. Arboviruses in the Iberian Peninsula // Acta Virol.-1990.-Vol.34.-pp. 1057-1063.

39. Gonzales M.T. and Filipe A.R. Antibodies to arboviruses in Northwestern Spain // Am. J. Trop. Med. Hyg.-1977.-№26.-pp.792-797.

40. Hall R.A., Scherret J.H., Mackenzi J.S. Kunjin virus: an Australian variant of West Nile? // Ann. N Y Acad. Sci.-2001 .-Dec.-№951 .-pp. 153-60.

41. Hammam H. M., Clark D. H., Price W.H. Antigenic variations of West Nile virus in relation to geography // Am. J. Epid.-1965.-№82.-pp.40-55.

42. Hammam H. M. and Price W.H. Further observation on geographic variation in the antigenic character of West Nile and Japanese В encephalitis viruses // Am. J. Epid.-1966.-№83 .-p. 113.

43. Hannoun C., Panthier R., Mouchet J. Isolation in France of the West Nile virus fron patients and from the vector Culex modestus ficalbi // C. R. Acad. Sci. Paris.-1964.-№259.-pp.4170-4172.

44. Hayes C.G. West Nile fever // в кн.: The arboviruses epidemiology and ecology / под ред. Monath T.P.-CRC press.-1989.-pp.59-88.

45. Hubalek Z. West Nile fever a reemerging mosquito-borne viral disease in Europe // Emerging Infection Disease.-1999.-Vol.5.-№ 5.-pp.643-650.

46. Jia X.Y., Briese Т., Jordan I., Rambaut A., Chi H.C., Mackenzie J.S., Hall R.A., Scherret J., Lipkin W.I. Genetic analisis of West Nile New York 1999 encephalitis virus // Lancet.-1999.-Dec 4.,-№354.,-pp.l971-1972.

47. Jupp P.G., Mcintosh B.M. Qantitative experiments on the vector capability of Culex (Culex) pipiens Univittatus Theobald with West Nile and Sindbis virus // J. Med. Entomol.-1970.-№7.-pp.371 -373

48. Juricova Z and Hubalek Z. Arbovirological examination of free-living dirds in thej

49. Czech Republic // Proc. 2 European Conf. Avian medicine and Surgery.-Utrecht.-1993.-PP.507-521.

50. Juricova Z., Pinowski J., Literak I., Hahm K., Romanowski J. Antibodies to alphavirus, flavivirus and bunyavirus in house sparrows (Passer domesticus) and tree sparrows (P. montanus) in Poland // Avian Dis.-1998.-№42.-pp.l82-185

51. Goddard L., Roth A.E., Reisen W., Scott T.W. Vector competence of California mosquitoes for West Nile virus // Emerg. Infect. Dis.-2002.-№8.-pp.l385-1391.

52. Goldblum N., Jasinka-Klingberg W., Klingberg M.A., Marberg K., Sterk V.V. The natural history of West Nile Fever. I. Clinical observations during an epidemic in Israel // Am. J. Hyg.-1956.-Nov.-Vol.64.-№3.-pp.259-69.

53. Katz G., Rannon L., Nili E., Danon Y.L. West Nile fever occurrence in a new endemic site in the Negev // Isr. J. Med. Sci.-1989.-№25.-pp.39-41.

54. Komar N., Langevin S., Hinten S., Nemeth N., Edwards E., Hettler D., Davis В., Bowen R., Bunning M. Experimental infection of North American birds with the

55. Ney York 1999 strain of West Nile virus // Emerg. Infect. Dis.-2003.-Vol.9.-№3.-pp.311-322.

56. Lanciotti R.S., Kerst A.J. Nucleic acid sequence-based amplification assays for rapid detection of West Nile and St. Louis encephalitis viruses // J. Clin. Microbiol. 2001 .-Vol.39.-№ 12.-pp.4506-4513.

57. Le Guenno В., Bougermouth A., Azzam Т., Bouakaz R. West Nile: a deadly virus? // Lancet.-1995 .-№348 .-p. 1315.

58. Malkinson M, Banet C. The role of birds in the ecology of West Nile virus in Europe and Africa // Curr. Top. Microbiol. Immunol.-2002.-№267.-pp.309-322.

59. Mathiot C.C., Georges A.J., Deubel V. Comparative analysis of West Nile strains isolated from human beings and animal hosts using monoclonal antibodies and cDNA restriction profiles // Res. Virol.-1990.-№141 .-pp.533-543.

60. Mcintosh B.M., McGilivray G., Dicknson D., Taljaard J.J. Ecological studies on Sindbis and West Nile viruses in South Africa. IV. Infection in a wild avian population// S. Afr. J. Med. Sci.-1968.-№33.-pp.l05-l 12.

61. Mcintosh B.M., Jupp P.G., Dos Santos, Meenehan G.E. Epidemics of West Nile and Sindbis viruses in south Africa with Culex (Culex) univittatus Theobald as vector// S. Afr. J. Sci.-1976.-№72.-pp.295-300.

62. McMinn P.C. The molecular basis of virulence of the encephalitogenic flaviviruses // J. of General Virology.-1997.-Vol.78.- pp.2711-2722.

63. Murgue В., Zeller H., Deubel V. The ecology and epidemiology of West Nile virus in Africa, Europe and Asia // Curr. Top. Microbiol. Immunol.-2002.-№267.-pp. 195221.

64. Naficy K. and Saidi S. Serological survey on viral antibodies in Iran // Trop. Geogr. Med.-1970.-№22.-pp. 183-188.

65. Nir Y., Goldwasser R., Lasowski Y., Avivi A. Isolation of arboviruses from wild birds in Israel // Am. J. Epidem.-1967.-№86.-pp.372-378.

66. Nir Y., Avivi A., Lasowski Y., Margalit J., Goldwasser R. Arbovirus activity in Israel //1st. J. Med. Sci.-1972.-№8.-pp 1695-1701.

67. Panella NA, Kerst AJ, Lanciotti RS, Bryant P, Wolf B, Komar N. Comparative West Nile virus detection in organs of naturally infected American Crows (Corvus brachyrhynchos) //Emerg. Infect. Dis.-2001. Vol.7.-№4.-pp.754-755.

68. Porter K.R., Summers P., Dubois D., Puri В., Nelson W., Henchal E., Oprandy J.J., Hayes C.G. Detection of West Nile virus by the polymerase chain reaction and analysis of nucleotide sequence variation // Am. J. Trop. Med. Hyg.-1993.-№48.-pp.440-446.

69. Perelman A. and Stern J. Acute pancreatitis in West Nile fever // Am. J. Trop. Med. Hyg.-1974.-№23 .-pp. 1150-1152.

70. Pierre V., Drouet M.T., Deubel V. Identification of mosquito-borne flavivirus sequences using universal primers and reverse transcription / polymerase chain reaction // Res. Virol.-1994.-№l45.-pp.93-104.

71. Rice C.M., Strauss E.G., Strauss J.H. Structure of the flavivirus genome // В кн.: The Togaviridae and Flaviviridae / Под ред. M.J. Shlesinger.-New York.:Plenum.-1986.-pp.279

72. Rice C.M., Lenches E.M., Eddy S.R., Shin J., Sheets R.L., Strauss J.H. Nucleotide sequence of yellow fever virus: implications for flavivirus gene expression and evolution // Sciens.-1985.-№299.-pp.726-733.

73. Ryan M.D., Monaghan S., Flint M. Virus-encoded proteinases of the Flaviviridae // J.of General Virology.-1998.-Vol.79.-pp.947-959.

74. Sardelis M.R., Turell M.J., Dohm D.J., O'Guinn M. Vector competence of select North American Culex and Coquillettidia mosquitoes for West Nile virus // Emerg. Infect. Dis.-2001 .-№7-pp. 1018-1022.

75. Savage H.M., Ceianu С., Nicolescu G., Karabatsos N., Lanciotti R., Vladimirescu A., Laiv L., Ungureanu A., Romanca C., Tsai Т.Е.//Am. J. Trop. Med. Hyg.-1999.-Vol.61.-№.4.-pp.600-611.

76. Scherret J.H., Poidinger M., Mackenzie J.S., Broom A.K., Deubel V., Lipkin W.I., Briese Т., Gould E.A., Hall R.A. The relationships between West Nile and Kunjin viruses // Emerg. Infect. Dis.-2001.-Vol.7.-№4.-pp.697-705.

77. Scherret J.H., Mackenzie J.S., Hall R.A., Deubel V., Gould E.A. Phylogeny and molecular epidemiology of West Nile and Kunjin viruses // Curr. Top. Microbiol. Immunol.-2002.-№267.-pp.373-90.

78. Shi P.Y., Brinton M.A., Veal J.M., Zhong Y.Y., Wilson W.D. Evidence for the existence pseudoknot structure at the 3' terminus of the flavivirus genomic RNA // Biochemestry.-1996.-Vol.35.-№13.-pp.4222-4230.

79. Shi P.Y., Li W., Brinton M.A. Cell proteins bind specificalli to West Nile virus minus-strand 3' stem-loop RNA // J. Virol.-1996.-Vol.70.-№9.-pp.6278-6287.

80. Smithburn K.C., Hughes T.P., Burke A.W., Paul J.H. A neurotropic virus isolated from the blood of a native of Uganda // Am. J. Trop. Med.-1940.-№20.-pp.471-92.

81. Smithburn K.C. Differentiation of West Nile virus from the virus of St. Louis and Japanese В encephalitis // J. Immunol.-1942.-№44.-pp.25-31.

82. Taylor R.M., Work Т.Н., Hurlbut H.S., Rizk F. A study of the ecology of West Nile virus in Egypt // Am. J. Trop. Med.-1956.-№5.-pp.579-620.

83. Triki H., Murri S., Le Gueno В., Bouattours S., Bahri O., Hili K., Sidhom M., Dellagi K. West Nile viral meningo-encephalitis in Tunisia // Med. Trop. (French).-2001.-Vol.61.-№6.-pp.487-90.

84. Tsai T.F. Factors changing epidemiology of Japanese encephalitis and West Nile fever // Factors in the emergence of Arbovirus disease / под ред. J. Saluzzo, B. Dodet.-Elsevier, Paris.-1997.-pp. 179-189.

85. Tsai T.F., Popovici F., Cernescu C. West Nile encephalitis epidemic in southeastern Romania // Lancet.-1998.-Vol.352.-pp.767-771.

86. Turell M.J., O'Guinn M., Oliver J. Potential for New York mosquitoes to transmit West Nile virus // Am. J. Trop. Med. Hyg.-2000.-№62.-pp.413-414.

87. Wengler G., Castle E., Leidner U., Nowak T. Sequence analysis of the membrane protein V3 of the flavivirus and of its gene // Virology.-1985.-№147.-pp.264-274.

88. Work Т.Н., Hurlbut H., Taylor R. Isolation of the West Nile virus from hooded crow and rock pigeons in the Nile Delta // Proc. Soc. Expt. Biol. Med.-1953.-№84.-pp719-722.

89. Work Т.Н., Hurlbut H., Taylor R. Indigenous wild birds of the Nile delta as potential West Nile virus circulating reservoirs // Am. J. Trop. Med.-1955.-№4.-pp.872-888.

90. Victor T.J., Malathi M., ravi V., Palani G., Appavoo N.C. First outbreak of Japanese encephalitis in two villages of Dharmapuri district in Tamil Nadu // Indian. J. Med. Res.-2000.-№l 12.-pp.l93-197.

91. Yamshchikov V.F., Compans R.W. Regulation of the late events in the flavivirus protein processing and maturation // Virology.-1993.-Vol.193.-№1.-pp.38-51.

92. Yamshchikov V.F., Trent D.W., Compans R.W. Upregulation of signalase processing and induction of prM-E secretion by the flavivirus NS2b-NS3 protease: roles of protease components // J. Virol.-1997.-Vol.71.-№6.-pp.4364-4371.