Штамм Lactobacillus paracasei B-11821: выделение, свойства и оценка возможности создания на его основе пробиотического препарата для использования в свиноводстве тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.01.06, кандидат наук Позолотина, Надежда Владимировна

• Позолотина, Надежда Владимировна
• кандидат наук
• 2016

Оглавление диссертации кандидат наук Позолотина, Надежда Владимировна

СОДЕРЖАНИЕ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Видовой состав нормальной кишечной микрофлоры поросят

1.2 Изменение видового состава микрофлоры поросят при дисбактериозах и кишечных инфекциях, их профилактика и лечение

1.3 Пробиотические препараты, целесообразность их использования в ветеринарии

1.4 Факторы, влияющие на пробиотические свойства микроорганизмов

1.5 Заключение по обзору литературы

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

2.1 Штаммы микроорганизмов

2.2 Питательные среды, растворы, реактивы

2.3 Методы исследований

ГЛАВА 3. ВЫДЕЛЕНИЕ ЛАКТОБАКТЕРИЙ, ИССЛЕДОВАНИЕ ИХ БИОЛОГИЧЕСКИХ СВОЙСТВ И ИДЕНТИФИКАЦИЯ

3.1 Выделение лактобактерий из кишечного содержимого поросят-отъемышей

3.2 Культурально-морофологические свойства изолятов лактобацилл

3.3 Биохимические свойства изолятов лактобацилл

3.4 Спектр и уровни лекарственной устойчивости изолятов лактобактерий

3.5 Адгезивные свойства изолятов лактобактерий

3.6 Антагонистическая активность изолятов лактобактерий в отношении разных видов энтеробактерий

3.7 Уровень кислотообразования изолятов лактобактерий

ГЛАВА 4. РАЗРАБОТКА ЛАБОРАТОРНОГО ОБРАЗЦА ПРОБИОТИЧЕСКОГО ПРЕПАРАТА НА ОСНОВЕ ШТАММА LACTOBACILLUS PARACASEIВ-11821

4.1 Выбор питательных сред и оптимицация условий культивирования Lactobacillus paracasei В-11821

4.2 Отработка условий получения посевных культур L. paracasei В-11821, предназначенных для длительного хранения в замороженном состоянии

4.3 Отработка режимов глубинного культивирования L. paracasei B-11821 в биореакторе типа LiFlus GX

4.4 Разработка жидкой формы пробиотического препарата на основе

L. paracasei В-11821

4.5 Разработка сухой формы пробиотического препарата на основе штамма

L. paracasei В-11821

4.6 Разработка «фугатной» формы пробиотического препарата на основе штамма L. paracasei В-11821

ГЛАВА 5. ОЦЕНКА ЭФФЕКТИВНОСТИ ПРОБИОТИКА НА ОСНОВЕ ШТАММА L. PARACASEI В-11821 В НАУЧНО-ПРОИЗВОДСТВЕННОМ ОПЫТЕ НА ПОРОСЯТАХ ОТЪЕМЫШАХ

5.1 Влияние биопрепарата на видовой и количественный состав кишечной микрофлоры поросят-отъемышей

5.2 Влияние биопрепаратов на живую массу, среднесуточные привесы и сохранность поголовья поросят-отъемышей

ГЛАВА 6. РАЗРАБОТКА СПОСОБА ПОВЫШЕНИЯ АДГЕЗИВНОЙ АКТИВНОСТИ ПРОБИОТИЧЕСКИХ ШТАММОВ

ГЛАВА 7. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

ПЕРЕЧЕНЬ СОКРАЩЕНИЙ, УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ, СИМВОЛОВ, ЕДИНИЦ И ТЕРМИНОВ

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

ПРИЛОЖЕНИЕ А

ПРИЛОЖЕНИЕ Б

ПРИЛОЖЕНИЕ В

ПРИЛОЖЕНИЕ Г

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Штамм Lactobacillus paracasei B-11821: выделение, свойства и оценка возможности создания на его основе пробиотического препарата для использования в свиноводстве»

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность работы

Животноводческие хозяйства несут большие убытки из-за высокой заболеваемости и смертности молодняка сельскохозяйственных животных. Так, в крупных свиноводческих комплексах Российской Федерации желудочно-кишечные заболевания составляют 54,3-71,4 % от общей заболеваемости свиней. На долю поросят-отъемышей приходится 55-92,2 % общей смертности свиней. Подавляющее большинство поросят погибают в возрасте до 15 дней [70].

Одним из путей решения этой проблемы является разработка новых экологически безопасных эффективных препаратов, способствующих нормальному развитию животных и получению качественной продукции [73]. Многочисленные исследования показывают, что наиболее эффективным, безопасным методом лечения и профилактики дисбактериозов и кишечных инфекций молодняка сельскохозяйственных животных является пробиотикотерапия. Пробиотики не нарушают биоценоза нормальной микрофлоры, характеризуются выраженным клиническим эффектом при лечении острых кишечных инфекций, повышают общую противоинфекционную устойчивость организма, регулируют и стимулируют пищеварение, значительно ослабляя стрессы, связанные с отъемом от свиноматки, обеспечивают высокие привесы [68, 90, 91, 108, 109, 118].

В настоящее время в ветеринарной практике преимущественно используются пробиотики на основе бактерий рода Bacillus, которые характеризуются высокой ферментативной активностью, устойчивостью к литическим и пищеварительным ферментам, технологичностью в производстве и стабильностью при хранении. За счет синтеза различных бактериоцинов они оказывают выраженный пробиотический эффект, но быстро элиминируются из желудочно-кишечного тракта, так как являются чужеродными для кишечной микрофлоры [2, 38, 64, 98]. Кроме того, родство спорообразующих бактерий с патогенными видами [69],

слабые пробиотические эффекты [131, 156], способность бактерий некоторых штаммов синтезировать энтеротоксины [127], случаи возникновения инфекционных патологий [145] оставляют много вопросов о целесообразности использования пробиотиков на основе спорообразующих микроорганизмов.

Низкая эффективность пробиотических препаратов на основе неспорообразующих микроорганизмов, например, лакто- и бифидобактерий, энтерококков, кишечной палочки и др. , может быть связана с чужеродностью используемых микроорганизмов для кишечной микрофлоры, потерей ими пробиотических свойств в результате многочисленных пересевов на искусственных питательных средах.

В отечественной биотехнологии практически не реализованы преимущества биопрепаратов на основе гомопробиотических штаммов лактобацилл, выделенных из организма того же вида животных, в отношении которых предполагается использование пробиотиков на их основе. В связи с этим разработка нового высокоэффективного отечественного пробиотика для свиноводства на основе гомопробиотических штаммов лактобацилл является актуальной задачей.

Степень разработанности темы исследования

По мнению многих авторов, наиболее перспективными для использования в свиноводстве являются пробиотики на основе лактобацилл. Эти микроорганизмы безвредны для животных, к ним отсутствует привыкание при длительном употреблении, они не вызывают побочных эффектов, способствуют восстановлению моторики кишечника при диарейных явлениях [14, 23, 115]. Анализ данных научной литературы показывает, что наиболее высокой эффективностью в составе биопрепаратов обладают гомопробиотические штаммы, т.е. представители собственной микрофлоры животных данного вида [52, 120, 158, 159,161].

В последнее время в медицине и ветеринарии все чаще стали применяться препараты на основе продуктов жизнедеятельности пробиотических микроорганизмов - метаболитные пробиотики, которые стимулируют развитие

собственной кишечной микрофлоры и подавляют рост условно патогенных микробов. Существует мнение, что живые микроорганизмы, в том числе и гомопробиотические лактобациллы, могут оказывать отрицательное воздействие на кишечную микрофлору хозяина, и нецелесообразно включать их в состав пробиотиков [107]. Однако сравнительные данные по оценке эффективности метаболитных и бактериальных форм пробиотического препарата в условиях одного эксперимента отсутствуют, и вопрос о преимуществе использования метаболитных пробиотиков над бактериальными остается открытым.

В настоящее время рынок пробиотических препаратов ветеринарного назначения по большей части представлен дорогостоящими импортными биопрепаратами на основе чужеродных для кишечной микрофлоры микроорганизмов. Это обуславливает необходимость выделения и изучения новых гомопробиотических штаммов лактобацилл, перспективных для разработки отечественных эффективных биопрепаратов ветеринарного назначения.

Известно, что при длительном поддержании культур пробиотических микроорганизмов in vitro значительно снижается их способность адгезироваться на поверхности эпителиоцитов и колонизировать слизистые желудочно-кишечного тракта, следовательно, снижается эффективность приготовленных на их основе пробиотических препаратов [65]. Адгезивная активность пробиотических микроорганизмов является одним из ключевых факторов, обеспечивающих эффективность пробиотического препарата, поэтому существует необходимость разработки способа повышения адгезивных свойств хранившихся коллекционных культур пробиотических микроорганизмов.

Цель и задачи исследования

Цель исследования - выделение и изучение гомопробиотического штамма лактобацилл, оценка возможности создания на его основе пробиотического препарата для свиноводства.

Для достижения поставленной цели необходимо решить следующие задачи:

1. Выделить из кишечного содержимого здоровых поросят-отъемышей изоляты лактобацилл, изучить их основные биологические свойства, идентифицировать и депонировать во Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов ФГУП «ГосНИИГенетика», осуществить выбор штамма, наиболее перспективного для создания пробиотического препарата.

2. На основе выбранного штамма лактобацилл разработать лабораторный образец гомопробиотического препарата, предназначенного для профилактики дисбактериозов и кишечных инфекций у поросят-отъемышей, в трех различных формах: жидкой, сухой и «фугатной».

3. Разработать технологическую схему производства лабораторного образца пробиотического препарата на основе выбранного штамма в жидкой, сухой и «фугатной» формах.

4. Оценить эффективность использования различных форм разработанного гомопробиотического препарата на основе штамма L. paracasei B-11821 в научно-производственном опыте, их влияние на процессы нормализации видового и количественного состава кишечной микрофлоры, на прирост живой массы, на среднесуточные привесы и на повышение сохранности поголовья поросят-отъемышей.

5. Разработать способ повышения адгезивной активности коллекционных культур пробиотических штаммов лактобацилл.

Научная новизна работы:

1. Из кишечного содержимого поросят-отъемышей выделен новый гомопробиотический штамм L. paracasei В-11821, обладающий антагонистической активностью в отношении использованных культур 9 видов энтеропатогенных микроорганизмов, высокой адгезивной активностью по отношению к эритроцитам свиньи ((50,8±3,4) %) и человека ((56,5±7,6) %), выраженной кислотообразующей способностью ((340,8±6,3) градусов Тернера), высокими ростовыми качествами (содержание живых микробов (6,1+0,6)109 КОЕ/см3 при глубинном

культивировании в течение 24 ч при температуре (37±1)°С на среде MRS на капустном отваре).

2. Впервые в научно-производственном опыте проведено комплексное сравнение эффективности жидкой, сухой и «фугатной» форм лабораторного образца пробиотического препарата; показано, что все формы пробиотического препарата на 30 сутки эксперимента нормализуют состояние кишечной микрофлоры; показано достоверное (Р=0,95) преимущество жидкой и «фугатной» форм перед сухой по способности к 60 суткам наблюдения поднимать среднесуточные привесы поросят-отъемышей, повышать живую массу и увеличивать сохранность поголовья.

3. Впервые разработан способ повышения адгезивных свойств культур лактобацилл, который заключается в выделении субпопуляции высокоадгезивных бактерий в результате адсорбции на эритроцитах с последующим отделением фракции связавшихся клеток от свободных бактерий методом фильтрования и выращиванием адгезированных бактерий на питательной среде.

Выделенный штамм Lactobacillus paracasei депонирован во Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов ФГУП «ГосНИИГенетика» под номером ВКПМ В-11821. Новизна изобретения подтверждается патентом на изобретение (рег. № заявки 2015147972) «Штамм бактерий Lactobacillus paracasei, используемый для приготовления пробиотического препарата».

Теоретическая и практическая значимость работы

Полученные результаты подтверждают перспективность использования гомопробиотических микроорганизмов в создании средств коррекции микрофлоры у поросят-отъемышей; вносят вклад в расширение представлений о взаимодействии с макроорганизмом лактобацилл вида Lactobacillus paracasei и продуктов их метаболизма. Выявленные закономерности их влияния на качественный и количественный состав микрофлоры поросят-отъемышей, на динамику их роста и развития в период адаптации к новому рациону способствуют совершенствованию методологии создания различных форм пробиотических препаратов.

В результате работы выделен новый гомопробиотический штамм L. paracasei В-11821. На его основе разработан лабораторный образец пробиотического препарата в трех формах: жидкой, сухой и «фугатной» для профилактики дисбактериозов и кишечных инфекций молодняка свиней. В научно-производственном опыте на поросятах-отъемышах проведено комплексное сравнение по эффективности жидкой, сухой и «фугатной» форм пробиотического препарата. Все три формы разработанного препарата способны обеспечивать нормализацию микрофлоры кишечника поросят в период отъема от свиноматки. Жидкая и «фугатная» формы биопрепарата, в отличие от сухой, обеспечивают достоверное (Р=0,95) повышение привесов, живой массы и сохранности поголовья поросят-отъемышей.

По материалам диссертационного исследования разработана «Инструкция по изготовлению и контролю лабораторного образца ветеринарного пробиотического препарата на основе штамма L. paracasei», а также составлен «Акт производственных испытаний экспериментального образца пробиотического препарата на основе штамма L. paracasei».

Материалы диссертационного исследования включены в учебный процесс кафедры микробиологии ВятГУ и используются при чтении лекций и проведении лабораторных и практических занятий со студентами по дисциплинам «Микробиология», «Основы биотехнологии», «Пробиотические микроорганизмы».

Методология исследования

Методология исследований соответствовала поставленным задачам. Предметами исследования явились изучение пробиотических штаммов лактобацилл, разработка технологии приготовления лабораторного образца нового ветеринарного пробиотического препарата, способа повышения адгезивности культур лактобацилл, оценка влияния различных форм пробиотического препарата на кишечную микрофлору поросят-отъемышей и их продуктивность. При организации и проведении экспериментальных исследований применялись

информационно-аналитические, микробиологические, биотехнологические и статистические методы.

Материалы и методы исследования

В работе использованы: штаммы Lactobacillusparacasei В-11821, Lactobacillus reuteri 1, Lactobacillus salivarius 1, Lactobacillus salivarius 2, Lactobacillus salivarius 3, выделенные из кишечного содержимого здоровых поросят; штамм Lactobacillus amylovorus БТ-24/88, полученный из Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов ГосНИИГенетики; штамм Lactobacillus plantarum 8Р-А3, выделенный из коммерческого пробиотического препарата «Лактобактерин»; штамм Lactobacillus acidophilus LA-5, выделенный из коммерческого пробиотического препарата «Нормобакт»; штамм Lactobacillus rhamnosus, выделенный из кисломолочного продукта «Имунеле»; штамм Escherichia coli C600 из коллекции микробных культур кафедры микробиологии ВятГУ; штаммы Enterobacter cloacae, Citrobacter freundii, Klebsiella oxytoca - из коллекции микробных культур НИИИ ВМ ВМА им. С.М.Кирова г. Санкт-Петербург (СПб), штаммы Pseudomonas aeruginosa, Proteus vulgaris, Proteus mirabilis, Salmonella pullorum, Serratia odorifera, выделенные из кишечного содержимого отстающих в росте поросят-отъемышей.

Информационно-аналитические методы

Проведен анализ современных литературных источников отечественных и зарубежных исследователей и патентный поиск по теме данного исследования.

Бактериологические методы

Изучены биологические свойства полученных изолятов лактобактерий: культурально-морфологические, тинкториальные, биохимические, генетические, определен спектр и уровни антибиотикорезистентности [59]. Изучены антагонистические свойства по методике Фредерика [125]. Изучены адгезивные свойства с помощью методики В.И. Бриллиса [15] и экспресс-метода В.А. Оборина [66]. Определён уровень кислотообразования [МУК 42.2602-10]. Исследован видовой и количественный состав микрофлоры кишечного

содержимого путем высева на дифференциально-диагностические питательные среды: Эндо, MRS, Симмонса, Калины, обогащенную питательную среду для контроля стерильности с налидиксовой кислотой, желточно-солевой агар, кровяной агар [36, 47]. Для оценки динамики изменения качественного и количественного состава нормальной микрофлоры высевы из кишечного содержимого производились до, во время и после выпаивания пробиотика поросятам-отъемышам [55].

При выполнении микроскопических исследований проводили окраску мазков по Граму, по Бурри-Прейсу (для обнаружения капсул), по Ожешко (для обнаружения спор). Для оценки подвижности микроорганизмов готовили препараты раздавленной и висячей капли [35].

Биотехнологические методы

Отработку режимов глубинного культивирования лактобацилл проводили на биореакторе типа LiFlus GX производства Bio-Tron Inc (Республика Корея) емкостью 5,0 л. В качестве посевного материала использовали хранящуюся в замороженном состоянии в течение не более чем 1 года суспензию L. paracasei В-11821.

Статистические методы

Статистическую обработку данных осуществляли с помощью методов вариационной статистики, с использованием параметрического критерия Стьюдента. Обработку проводили при помощи пакета программ вариационной статистики MS Excel 2010. Результаты исследований представлены в виде средних арифметических значений с доверительным интервалом при уровне вероятности, равном 95% [5].

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Гомопробиотический штамм L. paracasei В-11821, выделенный из кишечного содержимого поросят-отъемышей, обладает антагонистической активностью в отношении использованных культур 9 видов энтеропатогенных бактерий, высокой адгезивной активностью - (56,5±7,6) % и (50,8±3,4) % - в

отношении эритроцитов человека и свиньи соответственно, выраженной кислотообразующей способностью - (340,8±6,3) градусов Тернера.

2. Изготовленные на основе штамма L. paracasei В-11821 три формы лабораторного образца гомопробиотического препарата: жидкая, сухая и «фугатная» при курсовом выпаивании поросятам-отъемышам на 30 сутки эксперимента обеспечивают восстановление видового и количественного состава кишечной нормофлоры поросят-отъемышей; жидкая и «фугатная» формы пробиотического препарата к 60 суткам наблюдения обеспечивают достоверное (Р=0,95) увеличение среднесуточных привесов, прирост живой массы и повышение сохранности поголовья поросят-отъемышей по сравнению с животными контрольной группы.

3. Способ повышения адгезивной активности культур лактобацилл, основанный на выделении из культур субпопуляции бактерий с высокими адгезивными свойствами, позволяет на 15-56 % увеличить адгезивные свойства культур различных штаммов лактобацилл, длительно поддерживаемых на искусственных питательных средах.

Степень достоверности результатов работы

Степень достоверности результатов работы подтверждается использованием стандартных методик, сертифицированного и поверенного оборудования, воспроизводимостью результатов экспериментов.

Апробация работы

Основные результаты диссертации доложены и обсуждены на следующих международных и всероссийских конференциях: Международная научная студенческая конференция «Студент и научно-технический прогресс», г. Новосибирск, 2012, 2013; Всероссийская ежегодная научно-техническая конференция «Общество, наука, инновации», г. Киров, 2011, 2013, 2014, 2015; IV Международная конференция «Сорбенты как фактор качества жизни и здоровья», г. Белгород, 2012; XVII Международная экологическая студенческая конференция «Экология России и запредельных территорий»,

г. Новосибирск, 2012; областной конкурс «Молодые рационализаторы и изобретатели», г. Киров, 2012; Международная научно-практическая конференция молодых ученых, аспирантов и соискателей «Знания молодых: наука, практика и инновации», г. Киров, 2013; XXIV Международная научно-практическая конференция «Наука и современность - 2013», г. Новосибирск, 2013; Молодежный форум ПФО 1-Волга 2014; смена «Инновации и техническое творчество», г. Самара, 2014.

По результатам работы автор удостоена диплома за победу в региональном конкурсе «Молодые рационализаторы и изобретатели», 2012; дипломом за победу в конкурсе «У.М.Н.И.К.» - 2015.

Работа проводилась в рамках Программы стратегического развития ВятГУ на 2013-2014 гг., п. 2.1.1-7 «Разработка пробиотического препарата ветеринарного назначения для профилактики и лечения дисбактериоза у поросят». Частично исследования выполнялись в рамках договора с ООО «Биопром», г. Киров, №2 638/1 от 1.08.2014 г. на проведение НИР по теме «Подготовка и проведение испытаний эффективности пробиотического препарата на поросятах». Научно-производственный опыт по оценке эффективности биопрепарата проводился на базе свинокомплекса ЗАО «Заречье», г. Киров.

Личный вклад соискателя

Автор лично участвовала в планировании, проведении всего комплекса теоретических и экспериментальных исследований и анализе полученных результатов. Отработка условий получения культур L. paracasei В-11821 методом глубинного выращивания в биореакторе, получения лиофильно высушенных культур проведены совместно с заведующим лабораторией кафедры микробиологии ВятГУ Р.М. Бузиковым.

Исследование последовательностей генов 16Б рРНК лактобацилл с помощью ПЦР выполнено специалистами ВКПМ ГосНИИГенетики (г. Москва).

Изучение влияния биопрепарата на основе гомопробиотического штамма L. paracasei В-11821 в жидкой, «фугатной» и сухой формах на развитие поросят-

отъемышей в условиях промышленного свиноводства проводилось с участием заведующей племенной фермой ЗАО «Заречье» А.В. Жаворонковой.

Публикации

По теме диссертации опубликовано 18 научных работ, из них 3 статьи в журналах, рекомендованных ВАК для публикации основных результатов исследования и 1 5 научных статей и тезисов докладов в материалах международных и всероссийских научных конференций.

Соответствие диссертации паспорту научной специальности

Результаты научных исследований соответствуют пунктам 1, 3 и 11 паспорта специальности 03.01.06.

Структура и объем диссертации

Диссертация изложена на 164 стр., включает следующие основные разделы: введение, основная часть, заключение, список сокращений и условных обозначений, список литературы, в который входит 161 источник (в том числе 45 -на иностранном языке), приложения. Работа содержит 28 таблиц, 14 рисунков и 4 приложения.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

О пробиотических микроорганизмах стало известно еще в 1907 году, когда российский ученый И.И. Мечников заметил, что хорошим здоровьем и долголетием отличались болгары, употреблявшие в пищу кисломолочный продукт - «болгарский йогурт», в состав которого входила болгарская палочка (Lactobacillus delbruekii subsp. Bulgaricus). Он ввел понятие «пробиозис», которое пояснялось, как улучшение здоровья человека в процессе модификации собственной кишечной микробиоты [110]. Пробиозис, по мнению И.И. Мечникова, является ассоциацией нескольких организмов, стимулирующих многие жизненно важные процессы. А сами живые микробные клетки, оказывающие положительное влияние на микробиоценноз кишечника и здоровье человека стали именоваться пробиотиками. Период, когда была концептуально обоснована необходимость изучения видового состава нормальной микробиоты кишечника человека, принято считать началом эры пробиотиков [56, 57].

1.1 Видовой состав нормальной кишечной микрофлоры поросят

В настоящее время подтверждено, что нормальная микрофлора человека и теплокровных животных, населяющая слизистые оболочки желудочно-кишечного тракта (ЖКТ), выполняет ряд важных функций. Во-первых, она является одним из существенных механизмов защиты от вредных экзогенных и эндогенных факторов за счет изменения уровня рН (чаще всего в кислую сторону), выработки бактериоцинов, угнетающих рост и развитие посторонней микрофлоры, и борьбы за места адгезии к эпителию слизистой оболочки пищеварительного тракта. Во-вторых, за счет стимуляции факторов неспецифического иммунитета она обеспечивает устойчивость организма к инфекционно-токсическим воздействиям болезнетворных микроорганизмов. В-третьих, нормофлора вырабатывает многие витамины, ферменты, аминокислоты, летучие жирные кислоты (ацетат, пропионат,

бутират), необходимые для нормального функционирования организма хозяина. В-четвертых, улучшает секреторно-моторную деятельность кишечника, стимулирует регенерацию эпителия слизистой оболочки кишечника, перистальтику, увеличивает выработку слизи, и адсорбцию эпителиальными клетками кишечника аминокислот, жирных кислот, участвует в процессах всасывания ионов кальция, витамина D [19, 20, 74, 143].

В естественных условиях представители нормальной кишечной микрофлоры оказывают взаимное влияние друг на друга, тем самым поддерживая состояние динамического равновесия [3, 147]. При дисбактериозах микрофлора ЖКТ может оказывать и отрицательное воздействие на состояние не только пищеварительного тракта, но и в целом на организм животного. В частности, могут возникать процессы гниения в кишечнике в связи с усилением гидролиза белков, ухудшаться перевариваемость жира, в результате чего кишечник утрачивает способность выполнять защитные функции [21, 46, 74, 77, 90].

При исследовании кишечной микрофлоры поросят [138] получены данные о том, что ЖКТ новорожденных стерилен, а потребление молозива способствует интенсивному развитию факультативных анаэробов, большая часть которых - до 90%, представлена разными видами группы кишечной палочки. Через несколько дней после рождения в кишечной микрофлоре доминируют колиморфные бактерии и стрептококки, появляются бифидо- и лактобактерии. Нормальная микрофлора кишечника поросят окончательно формируется только к 20-25 дню от рождения и на 80-90% состоит из лактобактерий, преобладающими видами являются L. reuteri, L. sorbius, L. johnsoni, способные гидролизовать казеин молока, и L. salivarius, L. crispatus, L. acidophilus, L. fermentum, у которых протеолитические свойства выражены слабее [134, 147, 148]. В кишечном содержимом происходит постепенное повышение концентрации молочной кислоты и снижение уровня рН, что положительно влияет на видовой и количественный состав нормофлоры кишечника и в целом на развитие пищеварительной и иммунной систем организма [74, 126].

Введение твердого корма в рацион поросят после их отъема от свиноматки вызывает временное снижение концентрации лактобацилл. Это может быть обусловлено изменением видового состава лактофлоры в связи переходом на новый рацион питания поросят-отъемышей с легкоусвояемого молока на растительную пищу, содержащую смесь сложных полисахаридов и растительных белков [134-139, 147, 148, 151]. В тонком кишечнике наблюдается снижение уровня сбраживаемости лактозы и галактозы кишечной микрофлорой, в то время как ее способность к сбраживанию крахмала, арабинозы, ксилозы и целлобиозы увеличивается. Преобладающими видами лактофлоры поросят после отъема становятся крахмал сбраживающие виды лактобактерий (из которых изучены L. amilovorus, и генетически родственный ему L. sorbius) [123, 133].

Однако снижение содержания лактобактерий во всех отделах кишечника впериод отъема поросят от свиноматки приводит к снижению колонизационной резистентности слизистой оболочки ЖКТ и возникает риск интенсивного размножения патогенных и условно патогенных энтеробактерий, выделяющих значительное количество токсических веществ [134, 139, 147, 148]. Важно отметить, что нарушение баланса кишечной микрофлоры - дисбактериоз, может стать причиной дисфункции не только ЖКТ, но и всего организма в целом, что в итоге отрицательно сказывается на продуктивности молодняка свиней [85, 74, 97, 134].

Таким образом, для поддержания колонизационной резистентности слизистой оболочки ЖКТ и снижения риска развития дисбактериозов и кишечных инфекций целесообразно в рационы питания поросят в период отъема от свиноматки дополнительно вносить пробиотики, содержащие в своем составе лактобактерии (из представителей нормальной микрофлоры кишечника поросят-отъемышей), способные сбраживать сложные углеводы и сахара. Это будет способствовать более быстрой адаптации кишечной микрофлоры к новому рациону питания, улучшению перевариваемости твердых кормов, снижению послеотъемного стресса поросят и, как следствие, снижению смертности и повышению продуктивности поросят.

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Позолотина, Надежда Владимировна, 2016 год

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

1. Алмагамбетов, К. Х. Биотехнология / К. Х. Алмагамбетов. - Астана. - 2011. - 270 с.

2. Андреева, А.В. Нормофлора кишечника поросят при отъемном стрессе / А.В. Андреева, Е.Т. Муратова // Ученые записки КГАВМ им. Н.Э. Баумана. - 2010. -Т.203. - С.15-19.

3. Андреева, А.В. Профилактика желудочно-кишечных растройств у новорожденных телят и поросят отъемного периода фитопробиотиками / А.В. Андреева, О.Н. Николаева // Вестник БГАУ. - 2010. - №2. - С. 17-21

4. Андреева, С.В. Выживаемость пробиотиков из кисломолочных продуктов разных марок в условиях, иммитирующих пищеварение / С.В. Андреева, Э.А. Айбулатова, Н.В. Ярославцева, А.К. Малышева // Вестник Челябинского государственного университета. - 2013. - №7. - С.65-65.

5. Ашмарин, И.П. Статистические методы в микробиологических исследованиях / И.П. Ашмарин, А.А. Воробьев. - Л.: МЕДГИЗ.: СПб, 1962. - 179 с.

6. Бажов, Г.М. Использование микробиологических биопрепаратов при выращивании поросят - сосунов / Г.М. Бажов, Г.В. Литовка, Л.А. Бахирева // Сб. науч. тр. Краснодарский региональный институт агробизнеса. - 2002. - №11. - С. 183 - 188.

7. Бажов, Г.М. Использование рисовых отходов в комплексе с целлобактерином при откорме свиней / Г.М. Бажов, Л.А. Бахирева, Г.В. Литовка // Сб. науч. тр. Краснодарский региональный институт агробизнеса. -2002. - №11. - С. 151 - 158.

8. Бажов, Г.М. Эффективность применения целлобактерина в свиноводстве / Г.М. Бажов, Л.А. Бахирева, В.А. Пищулин // Сб. науч. тр. Краснодарский региональный институт агробизнеса. - 2002. - №11. - С. 158 - 163.

9. Бакулин, М. К. Определение антагонистической активности микроорганизмов. Бактериоциногения. Методы фаготипирования бактерий.

Определение лизогении: Методические рекомендации / М. К. Бакулин, А. С. Грудцына, А. Ю. Плетнева. - Киров.: ВятГУ, 2005. - 25 с

10. Батчаев, Р.И. Болезни молодняка: методические указания к практическим занятиям по дисциплине студентам специальности 11801.65 Ветеринария / Р.И. Батчаев, Х.Н. Гочияев. - Черкесск: БИЦ СевКавГГТА, 2014. - 40 с.

11. Баутин, А.Н. Разовая закваска Леснова при откорме свиней / А.Н. Баутин // Наука - сельскому хозяйству: матер. Междун. конфер. по повышению устойчивости сельскохозяйственного производства. - 2000. - С. 315 - 317.

12. Блинкова, Л.П. Бактериоцины: критерии, классификация, свойства, методы выявления // Журн. микробиол. - 2003. - № 3. - С. 109-113.

13. Болоцкий, И. А. Стрептококкоз свиней / И.А. Болоцкий, А.К. Васильев, В.И. Семенцов и др. // Ветеринария. - 2010. - №. 1. - С. 4-6.

14. Бондаренко, В.М. Пробиотики, пребиотики и синбиотики в терапии и профилактике кишечных дисбактериозов / В.М. Бондаренко, Н.М. Грачева // Фарматека. - 2003. - № 7. - С. 56-63.

15. Брилис, В.И. Методика изучения адгезивного процесса микроорганизмов / В.И. Брилис, Т.А. Брилене, Х.П. Ленцнер, А.А. Ленцнер // Лабораторное дело. -1986. - №4. - С.210-212.

16. Вахитов, Т.Я. Влияние метаболитов пробиотических и патогенных бактерий на антагонистическую активность Lactobacillus acidophilus Д№75 / Т.Я. Вахитов, Н.Б. Вербицкая, О.В. Добролеж, Е.В. Полевая, А.И. Кобатов // Научный журнал КубГАУ. - 2013. - №92. - С. 1-19.

17. Вахитов, Т.Я. Концепция пробиотического препарата, содержащего оригинальные микробные метаболиты / Т.Я. Вахитов, Л.Н. Петров, В.М. Бондаренко // Микробиология. - 2005. - Т. 74 - №5 - С. 108-114.

18. Вахитов, Т.Я. Регуляторные функции бактериальных экзометаболитов на внутрипопуляционном и межвидовых уровнях: Дисс.... докт. биол. наук: 03.00.23/ Вахитов Тимур Ящерович - Санкт-Петербург, - 2007 - 561 с.

19. Воробьев, А.А. Современный взгляд на проблемы повышения сохранности молодняка // Агро- Информ. - 2004. - С. 14-16.

20. Воробьев, А.А. Бактерии нормальной микрофлоры: биологические свойства и защитные функции / А.А. Воробьев, Е.А. Лыкова // Микробиология.-1999. - №6.-С. 102-105.

21. Воробьев, А.В. Опыт применения пробиотика биоспорин для лечения и профилактики желудочно-кишечных болезней молодняка / А.В. Воробьев, А.И. Фадеев // Актуальные проблемы производства продуктов животноводства: сб. науч. тр. - 2001. - С. 86 - 88.

22. Гаврилов, В.А. Технология производства нативного симбиотического препарата и оценка его эффективности в свиноводстве: дис. ...канд. биол. наук : 03.01.06, 06.02.02 / Гаврилов Владимир Андреевич - Щелково. - 2016. - 117 с.

23. Глушанова, Н.А. Экспериментальное обоснование новых подходов к коррекции микробиоценоза кишечника: дис. д-ра мед. наук: 03.00.07 / Глушанова Нина Алексеевна - М.: 2006. - 260 с

24. Грязнева, Т.Н. Технология производства пробиотика Биод-5 и его лечебно-профилактичекая эффективность для разных видов животных : дис. .д-ра биол. наук.: 03.00.23; 16.00.03 / Грязнева Татьяна Николаевна; МГАВМиБ - Москва. -2005. - 391 с.

25. Гусева, О.О. Влияние пробиотических препаратов на уровень привесов поросят-гипотрофиков / О.С. Гусева, А.В. Савинков // Материалы региональной научно-практической межвузовской конференции НГУ Самарская НИВС Россельхозакадении: Достижения современной науки и практики в области охраны здоровья животных и человека. - Самара. - 2011. - С.76-79.

26. Дармов, И. В. Выживаемость микроорганизмов пробиотиков в желудочно-кишечном тракте экспериментальных животных / И.В. Дармов, И.Ю. Чичерин, И.П. Погорельский [и др.] // Журнал инфектологии. - 2012. - №1. - С.68-74.

27. Дармов, И. В. Выживаемость микроорганизмов пробиотиков в условиях in vitro, имитирующих процесс пищеварения у человека / И.В. Дармов,

И.Ю. Чичерин, И.П. Погорельский [и др.] // Эксперимент. и клинич. гастроэнтерология. - 2011. - №3. - С. 6-11.

28. Дисбактериозы у детей: Учебное пособие для врачей и студентов. - М.: «КМК Лтд.», 1998.-64 с.

29. Долгов, В.С. Использование пробиотика «Нормофлора» свиноматкам и поросятам / Вестник Алтайского государственного аграрного университета. - 2011-№12(86). - С.60-62.

30. Евглевский, Д.А. Оценка и биотехнологическая стратегия повышения эффективности анатоксин-вакцин, антибиотиков и эубиотиков / Д.А. Евглевский // Вестник Курской государственной сельскохозяйственной академии. - 2013. - №. 2.- С.60-61

31. Евглевский, Д.А. Состояние и перспективы применения пробиотиков при желудочно-кишечных болезнях поросят / Д.А. Евглевский, М.А. Паюхина, И.А. Шевцов, В.Н. Суворова // Вестник Курской государственной сельскохозяйственной академии. - 2015. - №2. - С.66-67.

32. Жданов, П.И. Опыт и перспективы применения нового пробиотика «Споробактерин» в животноводстве и ветеринарной практике / П.И. Жданов, В.М. Мешков, А.И. Лепский // Юбил. сб. тр. ученых. - 2000. - С. 4 - 7.

33. Жданов, П.И. Применение споробактерина для повышения сохранности и продуктивности свиней / П.И. Жданов // Ветеринария. - 1994. - №11. - С. 36-40.

34. Жирнов, В.А. Питательные среды, как основа технологии производства эффективных биопрепаратов / В.А. Жирнов, А.П. Мансуров, Н.Н. Кучин // Актуальные вопросы микробиологии и биотехнологии. - 2015. - С.74-76

35. Золотарев, А.Г. Световая микроскопия микроорганизмов: Практическое руководство / А.Г. Золотарев, Е.В. Пименов, Д.А. Девришов. - М.: «Агровет», 2012. - 258 с.

36. Иванов, П.В. Совершенствование методов диагностики дисбактериоза. Информационное письмо / П.В. Иванов, А.Г. Бойцов, А.Д. Коваленко, О.Н. Ластовка, Е.А. Нилова. - СПБГМА им. И.И.Мечникова, 2002. - 26с.

37. Иванова, Е.И. Адгезивные свойства микроорганизмов, колонизирующих различные биотопы организма человека / Е.И. Иванова, С.М. Попкова, Н.М. Шабанова // Биология. Экология - 2011 - Т. 4 - №4 - С. 25-29.

38. Ивановский, А.А. Влияние бактоцеллолактина на иммунофизиологический статус поросят / А.А. Ивановский, Е.Ю. Тимкина // Достижения науки и техники АПК. - 2010. -№6. - С.63-64.

39. Колганова, Т.В. Корректирующее действие пробиотиков при экспериментальном дисбактериозе. Дисс...докт.биол.наук 03.00.07./ Колганова Татьяна Владимировна - М.: 2003 - 139с.

40. Колориметр фотоэлектрический концентрационный КФК-2: техническая описание и инструкция по эксплуатации. - 55 с.

41. Колотова, Е.В. Эпизоотология, диагностика, методы лечения и профилактика отечной болезни поросят / Е.В. Колотова, Л.А. Малышева // Ветеринарная патология - 2008. - №1. - С.163-166.

42. Константинов, В.А. Изучение эффективности использования разовой биохимической закваски Леснова при обработке кормов для кормления свиней различных половозрастных групп / В.А. Константинов // Проблемы и перспективы животноводства : тез. докл. 44-ой науч. конф. профессорско - преподавательского состава, сотрудников и аспирантов. - 1997. - ч. 3. - С. 246-247.

43. Кормление поросят-сосунов Часть 1. [Электронный ресурс]. - URL: http://svinovodstvo.blogspot.eom/2011/05/1 .html (дата обращения: 05.06.2015).

44. Корниленко, Е.А. Современные принципы выбора пробиотиков / Е.А. Корниленко // Детские инфекции. - 2007. - №3. - С. 64-69.

45. Коршунов, В.М. Рациональные подходы к коррекции микрофлоры кишечника / В.М. Коршунов, В.В. Смеянов, Б.А. Ефимов // Вестник РАМН - 1996. - №2. - С.60-65.

46. Красненко, Г.А. Сравнительная оценка бифидосодержащих кисломолочных продуктов / Г.А. Красненко, Л.И. Голенская // Сб. науч. тр. Краснодарский региональный институт агробизнеса. - 2003. -№12.-С.258 - 273

47. Лабинская, А.С. Микробиология с техникой микробиологических исследований. - «Медицина»: Москва, 1978. - 394с.

48. Леснова, О. Закваска Леснова - универсальный препарат для получения высокобелкового корма / О. Леснова // Свиноводство. - 2003.- № 1.- С. 11 - 12.

49. Литвинец, С.Г. Эффективность применения лактоамиловорина в рационах свиней в условиях интенсивной технологии производства : автореф. дис. .канд. сх. наук: 06.02.02 / Литвинец Сергей Геннадьевич; ВГСХА. - Киров., 2001. - 23с.

50. Лучкин, К.Ю. Влияние пробиотического препарата «Биовестин-Лакто» раздельно и в комплексе с сорбентом на продуктивность молодняка свиней : дисс....канд. с.-х. наук: 06.02.08. Лучкин Константин Юрьевич. - Барнаул, 2014. -181с.

51. Мазанкова, Л.Н. Пробиотики: характеристика препаратов и выбор в педиатрической практике / Л.Н. Мазанкова, Е.А. Лыкова // Детские инфекции. -2004. - Т. 1. - С. 18-23.

52. Малик, Н.И. Новые пробиотические препараты ветеринарного назначения : дисс.... докт. биол. наук : 16.00.03. / Малик Нина Ивановна. М.: 2003. - 402 с.

53. Манжурина, О.А. Профилактика и лечение смешанной кишечной инфекции у поросят с использованием пробиотика Ветом 1.1 / О.А. Манжурина, Н.Г. Жмуров, А.А. Ролдугина // Вестник воронежского государственного аграрного университета - 2010. - №1. - С.49-53.

54. Машенцева, Н.Г. Скрининг молочнокислых организмов - продуцентов бактериоцинов, перспективных для использования в мясной промышленности / Н.Г. Машенцева, В.В. Хорольский, Е.С. Дорофеева // Биотехнология. - 2006 - №6 - С. 20-27.

55. Методические указания по унификации исследований в области кормления с.-х. животных с использованием детализированных норм. - М., 1987. - 36 с.

56. Мечников, И.И. Лекции о сравнительной патологии воспаления / И.И. Мечников. - Directmedia. - 2013. - 260с.

57. Мечников, И.И. Этюды о природе человека / И.И. Мечников. — М.: Изд-во АН СССР. - 1961. — 288 с.

58. Михалюк, А.Н. Влияние пробиотиков на интенсивность роста и развития поросят / А.Н. Михалюк // Актуальные проблемы интенсивного развития животноводства: матер. 6-й Междунар. науч.-практ. конф. посвящ. 70-летию каф. генет. и развед. с.-х. жив-х. - 2003. - С. 183-185.

59. МУ 4.2.1890-04 Определение чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам. Методические указания. - М., 2004. - 91с.

60. Некрасов, Р.В. Влияние пробиотика лактоамиловарин на продуктивность и биохимические показатели крови поросят / Р.В. Некрасов, М.С. Чабаев, Н.И. Анисова [и др.] // Теория и практика кормления [Электронный ресурс]. - URL: Мр://:егт1аЬ.ги/разработки/пробиотик-в-кормлении-поросят (дата обращения: 05.06.2015).

61. Некрасов, Р.В. Эффективность использования в кормлении доращиваемых поросят пробиотика Лактоамиловорина / Р.В. Некрасов, М.Г. Чабаев, П.В. Мытников // Пробиотик в кормлении поросят. [Электронный ресурс] - URL: Мр://:егт1аЬ.ги/разработки/влияние-пробиотика-лактоамиловарин (дата обращения: 05.06.2015)

62. Николаева, И.В. Пробиотики у новорождённых и детей грудного возраста / И.В. Николаева, Л.А. Купчихина // Вестник современной клинической медицины. - 2013. - Т. 6. - №3. - С. 48-53.

63. Ноговицина, Е.А. Лечение желудочно-кишечных заболеваний у поросят / Е.А. Ноговицина, П.Н. Щербаков, Т.Б. Щербакова // Актуальные проблемы ветеринарной медицины, товароведения, животноводства, экономики и организации сельскохозяйственного производства и подготовки кадров на Южном Урале. - 2002. - С. 102 - 103.

64. Нугуманов, Г.О. Влияние пробиотика «Витафорт» и «Ветом» на состав кишечной микрофлоры поросят-отъемышей / Г.О. Нугуманов, Ф.С. Хазиахметов, Андреева А.В. // Биологические науки. - 2013. - №6. - С.606-610.

65. Оборин, В.А. Бактериофиксирующая активность эритроцитов в отношении вакцинных штаммов возбудителя чумы, сибирской язвы, туляремии, бруцеллеза и

обоснование ее роли в патогенезе данных заболеваний : дисс....докт. мед. наук: 14.03.03., 03.02.03. / Оборин Виктор Афанасьевич. - Саратов, 2011. - 280с.

66. Оборин, В.А. Фотоколориметрический метод изучения взаимодействия бактерий с эритроцитами людей и животных. Методические рекомендации / В. А. Оборин, Е.В. Пименов, А.Г. Ивонин. - Киров.: ВятГУ, 2009. - 20 с.

67. Осипова, И.Г. Споровые пробиотики / И.Г. Осипова, Н.А. Михайлова, И.Б. Сорокулова [и др.] // Журнал микробиологии. - 2003. - № 3. - С. 113-119.

68. Острикова, Э.Е. Влияние пробиотиков на становление кишечного биоценноза у поросят-сосунов / Э.Е. Острикова // Научный журнал КубГАУ. -2011. - №74. - С.1-13.

69. Похиленко, В.Д. Пробиотики на основе спорообразующих бактерий и их безопасность / В.Д. Похиленко, В.В. Перелыгин // Химическая и биологическая безопасность. - 2007. - № 2-3. - С.32-33.

70. Прудников, С.И. Факторные инфекционные болезни свиней и их профилактика / С.И. Прудников // Сибирский вестник.- 2007. - №6. - С.74-80.

71. Равилов, А.З. Микробиологические среды / А.З. Равилов, Р.Я. Гильмутдинов, М.Ш. Хусаинов - Казань: ФЭН. - 1999. - 398 с.

72. Садыков, Н.С. Разработка нового пробиотика Субтилакт на основе Lactobacillus plantarum и Bacillus subtilis / Н.С. Садыков, Е.Н. Плохушко, А.Н. Забокрицкий, К.М. Салмаков, Э.Н. Мустафина, П.Г. Васильев // Повышение устойчивости и эффективности агропромышленного производства в Сибири: наука, техника, практика: сб. матер. межрегион. науч.-практ. конф. - 2003. - С.181-183.

73. Самуйленко, А. Я. Инновационные биотехнологии в развитии агробиологической промышленности / А. Я. Самуйленко // Материалы международного агробиотехнологического симпозиума, посвященного 80-летию члена-корреспондента РАН, заслуженного деятеля науки РФ Сочнева В.В. 150 инноваций совершенствования ветеринарного обеспечения сельских и городских территорий ВПО ФГБОУ «Нижегородская ГСХА». - 2016. - С. 16-18.

74. Самуйленко, А. Я. Специфическая профилактика и антибиотикотерапия колибактериоза свиней / А. Я. Самуйленко, Д. А. Евглевский, К. В. Татарников // Вестник Курской государственной сельскохозяйственной академии. - 2013. - № 7. - С. 52.

75. Сенько, А.В. Рекомендации по использованию альтернативных способов профилактики желудочно-кишечных болезней поросят без применения антибиотиков / А.В. Сенько, Д.В. Воронов. - Гродно: ГГАУ. - 2010. - 47 с.

76. Сетдеков, Р.А. Микрофлора при отечной болезни у поросят / Р.А. Сетдеков, Р.Х. Юсупов, Г.Ф. Кабиров // Ученые записки Казанской государственной академии медицины им. Н.Э. Баумана. - 2011. - т. 207. - С. 406-409.

77. Сидоренко, С.В. Молекулярные основы резистентности к антибиотикам/ С.В. Сидоренко, В.И. Тишков // Успехи биологической химии. - 2004. - №44 - С. 263-306.

78. Сидоров, М. А. Определитель зоопатогенных микроорганизмов / М. А. Сидоров, Д. И. Скородумов, В. Б. Федотов. - М. : Колос, 1995.

79. Сидоров, М.А. Нормальная микрофлора животных и её коррекция пробиотиками / М.А. Сидоров, В.В. Субботин, Н.В. Данилевская // Ветеринария. -2000. - № 11. - С. 17-22.

80. Спиридонов, Г.Н. Этиологическая структура инфекционных болезней поросят-отъемышей в свиноводческих комплексах / Г.Н. Спиридонов, Х.З. Гаффаров, М.А. Ефимова, В.Н. Сидорова // Ветеринарная патология. - 2003.-№3. - С.61-62.

81. Старовойтова, С.А. Поиск штаммов родов Lactobacillus и Bifidobacterium перспективных для создания пробиотиков / С.А. Старовойтова, Л.Н. Лазаренко, Л.В. Авдеева [и др.] // Научный вестник. - 2009. - №26. - С.216-219.

82. Степаненко, П.П. Руководство к лабораторным занятиям по микробиологии молока и молочных продуктов / П.П. Степаненко. - М., 2005. - 653 с.

83. Степанов, А.В. Этиологическая структура факторных инфекций свиней и крупнорогатого скота в хозяйствах ЦЧЗ России / А.В. Степанов, О.А. Манжурина,

Л.И. Ефанова // Вестник Курской государственной сельскохозяйственной академии. - 2012. - №. 6. - С. 71-72

84. Субботин, В.В. Влияние бифидобактерина на кишечную микрофлору поросят / В.В. Субботин // Ветеринария. - 1998. - № 5. - С. 24 - 26.

85. Субботин, В.В. Профилактика желудочно-кишечных болезней новорожденных животных с симптомокомплексом диареи / В. В. Субботин, М. А. Сидоров // Ветеринария. - 2001. - Т. 4. - С. 3-7

86. Субботин, В.В. Желудочно-кишечные болезни поросят с симптомокомплексом диареи: причины, профилактика и терапия / В.В. Субботин //Ветеринария и кормление. - 2005. - №. 3. - С. 12-13.

87. Тамбиев, Т.С. Апробация некоторых схем лечения при смешанных желудочно-кишечных инфекциях в свиноводческих хозяйствах Ростовской области / Т.С. Тамбиев, Л.А. Малышева // Ветеринарная патология. - 2012. - Т. 39.

- №. 1. - С.56-60.

88. Тараканов, Б.В. Использование микробных препаратов и продуктов микробиологического синтеза в животноводстве / Б.В. Тараканов // Ветеринария. -1987. - №3. - С.41-45.

89. Тараканов, Б.В. Использование пробиотиков в животноводстве. - Калуга: ВНИИ ФБ и П с/х животных. - 1998. - С. 5-6.

90. Тараканов, Б.В. Новые биопрепараты для ветеринарии / Б.В. Тараканов, Т.А. Николичева // Ветеринария. - 2000. - № 7. - С.45 - 50.

91. Тараканов, Б.В. Штамм бактерий Lactobacillus amylovorus, используемый для производства пробиотика лактоамиловорина //Патент РФ. - №. 2054478.

92. Татарников, К.В. Специфическая профилактика и антибиотикотерапия колибактериоза свиней / К.В. Татарников, Д.А. Евглевский, А.Я. Самуйленко // Вестник Курской государственной сельскохозяйственной академии. - 2013. - №. 7.

- C.52.

93. Теппер, Е.З. Практикум по микробиологии /Е.З Теппер [и др]; под ред. В.К. Шильниковой. - М.: Дрофа, 2004. -138 с.

94. Тим Сэндл Механизмы бактериальной адгезии / Тим Сэндл // Чистые помещения и технологические среды. - 2014. - №1. - С.54-58.

95. Тимченко, Л.Д. Сравнительный анализ традиционных питательных сред и новая капустная среда для культивирования лактобактерий / Л.Д. Тимченко, Н.И. Пенькова, Л.С. Катунина // Вестник МГОУ. - 2012. - №2. - С. 51-55.

96. Тихонов, И.В. Технология приготовления стабилизированной рабочей культуры в качестве посевного материала для глубинного культивирования / И.В. Тихонов, Ю.С. Овсянников, В.Е. Романов // Ветеринарная медицина. - 2010. -№3-4. - С.23-25.

97. Токарев, И.Н. Применение пробиотиков в промышленном свиноводстве / И.Н. Токарев, А.В. Близнецов, С.Р. Ганиева // Ученые записки КГАВМ им. Н.Э. Баумана. - 2014. - №3. - С.275-281.

98. Токарев, И.Н. Влияние пробиотика споровит на интенсивность роста поросят-отъемышей / И.Н. Токарев, С.Р. Ганиева // Ученые записки КГАВМ им. Н.Э. Баумана. - 2014. - №3. - С.271-275.

99. Учасов, Д.С. Опыт использования пробиотика «Ситексфлор №1» в рационе поросят после отъема и транспортировки / Д.С. Учасов, Н.И. Ярован, О.Б. Сеин // Вестник Курской государственной сельскохозяйственной академии. - 2013. - №5. -С.72-73.

100. Учасов, Д.С. Эффективность применения пробиотика «Проваген» при технологическом стрессе у свиней / Д.С. Учасов, Н.И. Ярован, О.Б. Сеин // Вестник Орел ГАУ. - 2013. - №1. - С. 129-131.

101. Ушакова, Н.А. Новое поколение пробиотических препаратов кормового назначения / Н.А. Ушакова, Р.В. Некрасов, В.Г. Правдин [и др.] // Фундаментальные исследования. - 2012. - №1. - С.184-192.

102. Федорова, М.П. Изучение коррекции дисбактериоза поросят-сосунов / М.П. Федорова, М.П. Неустроев, Н.П. Тарабукина // Интеллектуальный потенциал молодежи - селу 21 века: сб. матер. 2-ой респуб.науч.-практ. конф. молод. исследователей. - 2001. - С.86-89.

103. Филатов, О. Ацидофилин - для поросят / О. Филатов // Свиноводство. - 1991.

- № 4. - С. 33-34.

104. Хавкин, А.И. Коррекция дисбиотических изменений кишечника у детей на современном этапе / А.И. Хавкин, Н.С. Жихарева // Русский мед. журн. - 2004. - Т. 12. - № 16. - С. 960-963.

105. Червинец, Ю.В. Бактериоциногенные высокоантагонистические штаммы лактобацилл / Ю.В. Червинец [и др.] // Микробиология. - 2006. - №7. - С. 10-12.

106. Черныш, А.Ю. Антагонистическое действие пробиотических лактобактерий в отношении патогенных стрептококков различных серологических групп: автореферат дис. ... к.м.н.: 03.00.07 / Черныш Анита Юрьевна - Санкт-Петербург.

- 2008г. - 19 с.

107. Чичерин, И.Ю. Микроорганизмы пробиотиков и индигенной микрофлоры человека и животных. Характер взаимодействия при совместном культивировании на плотной питательной среде / И.Ю. Чичерин, И.П. Погорельский, И.А. Лундовских [и др.] // Кишечная микрофлора. - 2013. - №2. - С.54-60.

108. Шамилова, Т.А. Влияние пробиотика на микрофлору и гистоморфологию кишечника поросят при смешанном микотоксикозе / Т.А. Шамилова, Н.М. Шамилов // Ученые записки КГАВМ им. Н.Э. Баумана. - 2013. - №. 215. - С.355-359.

109. Шамилова, Т.А. Изучение эффективности пробиотика в опытах на свиньях / Т.А. Шамилова, Н.М. Шамилов // Ученые записки КГАВМ им. Н.Э. Баумана. -2012. - №211. - С.337-340.

110. Шандуренко, Г.В. // Газета Биология. Издательский дом «Первое сентября», № 23. — Режим доступа: ЬАр://Ью.1вер1етЬг.гиМе,^:аг1:1с1е/рЬр?Ш=200002308.

111. Шейко, И.П. Свиноводство / И.П. Шейко. - Мн.: Новое знание, 2005. - 384с.: ил.

112. Шендеров, Б.А. Медицинская микробная экология и функциональное питание. Том 3: Пробиотики и функциональное питание / Б.П. Шендеров. - М.: Грантъ, 2001.-288 с.

113. Шендеров, Б.А. Медицинская микробная экология и функциональное питание Т.1 / Б.А. Шендеров. - М.: ГРАНТЪ, 1998. - 288с.

114. Щербаков, П.Н. Применение фитобациллина при отъеме поросят / П.Н. Щербаков // Ветеринария. - 2001. - № 10. - С. 41.

115. Янковский, Д.С. Бифидобактерии и лактобациллы как оптимальная основа современных пробиотиков / Д.С. Янковский, Г.С. Дымент // Соврененная педиатрия. - 2006. - Т.3. - №12. - С.1-10

116. Янковский, Д.С. К вопросу о генетической изменчивости пробиотиков и индигенных бактерий человека / Д.С Янковский, В.В. Бережной, Г.С. Дымент // Современная педиатрия.-2005.-Т1. - №6.- С. 208-213.

117. Aattouri, N. Production of interferon induced by non-pathogenic bacteria / N. Aattouri, D. Lemonnier // Probiotics: prospects of the use in opportunistic infections. Old Herborn University Seminar Monograpg (eds. Fuller et al.). Inst. Microbiol. Biochem. Herborn. - 1995. - P. 81-88.

118. Bengmark, S. Ecoimmunonutrition: A Chalenge for the Third Millenium / S. Bengmark //Nutrition. - 1998. - V. 14. - № 7/8. - P. 563-572.

119. Bengmark, S. Ecological control of the gastrointestinal tract. The role of probiotic flora / S. Bengmark // Gut. - 1998. - V. 42. - P. 2-7.

120. Chang, Y.H. Selection of a potential probiotic Lactobacillus strain and subsequent in vivo studies / J.K. Kim, H.J. Kim, W.Y. Kim, Y.B. Kim, Y.H. Park // Antonie Van Leeuwenhoek. - 2001. - Vol.80. -P.193-199.

121. Chengli, H. Study and use of the probiotic Lactobacillus reuteri in pigs: a review / H. Chengli, Z. Xiangfang, Y. Fengjuan, L. Hong, Q. Shiyan // Journal of Animal Science and Biotechnology. - 2015. - P.6-14

122. Cupere, F. Evaluation of the Effect of 3 Probiotics on Experimental Escherichia coli Enterotoxaemia in Weaned Piglets / F. Cupere, et al. // Journal of Veterinary Medicine, Series B. - 1992. - P. 39. - N10. - P. 277-284.

123. Dworkin, M. Procaryotes. Third edition / M. Dworkin., S. Falkow, E. Rossenberg, K.-H. Schleifer, E. Stackebrandt. - 2001. - Vol. 1. - P.3661-3713.

124. Fguira, L. The antifungal activity of the terrestrial Streptomyces US80 strain is induced by heat-killed fungi / L. Fguira, S. Smaoui, I. Karray-Rebai et al // Biotechnology Journal. - 2008. - Vol. 3. - P. 1058-1066.

125. Frederico, P. Actions antibiotiques reciproques chez les Enterobacteriacees / P.Fredericq // Comptes rendus des séances de la societe de biologie et de ses filiales. -1948. - T. 142. - №7-8. - P. 543-546.

126. Gebert, S. Lactobacillus brevis strain 1E1 administered to piglets through milk supplementation prior to weaning maintains intestinal integrity after the weaning event / S. Gebert, E. Davis, T. Rehberger, C.V. Maxwell // Beneficial Microbes.- 2011. - Vol. 2.

- N1. - P. 35-45.

127. Guinebretière, M.-H. Enterotoxigenic Profiles of Food-Poisoning and FoodBorne Bacillus cereus Strains / M.-H. Guinebretière, V. Broussolle, Ch. Nguyen-The // J. Clin. Microbiol. - 2002. - Vol. 40. - N 8. - P. 3053-3056.

128. Henning, S. New aspects for the application of nisin to food products based on its mode of action / S. Henning, R. Metz, W. Hammes // Int. J. Food Microbiol. - 1986. -Vol.3. - P. 135-141.

129. Hong, H.A. The use of bacterial spore formers as probiotics / H.A. Hong, L.H. Duc, S.M. Cutting // FEMS Microbiol. Rev. - 2005. - Vol. 29. - N4. - P. 813-835.

130. Hopwood, D.E. Interactions between the intestinal microflora, diet and diarrhoea, and their influences on piglet health in the immediate post-weaning period / D.E. Hopwood, DJH Hampson // Weaning the pig concepts and consequences. - 2003. - P. 199-218.

131. Hyronimus, B. Acid and bile tolerance of spore-forming lactic acid bacteria / B. Hyronimus, C. Le Marrec, A. Hadj Sassi, A. Deschamps // Int. J. Food Microbiol. -2000. - Vol. 61. - P. 193-197.

132. Hyronimus, B. Coagulin, a bacteriocin-like inhibitory substance produced by Bacillus coagulans I4 / B. Hyronimus, C. Le Marrec, M.C. Urdaci // J. Appl. Microbiol.

- 1998. - Vol. 85. - P. 42-50.

133. Jakava-Viljanen M. Lactobacillus sobrius Konstantinov et al. 2006 is a later synonym of Lactobacillus amylovorus Nakamura 1981 //International journal of systematic and evolutionary microbiology. - 2008. - Т. 58. - №. 4. - С. 910-913

134. Janczyk, P. Changes in the diversity of pig ileal lactobacilli around weaning determined by means of 16SrRNA gene ampliphication and denaturing gradient gel electrophoresis / P. Janczyk, R. Pieper, H. Smidt, W.B. Souffrant // FEMS Microbiol Ecol. - 2007. - Vol. 61. - P. 132-140.

135. Konstantinov, S.R. Feeding of Lactobacillus sobrius reduces Escherichia coli F4 levels in the gut and promotes growth of infected piglets / S.R. Konstantinov, et al. // FEMS microbiology ecology. - 2008. - Vol. 66. - N. 3. - P.599-607.

136. Konstantinov, S.R. Lactobacillus sobrius sp. nov., abundant in the intestine of weaning piglets/ S.R. Konstantinov, E. Poznanski, S. Fuentes, A.D.L. Akkermans, H. Smidt, W.M. de Vos // International Journal of Systematic and Evolutionary Microbiology.- 2006. - Vol. 56. - P. 29-32.

137. Konstantinov, S.R. Microbial diversity studies of the porcine gastrointestinal ecosystem during weaning transition // S.R. Konstantinov, Ch.F. Favier, W.Y. Zhu, B.A. Williams, J. Klub, W.-B. Soufrant, W.M. DE Vos, A.D.L. Akkermans, H. Smidt / Animal research.- Vol. 53, Number 4. - P. 317 - 324

138. Konstantinov, S.R. Microbial diversity studies of the porcine gastrointestinal ecosystem during weaning transition / S.R. Konstantinov, C.F. Favier, W.Y. Zhu,

B.A. Williams, J. Klub, W.-B. Soufrant, W.M. de Vos, A.D.L. Akkermans, H. Smidt // Animal Research. - 2004. - Vol. 53. - N.4. - P. 317-324.

139. Konstantinov, S.R. Post-natal development of the porcine microbiota composition and activities / S.R. Konstantinov, A.A. Awati, B.A. Williams, B.G. Miller, P. Jones,

C.R. Stokes, A.D.L. Akkermans, H. Smidt, W.M. de Vos // Environmental Microbiology. - 2006. - Vol. 8. - N. 7. - P. 1191-1199.

140. Lactobacillus Brevis strain: пат. № 60397654 США, № 2004/01266871; заявл. 22.07.2003 опубл. 08.04.2008 - 10c.

141. Lee, K.H. Partial characterization of polyfermenticin SCD, a newly identified bacteriocin of Bacillus polyfermenticus / K.H. Lee, K.D. Jun, W.S. Kim, H.D. Paik // Lett. Appl. Microbiol.- 2001. - Vol. 32. - P. 146-151.

142. Liu, H. Oral administration of Lactobacillus fermentum I5007 favors intestinal development and alters the intestinal microbiota in formula-fed piglets / H. Liu, J. Zhang, S. Zhang, F. Yang, P.A. Thacker, G. Zhang, et al. // Agric Food Chem. - 2014. - Vol.62. - P.860-866.

143. Martin, L. Cross Microbes versus microbes: immune signals generated by probiotic lactobacilli and their role in protection against microbial pathogens / L. Martin // Immunology and Medical Microbiology. - 2002. - Vol 34. - P.245-253.

144. Mathew, A. G. Incidence of antibiotic resistance in fecal Escherichia coli isolated from commercial swine farms / A.G. Mathew, W.G. Upchurch, S.E. Chattin // Journal of Animal Science. - 1998. - Vol. 76. - N. 2. - P. 429.

145. Oggioni, M.R. Recurrent septicemia in an immunocompromised patient due to probiotic strains of Bacillus subtilis / M.R. Oggioni, G. Pozzi, P.E. Balensin, P. Galieni, C. Bigazzi // J. Clin. Microbiol. - 1998. - Vol. 36. - P. 325-326.

146. Ohkawara, S. Oral Administration of Butyrivibrio fibrisolvens, a Butyrate-Producing Bacterium, Decreases the Formation of Aberrant Crypt Foci in the Colon and Rectum of Mice / S. Ohkawara,H. Furuya, K. Nagashima, N. Asanuma, T. Hino // J. Nutr. - 2005. - Vol. 135. - Р. 2878-2883.

147. Pieper, R Ecophysiology of the Developing Total Bacterial and Lactobacillus Communities in the Terminal Small Intestine of Weaning Piglets /R. Pieper, P. Janczyk, A. Zeyner, H. Smidt, V. Guiard, W.B. Souffrant // Microb Ecol. - 2008. - Vol. 56. - P. 474-483.

148. Pieper, R. The intestinal microflora of piglets around weaning - with emphasis on lactobacilli / R. Pieper, P. Janczyk, R. Schumann, W.B. Souffrant // Archiva Zootechnica.- 2006. - Vol. 9. - Р.28-40.

149. Pinchuk, I.V. In vitro anti-Helicobacter pylori activity of the probiotic strain Bacillus subtilis 3 is due to secretion of antibiotics / I.V. Pinchuk, P. Bressollier,

B. Verneuil, B. Fenet, I.B. Sorokulova, F. Megraud, M.C. Urdaci // Antimicrob. agents and Chemother. - 2001. - Vol. 45. - P. 3156-3161.

150. Probiotics Clostridium butyricum MIYAIRI strain. http: //www. miyarisan/

151. Pryde, S. E. Molecular analysis of the microbial diversity present in the colonic wall, colonic lumen, and cecal lumen of a pig / S.E. Pryde et al //Applied and Environmental Microbiology. - 1999. - Vol. 65. - N.12. - P. 5372-5377.

152. Roselli, M. The novel porcine Lactobacillus sobrius strain protects intestinal cells from enterotoxigenic Escherichia coli K88 infection and prevents membrane barrier damage / M. Roselli, et al. // The Journal of nutrition. - 2007. - Vol. 137. - N12. - P. 2709-2716.

153. Sanders, M.E. Lactic Acid Bacteria and Human Health. Probiotics: prospects of the use in opportunistic infections. / M.E. Sanders // Old Herborn University Seminar Monograpg (eds. Fuller et al.). Inst. Microbiol. Biochem. Herborn/ - 1995. - P. 126-140.

154. Sanders, M.E. Sporeformers as Human Probiotics: Bacillus, Sporolactobacillus, and Brevibacillus / M.E. Sanders, L. Morelli, T.A. Tompkins // Compr. Rev. Food Sci. and Food Safety. - 2003. - Vol. 2. - P. 101-110.

155. Simone, C.De. Rethinking the role of probiotics for the prevention and treatment of enteropathies / C. De Simone, G. Fameilaro, E. Jirillo et al. // Probiotics: prospects of the use in opportunistic infections. Old Herborn University Seminar Monograpg (eds. Fuller et al.). Inst. Microbiol. Biochem. Herborn. - 1995. - P. 67-80.

156. Spinosa, M.R. On the fate of ingested Bacillus spores / M.R. Spinosa, T. Braccini, E. Ricca, M. De Felice, L. Morelli, G. Pozzi, M.R. Oggioni // Res. Microbiol. - 2000. -Vol. 151. - P. 361-368.

157. Vondruscova, H. Alternatives to antibiotics growth promoters in preventionsof diarrhea in weaned piglets: a rewiev / H. Vondruscova, R. Slamova, M. Trckova, Z. Zraly, I. Pavlik // Veterinarni Medicina. - 2010. - Vol. 55. - N5. - P. 199-224.

158. Wang, A. Influence of Lactobacillus fermentum I5007 on the intestinal and systemic immune responses of healthy and E. coli challenged piglets / A. Wang, H. Yu, X. Gao, X. Li, S. Qiao // Antonie Van Leeuwenhoek. - 2009. - Vol.96. - H.89-98.

159. Wang, A.N. Dietary supplementation with Lactobacillus fermentum I5007 improves the anti-oxidative activity of weanling piglets challenged with diquat / A.N. Wang, C.J. Cai, X.F. Zeng, F.R. Zhang, G.L. Zhang, P.A. Thacker, et al // J Appl Microbiol. - 2013. - Vol.114. - P.1582-1591.

160. Wang, S.P. Dietary supplementation with high-dose Bacillus subtilis or Lactobacillus reuteri modulates cellular and humoral immunities and improves performance in weaned piglets / S.P. Wang, L.Y. Yang, X.S. Tang, L.C. Cai, G. Liu, X.F. Kong, et al. // J Food Agric Environ. - 2011. - Vol.9. - P.181-187.

161. Yu, H. Effect of viable Lactobacillus fermentum on the growth performance, nutrient digestibility and immunity of weaned pigs / H. Yu, A. Wang, X. Li, S. Qiao // J Anim Feed Sci.- 2008. - Vol.17. - P.61-69.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

Публикации в научных журналах, рецензируемых ВАК:

1. Позолотина, Н.В. Технология приготовления жидкой формы ветеринарного пробиотического препарата на основе штамма Lactobacillus paracasei / Н. В. Позолотина, И. В. Дармов, И. В. Маракулин, И. П. Погорельский // Фундаментальные исследования. - 2015. - №2.ч 10. - С. 2164-2169.

2. Дармов, И. В. Выделение и сравнительная характеристика штаммов лактобацилл - представителей нормальной кишечной микрофлоры поросят / И. В. Дармов, И. В. Маракулин, И. П. Погорельский, Н. В. Позолотина // Актуальные вопросы ветеринарной биологии. - 2015. - №2. - С.3-10.

3. Позолотина, Н. В. Оценка влияния биопрепарата на основе гомопробиотического штамма лактобацилл на кишечную микрофлору и продуктивность поросят-отъемышей в условиях промышленного свиноводства / Н. В. Позолотина, И. В. Дармов, И. В. Маракулин, И. П. Погорельский, В. А. Севрюгин, О. Н. Демакова, А. В. Жаворонкова // Ветеринарный врач. - 2015. - №5. - С. 29-36.

Статьи в научных изданиях:

4. Чичерин, И. Ю. Эволюция пробиотиков: историческая оценка и перспектива / И. Ю. Чичерин, И. П. Погорельский, И. А. Лундовских, И. В. Дармов, К. Е. Гаврилов, Н. В. Позолотина // Дневник казанской медицинской школы. -2015. - №1. - С.42-51.

5. Позолотина (Шестакова), Н.В. Выделение и идентификация условно патогенных и патогенных видов энтеробактерий для использования в качестве тест-штаммов при оценке антагонистических свойств пробиотических препаратов ветеринарного назначения / Н. В. Позолотина, И. В. Маракулин,

О. В. Подшивалова // Сборник материалов XXIV Международной научно-практической конференции «Наука и современность - 2013». - 2013. - С.25-29.

6. Позолотина (Шестакова), Н.В. Выделение антагонистически активных лакто- и бифидобактерий, перспективных для лечения и профилактики дисбактериозов у молодняка сельскохозяйственных животных / Н. В. Позолотина, И. В. Маракулин, О. В. Подшивалова // НПК-2013, 15-26 апреля 2013. - ВятГУ -Киров, 2013. - 1 электрон. опт. диск (CD-ROM). (Биологический факультет. Секция «Микробиология». Статья №21).

7. Позолотина (Шестакова), Н. В., Выделение и идентификация штаммов бифидо- и лактобактерий, обладающих антагонистическими свойствами в отношении энтеропатогенных микроорганизмов молодняка сельскохозяйственных животных / Н. В. Позолотина, И. В. Маракулин // Сборник научных трудов международной научно-практической конференции молодых ученых, аспирантов и соискателей «Знания молодых: наука, практика и инновации». - 2013. - №1. -С.230-232.

8. Позолотина (Шестакова), Н. В. Создание набора энтеропатогенных бактерий для оценки антагонистических свойств лакто- и бифидобактерий / Н. В. Позолотина, И. В. Маракулин, О. В. Подшивалова // Материалы Всероссийской ежегодной научно-практической конференции «Общество, наука, инновации» НПК-2013, 15-26 апреля 2013. - 1 электрон. опт. диск (CD-ROM). (Биологический факультет. Секция «Микробиология». Статья №11).

9. Позолотина (Шестакова), Н. В., Биохимические свойства изолятов лактобацилл, выделенных из кишечника поросят-отъемышей / Н. В. Позолотина, И. В. Маракулин, А. В. Окатова // Сборник материалов Всероссийской ежегодной научно-практической конференции «Общество, наука, инновации». - ВятГУ -Киров, 2014. - 1 электрон.опт. диск (CD-ROM). (Биологический факультет. Секция «Микробиология». - С.169-172).

10. Позолотина (Шестакова), Н.В. Оценка адгезивных свойств лактобактерий на эритроцитах человека и сельскохозяйственных животных / Н. В. Позолотина,

И. В. Маракулин, А. В. Окатова // Сборник материалов Всероссийской ежегодной научно-практической конференции «Общество, наука, инновации». - ВятГУ -Киров, 2014. - 1 электрон.опт. диск (CD-ROM). (Биологический факультет. Секция «Микробиология» - С.179-182).

11. Позолотина, Н. В. Выбор питательной среды и оптимизация условий выращивания Lactobacillus paracasei / Н. В. Позолотина, И. В. Маракулин, А. Ю. Орлова // Сборник материалов Всероссийской ежегодной научно-практической конференции «Общество, наука, инновации». ВятГУ - Киров, 2015.

- 1 электрон.опт. диск (CD-ROM). (Биологический факультет. Секция «Микробиология» - С.142-143).

12. Позолотина, Н. В. Оценка и выбор стабилизирующих добавок, обеспечивающих высокую выживаемость лактобацилл в составе жидкого препарата на основе штамма Lactobacillus paracasei / Н. В. Позолотина, И. В. Маракулин, А. Ю. Орлова // Сборник материалов Всероссийской ежегодной научно-практической конференции «Общество, наука, инновации» - Киров, 2015.

- 1 электрон. опт. диск (CD-ROM). (Биологический факультет. Секция «Микробиология» - С.144-146).

13. Позолотина, Н. В. Исследование антибиотикорезистентности новых пробиотических штаммов лактобацилл, выделенных из кишечного содержимого молочных поросят / Н.В. Позолотина, И.В. Маракулин, А.Ю. Орлова // Сборник материалов Всероссийской ежегодной научно-практической конференции «Общество, наука, инновации» - Киров, 2015. - 1 электрон.опт. диск (CD-ROM). (Биологический факультет. Секция «Микробиология»— С.147-148).

14. Позолотина, Н. В. Оптимизация режимов глубинного культивирования Lactobacillus paracasei в ферментере LIFLUS GS производства BIO-TRON-IC / Н.В. Позолотина, И.В. Маракулин, А.Ю. Орлова // Сборник материалов Всероссийской ежегодной научно-практической конференции «Общество, наука, инновации» -Киров, 2015. - 1 электрон.опт. диск (CD-ROM). (Биологический факультет. Секция «Микробиология» - С.149-151).

15. Позолотина, Н. В. Научное обоснование использования пробиотиков на основе гомопробиотических штаммов лактобацилл в свиноводстве (Обзор) / Н. В. Позолотина, И. В. Дармов, И. В. Маракулин // Научные механизмы решения проблем инновационного развития. - 2015. - С. 3-7.

Тезисы в материалах научных конференций:

16. Позолотина (Шестакова), Н. В. Выделение штаммов бифидо- и лактобактерий, обладающих антагонистической активностью в отношении энтеропатогенных видов микроорганизмов, возбудителей острых кишечных инфекций у молодняка сельскохозяйственных животных / Н. В.Позолотина, И. В. Маракулин // Материалы XVII международной экологической студенческой конференции «Экология России и запредельных территорий». - 2012. - №1. - С.99-100.

17. Позолотина (Шестакова), Н. В. Определение биологической концентрации лактобацилл в суспензиях с помощью спектрофотометрического метода / Н. В. Позолотина, И. В. Маракулин, А. П. Позолотин // Сборник тезисов, материалы Двадцатой Всероссийской научной конференции студентов-физиков и молодых ученых. - 2014. - №1. - С. 391-392.

18. Позолотина, Н. В. Оптимизация методики определения адгезивных свойств фотоколориметрическим методом пробиотического штамма Lactobacillus paracasei / Н. В. Позолотина, И. В. Маракулин, А. П. Позолотин // Сборник тезисов, материалы Двадцать первой Всероссийской научной конференции студентов-физиков и молодых ученых. - 2015. - №1. - С. 366-367.

Всероссийская Коллекция Промышленных Микроорганизмов

ФГУП Го сНИИ Генетика

ЕЗ Россия. Москва 117545, 1-ый Дорожный проезд. 1 ФГУПГосНИИГенетика • ВКПМ; Я [phone]; факс: [phone]: Эл. почта: [e-mail];

Идентификация штамма 1 до вида с помощью анализа генов, кодирующих 168 рРНК

Заказчик: фгбоу впо «ВятГУ» Дата: 25.11.2013

Этапы работ

I. Рассев культуры заказчика до отдельной колонии и получение биомассы для анализа генов, кодирующих 16S рРНК

I. Выделение ДНК. II. Выбор праимеров и режимы ПЦР.

Консервативные праймеры для наработки генов, кодирующих 16S рРНК -8f - aga gtt tga tcc tgg ctc ag 926r - ccg tea att cet ttr agt tt 1492r - ggt tac cet tgt tac gac tt с режимами реакции: 1.95°С -Змин. 2.35 циклов 95°С -30 сек. 57°С -30 сек. 72°С- 1 мин. 30 сек. 3. 72°С - 5мин

III. Идентификация с использованием видоспецифических праймеров В работе были использованы праймеры: ]. Группоспецифические для видов Lactobacillus casei, Lactobacillus paracasei,

Lactobacillus rhamnosus (3).

LU-5 CTAGCGGGTGCGACTTTGTT LaC-2 CCTCTTCGCTCGCCGCTACT

Режим реакции ПЦР: 95°C - Змин. -1 цикл 35 циклов: 95°С - 30 сек. 60°С - 30 сек. 72°С- 60 сек. 72°С - 5мин - 1 цикл.

2. Праймеры, специфические для вида Lactobacillus rhamnosus (3) LU-5 CTAGCGGGTGCGACTTTGTT RJiall GCGATGCGAATTTCTATTATT

Режим реакции ПЦР: 95cC - Змин. -1 цикл 35 циклов: 95"С - 30 сек. 63°С - 30 сек. 72°С- 60 сек. 72°С - 5мин - 1 цикл.

3. Праймеры, специфические для вида Lactobacillus paracasei (3) LU-5 CTAGCGGGTGCGACTTTGTT Lpar-4 GGCCAGCTATGTATTCACTGA

Режим реакции ПЦР:

95°C - Змин. -1 цикл 35 циклов:

95°С - 30 сек. 63°С - 30 сек. 72°С- 60 сек. 72°С - 5мин -1 цикл.

IV. Секвенирование генов, кодирующих 168 рРНК, сравнение секвенсов и построение деревьев родства.

Секвенирование проводится на автоматическом секвенаторе АЕ3000.

Для анализа секвенсов используются специализированные филогенетические компьютерные программы.

Стабильность воспроизведения результатов. Проводится не менее трех повторов ПЦР-реакций.

Условия электрофореза ПЦР исследуемых образцов.

1,0% агарозный гель, электрофорез при напряженности электрического поля 5 В/см а) Секвенирование вариабельных участков генов, кодирующих 168 рРНК.

При секвенировании вариабельных участков генов, кодирующих 168 РНК, получена следующая собранная нуклеотидная последовательность для исследуемого штамма:

ОАОТТСАСТОТССАТСТТСТССАСТСААСТТТСССАОТТТССОАТОСАСТАТСС

ТСООТТААОССОАОООСТТТСАСАТСАОАСТТААААААССОССТССОСГСОСТ

ТТАСОСССААТАААТССООАТААСОСТТОССАССТАССТАТТАСССССОСТСС

ТООСАССТАСТТАССССТСОСТТТСТССТТСОАТАСССТСАСОССОАСААСАО

ТТАСТСТССССАССАТТСТТСТССААСААСАСАСТТТТАССАСССОАААОССТ

ТСТТСАСТСАСОССОСОТТССТССАТСАОАСТТОСОТССАТТСТСОААОАТТС

ССТАСТОСТОССТСССОТАООАОТТТОООССОТОТСТСАСТСССААТСТОССС

ОАТСААССТСТСАОТТСООСТАССТАТСАТТОССТТОСТОАОСССТТАССТСА

ССААСТАОСТААТАССССОСОООТССАТССААААОСОАТАОСТТАСОССАТСТ

TTCAGCCAAGAACCATGCGGTTCTTGGATTTATGCGGTATTAGCATCTGTTTCC AAATGTTATCCCCCACTTAAGGGCAGGTTACCCACGTGTTACTCACCCGTCCG CCACTCGTTCAAAATTAAATCAAGATGCAAGCACCTTTCAATAATCAGAACTC GTTCGACTTGCATGTATTAGGCACGCCGCCAGCGTCCATCCTGAGCCAGGATC

б) Аназиз результатов секвенирования и построение дерева родства.

Первичный скрининг по базе данных GenBank и RDP-II показал, что исследуемый штамм принадлежит к следующим систематическим группам Bacteria; Firmicutes; Lactobacillales; Lactobacillaceae; Lactobacillus, причем гомология с некоторыми видами рот Lactobacillus составляет 97%.

Последовательности были выровнены с соответствующими последовательностями ближайших видов бактерий, доступными из базы данных GenBank.

Результаты обработки секвенсов при помощи компьютерной программы находящейся на сайте RDB II (Ribosomal Database Project II), предназначенной для определения родства микроорганизмов и построения филогенетических деревьев, представляются в графическом

rhamnosus (Т); JCM 1136; D16552

zeae (Т); АТСС15820; D86516

paracasei (Т); NBRC 15906; АВ181950

manihotivorans (Т); OND 32; LMG 18010Т; AF000162

pantheris (Т); AF413523

casei (Т); АТСС 393; AF469172

paracasei (Т); JCM 8130; D79212

thailandensis (Т); МСН5-2; АВ257863

camelliae (Т); МСНЗ-1; АВ257864

oligofermentans (Т); AMKR18; AY733084

виде.

S000003746 0.986 0.915 1404 Lactobacillus

S000009879 0.983 0.885 1431 Lactobacillus

S000319968 0.978 0.864 1416 Lactobacillus

S000386800 0.952 0.686 1470 Lactobacillus

S000393517 0.947 0.703 1455 Lactobacillus

S000395052 0.983 0.888 1432 Lactobacillus

S000413948 0.980 0.864 1438 Lactobacillus

S000652803 0.940 0.671 1418 Lactobacillus

S000652804 0.953 0.721 1424 Lactobacillus

S002967794 0.935 0.673 1472 Lactobacillus

Дальнейший анализ по ЯОР II 168 рРНК базе данных показал гомологию с теми же видами бактерий.

По данным анализа было построено филогенетическое дерево с гомологичными штаммами.

3. Маркер O'GeneRuler 100 bp DNA Ladder (mo, m зоо. 400,3oo, боо, too. 800.900, ,ooo. iaoo, noo, 2000,

3000 п.н, сверху вниз)

Наработка фрагмента размером 312 н.н. при использовании видоспецифических праймеров LU-5 и LPar-4 позволяет утверждать, что исследуемый штамм относится к виду

Lactobacillus paracasei.

Отсутствие фрагмента размером 113 н.н. при использовании видоспецифических праймеров LU-5 и Rhall позволяет утверждать, что исследуемый штамм не относится к виду Lactobacillus

rhamnosus.

заключение

По результатам проведенного анализа секвенсов вариабельных участков генов, кодирующих 16S рРНК, тестируемый штамм наиболее близок к виду

Lactobacillus paracasei (98%).

Для исследования использовалась следующая литература:

1 .Выделение ДНК для ПЦР

PCR Protocols. A Guide to methods and applications . Innis M, Gelfand D., Sninsky J.p. 14-15.

2. Условия ПЦР

Каталог MBI Fermentas 1998U999, 146-157.

Pavlicek A et al "Fre-Tree-freeware program for construction of phylogenetic trees on the basis of distance data and bootstrap\jackknife analysis of tree robustness. " Application in the RAPD analysis of genus Frenkelia Folia Biol (Praha) 1999 45(3) 97-9.

3. FEMS Microbiology Letters. 187 (2000) 167-J

4. Построение деревьев родства Ribosomal Database Project II ihttp://www-<

Директор ВКПМ

Синеокий С.п.

Всероссийская Коллекция Промышленных Микроорганизмов

ФГУП ГосНИИГенетика

В Россия. Москва. 117545.1-ый Дорожный проезд. 1 ФГУПГосНИИГенетика -ВКПМ. S [phone]; факс: [phone]: Эл почта vkpm@genetika ru;

Форма ВКПМ-ВР/4

Л" 11821

НАЦИОНАЛЬНОЕ ПАТЕНТНОЕ ДЕПОНИРОВАНИЕ

СПРАВКА О ДЕПОНИРОВАНИИ

Всероссийская Коллекция Промышленных Микроорганизмов (ВКПМ)

ФГУП ГосНИИгенетика приняла на национальное патентное депонирование

культуру:

Lactobacillus paracasei 1

Дата депонирования: 26 октября 2014 года

Депозитор: ФГБОУ ВПО «Вятский государственный университет»

Продукт, продуцируемый штаммом (область применения штамма): Ветеринарный пробиотический препарат.

РЕГИСТРАЦИОННЫЙ НОМЕР ВКПМ: В-11821

Директор ВКПМ д.б.н., проф.

Синеокий С.П.