Совершенствование технологии приготовления пробиотика на основе лактобактерий, оценка его свойств и эффективности применения в птицеводстве тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.23, кандидат биологических наук Овсянников, Юрий Степанович

• Овсянников, Юрий Степанович
• кандидат биологических наук
• 2009

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Овсянников, Юрий Степанович

ПЕРЕЧЕНЬ СОКРАЩЕНИЙ, УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ, СИМ- 4 ВОЛОВ, ЕДИНИЦ И ТЕРМИНОВ

ВВЕДЕНИЕ.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Анализ заболеваемости птиц в птицеводческих хозяйствах Кировской области и Российской Федерации за последние годы.

1.2. Классификация пробиотиков, состав, назначение.

1.3. Возможные направления совершенствования технологии получения пробиотиков из штаммов лактобактерий.

2. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

2.1. Материалы и методы исследования.

2.1.1 Штаммы микроорганизмов.

2.1.2 Питательные среды.

2.1.3. Лабораторные и сельскохозяйственные животные.

2.1.4. Методы оценки биологических свойств лактобактерий.

2.1.5 Методы культивирования микроорганизмов.

2.1.6 Методы оценки реактогенности, безвредности и токсигенности 57 2.1.7. Статистические методы обработки результатов.

2.2. Экспериментальное обоснование усовершенствования методики выделения молочнокислых бактерий от птиц в птицеводческих хозяйствах Кировской области.

2.3. Изучение биологических свойств выделенных штаммов молочнокислых бактерий.

2.4. Технология приготовления эталонных культур отобранных штаммов и оценка стабильности их свойств.

2.5. Отработка технологии приготовления и оптимизация прописи стабилизированной рабочей культуры в качестве посевного материала для глубинного культивирования.

2.6. Технология приготовления лабораторного образца пробиотиче-ского препарата на основе штамма Р6 лактобактерий.

2.7. Изучение стабильности основных биологических свойств лабораторного образца биопрепарата.

2.8. Изучение безвредности, реактогенности и токсигенности лабораторного образца пробиотика на основе штамма Р6 лактобактерий в опытах на лабораторных животных.

2.9. Изучение эффективности лабораторного образца пробиотика в опытах на курах в птицеводческих хозяйствах Кировской области.

3. ОБОБЩЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ.

4. ВЫВОДЫ.

5. ПРАКТИЧЕСКОЕ ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ НАУЧНЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ.

6. РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ИСПОЛЬЗОВАНИЮ НАУЧНЫХ ВЫВОДОВ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Совершенствование технологии приготовления пробиотика на основе лактобактерий, оценка его свойств и эффективности применения в птицеводстве»

Актуальность темы.

В последние годы в Российской Федерации наблюдается резкое ухудшение эпидемической и эпизоотической ситуации, что безусловно связано с нарастанием неблагоприятных изменений в экосфере. Отмечено повышение удельного веса дисбактериозов, причиной которых являются ухудшение экологической обстановки, неконтролируемое использование в ветеринарии и сельском хозяйстве антибиотиков и различных химиопрепаратов, гормонов и т.п., а также стрессовые факторы и условия, снижение качества питьевой воды и кормов [12, 19, 22-27, 39-45].

На сегодня считается бесспорным, что дисбактериозы у сельскохозяйственных животных и птиц приобретают широкое распространение, так как при отсутствии своевременной коррекции нарушений нормофлоры весьма высока вероятность развития у них тяжелых, рецидивирующих инфекционных заболеваний, иммунодефицитов, различных аллергопатий, анемий, гастроэнтерологических и других болезней, включая отставание в привесах, снижение репродуктивное™ [103-121].

В значительной степени нелеченые дисбактериозы опасны как для молодняка, так и репропродуктивного поголовья сельскохозяйственных животных и птиц. Рост инфекционной заболеваемости бактериальной, вирусной и другой этиологии во многом, помимо эпизоотологических и экологических предпосылок, предопределен снижением уровня неспецифической резистентности организма животных и птиц из-за выраженных дисбиотических нарушений [1, 4952, 57-60].

Учитывая отмеченное, профилактика и лечение инфекционных заболеваний и дисбактериозов сельскохозяйственных животных и птиц в настоящее время и на ближайшую перспективу являются приоритетными задачами ветеринарии.

Их решение возможно при условии реализации комплекса соответствующих противоэпизоотических мероприятий, включая разработку, серийное производство и внедрение в практику новых лечебно-профилактических средств для предупреждения и терапии инфекционных болезней и дисбактериозов, отвечающих современным требованиям. При этом немаловажное значение для обеспечения действенности системы этих мероприятий имеет адекватность и единая методология использования соответствующих лечебно-профилактических препаратов. Таковые, в свою очередь, обусловливают необходимость подготовки, утверждения и доведения до широкого круга ветеринарных специалистов информационно-методических и справочных документов по вышеназванным проблемам.

В настоящее время в числе высокоэффективных лечебно - профилактических препаратов отечественными и зарубежными специалистами рассматриваются пробиотики (эубиотики). Пробиотики - это препараты из живых безвредных для организма человека и теплокровных животных, антагонистически активных бактерий, подавляющих in vitro и in vivo рост и размножение патогенных и условно патогенных микроорганизмов, вызывающих острые кишечные заболевания (ОКЗ) и токсикоинфекции. Пробиотики, в отличие от антибиотиков и химиопрепаратов, не оказывают негативного влияния на представителей нормомикро флоры желудочно-кишечного тракта, слизистых сельскохозяйственных животных и птиц, а наоборот, при дисбиотических изменениях способствуют её качественному и количественному восстановлению до нормальных физиологических значений [71-87].

Отечественная ветеринарная практика располагает пока ещё недостаточной информацией об использовании пробиотиков при лечении и профилактики острых кишечных инфекций и дисбактериозов. Известно, что использование пробиотиков биосана и препарата на основе штаммов Bac.subtilis при лечении и профилактике острых кишечных инфекций и дисбактериозов показало их удовлетворительную эффективность и перспективность. При этом очевидна необходимость углубления исследований по проблеме пробиотиков в аспекте поиска новых штаммов микроорганизмов с пробиотическим действием, совершенствования имеющихся и создания новых препаратов данного вида для повышения их эффективности, а также разработка универсальной технологии.

Перспективными в отношении предотвращения заболеваний желудочно-кишечного тракта являются представители нормальной микрофлоры животных и птицы - молочнокислые бактерии, обладающие широкой природной антагонистической активностью в отношении патогенных и условно-патогенных микроорганизмов. Ввиду незначительного числа публикаций об эубиотическом действии лактобактерий в отечественной литературе актуальными являются исследования механизмов их антагонистического действия и условий сохранения, поддержания и усиления полезных свойств. Полученные результаты могут служить основой для разработки современных высокоэффективных пробиоти-ков на основе лактобактерий для ветеринарных целей.

В связи вышеизложенным конструирование эффективных препаратов на основе микроорганизмов с пробиотическими свойствами и создание усовершенствованных технологий их приготовления является весьма актуальной задачей.

Практика показывает, что наиболее эффективными в отношении сельскохозяйственной птицы являются пробиотические препараты на основе штаммов микроорганизмов, которые выделены из здоровых особей конкретного региона. Для создания нового пробиотического препарата были исследованы биологические свойства 12 штаммов молочнокислых бактерий, выделенных от кур птицефабрик Кировской области, и доказана эффективность лабораторного образца препарата, приготовленного на основе отобранного штамма Р6 с использованием разработанной питательной среды и усовершенствованной технологии.

Создание нового пробиотического препарата потребовало разработку и введение в процесс приготовления усовершенствованной питательной среды (ПС) для сохранения и поддержания исходных свойств выделенного штамма молочнокислых бактерий, накопления биомассы микробных культур на стадиях процесса приготовления готовой формы препарата, а также разработку и внедрение в технологический процесс новой операции по приготовлению стабилизированной рабочей культуры (СРК) из посевной микробной культуры, выращенной глубинным способом в бутылях.

Цель работы - создание усовершенствованной технологии производства, пригодной для промышленного выпуска пробиотика на основе выделенного штамма Lactobacillus plantarum, с использованием в качестве посевного материала стабилизированной рабочей культуры и вновь разработанной по составу жидкой питательной среды для получения нативной культуры (НК) при глубинном способе выращивания в аппаратах-культиваторах (АКВ).

Задачи исследования.

1. Усовершенствовать методику выделения лактобактерий, сохранить и поддержать эталонные штаммы полученных молочнокислых бактерий, изучить их биологические свойства.

2. Разработать технологию приготовления стабилизированной рабочей культуры и обосновать пропись защитной среды.

3. Отработать методику приготовления лабораторного и промышленного образца пробиотического препарата при использовании разработанной ПС и СРК и исследовать стабильность и воспроизводимость его прикладных и эксплуатационных характеристик.

4. Изучить специфическую безопасность и токсичность пробиотического препарата на лабораторных животных.

5. Усовершенствовать имеющуюся технологию промышленного производства пробиотиков на основе лактобактерий глубинным способом в аппаратах-культиваторах, оценить лечебно-профилактическую эффективность нового биопрепарата.

6. Создать нормативно-техническую документацию на приготовление готовой формы пробиотического препарата и его контроль.

Научная новизна. 1. Впервые на основе выделенных в птицеводческих хозяйствах Кировской области штаммов лактобактерий оптимизирован способ поддержания посевных материалов и приготовления нативных культур, основанный на использовании стабилизированной рабочей культуры, хранящейся при минус 20°С в течение шести месяцев.

2. Впервые для приготовления в аппаратах - культиваторах нативной культуры глубинным способом культивирования в жидкой питательной среде предложен ее новый состав, обеспечивающий высокие ростовые характеристики лактобацилл при производстве.

3. Предложенная промышленная технология производства пробиотика позволяет стабилизировать стадию культивирования за счет разработанной ПС и СРК, сократить процесс приготовления НК на 5 суток. Получен экономический эффект в расчёте на 1 суточную дозу молодняка кур на 24%. Себестоимость суточной дозы пробиотика, полученного по традиционной технологии, составила 1,58 копеек, а по усовершенствованной нами технологии - 1,2 копейки.

Практическая значимость работы. 1. Усовершенствованная промышленная технология за счет использования СРК сокращает на 5 суток пусковой период производства, стандартизирует стадию выпуска нативной культуры, снижает процент брака.

2. Включение в схему производства СРК, хранящейся в течение 6 месяцев при минус 20°С, обеспечивает выпуск пробиотика на протяжении длительного периода времени стандартным по составу посевным материалом в необходимых объемах.

3. Разработанная пропись жидкой питательной среды для приготовления НК обеспечивает выход биомассы Lactobacillus plantarum в объеме регламентных требований.

4. Приготовленный пробиотик на основе регионального штамма Lactobacillus plantarum Р6 при его применении в промышленном производстве молодняка кур повышает их сохранность до 5%.

Апробация работы. Материалы диссертационной работы доложены на Международной научно-практической конференции, посвященной 100- летию со дня рождения П.Г. Петского (Киров, 2009).

Публикации. По материалам диссертационной работы опубликовано 6 научных работ, в том числе 3 статьи в сборнике международной конференции, 3 статьи в журнале, включённом в перечень ВАК РФ.

Объём и структура диссертации. Материалы диссертации изложены на 127 страницах машинописного текста и включают введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение полученных результатов, выводы, данные о практическом использовании полученных результатов, рекомендации по использованию научных выводов, библиографический список (138 источников, из которых 99 отечественных и 39 иностранных), 23 таблицы, 4 рисунка, приложения.

Научные положения и результаты, выносимые на защиту.

1. Усовершенствование способа поддержания и хранения клеток штамма Lactobacillus plantarum Р6, использование разработанной питательной среды, стабилизированной рабочей культуры, внедрение отработанных параметров ведения процесса выращивания в аппаратах - культиваторах позволяет получить бактериальную культуру с полноценными биологическими свойствами, пригодную для производства пробиотического препарата.

2. Усовершенствованная технология производства позволяет сократить пусковой период производства нативной культуры на 5 суток, достигнуть экономического эффекта в снижении себестоимости суточной дозы препарата на 24%, получить пробиотический препарат на основе штамма лактобактерий с необходимыми биологическими и физико-химическими показателями качества.

3. Разработанный образец пробиотического препарата на основе штамма Lactobacillus plantarum Р6 безвреден, нереактогенен и обеспечивает у птицы при оральном способе применения лечебно-профилактический эффект, выражающийся в снижении падежа до 5%.

Экспериментальные исследования настоящей работы были осуществлены на кафедре биотехнологии ФГОУ ВПО МГАВМиБ, в лабораториях НИИ Микробиологии МО РФ (ФГУ 48 ЦНИИ МО РФ), кафедре микробиологии, вирусологии и фармакологии ФГОУ ВПО Вятской ГСХА по темам НИР № 174/04 и № 13 с 2003 по 2009г г. Производственные опыты были проведены в птицеводческих хозяйствах Кировской области. Работы проводились при совместном участии большого коллектива учёных, специалистов вышеуказанных учреждений.

Лично автором осуществлены планирования экспериментов, исследования по оценке биологических свойств выделенных от птиц лактобактерий, выбору перспективного штамма лактобактерий, влияние разработанного пробиотика на производственные показатели в птицеводческих хозяйствах, а также анализ полученных данных, их обобщение.

Автор выражает глубокую благодарность всем учёным и специалистам, участвовавшим в экспериментах и их обобщении, помогавшим в оформлении диссертационной работы и позволившим ссылку на совместно произведенные работы и исследования.

Огромную благодарность и признательность выражаю научному руководителю, доктору биологических наук, профессору И.В. Тихонову за помощь и моральную поддержку на всём протяжении работы, а также лауреатам Государственных премий и коллегам по совместным исследованиям доктору медицинских наук, профессору Е.В. Пименову, доктору медицинских наук, профессору И.В. Дармову, кандидату технических наук Г.В. Комоско, а также доктору медицинских наук, профессору В.Е. Романову, кандидатам наук С.А. Швецову, А.В. Ежову.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Заключение диссертации по теме «Биотехнология», Овсянников, Юрий Степанович

4. выводы

1. Усовершенствована методика выделения, сохранения и поддержания эталонных штаммов молочнокислых бактерий за счет сокращения количества пассажей и использования разработанного состава новой питательной среды. Из 12 исследованных штаммов выбраны 2, у которых биологические свойства отвечают предъявляемым требованиям.

2. Разработана технология приготовления стабилизированной рабочей культуры, позволяющая при использовании ее в промышленном производстве пробиотического препарата уменьшить количество этапов приготовления, снизить трудозатраты, повысить качество и стандартность конечного продукта, обеспечить ростовые и пробиотические свойства бактерий в составе СРК на протяжении 6-ти месяцев при минус 20° С, сократить время пускового периода на 5 суток, что снижает себестоимость суточной дозы препарата на 24%.

3. Отработаны методика выделения и схема приготовления эталонных и нативных культур выделенных штаммов лактобактерий с использованием новой питательной среды (КДМ) и стабилизированной рабочей культуры, которые позволяют сохранить исходный уровень антагонистической активности и кислотообразующей способности микробных культур лактобактерий, используемых для создания пробиотических препаратов в интересах промышленного птицеводства.

4. Всесторонняя апробация лабораторного образца пробиотического препарата на основе штамм Р6, полученного по усовершенствованной технологии, показала его безвредность, отсутствие реактогенности, стабильность биологических свойств при применении и хранении.

5. Разработана универсальная технология приготовления пробиотиков на основе лактобактерий, которая может быть внедрена в промышленное производство при глубинном способе выращивания в аппаратах-культиваторах. Применение препарата на основе штамма Р6 в производственных условиях повышало сохранность цыплят до 5 %.

6. Разработана и утверждена нормативно-технологическая документация на производство пробиотика на основе штамма Р6 L.plantarum и его контроль.

5. практическое использовании полученных научных результатов

1. Пробиотик на основе выделенного штамма Р6 лактобактерий используется в качестве лечебно - профилактического препарата при заболеваниях желудочно-кишечного тракта у кур.

2. Разработаны и утверждены Регламент производства пробиотика на основе штамма Р6 лактобактерий (2009г.) и Технические условия(2009г.).

3. Разработан и утверждён Сборник методик по приготовлению лабораторного образца пробиотика на основе штамма Р6 лактобактерий (2008г.).

4. Разработана и утверждена Инструкция по применению пробиотика на ос нове штамма Р6 лактобактерий для лечения и профилактики дисбактериозов желудочно-кишечного тракта у кур и повышения их естественной резистентности.

5. Разработаны инструкции по эксплуатации оборудования, общепромышленной и специальной технике безопасности.

6. Штамм Р6 лактобактерий депонирован в коллекции музея 48 ЦНИИ МО -РФ под инв. № 39.

7. Результаты научных исследований по усовершенствованию технологии i приготовления пробиотика на основе штамм Р6 лактобактерий используются в учебном процессе по дисциплине «Биотехнология» в ФГОУ ВПО МГАВМиБ и в ФГОУ ВПО Вятская ГСХА.

6. рекомендации по использованию научных выводов

1. Усовершенствованная технология производства пробиотического препарата для орального применения в птицеводстве рекомендуется для приготовления биопрепаратов на основе других микроорганизмов при глубинном культивировании.

2. Разработанный способ приготовления и применения стандартной стабилизированной рабочей культуры, позволяющей уменьшить количество этапов приготовления пробиотика, снизить трудозатраты, повысить качество и стандартность конечного продукта, целесообразно использовать в технологиях биопрепаратов на основе пробиотических микроорганизмов.

3. Разработанный пробиотический препарат на основе выделенного штамма Р6 рекомендуется использовать в качестве лечебно - профилактического препарата при заболеваниях желудочно-кишечного тракта у кур.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Овсянников, Юрий Степанович, 2009 год

1. Антипов В.А. Использование пробиотиков в животноводстве / В.А. Антипов // Ветеринария.- 1991.- № 4. С. 55-58.

2. Аркадьева З.А. Факторы, влияющие на жизнеспособность и свойства микроорганизмов при различных методах хранения / З.А. Аркадьева //Биологические науки.- 1993.- № 4.- С. 93-104.

3. Артюхин В. И. Белковые гидролизаты в производстве питательных сред. Производство и применение продуктов микробиологических производств / В. И. Артюхин, А. П. Шепелин, Н. В. Киселева //Обзорн. информ.- М., 1990.-Вып.Ю.-С. 12-45.

4. Ашмарин И.П. Статистические методы в микробиологических исследованиях / И.П. Ашмарин, А.А. Воробьев Л.: Гос. из-во мед. литературы, 1962. - С. 290.

5. Бергер М.О. Методы общей бактериологии / Под ред. М. О. Бергера. -М., 1983. С.23-56.

6. Бергер М.О. Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследований / Под ред. М. О. Бергера. М., 1982.-С.23 - 234.

7. Биотехнология: взгляд в будущее. Первая половина XXI века / Под ред. К.И. Скрябина. -М., 2008. 68 с.

8. Биотехнология состояние и перспективы развития: Материалы 1го Международного конгресса (Москва, 14-18 октября 2002 г.). - М.: ЗАО «ПИК Максима», 2002. - С. 10-72.

9. Блохина И.Н., Традиционная классификация и геносистематика бактерий рода Lactobacillus / И.Н. Блохина, Г.Ф. Леванова, В.М. Бондаренко и др.// Микробиология.- 1995.- № 4. С. 19-23.

10. Бовкун Г.Ф. Нормобиоценоз и дисбактериоз молодняка / Г.Ф. Бовкун, Е.П. Ващекин, Н.И. Малик и др. // Ветеринария сельскохозяйственных животных.- 2008.- № 2. С. 12 - 17.

11. Бовкун Г.Ф. Пробиотическая профилактика и терапия дисбактериозов / Бовкун Г.Ф., Ващекин Е.П., Малик Н.И. и др. // Ветеринария сельскохозяйственных животных. 2008. -№ 4. - С. 28 - 31.

12. Бовкун Г.Ф. Роль бифидогенных факторов в профилактике и терапии дисбактериозов. / Г.Ф. Бовкун, Е.П. Ващекин, Н.И. Малик, и др. // Ветеринария сельскохозяйственных животных. -2008. № 10.-С.51-55.

13. Бондаренко В.М. Иммуностимулирующее действие лактобактерий, используемых в качестве основы препаратов пробиотиков / В.М. Бондаренко, Э.И. Рубакова, В.А. Лаврова //Микробиология. -1998. № 4. - С. 107 - 111.

14. Бондаренко В.М. Дисбиоз. Современные особенности профилактики и лечения / В.М. Бондаренко. М.: Мир, 1995. - С. 20.

15. Брылин А.П. Эффективный пробиотик в интенсивном птицеводстве / А.П. Брылин // Ветеринария.- 2006.- №10. С. 16 - 17.

16. Бухарин О.В., Усвяцов Б.Я. Лизоцимная активность микроорганизмов / О.В. Бухарин, Б.Я. Усвяцов// Антибиотики. 1981. - №10. - С. 782.

17. Волков М.Ю. Коррекция нарушения микробиоценоза человека с помощью пробиотиков / М.Ю. Волков, А.В. Синица, Е.И. Ткаченко и др.// Вопросы питания.- 2006.- № 4. С. 32-34.

18. Волков М.Ю. Новый пробиотик Бактистатин продукт современных биотехнологий / М.Ю. Волков // Перспективы развития биотехнологии в России: Сб. науч. тр. - Пущино: «МаксПресс», 2005. - С. 21-22.

19. Воронин Е.С. Выделение и идентификация бактерий желудочно кишечного тракта животных: / Методические рекомендации/ Е.С. Воронин, Т.Н. Грязнева, Д.А. Девришов. - Утверждены Департаментом ветеринарии МСХ РФ 11.05.2004, per. № 13-5-02/1043.

20. Воронин Е.С. Этиология и профилактика желудочно-кишечных заболеваний телят / Е.С. Воронин, Д.А. Девришов, Л.Я. Ставцева //Вестник с.-х.науки.-1989.- № 9.-С. 105-116.

21. Гаврилов В.А. Проблемы перспективы биотехнологии / В.А. Гаврилов, И.В. Тихонов // Ветеринарная медицина.- 2003. №3. - С.5-7.

22. Горская Е.М. Механизмы развития микроэкологических нарушений в кишечнике и новые подходы к их коррекции: Автореф. дис. . докт. мед. наук / Е.М. Горская.- М., 1994.- С.53.

23. Грязнева Т.Н. Применение пробиотика Биод 5 в рационах кормления поросят-отъемышей// Зоотехния.- 2005.- №8. — С. 15.

24. Грязнева Т.Н. Антагонистическая активность бифидо- и лактобактерий в отношении энтеробактерий / Т.Н. Грязнева, Л.Я. Ставцева // Ветеринария. 1991.-№6.-С. 21-22.

25. Давыдкин В.Ю. Выживаемость пробиотиков на разных стадиях приготовления биопрепаратов // Биотехнология состояние и перспективы развития: Материалы 1го Международного конгресса (Москва, 14-18 октября 2002 г.) - М.: ЗАО «ПИК Максима», 2002. - С. 349-350.

26. Данилевская Н.В. Влияние пробиотика лактобифадол на продуктивность и сохранность поросят мясных пород на подсосе и доращивании / Н.В. Данилевская, Р.С. Кудинкин // Ветеринария сельскохозяйственных животных.-2008.- № 4. С. 56 - 58.

27. Данилевская Н.В. Пробиотик: действие на перепелов разных пород / Н.В. Данилевская //Птицеводство.- 2005. -№8.- С.14-15.

28. Девришов Д.А. Рекицен профилактический препарат против желудочно-кишечных заболеваний поросят / Д.А. Девришов, Г.Н. Печникова, З.М. Бедаева и др. - М., 1995. - С 81-84.

29. Егоров И. Пробиотик лактоамиловарин стимулирует рост цыплят / И. Егоров, П. Паньков, Б. Розанов и др. // Птицеводство.- 2004.- №8. С. 33-34.

30. Егоров Н.С. Бактериоцины. Образование, свойства, применение / Н.С. Егоров, И.П. Баранова //Антибиотики и химиотерапия.- 1999.- № 6.-С. 33.

31. Елынин А.И. Сгущение суспензий микробиологических производств и способы интенсификации процесса / А.И. Елынин. М.: Агропромиздат, 1987.-С. 225.

32. Жданов П.И. Биологические и эпизоотологические аспекты производства и применение нового пробиотика из бактерий рода Bacillus в свиноводстве: Автореф. дис. . канд. вет. наук / П.И.Жданов. СПб.: ПГАВМ, 1997. -С.21.

33. Запруднов A.M. Микробная флора кишечника и пробиотики / A.M. За-пруднов, JI.H. Мазанкова. М.: Колос, 1999. -204с.

34. Зернов B.C. Включение лактоамиловорина сухого в состав рационакур-несушек кросса "Родонит" / B.C. Зернов, Е.Н. Верещагина, Т.Н. Иванова // Тезисы докладов научной конференции аспирантов и соискателей. Киров: ВГСХА, 2001. - С.60-61.

35. Изачик Ю.А. Дисбактериоз кишечника/ Ю.А. Изачик, А.А. Корсун-ский // Медицинская помощь. 1993. -№2. -С.58-60.

36. Имангулов Ш. Ферментативный пробиотик: два в одном / Ш. Имангу-лов, Г. Игнатова, А. Первова и др. // Птицеводство.- 2004.- №7. С. 10-11.

37. Коршунов В.М. Микроэкология желудочно-кишечного тракта. Коррекция микрофлоры при дисбактериозах кишечника / В.М. Коршунов, Н.Н. Володин, Б.А. Ефимов и др. М.: Мир, 1999.- 287с.

38. Коршунов В.М. Рациональные подходы к проблеме коррекции микрофлоры кишечника / В.М. Коршунов, В.В. Смеянов, Б.А. Ефимов // Вестн. РАМН. 1996. - №2. - С. 60-65.

39. Критская И.В. Разработка питательной среды для накопления биомассы В. bifidum в процессе непрерывного культивирования в биореакторе / И.В. Критская // Микробиология. 1996. - №5. - С. 81-83.

40. Кругликов В.Д. Возможность приживления Lactobacillus acidophilus в кишечнике белых мышей на фоне бактериальной терапии / В.Д. Кругликов, Р.И. Цураева, И.В. Рыжков // Микробиология, эпидемиология и иммунобиология.- 1997.-№ 1.-С. 67-69.i

41. Куриленко А.Н. Инфекционные болезни молодняка сельскохозяйственных животных / А.Н. Куриленко, B.JI. Крупальник. М.: Колос, 2000.-275 с.

42. Ленцнер А.А. Лактофлора и колонизационная резистентность / А.А. Ленцнер, Х.П. Ленцнер, М.Э. Микельсаар //Антибиотики и мед. биотехнология. -1987.-№ З.-С. 173-179.

43. Малик Н.И. Новые пробиотические препараты ветеринарного назначения: Автореф. дис. докт. биол. наук /Н.И. Малик. М., 2002. — 53 с.

44. Методические рекомендации к контролю питательных сред по биологическим показателям. М., 1986. - 43 с.

45. Методические указания по определению чувствительности микроорганизмов к антибиотикам методом диффузии в агар с использованием дисков. — М.: МЗ СССР, 1983.- 15 с.

46. Молохова Е.И. Лекарственные препараты пробиотики на российском фармацевтическом рынке / Е.И. Молохова, В.Н. Тарасевич //Фармация. — 2000. — Т.49.-№3, —С.55—58.

47. Оганов Э.О. Воздействие пробиотика СБА на рост уток / Э.О. Оганов, А.Т. Жунушов // Ветеринария. 2004. - №12.- С. 46-47.

48. Огарков В.И. Основные биотехнологические проблемы микробиологической промышленности / В.И. Огарков // Биотехнология.-1986.-№ 4.-С. 5.

49. Определитель бактерий Берджи //Под ред. Дж. Хоулта, Н.Крига, П.Спита, и др. (9-е издание в 2-х томах) /Пер. с англ. под ред. Г.А. Заварзина.-М.: Мир, 1997. -799 с.

50. Панин А.Н. Биотехнологические аспекты изготовления сухих пробио-тических препаратов / А.Н. Панин //Научные основы пр-ва вет. биол. препаратов: Сб.науч.тр. Щелково: ВНИТИБП, 2000. - С. 343-345.

51. Панюшин С.К. Биологически активные добавки к пище. Теоретические и прикладные аспекты / С.К. Панюшин, Г.А. Угодчиков. М.: Издат. дом «РТ-Пресс», 2002. - 192с.

52. Перетц М.Г. Значение нормальной микрофлоры для организма человека и животных / М.Г. Перетц. М.: Колос, 1995.-387 с.

53. Промышленная микробиология / З.А. Аркадьева и др.; под ред. Н.С. Егорова. М.: Высш. шк., 1989. - 688 с.

54. Самуйленко А.Я. Основы технологии производства ветеринарных биологических препаратов / А.Я. Самуйленко, Е.А. Рубан. М.: Россельхозакаде-мия. - М.: РАСХН, 2000.- 781 с.

55. Сафонов Г.А. Пробиотики как фактор, стабилизирующий здоровье животных / Г.А. Сафонов, Т.А. Калинина, В.П. Романова // Ветеринария. 1992. -№7-8. - С 3-4.

56. Сидоров М.А. Нормальная микрофлора животных и ее коррекция про-биотиками / М.А. Сидоров, В.В. Субботин // Ветеринария. 2000. - № 11. - С. 17-22.

57. Смирнов В.В. Дискуссионные вопросы создания и применения бактериальных препаратов для коррекции микрофлоры теплокровных /В.В. Смирнов, С.Р. Резник, И.Б. Сорокулова // Микробиология. 1992.- № 6. - С.82-94.

58. Смирнов В.В. Пробиотики на основе живых культур микроорганизмов / Смирнов В.В., Коваленко Н.К. // Микробиология. 2002.- № 1. - С.53-58.

59. ЗАО «ПИК Максима», 2002. С. 334.

60. Смирнов В.В. Дискуссионные вопросы создания и применения бактериальных препаратов для коррекции микрофлоры теплокровных / В.В. Смирнов, С.Р. Резник, И.Б. Сорокулова // Микробиол. журн.- 1992.- № 6.-С. 8294.

61. Смирнов В.В. Спорообразующие аэробные бактерии-продуценты биологически активных веществ / В.В. Смирнов, С.Р. Резник, И.А. Василевская. -Киев: Нукова Думка, 1982. 278 с.

62. Сорокулова И.Б. Влияние пробиотиков из бацилл на функциональную активность макрофагов / И.Б. Сорокулова // Антибиотики и химиотерапия.-1998.- №2.-С. 20-23.

63. Стегний Б.Т., Гужвинская С.А. Перспективы использования пробиотиков в животноводстве //Ветеринария.- 2005,- №11.-С. 10 11

64. Субботин В.В. Биотехнология пробиотика лактобифадола (бифацидо-бактерина) и его лечебно-профилактическая эффективность: Автореф. дис. докт. вет. наук /В.В. Субботин. М., 1999. - 41 с.

65. Субботин В.В. Профилактика и терапия инфекционных болезней желудочно-кишечного тракта животных (Экологические аспекты) // Ветеринария сельскохозяйственных животных.- 2008.- №4. С. 18-21.

66. Тараканов Б.В. Использование пробиотика при откорме гусят на мясо / Б.В. Тараканов, В.Г. Никулин, В.И. Герасименко и др. // Птицеводство.- 2004.-№5.-С. 24-25.

67. Тараканов Б.В. Новые биопрепараты для ветеринарии / Б.В. Тараканов, Т.А. Николичева // Ветеринария. 2000. - № 7. - С. 45-50.

68. Тихонов И.В. Новые пробиотические препараты с гепатопротективной активностью. / И.В. Тихонов, О.В. Анохина, М.Ю. Волков //Сб. науч.тр. 10 Юбилейного междун. Славяно-Балтийского научного форума «Гастро 2008».-СПб: ООО «Гастро», 2008.- № 2-3. -С. 5-6.

69. Тихонов И.В. Пробиотики нового поколения / И.В. Тихонов, О.В. Анохина // Международное сотрудничество и развитие биотехнологии в Кировской области: Сб. науч. трудов. Киров: Экспресс, 2008. - С.6-7.

70. Тихонов И.В. Проблемы и перспективы биотехнологии. / И.В. Тихонов, В.А. Гаврилов //Ветеринарная медицина.-М.: Агровет. .-2003.- № 3- С. 26-27.

71. Тихонов И.В. Совершенствование технологии производства пробиотика "Биод-5" и методов его контроля // Ветеринарная медицина. М: Агровет, 2004. - №4. - С. 3-6.

72. Тихонов И.В. Технология приготовления оральной (таблетированной) формы вакцины против чумы / И.В. Тихонов, Н.А. Черкасов, A.JI. Ковтун // Актуальные вопросы профилактики опасных инфекционных заболеваний. Киров, 1991.-С. 90-91.

73. Трещанина Н.А. Выделение чистой культуры бактерий. Изучение свойств выделенных штаммов / Н.А. Трещанина, М.М. Серых, Ю.П. Фролов //Техника микробиологического исследования. Самара: Восход, 1997.-76 с.

74. Тхруни Ф.Н. Исследование антибактериальных свойств новых штаммов // Биотехнология состояние и перспективы развития: Материалы 1го Международного конгресса (Москва, 14-18 октября 2002 г.).- М.: ЗАО «ПИК Максима», 2002. С. 345-346.

75. Чугунова Н.К. Разработка способов стабилизации биомассы при изготовлении лекарственных форм лактобактерина / Н.Н. Чугунова, В.А. Несчисля-ев, Г.П. Вдовина и др. //Микробиология, эпидемиология и иммунобиология. -1997.-№2.-С. 102—104.

76. Шайдуллина Р.Г. Новые пробиотические препараты для животноводства / Р.Г. Шайдуллина, И.Г. Пивняк, В.А. Заболотский и др. // Аграр. Россия. -2000. № 5. - С. 64-69.

77. Шевелуха B.C. Сельскохозяйственная биотехнология / В. С. Шевелуха, Е.А. Калашникова, Е.С. Воронин М.: Высшая школа, 2003.- С.469.

78. Шендеров Б.А. Медицинская микробная экология и функциональное питание. М.: Изд-во «Грантъ», 2001. - 288с.

79. Adams Martin R. Safety of industrial lactic acid bacteria // J. Biotechnol. -1999. Vol. 68.- №2-3. - P. 171-178.

80. Berg R.D. Probiotics, prebiotics, or conbiotics / R.D. Berg // Treds Micro123

81. Bergogne-Berezin E. Treatment and preventation of antibiotic associated diarrhea // Int. J. Antimicrob. agents. 2000. - Vol. 16.- №4. - P. 521-526.

82. ЮЗ.Втег G.W. Biotherapeutic Agents and Infection Diseases / G.W. Bmer, L.W. Mc Farland, C.M. Surawicz Human Press.- 1999.- P.316.

83. Cheng C.C. Effect ofpeptides and amino acid prodused by Lactobacillus ca-sei in milk on the acid production of bifidobacteria / C.C. Cheng, T. Nagasawa // Ja-panise J. of Zootechical Sci. -1984. 55(5). - P. 339-349.

84. Collins M.D. Probiotics, prebiotics, and synbiotics: approaches for modulating the microbial ecology of the gut / M.D. Collins -Am J. Clin Nutr, 1999; 69 (suppl).- P. 1052.

85. De Simone C. Effect of Bifidobacterium longum and Lactobacillus acidophilus on gut mucosa and peripheral blood B-lymphocytes / C. De Simone, A. Ci-ardi, A. Grassi //Immunopharmacol. 1992. -Vol. 14. - № 1-2. - P. 41-43.

86. Drago L. Inhibition of in vitro growth of enteropathogens by new Lactobacillus isolates of human intestinal origin / L. Drago, M.R. Gismondo, A. Lombardi et al //FEMS Microbiol. Lett. -1997. -№ 153(2). -P.455-463.

87. Probiotics: from myth to reality. Demonstration of functionality in animal models of disease and in human clinical trials / C. Dunne et al // Antonie Van L. -1999. Vol. 76. - №1-4. - P. 279-292.

88. Elkins C.A. Identification of genes encoding conjugated bile salt hydrolase and transport In Lactobacillus johnsonii 100-100 / C.A. Elkins, D.C. Savage //J. Bacteriol. -1998. -№ 180. -P.-4344-4349.

89. Fuller R. Probiotics in man and animals / R. Fuller //J. Appl. Bacteriol.-1997. Vol. 66. - №5. - P. 365-378.

90. Fuller R. Bacteria associated with the gastric epithelium of neonatal pigs / R. Fuller, P.A. Barrow, B.E. Brooker // Appl. Environ. Microbiol.- 1978.- Vol. 35.-№ 3.- P. 582-591.

91. Gibson G.R. Selective stimulation of bifidobacteria in the human colon by oligofructose and inulin. / G.R. Gibson, E.B. Beatty, X. Wang, J.H. Cummings //Gastroenterology.- 1995.- № 108.- P. 975-82.

92. Gissen A.S. Off probiotics, prebiotics and synbiotics / A.S. Gissen // ISS VRP'S Inc. Vit Res. Prod. Newsletters. USA. - 1995. - P. 111-117.

93. Gomes-Gil B. A riview on the use of microorganisms as probiotics / B. Gomes-Gil et al. // Rev. Latinoam. Microbiol. 1998. - Vol. 40. - №3-4. - P. 166-172.

94. Gordon J.I. Interactions between epithelial cells and bacteria / J.I. Gordon, L.V. Hooper, 1. Bry et al. //Science.-1997.-№ 276.- P. 965.

95. Grangette C. Mucosal immune responses and protection against tetanus toxjin after intranasal immunization with recombinant Lactobacillus plantarum / C. Grangette et al. // Infect Immun. 2001. - Vol. 69, № 3. - P. 1547-1553.

96. Green D.H. Characterization of two Bacillus probiotics / D.H. Green // J. Appl. and Environ.Microbiol. 1999. - Sept. - P. 4288-4291.

97. Gupta M. Lytic effect of Bacillus subtilis elastase on gram-positive and negative bacteria / M. Gupta, M. Kaur, K.G. Gupta // Indian. J. Exp. Biol.-1992. Vol. 30.-№5.- P. 380-383.

98. Kitacawa H. AT oligonucleotides inducing В lymphocyte activation exist in probiotic Lactobacillus gasseri / H. Kitacawa et al. // Int. J. Food Microbiol. 2001. -Vol. 65. - № 3. - P. 149-162.

99. Kullen M.J. Genetic modification of intestinal lactobacilli and bifidobacteria / M.J. Kullen, T.R. Klaenhammer // Curr. Issues Mol. Biol. 2000. - Vol. 2. - №2.-P. 41-50.

100. Macfarlane G.N. Probiotics and prebiotics: can regulatiny the activites of intestinal bacteria benefit health? / G.N. Macfarlane // British Med. J. 1999. - Vol. 318. - № 7189. - P. 999-1003.

101. Madsen K. et al. Probiotic bacteria enhance murine and human intestinal epitelial barrier function / K. Madsen et al. // Gastroenterology. 2001. - Vol. 121. -№3.-P. 580-591.

102. Maruta K. Probiotics or antibiotics / K. Maruta //World Poultry. -1999. №3.-P.112-127.

103. McDonough P.L. Salmonella enterica infections: an emerging infectious disease / P.L. McDonough et al. // J. Clin.Microbiol. 1999. - № 37. - P. 2418-2427.

104. Morishita Y. The effects of various dietary substances on the intestinal microflora / Y. Morishita // J. Germfree Life Gnotobiol. 1991. - Vol. 21. - № 1. - P. 344-346.

105. Mulder R.W. Probiotics as a tool against Salmonella contamination / R.W. Mulder // World Poultry. 1991. - Vol. 7. - N 3. - P. 36-37.

106. Mc Farland L.I. Biotherapeutic agents: past, present and future / L.I. Mc Farland, G.W. Elmer //Microecology Ther. 1995. - № 23. P. 46-73.

107. Nemcova R. Criteria for selection of lactobacilli for probiotic use / R. Nem-cova // Vet. Med. (Praha). 1995. - - Vol. 42. - №1. - P. 19-27.

108. Ohya T. Significance of fecal volatile fatty acids in shedding of E. coli 0157 from calves: experimental infection and preliminary use of a probiotic product / T. Ohya, T. Marubashi, H. Ito // J. Vet. Med. Sci. 2000. - Vol. 62. - № 11. - P. 11511155.

109. Perdigon G. et al. Immune system stimulation by probiotics / G. Perdigon et al. //J. Dairy Sci. 1995. - Vol. 78. - №7. - P. 1597-1606.

110. Perdigon G., Fuller R., Raya R. Lactic acid bacteria and their effect on the immune system / G. Perdigon, R. Fuller, R. Raya // Curr. Issues Intest. Microbiol.126

111. Reid G. Is there a role for lactobacilli in preventation of urogenital and intestinal infections? / G. Reid et al. // Clin. Microbiol. Rev. 1990. - Vol. 3. - № 4. - P. 335-344.

112. Rivas A.L. Relations between oraly-administered colostrum derived nutrients and bovine leukocyte populations. / A.L. Rivas et al. // 38th Ann National Council, Arlington, VA. -1999. P.215-217.

113. Vanbelle M. Probiotics in animal nutrition: a riview / M.Vanbelle, E. Teller, M. Focant // Arch. Tierernahr. 1990. - Vol. 40, №7. - P. 543-567.

114. Jarvis W.R. The epidemiology of colonization / W.R. Jarvis // Infection Control and Nosocomial Colonization. 1996.-№ 17. P. 47-52.