Роль Translocator protein (TSPO) в регуляции пролиферации и апоптоза опухолевых клеток при BRAF-положительной меланоме кожи тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.03.04, кандидат медицинских наук Гырылова, Светлана Николаевна

• Гырылова, Светлана Николаевна
• кандидат медицинских наук
• 2012

Оглавление диссертации кандидат медицинских наук Гырылова, Светлана Николаевна

Введение.

Глава 1. Обзор литературы.

1.1. Современные представления о молекулярных механизмах развития меланомы кожи. Нарушения клеточной пролиферации.

1.2. Нарушение регуляции апоптотической гибели клеток при меланоме кожи.

1.3. Апоптоз-ассоциированный белок TSPO и применение его лигандов в экспериментальной терапии злокачественных новообразований.

Глава 2. Материал и методы исследования.

Глава 3. Результаты собственных исследований.

3.1. Модуляция уровня TSPO в клетках меланомы лигандом TSPO

PKI 1195 и ингибитором МАРК U0126.

3.2. Оценка интенсивности клеточной пролиферации и апоптоза после инкубации клеток меланомы с лигандом TSPO РКП 195, ингибитором МАРК U0126.

3.3. Молекулярно-генетический анализ биоптатов кожи . больных первичной меланомой для верификации мутации гена BRAF V600E.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Роль Translocator protein (TSPO) в регуляции пролиферации и апоптоза опухолевых клеток при BRAF-положительной меланоме кожи»

Актуальность проблемы

Злокачественные новообразования кожи, включая меланому кожи, в структуре всех злокачественных опухолей человека составляют более чем одну третью часть, что делает их одними из наиболее часто встречающихся типов злокачественных новообразований [Pollock P.M. et al., 2003]. Злокачественная меланома кожи, являющаяся одной из наиболее агрессивных опухолей, в Российской Федерации относится к редким видам злокачественных новообразований [Кубанова А.А. и др., 2007]. Несмотря на это, в Красноярском крае заболеваемость меланомой увеличивается, параллельно идет также увеличение показателей смертности [Гырылова С.Н., 2009]. При этом прирост данных показателей происходит интенсивно, уровень смертности в Красноярском крае приближается к соответствующим показателям стран с наиболее высокими показателями заболеваемости. Все это позволяет расценивать меланому кожи как важную медико-социальную проблему, которая наносит невосполнимый экономический ущерб обществу.

Меланома кожи является не только клинически разнородной опухолью, классифицирующейся на различные клинические и гистологические варианты. По современным данным меланома характеризуется изначально молекулярным и генетическим разнообразием, определяющим клинический полиморфизм, а также особенности течения заболевания.

Пролиферация меланоцитов, выживание, дифференцировка и миграция являются важнейшими элементами нормальной физиологии кожи. Как показывают последние исследования, одним из ключевых изменений, происходящих при развитии меланомы кожи, является мутагенная активация сигнального каскада митоген-активированных протеинкиназ (МАРК).

Хотя многочисленные доклинические исследования оценивали мутацию BRAF и сигнальный механизм МАРК как перспективную мишень для терапии меланомы кожи, начальные клинические исследования не показали эффективность лечения меланомы с использованием ингибиторов BRAF или МАРК-сигналрегулирующей киназы (МЕК). Это связано с тем, что высокая пластичность клеток меланомы кожи позволяет ей оставаться одной из наиболее резистентных опухолей к химиотерапии. Метастазирующая меланома является прогностически крайне неблагоприятной опухолью, резистентной ко всем видам традиционной химиотерапии и тестируемым биологическим агентам [Мерабишвили В.М., 2006].

Для преодоления механизмов резистентности и повышения эффективности терапии меланомы кожи может являться потенциальной мишенью митохондриальный белок Translocator Protein, TSPO. Показано, что TSPO, как один из компонентов митохондриальных пор, может модулировать их функционирование путем увеличения продолжительности открытия, что ведет к снижению мембранного потенциала [Decaudin D. et al., 2002]. TSPO является внутриклеточным белком с преимущественной митохондриальной и ядерной локализацией. Показано участие TSPO в регуляции пролиферации клеток, дифференцировки, апоптоза и ионного транспорта. Повышенные уровни TSPO обнаружены при различных типах злокачественных новообразований, в частности, при раке молочной железы, толстого кишечника, плоскоклеточном раке ротовой полости [Batarseh A. et al., 2010]. Роль в канцерогенезе данного белка является изученной недостаточно, но предполагается, что он может потенцировать усиление клеточной пролиферации посредством участия в транспорте холестерина через биологические мембраны, что является необходимым для обеспечения пластических и энергетических затрат опухолевых клеток, характеризующихся высоким пролиферативным потенциалом. Помимо этого, выявлено, что лиганды TSPO при ряде злокачественных новообразований изменяют выраженность апоптоза, клеточной пролиферации [Veenman L. et al., 2007].

Цель работы

Оценить возможность регуляции клеточной пролиферации и апоптоза лигандами белка-переносчика (Translocator protein, TSPO) в BRAF-позитивных меланомах кожи.

Задачи исследования

1. Выявить особенности экспрессии TSPO в нейтрофилах периферической крови больных меланомой кожи;

2. Определить уровень TSPO+ клеток и особенности экспрессии мРНК TSPO в клетках BRAF-позитивной меланомы кожи после инкубации с лигандом TSPO РКП 195 в концентрациях 10 nmol/L, 100 nmol/L, 10fimol/L.

3. Определить уровень TSPO+ клеток и особенности экспрессии мРНК TSPO в клетках BRAF-позитивной меланомы кожи после инкубации с МЕК-ингибитором U0126 в концентрациях 10 fimol/L, 50 |imol/L, а также при сочетанной инкубации с U0126 и PKI 1195;

4. Установить характер влияния лиганда TSPO, в том числе при сочетанном применении с МЕК-ингибитором U0126 на выраженность апоптоза и пролиферации опухолевых клеток BRAF-позитивной меланомы кожи;

5. С помощью молекулярно-генетического анализа выявить частоту встречаемости BRAF-позитивных меланом кожи, а также клинико-гистологических вариантов меланомы кожи в Красноярском крае.

Научная новизна

В представленной работе впервые получены данные о характере экспрессии TSPO в клетках BRAF-позитивной меланомы кожи, в том числе после воздействия лигандом TSPO и МАРК-ингибитором U0126.

Впервые оценены изменения уровня пролиферации и апоптотической гибели в клетках BRAF-позитивной меланомы кожи при модуляции уровня TSPO; показано преимущество комбинированного применения модуляторов TSPO и МАРК-ингибиторов для индукции апоптоза в клетках меланомы. Впервые установлено регулирующее действие сигнального пути МАРК на уровень экспрессии TsPO в клетках меланомы кожи.

Впервые исследованы пациенты с меланомой кожи на предмет наличия мутации гена BRAF в Красноярском крае, а также выявлены клинико-гистологические особенности меланомы кожи в зависимости от BRAF-статуса.

Научно-практическая значимость работы

Полученные экспериментальные данные указывают на возможность использования TSPO в качестве патогенетической мишени для модуляции уровня пролиферации и апоптоза клеток меланомы. Кроме того, показано, что комбинированная терапия лигандом TSPO РКП 195 в сочетании с блокаторами МАРК требует дальнейшего изучения как возможный новый подход к персонализированному лечению данного заболевания при BRAF-позитивных меланомах кожи.

Показано, что BRAF-позитивные меланомы кожи в высокой степени присутствуют в популяции больных меланомой кожи - жителей Красноярского края, что также подчеркивает необходимость дальнейших разработок, поиска молекулярных мишеней для терапии данного молекулярного-генетического варианта опухоли.

Выполненная работа поддержана грантами Красноярского краевого фонда поддержки научной и научно-технической деятельности (2010 г.).

Положения, выносимые на защиту

1. У больных меланомой кожи по сравнению со здоровыми лицами, изменена функциональная активность нейтрофилов, о чем свидетельствует снижение экспрессии TSPO в нейтрофилах периферической крови.

2. Лиганд РКП 195, специфически связываясь с TSPO, способен повышать его экспрессию в клетках меланомы кожи в наномолярных концентрациях, изменение экспрессии данного митохондриального белка происходит однонаправлено с уровнем апоптоза; ингибитор МАРК U0126 повышает уровень экспрессии мРНК TSPO в клетках меланомы кожи SK MELI, что доказывает его способность оказывать регулирующий эффект на TSPO;

3. Лиганд TSPO РКП 195 и ингибитор МАРК U0126 в эксперименте демонстрируют способность изменять выраженность апоптоза и уровень пролиферации в клетках меланомы кожи SK MELI, характеризующихся положительным BRAF-статусом. При комбинированном использовании лиганда TSPO РКП 195 и МАРК-ингибитора U0126 достигается более выраженный активирующий эффект в отношении уровня апоптоза клеток меланомы кожи.

Внедрение результатов исследования

Результаты, полученные в ходе диссертационного исследования, внедрены в практику лаборатории биохимии опухолей ФГБУ НИИ Онкологии СО РАМН с 11 января 2012г., а также в учебный процесс кафедры нормальной анатомии и гистологии человека ГБОУ ВПО «Красноярский государственный медицинский университет Минздрава» с 20 апреля 2012 г., в календарно-тематический план практических занятий по теме: «Цитология. Жизненный цикл клетки».

Апробация работы

Основные положения диссертации доложены на заседании кафедры патологической физиологии имени проф. В.В. Иванова Красноярского государственного медицинского университета имени проф. В.Ф. Войно-Ясенецкого, на IV и V региональной конференции молодых ученых-онкологов «Актуальные вопросы экспериментальной и клинической онкологии» (Томск, 2009, 2011 гг.), 18-ом и 20-ом Конгрессе Европейской Академии Дерматологии и Венерологии (Берлин, 2009г., Лиссабон, 2011 г.), 6-ом Весеннем Симпозиуме Европейской Академии Дерматологии и Венерологии (Верона, 2012г.), в рамках Летней школы для дерматовенерологов «Research and Imaging Techniques» (Вена, 2010 г.).

Публикации

По материалам диссертации опубликовано 19 печатных работ, в том числе в 4 журналах, рекомендованных ВАК РФ для опубликования статей, содержащих результаты диссертационных исследований. Получен патент Российской Федерации на изобретение №2455993 «Способ индукции апоптотической гибели клеток меланомы кожи», заявка № 2011127875, приоритет изобретения 6 июля 2011г.

Структура и объем диссертации

Диссертация изложена на 107 страниц текста, состоит из введения, четырех глав, выводов и списка литературы. Работа содержит 14 рисунков, 6 таблиц. Библиографический список содержит 161 источников, из которых 8 отечественных и 153 иностранных авторов.

Заключение диссертации по теме «Клеточная биология, цитология, гистология», Гырылова, Светлана Николаевна

выводы

1. У больных меланомой кожи нарушена функциональная активность нейтрофилов, на что указывает снижение уровня TSPO+ клеток в нейтрофилах периферической крови по сравнению показателем здоровых лиц.

2. Экспрессия TSPO в клетках меланомы кожи индуцирцется лигандом данного рецептора РКП 195, при этом повышение уровня мРНК TSPO регистрируется только при инкубации с РКП 195 в концентрации 100 nmol/L;

3. Экспрессия TSPO в клетках меланомы кожи повышается при действии ингибитора сигнального пути МАРК U0126 при концентрациях последнего 10 ¡imol/L, что доказывает регуляторный эффект данного механизма передачи сигнала в отношении TSPO.

4. Лиганд TSPO РКП 195 обладает способностью вызывать изменение уровня апоптоза и пролиферации клеток меланомы; при этом РКП 195 потенцирует проапоптотический и антипролиферативный эффекты МАРК-ингибитора U0126, что показывает возможность использования TSPO в качестве молекулярной мишени для оптимизации способов противоопухолевой терапии в отношении BRAF-положительной меланомы кожи.

5. BRAF-позитивные меланомы доминируют в популяции вне зависимости от пола, возраста, локализации и гистотипа опухоли.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Распространенность ВКАБ-позитивных меланом в Красноярском крае определяет и необходимость поиска новых регуляторов пролиферации и апоптоза клеток меланомы у таких пациентов.

2. Необходимо учитывать ВКАР статус пациентов с меланомой кожи, и в дальнейшем использовать комбинированную терапию, включающей применение ВКАР ингибиторов в сочетании с препаратами, воздействующими на процессы пролиферации или апоптотической гибели клеток, например в качестве мишени может выступать ТБРО.

Список литературы диссертационного исследования кандидат медицинских наук Гырылова, Светлана Николаевна, 2012 год

1. Аравийская Е.Р. Ультрафиолет, его влияние на кожу. Современные принципы фотопротекции / Аравийская Е.Р, Соколовский Е.В. // Вестн. Дерматол. Венерол. 2003.- №2. - С.14-17.

2. Ахтямов С.Н. Клинико-морфологические особенности старения кожи / Ахтямов С.Н, Кягова A.A. // Вестн. Дерматол. Венерол. 2005.- №4. -С.60-64.

3. Гырылова С.Н. Особенности эпидемиологии меланомы кожи в Красноярском крае / Гырылова С.Н, Рукша Т.Г, Арутюнян Г.А. // Вестн. Дерматол. Вененрол,- 2009.- № 6.- С.21-27.

4. Злокачественные новообразования в России в 2004 году (заболеваемость и смертность) / Под ред. Чиссова В.И. 2006.

5. Кубанова A.A. Злокачественные новообразования кожи в структуре онкологической заболеваемости в Российской Федерации / Кубанова A.A., Мартынов A.A. // Вестн. Дерматол. и Венерол. -2007.-№6.-С.19-24.

6. Мерабишвили В.М. Злокачественная меланома кожи современные тенденции (заболеваемость, смертность, диагностика, морфологическая верификация) / Мерабишвили В.М. // Вопр. Онкол.- 2006.- № 3.- 275-287.

7. Рукша Т.Г. Современные представления об этиологии и патогенезе / Рукша Т.Г, Прохоренков В.И, Салмина А.Б. и др. // Вестн. Дерматол. Венерол. 2007.- №5. - С.22-28.

8. Селедцов В.И. Иммунологические и клинические аспекты применения ксеновакцинотерапии в лечении меланомы / Селедцов В.И, Фельде М.А, Самарин Д.М. и др.// Росс. Онкол. Журн.-2006.-№4.-С.23-28.

9. Adnane L. Sorafenib (BAY 43-9006, Nexavar((R))), a dual-action inhibitor that targets RAF/MEK/ERK pathway in tumor cells and tyrosine kinases

10. VEGFR/PDGFR in tumor vasculature / Adnane L., Trail P.A., Taylor I. et al. // Methods Enzymol.-2005.- Vol. 407.- P.597-612.

11. Aplin A.E. Mechanisms of resistance to RAF inhibitors in melanoma / Aplin A.E., Kaplan F.M., Shao Y. // J. Invest. Dermatol. 2011. - Vol. 131. -P. 1817-20.

12. Atkins M.B. High-dose recombinant interleukin 2 therapy for patients with metastatic melanoma: analysis of 270 patients treated between 1985 and 1993 / Atkins M.B., Lotze M.T., Dutcher J.P. et al. // J. Clin. Oncol.-1999.-Vol.17.-P.2105-2116.

13. Atkins M.B. Innovations and challenges in melanoma: summary statement from the first Cambridge conference / Atkins M.B., Elder D.E., Essner R. et al. // Clin. Cancer Res.- 2006.- Vol.12.- P.2291-2296.

14. Aust D.E. Mutations of the BRAF gene in ulcerative colitis-related colorectal carcinoma / Aust D.E., Haase M., Dobryden L. et al // Int. J. Cancer.-2005.-Vol. 115.-P.673-7.

15. Baguley B.C. Novel strategies for overcoming multidrug resistance in cancer / Baguley B.C. // Biodrugs.-2002. Vol.16.-P.97 -103.

16. Beadling C. KIT Gene Mutations and Copy Number in Melanoma Subtypes / Beadling C., Jacobson-Dunlop E., Hodi F.S. et al. // Clin. Cancer Res.-2008.-Vol.14.-P. 6821 6828.

17. Berger W. Possible role of the multidrug resistance-associated protein (MRP) in chemoresistance of human melanoma cells / Berger W., Hauptmann E., Elbling L. etal. //Int. J. Cancer. 1997.-Vol.-71.-P. 108-115.

18. Brochez L. Diagnostic ability of general practitioners and dermatologists in discriminating pigmented skin lesions I Brochez L., Verhaeghe E., Bleyen L. et al. // J. Am. Acad. Dermatol. 2001.-Vol.44.-P. 979-986.

19. Brose M.S. BRAF and RAS mutations in human lung cancer and melanoma / Brose M.S., Volpe P., Feldman M. et al. // Cancer Res.- 2002.-Vol. 62.-P. 6997-7000.

20. Carracedo A. Inhibition of mTORCl leads to MAPK pathway activation through a PI3K-dependent feedback loop in human cancer // Carracedo A., Ma L., Teruya-Feldstein J. et al. // J. Clin. Invest. 2008.- Vol.- 118.-P. 3065-3074.

21. Casellas P. Peripheral benzodiazepine receptors and mitochondrial function / Casellas P., Galiegue S., Basile A.S. // Neurochem Int. 2002.-Vol. 40. - P. 475-86.

22. Chapman P.B. Phase III multicenter randomized trial of the Dartmouth regimen versus dacarbazine in patients with metastatic melanoma / Chapman P.B., Einhorn L.H., Meyers M.H. et al // J. Clin. Oncol.-1999.- Vol.17.- P. 27452751.

23. Chamberlain A.J. Nodular Type and Older Age as the Most Significant Associations of Thick Melanoma in Victoria, Australia / Chamberlain A.J., Fritschi L., Giles G.G. et al. //Arch. Dermatol.- 2002.-Vol.l38.-P.609-614.

24. Chauhan D. Targeting mitochondria to overcome conventional and bortezomib/proteasome inhibitor PS-341 resistance in multiple myeloma (MM) cells / Chauhan D., Li G., Podar K. et al. // Blood. 2004.- Vol. 104. - P. 2458 - 2466.

25. Chetoui N. Down-Regulation of Mcl-1 by Small Interfering RNA Sensitizes Resistant Melanoma Cells to Fas-Mediated Apoptosis / Chetoui N., Sylla K., Gagnon-Houde J.V. et al. // Mol. Cancer Res.-2008.- Vol.6.- P.42.

26. Chelli B. Peripheral-type benzodiazepine receptor ligands: mitochondrial permeability transition induction in rat cardiac tissue / Chelli B., Falleni A., Salvetti F. et al. // Biochem. Pharmacol. 2001. - Vol. 61. - P. 695-705.

27. Chelli B. PK 11195 differentially affects cell survival in human wild-type and 18 kDa translocator protein-silenced ADF astrocytoma cells / Chelli B., Salvetti A., Da Pozzo E. et al // J. Cell. Biochem. 2008.- Vol.105. -P. 712-723

28. Cockburn M. Recall Bias in Self-reported Melanoma Risk Factors / Cockburn M., Hamilton A., Mack T. // Am. J. Epidemiol. 2001. - Vol. 153. - P.1021 -1026.

29. Cohen Y. Exon 15 BRAF Mutations Are Uncommon in Melanomas Arising in Nonsun-Exposed Sites / Cohen Y., Rosenbaum E., Begum S. et al. // Clin. Cancer Res.-2004.-Vol.10.-P. 3444.

30. Cormier J.N. Ethnic Differences Among Patients With Cutaneous Melanoma / Cormier J.N., Xing Y., Ding M. et al. // Arch. Intern. Med. 2006. - Vol.166. -P.1907 - 1914.

31. Costantini P. Mitochondrion as a Novel Target of Anticancer Chemotherapy / Costantini P., Jacotot E., Decaudin D. et al. // J. Natl. Cancer Inst. 2000.-Vol. 92.- P. 1042 - 1053.

32. Curtin J.A. Distinct sets of genetic alterations in melanoma / Curtin J.A., Fridlyand J., Kageshita T. et al. // N. Engl. J. Med.- 2005.-Vol. 353(20).-P.2135-2147.

33. Curtin J.A. Distinct sets of genetic alterations in melanoma. Curtin J.A., Fridlyand J., Kageshita T. et al. //N. Engl. J. Med. 2005.-Vol.353.-P.2135-47.

34. Curtin J.A. Somatic activation of KIT in distinct subtypes of melanoma / Curtin J.A., Busam K., Pinkel D. et al. // J. Clin. Oncol. -2006.-Vol.24.-P.4340-6.

35. Cummins D.L. Cutaneous malignant melanoma / Cummins J.M., Pantle H., Silverman M.A. et al. // Mayo Clin. Proc. 2006. - Vol. 81. - P.500-7.

36. Dallaporta B. Plasma Membrane Potential in Thymocyte Apoptosis / Dallaporta B., Marchetti P., de Pablo M.A. et al.// J. Immunol. 1999.- Vol. 162.-P. 6534 - 6542.

37. Daniotti M. BRAF alterations are associated with complex mutational profiles in malignant melanoma / Daniotti M., Oggionni M., Ranzani T. et al. // 0ncogene.-2004. Vol. 23.-P. 5968-77.

38. Danson S. Improving outcomes in advanced malignant melanoma: update on systemic therapy / Danson S., Lorigan P. // Drugs. 2005.-Vol.65.-733-743.

39. De Jong D. Subcellular localization of the Bcl-2 protein in malignant and normal lymphoid cells / De Jong D., Prins F. A., Mason D. Y. et al. // Cancer Res. 1994 .- Vol. 54.- P. 256-260.

40. Decaudin D. Peripheral Benzodiazepine Receptor Ligands Reverse Apoptosis Resistance of Cancer Cells in Vitro and in Vivo / Decaudin D., Castedo M., Nemati F. et al. // Cancer Res.-2002.-Vol. 62.-P.1388.

41. Dietrich D.R. Toxicological and pathological applications of proliferating cell nuclear antigen (PCNA), a novel endogenous marker for cell proliferation / Dietrich D.R. // Crit. Rev. Toxicol. 1993.- Vol. 23.- P.77-109.

42. Dumaz N. In Melanoma, RAS Mutations Are Accompanied by Switching Signaling from BRAF to CRAF and Disrupted Cyclic AMP Signaling / Dumaz N., Hayward R., Martin J. et al. // Cancer Res.-2006.-Vol. 66.-P. 9483.

43. Eisen T. Phase I trial of sorafenib (BAY 43-9006) combined with dacarbazine (DTIC) in patients with metastatic melanoma / Eisen T., Ahmad T., Marais R., et al. // Eur. J. Cancer Suppl.-2005.-Vol.3.-P.349.

44. Ellerhorst J.A. Clinical Correlates of NRAS and BRAF Mutations in Primary Human Melanoma / Ellerhorst J.A., Greene V.R., Ekmekcioglu S. et al. // Clin. Cancer Res.-2011.-Vol. 17.-P. 229.

45. Fafalios A. Translocator protein blockade reduces prostate tumor growth // Fafalios A., Akhavan A., Parwani A.V., et al. // Clin. Cancer Res. 2009.- Vol. 15.-P. 6177-6184.

46. Fan J. Translocator Protein 2 Is Involved in Cholesterol Redistribution during Erythropoiesis / Fan J, Rone M.B, Papadopoulos V. // J. of Biological Chemistry.-2009.-Vol. 284.-P.30484-30497.

47. Fecher L.A. Effectively targeting BRAF in melanoma: a formidable challenge / Fecher L.A, Amaravadi R, Schuchter L.M. // Pigment Cell Melanoma Res. -2008.-Vol. 21.-P.410-1.

48. Ferreira C.G. Apoptosis: Target of Cancer Therapy / Ferreira C.G, Epping M, Kruyt F.A.E. et al. // Clin. Cancer Res. -2002.-Vol. 8.-P. 2024 2034.

49. Flaherty K.T. Narrative Review: BRAF Opens the Door for Therapeutic Advances in Melanoma / Flaherty K.T. // Ann. Intern. Med. 2010. - Vol.153. -P. 587-591.

50. Flaherty K.T. Chemotherapy and targeted therapy combinations in advanced melanoma / Flaherty K.T. // Clin. Cancer Res.-2006.-Vol. 12.-2366-2370.

51. Gottesman M. M. Mechanisms of cancer drug resistance / Gottesman M. M. // Annu. Rev. Med. 2002.-Vol.53.-P. 615 -627.

52. Grossman D. Drug resistance in melanoma: mechanisms, apoptosis, and new potential therapeutic agents / Grossman D, Altieri D. C. // Cancer Metastasis Rev. 2001.-Vol.20.-P.3 -11.

53. Goldie J.H. Drug resistance in cancer: a perspective / Goldie J.H. // Cancer Metastasis Rev. 2001.-Vol. 20. - P.63 -68.

54. Garbe C. Systematic Review of Medical Treatment in Melanoma: Current Status and Future Prospects / Garbe C, Eigentler T.E, Keilholz U. et al. // The Oncologist.-2011.-Vol. 16- P.5-24.

55. Garbe C. Diagnosis and treatment of cutaneous melanoma: state of the art 2006 / Garbe C., Eigentler T.K. // Melanoma Res. 2007.-Vol.-17.-P.l 17-27.

56. Grabe C. Chemotherapy and chemoimmunotherapy in disseminated malignant melanoma / Grabe C. // Melanoma Res.- 2002 .- Vol. 2.-P. 291 -299.

57. Greenlee R.T. Cancer statistics / Greenlee R.T., Murray T., Bolden S. et al. // CA Cancer J. Clin. 2000. - Vol. 50. - P.7-33.

58. Grange J.M. Immunotherapy for malignant melanoma—tracing Ariadne's thread through the labyrinth / Grange J.M., Krone B., Stanford J.L. // Eur. J. Cancer. 2009. - Vol. 45. - P. 2266-73.

59. Jemal A. Recent trends in cutaneous melanoma incidence among whites in the United States / Jemal A., Devesa S.S., Hartge P. et al. // J. Natl. Cancer Inst.-2001.-Vol. 93.- P.678-668.

60. Hanahan D. The hallmarks of cancer / Hanahan D., Weinberg R.A. // Cell.-2000.-Vol.l00.-P.57-70.

61. Hingorani S.R. Suppression of BRAF(V599E) in human melanoma abrogates transformation / Hingorani S.R., Jacobetz M.A., Robertson G.P. et al. // Cancer Res.- 2003.- Vol.63.- P. 5198-5202.

62. Helmach H. Drug-resistance in human melanoma / Helmach H., Rossmann E., KernM. A. et al. //Int. J. Cancer.-2001.-Vol. 93.-P. 617 -622.

63. Helmach H. Drug resistance towards etoposide and cisplatin in human melanoma cells is associated with drug-dependent apoptosis deficiency /

64. Helmach H., Kern M. A., Rossmann E. et al. // J. Investig. Dermatol. 2002.-Vol.18.-P. 923-932.

65. Hemmings D.H. Cutaneous Melanoma in a Multiethnic Population Is This a Different Disease? / Hemmings D.H., Johnson S., Tominaga G.T. et al. // Arch. Surg. 2004.-Vol.l39.-P.968-973.

66. Huang D. Inhibition of MAPK Kinase Signaling Pathways Suppressed Renal Cell Carcinoma Growth and Angiogenesis In vivo / Huang D., Ding Y., Luo W-M. et al. // Cancer Res. 2008.- Vol. 68,- P.81 - 88.

67. Hirsch T. PK11195, a ligand of the mitochondrial benzodiazepine receptor, facilitates the induction of apoptosis and reverses Bcl-2-mediated cytoprotection / Hirsch T., Decaudin D., Susin S. A. et al. // Exp. Cell Res. -1998. Vol. 241. - P.426-434.

68. Hersey P. Apoptosis and melanoma: how new insights are effecting the development of new therapies for melanoma / Hersey P. // Curr. Opin. Oncol.-2006.-Vol.18.-P. 189-196.

69. Hofbauer G.F. Fas ligand reduces viability in primary melanoma short-term cell cultures more than in metastatic melanoma short-term cell cultures / Hofbauer G.F., Hatta N., Daigle I. et al. // Dermatology.- 2005.- Vol. 211.-P.318-324.

70. Hocker T.L. Melanoma genetics and therapeutic approaches in the 21st century: moving from the benchside to the bedside / Hocker T.L., Singh M.K., Tsao H. // J. Invest. Dermatol. 2008.-Vol. 128.- P. 2575-95.

71. Keiran S.M. Multiple signaling pathways must be targeted to overcome drug resistance in cell lines derived from melanoma metastases / Keiran S.M., Haass N.H., Brafford P.A. et al. // Mol. Cancer Ther.- 2006.-Vol.5.-P.l 136-44.

72. Kirsner R.S. The Association of Medicare Health Care Delivery Systems With Stage at Diagnosis and Survival for Patients With Melanoma / Kirsner R.S., Wilkinson J.D., Ma F. et al. //Arch. Dermatol.- 2005.- Vol. 141. -P.753-757.

73. Kato T. Improvement in survival rate of patients with acral melanoma observed in the past 22 years in Sendai / Kato T., Suetake T., Sugiyama Y. et al. // Japan. Clin. Exp. Dermatol.- 1993.-Vol.l8.-P.107-110.

74. Karbowniczek M. mTOR is activated in the majority of malignant melanomas / Karbowniczek M., Spittle C.S., Morrison T. et al. // J. Invest. Dermatol.- 2008.-Vol. 128.-P. 980-987.

75. Kumar R. BRAF mutations are common somatic events in melanocytic nevi / Kumar R., Angelini S., Snellman E. et al. // J. Invest. Dermatol.- 2004.- Vol.-122.-P. 342-8.

76. Kane R.C. Sorafenib for the treatment of advanced renal cell carcinoma / Kane R.C., Farrell A.T., Saber H., et al. // Clin. Cancer Res.- 2006.-Vol.12.-P.7271-8.

77. Kalkhoran S. Historical, Clinical, and Dermoscopic Characteristics of Thin Nodular Melanoma / Kalkhoran S., Milne O., Zalaudek I. et al. // Arch. Dermatol.-2010.-Vol. 146.-P.311-318.

78. Kumar S.M. Mutant V600E BRAF Increases Hypoxia Inducible Factor-la Expression in Melanoma / Kumar S.M., Yu H., Edwards R. et al. // Cancer Res.-2007.-Vol. 67.-P. 3177.

79. Kugler W. Ligands of the mitochondrial 18 kDa translocator protein attenuate apoptosis of human glioblastoma cells exposed to erucylphosphohomocholine / Kugler W., Veenman L., Shandalov Y. et al. // Cell Oncol. 2008. - Vol. 30. -P.435-50.

80. Kroemer G. Mitochondrial control of apoptosis / Kroemer G., Zamzami N., Susin S. A. //Immunol. Today. 1997. - Vol. 18. - P. 44-51.

81. Liu W. Rate of growth in melanomas: characteristics and associations of rapidly growing melanomas / Liu W., Dowling J.P., Murray W.K. et al. // Arch. Dermatol. 2006.-Vol.l42(12).-P.1551-1558.

82. Levin E. The peripheral-type benzodiazepine receptor and tumorigenicity: isoquinoline binding protein (IBP) antisense knockdown in the C6 glioma cell line. Levin E., Premkumar A., Veenman L. Et al. // Biochemistry. 2005. -Vol. 44.- P.9924-35.

83. Lage H. Modulation of DNA topoisomerase II activity and expression in melanoma cells with acquired drug resistance / Lage H., Helmach H., Dietel M. et al. // Br. J. Cancer.- 2000.-Vol. 82.- P. 488 -491.

84. Lindholm C. Invasive cutaneous malignant melanoma in Sweden, 1990-1999: a prospective, population-based study of survival and prognostic factors / Lindholm C., Andersson R., Dufmats M., et al. // Cancer.-2004.-Vol. 101.-P.2067-2078.

85. Lorigan P. Systemic therapy for metastatic malignant melanoma—from deeply disappointing to bright future? // Lorigan P., Eisen T., Hauschild A. // Exp. Dermatol. 2008. - Vol. 17. - P.383-94.

86. Liem A.A. The role of signal transduction in cancer treatment and drug resistance / Liem A.A., Chamberlain M. P., Wolf C. R. et al. // Eur. J. Surg. Oncol.- 2002.-Vol. 28.-P. 679 -684.

87. Lev D.C. Exposure of Melanoma Cells to Dacarbazine Results in Enhanced Tumor Growth and Metastasis In Vivo / Lev D.C., Onn A., Melinkova V.O. et al. // J. of Clin. Oncol. 2004.-Vol. 22 No 11.- P.2092-2100.

88. Liao Y-H. ARMS Depletion Facilitates UV Irradiation-Induced Apoptotic Cell Death in Melanoma / Liao Y-H., Hsu S-M., Huang P-H. // Cancer Res.-2007.-Vol. 67.-P. 11547 11556.

89. Libra M. Analysis of BRAF mutation in primary and metastatic melanoma / Libra M., Malaponte G., Navolanic P.M. et al. // Cell Cycle. -2005.- Vol. 4.-P. 1382-4.

90. Liu D. Suppression of BRAF/MEK/MAP Kinase Pathway Restores Expression of Iodide-Metabolizing Genes in Thyroid Cells Expressing the V600E BRAF Mutant / Liu D., Hu S., Hou P. et al. // Clin. Cancer Res.- 2007,-Vol.13.-P.1341.

91. Losina E. Visual Screening for Malignant Melanoma. A Cost-effectiveness Analysis / Losina E., Walensky R.P., Geller A. et al. // Arch. Dermatol. 2007.-Vol. 143.-P.21-28.

92. Maaser K. Overexpression of the peripheral benzodiazepine receptor is a relevant prognostic factor in stage III colorectal cancer // Maaser K., Grabowski P., Sutter A.P., et al // Clin. Cancer Res.- 2002,- Vol. 8.- P. 3205-3209.

93. Melck A.L. The Utility of BRAF Testing in the Management of Papillary Thyroid Cancer / Melck A.L., Yip L., Carty S.E. // The Oncologist. 2010. -Vol. 15.-P.1285-1293.

94. Mercer K.E. Raf proteins and cancer: BRAF is identified as a mutational target / Mercer K.E., Pritchard C.A. // Biochim. Biophys. Acta.- 2003.-Vol. 1653.-P. 25-40.

95. Maldonado J.L. Determinants of BRAF Mutations in Primary Melanomas / Maldonado J.L., Fridlyand J., Patel H. et al. // J. Natl. Cancer Inst.-2003.-Vol.95.-P. 1878 1890.

96. Martindale J.L. Cellular response to oxidative stress: signaling for suicide and survival / Martindale J.L., Holbrook N.J. // J. Cell Physiol. 2002. - Vol. 192.-P. 1-15.

97. Middleton M.R. Randomized Phase III study of temozolomide versus dacarbazine in the treatment of patients with advanced metastatic malignant melanoma / Middleton M.R., Grob J.J., Aaronson N., et al // J. Clin. Oncol.-2000.- Vol. 18. P.158-166.

98. Mills C. Ro5-4864 promotes neonatal motor neuron survival and nerve regeneration in adult rats / Mills C., Makwana M., Wallace A. et al. // Eur. J. Neurosci. 2008. - Vol. 27. - P. 937-946.

99. Michaloglou C. BRAFE600-associated senescence-like cell cycle arrest of human naevi / Michaloglou C., Vredeveld L.C., Soengas M.S. et al. // Nature. 2005. - 436. -P. 720-4.

100. Nagasaka T. Colorectal Cancer With Mutation in BRAF, KRAS, and Wild-Type With Respect to Both Oncogenes Showing Different Patterns of DNA Methylation / Nagasaka T, Sasamoto H, Notohara K. et al. // J. Clin. Oncol. 2004. - Vol. 22. - P. 4584 - 4594.

101. Olson J. M. Presence of peripheral-type benzodiazepine binding sites on human erythrocyte membranes / Olson J. M, Ciliax B. J, Mancini W. R. Et al. //Eur. J. Pharmacol. -1988. Vol.152.-P. 47-53.

102. Okaro A.C. Pklll95, a mitochondrial benzodiazepine receptor antagonist, reduces apoptosis threshold in Bcl-XL and Mcl-1 expressing human cholangiocarcinoma cells / Okaro A.C., Fennell D.A, Corbo M. et al. // Gut. -2002.-Vol. 51.-P.556 561.

103. Peli J. Oncogenic Ras inhibits Fas ligand-mediated apoptosis by downregulating the expression of Fas / Peli J, Schroter M, Rudaz C. et al. // EMBO J. 1999.- Vol. 18.-P. 1824-1831.

104. Poetsch M. Can different genetic changes characterize histogenetic subtypes and biologic behaviour in sporadic malignant melanoma of the skin? / Poetsch M, Dittberner T, Woenckhaus C. // Cell Mol. Life Sei. -2003.-Vol. 60(9).-P. 1923-1932.

105. Pepkorn M. The Spitz nevus is melanoma / Pepkorn M. // Am. J. Dermatopathol. 2005.-Vol. 27.-P.367-9.

106. Pretner E. Cancer-related Overexpression of the Peripheral-type Benzodiazepine Receptor and Cytostatic Anticancer Effects of Ginkgo biloba Extract (EGb 761) / Pretner E, Amri H, Li W. et al. // Anticancer Res. 2006.-Vol. 26.-P. 9-22.

107. Pollock P.M. High frequency of BRAF mutations in nevi / Pollock P.M., Harper U.H, Hansen K.S et al. //Nat. Genet. 2002.-Vol. 33.-P.19 - 20.

108. Ribble D. A simple technique for quantifying apoptosis in 96-well plates / Ribble D., Goldstein N.B., Norris D.A. et al. // BMC Biotechnol. -2005. -Vol. 5. P.12.

109. Ries L.A. The annual report to the nation on the status of cancer, 19731997, with a special section on colorectal cancer / Ries L.A., Wingo P.A., Miller D.S. et al. // Cancer.- 2000.-Vol.-88. P.2398-424.

110. Rigel D.S. ABCDE—An Evolving Concept in the Early Detection of Melanoma / Rigel D.S., Friedman R.J., Kopf A.W. et al. // Arch. Dermatol. -2005,-Vol. 141 .-P. 1032-1034.

111. Runger T. Alterations of DNA repair in melanoma cell lines resistant to cisplatin, fotemustine, or etopside / Runger T., Emmert S., Schadendorf D. et al. // J. Investig. Dermatol. 2000. - Vol.114.-P. 34 -39.

112. Shinozaki M. Incidence of BRAF oncogene mutation and clinical relevance for primary cutaneous melanomas / Shinozaki M., Fujimoto A., Morton D.L. et al. // Clin. Cancer Res. 2004.-Vol.10.-P. 1753-7.

113. Solit D.B. BRAF mutation predicts sensitivity to MEK inhibition / Solit D.B., Garraway L.A., Pratilas C.A. et al. //Nature.- 2006.-Vol. 439.-P.358-62.

114. Smalley K.S.M. Increased cyclin D1 expression can mediate BRAF inhibitor resistance in BRAF V600E-mutated melanomas / Smalley K.S.M., Lioni M., Dalla Palma M. et al. // Mol. Cancer Ther.-2008.- Vol.7.-P. 2876.

115. Smalley K.S.M. Multiple signaling pathways must be targeted to overcome drug resistance in cell lines derived from melanoma metastases Smalley K.S.M., Haass N.K., Brafford P.A. et al. // Mol. Cancer Ther.-2006.-Vol.5.-P.1136.

116. Salvetti F. Effect of noise exposure on rat cardiac peripheral benzodiazepine receptors / Salvetti F., Chelli B., Gesi M. et al. // Life Sci.-2000.- Vol. 66.-P.1165-75.

117. Satyamoorthy K. Constitutive mitogen-activated protein kinase activation in melanoma is mediated by both BRAF mutations and autocrine growth factor stimulation / Satyamoorthy K., Li G., Gerrero M.R. et al. // Cancer Res.- 2003.- Vol.-63.-P.756-9.

118. Shinozaki M. Incidence of BRAF Oncogene Mutation and Clinical Relevance for Primary Cutaneous Melanomas / Shinozaki M., Fujimoto A., Morton D.L. et al. // Clin. Cancer Res. 2004.-Vol. 10.-P. 1753 - 1757.

119. Stahl J.M. Loss of PTEN Promotes Tumor Development in Malignant Melanoma / Stahl J.M., Cheung M., Sharma A. et al. // Cancer Res. 2003.-Vol.63.-P.2881-2890.

120. Solit D.B. BRAF mutation predicts sensitivity to MEK inhibition / Solit D.B., Garraway L.A., Pratilas C.A., et al. //Nature.- 2006.-Vol. 439.-P.358-62.

121. Stahl J.M. Deregulated Akt3 activity promotes development of malignant melanoma / Stahl J.M., Sharma A., Cheung M. et al. // Cancer Res.-2004.-Vol.64.-P. 7002-7010.

122. Sharma A. Mutant V599EB-Raf regulates growth and vascular development of malignant melanoma tumors / Sharma A., Trivedi N.R., Zimmerman M.A. et al. // Cancer Res.- 2005.-Vol.65.-P.2412-2421.

123. Smalley K.S. Increased cyclin D1 expression can mediate BRAF inhibitor resistance in BRAF V600E-mutated melanomas / Smalley K.S., Lioni M., Palma M.D. et al. // Mol. Cancer Ther. 2008. - Vol. 7. - P. 2876-2883.

124. Soengas M.S. Apoptosis and melanoma chemoresistance / Soengas M.S., Lowe S.W. // Oncogene.- 2003.-Vol. 22.-P. 3138-3151.

125. Strand S. Lymphocyte apoptosis induced by CD95 (APO-l/Fas) ligand-expressing tumor cells—a mechanism of immune evasion / Strand, S., Hofmann W. J., Hug H. et al. //Nat. Med. 1996.- Vol.2.- P.1361-1366.

126. Soengas M. S. Inactivation of the apoptosis effector Apaf-1 in malignant melanoma / Soengas M. S., Capodieci P., Polsky D. et al. // Nature.-2001.-Vol. 409.-P.207-211.

127. Serrone L., Hershey P. The chemoresistance of human malignant melanoma: an update//Melanoma Res.-1999.-Vol.3.-P. 51 -58.

128. Skatrud P.L. The impact of multiple drug resistance (MDR) proteins on chemotherapy and drug discovery / Skatrud P. L. // Prog. Drug Res. 2002.-Vol. 58.-P. 99-131.

129. Sieben N.L. In ovarian neoplasms, BRAF, but not KRAS, mutations are restricted to low-grade serous tumours / Sieben N.L., Macropoulos P., Roemen G.M. et al. // J. Pathol.- 2004.-Vol. 202.-P.336-40.

130. Sekulic A. Malignant melanoma in the 21st century: the emerging molecular landscape // Sekulic A., Haluska P., Miller A.J. et al. // Mayo Clin. Proc. 2008. - Vol. 83. - P.825-46.

131. Tang D. Quantitative Preclinical Imaging of TSPO Expression in Glioma Using N,N-Diethyl-2-(2-(4-(2-l 8F-Fluoroethoxy)Phenyl)-5,7

132. Dimethylpyrazolol,5-a.Pyrimidin-3-yl)Acetamide // Tang D., Hight M.R., McKinley E.T. et al. II J. Nucl. Med.- 2012.- Vol.53.- P.287-294.

133. Tas F. Malignant Melanoma in Turkey: A Single Institution's Experience on 475 Cases / Tas F., Kurul S., Camlica H. et al. // Jpn. J. Clin. Oncol. 2006.-Vol. 36.- P. 794 - 799.

134. Tannock I.F. Tumor physiology and drug resistance / Tannock I. F. // Cancer Metastasis Rev.- 2002.-Vol. 20.-P.123 -132.

135. Torres L.F. Analysis of PCNA, p53, and bcl-2 Expression in the Sequence Primary Acquired Melanosis-Conjunctival Melanoma / Torres L.F., Sänchez-Suarez P., Rodriguez-Reyes A.A. et al. // Invest. Ophthalmol. Vis. Sei. 2005. - Vol.46. - P. 3409.

136. Tuveson D.A. BRAF as a potential therapeutic target in melanoma and other malignancies / Tuveson D.A., Weber B.L., Herlyn M. et al. // Cancer Cell.- 2003.-Vol.4.-P.95-8.

137. Uribe P. BRAF mutation: a frequent event in benign, atypical, and malignant melanocytic lesions of the skin / Uribe P., II Wistuba, Gonzalez S. II Am. J. Dermatopathol.- 2003.-Vol. 25.-P.3 65-70.

138. Veenman L. Channel-like functions of the 18-kDa translocator protein (TSPO): regulation of apoptosis and steroidogenesis as part of the host-defense response / Veenman L., Papadopoulos V., Gavish M.// Curr. Pharm. Des.-2007,-Vol. 13.-P. 2385-405.

139. Vrabec J.P. Cell-Type-Specific Opening of the Retinal Ganglion Cell Mitochondrial Permeability Transition Pore / Vrabec J.P., Lieven C.J., Levin L.A. // Invest. Ophthalmol. Vis. Sei. 2003.- Vol. 44.- P. 2774.

140. Wajant H. CD95L/FasL and TRAIL in tumour surveillance and cancer therapy / Wajant H. // Cancer Treat. Res. 2006. - Vol.l30.-P.141-165.

141. Woods M. J. Multiple forms and locations for the peripheral-type benzodiazepine receptor / Woods M. J., Williams D. C. // Biochem. Pharmacol. -1996.-Vol. 52.-P.l 805-1814.

142. Xing M. BRAF mutation in thyroid cancer / Xing M. // Endocr. Relat. Cancer.-2005.-Vol.12.-P. 245-62.

143. Yazdi A.S. Mutations of the BRAF gene in benign and malignant melanocytic lesions / Yazdi A.S., Palmedo G., Flaig M.G. et al. // J. Invest. Dermatol.-2003.-Vol. 121.-P. 1160-2.

144. Zavala F. A monoclonal antibody against peripheral benzodiazepine receptor activities the human neutrophil NADPH-oxidase / Zavala F., Masson A., Brys L. et al. // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1991.- Vol.176. -P. 1577-1583.