Роль полиморфных вариантов генов-регуляторов апоптоза: поли(АДФ-рибозы) полимеразы-1, апоптозиндуцирующего фактора и р53 в патогенезе ишемического инсульта тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.13, кандидат медицинских наук Шетова, Ирма Мухамедовна

• Шетова, Ирма Мухамедовна
• кандидат медицинских наук
• 2005

Оглавление диссертации кандидат медицинских наук Шетова, Ирма Мухамедовна

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Роль наследственного фактора в развитии инсульта.

Методы исследования генетических аспектов ишемического инсульта

1.2. Понятие полиморфизма. Вклад полиморфных вариантов генов в развитие заболевания.

1.3. Молекулярно-генетические основы развития ишемического инсульта и формирования его основных факторов риска.

1.4. Биохимические механизмы церебральной ишемии.

1.5. Молекулярные механизмы клеточной гибели в условиях церебральной ишемии.

1.5.1. Апоптоз, опосредованный действием р53. Роль р53 в норме и при патологии.

1.5.2. Каспаз-независимый путь апоптоза. Характеристика апоптоз-индуцируюгцего фактора.

1.5.3. Конечный этап апоптоза. Характеристика поли(АДФ-рибозы) полимер азы-1.

ГЛАВА 2. КЛИНИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА БОЛЬНЫХ И МЕТОДОВ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Клиническая характеристика больных.

2.2. Методы исследования.

2.2.1. Клинические методы.

2.2.2. Генетические методы исследования.

2.2.3. Статистическая обработка данных.

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ КЛИНИКО-ИНСТРУМЕНТАЛЬНОГО ИССЛЕДОВАНИЯ ПАЦИЕНТОВ.

ГЛАВА 4. РЕЗУЛЬТАТЫ МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКОГО И

БИОХИМИЧЕСКОГО ИССЛЕДОВАНИЯ ПАЦИЕНТОВ.

4.1. Анализ полиморфных вариантов гена ПАРП-1.

4.2. Анализ полиморфных вариантов гена АИФ.

4.3. Полиморфизм гена р53.

4.4. Результаты многофакторного анализа.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Роль полиморфных вариантов генов-регуляторов апоптоза: поли(АДФ-рибозы) полимеразы-1, апоптозиндуцирующего фактора и р53 в патогенезе ишемического инсульта»

Сосудистые заболевания мозга — актуальная медицинская и социальная проблема.

Широкое распространение цереброваскулярных заболеваний, нередкое возникновение их в молодом возрасте, высокий процент смертности и инвалидизации определяют медицинскую и социальную значимость исследований, посвященных изучению генетических аспектов ишемического инсульта.

Большинство случаев ишемического инсульта относится к полигенным мультифакториальным синдромам, в развитии которых задействованы как факторы наследственной предрасположенности, так и факторы внешней среды.

В настоящее время исследования в области генетики ишемического инсульта ведутся по нескольким направлениям. Проводится изучение роли кандидатных генов, участвующих в формировании основных факторов риска цереброваскулярной патологии [7, 12]. В рамках этих исследований изучаются полиморфные варианты генов ренин-ангиотензиновой системы [7, 66, 139], МЭ-синтаз [10, 121], генов атерогенеза и гемостаза [121]. В ходе исследований, проведенных на нашей кафедре совместно ОМГЧ ИМГ РАН, была найдена взаимосвязь между ББ гомозиготным генотипом гена АПФ и стенозом МАГ у пациентов с атеротромботическим инсультом. Было также установлено, что 4а4Ь генотип есЖ)8 ассоциирован с развитием сахарного диабета II типа [10, 11, 16].

В последние годы особую актуальность приобретают исследования, посвященные раскрытию молекулярно-генетических основ ишемического повреждения мозга, возможностям прогнозирования индивидуальной чувствительности мозга к ишемии.

Представление о механизмах повреждающего действия ишемии менялось в течение последних десятилетий. Трансформация гемодинамических, клеточных и молекулярных изменений в стойкий морфологический дефект определяется не только возможностями коллатерального кровообращения и реактивностью сосудов мозга, но и особенностями индивидуальной чувствительности вещества мозга к ишемии, фоновым состоянием метаболизма, особенностями реагирования нейроиммуноэндокринной системы [7, 15].

На современном этапе ведется поиск генов, вовлеченных в комплекс генетических реакций, запускаемых фокальной ишемией, непосредственно определяющих тканевой ответ на ишемическое повреждение и участвующих в формировании морфологического дефекта.

Процессы некроза и апоптоза запускаются практически одновременно. Программированная клеточная смерть индуцируется по 3 основным механизмам, функционирующим параллельно:

1. митохондриальному - изменение транскрипции генов ряда апоптогенных белков ведет к увеличению проницаемости мембран митохондрий с высвобождением цитохрома С и затем активацией каспазного каскада. Однако, митохондриальный путь апоптоза может запускаться и без участия каспаз. Каспаз-независимый путь запускается непосредственно при деструкции митохондрии и высвобождении апоптоз-индуцирующего фактора (АИФ). АИФ - митохондриальный интермембранный флавопротеин, играющий важную роль в конденсации ядерного хроматина и фрагментации ДНК.

2. через рецепторы FAS и TNF — при связывании .с ними внеклеточных лигандов - маркеров некроза с последующим возбуждением каспазы 8 и запуском каспазного каскада;

3. через прямое повреждение ДНК в процессах активации кальций -зависимых ферментов и оксидантного стресса [7, 44, 117, 134].

Во всех механизмах индукции апоптоза принимает участие транскрипционный фактор р53, синтез которого происходит в ответ на различные повреждающие воздействия, включая оксидантный стресс, эксайтотоксичность, повреждения ДНК. Роль гена р53 была продемонстрирована на модели фокальной ишемии мозга у экспериментальных животных. Размер инфаркта был достоверно меньше у трансгенных мышей со сниженным содержанием р53.

Необходимо отметить, что некроз и апоптоз являются взаимосвязанными звеньями общего механизма ишемического повреждения клетки. Концевую роль в их реализации играет ядерный регулятор - ДНК-разрушающий фермент ПАРП-1; повышенная активация его ведёт к истощению НАД, а затем и АТФ, и как следствие - к высокому энергодефициту клетки и к клеточной гибели. Этот механизм чаще всего, выступает ведущим звеном при сосудистых катастрофах и нейродегенеративных процессах, при которых делеция гена ПАРП-1 и препараты, ингибирующие его обеспечивают защитное действие. Клеточная гибель, ассоциированная с повышенной активацией ПАРП-1, обнаруживается при некрозе, в то время как при апоптозе наблюдается распад ПАРП-1, что может сохранить энергию, необходимую для протекания апоптоза.

В связи с вышесказанным особую значимость приобретают исследования посвященные раскрытию молекулярно-генетических механизмов ишемического повреждения мозга, факторов индивидуальной чувствительности вещества мозга к ишемии, что и определяет актуальность настоящей работы, ее цель и задачи.

Цель работы: Изучение полиморфных вариантов генов-регуляторов апоптоза: ПАРП-1, АИФ и р53 и их влияния на формирование инфаркта мозга, течение и исход острого ишемического атеротромботического инсульта.

Задачи исследования:

1. Изучение клинических особенностей развития ишемического атеротромботического инсульта и МРТ закономерностей формирования инфаркта мозга на протяжении острого периода заболевания.

2. Анализ структурных особенностей Rsa-I полиморфизма гена ПАРП-1, Bell полиморфизма гена АИФ и Bam HI полиморфизма гена р53 и их влияния на формирование инфаркта мозга, течение и исход ишемического инсульта.

3. Разработка молекулярно-генетических критериев прогнозирования размеров инфаркта мозга и исхода ишемического инсульта.

Научная новизна.

1. Впервые проведено комплексное динамическое клиническое, МР-морфометрическое, молекулярно-генетическое исследование пациентов в остром периоде ишемического инсульта с целью изучения роли полиморфизмов генов — регуляторов апоптоза в патогенезе ишемического инсульта.

2. Показано, что обнаруженная ассоциация полиморфизмов генов ПАРП-1 и р53 с тяжестью состояния больных й объемом инфаркта мозга может позволить использование данных генотипов в качестве прогностических критериев для определения варианта течения заболевания и формирования очага инфаркта при остром ишемическом инсульте.

Практическое значение работы.

1. Полученная взаимосвязь между полиморфными вариантами генов-регуляторов апоптоза: ПАРП-1 и р53 и тяжестью состояния больных, а также объемом инфаркта мозга позволяет применять данные генотипы в качестве критериев раннего прогнозирования течения заболевания и формирования очага ишемического повреждения при остром ишемическом инсульте.

2. Выявление генетических маркеров индивидуальной чувствительности мозга к ишемии расширяет возможности первичной профилактики ишемического инсульта, позволяет разработать новые подходы к диспансеризации практически здоровых лиц из групп риска с целенаправленным и комплексным их обследованием и превентивным лечением.

3. Изучение генетических основ повреждающего действия ишемии позволяет выявить новые мишени для лечения инсульта. Выявленная ассоциация между полиморфными вариантами генов ПАРП-1 и р53 и размерами инфаркта доказывает перспективность использования нейропротекторов, реализующих свое действие через торможение процессов апоптоза и активацию синтеза нейротрофических факторов.

Заключение диссертации по теме «Нервные болезни», Шетова, Ирма Мухамедовна

выводы

1. Комплексный клинико-молекулярно-генетический и МР-морфометрнческий анализ установил взаимосвязь между ЯБа-Г полиморфизмом гена ПАРП-1 и размерами очага церебрального инфаркта на 1-е, 3-й, 7-е и 21-е сутки от развития инсульта. Установлена достоверная связь гомозиготного -/- Ква-Г ПАРП-1 генотипа с обширным (>90 см ) ишемическим поражением головного мозга (р=0,04; р=0,04; р=0,002 и р=0,02, соответственно), по сравнению с +/- 1^-1 ПАРП-1 и +/+ Е^а-Г ПАРП-1 генотипами, которые были ассоциированы с очагами инфаркта малого о объема (<40 см ). Согласно статистике Байеса, у пациентов с -/- 1^-1 ПАРП-1 генотипом можно с вероятностью 65% прогнозировать развитие инфаркта о мозга большого объема (>90 см ) при ишемическом инсульте.

2. Анализ распределения генотипов ПАРП-1 в зависимости от тяжести состояния пациентов на 1-е, 3-й, 7-е и 21-е сутки от развития инсульта выявил достоверно более частое носительство гомозиготного -/- ЯБа-Г ПАРП-1 генотипа у больных с тяжелым инсультом (балл по шкале Оргогозо <40), по сравнению с генотипами +/- и +/+ Б^аЛ ПАРП-1 (р=0,001; р=0,0006; р=0,001 и р=0,026, соответственно).

3. Исследование полиморфных сайтов гена АИФ не установило какой либо их корреляции с объемом инфаркта головного мозга и тяжестью состояния у пациентов с ишемическим атеротромботическим инсультом в исследованной группе.

4. Комплексный клинико-молекулярно-генетический и МР-морфометрический анализ определил высокодостоверную зависимость объема ишемического повреждения мозга на 3-й сутки от развития атеротромботического ишемического инсульта от Ваш Н1 полиморфизма гена р53 - одного из маркеров тканевого повреждения по механизму апоптоза. У больных с -/- полиморфным вариантом гена р53 достоверно чаще л встречались очаги малого объема (менее 40 см ), чем у пациентов с +/- и +/+ Ваш Н1 р53 генотипами (р=0,008). Согласно статистике Байеса, у пациентов с -/- Ваш Н1 р53 генотипом развитие ишемического инфаркта малого объема можно прогнозировать с вероятностью 65%, тогда как у пациентов с +/- Ваш Н1 р53 генотипом можно с вероятностью 75% прогнозировать развитие о инфаркта мозга большого объема (>90 см ) при остром нарушении мозгового кровообращения.

5. Анализ распределения генотипов р53 в зависимости от тяжести состояния пациентов на 1-е, 3-й, 7-е и 21-е сутки от развития инсульта выявил достоверно более частое носительство гомозиготного -/- Ваш Ш р53 генотипа у больных с наиболее благоприятным течением инсульта (балл по шкале Оргогозо >40) по сравнению с +/- и +/+ Ваш Ш р53 генотипами (р-0,0006; р=0,0003; р=0,0014 и р=0,005, соответственно).

6. Многофакторный анализ связи различных комбинаций ПАРП-1 и р53 генотипов с объемом очага ишемического повреждения головного мозга установил высокодостоверное преобладание очагов инфаркта большого объема у пациентов-носителей комбинации -/-1^-1 ПАРП-1 генотипа и +/-; +/+ Ваш Н1 р53 генотипов по сравнению с пациентами, имевшими +/-; +/+ Ква-1 ПАРП-1 и -/- Ват Ш р53 генотипы (р=0,026).

7. Обнаруженная достоверная связь характера полиморфного варианта генов-маркеров апоптоза: ПАРП-1 и р53 с объемом церебрального инфаркта и тяжестью ишемического инсульта подтверждает участие механизмов программированной клеточной смерти в ишемическом повреждении ткани головного мозга и обосновывает необходимость разработки методов терапевтической и превентивной нейропротекции, направленных на временное торможение апоптоза.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ.

1. Целесообразно включить молекулярно-генетическую диагностику Ваш Н1 полиморфизма гена р53 и Л8а-1 полиморфизма гена ПАРП-1 в качестве молекулярно-генетических маркеров индивидуальной чувствительности ткани мозга к ишемии с целью выявления групп риска по развитию обширного очага инфаркта в случае острого сосудистого мозгового эпизода.

2. Рекомендуется использовать в группах повышенного риска по развитию инсульта своевременную превентивную нейропротекторную терапию, стимулирующую синтез защитных нейротрофических факторов.

3. Целесообразно включить в комплекс интенсивной терапии ишемического инсульта применение нейропротекторов, обладающих нейротрофическими и апоптоз-модулирующими свойствами.

Список литературы диссертационного исследования кандидат медицинских наук Шетова, Ирма Мухамедовна, 2005 год

1. Анничков H.H. О распространении атеросклероза по данным секционного материала. Труды Лен. Мед. ВУЗа б-цы им. Мечникова JI. 1935; 17-25.

2. Ашмарин И.П., Стукалов П.В. Нейрохимия. М. Изд-во Инст Биомед химии РАМН 1996.

3. Вихтер A.M., Жданов B.C. Атеросклероз при различных заболеваниях. 95М. 1976.

4. Горбунова В.Н., Баранов B.C. Введение в молекулярную диагностику и генотерапию наследственных заболеваний. С.П. 1997; 36.

5. Горрен А. К. Майер Б. Биохимия 1998; 63 (7): 870-880.

6. Гусев Е.И. Ишемическая болезнь головного мозга. Актовая речь М. 1992; 36.

7. Гусев Е.И., Скворцова В.И. Ишемия головного мозга. М. Медицина 2001.

8. Гусев Е.И., Скворцова В.И., Коваленко A.B., Соколов М.А. Механизмы повреждения ткани мозга на фоне острой фокальной церебральной ишемии. Журн неврол и психиатр 1999; 2: 65-70.

9. Давиденкова Е.Ф., Колосова H.H., Либерман И.С. Медико-генетическое консультирование в системе профилактики ишемической болезни сердца инсультов. Л. Медицина 1979.

10. Кольцова Е.А. Роль структурных особенностей генов ренин-ангиотензиновой системы, эндотелиальной ло-синтазы и р53 в развитии основных факторов риска цереброваскулярной патологии и в формировании инфаркта мозга. Дис. Канд мед наук. М,2002.

11. Милосердова О.В. Анализ полиморфных вариантов кандидатных генов полиметаболического синдрома и инсулин независимого сахарного диабета: Дис. Канд мед наук. М. 2001.

12. Новиков B.C. Программированная клеточная гибель С.П. Наука 1996; 23-26, 51-55.

13. Одинак М.М., Михайленко А. А., Иванов Ю.С., Семин Г. Ф. Сосудистые заболевания головного мозга. С-П. 1998; 160.

14. Скворцова В.И. Участие апоптоза в формировании инфаркта мозга. Инсульт. Приложение Журн неврол и психиатр 2001; (2): 12-18.

15. Скворцова В.И., Кольцова Е.А., Лимборская С.А., Сломинский П.А., Кондратьева Е.А. Полиморфизм гена ангиотензин-превращающего фермента у больных с ишемической болезнью мозга. Инсульт (приложение к Журн. Неврол и психиатр им С.С. Корсакова). 2001; 3:

16. Фейгин В. Л. Алгоритмы диагностики и лечения больных с цереброваскулярными заболеваниями (дифференциально-диагностические таблицы и схемы). Методическое пособие для врачей. Новосибирск. 1999; 75.

17. Флеров М.А. Биохимические особенности и взаимодействие нейронов и нейрогилии. В кн: Нейрохимия (Ашмарин И.П., Стукалов П.В. ред) М. 1996; 193-200.

18. Чазов Е. И. Состояние и перспективы развития исследований в области борьбы с сердечно-сосудистыми заболеваниями. XXVIII сессия общего собрания АМН СССР. М. 1976; 14-20.

19. Чистяков Д. Полиморфные маркеры генов eNOS и сосудистого рецептора ангиотензиногена II и предрасположенность к ИБС. 1999.

20. Alano СС et al. Poly(ADP-ribose) Polymerase-1-mediated Cell Death in

21. Astrocytes Requires NAD+ Depletion and Mitochondrial Permeability Transition J Biol Chem 2004; 279(18):18895-18902.

22. Andriezen W. Anatomic and Physiologic 1993; 10: 532-540.

23. Asplund K. European White Book on Stroke 1998.

24. Astrup J., Siesjo B., Symon L. Stroke 1981; 12: 723-725.

25. Balkaran B., Char G., Morris J. et al., Stroke in cohort of patients with homozygous sickle cell disease. J Pediatr 1992; 120: 360-366.

26. Banati R. et al. Glia 1993; 7: 111-118.

27. Bar J et al. Attenuation of the p53 response to DNA damage by high cell density Oncogene 2004; 23(12):2128-37.

28. Basun H., Corder H., Guo Z. et al. Apolipoprotein E polymorphism and stroke in population sample aged 75 years or more. Stroke 1996; 27: 1310-1315.

29. Bogousslavsky J. Cerebrovasc Dis 1991; 1: 61-68.

30. Boysen G., Nyboe J., et al. Stroke incidence and risk factors for stroke in Copenhagen, Denmark. Stroke 1988; 19: 1345-1353.

31. Brass L., Isaacsohn J. Merikangas K., Robinette C. A Study of Twins and Stroke. Stroke 1992; 23: 221-223.

32. Brown M., Goldstein J. et al. The metabolic basis of inherited disease. 5th ed. New York: McGraw-Hill 1983; 655-671.

33. Budihardjo I. et al. Biochemical pathways of caspase activation during apoptosis. Ann Rev Cell and Develop Biol 1999; 15: 269-290.

34. Cai H. The Glu-298-Asp (894G-T) mutation at exon 7 of the endothelial nitric oxide synthase gene and coronary artery disease J Mol Med 1999; 77: 6: 511-514.

35. Carter A., Ossei-Gerning N., Grant P. Platelet glycoprotein Ilia P1A polymorphism in young men with myocardial infarction letter. Lancet 1996; 348: 485^86.

36. Catto A., Kohler H., Bannan S., Stickland M., Carter A., Grant P. Factor XIII Val 34 Leu: novel association with primary intracerebral hemorrhage. Stroke 1998; 29: 813-816.

37. ChenH, Chopp M. et al. Neurol Sci 1993; 118: 109-106.

38. Chen S, Soares H., Morgan J. Adv Neurol 1996; 71: 433^150.

39. Chinnaiyan A. et al. FADD, a novel death domain-containing protein, interacts with the death domain of Fas and initiates apoptosis. Cell 1995; 81: 505512.

40. Chinnaiyan A. et al. Interaction of CED-4 with CED-3 and CED-9: a molecular framework for cell death. Science 1997; 275: 1122-1126.

41. Choi D. Cerebral hypoxia: Some new approaches and unanswered questions. J Neurosci 1990; 10:2493-2501.

42. Chopp M., Li Y. Apoptosis and focal cerebral ischaemia. Acta Neurosurgery 1996; 66: 21-26.

43. Clark R., Lee E. et al. Development of tissue damage, inflammation and resolution following stroke: an immunohistochemical and quantitative planimetric study. Brain Res Bull 1993; 31: 565-572.

44. Corral J, Vicente V et al. Genetic polymorphisms of factor VII are not associated with arterial thrombosis. Blood Coagul Fibrinolysis 1998; 9: 267-272.

45. Couder R., Fermanian J. et al. Prevalence of apolipoprotein E phenotypes in ischemic cerebrovascular disease. A case-control study. Stroke 1993; 24: 661-664.

46. Crumrine R., Thomas A. et al. Attenuation of p53 expression protects against focal ischemic, damage in transgenic mice. J Cereb Blood Flow Metab 1994; 14: 887-891.

47. Crutchfield K., Patronas N., Barton N. et al. Quantitative analysis of cerebral vasculopathy in patients with Fabry disease. Neurology 1988; 50: 1746-1769.

48. Davies J., Watkins J. T. Brain Res. 1982; 235: 378-386.

49. Dawson T.3 Dawson V., Snyder S. A novel neuronal messenger molecule in brain: the free radical, nitric oxide. Ann Neurol 1992; 32: 297-311.

50. Dawson V., Dawson T. et al. Mechanisms of nitric oxide-mediated neurotoxicity in primary brain cultures. JNeurosci 1993; 13: 2651-2661.

51. Diaz J. Hachinski V. et al. Aggregation of multiple risk factors for stroke in siblings of patients with brain infarction and transient ischemic attacks. Stroke 1986; 17: 1239-1242.

52. Du C., Hu R. et al. Very delayed infarction. J Cereb Blood Flow Metab 1996; 16: 195-201.

53. Ellis H., Horvitz H. Genetic control of programmed cell death in the nematode C.elegans. Cell 1986; 44: 817-829.

54. Ellis H., Yuan H., Horvitz H. Mechanisms and functions of cell death. Ann Rev Cell DevBiol 1991; 7: 663-698.

55. Enter C., Foster C. et al. A specific point mutation in the mitochondrial genome of Caucasians with MELAS. Hum Genet 1991; 88: 233-236.

56. Ferraris D. et al. Design and synthesis of poly(ADP-ribose) polymerase-1 (PARP-1) inhibitors. Part 4: biological evaluation of imidazobenzodiazepines as potent PARP-1 inhibitors for treatment of ischemic injuries Bioorg Med Chem. 2003; ll(17):3695-707.

57. Ferrer I, Planas AM. Signalling of cell death and cell survival following focal cerebral ischemia: life and death struggle in the penumbra.

58. J Neuropathol Exp Neurol 2003; 62(4):329-39.

59. Fisher M. Cerebrovasc Dis 1991; 1: 112-119.

60. Fisher M., Bogousslavsky J. Current Review of Cerebrovascular Disease. Philadelphia, CM 1996; 237.

61. Fisher M., Takano K. Ballierie's clinical neurology, cerebrovascular disease (Hachinski V. ed.) London 1995; 276-296.

62. Florence Corret et al. New polymorphisms in human poly(ADP-ribose) polymerase-1 coding sequence: lack of association with longevity or with increased cellular poly(ADP-ribosyl)ation capacity J Mol Med 2000; 78: 471-480.

63. Franken D., Vreugdenhil A., Novakova I. et al. Familial cerebrovascular accidents due to concomitant hyperhomocysteinemia and protein C deficiency type 1. 1993; 24: 1599- 1600.

64. Gaillard et al. Structure of human angiotensinogen gene. DNA 8. 1989; 8789.

65. Garcia J. et al. Am J Pathol 1993; 142: 623-635.

66. Gerald M. Cohen. Caspases: the executioners of apoptosis Biochem. J 1997; 326: 1-16.

67. Gilon D., Buonanno F., Kistler J. et al. Lack of evidence of an association between mitral-valve prolapse and stroke in young patients. N Engl J Med 1999; 341:8-13.

68. Giulian D. Reactive microglia and ischemic injury. P. on Cerebrovasc. Diseases, San Diego, CA, Academic 1997; 117-124.

69. Goto S et al. Poly(ADP-ribose) impairs early and long term experimental stroke recovery Stroke 2002; 33(4): 1101-1106.

70. Gottron F. et al. Caspase inhibition. Mol Cell Neurosci 1997; 9: 159-169.

71. Graeber M., Muller U. Recent developments in the molecular genetics of mitochondrial disorders. Review. J Neurol Sei 1998; 153: 251-263.

72. Green F., Humphries S. et al. A common genetic polymorphism associated with lower coagulation factor VII levels in healthy individuals. Arterioscler Thromb 1991; 11: 540-546.

73. Gregan SP et al. Apoptosis-inducing factor is involved in the regulation of caspase-independent neuronal cell death Cell Biol 2002; 158(3):507-17.

74. Ha HC, Snyder SH. Poly(ADP-ribose) polymerase in the nervous system J Neurobiol Dis 2000; 7(4): 225-239.

75. Hansen J. et al. Effect of anoxia on ion distribution in the brain. Physiol Rev 1985; 65: 101-148.

76. Hassan A., Marcus H. Genetics and ischemic stroke. Brain 2000; 123: 17841812.

77. Hengartner M., Ellis R., Horvitz H. C.elegans gene CED-9 protects cells from programmed cell death. Nature 1992; 356: 494-499.

78. Herman B., Schmitz P. et al. Multivariate logistic analysis of risk factors for stroke in Tilburg, The Netherlands. Am J Epidemiol 1983; 118: 514-525.

79. Heywood D., Carter A., Catto A. et al. Polymorphisms of the factor VII gene and circulating FVII:C levels in relation to acute cerebrovascular disease and poststroke mortality. Stroke 1997; 28: 816-821.

80. Hossmann K. et al. Viability thresh olds and the penumbra of focal ischemia. Ann Neurol 1994; 36, 557-565.

81. Hou L. et al. Association of a 27-bp repeat polymorphism in eNOS gene with ischemic stroke in Chinese patients. Neurology 2001; 56 (4): 490-496.

82. Hsu H., Xiong J. The TNF receptor 1-associated protein TRADD signals cell death andNF-kB activation. Cell 1995; 81: 495-504.

83. Iadecola C. et al. Delayed reduction of ischemic brain injury and neurological deficits in mice lacking the inducible nitric oxide synthase gene J Neurosci 1997; 17: 9157-9164.

84. Iadecola C. Mechanisms of cerebral ischemic damage. In: Cerebral Ischemia (Wolfgan Walz ed) New Jersey, Totowa, Humana Press 1999; 3-33.

85. Iadecola C. Regulation of the cerebral microcirculation during neural activity: is nitric oxide the missing link? Trends Neurosci 1993; 16: 206-214.

86. NOS gene with myocardial infarction in the Japanese population. Am J Cardiol 1998; 81: 1: 83-86.

87. Ishii H. et al. Neurochem Res 1993; 18: 1193-1201.

88. Iwai N., Tamaki C., Ohmichi N., Kinoshita M. The I/I genotype of the ACE gene delays the onses of acute coronary syndromes. J Arteriosclerosis Thrombosis and Vascular Biology 1997; 171(9): 1730-1733.

89. Jacewicz H. et al., Selective gene expression in focal cerebral ischemia. J. Cereb. Blood Flow Metab 1986; 6: 263-272.

90. Jamrozik K. et al. The role of lifestyle factors in aetiology of stroke. A population-based case-control study in Perth, Western Australia. Stroke 1994; 25: 51-59.

91. Jates P. A change in the pattern of cerebrovascular disease. Lancet 1964; 1: 65-69.

92. Jeunemaitre X. Corvol P. et al. Molecular basis of Human Hypertension: Role of Angiotensinogen. Cell 1992; 71: 169-180.

93. Jousilahti P., Rastenyte D. et al. Parental history of cardiovascular disease and risk of stroke. A prospective follow-up of 14371 middle-aged men and women in Finland. Stroke 1997; 28: 136-146.

94. Jurgensmeie J. et al. Bax directly induces release of citochrome C from isolated mitochondria. Proc Natl Acad Sci U S A 1998; 95: 4997-5002.

95. Kamiya T., Jacewicz M., Pulsinelli W. et al. J. Cereb. Blood Flow Metab. 1995; 15: 1.

96. Kato N. et al. Evaluation of the poly(ADP-ribose) polymerase gene in human stroke J Atherosclerosis 2000; 148(2): 345-352.

97. Ke N., Godzik A., Reed J.C. Bcl-B, a novel Bcl-2 family member that differentially binds and regulates Bax and Bak J Biol Chem. 2001; 276(16): 12481-4.

98. Kerr J., Wyllie A., Currie A. Apoptosis: a basic biologic phenomenon with wide-ranging implications in tissue kinetics. Br J Cancer 1972; 26: 239-257.

99. Kessler C., Walter R., et al. The apolipoprotein E and beta-fibrinogen G/A-455 gene polymorphisms are associated with ischemic stroke involving large-vessel disease. Arterioscler Thromb Vase Biol 1997; 17: 2880-2884.

100. Khaw K., Barrett-Connor E. Family history of stroke as an independent predictor of ischemic heart disease in men and stroke in women. Am J Epidemiol 1986; 123: 59-66.

101. Killy D., Wolf P., Cupples A., Beiser A., Myers R. Familial aggregation of stroke the Framingham study. Stroke 1993; 24 (9).

102. Kitazawa M. at al. Dieldrin promotes proteolytic cleavage of Poly(ADP-ribose) polymerase and apoptosis in dopaminergic cells: Protective Effect of mitochondrial anti-apoptotic protein bcl-2. Neurotoxicology 2004 Jun; 25(4):589-98.

103. Kluck R. et al. The release of cytochrome C from mitochondria: a primary site for bcl-2 regulation of apoptosis. Science 1997; 275: 1132-1136.

104. Koller H., Stoll G., Sitzer M., et al. Deficiency of both protein C and protein S a family with ischemic stroke in young adults. Neurology 1994; 44: 1238-12340.

105. Kraus J., Rosenberg L. et al. Human cystathionine beta-syntase cDNA: sequence, alternative splicing and expression in cultured cells. Hum Mol Genet 1993; 2: 1633-1638

106. Kuroki S., Ikeda U., Maeda Y. et al. Lack of association between the Insertion/deletion polymorphism of the Angiotensin I-Converting Enzyme Gene and vasoapastic angins. J Clin Cardiol 1997; 20: 873-876.

107. Lei S., Pan Z., et al. Effect of nitric oxide production on the redox modulatory site of the NMDA receptor-channel complex. Neuron 1992; 8: 1087— 1099.

108. Li P. et al. Cytochrome C and ATP dependent formation of Apaf-1 / caspase-9 complex initials an apoptotic protease cascade. Cell 1997; 91: 479-485.

109. Lin J., Yueh K. Angiotensine-converting gene polymorphism and cerebrovascular disease in the Chinese population. In: 20th Salzburg Conference 1999; Nov 3-6; Taipei.

110. Lithgow T. et al. The protein product of the oncogene bcl-2 is a component of the nuclear envelope the endoplasmic reticulum and the often mitochondrial membrane. Cell Growth Differ 1994; 5: 411-417.

111. Loihl A. et al. Expression of nitric oxide synthase (NOS)-2following permanent focal ischemia and the role of nitric oxide in infarct generation in male, female andNOS-2 gene deficient mice Brain Res 1999; 830: 1: 155-164.

112. Lowe S. et al. P53 is regulator for radiation-induced apoptosis in mouse thymocytes. Nature 1993; 362: 847-849.

113. MacLeod M., Dahiyat M. et al. No association between the Glu/Asp polymorphism of NOS3 gene and ischemic stroke. Neurology 1999; 53 (2): 418420.

114. Magistretti P., Pellerin L. The central role of astrocytes in brain energy metabolism. In: Neuroscience, neurology and health. WHO, Geneva. 1997; 53-64.

115. Majno G., Joris I. Apoptosis, oncosis and necrosis: an overview of cell death. Am J Pathol 1995; 146: 3-15.

116. Malik F., Lavie C., Mehra M. et al. Re- Renin-angiotensin system: Genes to bedside. American Heart Journal Sept. 1997: 514-526.

117. Manzoni O., Prezeau L., Marin P. et al. Neuron 1992; 8: 653-662.

118. Margaglione M., Seripa D. et al. Prevalence of apolipoprotein E alleles in healthy subjects and survivors of ischemic stroke: an Italian case-control study. Stroke 1998; 29: 393-399.

119. Markus H., Ruigrok Y. et al. Endothelial nitric oxide synthase exon 7 polymorphism, ischemic cerebrovascular disease, and carotid atheroma. Stroke 1998; 29: 1908-1911.

120. Marshall J. Familial incidence of cerebrovascular disease. J Med Gen 1971; 1: 84-89.

121. Miyashita T. et al. Tumor suppressor p53 is a regulation of bcl-2 and bax gene expression in vitro and vivo. Oncogene 1994; 9: 1799-1805.

122. Morioka K. et al. Characterization of microglial reaction after middle cerebral artery occlusion in the rat brain. J Comp Neurol 1993; 327: 123-132.

123. Mudd S., Levy H. Disorders of transsulfuration. The metabolic basis of inherited disease. 5th ed. New York: McGraw-Hill. 1983; 522-559.

124. Nakagami H. et al. Coronary artery disease and eNOS and ACE (angiotensin-converting enzyme) gene polymorphism. J Thromb Thrombolysis 1999/10; 8:3: 191-195.

125. Nakata Y., Katsuya T. et al. Methylenetetrahydrofolate reductase gene polymorphism: relation to blood pressure and cerebrovascular disease. Am J Hypertwns 1998; 11: 1019-1023.

126. Nakase T, Fushiki S, Naus C Astrocytic gap junctions composed of connexin 43 reduce apoptotic neuronal damage in cerebral ischemia Stroke. 2003; 34(8):1987-93.

127. Nakata Y., Katsuya T. et al. Polymorphism of angiotensin converting enzyme, angiotensinogen, and apolipoprotein E genes in a Japanese population with cerebrovascular disease. Am J Hypertens 1997; 10: 1391-1395.

128. Narita M. et al. Bax interacts with the permeability transition pore to induce permeability transition and cytochrome C release in isolated mitochondria. Proc Natl Acad Sei U S A 1998; 95: 14681-14686.

129. Natowicz M., Kelley R.I. Mendelian etiologies of stroke Ann Neurol 1987; 22: 175-192.

130. Nickerson C., Drago R. Antiatherogenic effect of Captopril in the

131. Olney J., McGeer E., Olney J.W., McGeer P. Neurotoxicity of excitatory aminoacids: Kainic Acid as tool in Neurobiology. New York 1978; 95-121.

132. Pelligrino D. et al. Nitric oxide synthesis and regional cerebral blood flow responses to hypoxia in the rat. J Cereb Blood Flow Metab 1993; 13: 80-87.

133. Plesnila N et al. Nuclear translocation of apoptosis-inducing factor after focal cerebral ischemia J Cereb Blood Flow Metab 2004; 24(4):458-66.

134. Poirier O. et al. Polymorphisms of the eNOS gene no consistent association with myocardial infarction in the ECTIM study. Eur J Clin Invest 1999; 29 (4): 284-290.

135. Reed J.C. et al. BCL-2 family proteins and mitochondria. Biochim Biophys Acta 1998; 1366: 127-137.

136. Reynolds M., Ristor M., Bush E. et al. Angiotensin-Converting enzyme DD genotype in patient with Ischaemic or idiopathic cardiomyopathy. Lancet 1993; 342: 1073-1075.

137. Rotondo G., Maniero G., Toffano G. Aviat Space Environ Med 1990; 61(2): 21-25.

138. Sakuta R., Goto Y. et al. Mitochondrial DNA mutations at nucleotide positions 3243 and 3271 in mitochondrial myopathy, encephalopathy, lactic acidosis, and stroke-like episodes: a comparative study. J Neurol Sei 1993; 115: 158-160.

139. Schmidt R., Schmidt H. et al. Apolipoprotein E polymorphism and silent microangiopathy-related cerebral damage. Results of the Austrian Stroke Prevention Study. Stroke 1997; 28: 851-856.

140. Spector M. et al. Interactions between the C.elegans cell-death regulators CED-9 and CED-4. Nature 1997; 385: 653-656.

141. Stanger B. et al. A novel protein containing a death that interacts with Fas/APO-1 in yeast and causes cell death. Cell 1995; 81: 513-523.

142. Steller H. Mechanisms and genes of cellular suicide. Science 1995; 267: 1445-1449

143. Strosznajder RP et al. Poly(ADP-ribose) polymerase during reperfiision after transient forebrain ischemia: its role in brain edema and cell death J Mol Neurosci 2003; 20(1): 61-72.

144. Tanaka K. et al. Inhibition of nitric oxide synthesis impairs autoregulation of local cerebral blood flow in the rat. Neuroreport 1993; 4: 267-270.

145. Tarkowski G. et al. Cerebrovasc Dis 2000; 10: 200-206.

146. Third J., Montag J. et al. Primary and familial hypoalphalipoproteinemia. Metabolism 1984; 33: 136-146.

147. Thornberry N. et al. Caspases: enemies within. Science 1998; 281: 13121316.

148. Tsukada T. et al. Biochem Biophys Res Commun 1998; 245: 190-193.

149. Ueda S., Weir C.J. et al. Lack of association between angiotensin converting enzyme gene insertion/deletion polymorphism and stroke. J Hypertens 1995; 13: 1597-1601.

150. Vaux D., Cory S., Adams J. Bcl-2 gene promotes haemopoeitic cell survival and cooperates with c-myc to immortalize pre-beta-cells. Nature 1988; 335: 440442.

151. Vaux D., Strasser A. The molecular biology of apoptosis. Proc Nat Acad Sci USA 1996; 93: 2239-2244

152. Verschuer O. Genetik des Meushen. Munchen. Berlin. 1959.

153. Vomberg P., Breederveld C. et al. Cerebral thromboembolism due to antithrombin III deficiency in two children. Neuropediatrics 1987; 18: 42^44.

154. Wagner K., Giles W., Johnson C. et al. Platelet glycoprotein receptor Ilia polymorphism P1A2 and ischemic stroke risk: the Stroke Prevention in Young Women Study. Stroke 1998; 29: 581-5.

155. Wallach D. et al. Tumor necrosis factor receptor and Fas signaling mechanizmz. Annu Rev Immunol 1999; 17: 331-367.

156. Wang X. et al. A smoking-dependent risk of coronary artery diseases associated with a polymorphism of the endothelial nitric oxide synthase gene. Nat Med 1996; 1:41^5.

157. Waters C. Molecular mechanisms of neuronal cell death. RBI Neurotransmissions, Newsletter for Neuroscientist 1997; 2 (XIII): 27.

158. Weiss E., Bray P. et al. A polymorphism of a platelet glycoprotein receptor as an inherited risk factor for coronary thrombosis. N Engl J Med 1996; 334: 1090-1094.

159. Welin H. et al. Analysis of risk factors for stroke in a cohort of men born in 1913. N Eng J Med 1987; 317: 521-526.

160. Whittingham T., Assaf H., Selman W. et al. Metab Brain Dis 1992; 7 (2): 77-92.

161. Wiessner H. et al. Mechanisms of secondary Brain Damage in Cerebral Ischemia and Trauma. NY 1996; 1-7.

162. Williams L. Signal transduction by the platelet derived growth factor receptor. Science 1989; 243: 1564-1570.

163. Wu D., Wallen H. Interaction and regulation of subcellular localization of CED-4 by CED-9. Science 1997; 275: 1126-1129.

164. Yahashi Y. et al. The 27-bp repeat polymorphism in intron 4 of the endothelial NOS gene and ischemic stroke in a Japanese population. Blood Coagul Fibrinolysis 1998; 5: 405^109.

165. Yang J., Liu X. Prevention of apoptosis by bcl-2: release of cytochrome C from mitochondria blocked. Science 1997; 275: 1129-1132.

166. Yu SW, Wang H, Poitras MF, Coombs C, Bowers WJ, Federoff HJ, Poirier GG, Dawson TM, Dawson VL. Mediation of poly (ADP-ribose) polymerase-1-dependent cell death by apoptosis-inducing factor Science 2002 12; 297(5579):259-63.

167. Zee R., Ridker P. et al. Prospective evaluation of the angiotensin-converting enzyme insertion/deletion polymorphism and the risk of stroke. Circulation 1999; 99: 340-343.

168. Zhang F. et al. Nitric oxide donors increase blood flow and reduce brain damage in focal ischemia evidence that nitric oxide is beneficial in the early stages of cerebral ischemia J Cereb Blood Flow Metab 1994; 14: 217-226, 574-580.