Роль полиморфных вариантов гена индуцибельной NO-синтазы в формировании инфаркта мозга у больных с каротидным ишемическим атеротромботическим инсультом. тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.13, кандидат медицинских наук Боцина, Александра Юрьевна

• Боцина, Александра Юрьевна
• кандидат медицинских наук
• 2009

Оглавление диссертации кандидат медицинских наук Боцина, Александра Юрьевна

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1 .Основные современные методы исследования генетической составляющей ишемического инсульта

1.1.1. Ассоциативные исследования генетических факторов риска развития ишемического инсульта.

1.1.2. Ассоциативные исследования индивидуальной чувствительности мозга к ишемическому повреждению.

1.1.2.1. Роль генов липидного обмена в формировании индивидуальной чувствительности мозга к ишемическому повреждению.

1.1.2.2. Роль генов митохондриального и рецепторного путей апоптоза в формировании индивидуальной чувствительности мозга к ишемическому повреждению.

1.1.3. Полногеномное сканирование.

1.2. Индуцибельная ЫО-синтаза и оксид азота в реализации биохимических механизмов ишемии мозга.

1.2.1. Изоформы ЫО-синтазы: еЫОБ, пЫОБ, /АЮБ.

1.2.2. Функционирование изоформ ЫО-синтазы на разных этапах ишемического повреждения мозга.

1.2.3. Роль оксида азота в развитии ишемического повреждения мозга.

1.2.4. Взаимодействие ¡ЫОБ с белками ПАРП-1 и ЦОГ-2 на этапах ишемического повреждения мозга.

1.2.5. Применение ингибиторов гУУОБ в моделях экспериментальной ишемии.

1.3. Ассоциативный анализ полиморфных вариантов генов N081,

N082 и N083.

ГЛАВА 2. КЛИНИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА БОЛЬНЫХ И МЕТОДОВ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Клиническая характеристика больных.

2.2. Методы исследования.

2.2.1. Клинические методы.

2.2.2. Лабораторные и инструментальные методы.

2.2.3. Генетические методы исследования.

2.2.4. Статистическая обработка данных.

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ КЛИНИКО-ИНСТРУМЕНТАЛЬНОГО ИССЛЕДОВАНИЯ ПАЦИЕНТОВ.

ГЛАВА 4. РЕЗУЛЬТАТЫ МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКОГО ИССЛЕДОВАНИЯ ПАЦИЕНТОВ.

4.1. Распределение основных факторов риска ишемического инсульта в зависимости от генотипов полиморфных вариантов N082.

4.2. Анализ связи полиморфных вариантов гена N082 с динамикой объема очага инфаркта мозга.

4.3. Распределение генотипов полиморфных вариантов гена N082 в зависимости от динамики тяжести состояния.

4.4. Распределение генотипов полиморфных вариантов гена N082 в зависимости от степени функционального восстановления.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Роль полиморфных вариантов гена индуцибельной NO-синтазы в формировании инфаркта мозга у больных с каротидным ишемическим атеротромботическим инсультом.»

Сосудистые заболевания головного мозга и, в частности, ишемический инсульт - одна из наиболее важных и актуальных медицинских проблем нашего общества. Широкое распространение ишемического инсульта, высокий процент смертности и тяжелой инвалидизации определяют приоритетность исследований в области изучения патогенеза развития заболевания.

Многочисленные эпидемиологические исследования доказали важность роли генетической составляющей в частоте развития сосудистых заболеваний головного мозга.

В большинстве случаев ишемический инсульт - это мультифакторное заболевание, в формировании которого принимают участие как внешние факторы, так и индивидуальные генетические особенности индивидуума.

В настоящее время в изучении генетической предрасположенности инсульта, равно как и других мультифакторных заболеваний, используется анализ генетических ассоциаций, с помощью которого проводится изучение кандидатных генов, участвующих в формировании основных факторов риска сосудистой патологии.

В последние несколько лет анализ генетических ассоциаций используется и для изучения аспектов индивидуальной чувствительности мозга к ишемическому повреждению и возможному прогнозированию течения и исхода заболевания. В рамках исследований, проведенных на кафедре фундаментальной и клинической неврологии и нейрохирургии ГОУ

ВПО РГМУ совместно с Отделом Молекулярных Основ Генетики Человека

ИМГ РАН, была определена связь Rsa-I полиморфизма гена ПАРП-1 и

ВатШ полиморфизма гена р53, основных индукторов митохондриального звена апоптоза с объемами очага инфаркта мозга на 1-е, 3-й, 7-е и 21-е сутки и тяжестью заболевания [12]. Выявлена связь rs3740720 полиморфизма гена

F ADD и полиморфизма -1677 G/A гена Fas с формированием обширного б очага инфаркта мозга и тяжестью течения заболевания [7]. Полученные данные косвенно подтверждают участие механизмов программированной клеточной гибели в ишемическом повреждении ткани головного мозга.

Избыточная продукция оксида азота (N0) при обязательном участии фермента индуцибельная 1чЮ-синтаза (¡N05!) с последующим образованием токсического соединения пероксинитританиона в настоящее время рассматривается как один из важнейших пусковых механизмов тканевого повреждения на разных этапах ишемии мозга. Участие гена N082, кодирующего синтез в формировании очага инфаркта мозга было многократно продемонстрировано на различных моделях экспериментальной ишемии. Особое внимание привлекает факт относительно поздней экспрессии /АЮБ, что в дальнейшем возможно определит избирательное применение селективных ингибиторов фермента в условиях стационаров, куда пациенты с ишемическим инсультом не всегда госпитализируются в первые сутки от развития заболевания.

В связи с изложенным выше, представляет интерес проведение анализа структурных особенностей гена N082, кодирующего синтез фермента /АЮБ у больных с ишемическим инсультом в остром периоде.

Цель работы: Изучение роли полиморфных вариантов гена индуцибельной №>синтазы (N082) в формировании инфаркта мозга, течении и исходе заболевания у больных с каротидным ишемическим атеротромботическим инсультом.

Задачи исследования

1. Изучить клинические особенности развития каротидного ишемического атеротромботического инсульта и закономерности динамики формирования инфаркта мозга в остром периоде заболевания.

2. Проанализировать полиморфные варианты -2447СЛЗ, -1659С/Т, -0,7 (ТААА)П 1/1) и 8ег608Ьеи(150С/Т) гена N082 и их влияние на динамику формирования инфаркта мозга.

3. Оценить связь анализируемых полиморфных вариантов гена N082 с течением и исходом ишемического инсульта.

Научная новизна

1. Впервые проведено комплексное динамическое клиническое, МР-морфометрическое и молекулярно-генетическое исследование пациентов в остром периоде ишемического инсульта с целью изучения роли полиморфных вариантов -2447С/0, -1659С/Т, -0,7 (ТААА)П 1/Б и 8ег608Ьеи(150С/Т) гена N082 в динамике формирования инфаркта мозга, течении и исходе заболевания.

2. Обнаружены статистически значимые ассоциации полиморфизмов 8ег608Ьеи(С/Т) и -1659С/Т гена N082 с динамикой формирования очага инфаркта мозга, что косвенно может свидетельствовать о функциональной значимости вышеуказанных полиморфных вариантов.

3. Выявлено достоверное преобладание носителей гомозиготного С/С генотипа по полиморфизму 8ег608Ьеи(С/Т) гена N082 среди больных с отрицательной динамикой в неврологическом статусе в период с 1-х по 3-й сутки и в группах больных с умеренной и тяжелой инвалидизацией, по сравнению с носительством аллеля Т, независимо от исходного объема инфаркта мозга.

Практическая значимость работы

1. Полученная взаимосвязь полиморфизма 8ег608Ьеи(С/Т) гена N082 с динамикой формирования очагов инфаркта мозга, течением и исходом ишемического инсульта позволит применять анализ генотипов 8ег608Ьеи(С/Т) в качестве критерия прогнозирования течения и исхода заболевания.

2. Выявление генетических маркеров индивидуальной чувствительности мозга к ишемии расширяет возможности индивидуализированной профилактики ишемического инсульта и позволяет разработать новые подходы к диспансеризации здоровых лиц из группы риска.

3. Изучение генетических основ повреждающего действия ишемии позволяет выявить новые мишени для лечения инсульта. Ассоциация полиморфного варианта 8ег608Ьеи(С/Т) гена N082 с динамикой формирования инфаркта мозга показывает перспективность использования нейропротекторов, реализующих свое действие через высокоселективное ингибирование фермента /ЖЖ

Положения, выносимые на защиту

1. Формирование объема инфаркта мозга, динамика неврологического статуса и степень функционального восстановления при ишемическом инсульте статистически значимо ассоциированы с полиморфным вариантом 8ег608Ьеи(С/Т) 16-го экзона гена N082, что косвенно свидетельствует о функциональной значимости данного участка, определяющего замену аминокислоты серина на лейцин в последовательности первичной структуры белка фермента ¿N08.

2. Высокодостоверное различие в относительной динамике объема исходно малых очагов инфаркта мозга у носителей С/С генотипа в сравнении с носителями аллеля Т по 8ег608Ьеи(С/Т) гена N082, позволяет 9 предположить различную степень значимости избыточного синтеза N0 для формирования очагов разного объема.

3. Обнаруженная связь полиморфизма гена N082, кодирующего синтез ¡N05, с динамикой формирования инфаркта мозга, подтверждает участие важнейших медиаторов нейроиммунного ответа N0 и ОЫОО" в ишемическом повреждении головного мозга у больных с каротидным ишемическим атеротромботическим инсультом и обосновывает изучение и необходимость разработки нейропротекторов, реализующих свое действие путем высокоселективного ингибирования фермента ¡N08.

Заключение диссертации по теме «Нервные болезни», Боцина, Александра Юрьевна

выводы

1. Комплексный клинический, молекулярно-генетический и МР-морфометрический анализ выявил взаимосвязь полиморфного варианта 8ег608Ьеи(С/Т) гена N082 с динамикой формирования очага инфаркта мозга в период с 1-х по 3-й и с 1-х по 7-е сутки от развития заболевания (г = -0,376 и г = -0,295, р<0,05), а также связь 8ег608Ьеи(С/Т) и -1659С/Т гена N082 с динамикой формирования очага инфаркта мозга в период с 7-х по 21-е сутки от развития заболевания (г = -0,422 иг = 0,75 соответственно р<0,05) независимо от исходного объема независимо от исходного объема.

2. Установлено статистически значимое различие по выраженности динамики объема очага церебральной ишемии в группах носителей гомозиготного генотипа С/С и носителей аллеля Т полиморфного варианта 8ег608Ьеи(С/Т). Для носителей аллеля Т характерно менее выраженное увеличение объема очага с 1-х по 3-й сутки по сравнению с носителями гомозиготного генотипа С/С независимо от исходного объема очага (р=0,03).

3. В группе пациентов с малым объемом очага церебральной ишемии носительство гомозиготного генотипа С/С по полиморфизму 8ег608Ьеи(С/Т) высоко достоверно связано с более выраженным увеличением объема малого очага в период с 1-х по 3-й сутки по сравнению с носительством аллеля Т (р=0,005).

4. Установлено достоверное различие по выраженности динамики объема очага церебральной ишемии в группах носителей гомозиготного генотипа С/С и носителей аллеля Т полиморфных вариантов 8ег608Ьеи(С/Т) и -1659С/Т. Для носителей протективной аллели Т характерно более выраженное уменьшение объема очага с 7-х по 21-е сутки по сравнению с носителями гомозиготного генотипа С/С (р=0,03 и р=0,02 соответственно).

5. Частота С/С генотипа достоверно преобладает у больных с отрицательной динамикой в неврологическом статусе (по балльной шкале Оргогозо) в периоды с 1-х по 3-й и с 7-х по 21-е сутки, а также среди пациентов с замедленным восстановлением нарушенных неврологических функций к концу острого периода ишемического инсульта (тяжелая или умеренная инвалидизация) по сравнению с носительством аллеля Т, независимо от исходного объема инфаркта мозга (р=0,006 и р=0,01 соответственно).

6. Исследование полиморфных вариантов -2447СЛЗ и -0,7 (ТААА)п 1ЛЭ не выявило их корреляции с динамикой объема очага инфаркта мозга, динамикой тяжести состояния и степенью функционального восстановления (р>0,05).

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Целесообразно включить молекулярно-генетическую диагностику полиморфного варианта 8ег608Ьеи(С/Т) гена N082 в качестве молекулярно-генетического маркера индивидуальной чувствительности ткани мозга к ишемии с целью выявления группы риска по неблагоприятной динамике объема очага инфаркта мозга в случае острого сосудистого мозгового эпизода.

2. Рекомендуется использовать в группах риска по развитию ишемического инсульта своевременную превентивную нейропротективную терапию, стимулирующую синтез защитных нейротрофических факторов.

3. Целесообразна разработка и включение в комплекс интенсивной терапии ишемического инсульта нейропротекторов, избирательно подавляющих фермент ¡N08.

Список литературы диссертационного исследования кандидат медицинских наук Боцина, Александра Юрьевна, 2009 год

1. Албертс Б., Брей Д., Льюис Дж.: Молекулярная биология клетки. «Мир» М., 1994.

2. Ворлоу Ч.П., Деннис М.С., ван Гейн Ж., и др. Инсульт. Практическое руководство для ведения больных. С-П. Политехника 1998.

3. Гусев Е.И., Скворцова В.И. Ишемия головного мозга. М. Медицина 2001.

4. Гусев Е.И., Скворцова В.И., Коваленко A.B., Соколов М.А. Механизмы повреждения ткани мозга на фоне острой фокальной церебральной ишемии. Журн неврол и психиатр 1999;2:65-70.

5. Иллариошкин С.Н. Генетика сосудистых заболеваний мозга. Очерки ангионеврологии. Под ред. Суслиной З.А. М.: Атмосфера, 2005: с.341.

6. Кольцова Е.А. Роль структурных особенностей генов ренин-ангиотензиновой систем, эндотелиальной NO-синтазы и р53 в развитии основных факторов риска цереброваскулярной патологии и в формировании инфаркта мозга. Дис.Канд мед наук.М,2002.

7. Кольцова К.В. Роль полиморфных вариантов генов, участвующих в рецепторном пути индукции апоптоза (Fas, FADD и каспазы-8) в патогенезе ишемического инсульта. Дис.Канд мед наук.М,2007.

8. Скворцова В.И. Участие апоптоза в формировании инфаркта мозга. Инсульт. Приложение Журн неврол и психиатр 2001;2:12-18.

9. Чистяков Д.А., Воронько O.E., Савостьянов К.В. и др. Полиморфные маркеры генов эндотелиальной NO-синтазы и сосудистого рецептораангиотензина II и предрасположенность к ишемической болезни сердца. Генетика 2000. Т. 36. № 12. С. 1707-1711.

10. Шамалов Н.А. Динамика восстановительных процессов при ишемическом инсульте по данным сопоставления клинических и томографических показателей. Дис.канд.наук. М,2004.

11. Шетова И.М. Роль полиморфных вариантов генов-регуляторов апоптоза: поли (АДФ-рибозы) полимеразы-1, апоптоз-индуцирующего фактора и р53 в патогенезе ишемического инсульта. Дис.Канд мед наук.М,2005.

12. Adams H.Jr., Bendixen В., Kapelle L. et al. Classification of subtype of acute ischemic stroke. Definitions for use in a multicenter clinical trial. Trial of Org 10172 in Acute Stroke Treatment. Stroke 1993;24:35-41.

13. Allan S.M., Rothwell N.J. Cytokines and acute neurodegeneration. Neuroscience 2001 ;2:734-744.

14. Armengou A., Hurtado O., Leira R. et al. L-arginine levels in blood as a marker of nitric oxide-mediated brain damage in acute stroke: a clinical and experimental study. J Cereb Blood Flow Metab 2003;23(8):978-984.

15. Bachschmid M., Thurau S., Zou M.H., Ullrich V. Endothelial cell activation by endotoxin involves superoxide/NO-mediated nitration of prostacyclin synthase and thromboxane receptor stimulation. FASEB J 2003; 17: 914— 916.

16. Barnes P.J., Adcock I.M. Transcription factors and asthma. Eur Respir 1998;12:221-234.

17. Beck K-F., Eberhardt W., Frank S. et al. Inducible NO synthase: role in cellular signalling. J Exp Biol 1999;202:645-653.

18. Bevan S., Porteous L., Sitzer M., Markus H.S. Phosphodiesterase 4D gene, ischemic stroke and asymptomic carotyd atherosclerosis. Stroke 2005;36:949-953.

19. Butler A.R., Megson I.L., Wright P.G. Diffusion of nitric oxide and scavenging by blood in the vasculature. Biochim Biophys Acta 1998;1425:168-176.

20. Cai H., Wilcken D.E.,Wang X.L. The Glu-298-->Asp (894G->T) mutation at exon 7 of the endothelial nitric oxide synthase gene and coronary artery disease. JMolMed 1999;77(6):511-514.

21. Castillo J., Rama R., Davalos A. Nitric oxide-related brain damage in acute ischemic stroke. Stroke 2000;31(4):852-857.

22. Cramer J.P., Mockenhaupt F.P., Ehrhardt S., Burkhardt J. et al. iNOS promoter variants and severe malaria in Ghanian children. Trop Med Int Health 2004;9(10): 1074-1080.

23. Dell'Albani P., Santangelo R., Torrisi L.et al. JAK/STAT pathway mediates cytokine-induced iNOS expression in primary astroglial cell cultures. J Neurosci Res 2001 ;65(5):417-424.

24. Dirnagl U., Iadecola C., Moskowitz M.A. Pathobiology of ischaemic stroke: an integrated view. Trends Neurosci 1999;22:391-397.

25. Dirnagl U., Simon R.P., Hallenbeck J.M. Ischemic tolerance and endogenous neuroprotection. Trends Neurosci 2003;26:248-254.

26. Eliasson M.J., Sampei K., Mandir A.S. et al. Poly(ADP-ribose) polymerase gene disruption renders mice resistent to cerebral ischemia. Nat Med 1997;3:1089-1095.

27. Endres M., Wang Z.Q., Namura S et al. Ischemic brain injury is mediated by the activation of poly(ADP-ribose)polymerase. J Cereb Blood Flow Metab 1997;17:1143-1151.

28. Foster C., ClarkH.B., RossM.E., IadecolaC.Inducible NOS expression in human cerebral infarcts. Acta Neuropathol 1999;97(3):215-220.

29. Geller D.A., Lowenstein C.J., Shapiro R.A. et al. Molecular cloning and expression of inducible nitric oxide synthase from human hepatocytes. Proc Natl Acad Sci 1993;90:3491-3495.

30. Giardino I., Fard A.K., Hatchell D.L. et al. Aminoguanidine inhibits reactive oxygen species formation, lipid peroxidation, and oxidant-induced apoptosis. Diabetes 1998;47:1114-1120.

31. Gomez L.M., Anaya J.M., Vilchez J.R., et al. A polymorphism in the inducible synthase gene is associated with tuberculosis. Tuberculosis 2007;87(4):288-94.

32. Granger C., Dewis L.S., Peters M.C. et al. Stroke rehabilitation: analysis of repeated Barthel index measures. Arch Phys Med Rehabil. 1979;60:14-17.

33. Gretarsdottir S., Thorleifson G., Reynisdottir S.T. et al. The gene encoding phosphodiesterase 4D confers risk of ischemic stroke. Nat Genet 2003;35:131-138.

34. Guix F.X., Uribesalgo I., Coma M., Munoz F.J. The physiology and pathophysiology of nitric oxide in the brain. Prog Neurobiol 2005;76:126-152.

35. Ha H.C., Snyder S.H. Poly(ADP-ribose) polymerase is a mediator of necrotic cell death by ATP depletion. Proc Natl Acad Sci USA 1999;96:13978-13982.

36. Hara H., HuangPL., PanahianN. et al. Reduced brain edema and infarction volume in mice lacking the neuronal isoform of nitric oxide synthase after transient MCA occlusion. J Cereb Blood Flow Metab 1996;16(4):605-611.

37. Hassa P.O., Hottiger M.O. The functional role of poly(ADP-ribose) polymerase 1 as novel coactivator of NF-kB in inflammatory disorders. Cell Mol Life Sci 2002;59:1534-1553.

38. Hassan A., Gormley K., O'Sullivan M. et al. Endothelial nitric oxide gene haplotypes and risk of cerebral small-vessel disease. Stroke 2004;35(3):654-659.

39. Hassan A., Markus H. Genetics and ischemic stroke. Brain 2000; 123:17841812.

40. Hegele R.A., Dichgans M. Update in genetics of stroke and cerebrovascular disease 2007. Stroke 2008;39:252-254.

41. Helgadottir A., Gretasdottir S., St Clair D., et al. Association between the gene encoding 5-lipoxygenase activating protein and stroke in a Scottish population. Am J Num Genet 2005;76:505-509.

42. Helgadottir A., Manolescu A., Thorleifson G. et al. The gene encoding 5-lipoxygenase activating protein confers risk of myocardial infarction and stroke. Nat Genet 2003;36:233-239.

43. Hingorami A.D., Liang C.F., Fatibene J. et al. A common variant of the endothelial nitric oxide synthase (Glu298~>Asp) is a major risk factor for coronary artery disease in the UK. Circulation 1999; 100(14): 1515-1520.

44. Hobbs M.R., Udhayakumar V., Levesque M.C. et al. A new promoter polymorphism associated with increased nitric oxide production and protection from severe malaria in Tanzanian and Kenyan children. Lancet 2002;360(9344): 1468-1475.

45. Hogg N., Kalyanaraman B., Joseph J.et al. Inhibition of low density lipoprotein oxidation by NO. FEBS Lett 1993;334(2):170-174.

46. Holla L.I., Stejskalova A., Znojil V., Vasku A. Analysis of the inducible nitric oxide synthase gene polymorphisms in Czech patients with atopic diseases. Clin Exp Allergy 2006;36(12): 1592-1601.

47. Hou L., Osei-Hyiaman D.,Yu H. et al. Association of a 27-bp repeat polymorphism in ecNOS gene with ischemic stroke in Chinese patients. Neurology 2001;56(4):490-496.

48. Hu J., FerreiraA., VanEldikL.J.SlOOp induces neuronal death through nitric oxide release from astrocytes. J Neurochem 1997;69(6):2294-2301.

49. Huang Z., Huang PL., Panahian N.et al. Effects of cerebral ischemia in ice deficient in neuronal nitric oxide synthase. Science 1994;265:1883-1885.

50. Iadecola C., Foster C., Nogawa S. et al. Cyclooxygenase-2 immunoreactivity in the human brain following cerebral ischemia. Acta Neuropathol(Berl) 1999;98:9-14.

51. Iadecola C., Niwa K., Nogawa S. et al. Reduced susceptibility to ischemic brain injury and N-methyl-D-aspartate-mediated neurotoxity in COX-2-deficient mice. Proc Natl Acad Sci USA 2001;98:1294-1299.

52. Iadecola C., Ross M.E. Molecular pathology of cerebral ischemia: delayed gene expression and strategies for neuroprotection. Ann NY Acad Sci. 1997;835:203-217.

53. Iadecola C., Zhang F., Casey R. et al. Delayed reduction of ischemic brain injury and neurological deficits in mice lacking the inducible nitric oxide synthase gene. J Neurosci 1997;17(23):9157-9164.

54. Iadecola C., Zhang F., Xu S. et al. iNOS expression in brain following cerebral ischemia. J Cereb Blood Flow Metab 1995;15(3):378-384.

55. Iadecola C., Zhang F., Xu X. Inhibition of iNOS ameliorates cerebral ischemic damage. Am J Physiol. 1995;268:R286-R292.

56. Ichihara S., Yamada Y., Fujimura T. et al. Association of a polymorphism of the endothelial constitutive nitric oxide synthase gene with myocardial infarction in the Japanese population. Am J Cardiol 1998;81(l):83-86.

57. Johannesen J., Pie A., Pociot F. et al. Linkage of the human inducible nitric oxide synthase gene to type 1 diabetes. J Clin Endocrin Metab 2001 ;86(6):2792-2796.

58. Joshi M.S., Ferguson T.B. Jr., Han T.H. et al. Nitric oxide is consumed, rather than conserved, by reaction with oxyhemoglobin under physiological conditions. Proc Natl Acad Sci USA 2002;99:10341-10346.

59. Kaise M., Miwa J., Suzuki N. et al. Inducible nitric oxide synthase gene promoter polymorphism is associated with increased gastric mRNA expression of iNOS and increased risk of gastric carcinoma. Eur J Gastroenterol Hepatol 2007;19(2):139-145.

60. Kawaguchi Y., Tochimoto A., Hara M. et al. NOS2 polymorphisms associated with the susceptibility to pulmonary arterial hypertension with systemic sclerosis: contribution to the transcriptional activity. Arthritis Res Ther 2006;8(4):R104.

61. Kim Y.M, Talanian R.V, Billiar T.R. Nitric oxide inhibits apoptosis by preventing increases in caspase-3 like activity via two distinct mechanisms. J Biol Chem 1997;272:31138-31148.

62. Kleinert H., Wallerath T., Euchenhofer C. et al. Estrogens increase transcription of the human eNOS gene. Hypertension. 1998;31:582-588.

63. Kun J.F., Mordmuller B., Perkins D,J. et al. Nitric oxide synthase G954C, increased NO production and protection against malaria. J Infect Dis 2001;184:330-336.

64. Lipton P. Ischemic cell death in brain neurons. Physiol Rev 1999;79: 1431— 1568.

65. Liu K., Li Q., Zhang L., Zheng X. The dynamic detection of NO during stroke and reperfusion in vivo. Brain Inj 2009;23(5):450-8.

66. LiuY.,LaaksoM.P., KaronenJ.O. etal. Apolipoprotein E polymorphism and acute ischemic stroke: a diffusion- and perfusion-weighted magnetic resonance imaging study. JCerebBloodFlowMetab. 2002;22:1336-1342.

67. LiuY.,NuutinenJ., LaaksoM.P. etal. ApoE polymorphism and acute stroke: a study with diffusion- and perfusion-weighted MRI and MR angiography. ActaNeurolScand. 2006; 114(5):323-328.

68. Lohmussaar E., Gschwendtner A., Mueller J.C. et al. ALOX5AP gene and PDE4D gene in a central European population of stroke patients. Stroke 2005;36:731-736.

69. Loihl A.K., Campbell I., Murphy S. The expression of NOS-2 following permanent focal ischemia and the role of NO in infarct generation in male, female and NOS-2 deficient mice. Brain Res. 1999;830:155-164.

70. Mandir A.S., Poitras M.F., Berliner A.R. et al. NMDA but not non-NMDA excitotoxicity is mediated by Poly(ADP-ribose) polymerase.J Neurosci 2000;20:8005-8010.

71. Markus H.S. Ruigrok Y, Ali N, Powell J.F. Endothelial nitric oxide synthase exon 7 polymorphism, ischemic cerebrovascular disease, and carotid atheroma. Stroke 1998;29:1908-1911.

72. Martin M.C., Martinez A., Mendoza J.L. et al. Influence of the NOS2A on inflammatory bowel disease susceptibility. Immunogenetics 2007;59(11):833-837.

73. MatarinM, Simon-SanchezJ, Fung H.C. Structural genomic variation in ischemic stroke. Neurogenetics. 2008 May;9(2):101-8.

74. Meschia J.F., Brott T.G., Brown R.D. Jr. et al. Phosphodiesterase 4D and 5-lipoxygenase activating protein in ischemic stroke. Ann Neurol 2005;58:351-361.

75. Morris B.J., Glenn C.L., Wilcken D.E., Zhang X.L. Influence of an inducible nitric oxide synthase promoter variant on clinical variables in patients with coronary artery disease. Clin Sci (London) 2001;100(5):551-556.

76. Morris B.J., Markus A., Glenn C.L. et al. Association of a functional inducible niric oxide synthase promoter variant with complications in type 2 diabetes. J Mol Med 2002;80(2):96-104.

77. Murphy S. Production of nitric oxide by glial cells. Glia 2000;29:1-14.

78. MyllykangasL.,PolvikovskiT., SulkavaR. etal. Association of lipoproteinlipase Ser477Ter polymorphism with brain infarction: a population-based neuropathological study. AnnMed. 2001;33(7):486-492.

79. Nakagami H., Ikeda U., Maeda Y. et al. Coronary artery disease and endothelial nitric oxide synthase and angiotensin-converting enzyme gene polymorphisms. J Thromb Thrombolysis 1999;8(3):191-195.

80. Nanetti L., Taffi R., Vignini A. et al. Reactive oxygen species plasmatic levels in ischemic stroke. Mol Cell Biochem 2007;303(1-2): 19-25.

81. Nilsson-Ardnor S., Wiklund P.G., Lindgren P. et al. Linkage of ischemic stroke to the PDE4D region on 5q in a Swedish population.Stroke 2005 Aug;36(8): 1666-1671.

82. Niwa M., Inao S., Takayasu M. et al. Time course of expression of three nitric oxide synthase isoforms after transient middle cerebral artery occlusion in rats. Neurol Med Chir (Tokyo). 2001;41(2):63-72.

83. Nogawa S., Foster C., Zhang F. et al. Interaction between inducible nitric oxide synthase and cyclooxygenase-2 after cerebral idchemia. Proc Natl AcadSci 1998;95( 18): 10966-10971.

84. Nogawa S., Zhang F., Ross ME. et al. Cyclo-oxygenase-2 gene expression in neurons contributes to ischemic brain damage. J Neurosci 1997; 17:27462755.

85. Nurmi A., Lindsberg P.J., Koistinaho M., et al. Nuclear factor-kappa B contributes to infarction after permanent focal ischemia. Stroke 2004;35:987-991.

86. Ou P., Wolff S.P. Aminoguanidine: a drug proposed for prophylaxis in diabetes inhibits catalase and generates hydrogen peroxide in vitro.Biochem Pharmacol 1993;46:1139-1144.

87. Park E-M., Cho S., Frys K.A. et al. Inducible NO-synthase contributes to gender differences in ischemic brain injury. J Cereb Blood Flow Metab 2006;26:392-401.

88. Park E-M., Sunghee C., Kelly F. et al. Interaction between inducible nitric oxide synthase and poly(ADP-ribose)polymerase in focal ischemic brai injury. Stroke 2004;35:2896-2901.

89. Parmentier S., Bohme G.A., Lerouet D. et al. Selective inhibition of inducible nitric oxide synthase prevents ischemic brain injury. Br J Pharmacol 1999;127(2):546-552.

90. Poirier O., Mao C., Mallet C. et al. Polymorphisms of the endothelial nitric oxide synthase gene no consistent association with myocardial infarction in the ECTIM study. Eur J Clin Invest 1999;29(4):284-290.

91. Sairanen T., Ristimaki A., Karajalainen-Lindsberg M.L. et al. Cyclooxygenase-2 is induced globally in infarcted human brain. Ann Neurol 1998;43:738-747.

92. Samdani A.F., Dawson T.M., Dawson V.L. Nitric oxide synthase in models of focal ischemia. Stroke 1997;28(6): 1283-1288.

93. Sugimoto K., Iadecola C. Delayed effect of administration of COX-2 inhibitor in mice with acute cerebral ischemia. Brain Res 2003;960:273-276.

94. Sugimoto K., Iadecola C. Effects of aminoguanidine on cerebral ischemia in mice: comparison between mice with and without iNOS gene. Neurosci Lett 2002. 331(l):25-28.

95. Szabo C. Physiological and pathophysiological roles of nitric oxide in the central nervous system. Brain Res Bull 1996;41:131-141.

96. Taffi R., Nanetti L., Mazzanti L. et al. Plasma levels of nitric oxide and stroke outcome. J Neurol 2008;255(l):94-98.

97. Takahashi K., Greenbrg J.H., Jackson P. et al. Neuroprotective effects of inhibiting poly(ADP-ribose) synthetase on focal cerebral ischemia in rats. J Cereb Blood Flow Metab 1997;3:1137-1142.

98. Tuna M., Yilmaz D.M., Erman T., et al. Effect of neutralization of rat interleukin 6 bioactivity on inducible nitric oxide synthase up-regulation and cerebral ischemic damage. Neurol Res 2008; Nov 25 Epub ahead of print.

99. Vakili A., Zahedi-Khorasani M. Effect of aminoguanidine on postishemic damage in rodent model of stroke. Pak J Pharm Sei 2008;21(1):24-28.

100. Wang X.L., Mahaney M.C., Sim A.S. et al. Genetic contribution of the endothelial constitutive nitric oxide synthase gene to plasma nitric oxide levels. Arterioscler Thromb Vase Biol 1997;17:3147-3153.

101. Wang X.L.,Sim A.S., Badenhop R.F. et al. A smoking-dependent risk of coronary artery disease associated with a polymorphism of the endothelial nitric oxide synthase gene. Nat Med 1996;1:41-45.

102. Warpeha K.M., Xu M., Liu L. et al. Genotyping and functional analysis of a polymorphic (CCTTT)n repeat of NOS2A in diabetic retinopathy. FASEB J. 1999;13:1825-32.

103. White B.C., Sullivan J.M., De Gracia D.J. et al. Brain ischemia and reperfiision: molecular mechanisms of neuronal injury. J Neurol Sei 2000;179:1-33.

104. Willmot M., Gibson C., Gray L. et al. Nitric oxide synthase inhibitors in experimental ischemic stroke and their effects on infarct size and cerebral blood flow: a systematic review. Free Radic Biol Med 2005;39(3):412-425.

105. Yahashi Y., Kario K., Shimada K., Matsuo M. The 27-bp repeat polymorphism in intron 4 of the endothelial cell nitric oxide synthase gene and ischemic stroke in a Japanese population.Blood Coagul Fibrinolysis. 1998;9(5):405-409.

106. Yildiz G., Demiiyurek A.T., Sahin-Erdemli I. et al. Comparison of antioxidant activities of aminoguanidine, methylguanidine and guanidine by luminol-enhanced chemiluminescence. Br J Pharmacol 1998;124:905-910.

107. Yu S.W., Wang H., Poitras M.F. et al. Mediation of poly(ADP-ribose) polymerase-1-dependent cell death by apoptosis-inducing factor. Science 2002;297:259-263.

108. Zee R.Y., Cheng S., Hegener H.H. et al., Genetic variants of ALOX5AP, and risk of incident myocardial infarction and ischemic stroke: a nested case-control approach. Stroke. 2006;37(8):2007-2011.

109. Zhao X., Haensel C., Araki E. et al. Gene-dosing effect and persistence of reduction in ischemic brain injury in mice lacking inducible nitric oxide synthase. Brain Res 2000;872:215-218.

110. Zhu D.Y., Liu S.H., Sun H.S. et al. Expression of inducible nitric oxide synthase after focal cerebral ischemia stimulates neurogenesis in the adult rodent dentate gyrus. J Neurosci 2003;23:223-229.