Роль полиморфных вариантов генов, участвующих в рецепторном пути индукции апоптоза (FADD, Fas и каспазы-8) в патогенезе ишемического инсульта тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.13, кандидат медицинских наук Кольцова, Кира Владимировна

• Кольцова, Кира Владимировна
• кандидат медицинских наук
• 2007

Оглавление диссертации кандидат медицинских наук Кольцова, Кира Владимировна

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Методы исследования генетических аспектов ишемического инсульта.

1.2. Молекулярно-генетические основы развития ишемического инсульта и формирования его основных факторов риска.

1.3. Биохимические механизмы церебральной ишемии.

1.4 Молекулярные механизмы клеточной гибели в условиях церебральной ишемии.

1.4.1 Молекулярные механизмы апоптоза, вызванные активацией рецепторов смерти.

1.4.2. Молекулярные механизмы действия каспаз.

1.5 Возможности современной нейропротективной терапии.

ГЛАВА 2. КЛИНИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА БОЛЬНЫХ И МЕТОДОВ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Клиническая характеристика больных.

2.2. Методы исследования.

2.2.1. Клинические методы.

2.2.2. Генетические методы исследования.

2.2.3. Статистическая обработка данных.

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ КЛИНИКО-ИНСТРУМЕНТАЛЬНОГО

ИССЛЕДОВАНИЯ ПАЦИЕНТОВ.

ГЛАВА 4. РЕЗУЛЬТАТЫ МОЛЕКУЛЯРНО

ГЕНЕТИЧЕСКОГО ИССЛЕДОВАНИЯ ПАЦИЕНТОВ.

4.1 Анализ полиморфных вариантов гена FADD.

4.2. Анализ полиморфных вариантов гена Fas.

4.3. Анализ полиморфных вариантов гена каспазы

4.4. Результаты многофакторного анализа.

4.4.1 Анализ полиморфных вариантов гена FADD и Fas.

4.4.2 Анализ комбинаций полиморфных вариантов генов FADD и Fas с генами-регуляторами митохондриального пути индукции anomxmPARP-l ир53.

4.4.3 Анализ связи комбинаций полиморфных вариантов генов FADD, Fas, PARP-1 и р53 с объемом ишемического поражения мозга.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Роль полиморфных вариантов генов, участвующих в рецепторном пути индукции апоптоза (FADD, Fas и каспазы-8) в патогенезе ишемического инсульта»

Сосудистые поражения нервной системы являются одной из важнейших проблем клинической неврологии. Внимание к сосудистой патологии мозга объясняется ее широкой распространенностью, высоким процентом смертности и инвалидизации.

На протяжении последних 25-30 лет во всем мире ведется активное изучение механизмов развития цереброваскулярных заболеваний и поиск эффективных методов их профилактики и лечения. Так, к примеру, для существенного улучшения качества лечения острого инсульта необходимы информированность широких масс населения об этом заболевании, разработка более эффективных и безопасных методов быстрого восстановления мозгового кровотока и активной нейропротекции в условиях реперфузии [69].

Ишемический инсульт может представлять собой один из синдромов моногенной наследственной патологии, но в большинстве случаев этиология инсульта полигенна.

Проводится изучение роли кандидатных генов, участвующих в формировании основных факторов риска цереброваскулярной патологии [5, 17]. Изучаются гены ренин-ангиотензиновой системы, NO-синтаз, гены системы гемостаза, гены, контролирующие обмен гомоцистеина и липидов, а также гены, вовлеченные в процессы программированной клеточной смерти [60, 115].

Многочисленные исследования позволили выделить ряд кандидатных генов, вовлеченных в патогенез ишемии мозга. Однако выявить конкретные полиморфные варианты генов либо генные мутации, определяющие развитие ишемического инсульта, до сих пор не удалось.

Наряду с изучением молекулярно-генетических аспектов формирования основных факторов риска цереброваскулярной патологии проводится изучение генетических механизмов апоптоза и антиапоптозной защиты, а также исследования генов, определяющих индивидуальную чувствительность ткани мозга к ишемии [20, 28]. Показано, что изменение экспрессии генов, вовлеченных в механизмы регуляции программированной клеточной гибели (семейство bcl-2, каспазы, гены немедленного реагирования, гены белков теплового шока, р53), может играть важную роль в развитии ишемического повреждения мозга.

Объединение усилий фундаментальных нейронаук и клинической неврологии способствовало раскрытию основных механизмов, запускаемых острой фокальной ишемией мозга.

Одним из наиболее существенных достижений в последние годы было раскрытие стадийности патофизиологического каскада острейшего периода ишемического инсульта. Установлены основные механизмы, обусловливающие переход обратимых гемодинамических, клеточных и молекулярных изменений в области ишемической полутени в стойкие, формирование зоны некроза.

Наряду с некрозом, в момент повреждения запускается механизм отсроченного (вторичного) повреждения клеток, в основе которого лежит апоптоз, представляющий собой физиологическую гибель клеток, необходимую для обновления клеточного пула органов, дифференцировки и развития тканей [51, 70, 85]. Помимо этого, апоптоз активируется и тем самым предохраняет ткани от возможных последствий при сублетальных повреждениях, недостаточных для прямого уничтожения клетки путем некроза.

Возможность перехода апоптоза в некроз (апоптозно-некротический континуум, апонекроз) недостаточно изучена, и это является предметом более широкого рассмотрения проблемы.

В то время как некроз представляет собой необратимую гибель клетки, смерть в результате апоптоза на определенных этапах может быть задержана или предупреждена. Поэтому во многих лабораториях мира проводятся исследования с целью изучения механизмов активации апоптоза, его 7 временного и пространственного распространения в клеточной популяции ткани. Выясняются индукторы, супрессоры и исполнители программы апоптоза, а так же возможные пути влияния на этот процесс, и, прежде всего его торможения, с целью повышения выживаемости клеток.

Реализация цитотоксичности связана с индукцией рецептор-опосредованного апоптоза клетки-мишени. Среди огромного множества клеточных рецепторов в особую группу выделяют так называемые рецепторы смерти (death receptors). Они представляют собой трансмембранные гликопротеиды, которые, взаимодействуя со специфическими лигандами, передают апоптотический сигнал в клетку и вызывают активацию каспаз. Большинство смертельных рецепторов относятся к надсемейству рецепторов фактора некроза опухолей (TNFR) и характеризуются сходными эктрацеллюлярными доменами, богатыми цистеином [81]. Рецепторы смерти также имеют в своей структуре гомологичные цитоплазменные участки, называемые смертельными доменами (death domain), которые принимают непосредственное участие в запуске апоптоза [88].

Наиболее изученными из смертельных рецепторов являются Fas (CD95, или Apol) и TNFR1. Человеческий Fas-рецептор состоит из 335 аминокислотных остатков с сигнальной последовательностью на N-конце и трансмембранным участком в середине молекулы, что позволяет отнести его к мембранным белкам Т типа [40, 106].

Исследования последних лет позволили выявить группу (каскад) цистеиновых протеаз - каспаз, которые активируя друг друга, во многих случаях составляют основу реализации программы клеточной гибели [43, 44]. С появлением каспаз была выделена третья, промежуточная фаза апоптоза, связанная с активацией так называемых исполнителей апоптоза, к которым отнесены нижние каспазы (downstream caspases) и эндонуклеазы

103, 109]. Считают, что эта промежуточная фаза до начала фрагментации ДНК также является обратимой.

Кроме фрагментации ДНК, активация или индукция каспаз также является достаточно надежным признаком апоптоза. Использование иммуногистологического метода с применением антикаспазных антител позволяет регистрировать эти протеиназы на ранних этапах посттравматического апоптоза в спинном мозге

Каспаза 8 рекрутируется лиганд-активированными рецепторами посредством ассоциированного с рецепторами смертельного домена белка FADD, что привело к первой молекулярной модели апоптоза, индуцируемого смертельными рецепторами. i

Хотя FADD необходим для Fas-индуцированной некроз-подобной программируемой клеточной гибели, этот белок блокирует TNFR1-индуцированный некроз, возможно путем активации caspase-8. Следовательно, FADD можно рассматривать как один из переключателей между апоптозом и некрозом, запускаемыми TNF.

Реализация программированной клеточной смерти происходит параллельно по 3 путям:

1. Рецепторный - взаимодействие рецептора и лиганда смерти приводит к последовательной активации инициаторных и эффекторных каспаз (каспазы I и II порядка соответственно), после чего процесс оказывается необратимым.

2. Митохондриальный - под воздействием индукторов апоптоза происходит увеличение проницаемости мембран митохондрий с высвобождением цитохрома С с последующей активацией каспазного каскада. Высвобождение апоптоз-индуцирующего фактора (АИФ) является митохондриальным эффектором, вызывающий конденсацию хроматина и фрагментацию ДНК независимо от действия каспаз. 9

3. Прямое повреждение ДНК ведет к активации р53, который стимулирует "рецепторы смерти" и апоптозные гены, а также активирует модулятор суицида PUMA (р53 upregulated modulator of APOptosis), блокирующий антиапоптозный белок Bcl-2, после чего происходит беспрепятственный выход цитохрома с из митохондрий.

Дефекты на любой ступени пути цитохром с или АИФ приводят к переключению с апоптотической гибели на некротическую. Такая гибель соответствует критериям ПКГ, так как может быть блокирована анти-апоптическими онкогенами Вс1-2. Подавление каспазной активности изменяет способ гибели клетки, если сигнал достиг митохондрий. Во многих моделях гибели клеток главные контролеры программируемой клеточной гибели оперируют на митохондриальном уровне, тогда как решения о форме гибели принимаются на уровне активации каспаз.

В случае острой церебральной ишемии нейроны внутри одной области подвергаются воздействию разной интенсивности, что обусловливает разные программы гибели. К примеру, быстрое истощение АТФ или нарушение внутриклеточного распределения ионов нарушают цитохромом с-индуцированную активацию каспаз, а массивная продукция оксида натрия непосредственно инактивирует каспазы. Таким образом, гибель клеток обнаруживает смешанные признаки апоптоза и некроза, в качестве «исполняющих» протеаз выступают каспазы или калпаины, или же обнаруживается активация PARP-1, как контролера запрограммированного некроза [126].

Активное изучение генов, вовлеченных в комплекс генетических реакций, определяющих тканевой ответ на ишемическое повреждение и участвующих в формировании морфологического дефекта, а также их полиморфных вариантов определяет актуальность настоящей работы, ее цель и задачи.

Цель работы: Изучение полиморфных вариантов генов-регуляторов рецепторного пути индукции апоптоза (FADD, Fas и каспазы 8) их влияния на формирование инфаркта мозга, течение и исход острого ишемического атеротромботического инсульта.

Задачи исследования:

1. Изучение клинических особенностей развития ишемического атеротромботического инсульта и МРТ закономерностей формирования инфаркта мозга на протяжении острого периода заболевания.

2. Анализ структурных особенностей однонуклеотидного полиморфизма rs3740720 гена FADD, однонуклеотидного полиморфизма в 5'фланкирующей области -1677 G/A гена Fas и однонуклеотидного полиморфизма rs 3769823 каспазы 8 и их влияния на формирование инфаркта мозга, течение и исход ишемического инсульта.

3. Исследование связи комбинаций полиморфных вариантов генов рецепторного пути индукции апоптоза (FADD, Fas и каспазы-8) и митохондриального пути (PARP-1 и р53) с объемом церебрального инфаркта, течением и исходом ишемического инсульта.

4. Разработка молекулярно-генетических критериев прогнозирования объема инфаркта мозга и исхода ишемического инсульта.

Научная новизна.

1. Впервые проведено комплексное динамическое клиническое, МР-морфометрическое, молекулярно-генетическое исследование пациентов в остром периоде атеротромботического ишемического инсульта с целью изучения роли полиморфизмов генов-регуляторов рецепторного пути индукции апоптоза в патогенезе ишемического инсульта.

2. Обнаружена ассоциация комбинаций полиморфизмов генов рецепторного пути индукции апоптоза (FADD и Fas) и митохондриального пути (PARP-1 и р53) с тяжестью состояния больных в остром периоде ишемического инсульта и объемом инфаркта мозга.

3. Комбинации полиморфных вариантов генов-регуляторов рецепторного пути индукции апоптоза FADD и Fas могут быть применены в качестве критериев для прогнозирования объема инфаркта головного мозга при ишемическом инсульте.

Практическое значение работы.

1. Обнаруженная взаимосвязь между полиморфными вариантами генов-регуляторов рецепторного пути индукции апоптоза (FADD и Fas), митохондриального пути (PARP-1 и р53), тяжестью состояния больных в остром периоде ишемического инсульта и объемом инфаркта мозга позволяет применять исследование комбинаций генотипов FADD и Fas для раннего прогнозирования течения ишемического инсульта и объема церебрального инфаркта.

2. Выявление генетических маркеров индивидуальной чувствительности головного мозга к ишемии расширяет возможности первичной профилактики ишемического инсульта, позволяет разработать новые подходы к диспансеризации практически здоровых лиц из групп риска с целенаправленным и комплексным их обследованием и превентивным лечением.

3. Изучение генетических основ повреждающего действия ишемии позволяет выявить новые мишени для лечения инсульта. Выявленная ассоциация между полиморфными вариантами генов FADD, Fas и размерами инфаркта головного мозга доказывает перспективность использования нейропротекторов, реализующих свое действие через торможение процессов апоптоза.

Заключение диссертации по теме «Нервные болезни», Кольцова, Кира Владимировна

выводы

1. Комплексный клинико-молекулярно-генетический и МР-морфометрический анализ установил, что у лиц с гомозиготным G/G генотипом по однонуклеотидному полиморфизму rs3 740720 в гене FADD средний объем инфаркта при ишемическом поражении головного мозга на 1-е, 3-й, 7-е и 21-е сутки от развития инсульта достоверно выше (191,43 см ) по сравнению с носителями А/А и A/G генотипами по этому полиморфизму (65,7 см ).

2. Анализ генотипов по полиморфизму rs3740720 гена FADD выявил более частое носительство гомозиготного G/G FADD генотипа у больных с тяжелым инсультом (балл по шкале Оргогозо <40), по сравнению с генотипами А/А и A/G FADD на 1-е, 3-й и 7-е сутки от развития инсульта (р=0,04 на 1-е сутки, р=0,04 на 3-й сутки и р=0,04 на 7-е сутки развития заболевания).

3. Выявлена высокодостоверная связь объема очага инфаркта на 3-й сутки инсульта: у носителей аллеля А гена Fas (однонуклеотидный полиморфизм в 5'фланкирующей области -1677 G/A) отмечался инфаркт головного мозга со средним объемом 124,7 см , что достоверно превышало объем инфаркта у носителями гомозиготного G/G генотипа (48,9 см ; р=0,05).

4. Анализ генотипов по однонуклеотидному полиморфизму в 5'фланкирующей области -1677 G/A гена Fas выявил достоверно более частое носительство гомозиготного G/G Fas генотипа у больных с наиболее «благоприятным» течением инсульта (балл по шкале 0ргогозо>40) по сравнению с А/А и A/G Fas генотипами (р=0,02; р=0,02; р=0,01 и р=0,01 соответственно).

5. Анализ однонуклеотидного полиморфизма rs 3769823 гена каспазы 8 не выявил корреляции с объемом инфаркта головного мозга и тяжестью состояния больных.

6. Анализ комбинаций генов FADD, Fas, PARP-1 и р53 показал, что в исследуемой группе пациентов у носителей 3 и более «неблагоприятных» полиморфных вариантов этих генов достоверно чаще встречались очаги инфаркта головного мозга большого объема по сравнению с комбинациями, объединяющими не более 2 «неблагоприятных» полиморфных вариантов (р=0,01). Средние объемы инфарктов в этих группах пациентов составили

3 3

131,7 см и 31,8 см соответственно.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ.

1. Обнаруженная взаимосвязь между полиморфными вариантами генов-регуляторов рецепторного пути индукции апоптоза (FADD и Fas), митохондриального пути (PARP-1 и р53), тяжестью состояния больных в остром периоде ишемического инсульта и объемом инфаркта мозга позволяет применять исследование комбинаций генотипов FADD и Fas для раннего прогнозирования течения ишемического инсульта и объема очага инфаркта головного мозга.

2. Выявление генетических маркеров индивидуальной чувствительности головного мозга к ишемии расширяет возможности первичной профилактики ишемического инсульта, позволяет разработать новые подходы к диспансеризации практически здоровых лиц из групп риска с целенаправленным и комплексным их обследованием и превентивным лечением.

Список литературы диссертационного исследования кандидат медицинских наук Кольцова, Кира Владимировна, 2007 год

1. Ашмарин И.П., Стукалов П.В. Нейрохимия. М. Изд-во Инст Биомед химии РАМН 1996.

2. Баранов B.C., Баранова Е.В., Иващенко Т.Э., Асеев М.В. Геном человека и гены "предрасположенности": Введение в предиктивную медицину. СПб., 2000

3. Барышников А.Ю., Шишкин А.В. Иммунологические проблемы апоптоза. М.: Эриториал УРРС. 2002. 320 с.

4. Боринская С.А., Янковский Н.К. Структура генома прокариот // Молекулярная биология. 1999. Т. 33. № 6

5. Бочков Н.П. Генетика человека и клиническая медицина // Вестн. РАМН. 2001. № 10 Генная терапия медицина будущего / Под ред. А.В.Зеленина. М., 2000

6. Гусев Е.И., Скворцова В.И. Ишемия головного мозга. М. Медицина 2001.

7. Гусев Е.И., Скворцова В.И., Стаховская JI.B., Киликовский В.В., Айриян Н.Ю. Эпидемиология инсульта в России. Consilium Medicum 2003; 5-7.

8. Давиденкова Е.Ф., Колосова Н.Н., Либерман И.С. Медико-генетическое консультирование в системе профилактики ишемической болезни сердца инсультов. JI. Медицина 1979.

9. Дамулин И. В.,. Левин О. С, Яхно Н. Н. Болезнь Альцгеймера: клинико-МРТ-исследование Неврологический журнал 1999; 2: 23-34

10. Камчатнов П.Р., Чугунов А.В.,.Воловец С.А, Умарова Х.Я. Нарушения мозгового кровообращения. Комбинированная терапия дисциркуляторной энцефалопатии.СотШит medicum 2005; 8:18-23.

11. Кольцова Е.А. Роль структурных особенностей генов ренин-ангиотензиновой системы, эндотелиальной яосинтазы и р53 в развитии основных факторов риска цереброваскулярной патологии и в формировании инфаркта мозга. Дис. Канд мед наук. М, 2002.

12. Милосердова О.В. Анализ полиморфных вариантов кандидатных генов полиметаболического синдрома и инсулин независимого сахарного диабета: Дис. Канд мед наук. М. 2001.

13. Новиков B.C. Программированная клеточная гибель С.П. Наука 1996; 2326,51-55.

14. Новожилова А.П., Плужников Н.Н., Новиков B.C. В кн. Программированная клеточная смерть (Под ред. В. С. Новикова.), Наука, 1996 Спб., с. 9-29.

15. Потапнев М.П. Апоптоз клеток иммунной системы и его регуляция цитокинами // Иммунология. 2002. №4. С. 237—243.

16. Скворцова В.И., Кольцова Е.А., Лимборская С.А., Сломинский П.А., Кондратьева Е.А. Полиморфизм гена ангиотензин-превращающего фермента у больных с ишемической болезнью мозга. Инсульт (приложение к Журн. Неврол и психиатр им С.С. Корсакова). 2001; 3:

17. Скворцова В.И., Лимборская С.А., Сломинский П.А., Губский Л.В., Кольцова Е.А., Шетова И.М., Шамалов Н.А., Тупицына Т.Н., И.А. Платонова. Генетические аспекты ишемического инсульта. Ж.Вестник РГМУ, 2003, № 4 (30), с. 78-84

18. Скворцова В.И. Механизмы повреждающего действия церебральной ишемии и новые терапевтические стратегии. Журн неврол и психиатр 2003; 9: 20-22.

19. Скворцова В.И. Реперфузионная терапия ишемического инсульта. Consilium medicum 2004; 6(8): 610-614.

20. Скулачев В.П. Кислород и явления запрограммированной смерти. Москва 2000г.

21. Скулачев В.П. Феноптоз: запрограммированная смерть организма. Биохимия 1999; 64 (12): 1679-1688.

22. Степанов Ю.М., Фильченков А.А., Кушлинский Н.Е. Система Fas/Fas-лиганд. Киев: ДИА, 2000.

23. Скворцова В.И. Участие апоптоза в формировании инфаркта мозга. Инсульт. Приложение Журн неврол и психиатр 2001; (2): 12-18.

24. Скоромец А.А., Ковальчук В.В. Эпидемиология сосудистых заболеваний головного мозга. Мир медицины 1998; № 9-10

25. Фейгин B.JL. Алгоритмы диагностики и лечения больных с цереброваскулярными заболеваниями (дифференциально-диагностические таблицы и схемы). Методическое пособие для врачей. Новосибирск. 1999; 75.

26. Флеров М.А. Биохимические особенности и взаимодействие нейронов и нейрогилии. В кн: Нейрохимия (Ашмарин И.П., Стукалов П.В. ред) М. 1996; 193-200.

27. Шетова И.М. Роль полиморфных вариантов генов-регуляторов апоптоза: Поли (АДФ-рибозы) полимеразы-1, апоптоз-индуцирующего фактора и р-53 в патогенезе ишемического инсульта. Дис. Канд мед наук. М,2004.

28. Шмидт Е.В. и др. Сосудистые заболевания нервной системы. М: Медицина 1975: 662.

29. Янковский Н.К., Боринская С.А. Геном человека: научные и практические достижения и перспективы: Аналитический обзор // Вестник РФФИ. 2003. № 2

30. Ярилин А.А. Апоптоз и его место в иммунных процессах // Иммунология. 1996. №6. С. 10—23.

31. Ahmad M., Shi Y., Oncogene 2000 19: 3363-3371

32. Arends M.J., Wyllie A.H. Apoptosis. Mechanism and role in pathology // Int. Rev. Exp. Pathol. 1991. V. 32. P. 223—254.

33. Behrmann I., Walczak H., Krammer P.H. Structure of the Human APO-1 Gene // Eur. J. Immunol. 1994. V. 24. № 12. P. 3057—3062.

34. Belayev L., Liu Y., Zhao W., Busto R., Ginsberg M.D. Human albumin therapy of acute ischemic stroke: marked neuroprotective efficacy at moderate doses and with a broad therapeutic window. Stroke. 2001; 32: 553—560.

35. Belayev L., Pinard E., Nallet H., Seylaz J., Liu Y., Riyamongkol P., Zhao W., Busto R., Ginsberg M.D. Albumin therapy of transient focal cerebral ischemia: in vivo analysis of dynamic microvascular responses. Stroke. 2002; 33: 1077—1084.

36. Boise L.H. and Thompson C.B., ibid. 274, 67 (1996); Osborne B.A. Curr. Opin. Immunol. 8, 245 (1996); Winoto A., ibid. 9, 365 (1997).

37. Boysen G., Nyboe J., et al. Stroke incidence and risk factors for stroke in Copenhagen, Denmark. Stroke 1988; 19: 1345-1353.

38. Brass L., Isaacsohn J. Merikangas K., Robinette C. A Study of Twins and Stroke. Stroke 1992; 23: 221-223.

39. Bulfon-Paus S., Ruckert R., Krause H., Transplantation 2000; 69: 1386-1391

40. Cai H. The Glu-298-Asp (894G-T) mutation at exon 7 of the endothelial nitric oxide synthase gene and coronary artery disease J Mol Med 1999; 77: 6: 511-514.

41. Chopp M, Li Y. Apoptosis and focal cerebral ischaemia. Acta Neurosurgery 1996; 66: 21-26.

42. Chopp M., Li Y., Zhang Z., Freytag S. p53 expression in brain after middle cerebral artery occlusion in the rat. Biochem Biophys Res Commun 1992; 182(3): 1201-1207.

43. Cohen, J. J. Immunol. Today, 1993 14, 126-130.

44. Corral J, Vicente V et al. Genetic polymorphisms of factor VII are not associated with arterial thrombosis. Blood Coagul Fibrinolysis 1998; 9: 267-272.

45. Crumrine R.C., Thomas AL, Morgan PF. Attenuation of р5Ъ expression protects against focal ischemic damage in transgenic mice. J Cereb Blood Flow Metab 1994; 14: 887-891.

46. Dichgans M, Monogenic causes of ischemic stroke, In: Markus HS, ed, Stroke Genetics Oxford, UK: Blackwell Science; 2003:127—163,

47. Elbaz A., Cambien F., Amarenco P., on behalf of the GENIC Investigators. Plasminogen activator inhibitor genotype and brain infarction. Circulation. 2001; 103: E13—E14.

48. Eldahan B.A., Faden A. Caspase pathways neuronal apoptosis, and CNS injury. J. Neurotrauma 2000; 17(10): 811-829.

49. Emery E., Aldana P., Bunge M.B., Puckett W., Srinivasan A., Keane R.W., Bethea J., Levi A.D. (1998) J. Neurosurg. 89, 911-920.

50. Emgard M., Petersen a., Cell Trasplant. 2000; 9: 179-195

51. Evan G., Liltlewood T. A matter of life and cell death. Science. 1998. V.281 P. 1317-1322

52. Ferrer I, Friguls B, Dalfo E et al. Caspase-dependent and caspase-independent signalling of apoptosis in the penumbra following middle cerebral artery occlusion in the adult rat. Neuropathol Appl Neurobiol. 2003; 29(5): 472-81.

53. Flossman E„ Schulz U,G,R„ Rothwell P,M, Systematic review of methods and results of studies of the genetic epidemiology of ischemic stroke, Stroke 2004;35:212-227,

54. Gillardon F., Klimaschewski L., Wickert H., Krajewski S., Reed J.C., Zimmermann M. (1996) Brain Res. 739, 244-250.

55. Green F., Humphries S. et al. A common genetic polymorphism associated with lower coagulation factor VII levels in healthy individuals. Arterioscler Thromb 1991; 11: 540-546.

56. Gregan SP et al. Apoptosis-inducing factor is involved in the regulation of caspase-independent neuronal cell death Cell Biol 2002; 158(3):507-17.

57. Gretarsdottir S., Thorleifsson G., Reynisdottir S.T., Manolescu A., Jonsdottir S., The gene encoding phosphodiesterase 4D confers risk of ischemic stroke. Nat Genet 2003; 35:131—138.

58. Gruber H.E., Norton H.J., Hanley E.N. Spine 2000; 25: 2153-21573.

59. Hansson O., Castilho R.F., Brundin P., Karlsson J. Exp. Neuron. 2000; 164: 102-111

60. Hassan A„ Markus H,S, Genetics and ischaemic stroke, Brain 2000; 123:1784—1812,

61. Hassan A„ Sham P,C„ Markus H,S, Planning genetic studies in human stroke, Sample size estimates based on family history data, Neurology 2002;58:1483— 1488,

62. Harrison D., Davis R., Bond В., Campbell C., James M., Parsons A.A. Caspase mRNA expression in a rat model of local cerebral ischemia. Brain res Mol Brain Res 2001; 89(1-2): 31-32

63. Hengartner M., Ellis R., Horvitz H. C.elegans gene CED-9 protects cells from programmed cell death. Nature 1992; 356: 494-499.

64. Hindorff L.A., Schwartz S.M., Siscovick D.S., Psaty B.M., Longstreth W.T., Reiner A.P. The association of PAI-1 promoter 4G/5G insertion/deletion polymorphism with myocardial infarction and stroke in young women. J Cardiovasc Risk. 2002; 9: 131—137.

65. Joseph P. Broderick. William M. Feinberg Lecture: Stroke Therapy in the Year 2025. Stroke 2004; 35: 1: 205—211.

66. Joutel A., Vahedi K., Corpechot C., Troesch A., Chabriat H., Vayssiere C., Cruaud C., Maciazek J., Weissenbach J., Bousser M.G., et al. Strong clustering andstereotyped nature of Notch3 mutations in CADASIL patients. Lancet. 1997; 350: 1511—1515.

67. Kelly P.J., Rosand J., Kistler J.P., Shih V.E., Silveira S., Plomaritoglou A., Furie K.L. Homocysteine, MTHFR 677C->T polymorphism, and risk of ischemic stroke: results of a meta-analysis, Neurology, 2002;59:529—536,

68. Kim R.J., Becker R.C. Association between factor V Leiden, prothrombin G20210A, and methylenetetrahydrofolate redictase C677T mutations and events of the arterial circulatory system: a meta-analysis of published studies, Am Heart J 2003;146:948-957,

69. Kohler H.P., Grant P.J. Mechanisms of disease: plasminogen-activator inhibitor type 1 and coronary artery disease. N Engl J Med. 2000; 342: 1792— 1801.

70. Kokubo Y., Chowdhury A.H., Date C., Yokoyama Т., Sobue H., Tanaka H, Age-dependent association of apolipoprotein E genotypes with stroke subtypes in a Japanese rural population, Stroke, 2000;31:1299—1306,

71. Kerr, J.F.R., Wyllie, A.H., and Currie, A. R. Brit. J. Cancer, 1972 26, 239-257.

72. Kidwell C.S., Alger J.R., Saver J.L. Evolving paradigms in neuroimaging of the ischemic penumbra/ stroke 2004; 35: Suppl I: 11: 2662-2665.

73. Lei S., Pan Z., et al. Effect of nitric oxide production on the redox modulatory site of the NMDA receptor-channel complex. Neuron 1992; 8: 1087-1099.

74. Leist, M., Single, В., Castoldi, A.F., Kuhnle, S., and Nicotera, P. J. Exp. Med., 185, 1997; 1481-1486.

75. Leker RR, Aharonowiz M, Greig NH et al. The role of p53-induced apoptosis in cerebral ischemia: effects of the p53 inhibitor pifithrin alpha. Exp Neurol. 2004; 187(2): 478-86.

76. Li G.L., Brodin G., Farooque M., Funa K., Holtz A., Wang W.L., Olsson Y. (1996) J. Neuropathol. Exp. Neurol. 55, 280-289.

77. Loihl A. et al. Expression of nitric oxide synthase (NOS)-2following permanent focal ischemia and the role of nitric oxide in infarct generation in male, female and NOS-2 gene deficient mice Brain Res 1999; 830: 1: 155-164.

78. Lou J., Lenke L.G., Ludwig F.J., O'Brien M.F. (1998) Spinal Cord 10, 683690.

79. Margaglione M., Grandone E., Cappucci G., Colaizzo D., Giuliani N., Vecchione G., et al. An alternative method for PAI-1 promoter polymorphism (4G/5G) typing. Thromb Haemost. 1997; 77: 605—606.

80. McCarron M., Nicoll J. High frequency of apolipoprotein E e2 allele is specific for patients with cerebral amyloid angiopathy-related haemorrhage. Neurosci Lett. 1998; 247: 45—48.

81. Mies G., Ishimaru S., Xie Y., Seo K., Hossmann K.A. Ischemic thresholds of cerebral protein synthesis and energy state following middle cerebral artery occlusion in rat. J Cereb Blood Flow Metab. 1991;11:753—761.

82. Miyashita T, Krajewski S, Krajewska M, Wang HG, Lin HK, Liebermann DA, Hoffman B, Reed JC. Tumor suppressorр5Ъ is a regulation of bcl-2 and bax gene expression in vitro and vivo. Oncogene 1994; 9:1799-1805.

83. Nagata, S. (1997). Apoptosis by death factor. Cell 88, 355-365

84. Nash, P.B., Purner, M.B., Leon, R.P., Clarke, P., Duke, R.C., and Curiel, T.J. J. Immunol., 1998160, 1824-1830.

85. Newton K., Hams A.W., Bath M.L., Smith K.G.C., Strasser A., EMBO J. 17, 706 (1998); Zornig M., Hueber A.O., Evan G., Curr. Biol. 8, 467 (1998).

86. Nicholson D.W., Thornberry N.A. // Trends Biochem. Sci. 1997. V. 22. P. 299306.

87. Nicotera, P. and Leist, M. Cell Death Differ., 1997; 4, 435-442.

88. Oehm A., Behrmann I., Falk W. et al. Purification and Molecular Cloning of the APO-1 Cell Surface Antigen, a Member of the Tumor Necrosis Factor/Nerve Growth Factor Receptor Superfamily // J. Biol. Chem. 1992. V. 267. №15. P. 10709—10715.

89. Okuda Y., Sakoda S., Fujimura H., Nagata S., Biochem. Biophys. Res. Commun. 2000; 275, 164-168

90. Oliver, F.J., Menissier-de Murcia, J., and de Murcia, G. Am. J. Hum. Genet., 1999 64, 1282-1288.

91. Onda H., Kasuya H., Yoneyama Т., Takakura K., Hori Т., Takeda J., Genomewide-linkage and haplotype-association studies map intracranial aneurysm to chromosome 7ql 1. Am J Hum Genet. 2001; 69: 804—819.

92. Pezzini A., Assanelli D., Maalikjy Akkawi N„ Albertini A., Padovani A, Synergistic effect of apolipoprotein E polymorphisms and cigarette smoking on risk of ischemic stroke in young adults, Stroke, 2004;35:438—444

93. Rabuffetti M., Sciorati C., Tarozzo G., Clementi E., J. neurosci. 2000; 20: 4398-4404

94. Reed J.C. et al. BCL-2 family proteins and mitochondria. Biochim Biophys Acta 1998; 1366: 127-137.

95. Robertson G.S., Crocker S.J., Nicholson D.W., Schulz J.B. (2000) Brain Pathol. 10, 283-292.

96. Rotonda J. et al., Nature Struct. Biol. 3, 619 (1996).

97. Rubattu S„ Volpe M„ Kreutz R„ Ganten U„ Ganten D„ Chromosomal mapping of quantitative trait loci contributing to stroke in a rat model of complex human disease, Nat Genet 1996; 13:429—434

98. Saito N., Yamamoto Т., Watanabe Т., Abe Y., Kumagai T. (2000) J. Neurotrauma 17, 173-182.

99. Slowik A T. Dziedzic, W. Turaj, J. Pera, L. Glodzik-Sobanska, P. Szermer. A2 allele of GpIIIa gene is a risk factor for stroke caused by large-vessel disease in males. Stroke. 2004;35:7:1589—159399.

100. Takahashi A. (1999) Int. J. Hematol. 70, 226-232.

101. Tartaglia L.A., Goeddel D.V. Two TNF receptors // Immunol. Today. 1992. V. 13. №5. P. 151—153.

102. Thompson, C.B. Science, 1995267, 1456-1462.

103. Tomimoto H., I. Akiguchi, R. Ohtani, H. Yagi, M. Kanda, H. Shibasaki, and Y. Yamamoto The Coagulation-Fibrinolysis System in Patients With1.ukoaraiosis and Binswanger Disease Arch Neurol, October 1, 2001; 58(10): 1620- 1625.

104. Tsujimoto Y. Cell Death Differ., 1997; 4, 429-434

105. Van den Hombergh C.E., Schouten E.G., van Staveren W.A., van Amelsvoort L.G., Kok F.J. Physical activities of noninstitutionalized Dutch elderly and characteristics of inactive elderly. Med Sci Sports Exerc. 1995; 27: 334-—339.

106. Vaux, D. L. and Korsmeyer, S. J. 1999 Cell, 96, 245-254.

107. Vomberg P., Breederveld C. et al. Cerebral thromboembolism due to antithrombin III deficiency in two children. Neuropediatrics 1987; 18: 42-44.

108. Yasuda T , Takeshita H., Iida R., Nakajima Т., Hosomi O., Nakashima Y, Kishi K. (1998) J. Biol. Chem. 273, 2610-2616.

109. Yepes M., Wong M.K., Coleman T.A., Smith E. Blood 2000; 96: 569-576

110. Yuan J, Horvitz HR. A first insight into the molecular mechanisms of apoptosis. Cell. 2004. SI 16. S53-S56.

111. Yuan J., Shaham S., Ledoux S., Ellis H.M., Horvitz H.R., Cell 75, 641 (1993). Thornberry N.A. et al., Nature 356, 768 (1992).

112. Yong C., Arnold P.M., Zoubine M.N., Citron B.A., Watanabe I., Berman N.E., Festoff B.W.(1998). J. Neurotrauma 15, 459-472.

113. Walczak H., Miller R.E., Ariail K. Nat.Med. 1999, 5: 157-163

114. Weinstein P.R., S. Hong, F.R. Sharp. Molecular identification of the ischemic penumbra. Stroke. 2004;35:Suppl. 1:11:2666—2670

115. Woo D., Sauerbeck L.R., Kissela B.M., Khoury J.C., Genetic and environmental risk factors for intracerebral hemorrhage: preliminary results of a population-based study. Stroke. 2002; 33: 1190—1196;comment 1196.

116. Zucchelli P.C., Pavlica Pietro, Zuccala Alessandro, Losinno Francesco, Barozzi Libera Hypertension-induced renal failure 2001; 14 (1)

117. Zunger B. et al. A novel protein containing a death that interacts with Fas/APO-1 in yeast and causes cell death. Cell 1995; 81: 513-523.

118. Zimanzoni O., Prezeau L., Marin P. et al. Neuron 1992; 8: 653-662.

119. Zhang H., Rosenbaum DM, Gupta G, D'Amore J, Singh M, Weidenheim K, Kessler JA. Fas (CD95/APO-1) plays a role in the pathophysiology of focal cerebral ischemia. JNeurosci Res. 2000 Sep 15;61(6):686-92.