Роль лейкемияингибирующего фактора в регуляции роста эмбриональных стволовых клеток и зародышей мыши в культуре тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.02, кандидат биологических наук Федорова, Виктория Викторовна

• Федорова, Виктория Викторовна
• кандидат биологических наук
• 2003

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Федорова, Виктория Викторовна

ВВЕДЕНИЕ.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Эмбриональные стволовые клетки (ЭСК) млекопитающих.

1.2. Основные характеристики ЭСК.

1.2.1. Маркеры недифференцированного состояния ЭСК.

1.2.2. Клеточный цикл ЭСК.

1.2.3. Инактивация Х-хромосомы в ЭСК.

1.3. Генетические изменение ЭСК при продолжительном культивировании.

1.4. Цитокин LIF как необходимый компонент для культивирования ЭСК.

1.5. Структура цитокина LIF.

1.6. Механизм действия LIF на ЭСК.

1.6.1. Альтернативный механизм действия LIF на ЭСК.

1.7. Действие других цитокинов семейства IL-6.

1.8. Биологическая роль LIF in vivo.

1.8.1. Роль LIF, LIF -R и gpl30 в эмбриогенезе млекопитающих.

1.9. Актуальность исследования механизма поддержания тотипотентных свойств ЭСК in vitro.

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

2.1. Биологический материал и клеточные культуры.

2.1.1. Культивирование ЭСК.

2.1.2. Приготовление фидера из первичных эмбриональных фибробластов мыши.

2.1.2.1 Выделение ПЭФ.

2.1.2.2. Культивирование ПЭФ и получение кондиционированной среды.

2.1.2.3. Обработка митомицином С.

2.1.3. Криоконсервация клеточных культур.

2.1.3.1. Криоконсервация и хранение ЭСК.

2.1.3.2. Криоконсервирование и хранение ПЭФ.

2.2. Оценка тотипотентного состояния ЭСК.

2.2.1. Морфологический критерий.

2.2.2. Цитохимический тест на выявление специфической активности эндогенной щелочной фосфатазы.

2.2.3. Сохранение ЭСК способности формировать эмбриоидные тела.

2.3. Элеюрофизиологические исследования на БЛМ.

2.3.1. Используемые препараты LIF.

2.3.2. Измерение разности поверхностных потенциалов на мембране.

2.3.3. Измерение проводимости БЛМ по постоянному току.

2.4. Анализ цитогенетических изменений при культивировании

2.4.1. Выбор клеточных культур.

2.4.2. Приготовление цитогенетических препаратов.

2.5. Выявление действие LIF на развитие доимплантационных зародышей мыши in vitro.

2.5.1. Выделение доимплантационных зародышей.

2.5.2. Культивирование и оценка жизнеспособности зародышей.

2.6. Оценка экспрессии эндогенного гена lif.

2.6.1. Трансформация ЭСК геном lif.

2.6.2. Отбор образцов для исследования.

2.6.3. Выделение РНК кислотным фенольным методом.

2.6.4. Проведение RT-PCR.

2.6.4.1. Подбор праймеров.

2.6.4.2. Состав и режим RT-PCR.

2.6.4.3. Оценка продуктов PCR.

2.7. Статистическая обработка результатов.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ.

3.1. Особенности развития и характеристики разных линий ЭСК мыши в зависимости от условий культивирования.

3.2. Влияние трансформации геном ///"на сохранение тотипотентного состояния ЭСК.

3.3. Анализ кариотипических особенностей ЭСК мыши в связи с дифференцировкой и экспрессией гена lif.

3.4. Влияние LIF на развитие ранних зародышей мыши in vitro.

3.5. Действие LIF на БЛМ.

4. ОБСУЖДЕНИЕ.

5. ВЫВОДЫ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Роль лейкемияингибирующего фактора в регуляции роста эмбриональных стволовых клеток и зародышей мыши в культуре»

Эмбриональные стволовые клетки (ЭСК) являются важнейшим объектом, биотехнологических и молекулярно-генетических исследований благодаря своей способности воспроизводить эмбриогенез как in vitro, так и in vivo (Bradley et al., 1984; Doetschman et al., 1985). После инъекции в бластоцислу ЭСК участвуют в формировании органов и тканей химерного зародыша (Martin, 1981). Это уникальное свойство обусловлено тотипотентн остью ЭСК и поддерживается в культуре при условии добавления в среду лейкемияингибирующего фактора (цитокина LIF). Действие LIF направлено, с одной стороны, на поддержание активной пролиферации стволовых клеток, с другой, - на подавление спонтанной цитодифференцировки.

LIF участвует в передаче сигнала через рецепторные пути, необходимыми компонентами которых являются LIF-рецептор и трансмембранный белок gpl30 (Gearing et al., 1992; Yoshida, 1996; Taga, 1997). Известны Ras-зависимый путь LIF-сигнализации, активирующий ядерный фактор транскрипции при участии мембран-связанного G-подобного Ras-белка, а также Ras-независимый путь, включающий цитоплазматический переносчик сигнала и активатор транскрипции (Signal Transducer and Activator of Transcription-3) STAT-3 (Niwa et al., 1998; Raz et al., 1999; Bromberg, 2001). Для перечисленных транскрипционных факторов еще не обнаружены специфические гены-мишени, продукты которых участвуют в поддержании тотипотентных свойств и недифференцированного фенотипа стволовых клеток в условиях культуры (Oka et al., 2002). Кроме того, мутантные линии ЭСК с нокаутами по генам ключевых компонентов рецепторных путей передачи LIF-сигнала (/;/-/-, lifr-/-, gpJ30-/~ и stat3-/~) обладают эмбриональными свойствами и способны к цитодифференцировкам, как и стволовые клетки исходных линий (Takeda et al., 1997; Dani et al., 1998).

Таким образом, известные пути LTF-регуляции с участием рецепторных комплексов не являются единственными и достаточными для объяснения механизмов поддержания тотипотентного состояния стволовых клеток при культивировании in vitro. Для решения широкого круга современных биотехнологических и медицинских задач на основе использования методов трансгеноза и заместительной терапии беспорное преимущество перед любыми другими клеточными системами имеют тотипотентные ЭСК. Поэтому проблема сохранения и поддержания этих уникальных клеток в культуре, особенно в течение длительного периода, относится к числу наиболее значимых. В связи с этим основное внимание в данном исследовании было уделено изучению особенностей развития и культивирования ЭСК мыши, а также ранних зародышей, производными которых являются стволовые клетки.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Заключение диссертации по теме «Биофизика», Федорова, Виктория Викторовна

ВЫВОДЫ

1. Эндогенный цитокин LTF, продуцируемый LIF-трансформированными ЭСК мыши, участвует в сохранении и поддержании тотипотентного состояния клеток в ходе их культивирования, наравне с экзогенным рекомбинантным цитокином. Трансформированные ЭСК формируют типичные для стволовых клеток колонии с высокой активностью эндогеной щелочной фосфатазы даже при условии отсутствия фидера и экзогенного LIF в среде культивирования.

2. Экспрессия гена lif в тотипотентных стволовых клетках стабилизирует генетический аппарат и делает популяцию в целом более устойчивой к внешним воздействиям в основном за счет снижения уровня хромосомных перестроек.

3. Для различных популяций ЭСК мыши, в том числе и для генетически трансформированных клеток, с увеличением продолжительности культивирования характерным является возрастание уровня анеуплоидии по типу 2п±1.

4. Под влиянием цитокина LIF (эндо- и/или экзогенного) происходит селекция и отбор клеточных клонов с увеличенной копийностью хромосом 8 и 19, в которых сосредоточены гены факторов транскрипции STAT3 и Jak-киназ, участвующих в активации пути передачи LIF-сигнала.

5. Основная функция LIF в раннем эмбриогенезе заключается в формировании полноценной бластоцисты с функционально активным трофобластом, что важно для получения эмбриональных клеток de novo, а также для последующей имплантации зародышей в матку.

6. Одним из аспектов регуляторного действия LIF является усиление адгезивных свойств зародышей на стадии бластоцисты. В этом случае LIF является фактором, регулирующим межклеточные взаимодействия бластоцисты с эндометрием матки.

7. LIF действует на стволовые клетки не только через соответствующий комплекс LIF-рецептора и трансмембранного белка gp 130, но и как поверхностно активное вещество путем взаимодействия с липидным матриксом мембраны, что может служить одним из аспектов поддержания тотипотентного состояния ЭСК млекопитающих.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Федорова, Виктория Викторовна, 2003 год

1. Березовская О.П., Межевикина Л.М., Вепринцев Б.Н. Метод культивирования ранних эмбрионов линейных мышей // Онтогенез. 1986. т. 17. № 5. С.553-555.

2. Васильева С.Г., Прелле К., Мюллер 3. и др. Получение и длительное культивирование эмбриональных стволовых клеток кролика. Онтогенез, 1998, т. 29. N 5. с. 347-353.

3. Гланц С. Медико-биологическая статистика. М.: Практика, 1998.464 с.

4. Дыбан А.П. Раннее развитие млекопитающих. // Наука. Ленинград. 1988. С.34-49.

5. Лойд 3., Госсрау 3., Шиблер Т. Гистохимия ферментов. Лабораторные методы. М.: Мир, 1982. с. 64-67.

6. Мамаева С.Е. Хромосомный анализ культивируемых клеток. В сб.: Методы культивирования клеток. Ленинград: Наука. 1988. с. 78-98.

7. Миталипов Ш.М., Миталипова М.М., Иванов В.И. Влияние длительности культивирования на плюрипотентность эмбриональних стволовых (ES) клеток мыши in vitro и in vivo // Онтогенез. 1994. т. 25. с. 19-27.

8. Миталипова М.М. Факторы, влияющие на развитие эмбриональных стволовых клеток крупного рогатого скота и мыши в системе in vitro и in vivo. Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук. ВИЖ. 1995. 127 с.

9. Полянская Г.Г. Закономерности кариотипической изменчивости в клеточных культурах при длительном культивировании в разных условиях. Успехи современной биологии, 2000, т. 120, № 6, с. 529-539.

10. Савченкова И.П., Фляйшманн З.М., Булла Й. и др. Использование плюрипотентных эмбриональных стволовых клеток мыши для получения химерных животных // Цитология. 1996а. т. 38. с. 1118-1123.

11. Савченкова И.П., Зиновьева Н.А., Буллай Й. и др. Эмбриональные стволовые клетки, их генетическое изменение путем гомологической рекомбинации и использование в получении трансгенных животных // Успехи соврем.биологии. 1996b. т. 116. с. 78-91.

12. Савченкова И. П. Эмбриональные стволовые клетки в биологии: настоящее и будущее. РАСХН: Дубровицы. 1999. 93 стр.

13. Agliano A.M., Santangelo С., Silvestri I. et al. On chromosomal instability: what is the karyotype of your 32D C13 cell line // Blood. 2000. v. 95. N 11. P. 3636-3637

14. Auernhammer C. J., Melmed S. Leukemia-inhibitory factor neuroimmune modulator ofendocrine function // Endocrine reviews. 2000. v. 21. pp. 313345.

15. Baumann H., Wong G.G. Hepatocyte-stimulating factor III shares structural and functional identity with leukemia- inhibitory factor // J.Immunol. 1989. v. 143. pp. 1163-1167.

16. Bazan J.F. Structural design and molelular evolution of a cytokine receptor superfamily//Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1990. v. 87. pp. 6934-6938.

17. Bernardino-Sgherri J., Chicheportiche A., Niveleau A. et al. Unusual chromosome cleavage dynamic in rodent neonatal germ cell // Chromosoma. 2002. v. 111. pp. 341-347.

18. Berridge M.J. Calcium signaling and cell proliferation // Bioessays. 1995. v. 17. pp. 491-500.

19. Billadeau D., Jelinek D.F., Shah N. et al. Introduction of an activated N-ras oncogene alters the growth characteristics of the interleukin 6-dependent myeloma cell line ANBL6 // Cancer Res. 1995. v. 55. pp. 3640-3646.

20. Bitard J., Daburon S., Duplomb L. et al. Mutations in the Immunoglobulin-like Domain of gpl90. The Leukemia Inhibitory Factor (LIF) Receptor. Increase or Decrease Its Affinity for LIF // J. Biol. Chem. 2003. v. 278. pp. 16253-16261.

21. Bhatt H., Brynet L.J., Stewart C.L. Uterin expression of leukemia inhibitory factor coincides with the onset of Blastocyst implantation // Proc.Natl. Acad.Sci. 1991. v. 88. pp. 11408-11412.

22. Boeuf H., Hauss C., De Graeve F. et al. Leukemia Inhibitory Factor-dependent Transcriptional Activation in Embryonic Stem Cells // J. Cell Biol. 1997. v. 138. pp. 1207-1217

23. Bradley A., Evans M. Kaufman M.N. Robertson E. Formation of germ-line chemaeras from embryo-derived teratocarcinoma cell lines // Nature. 1984. v. 309. pp. 255-256.

24. Bromberg F.B. Activation of STAT proteins and growth control // BioEssays. 2001. v. 23. pp. 161-169.

25. Brown D.G., Willington M.A., Findlay I. et al. Criteria that optimise the potential of murine embryonic stem cells for in vitro and in vivo developmental studies // In vitro Cell Dev. Biol. 1992. v. 28A. pp. 773-778.

26. Brulet P., Babinet C., Kemler. R. et al. Monoclonal antibodies against trophectoderm-specific markers during mouse blastocyst formation // Proc. Natl. Acad. Sci. 1980. v. 77. pp. 4113-4117.

27. Burdon Т., Stracey С., Chambers I. et al. Supression of SHP-2 and ERK signaling promotes self-renewal of mouse embryionic stem cells // Dev. Biol. 1999. v. 210. pp 30-43.

28. Cervantes R., Stringer J., Shao C. et al. Embryonic stem cells and somatic cells differ in mytation frequency and type // Proc. NAtl. Acad. Sci. USA. 2002. v. 99. pp. 3586-3590.

29. Cheema S., Richards L., Murphy M. et al. Leukemia inhibitory factor prevents the death of axotomised sensory neurons in the dorsal root ganglia of the neonatal rat//J. Neurosci. Res. 1994. v. 37. pp. 213-218.

30. Chomczynski P., Saachi N. Single-step method of RNA isolation by acid guanidinum thiocyanate phenol - chloroform extraction // Anal. Biochem. 1987. v. 162. pp. 156-159.

31. Conover J.C., Ip N.Y., Poyemirou W.T. et al. Ciliary neurotrophic factor maintains the pluripotentiality of embryonic stem cells // Development. 1993. v. 119. pp. 559-565.

32. Conquet F., Brulet P. Developmental expression of myeloid leukemia inhibitory factor gene in preimplantation Blastocyst and extraembryonic tissue of mouse embryos // Molecular and cellular biology. 1990. v. 10. pp. 38013805.

33. Conquet F., Peyrieras N., Tiret L. et al. Inhibited gastrulation in mouse embryos overexpressing the leukemia inhibitory factor // Proc.Natl. Acad. Sci. USA. 1992. v. 89. p. 8195-8199

34. Cowley S., Paterson H., Kemp P. et al. Activation of MAP kinase is necessary and sufficient for PC 12 differentiation and for transfdrmation of NIH 3T3 cells // Cell. 1994. v. 77. pp. 841-852.

35. Crolla J.A., Brown D., Whittingham D.G. Spontaneous induction of an homologous robertsonian translocation. Rb (11. 11) in a murine embryonic stem cell lines//Chromosoma. 1990. v. 55. pp. 107-110.

36. Dani Ch., Chambers I., Johnston S. et al. Paracrine induction of stem sell renewal by LIF-deficient cells: a new ES cell regulatory pathway // Dev. Biol. 1998. v. 203. pp. 149-162.

37. Davis S., Aldrich Т., Valenzuela D. et al. The receptor for ciliary neurotrophic factor// Science. 1991. v. 253. pp. 59-63.

38. Davis S., Aldrich Т.Н., Stahl N. et al. LIFRp and gpl30 as heterodimerizing signal transdusers of the tripartite CNTF receptor // Science. 1993. v. 260. pp. 1805-08.

39. Doetschman Т., Eistetter H., Katz M. et al. The in vitro development of blastocyst derived embryonic stem cell lins: formation of visceral yolk sac, blood islands and myocardium //J. Embryol. Exp. Morphol. 1985. v. 87. pp. 27-45.

40. Doetschman Т., Williams P., Maeda. M. Establishment of hamster blastocyst-derived embryonic stem (ES) cells. // Dev. Biol. 1988. v. 127. pp. 224-227

41. Endo T.A., Masuhara M., Yokouchi M. et al. A new protein containing an SH2 domain that inhibits Jak-kinases // Nature. 1997. v. 387. pp. 921-924.

42. Ernst M., Oates A. and Dunn A. R. Gpl30-mediated Signal Transduction in Embryonic Stem Cells Involves Activation of Jak and Ras/Mitogen-activated Protein Kinase Pathways // J. Biol. Chem. 1996. v. 271. pp. 30136-30143

43. Evans M.J., Kaufman M.H. Esteblishment in culture of pluripotental cells from mouse embryos // Nature. 1981. v. 292. pp. 154-158.

44. Fedorov L.M., Haegel-Kronenberger H., Hirchenhain J. A comparison of the germline potential of differently aged ES cell lines and their transfected descendans//Transgenic Res. 1997. v. 6. pp. 223-231.

45. Frost R., Nystrom G., Lang C. Regulation of IGF-I mRNA and signal transdusers apd activator of transcription-3 and -5 (Stat-3 and -5) by GH in C2C12 myoblasts//Endocrinol. 2002. v. 143. pp. 492-503.

46. Fukada Т., Hibi M., Yamanaka Y. et al. Two Signals Are Necessary for Cell Proliferation Induced by a Cytokine Receptor gpl30: Involvement of STAT3 in Anti-Apoptosis // Imminity. 1996. v. 5. pp. 449-460.

47. Fukuda M., Sato Т., Nakayama J. et al. Trophin and tastin, a novel cell adhesion molecule complex with potential involvement in embryo implantation // Genes Dev. 1995. v. 9. P. 1199-1210.

48. Gao S., McGarry M., Ferrier T. et al. Effect of cell confluence on production of cloned mice using an inbred embryonic stem cell line // Biol Reprod. 2003. v. 68. pp. 595-603

49. Gearing D.P., Gough N.M., King J.A. et al. Molecular cloning and expression of cDNA encoding a murine myeloid leukemia inhibitory factor (LIF) // EMBO J. 1987. v. 6. pp. 3995-4002.

50. Gearing D., Thut C., Vanderbos T. Leukemia inhibitory factor is structurally related to the IL-6 signal tranceducer. gp-130 // Science. 1991. v. 10. pp. 2839-48.

51. Gearing D., Comeau M., Friend D. et al. The IL-6 signal transduser. gpl30: an oncostatin M receptor and affinity converter for the LIF receptor // Science. 1992. v. 255. pp. 1434 -7.

52. Levenberg S., Golub J.S., Amit M. et al. Endothelial cells derived from human embryonic stem cells hulamit // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2002. v. 99 pp. 4391-4396.

53. Gough N.M., Gearing D.P., King J.A. et al. Molecular cloning and expression of human homologue of murine gene encoding myeloid leukemia-inhibitory factor//Proc. Natl. Acad. Sci USA. 1988. v. 85. pp. 2623-2627.

54. Gough N.M., Willson T.A., Stahl J. et al. Molecular biology of the leukemia inhibitory factor gene // Ciba Found Symp. 1992. v. 167. pp. 24^46.

55. Haines В., Voyle R.B., Pelton T. et al. Complex conserved organization of the mammalian LIF gene: a novel mechanism for regulated expression ofintracellular and extracellular cytokines // J. Immunol. 1999. v. 162. pp. 4637-4646.

56. Haines В., Voyle R.B. and Rathjen P. Intracellular and Extracellular Leukemia Inhibitory Factor Proteins Have Different Cellular Activities That Are Mediated by Distinct Protein Motifs // Mol. Biol. Cell. 2000. v. 11. pp. 1369-1383.

57. Heinrich P., Behrmann I., Muller-Newen G. et al. Interleukin-6-type cytokine signalling through the gpl30/Jak/STAT pathway // Biochem. J. 1998. v. 334. pp. 297-314.

58. Hibi M., Murakami M., Saito M. et al. Molecular cloning and expression of an IL-6 signal transduser. gpl30. // Cell. 1990. v. 63. pp. 1149-57.

59. Hilton D. LIF: lots of interesting functions // Trends Biochem.Sci. 1992. v. 17. pp. 72-76.

60. Hinds M.G., Maurer Т., Zhang J.G. et al. Solution structure of leukemia inhibitory factor//J. Biol. Chem. 1998. v. 273. pp. 13738.

61. Hirano, Т., Nakajima K. and Hibi, M. Signaling mechanisms through gpl30: a model of the cytokine system // Cytokine Growth Factor Rev. 1997. v. 8. pp. 241-252.

62. Hon Y., Rulifson I.C., Tsai B.C. et al. Growth inhibitors promote differentiation of insulin-producing tissue from embryonic stem cells // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2002. v. 99 pp. 16105-16110.

63. Tshimi Y., Abe E., Jin C.H. et al. Leukemia inhibitory factor/differentiation-stimulating factor (LIF/D-factor): regulation of its production and possible roles in bone metabolism // J. Cell Physiol. 1992. v. 152. pp. 71-78.

64. Kahan В. W., Jacobson L. M., Hullett D. A. et al. Pancreatic Precursors and Differentiated Islet Cell Types From Murine Embryonic Stem Cells An In Vitro Model to Study Islet Differentiation // Diabetes. 2003. v. 52. pp. 20162024.

65. Kawase E., Suemori H., Takahashi N. et al. Strain difference in establishment of mouse embryonic stem (ES) cell lines // Int. J. Dev. Biol. 1994. v. 38. pp. 385-390.

66. Kemler R. P., Brulet M.-T., Schnebelen J. et al. Reactivity of monoclonal antibodies againstintermediate filament proteins during embryonic development Hi. Embryol. Exp. Morphol. 1981. v. 64. pp. 45-60.

67. Kishimoto Т., Taga Т., Akira S. Cytokine signal transduction // Cell. 1994. v. 76. pp. 253-262.

68. Ко M.S., Kitchen J.R., Wang X. et al. Lage-scale cDNA analysis raveals phased gene expression patterns during preimplantation mouse development //Development. 2000. v. 127. pp. 1737-1749.

69. Komiyama Т., Ray C., Pickup D. et al. Inhibition of interleukin-ip converting enzyme by the cowpox virus serin CrmI // J. Biol. Chem. 1994. v. 268. pp. 19331-19337.

70. Kondoh G., Yamamoto Y., Yoshida K. et al. Easy assessment of ES cell clone potency for chimeric development and germ-line competency by an optimized aggregation metod // J. Biochem. Biophys. Methods. 1999. v. 39. pp. 137-142.

71. Layton M.J., Owczarek C.M., Metcalf D. et al. Conversion of the biological specificity of murine to human leukemia inhibitory factor by replacing 6 amino acid residues // J. Biol. Chem. 1994. v. 269. pp. 29891-29896.

72. Li M., Sendtner M., Smith A. Essential function of LIF receptor in motor neurons//Nature. 1995. v. 378. pp. 724-727.

73. Liu X., Wu H., Loring J. et al. Trisomy eight in ES cells is a common potential problem in gene targeting and interferes with germ line transmission //Dev. Dyn. 1997. v. 209. pp. 85-91

74. Longo L., Bygrave A., Grosveld F. et al. The chromosome make-up of mouse embryonic stem cells is predictive of somatic and germ cell chimerism // Transgenic Res. 1997. v. 6. pp. 321-328.

75. Martin G.R., Evans M.J. The formation of embryoid bodies in vitro by homogenous embryonal carcinoma cell cultures derived from isolated single cells. In'Tteratomas and Differentiation", 1975, Academic Press, New York, pp. 169-187.

76. Martin G.R. Isolation of a pluripotent cell line from early mouse embryos cultured in medium conditioned by teratocarcinoma stem cells // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1981. v. 78. pp. 7634-7638.

77. Matsuda Т., Nakamura Т., Nakao K. et al. STAT3 activation is sufficient to maintain and undifferentiated state of mouse embryonic stem cells // EMBO J. 1999. v. 18. pp. 4261-4269.

78. Matsui Y., Zsebo K., Hogan B. Derivation of pluripotent embryonic stem cells from murine primordial germ cells in culture // Cell. 1992. v.70. pp. 841847.

79. McBurney M.W., Strutt B.J. Genetic activity of X-chromosomes in pluripotent female teratocarcinoma cells and their diffefrentiated progeny // Cell. 1980. V. 21. pp. 357-364

80. Metcalf D., Waring P., Nicola N.A. Actions of leukaemia inhibitory factor on megakaryocyte and platelet formation // Ciba Found Symp. 1992 V. 167. pp. 174-187.

81. Metcalf D. The unsolved enigmas of leukemia inhibitory factor // Stem Cells. 2003. v. 21. pp. 5-14.

82. Mercola M., Stiles C.D. Growth factor superfamilies and mammalian embryogenesis// Dev. 1988. v. 102. pp. 451-460.

83. Min J.-Y., Yang Y., Converso K. L. et al. Transplantation of embryonic stem cells improves cardiac function of postinfarcted rats // J. Appl. Physiol. 2002. v. 92. pp. 288-296.

84. Mitalipov S.M., Mitalipova M.M., Ivanov V.I. The effect of duration of cculturing on the pluripotency of mouse embryonic stem (ES)cells in vitro and in vivo // Ontogenez. 1994. v. 25. pp. 19-27.

85. Monk M., Harper M.I. Sequential X-chromosome inactivation coupled with cellular differentiation in early mouse embryos // Nature. 1979. Vol.281, pp. 311-313.

86. Moreau J.-F., Donaldson D.D., Bennett F. et al. Leukaemia inhibitory factor is indentical to the myeloid growth factor human interleukin for DA cells // Nature. 1988. v. 336. pp. 690-692.

87. Mori M., Yamaguchi K., Abe K. Purification of a lipoprotein lipase-inhibiting protein produced by melanoma cell line associated with cancer cachexia // Biochem. Biophis. Res. Commun. 1989. v. 160. pp. 1085-1092.

88. Murphy M., Dutton R., Koblar S. et al. Cytokines which signal through the LIF receptor and their actions in the nervous system // Prog. Neurobiol. 1997. v. 52. pp. 355-378

89. Murray R., Lee F., Chi C.-P. The genes for leukemia inhibitory factor and interleukin 6 are expressed in murine blastocysts prior to the onset of hemopoiesis//Mol. Cell. Biol. 1990. v. 10. pp. 4953-4956.

90. Murray P., Edgar D. The regulation of embryonic stem cell differentiation by leukaemia inhibitory factor (LIF) // Differentiation. 2001. v. 68. pp. 227-234.

91. Nagy A., Gocza E., Diaz E. et al. Embryonic stem cells alone are able to support fetal development in the mouse // Development. 1990. v. 110. pp. 815-821.

92. Nagy A., Rossant J., Nagy R. et al. Derivation of completely cell culture-derived mice from early-passage embryonic stem cells // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1993. v. 90. pp. 8424-28.

93. Nakashima K., Taga T. gpl30 And the IL-6 family of cytokines: signaling mechanisms and thrombopoietic activities. Semin Hematol., 1998, v. 35, pp. 210-221.

94. Notariani E., Galli C., Laurie S. et al. Derivation of pluripotent embryonic cell lines from pig and sheep //J. Reprod. Fert. Suppl. 1991. V. 43. pp. 255260.

95. Nichols J., Evans E.P. Smith A.G. Establishment of germ-line-competent embryonic stem (ES) cell using differentation inhibiting activity. Development, 1990, v. 110, N 4, pp. 1341-1348

96. Nichols J., Chambers I., Smith A. Derivation of germline compitent embryonic stem cells with a combination of interleukin-6 and soluble mterleukin-6 receptor // Exp. Cell Res. 1994. v. 215. pp. 237-239

97. Nichols J., Davidson D., Taga T. et al. Complementary tissue-specific expression of LIF and LIF-receptor mRNA in early mouse embryogenesis // Mech. Dev. 1996. v. 57. pp. 123-131.

98. Nishimura F., Yoshikawa M., Kanda S. et al. Potential use of embryonic stem cells for the treatment of mouse parkinsonial model: improved behavior by

99. Paterno G.D., McBurney M.W. X-chromosome inactivationduring induced differentiation of a female mouse embryonal carcinoma cell line // J. Cell Sci. 1985. v. 75. pp. 149-163

100. Pease S., Braghetta P., Gearing D. et al. Isolation of embryonic stem (ES) cells in media supplemented with recombinant leukemia inhibitory factor (LIF)//Dev. Biol. 1990. v. 141. pp. 344-352.

101. Pesce M., Wang X., Wolgemuth D.J. et al. Differential expression of the Oct-4 transcription factor during mouse germ cell differentiation // Mech. Dev. 1998a. v. 71. pp. 89-98.

102. Pesce M., Gross M.K., Scholer H.R. In line with our ancestor: Oct-4 and the mammalian germ // Bioessays. 1998b. v. 20. pp. 722-732.

103. Rastan S., Robertson E. X-chromosome deletions in embryoderived (EK) cell lines associated with lack of X-chromosome inactivation // J. Embryol. Exp. Morphol. 1985. v. 90. pp. 379-388.

104. Rathjen P., Toth S., Wills A. et al. Differentiation inhibiting activity is produced in matrix-associated and diffusible forms that are generated by alternate promoter usage // Cell. 1990a. v. 62. pp. 1105-1114.

105. Rathjen P., Nichols J., Toth S. et al. Developmentally programmed induction of differentiation inhibiting activity and the control of stem cell population // Genes Dev. 1990b. v. 4. pp. 2308-18.

106. Raz R., Lee C.-K., Cannizzaro L.A. et al. Essential role of STAT3 for embryonic stem cell pluripotency // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1999. v. 96. pp. 2846-2851.

107. Resnik J.L., Bixler L., Cheng L. et al. Long-term proliferation of mouse primordial germ cells in cultire//Nature. 1992. v. 339. pp. 550-551.

108. Niwa H., Burdon Т., Chambers I. et al. Self-renewal of pluripotent embryonic stem cells is mediated via activation of STAT3 // Genes Dev. 1998. v. 12. pp. 2048-2060.

109. Niwa H., Miyazaki J., Smith A.G. Quantitative expression of Oct-3/4 defines differentiation, dedifferentiation or selfrenewal of ES cells // Nat. Genet. 2000. v. 24. pp. 372-376.

110. Niwa H. Molecular mechanism to maintain stem cell renewal of ES cells // Cell Struct Funct. 2001. v. 26. pp. 137-48.

111. Odorico J. S., Kaufman D. S., Thomson J. A. Multilineage differentiation from human embryonic stem cell lines //Stem cells. 2001. v. 19. pp. 193-204.

112. Oka M., Tagoki K., Russell T. et al. CD9 is associated with leukemia inhibitory factor-mediated maintenance of embryonic stem cells // Mol. Cell. Biol. 2002. v. 13. pp. 1274-1281.

113. Owczarek C.M., Layton M.J., Metcalf D. et al. Inter-species chimeras of leukaemia inhibitory factor define a major human receptor-binding determinant // EMBO J. 1993. v. 12. pp. 3487-3495.

114. Pages G., Lenormand P., L'Allemain G. et al. Mitogen-activated protein kinases p42mapk and p44mapk are required for fibroblast proliferation // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1993. v. 90. pp. 8319-8323.

115. Park J., Yoshida I., Taga T. et al. Trisomy 8 does not affect differentiative potential in a murine parthenogenetic embryonic stem cell lines // Jpn. J. Vet. Res. 1998. v. 46. pp. 29-35.

116. Pascoe W.S., Kemler R., Wood S.A. Genes and functions: trapping and targeting in embryonic stem cells // Biochemica et Biophysica Acta. 1992. v. 1114. pp. 209-221

117. Robb L., Dimitriadis E., Li R., Salamonsen L.A. Leukemia inhibitory factor and interleukin-11: cytokines with key roles in implantation // J. Reprod. Immunol. 2002. v. 57. pp. 129-41.

118. Robertson E.J., Bradley A., Kuehn M. et al. Germ-line transmission of the genes introduced into cultured pluripotential cells by retroviral vector. Nature, 1986, v. 323, pp.445-448.

119. Robertson E.J. Embryo-derived stem cell lines. In: Robertson. E.J. ed. "Teratocarcinoma and Embiyo-Derived Stem Cells: A Practical Approach". Oxford. UK: IRL Press. 1987. pp. 71-112.

120. Robertson M., Chambers I., Rathjen P. et al. Expression of alternative forms of differentiation inhibiting activity (DIA/LIF) during murine embryogenesis and in neonatal and adult tissues //Dev. Genet. 1993. v. 14. pp. 165-173.

121. Robinson R.C., Grey L.M., Staunton D. et al. The crystal structure and biological function of leukemia inhibitory factor: implications for receptor binding // Cell. 1994. v. 77. pp. 1101.

122. Rose T.M., Bruce A.G. Oncostatin M is a member of a cytikine family that includes lleukemia-inhibitoiy factor, granulocyte colony-stimulating factor and interleulin 6 // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1991. v. 88. pp. 8641-5.

123. Rose Т., Weiford D., Gunderson N. et al. Oncostatine M (OSM) inhibits the differentiation of pluripotent embryonic stem cells in vitro // Cytokine. 1994. v. 6. pp. 48-54.

124. Rosner J.L. Reflection of science as a product. Nature. 1990. v. 345. pp. 108.

125. Saito S., Strelchenko N., Niemann H. Bovine embryonicstem cell-like cell lines cultured over several passages // Roux's Arch. Dev. Biol. 1992. v. 201. pp. 134-141.

126. Savatier P., Lapillone H., van Grunsven L.A. et al. Withdrawal of differentiation inhibitory factor up-regulates D-type cyclin-dependent kinase inhibitors in mouse embryonic stem cells // Oncogene. 1996. v. 12. pp. 309322.

127. Scholer H.R., Ruppert S., Suzuki N. et al. New type of POU domain in germ line-specific protein Oct-4 // Nature. 1990. 344. 435-439.

128. Scholer H.R., Hatzopoulos A.K., Balling R. et al. A family of octamer specific proteins presents during mouse embryogenesis: Evidence for germ line-specific expression of an Oct factor // EMBO J. 1989. v. 8. pp. 2543-50.

129. Schultz G., Heyner S. Gene expression in pre-implantation mammalian embryo // Mutat. Res. 1992, v. 296. pp. 11-31.

130. Shamblott M.J., Axelman J., Wang S. et al. Derivation of pluripotent stem cells from cultured human primordial germ cells // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1998. v. 95. pp. 13726-13731.

131. Shao C., Deng L., Heneragui O. et al. Mitotic recombination produces majority of recessive fibroblast variants in heterozygous mice // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1999. v. 96. pp. 9230-9235.

132. Smith A.C., Heath J.K., Donaldson D.D. et al. Inhibition of pluripotental embryonic stem cell differentation by purified polipeptides. Nature, 1988, v. 336, pp. 688-690.

133. Smith A., Nichols J., Robertson M. et al. Differentiation inhibiting activity (DIA/LIF) and mouse development // Dev Biol. 1992. v. 151. pp. 339-351.

134. Smith A.G. Embryonic stem cells. Marshak D.R. Gardner D.K. Gottlieb D. eds. (Cold Spring Harbor. New York: Cold Spring Harbor Laboratory Press.) 2001a. pp. 205-230.

135. Smith A.G. Embryo-derived stem cells: Of Mice and Men. // Ann. Rev. Cell. Dev. Biol. 2001b. v. 17. pp. 435-462

136. Smith A.G., Hooper M.L. Buffalo rat liver cells produce a diffusible activity which inhibits the differentiation of murine embryonal carcinoma and embryonic stem cells // Dev. Biol. 1987. v. 121. pp. 1-9.

137. Solter D. Dolly is a clone and no longer alone // Nature. 1998. v. 394. pp. 315-316.

138. Solter D., Knowles B.B. Monoclonal body defining a stage-specific mouse embryonic antigen (SSEA-1) // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1978. v. 75. pp. 5565-69.

139. Soria В., Skoudy A., Martin F. From stem cells to beta cells:new strategies of stem cell therapy of diabetes milletus // Diabetologia. 2001, v. 44. pp. 401415.

140. Stewart C.L., Kaspar P., Brunet L.J. et al. Blastocyst implantation depends on maternal expression of leukemia inhibitory factor // Nature. 1992. v. 359. pp. 76-79.

141. Stewart C.L. Leukemia inhibitory factor and the regulation of pre-implantation development of the mammalion embryo // Molec. Reprod. Development. 1994. v. 39. pp. 233-238.

142. Stewart C., Cullinan E. B. Preimplantation development of the mammalian embryo and its regulation by growth factors // Dev Genetics. 1997. v. 21. pp. 91-101.

143. Stricland S., Smith K., Marotti K. Hormonal induction of differentiation in teratoarcinoma stem cells: generation of parietal endoderm by retinoic acid and dibutyryl cAMP // Cell. 1980. v. 21. pp. 347-355.

144. Sukoyan M.A., Golubitsa A.N., Zhelezova A.I. et al. Isolation and cultivation of blastocyst-derived stem cell lines from american mink (Mustela vison) // Molec. Reprod. Develop. 1992. v. 33. pp. 418-431.

145. Sutherland A., Calarco P., Damsky C. Developmental regulation of integrin expression at the time of implantation in the mouse embryo // Development. 1993. v. 119. pp. 1175-1186.

146. Suzuki H., Kamada N., Ueda O. et al. Germ-line contribution of embryonic stem cells in chimeric mice: influence of karyotype and in vitro differentiation ability // Exp. Anim. 1997. v. 46. pp. 17-23.

147. Suzuki O., Matsuda J., Takano K. et al. Effect of genetic background on establishment of mouse embryonic stem cells // Exp. Anim. 1999. v. 48. pp. 213-216.

148. Sweetser D.A., Kapur R.P., Froelick G.J. et al. Oncogenesis and altered differentation induced by activated Ras in neuroblasts of transgenic mice // Oncogene. 1997. v. 15. pp. 2783-2794

149. Taga Т., Hibi M., Hirata Y. et al. Interleukin-6 triggers the association of its receptor with a possible signal transduser. gpl30 // Cell. 1989. v. 58. pp. 573-81.

150. Taga T. The signal transducer gpl30 is shared by interleukin-6 family of haemapoetic and neurotrophic cytokines // Ann. Med. 1997. v. 29. pp. 63-72

151. Taga Т., Kishimoto T. Gpl30 and interleulin-6 family of cytokines // Annu. Rev. Immunol. 1997. v. 15. pp. 797-819.

152. Takagi N., Sugawara O., Sasaki M. Regional and temporalchanges in the pattern of X-chromosome replication during theearly postimplantation development of the female mouse // Cromosoma. 1982. v. 85. pp. 275-286.

153. Takeda K., Noguchi K., Shi W. et al. Targeted disraption of the mouse Stat3 gene leads to early embryonic lethality. Proc.N atl.Acad.Sci.USA, 1997, v. 94, pp. 3801-3804.

154. Taupin J.L., Pitard V., Dechanet J. et al. Leukemia inhibitory factor: part of a large ingathering family // Int. Rev. Immunol. 1998. v. 16. pp. 397^426.

155. Tewari M., Dixit V. Fas- and tumor necrosis factor-induced apoptosis is inhibited by the poxvirus CrmA gene product // J. Biol. Chem. 1995. v. 270. pp. 3255-3260.

156. Thompson J.A., Marshal V.S. Primate embryonic stem cells // Current Topics in Developmental Biology. 1998. v. 38. pp. 133-165.

157. Thompson I.A., Iskoviz- Eidor J., Shapiro S.S. et al. Embryonic cell lines derived from human blastocysts // Science. 1998. v. 282. pp. 1145-1147.

158. Tomida M., Yamamoto-Yamaguchi Y., Hozumi M. Purification of a factor inducing differentiaton of mouse myeloid leukemic Ml cells from conditioned medium of mouse fibroblast L929 cells // J. Biol. Chem. 1984. v. 259. pp. 10978-10982.

159. Tomida M. Structural and functional studies on the leukemia inhibitory factor receptor required for differentiation and growth arrest of myeloid leukemic cells // Leuk. Lymphoma. 2000. V. 37. pp. 517-25.

160. Uhlmann F. Secured cutting: controlling separase at the metaphase to anaphase transition // EMBO reports. 2001. v. 21. pp. 487-492

161. Vogiagis D., Marsh M., Fry R. et al. Leukemia inhibitoiy factor in human endometrium throughout the menstrual cycle // J. Endocrinol. 1996. v. 148. pp. 95-102.

162. Vogiagis D. Salamonsen L. The role of leukemia inhibitory factor in the establishment of pregnancy//J. Endocrinol. 1999. v. 160. pp. 181-190.

163. Voss AK; Thomas T; Petrou P. et al. Taube nuss is a novel gene essential for the survival of pluripotent cells of early mouse embryos // Development. 2000. v. 127. pp. 5449-61

164. Voyale R., Haines В., Pera M. et al. Human germ cell tumor lines express novel leukemia inhibitory factor transcript encoding differentially localized proteins//Exp. Cell Res. 1999. v. 249. pp. 199-211.

165. Ware C., Horowitz M., Renshaw B. et al. Targeted disruption of the low-affinity leukemia inhibitory factor receptor gene causes placental. Neural andmetabolic defects and results in perinatal death // Development. 1995. v. 121. pp. 1283-1299

166. Weissman I.L. Stem cell: units of development, units of regeneration and units in evolution // Cell. 2000. v. 100. pp. 157-168.

167. Wianny F., Real F.X., Mummery C.L. et al. G-l phase regulators. Cyclin D1, Cyclin D2, Cyclin D3: up-regulation at gastrulation and dynamic expression during neurolation // Dev. Dyn. 1998. v. 212. pp. 49-62.

168. Williams R., Hilton D., Pease S. et al. Mieloid leukemia inhibitory factor maintains the developmental potentional of embryonic stem cells // Nature. 1988. v. 336. pp. 684-687.

169. Winslow T. Stem cells: scientific progress and future research directions. National Institute of Health. 2001 www.nih.gov/stemcel1/scireport.htrn

170. Wobus A., Holzhausen H., Jakel P. et al. Characterization of a pluripotent stem cell line derived from a mouse embryo // Exp. Cell Res. 1984. v. 152. pp. 212-219.

171. Wolf E., Kramer R., Polejaeva I. et al. Efficient generation of chimaeric mice using embryonic stem cells after long term culture in the presence of ciliary neurotrophic factor//Transgen. Res. 1994. v. 3. pp. 152-158.

172. Yamada Т., Yoshkawa M., Kanda S. et al. In vitro differentiation of embryonic stem cells into hepatocyte-Iike cells identified by cellular uptake of indocyanine green // Stem cells. 2002. v. 20. pp. 146-154.

173. Yamamori Т., Fukada K., Aebersold R. et al. The cholinergetic neuronal differentation factor from heart cells is identical to leukemia inhibitory factor // Science. 1989. v. 246. pp. 1412-1416.

174. Yamasaki K. Taga T. Hirata S. et al. Cloning and expression of the human interleukin-б (BSF-2/IFNb2) receptor//Science. 1988. v. 241. pp. 825-828.

175. Yang Z.-M. Chen D.-B. Harper M. Differential hormonal regulation of leukemia inhibitory factor (LIF) in rabbit uterus during early pregnancy // Molecular and Reproductive Development. 1996. v. 43. pp. 470-476.

176. Yang Z.M., Le S.P., Chen D.B. et al. Expression patterns of leukemia inhibitory factor receptor (LIFR) and the gpl30 receptor component in rabbit uterus during early pregnancy // J. Reprod. Fertil. 1995. v. 103. pp. 249-255

177. Yoshida K., Taga Т., Saito M. et al. Targeted disraption of gpl30. A common signal transducer for the interleukin-6 family of cytokines, leads to myocardial and hematological disorders // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1996. v. 93. pp. 407-411.