Исследование активности рекомбинантного белка LIF про- и эукариотического происхождения на культуре эмбриональных стволовых клеток мыши тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.04, кандидат биологических наук Петрова, Раушания Рашитовна

• Петрова, Раушания Рашитовна
• кандидат биологических наук
• 2006

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Петрова, Раушания Рашитовна

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. ЦИТОКИНЫ СЕМЕЙСТВАШ.

1.2. ХАРАКТЕРИСТИКИ ЭМБРИОНАЛЬНЫХ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК (ЭСК) МЛЕКОПИТАЮЩИХ.

1.3. ОРГАНИЗАЦИЯ ГЕНА lif.

1.4. МОЛЕКУЛЯРНАЯ СТРУКТУРА БЕЛКА LIF.

1.5. ЗНАЧЕНИЕ ИЗОФОРМ ЦИТОКИНА LIF.

1.6. МЕХАНИЗМЫ ДЕЙСТВИЯ LIF НА ЭСК МЛЕКОПИТАЮЩИХ.

1.7. ПУТИ LIF-СИГНАЛИЗАЦИИВ ЭСК

1.8. ДИФФЕРЕНЦИРОВКА ЭСК МЛЕКОПИТАЮЩИХ in vitro.

2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ.

2.1. ПЛАЗМИДНЫЕ ВЕКТОРЫ.

2.2. КЛОНИРОВАНИЕ КДНК ГЕНА lif.

2.3. ЭЛЕКТРОФОРЕЗ ДНК В АГАРОЗНОМ ГЕЛЕ.

2.4. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ ГЕНА lif.

2.5. ПОЛУЧЕНИЕ ПРОКАРИОТИЧЕСКОГО БЕЛКА LIF.

2.6. БЕЛКОВЫЙ ЭЛЕКТРОФОРЕЗ В ПААГ.

2.7. ДИАЛИЗ РЕКОМБИНАНТНОГО БЕЖА LIF.

2.8. WESTERN-БЛОТ АНАЛИЗ (ИММУНОБЛОТТИНГ).

2.9. ПОЛУЧЕНИЕ LIF В КЛЕТКАХ ЛИНИИ COS-1.

2.10. ОЦЕНКА ЭКСПРЕССИИ РЕКОМБИНАНТНОГО БЕЛКА LIF.

2.10.1. ИММУНОФЕРМЕНТНЫЙ АНАЛИЗ (ИФА).

2.10.2. ИММУНОЦИТОХИМИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ LIF.

2.11. ТЕСТИРОВАНИЕ АКТИВНОСТИ LIF НА ЭСК МЫШИ.

2.12. МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНОЕ СОСТОЯНИЕ ЭСК in vitro.

2.12.1. МОРФОЛОГИЧЕСКИЙ КРИТЕРИЙ ЭСК.

2.12.2. ПРОЛИФЕРАТИВНАЯ АКТИВНОСТЬ И ВРЕМЯ УДВОЕНИЯ.

2.12.3. ЦИТОХИМИЧЕСКИЙ ТЕСТ НА ВЫЯВЛЕНИЕ ЭЩФ.

2.13. ДИФФЕРЕНЦИРОВКА ЭСК МЫШИ ЛИНИИ R1 in vitro.

2.14. СТАТИСТИЧЕСКАЯ ОБРАБОТКА РЕЗУЛЬТАТОВ.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ.

3.1. ЭКСПРЕССИЯ ГЕНА И/В РАЗНЫХ ТИПАХ КЛЕТОК.

3.2. БИОЛОГИЧЕСКАЯ АКТИВНОСТЬ РЕКОМБИНАНТНЫХ LIF

3.3. ИНДУКЦИЯ ДИФФЕРЕНЦИРОВКИ ЭСК МЫШИ В УСЛОВИЯХ ПРОЛОНГИРОВАННОГО КУЛЬТИВИРОВАНИЯ С LIF-COS.

4. ВЫВОДЫ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Исследование активности рекомбинантного белка LIF про- и эукариотического происхождения на культуре эмбриональных стволовых клеток мыши»

Открытие эмбриональных стволовых клеток (ЭСК) мыши (Evans, Kaufman, 1981; Martin, 1981) и человека (Thomson et al., 1998) относится к выдающимся достижениям ХХ-го века. Использование этих клеточных культур в медико-биологических исследованиях расширяет наши представления о возможностях биологии развития, генетики, клеточной и молекулярной биологии. В настоящее время с помощью ЭСК решаются фундаментальные и прикладные проблемы дифференцировки и управления индивидуальным развитием (Boheler et al., 2002; Toyooka et al., 2003; Wobus, Boheler, 2005), исследуются молекулярные механизмы репрограммирования ядер соматических клеток в энуклеированных ооцитах (Wilmut et al., 1997; Hochedlinger et al., 2003). Есть серьезные основания для использования ЭСК в заместительной терапии с целью коррекции и лечения наследственных и дегенеративных заболеваний (Schuldiner et al., 2000; Boheler et al., 2002; Ventura et al., 2004; Wobus, Boheler, 2005).

Подавляющее большинство экспериментальных исследований выполнено на линиях ЭСК мыши. Эти работы стали возможны только благодаря применению цитокина LIF (Leukemia Inhibitory factor) - основного фактора поддержания ЭСК в недифференцированном состоянии in vitro

Gearing et al., 1987; Gough et al, 1988; Smith et al., 1988; Thomson et al., 1998;

Auernhammer, Melmed, 2001). Цитокин LIF охарактеризован как гликопротеин с высокой аффинностью связывания с LIF-рецептором (LIF-R) и трансмембранным переносчиком - gpl30 (Gearing et al., 1991; Davis et al., 6

1993). В настоящее время достаточно хорошо исследованы его молекулярная структура и механизмы действия на плюрипотентные клеточные линии. LIF-активация рецепторного комплекса (LIF-R-gpl30) запускает в ЭСК мыши JAK-STAT3 (Ernst et aL, 1996; Niwa et al., 1998, Raz et al., 1999), МАРК (Auernhammer, Melmed, 2001; Izumi et al., 2006) и/или PI3K пути внутриклеточной сигнализации (Auernhammer, Melmed, 2001; Kristensen et al., 2005; Boiani, Scholer, 2005). В результате действия LIF в ЭСК реализуются программы как подавления (JAK-STAT3-nyn>), так и активации цитодифференцировки in vitro (МАРК и Р13К-путь).

Широкий спектр действия LIF на ЭСК связан с тем, что этот регуляторный белок способен активировать разные каскады цитоплазматических реакций и, соответственно, разные гены-мишени, ответственные за шпорипотентность, пролиферативную активность и дифференцировку. Аналогичная картина выявляется при действии на ЭСК рекомбинантных цитокинов LIF, полученных на основе микроорганизмов или же клеток млекопитающих (Smith et al., 1988; Chang et al., 1997; Matsuda et al., 1999; Buehr et al., 2003; Horiuchi et al., 2004). Несмотря на огромный фактический материал, в вопросах LIF регуляции ЭСК млекопитающих остается много неизвестного. Этот цитокин необходим разным видам для поддержания in vitro генетически стабильных линий плюрипотентных клеток из ранних зародышей на стадии бластоцисты (Nagy et al., 1990; Vogiagis,

Salomonsen, 1999; Dimitriadis, 2005). ЭСК других видов, в частности человека, в культуре обнаруживают зависимость не от LIF, а от основного 7 фактора роста фибробластов - bFGF и/или фидерных клеток (Reubinoff et al., 2000; Wobus, Boheler, 2005). Связано ли это с видовыми особенностями ЭСК или же с различиями в свойствах рекомбинантного LIF, остается не ясным. Для ответа на эти вопросы необходимы сравнительные исследования. Данные литературы, полученные на разных линиях ЭСК, в разных системах культивирования с коммерческими препаратами рекомбинантного LIF, полученными разными способами, сравнивать трудно. Они обнаруживают биохимическую и видовую гетерогенность (Hilton et al., 1988; Gasean et al., 1989; Thompson et al., 1998). Возможно, что на биологическую активность рекомбинантного LIF влияет не только первичная структура этого белка, но и его постгрансляционные модификации, что весьма вероятно при использовании разных систем экспрессии. Для получения ответов на эти вопросы необходимы сравнительные исследования функциональной активности продуктов экспрессии одного гена lif при действии на стабильную LIF-зависимую культуру клеток.

В связи с этим целью наших исследований было определение активности рекомбинантного белка LIF мыши, полученного в результате экспрессии одного гена lif в про- и эукариотических клетках-продуцентах, и исследование характера действия на плюрипотентность и дифференцировку LIF-зависимой линии ЭСК мыши для того, чтобы проверить, влияет ли система экспрессии на функциональные свойства рекомбинантного белка LIF.

Мы решали следующие задачи:

- Конструирование экспрессионных векторных систем со встроенным геном /г/мыши для про- и эукариотических клеток-продуцентов, выделение и хроматографическая очистка рекомбинантных белков LIF.

- Оптимизация условий для введения плазмидных конструкций и отбор клеток-продуцентов со стабильной экспрессией гена lif мыши.

- Сравнение биологической активности рекомбинантного белка LIF про- и эукариотического происхождения при действии на плюрипотентные ЭСК мыши в культуре in vitro.

- Оценка скорости и характера роста, а также способности рекомбинантного LIF поддерживать ЭСК мыши в плюрипотентном состоянии в зависимости от способов очистки, концентрации LIF в среде и длительности культивирования.

- Анализ способности рекомбинантного белка LIF мыши влиять на процессы цитодифференцировки ЭСК в условиях пролонгированного культивирования.

Заключение диссертации по теме «Биохимия», Петрова, Раушания Рашитовна

ВЫВОДЫ

1. Созданы две генетические конструкции на основе плазмидных векторов рЕТ28Ь и pcDNA3 со встроенным геном lif мыши для получения рекомбинантного белка LIF в E.coli (штаммы Rosetta и BL21) и в эукариотических клетках линии Cos-1.

2. Показано, что рекомбинантный белок LIF-Cos вырабатывается в секреторной форме (более 80%) и только небольшая его часть остается в цитоплазме и связана с клеточным матриксом. В фазу активного роста Cos-1 концентрация рекомбинантного секретируемого белка LIF достигает 0.65 мкг/мл. Рекомбинантный LIF-pET накапливается в E.coli в тельцах включения. После выделения и очистки его концентрация составляет 50 мкг/мл.

3. В течение 2-3 суток культивирования рекомбинантные белки LIF-Cos и LIF-pET поддерживают плюрипотентность и развитие ЭСК мыши линии R1 в виде колоний (70-80 %), аналогично коммерческому препарату LIF мыши (ICN).

4. Различия в активности между белками LIF про- и эукариотического происхождения обнаруживаются по влиянию на пролиферативную активность и дифференцировку ЭСК мыши линии R1 только при увеличении длительности культивирования. Рекомбинантный LIF-Cos под держивает более высокую скорость роста плюрипотентных клеток в виде колоний и индуцирует дифференцировку по типу кардиомиоцитов.

5. В условиях пролонгированного культивирования ЭСК мыши R1 с рекомбинантным LIF-Cos получена модель дифференцированных эмбриональных кардиомиоцитарных клеток с сократительной активностью, выявляющих экспрессию кардиального а-актина и отвечающих на /?-адренергическую стимуляцию.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Петрова, Раушания Рашитовна, 2006 год

1. Герхардт Ф. Методы общей бактериологии. Москва, Мир, 1983, т. 1, стр. 57-61.

2. Гланц С. Медико-биологическая статистика. Москва, Практика, 1998, 464 с.

3. Гривенников И.А., Мануйлова Е.С. Эмбриональные стволовые клетки в изучении функции генов в процессах дифференцировки и развития. Проблемы и перспективы молекулярной генетики, том. 1 (отв. редактор акад. Е.Д.Свердлов), Москва, Наука, 2003, стр. 290-307.

4. Гривенников И.А., Шкуматов A.A. Эмбриональные стволовые клетки. Проблемы репродукции. 2002, №3, http://www.rusmedserv.eom/problreprod/2002/3/article482.html

5. Лойд 3., Госсрау 3., Шиблер Т. Гистохимия ферментов. Лабораторные методы. Москва, Мир, 1982, стр. 64-67.

6. Патрушев Л.И. Биосинтез белка в искусственных генетических системах. Проблема белка. Москва, Наука, 1995, т. 1, Химическое строение белка, стр. 354-478.

7. Репин B.C., Ржанинова A.A., Шаменков Д.А. Эмбриональные стволовые клетки: фундаментальная биология и медицина. Москва, Реметэкс, 2002, 184 с.

8. Рыбчин В.Н. Основы генетической инженерии. СПб, СПбГТУ, 1999, 521 с.

9. Сингер M., Берг П. Гены и геномы. Москва, Мир, 1998, т. 1, стр. 262265.

10. Alexander W.S. Suppressors of cytokine signalling (SOCS) in the immune system. Nat. Rev. Immunol., 2002, v. 2, p. 410^116.

11. Aloisi F., Rosa S., Testa U., Bonsi P., Russo G., Peschle C., Levi G. Regulation of leukemia inhibitory factor synthesis in cultured human astrocytes. J. Immunol., 1994, v. 152, p. 5022-5031.

12. Auernhammer C., Melmed S. Leukemia-inhibitory factor neuroimmunemodulator of endocrine function. Endocrine reviews, 2000, v. 21, p. 313-345.

13. Bader A., Al-Dubai H, Weitzer G. Leukemia Inhibitory Factor modulates cardiogenesis in embryoid bodies in opposite fashions. Circ. Res., 2000, v. 86, p. 787-794.

14. Bagutti C, Wobus A.M., Fassler R., Watt F.M. Differentation of embryonal stem cells into keratinocytes: comparison of wild-type and pi integrin-dificient cells. Dev. Biol, 1996, v. 176, p. 184-196.

15. Bazan J.F. Structural design and molelular evolution of a cytokine receptor superfamily. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1990, v. 87, p. 6934-6938.

16. Beltrami A.P, Urbanek K., Kajstura J, Yan S.M., Finato N., Bussani R, Nadal-Ginard B, Silvestri F, Leri A, Beltrami C.A, Anversa P. Evidence that human cardiac myocytes divide after myocardial infarction. N. Engl. J. Med, 2001, v. 344, p. 1750-1757.

17. Bhatt H, Brynet L.J, Stewart C.L. Uterin expression of leukemia inhibitory factor coincides with the onset of Blastocyst implantation. Proc.Natl. Acad.Sci, 1991, v. 88, p. 11408-11412.

18. Boheler K.R, Czyz J, Tweedie D, Yang HT, Anisimov SV, and Wobus AM Differentiation of pluripotent embryonic stem cells into cardiomyocytes. Circ. Res, 2002, v. 91, p. 189-201.

19. Boiani M, Scholer H.R. Regulatory networks in embryo-deried pluripotent stem cells. Molecular Cell Biology, 2005, v. 6, p. 872-884.

20. Bradley A, Evans M. Kaufman M.N. Robertson E. Formation of germ-line chimaeras from embryo-derived teratocarcinoma cell lines. Nature, 1984, v. 309, p. 255-256.

21. Brown D.G., Willington M.A., Findlay I., Muggleton-Harris A.L. Criteria that optimise the potential of murine embryonic stem cells for in vitro and in vivo developmental studies. In vitro Cell Dev. Biol., 1992, v. 28A, p. 773-778.

22. Buehr M., Nichols J., Stenhouse F., Mountford P, Greenhalgh CJ, Kantachuvesiri S, Brooker G, Mullins J, and Smith AG. Rapid loss of Oct-4 and pluripotency in cultured rodent blastocysts and derivative cell lines. Biol. Reprod., 2003, v. 68, p. 222-229.

23. Burdon T., Chambers I., Stracey C, Niwa H, and Smith A. Signaling mechanisms regulating self-renewal and differentiation of pluripotent embryonic stem cells. Cells Tiss. Organs, 1999, v. 165, p. 131-143.

24. Burstein S.A., Mei R.L., Henthorn J, Friese P, Turner K. Leukemia inhibitory factor and interleukin-11 promote maturation of murine and human, megakaryocytes in vitro. J. Cell Physiol., 1992, v. 153, p. 305-12.

25. Carter-Su C., Smit L.S. Signaling via JAK tyrosine kinases: growth hormone receptor as a model system. Recent Prog. Horm. Res., 1998, v. 53, p. 61-82.

26. Caspi 0., Gepstein L. Stem cells for myocardial repair. Europ. Heart Jour. Supplements, 2006, v. 8, suppl. E, p. E43-E54.

27. Chabaud M., Fossiez F., Taupin J., Miossec P. Enhancing effect of IL-17 on IL-1-induced IL-6 and leukemia inhibitory factor production by rheumatoid arthritis synoviocytes and its regulation by Th2 cytokines. J. Immunol., 1998, v. 161, p. 409^414.

28. Chambers I., Colby D., Robertson M., Nichols J, Lee S, Tweedie S, Smith A. Functional expression cloning of nanog, a pluripotency sustaining factor in embryonic stem cells. Cell, 2003, v. 113, p. 643-655.

29. Chang I.K., Jeong D.K., Hong Y.H., Park T.S., Moon Y.K., Ohno T., Han J.Y. Production of germline chimeric chickens by transfer of cultured primordial germ cells. Cell Biol. Int., 1997, v. 21, p. 495-499.

30. Cheema S., Richards L., Murphy M., Bartlett P.F. Leukemia inhibitory factor prevents the death of axotomised sensory neurons in the dorsal root ganglia of the neonatal rat. J. Neurosci. Res., 1994, v. 37, p. 213-218.

31. Chen F.M., Yamamura H.I., Roeske W.R. Ontogeny of mammalian myocardial /2-adrenergic receptors. Eur J Pharmacol., 1979, v. 58, p. 255-264.

32. Chen X., Vinkemeier U., Zhao Y., Jeruzalmi D., Darnell Jr.J.E., Kuriyan J. Crystal structure of a tyrosine phosphorylated STAT-1 dimer bound to DNA. Cell, 1998, v. 93, p. 827-839.

33. Chiu C.Y., Rao M.S. Human Embryonic Stem Cells. Totowa, NJ: Humana, 2003.

34. Conquet F., Peyrieras N., Tiret L., Brulet P. Inhibited gastrulation in mouse embryos overexpressing the leukemia inhibitory factor. Proc.Natl. Acad. Sci. USA, 1992, v. 89, p. 8195-8199.

35. Cowan C.A., Klimanskaya I., McMahon J., Atienza J., Witmyer J., Zucker J.P., Wang S., Morton C., McMahon A., Powers D., Melton D. Derivation of embryonic stem-cell lines from human blastocysts. 2004, v. 350, № 13, p. 13531356.

36. Daheron L., Opitz S.L., Zaehres H., Lensch W.M., Andrews P.W., Itskovitz-Eldor J., Daley G.Q. LIF/STAT3 signaling fails to maintain self-renewal of human embryonic stem cells. Stem Cells, 2004, v. 22, p. 770-778.

37. Darnell J.E., Kerr I.M., Stark G.R. Jak-Stat pathways and transcriptional activation in response to IFNs and other extracellular signaling proteins. Science, 1994, v. 264, p. 1415-1421.

38. Darnell Jr.J.E. STATs and gene regulation. Science, 1997, v. 277, p. 16301635.

39. Davis S., Aldrich T.H., Stahl N., Pan L., Taga T., Kishimoto T., Ip N.Y., Yancopoulos G.D. LIFRJ3 and gpl30 as heterodimerizing signal transdusers of the tripartite CNTF receptor. Science, 1993, v. 260, p. 1805-08.

40. Dick J.E., Kamel-Reid S., Murdoch B., Doedens M. Gene transfer into normal human hematopoietic cells using in vitro and in vivo assays. Blood, 1991, v. 78, is. 3, p. 624-634.

41. Dimitriadis E., White C.A., Jones R.L., Salamonsen L.A. Cytokines, chemokines and growth factors in endometrium related to implantation. Hum. Reprod. Update, 2005, v. 11, is. 6, p. 613-630.

42. Dinsmore J., Ratliff J., Deacon T., Pakzaban P., Jacoby D., Galpern W., Isacson O. Embryonic stem cells differentiated in vitro as novel source of cells for transplantation. Cell Transplantation, 1996, v. 5, № 2, p. 131-143.

43. Dinsmore J., Solomob F. Inhibition of MAP2 expression affects both morphological and division phenotypes of neuronal differentation. Cell, 1991, v. 64, p. 817-826.

44. Doetschman T., Eistetter H., Katz M., Schmidt W., Kemler R. The in vitro development of blastocyst-derived embryonic stem cell lines: Formation of visceral yolk sac, blood, islands and myocardium. J. Embryol. Exp. Morphol., 1985, v.87, p. 27-45.

45. Doetschman T., Williams P., Maeda. M. Establishment of hamster blastocyst-derived embryonic stem (ES) cells. Dev. Biol., 1988, v. 127, p. 224-227.

46. Ernst M., Gearing D.P., Dunn A.R. Functional and biochemical association of Hck with the LIF/IL-6 receptor signal transducing subunit gpl30 in embryonic stem cells. EMBO J., 1994, v. 13, p. 1574-1584.

47. Ernst M., Oates A., Dunn A.R. Gpl30-mediated signal transduction in embryonic stem cells involves activation of Jak and Ras/Mitogen-activated protein kinase pathways. J. Biol. Chem., 1996, v. 271, p. 30136-30143.

48. Evans M.J., Kaufman M.H. Esteblishment in culture of pluripotental cells from mouse embryos. Nature, 1981, v. 292, p. 154-158.

49. Farese A.M., Myers L.A., MacVittie T.J. Therapeutic efficacy of recombinant human leukemia inhibitory factor in a primate model of radiation-induced marrow aplasia. Blood, 1994, v. 84, p. 3675-3678.

50. Fischbach G.D., Fischbach R.L. Stem cells: science, policy, and ethics. J. Clin. Invest., 2004, v. 114, p. 1364-1370.

51. Fukada T., Hibi M., Yamanaka Y., Takahashi-Tezuka M., Fujitani Y,

52. Yamaguchi T., Nakajima K., Hirano T. Two signals are necessary for cellproliferation induced by a cytokine receptor gpl30: involvement of STAT3 in antiapoptosis. Imminity, 1996, v. 5, p. 449-460.

53. Gajovic S., Chowdhury K., Gruss P. Genes expressed after retinoic acid-mediated differentation of embryoid bodies are likely to be expressed during embryo development. Exp.Cell Research, 1998, v. 242, p. 138-143.

54. Gardner R.L., Johnson M.H. Investigation of cellular interaction and deployment in the early mammalian embryo using interspecific chimaeras between the rat and mouse. Ciba Found Symp., 1975, v. 29, p. 183-200.

55. Gearing D.P., Gough N.M., King J.A. Hilton D.J., Nicola N.A., Simpson R.J., Nice E.C., Kelso A., Metcalf D. Molecular cloning and expression of cDNA encoding a murine myeloid leukemia inhibitory factor (LIF). EMBO J., 1987, v. 6, p. 3995-4002.

56. Gearing D.P., Nicola N.A., MetcalfD., Foote S., Willson T.A., Gough N.M.,

57. Williams R.L. Production of Leukemia Inhibitory Factor in Escherichia coli by a

58. Novel Procedure and Its Use in Maintaining Embryonic Stem Cells in Culture.

59. Bio/Technology, 1989, v. 7, p. 1157-1161.

60. Gearing D.P., Thut C.J., VandenBos T., Gimple S.D., Delaney P.B., King J., Price V., Cosman D., Beckman M.P. Leukemia inhibitory factor receptor is structurally related to the IL-6 signal transducer, gp-130. EMBO J., 1991, v. 10, p. 2839-48.

61. Geisse S., Gram H., Kleuser B., Kocher, H.P. Eukaryotic expression systems: A comparison. Protein expression and purification, 1996, v. 8, p. 271282.

62. Getchell T.V., Shah D.S., Partin J.V., Subhedar N.K., Getchell M.L. Leukemia inhibitory factor mRNA expression is upregulated in macrophages and olfactory receptor neurons after target ablation. J. Neurosci. Res., 2002, v. 67, p. 246-254.

63. Giovannini M., Djabali M., McElligott D., Selleri L., Evans G.A. Tandem linkage of genes coding for leukemia inhibitory factor (LIF) and oncostatin M (OSM) on human chromosome 22. Cytogenet. Cell Genet., 1993, v. 64, p. 240244.

64. Godard A., Gascan H., Naulet J., Peyrat M.A., Jacques Y., Soulillou J.P., Moreau J.F. Biochemical characterization and purification of HILDA, a human lymphokine active on eosinophils and bone marrow cells. Blood, 1988, v. 71, is. 6, p. 1618-1623.

65. Gough N.M., Gearing D.P., King J.A. Willson T.A., Nicola N.A., Metcalf D. Molecular cloning and expression of human homologue of murine gene encoding myeloid leukemia-inhibitory factor. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1988, v. 85, p. 2623-2627.

66. Gough N.M., Willson T.A., Stahl J., Brown M.A. Molecular biology of the leukemia inhibitory factor gene. Ciba Found Symp., 1992, v. 167, p. 24-46.

67. Haines B., Voyle R.B., Pelton T., Forrest R„ Rathjen P,D. Complex conserved organization of the mammalian LIF gene: a novel mechanism for regulated expression of intracellular and extracellular cytokines. J. Immunol., 1999, v. 162, p. 4637-4646.

68. Haines B., Voyle R.B., Rathjen P. Intracellular and extracellular Leukemia Inhibitory Factor proteins have different cellular activities that are mediated by distinct protein motifs. Mol. Biol. Cell, 2000, v. 11, p. 1369-1383.

69. Hamazaki T., Iiboshi Y., Oka M., Papst P.J., Meacham A.M., Zon L.I., Terada N. Hepatic maturation in differentiating embryonic stem cells in vitro. FEBS Lett., 2001, v. 497, p. 15-19.

70. Hamazaki T., Oka M., Yamanaka S., Terada N. Aggregation of embryonicstem cells induces Nanog repression and primitive endoderm differentiation.

71. Journal Cell Science, 2004, v. 117, № 23, p. 5681-5686.

72. Hermsmeyer K., Mason R., Griffen S.H., Becker P. Rat cardiac muscle single cell automaticity responses to a- and ^-adrenergic agonists and antagonists. Circ. Res., 1982, v. 51, p. 532-537.

73. He J.Q., Ma Y., Lee Y., Thomson J.A., Kamp T.J. Human Embryonic Stem Cells develop into multiple types of cardiac myocytes. Circ. Res., 2003, v. 93, №l,p. i-3.

74. Heinrich P.C., Behrmann I., Muller-Newen G., Schaper F, Graeve L. Interleukin-6-type cytokine signalling through the gpl30/Jak/STAT pathway. Biochem. J., 1998, v. 334, p. 297-314.

75. Hilton D.J., Nicola N.A., Metcalf D. Purification of a murine leukemia inhibitory factor from Krebs ascites cells. Anal. Biochem., 1988 b, v. 173, p. 359367.

76. Hilton D.J. LIF: lots of interesting functions. Trends Biochem Sci., 1992, v. 17, №2, p. 72-76.

77. Hilton D.J., Nicola N.A. Kinetic analyses of the binding of leukemia inhibitory factor to receptor on cells and membranes and in detergent solution. J. Biol. Chem., 1992, v. 267, p. 10238-47.

78. Hilton D.J., Gough N.M. Leukemia inhibitory factor. Cytokines, 1998, Acad.Press Lim. P. 277-296.

79. Hinds M.G., Maurer T., Zhang J.G., Nicola N.A., Norton R.S. Solution structure of leukemia inhibitory factor. J. Biol. Chem., 1998, v. 273, p. 1373813745.

80. Hochedlinger K., Jaenisch R. Nuclear transplantation, embryonic stem cells, and the potential for cell therapy. The new England jour, of med., 2003, v. 349, №3,p. 275-286.

81. Hogan B., Tilly R. In vitro development of inner cell masses isolated immunosurgically from mouse blastocysts. II. Inner cell masses from 3. 5-to 4. 0-day p. c. blastocysts. J. Embryol. Exp., 1978, v. 45, p. 107-121.

82. Hon Y., Rulifson I.C., Tsai B.C., Heit J.J., Cahoy J.D., Kim S.K. Growth inhibitors promote differentiation of insulin-producing tissue from embryonic stem cells. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 2002, v. 99, p. 16105-16110.

83. Hsu L.W., Heath J.K. Identification of two elements involved in regulating expression of murine leukemia inhibitory factor gene. Bioch. J., 1994, v. 302, p. 103-110.

84. Hiibner K., Fuhrmann G., Christenson L.K., Kehler J., Reinbold R., De La F.R., Wood J., Strauss III J.F., Boiani M., Scholer H.R. Derivation of oocytes from mouse embryonic stem cells. Science, 2003, v. 300, p. 1251-1256.

85. Hudson K.R., Vernallis A.B., Heath J.K. Characterization of the receptor binding sites of the human leukemia inhibitory factor and creation of antagonists. J. Biol. Chem., 1996, v. 271, p. 11971-11978.

86. Itskovitz-Eldor J., Schuldiner M., Karsenti D., Eden A., Yanuka O., Amit M., Soreq H., Benvenisty N. Differentiation of human embryonic stem cells into embryoid bodies compromising the three embryonic germ layers. Mol. Med., 2000, v. 6, p. 88-95.

87. Jaenicke R., Rudolph R. Folding proteins. Protein structure a practical approach (ed. Creighton T.E.), N.-Y.: IRL Press, 1990, p. 191-224.

88. Jo C., Kim H., Jo I., Choi I., Jung S.C., Kim J., Kim S.S., Jo S.A. Leukemia inhibitory factor blocks early differentiation of skeletal muscle cells by activating ERK. 2005, Biochim. Biophys. Acta., v. 1743, № 3, p. 187-197.

89. Kawase E., Suemori H., Takahashi N., Okazaki K., Hashimoto K., Nakatsuji N. Strain difference in establishment of mouse embryonic stem (ES) cell lines. J. Dev. Biol., 1994, v. 38, № 2, p. 385-390.

90. Keller G., Kennedy M., Papayannopoulou T., Wiles M.V. Hematopoietic commintment during embryonic stem cell differentation in culture. Mol. Cell Biol., 1993, v. 13, p. 473-486.

91. Keller G. Embryonic stem cell differentiation: emergence of a new era in biology and medicine. Genes & Dev., 2005, v. 19, p. 1129-1155.

92. Kelly D., Rizzino A. DNA microarray analyses of genes regulated during the differentiation of embryionic stem cells. Mol.Reprod.Devel., 2000, v. 56, p. 113-123.

93. Klug M.G., Soonpaa M.H., Koh G.Y., Field L.J. Genetically selectedcardiomyocytes from differentiating embronic stem cells form stable intracardiacgrafts. J Clin. Invest., 1996, v. 98, p. 216-224.

94. Kola I., Davey A., Gough N.M. Localization of the murine leukemia inhibitory factor gene near the centromere on chromosome 11. Growth Factors, 1990, v. 2, p. 235-240.

95. Koopman P., Cotton R.G. A factor produced by feeder cells which inhibits embryonal carcinoma cell differentiation. Characterization and partial purification. Exp. Cell Res, 1984, v. 154, № 1, p. 233-42.

96. Kojima K, Kanzaki H, Iwai M, Hatayama H, Fujimoto M, Inoue T, Horie K, Nakayama H, Fujita J, Mori T. Expression of leukemia inhibitory factor in human endometrium and placenta. Biol. Reprod, 1994, v. 50, p. 882-887.

97. Kristensen D.M, Kalisz M, Nielsen J.H. Cytokine signalling in embryonic stem cells. APMIS, 2005, v. 113, № 11-12, p. 756-72.

98. Krystosek A, Sachs L. Control of lysozyme induction in the differentiation of myeloid leukemic cells. Cell, 1976, v. 9, p. 675-684.

99. Kunisada K, Hirota H, Fujio Y, Matsui H, Tani Y, Yamauchi-Takihara K, Kishimoto T. Activation of JAK-STAT and MAP kinases by leukemia inhibitory factor through gpl30 in cardiac myocytes. Circulation, 1996, v. 94, p. 2626-2632.

100. Kuropatwinski K.K, De Imus C, Gearing D, Baumann H, Mosley B. Influence of subunit combinations on signaling by receptors for oncostatin M, leukemia inhibitory factor and interleukin-6. J. Biol. Chem, 1997, v. 272, p. 15135-15144.

101. Kurzrock R, Estrov Z, Wetzler M, Gutterman, Talpaz M. LIF: not just aleukemia inhibitory factor. End. Reviews, 1991, v. 12, p. 208-217.

102. Layton M.J., Lock P., Metcalf D., Nicola N.A. Cross-species receptor binding characteristics of human and mouse leukemia inhibitory factor suggest a complex binding interaction. J. Biol. Chem., 1994 a, v. 269, p. 17048-17055.

103. Layton M.J., Owczarek C.M., Metcalf D., Lock P.A., Wilson T.A., Gough N.M., Hilton D.J., Nicola N.A. Complex binding of leukemia inhibitory factor to its membrane-expressed and soluble receptors. Proc. Soc. Exp. Biol. Med., 1994 b, v. 206, p. 295-298.

104. Layton M.J., Owczarek C.M., Metcalf D., Smith D.K., Treutlein H.R., Nicola N.A. Conversion of the biological specificity of murine to human leukemia inhibitory factor by replacing 6 amino acid residues. J. Biol. Chem., 1994 c, v. 269, p. 29891-29896.

105. Lin L.-F.-H., Mismer D., Lile J.D., Armes L.G., Butler E.T., Vannice J.L., Collins F. Purification, cloning and expression of ciliary neurotrophic factor (CNTF). Science, 1989, v. 246, p. 1023-1025.

106. Mao Y., Lee A.W.-M. A novel role for Gab2 in bFGF-mediate cell suevival during retinoic acid-induced neuronal differentiation. J. Cell Biol., 2005, v. 170, № 2, p. 305-316.

107. Martin G.R, Evans M.J. The formation of embryoid bodies in vitro by homogenous embryonal carcinoma cell cultures derived from isolated single cells. Tteratomas and Differenriation, N.-Y.: Academic Press, 1975, p. 169-187.

108. Martin G.R. Isolation of a pluripotent cell line from early mouse embryos cultured in medium conditioned by teratocarcinoma stem cells. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1981, v. 78, p. 7634-7638.

109. Matsuda T, Nakamura T, Nakao K, Arau T, Katsuki M, Heike T, Yokota T. STAT3 activation is sufficient to maintain and undifferentiated state of mouse embryonic stem cells. EMBO J, 1999, v. 18, p. 4261-4269.

110. McBurney M.W, Jones-Villeneuve E.M, Edwards M.K, Anderson P.J. Control of muscle and neuronal differentiation in a cultured embryonal carcinoma cell line. Nature, 1982, v. 299, p. 165-167.

111. Metcalf D, Hilton D.J, Nicola N.A. Clonal analysis of the actions of the murine leukemia inhibitory factor on leukemic and normal murine hemopoietic cells. Leukemia, 1988, v. 2, p. 216-221.

112. Metcalf D. The leukemia inhibitory factor (LIF). Int. J. Cell Cloning, 1991, v. 9, p. 95-108.

113. Metcalf D. Leukemia inhibitory factor a puzzling polyfunctional regulator. Growth Factors, 1992, v. 7, p. 169-173.

114. Mintz B, Illmensee K. Normal genetically mosaic mice produced from malignant teratocarcinoma cells. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1975, v. 72, p. 35853589.

115. Murray P., Edgar D. The regulation of embryonic stem cell differentiation by leukaemia inhibitory factor (LIF). Differentiation, 2001, v. 68, p. 227-234.

116. Nagy A., Gocza E., Diaz E., Prideaux V.R., Ivanyi E., Markkula M., Rossant J. Embryonic stem cells alone are able to support fetal development in the mouse. Development, 1990, v. 110, p. 815-821.

117. Nagy A., Rossant J., Nagy R., Prideaux V.R., Ivanyi E., Markkula M., Rossant J. Derivation of completely cell culture-derived mice from early-passage embryonic stem cells. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1993, v. 90, p. 8424-8428.

118. Nicol R.L., Frey N., Pearson G., Melanie C., Richardson J., Olson J. Activated MEK5 induces serial assembly of sarcomeres and eccentric cardiac hypertrophy. The EMBO J., 2001, v. 20, p. 2757-2767.

119. Nichols J., Evans E.P., Smith A.G. Establishment of germ-line-competent embryonic stem (ES) cell using differentation inhibiting activity. Development, 1990, v. 110, N4, p. 1341-1348.

120. Nichols J., Zevnik B., Anastassiadis K., Niwa H., Klewe-Nebenius D., Chambers I., Scholer H., Smith A. Formation of pluripotent stem cells in the mammalian embryo depends on the POU transcription factor Oct-4. Cell, 1998, v. 95, p. 379-391.

121. Ning H.X., Chen Y., Rong Y. Zhang X.F., Chang Z.J. Cloning, eukaryotic expression and function assay of recombinant leukemia inhibitory factor gene LIF. Sheng Wu (Shanghai), 2003, v. 35, № 12, p. 1123-1127.

122. Niwa H., Burdon T., Chambers I., Smith A Self-renewal of pluripotent embryonic stem cells is mediated via activation of STAT3. Genes Dev., 1998, v. 12, p. 2048-2060.

123. Niwa H., Miyazaki J., Smith A.G. Quantitative expression of Oct-3/4 defines differentiation, dedifferentiation or selfrenewal of ES cells. Nat. Genet., 2000, v. 24, p. 372-376.

124. Niwa H. Molecular mechanism to maintain stem cell renewal of ES cells. Cell Struct Funct., 2001, v. 26, p. 137-48.

125. Odorico J.S., Kaufman D.S., Thomson J.A. Multilineage differentiation from human embryonic stem cell lines. Stem cells, 2001, v. 19, p. 193-204.

126. Ogawa K., Nishinakamura R., Iwamatsu Y., Shimosato D., Niwa H. Synergistic action of Wnt and LIF in maintaining pluripotency of mouse ES cells. Biochem. Biophys. Res. Commun., 2006, v. 343, № 1, p. 159-66.

127. Owczarek C.M., Layton M.J., Metcalf D. Lock P., Willson T.A., Gough N.M., Nicola N.A. Inter-species chimeras of leukaemia inhibitory factor define a major human receptor-binding determinant. EMBO J., 1993, v. 12, p. 3487-3495.

128. Pease S., Braghetta P., Gearing D., Grail D., Williams R.L. Isolation of embryonic stem (ES) cells in media supplemented with recombinant leukemia inhibitory factor (LIF). Dev. Biol., 1990, v. 141, p. 344-352.

129. Prelle K., Vassiliev I.M., Vassilieva S.G., Wolf E., Wobus A.M. Establishment of pluripotent cell lines from vertebrate species: present status and future prospects. Cells Tis. Org., 1999, v. 165, p. 220-236.

130. Purvis D.H., Mabbutt B.C. Solution dynamics and secondary structure of murine leukemia inhibitory factor: a four-helix cytokine with a rigid CD loop. Biochemistry, 1997, v. 36, p. 10146-10154.

131. Rathjen P.D., Toth S., Willis A., Heath J.K., Smith A.G. Differentiationinhibiting activity is produced in matrix-associated and diffusible forms that aregenerated by alternate promoter usage. Cell, 1990, v. 62, p. 1105-14.

132. Raz R., Lee C.K., Cannizzaro L.A., d'Eustachio P., Levy D.E. Essential role of STAT3 for embryonic stem cell pluripotency. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1999, v. 96, p. 2846-2851.

133. Recombinant method for making leukemia inhibitor factor. United States Patent 5427925, 1993, http://www.patentstorm.us/patents/5427925-description.html.

134. Reppel M., Boettinger C., Hescheler J. Beta-adrenergic and muscarinic modulation of human embryonic stem cell-derived cardio-myocytes. Cell Physiol Biochem., 2004, v. 14, p. 187-196.

135. Reubinoff B.E., Pera M.F., Fong C.Y. Trounson A., Bongso A. Embryonic stem cell lines from human blastocysts: somatic differentiation in vitro. Natl.v

136. Biotechnol., 2000, v. 18, p. 399-404.

137. Robb L., Dimitriadis E., Li R., Salamonsen L.A. Leukemia inhibitory factor and interleukin-11: cytokines with key roles in implantation. J. Reprod. Immunol., 2002, v. 57, p. 129-41.

138. Robertson E.J. Using embryonic stem cells to introduce mutations into the mouse germ line. Biol Reprod., 1991, v. 44, p. 238-245.

139. Robertson M., Chambers I., Rathjen P. Nichols J. Expression of alternative forms of differentiation inhibiting activity (DIA/LIF) during murine embryogenesis and in neonatal and adult tissues. Dev. Genet., 1993, v. 14, p. 165173.

140. Robinson R.C., Grey L.M., Staunton D., Vankelecon H., Vernallis A.B.,

141. Moreau J., Stuart D.I., Heath J.K., Jones E.Y. The crystal structure and biological126function of leukemia inhibitory factor: implications for receptor binding. Cell,1994, v. 77, p. 1101-1116.

142. Robinson R.C., Grey L.M., Staunton D., Stuart D.I., Heath J.K., Jones E.Y. The crystal structure of murine leukemia inhibitory factor. Ann. NY Acad. Sci.,1995, v. 762, p. 179-188.

143. Rohwedel J., Guan K., Wobus A.M. Induction of cellular differentiation by retinoic acid in vitro. Cells Tiss. Org., 1999, v. 165, p. 190-202.

144. Sambrook J., Fritsch E.F., Maniatis T. Molecular Cloning: A Laboratory Manual. Cold Spring Harbor, N.-Y.: Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989.

145. Sasai K., Aikawa J., Tojo H., Tojo H., Tanaka S., Ogawa T., Shiota K. Functions of the N-glycans of rat leukemia inhibitory factor expressed in Chinese hamster ovary cells. J. Biochem. (Tokyo), 1998, v. 124, p. 999-1003.

146. Sato N., Meijer L., Skaltsounis L. Greengard P., Brivanlou A.H. Maintenance of pluripotency in human and mouse embryonic stem cells through activation of Wnt signaling by a pharmacological GSK-3-specific inhibitor. Nat. Med., 2004, v. 10, p. 55-63.

147. Sheehan S.M., Tatsumi R., Temm-Grove C.J., Allen R. HGF is an autocrine growth factor for skeletal muscle satellite cells in vitro. Muscle & Nerve, 2000, v. 23, p. 239-45

148. Schiemann W.P., Nathanson N.M. Raf-1 independent stimulation of mitogen-activated protein kinase by leukemia inhibitory factor in 3T3-L1 cells. Oncogene, 1998, v. 16, p. 2671-2679.

149. Schmelzer C.H., Harris R.J., Butler D., Yedinak C.M., Wagner L.K., Burton L.E. Glycosylation pattern and disulfide assignments of recombinant human differentiation-stimulating factor. Arch. Biochem. Biophys., 1993, v. 302, p. 484489.

150. Schoonjans L., Albright G.M., Li J.L., Collen D., Moreadith R.W. Pluripotential rabbit embryonic stem (ES) cells are capable of forming overt coat color chimeras following injection into blastocysts. Mol. Reprod. Dev., 1996, v. 45, p. 439-443.

151. Schoonjans L., Kreemers V., Danloy S., Moreadith R.W., Laroche Y., Collen D. Improved generation of germline-competent embryonic stem cell lines from inbred mouse strains. Stem Cells, 2003, v. 21, p. 90-97.

152. Schuldiner M., Yanuka 0., Itskovitz-Elder, Melton D.A., Benvenisty N. Effects of 8 growth factors on the differentiation of human embryonic stem cells. Proc. Natl. Acad. Sei. USA, 2000, v. 97, p. 11307-11312.

153. Sengupta T.K., Talbot E.S., Scherle P.A., Ivashkiv L.B. Rapid inhibition of interleukin-6 signaling and Stat3 activation mediated by mitogen-activated protein kinases. Proc. Natl. Acad. Sei. USA, 1998, v. 95, p. 11107-11112.

154. Smith A.C., Heath J.K., Donaldson D.D., Wong G.G., Moreau J., Stahl M., Rogers D. Inhibition of pluripotental embryonic stem cell differentation by purified polipeptides. Nature, 1988, v. 336, p. 688-690.

155. Smith A., Nichols J., Robertson M., Rathjen P.D. Differentiation inhibiting activity (DIA/LIF) and mouse development. Dev. Biol., 1992, v. 151, p. 339-351.

156. Smith D.K., Treutlein H.R. LIF receptor-gpl30 interaction investigated by homology modeling: implications for LIF binding. Protein Sei., 1998, v. 7, p. 886896.

157. Stahl J., Gearing D.P., Willson T.A., Brown M.A., King J.A., Gough N.M.

158. Structural organization of the genes for murine and human leukemia inhibitory129factor. Evolutionary conservation of coding and non-coding regions. J. Biol. Chem., 1990, v. 265, p. 8833-8841.

159. Stahl J., Gough N.M. Delineation of positive and negative control elements within the promoter region of the murine leukemia inhibitory factor (LIF) gene. Cytokine, 1993, v. 5, p. 386-93.

160. Starr R., Novak U., Willson T.A. et al. Distinct roles for leukemia inhibitory factor receptor a-chain and gpl30 in cell type-specific signal transduction. J. Biol. Chem., 1997, v. 272, p. 19982-19986.

161. Starr R., Willson T.A., Viney E.M., Murray L.J., Rayner J.R., Jenkins B.J., Gonda T.J., Alexander W.S., Metcalf D., Nicola N.A., Hilton D.J. A family of cytokine-inducible inhibitors of signaling. Nature, 1997, v. 387, p. 917-921.

162. Stevens L.C. Origin of testicular teratomas from primordial germ cells in mice. J. Natl. Cancer Inst., 1967, v. 38, p. 549-552.

163. Stewart C.L., Kaspar P., Brunet L.J., Bhatt H., Gadi I., Kontgen F., Abbondanzo S.J. Blastocyst implantation depends on maternal expression of leukemia inhibitory factor. Nature, 1992, v. 359, p. 76-79.

164. Stofega M.R., Wang H., Ullrich A., Carter-Su C. Growth hormone regulation of SIRP and SHP-2 tyrosyl phosphorylation and association. J. Biol. Chem., 1998, v. 273, p. 7112-7117.

165. Stojkovic M., Lako M., Strachan T., Murdoch A. Derivation, growth and applications of human embryonic stem cells. Reproduction, 2004, v. 128, p. 259267.

166. Sulkowski E. Purification of proteins by IMAC. Trends Biotechnol., 1985, v. 3, p. 1-7.

167. Sutherland G.R., Baker E., Hyland V.J., Callen D.F., Stahl J., Gough N.M. The gene for human leukemia inhibitory factor (LIF) maps to 22ql2. Leukemia, 1989, v.3, p. 9-13.

168. Taga T., Kishimoto T. GP130 and the interleukin-6 family of cytokines. Annu. Rev. Immunol., 1997, v. 15, p. 797-819.

169. Thomson J.A., Kalishman J., Golos T.G., Durning M., Harris C.P., Becker R.A., Hearn J.P. Isolation of a primate embryonic stem cell line. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1995, v. 92, p. 7844-7848.

170. Thomson J.A., Itskovitz-Eldor J., Shapiro S.S. Waknitz M.A., Swiergiel J.J., Marshall V.S., Jones J.M. Embryonic stem cell lines derived from human blastocysts. Science, 1998, v. 282, p. 1145-1147.

171. Tomida M., Yamamoto-Yamaguchi Y., Hozumi M. Purification of a factor inducing differentiaton of mouse myeloid leukemic Ml cells from conditioned medium of mouse fibroblast L929 cells. J. Biol. Chem., 1984, v. 259, p. 1097810982.

172. Tomida M., Yamamoto-Yamaguchi Y., Hozumi M. Three different cDNAs encoding mouse D-factor/LIF receptor. J. Biochem. (Tokyo), 1994, v. 115, p. 557562.

173. Tomida M., Heike T., Yokota T. Cytoplasmic domains of the leukemia inhibitory factor receptor required for STAT3 activation, differentiation, and growth arrest of myeloid leukemic cells. Blood, 1999, v. 93, p. 1934-1941.

174. Tomida M. Structural and functional studies on the leukemia inhibitory factor receptor required for differentiation and growth arrest of myeloid leukemic cells. Leuk. Lymphoma, 2000, v. 37, p. 517-25.

175. Toyooka Y., Tsunekawa N., Akasu R., Noce T. Embryonic stem cells can form germ cells in vitro. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 2003, v. 100, p. 1145711462.

176. Trounson A. The Production and Directed Differentiation of Human Embryonic Stem Cells. End. Rev., 2006, v. 27, p. 208-219.

177. Ventura C., Maioli M., Asara Y., Santoni D., Scarlata I., Cantoni S., Perbellini A. A novel differentiating glycoconjugate affording a high throughput of cardiogenesis in embryonic stem cells. J. Biol. Chem., 2004, v. 279, is. 22, p. 23574-23579.

178. Vogiagis D., Salamonsen L. The role of leukemia inhibitory factor in the establishment of pregnancy. J. Endocrinol., 1999, v. 160, p. 181-190.

179. Vojtek A.B., Der C.J. Increasing complexity of the Ras signaling pathway. J. Biol. Chem., 1998, v. 273, p. 19925-19928.

180. Voyle R., Haines B., Pera M., Forrest R., Rathjen P.D. Human germ cell tumor lines express novel leukemia inhibitory factor transcript encoding differentially localized proteins. Exp. Cell Res., 1999, v. 249, p. 199-211.

181. Waring P., Wycherley K, Cary D, Nicola N, Metcalf D. Leukemia inhibitory factor levels are elevated in septic shock and various inflammatory body fluids. J. Clin. Invest, 1992, v. 90, p. 2031-2037.

182. Wen Z, Darnell Jr. J.E. Mapping of Stat3 serine phosphorylation to a single residue (727) and evidence that serine phosphorylation has no influence on DNA 4 binding of Statl and Stat3. Nucleic Acids Res, 1997, v. 25, p. 2062-2067.

183. Wesselingh S.L, Levine B, Fox R.J, Choi S, Griffin D.E. Intracerebral cytokine mRNA expression during fatal and nonfatal alphavirus encephalitis suggests a predominant type 2 T cell response. J. Immunol, 1994, v. 152, p. 12891297.

184. Willson T.A, Metcalf D, Gough N.M. Cross-species comparison of the sequence of the leukemia inhibitory factor gene and its protein. Eur. J. Biochem, 1992, v. 204, p. 21-30.

185. Wilmut I, Schnieke A.E, McWhir J, Kind A.J, Campbell K.H. Viable offspring derived from fetal and adult mammalian cells. Nature, 1997, v. 385, p. 810-813.

186. Wobus A.M, Holzhausen H, Jakel P, Schoneich J. Characterization of a pluripotent stem cell line derived from a mouse embryo. Exp. Cell Res, 1984, v. 152, p. 212-219.

187. Wobus A.M., Boheler K.R. Embryonic Stem Cells: Prospects for Developmental Biology and Cell Therapy. Physiol. Rev., 2005, v. 85, p. 635-678.

188. Xu C., Inokuma M.S., Denham J., Golds K., Kundu P., Gold J.D., Carpenter M.K. Feeder-free growth of undifferentiated human embryonic stem cells. Nat. Biotechnol., 2001, v. 19, p. 971-974.

189. Yamamoto-Yamaguchi Y., Tomida M., Hozumi M. Prolongation by differentiation-stimulating factor/leukemia inhibitory factor of the survival time of mice implanted with mouse myeloid leukemia cells. Leuk. Res., 1992, v. 16, № 10, p. 1025-1029.

190. Yang Z.M. Chen D.-B. Harper M. Differential hormonal regulation of leukemia inhibitory factor (LIF) in rabbit uterus during early pregnancy. Molec. Reprod. Devel., 1996, v. 43, p. 470-476.

191. Yang Z.M., Le S.P., Chen D.B. Expression patterns of leukemia inhibitory factor receptor (LIFR) and the gpl30 receptor component in rabbit uterus during early pregnancy. J. Reprod. Fertil., 1995, v. 103, p. 249-255.

192. Yao S., Chen S., Clark J., Hao E., Beattie G.M., Hayek A., Ding S. Long-term self-renewal and directed differentiation of human embryonic stem cells in chemically defined conditions. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 2006, v. 103, № 18, p. 6907-6912.

193. Zhang X.F., Ge Z.L., Sun L.Y., Ding Q.M., Zhang Q.W., Cao H„ Yuan L.Z. Cloning and Expression of the Gene Coding for the Fusion Protein rhGM-CSF/LIF. Sheng Wu (Shanghai), 1997, v. 29, № 5, p. 425-431.