Роль кислорода в межклеточном взаимодействии гемопоэтических стволовых и мезенхимальных стромальных клеток in vitro тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.03.01, кандидат наук Маслова, Елена Викторовна

• Маслова, Елена Викторовна
• кандидат наук
• 2013

Оглавление диссертации кандидат наук Маслова, Елена Викторовна

ОГЛАВЛЕНИЕ

Стр.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Понятие ниши стволовых клеток

1.2. Факторы микроокружения в нише гемопоэтических стволовых клеток

1.2.1. Клеточные факторы

1.2.2. Неклеточные факторы

1.3. Влияния факторов микроокружения на гемопоэтические клетки in 22 vitro

1.3.1. Пуповинная кровь, как источник гемопоэтических клеток, 23 применяемых в клинических и лабораторных исследованиях

1.3.2. Идентификация и функциональная характеристика гемопоэтических 27 клеток

1.3.3. Методические подходы к культивированию гемопоэтических клеток

1.3.3.1. Гемопоэтические клетки в суспензионной культуре

1.3.3.2. Культивирование гемопоэтических клеток с использованием 36 стромального подслоя. Источники стромальных клеток

1.3.4. Пониженное содержание кислорода как фактор локального 38 микроокружения in vitro

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1. Оборудование, материалы и реактивы

2.1.1. Химические реагенты и материалы

2.1.2. Антитела

2.1.3. Оборудование

2.2. Среды для культивирования клеток

2.2.1. Среда для криоконсервации клеток

2.2.2. Полная среда для культивирования жтММСК

2.2.3. Среда для культивирования пкМНК и сокультивирования пкМНК и 46 жтММСК

2.3. Выделение и культивирование клеток

2.3.1. МНК из пуповинной крови человека

2.3.2. ММСК из стромально-васкулярной фракции жировой ткани человека

2.3.3. Криоконсервация жтММСК

2.3.4. Культивирование клеток при пониженном содержании кислорода

2.3.5. Пассирование жтММСК

2.3.6 Подготовка стромального подслоя для сокультивирования с пкМНК

2.3.7 Первичная культура пкМНК

2.3.8. Культивирование гемопоэтических клеток в полужидкой среде 49 MethoCult Н4034

2.3.9. Совместное культивирование пкМНК и жтММСК

2.4. Схема исследования

2.5. Методы исследования

2.5.1. Микроскопия

2.5.2. Проточная цитофлуориметрия

2.5.3. Иммуноцитохимическое окрашивание клеток

2.5.4. Выявление апоптотических и некротических клеток

2.5.5. Определение жизнеспособности методом Live/Dead

2.5.6. Окрашивание по Гимзе

2.5.7. Выявление КОЕ

2.5.8. Выявление КООБ

2.5.9. Определение количества хемокинов в среде культивирования

2.6. Статистическая обработка результатов

Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ

3.1 Разработка методических подходов для обогащения мононуклеарной

фракции пкМНК ранними недифференцированными предшественниками гемопоэза

3.1.1. Характеристика исходной популяции пкМНК

3.1.2. Культивирование пкМНК без стромального подслоя

3.1.3. Использование жтММСК в качестве стромального подслоя для 64 культивирования пкМНК

3.1.4. Экспансия пкМНК в совместной культуре с жтММСК

3.2. Взаимодействие пкМНК с жтММСК при концентрациях кислорода,

близких к тканевым

3.2.1. Динамика прикрепления, жизнеспособность и механизмы клеточной

гибели пкМНК

3.2.2. Морфологическая характеристика пкМНК, сокультивируемых с 72 жтММСК

3.2.3. Субиопуляционный состав неприкрепленных пкМНК после 74 сокультивирования с жтММСК

3.2.4. Выявление КОЕ среди пкМНК после сокультивирования с жтММСК

3.2.5. Хемокиновый профиль монокультур пкМНК и жтММСК в 80 зависимости от концентрации кислорода

3.2.6. Влияние сокультивирования пкМНК и жтММСК при различном 81 содержании кислорода на концентрацию хемокинов в кондиционированной среде

3.3. Экспансия гемопоэтических клеток пуповинной крови на подслое из

жтММСК при различном содержании кислорода

3.3.1. Культура, образованная адгезирующей фракцией пкМНК: 84 жизнеспособность и морфологическая характеристика

3.3.2. Иммунофенотипический анализ суспензионной фракции клеток, 86 образованной адгезирующей фракцией пкМНК

3.3.3. Колониеобразующая способность суспензионной и адгезированной к 87 подслою жтММСК фракции клеток пкМНК

3.3.4. Выявление клеток, способных формировать области «булыжной 89 мостовой» (КООБ), при совместном культивировании пкМНК с жтММСК

3.3.5. Хемокиновый профиль монокультур пкМНК и жтММСК

3.3.6. Сравнительный анализ продукции хемокинов в культуре, 94 образованной адгезирующей фракцией пкМНК в условиях различного содержания кислорода

Глава 4. ОБСУЖДЕНИЕ

ВЫВОДЫ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

CD (cluster of differentiation) - кластер дифференцировки FITC (fluorescein isothyocyanate) - флуоресцеин-изотиоцианат

G-CSF (granulocyte colony-stimulating factor) - гранулоцитарный колониестимулирующий фактор

HIF (hypoxia-inducible factors) - гипоксия-индуцибельный фактор ICAM-1 (intercellular adhesion molecule 1) - молекула межклеточной адгезии-1 IFN-y (interferon- у) - интерферон-у IL-8 (interleukin-8) - интерлейкин

LTC-IC (long-term culture-initiating cells) - клетки, способные длительно поддерживать гемопоэз в культуре

MIG (monokine induced by interferon у) - монокин, индуцированный интерфероном-у MIP-la (macrophage inflammatory protein-1а) - макрофагальный белок воспаления а MIP-lp (macrophage inflammatory protein- lp) - макрофагальный белок воспаления р МСР-1 (macrophage chemotactic protein-1) - моноцитарный хемотаксический фактор-1 PCNA (proliferating cell nuclear antigen) - ядерный антиген пролиферирующих клеток РЕ (phycoerythrin) - фикоэритрин

TGF-P (transforming growth factor Р) - трансформирующий фактор роста-р

VCAM-1 (vascular cell adhesion molecule 1) - молекула адгезии клеток сосудов-1

аМЕМ (Minimum Essential Medium Eagle Alpha) - минимальная среда Игла (альфа

модификация)

БОЕ-Э - бурстобразующая единица эритроцитов

БСА - бычий сыворотный альбумин

ГСК - гемопоэтические стволовые клетки

ДМСО - диметилсульфоксид

ЕК-клетки - естественные клетки-киллеры

жтММСК - мультипотентные мезенхимальные стромальные клетки, выделенные из стромально-васкулярной фракции жировой ткани КМ - костный мозг

кмММСК - мультипотентные мезенхимальные стромальные клетки, выделенные из костного мозга

КОЕ - колониеобразующая единица КОЕ-Г - КОЕ гранулоцитов

КОЕ-ГМ - КОЕ гранулоцитов и моноцитов/макрофагов

КОЕ-ГЭММ - КОЕ гранулоцитов, эритроцитов, моноцитов/макрофагов и мегакариоцитов

5

КОЕ-М - КОЕ моноцитов/макрофагов

КООБ - клетка, образующая области «булыжника»

КРКМ - клетки репопулирующие костный мозг

ММСК - мультипотентные мезенхимальные стромальные клетки

МНК - мононуклеарные клетки

НССК - недифференцированные соматические стволовые клетки

ПИ - пропидия йодид

ПК - пуповинная кровь

пкМНК - мононуклеары пуповинной крови

ФБ - фосфатно-солевой буфер

ФДА - диацетат флуоресцеина

ЭПК - эндотелиальные прогениторные клетки

ЭТС - эмбриональная телячья сыворотка

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Роль кислорода в межклеточном взаимодействии гемопоэтических стволовых и мезенхимальных стромальных клеток in vitro»

ВВЕДЕНИЕ

Судьбу гемопоэтических стволовых клеток (ГСК) определяет кроветворная ниша, расположенная в костном мозге (Schofield et al., 1978). Клеточные и неклеточные компоненты микроокружения поддерживают состояние покоя, деления, самообновления или дифференцировки ГСК. Известно, что в костном мозге более примитивные гемопоэтические клетки находятся при 1-2% кислорода в окружении остеобластов и клеток стромы, в то время как более зрелые предшественники расположены в сосудистой нише, где уровень кислорода выше (Parmar et al., 2007). Показано, что в условиях in vitro содержание кислорода может влиять на гемопоэтические клетки, оказывая существенный эффект на предшественников одного уровня иерархии и оставаясь индифферентным для других (Cipolleschi et al., 1993).

Известно, что свойства стромальных клеток - основного клеточного компонента костномозговой ниши, также зависят от уровня кислорода. В опытах in vitro показано, что при гипоксии увеличивается их пролиферативная активность и число КОЕ-Ф, замедляется дифференцировка в остео- и адипогенном направлении, а в хондрогенном усиливается (Буравкова и др., 2009; Grayson et al., 2007; Fehrer et al., 2007). К сожалению, влиянию концентрации кислорода на взаимодействие гемопоэтических и стромальных клеток до сих пор уделяется недостаточно внимания. В нашей лаборатории впервые было показано, что при совместном культивировании мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток (ММСК) из костного мозга и ГСК происходит увеличение продукции медиаторов, опосредующих взаимодействие гемопоэтичеких и стромальных клеток (Жамбалова и др., 2009). В более поздних работах других авторов продемонстрировано, что, в отличие от стандартных условий культивирования, низкие концентрации кислорода способствуют поддержанию ранних гемопоэтических клеток, находящихся в состоянии покоя (Hammoud et al., 2011; Jing et al., 2012).

Большая часть исследований по взаимодействию ММСК и ГСК до недавнего времени проводилась на стромальных и гемопоэтических предшественниках, выделенных из костного мозга (Arai & Suda, 2007; Valtieri & Sorrentino, 2008). В результате было показано, что ММСК, использованные в качестве фидерного подслоя, могут существенным образом влиять на сокультивируемые с ними ГСК, в частности, изменяя соотношение коммитированных и малодифференцированных предшественников, обеспечивающих длительное восстановление кроветворения (Петрова и др., 2006; Moore et al., 1997; Punzel et al., 2003; McNiece et al., 2004; Freund et al., 2006; Hofmeister et al., 2007; Wagner et al., 2007). ММСК из жировой ткани человека (жтММСК), также как и

ММСК из костного мозга (кмММСК) могут поддерживать гемопоэз in vitro (Corre et al., 2006). Однако, несмотря на близкое сходство, ММСК из жировой ткани с меньшей эффективностью, чем ММСК из других источников способствуют пролиферации примитивных гемопоэтических предшественников (Wagner et al., 2007). Аналогичные результаты получены и в других работах, где показано, что при сокультивировании ГСК и ММСК из жировой ткани образуется меньшее количество CD34+ клеток, чем при сокультивировании с костномозговыми ММСК (Kirloy et al., 2007; de Toni et al., 2011). С другой стороны, ММСК из жировой ткани способствуют дифференцировке ГСК и более эффективно поддерживают дифференцированные гемопоэтические предшественники (Nakao et al., 2010).

Как альтернативу гемопоэтическим клеткам костного мозга в последнее время все чаще используют мононуклеары пуповинной крови (пкМНК) (Maniani et al., 1998). Несмотря на то, что это перспективный и легкодоступный источник ГСК, существенным недостатком применения в клинике является ограниченное количество стволовых клеток. С целью обогащения ранними гемопоэтическими предшественниками используют различные варианты культивирования клеток пуповинной крови (Bridell et al., 1997, Mayani et al., 1998, McNiece et al., 2004). Основное внимание исследователей при этом сосредоточено на подборе компонентов ростовых сред и методов изоляции малодифференцированных клеток. Между тем, в большинстве существующих моделей культивирования ГСК из пуповинной крови остается недооцененной роль локального микроокружения: взаимодействия со стромальными элементами, паракринной регуляции и концентрации кислорода.

Несмотря на проведение большого количества исследований, направленных на изучение межклеточных взаимодействий в тканевой нише гемопоэтических клеток, конкретные пути реализации влияния ниши на стволовые клетки до сих пор остаются нераскрытыми. Изучение особенностей взаимодействия гемопоэтических и стромальных клеток в условиях тканевых концентраций кислорода позволит расширить представления о влиянии факторов микроокружения на регуляцию гемопоэза, а также может использоваться в дальнейшем при разработке методик обогащения стволовыми и прогениторными клетками трансплантатов кроветворной ткани.

Цель работы: Сравнительное изучение особенностей межклеточного взаимодействия мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток и гемопоэтических стволовых клеток в условиях различного содержания кислорода.

В соответствии с указанной целью были поставлены следующие задачи

исследования:

1) разработать экспериментальную модель для получения адгезирующих малодифференцированных предшественников пкМНК с использованием жтММСК;

2) оценить влияние сокультивирования с жтММСК при различном содержании кислорода на адгезирующую и суспензионную фракции пкМНК;

3) охарактеризовать функциональные и фенотипические особенности гемопоэтических клеток, образующихся из адгезирующей к жтММСК фракции пкМНК;

4) оценить влияние сокультивирования с жтММСК и различных концентраций кислорода на продукцию паракринных медиаторов пкМНК и полученными из них малодифференцированными гемопоэтическими предшественниками.

Научная новизна

Разработана и апробирована модель совместного культивирования жтММСК и пкМНК, в которой способность адгезирующей фракции пкМНК к экспансии оценивается при культивировании в отсутствие суспензионной фракции.

Впервые показано, что жтММСК в диапазоне концентраций кислорода 1-5-20% в среде при совместном культивировании могут эффективно поддерживать жизнеспособность пкМНК, в том числе малодифференцированных предшественников.

Впервые показано, что адгезирующая к жтММСК фракция пкМНК способна генерировать популяцию клеток, обогащенную гемопоэтическими предшественниками разной степени коммитированности.

Установлено, что в условиях пониженного содержания кислорода из пкМНК образуется большее количество гемопоэтических колоний, а также изменяется соотношение колониеобразующих единиц (КОЕ): увеличивается доля унипотентных (КОЕ-Г и КОЕ-М) и уменьшается доля мульти- и бипотентных (КОЕ-ГЭММ и КОЕ-ГМ). После кратковременного сокультивирования пкМНК с жтММСК этот эффект более выражен.

Получены новые данные, свидетельствующие о том, что при сокультивировании пкМНК и жтММСК происходит изменение профиля продуцируемых хемокинов 1Ь-8,

MIP-lp и MCP-1, опосредующих взаимодействие клеток. Показано, что степень этого изменения может зависеть от уровня кислорода в среде культивирования.

Теоретическая и практическая значимость работы

Полученные результаты вносят значительный вклад в существующие представления о влиянии факторов микроокружения на гемопоэтические клетки. Было показано, что жтММСК эффективно поддерживают экспансию гемопоэтических предшественников из пкМНК различной степени коммитированности в пределах 1-20% кислорода. При тканевых концентрациях кислорода среди пкМНК выявлялось больше КОЕ и изменялся их субпопуляционный состав, что приводило к увеличению доли унипотентных (КОЕ-Г и КОЕ-М) и уменьшению доли мульти- и бипотентных (КОЕ-ГЭММ и КОЕ-ГМ).

Впервые для исследования роли кислорода во взаимодействии гемопоэтических и стромальных клеток был использован методический подход, основанный на сокультивировании пкМНК и жтММСК. Проведенное исследование позволило продемонстрировать, что использование жтММСК в качестве стромального подслоя и варьирование содержания кислорода в среде культивирования пкМНК могут быть использованы как факторы, модулирующие свойства гемопоэтических клеток, получаемых при экспансии. Заявка на патент №2013112801 от 22.03.2013 «Способ экспансии мононуклеарных клеток пуповинной крови (пкМНК) ex vivo в присутствии мультипотентных стромальных мезенхимальных клеток (ММСК)».

Положения, выносимые на защиту

1. Разработан методический подход, в котором адгезировавшие к жтММСК пкМНК в отсутствие суспензионной фракции способны генерировать популяцию предшественников разной степени коммитированности.

2. При пониженном содержании кислорода (1% и 5%) в сокультуре пкМНК и жтММСК увеличивается общее количество КОЕ и изменяется их субпопуляционный состав, что проявляется в увеличении доли унипотентных (КОЕ-Г и КОЕ-М) и уменьшению доли мульти- и бипотентных (КОЕ-ГЭММ и КОЕ-ГМ).

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Понятие ниши стволовых клеток

Концепция ниши, как специфического микроокружения, модулирующего поведение стволовых клеток, была предложена Шофилдом в 1978 году, что дало начало бурно развивающейся сегодня области исследования ниш стволовых клеток (Schofield et al., 1978). Нишу принято рассматривать как анатомическую субъединицу тканевого компартмента, состоящую из взаимосвязанных клеточных и неклеточных компонентов, регулирующих биологию стволовых клеток (Li & Xie, 2005; Scadden et al., 2006; Yin & Li, 2006; Jones & Wagers, 2008). Различные типы клеток, кровеносные сосуды, тканевой матрикс формируют трехмерное пространство, обеспечивающие специфическую архитектуру, все это создает уникальное микроокружение для стволовых клеток (Scadden et al., 2006). Контакт и взаимодействие между всеми элементами играет важную роль в поддержании самообновления и мультипотентности стволовых клеток.

В костном мозге располагается кроветворная ниша, где образуются все типы клеток крови, проходя поэтапное развитие. Гемопоэтические стволовые клетки (ГСК), способные к самоподдержанию, находятся на первом уровне в иерархии и дают начало всем клеткам крови. ГСК могут быть идентифицированы и выделены с помощью многопараметрической проточной цитометрии (FACS) по фенотипу Lin'Sca 1 hic-Kit+CD3 4" CD48"CD150hi. На клональном уровне они способны восстановить всю кроветворную систему у летально облученных мышей даже при серийной трансплантации (Purton et al., 2007; Wilson et al., 2008). Популяция ГСК содержит две субпопуляции. Первые, активные ГСК, обеспечивают физиологическое непрерывное производство новых клеток крови. Вторые, малочисленная популяция ГСК, обладают большим потенциалом к самообновлению и находятся в состояние покоя (покоящиеся ГСК). В ответ на стресс-сигналы ниша активирует эти клетки, и они вовлекаются в процесс восстановления после травмы (Wilson et al., 2008; Takizawa et al., 2011; King & Goodell, 2011). Точных данных о преимущественном расположении субпопуляций ГСК в костном мозге пока нет, из-за чего в научном сообществе возникают дискуссии.

1.2. Факторы микроокружения в нише гемопоэтических стволовых клеток

В результате значительного числа исследований, посвященных изучению влияния ниши на стволовые клетки и их потомков - малодифференцированных предшественников,

сформировалось представление о факторах микроокружения, которые можно разделить на две большие категории. К первой относятся эффекты, определяющиеся прямыми взаимодействиями клетка-клетка (межклеточные взаимодействия между стволовыми клетками и их потомками с клетками стромы или зрелыми клетками крови). Вторая категория включает влияние неклеточных факторов: соединительно-тканного матрикса, биологически активных медиаторов, уровня кислорода, кальция и другие.

1.2.1. Клеточные факторы

Различные типы клеток участвуют в регуляции развития гемопоэтических клеток, однако, как было показано, ключевую роль в формировании гемопоэтического микроокружения играют клетки стромального гистогенетического ряда (Ziegler et al., 1999; Pelosi et al., 2002; Kiel et al., 2005; Kiel & Morrison, 2008; Morrison & Spradling, 2008). В костном мозге выделяют три клеточных компартмента гемопоэтической ниши. Два из них представлены клетками, относящимися к стромальному дифферону: остеобластическая ниша (Calvi et al., 2003), где ГСК располагаются в тесном контакте с эндостом, и ретикулярная стромальная ниша (Sacchetti et al., 2007), в которой ГСК локализуются в непосредственной близости с ретикулярными стромальными клетками. Третья ниша сформирована сосудистыми/синусоидальными эндотелиальными клетками, в ней ГСК находятся в прямой связи с эндотелиальными клетками в венозной части синусоидов (Kiel et al., 2005). Также участвуют в формировании гемопоэтической ниши остеокласты, мегакариоциты, мезенхимальные клетки-предшественники, адипоциты и другие клетки (Kiel et al., 2005). Из-за близкого анатомического расположения этих клеток в пределах трабекулярной кости они тем или иным образом принимают участие в регуляции ГСК. Стоит отметить, что ниши в пределах костного мозга неотделимы и взаимосвязано участвуют в поддержании гемопоэтических клеток.

Первыми клетками, идентифицированными как компонент гемопоэтической ниши, были остеобласты. На моделях трансгенных и нокаутных мышей была продемонстрирована роль остеобластных клеток в поддержании ГСК. В частности, при экспрессии в остеобластных клетках нескольких трансгенов, ответственных за усиление костеобразования, происходило увеличение количества ГСК в костном мозге (Calvi et al., 2003; Zhang et al., 2003). В ходе многолетних исследований было показано, что основная часть примитивных ГСК располагается в костном мозге преимущественно в области эндоста. Гемопоэтические клетки с фенотипом Lin"Scal+Kit+CD48'CD150+, расположенные в эндостальной области эпифиза бедренной кости, обладают

способностью к высокоэффективному хомингу и большим пролиферативным потенциалом in vitro, чем фенотипически аналогичные гемопоэтические клетки, выделенные из центральной части костного мозга диафза бедренной кости (Grassinger et al., 2010). Тем не менее, в некоторых работах показано, что изменения в зрелых остеобластах не всегда отражаются на развитии клеток крови. Хронические воспалительные артриты (Ma et al., 2009), лечение с использованием стронция (Lymperi et al., 2008) или мутации (Kiel et al., 2007; Raaijmakers et al., 2010), которые влияют на зрелые остеобласты, не оказывают эффекта на более примитивные предшественники и не изменяют количество и физиологическую активность ГСК. Это свидетельствует о том, что в поддержании ГСК in vivo участвуют наиболее примитивные остеобластические предшественники. Условный нокаут по гену Dicer-1, который отвечает за синтез микроРНК, в частности, у остеобластических предшественников, вызывает панцитопению периферической крови и дисплазию костного мозга с увеличением пролиферации и апоптоза гемопоэтических стволовых клеток и их потомков, в то время как тот же нокаут в зрелых остеобластах не имеет такого эффекта (Raaijmakers et al., 2010). В попытке точно определить какие клетки остеобластического ростка участвуют в поддержании гемопоэза, были предложены несколько кандидатов. Основываясь на выборочной экспрессии антигенов Sca-1 и ALCAM/CD166 негемопоэтическими и неэндотелиальными клетками костного мозга с фенотипом CD45-Terll9-CD31-, были определены остеохондро- и остеопредшественники, а также ММСК, все они поддерживали экспансию длительно репопулирующих гемопоэтических стволовых клеток in vitro (Nakamura et al., 2010).

В недавних исследованиях были выявлены и другие клетки костномозгового микроокружения, вовлеченные в регуляцию ГСК (рис. 1).

■Osteomac

• Nestin* АЖ Schwann- I Cell Nestm MSC

Sinusoid

LepR+ stromal cell

Osteoblast

CXCL12

Endothelial Cell

Bone

Bone marrow

Рис. 1. Взаимодействия различных типов клеток в гемопоэтической нише (из обзора Lander et al., 2012, «What does the concept of the stem cell niche really mean today?» BMC Biology 2012, 10:19).

Так, состояние покоя у «спящих» ГСК (dormancy HSC) поддерживается трансформирующим фактором роста-В (TGF-B) и тромбопоэтином (ТРО), которые экспрессируют нестин+ немиелинизированные Шванновские клетки (nestW Schwann cells) и остеобласты (osteoblasts), соответственно. Фактор стволовых клеток (SCF), необходимый для поддержания ГСК, в основном продуцируется стромальными клетками, экспрессирующими рецептор к лептину (LepR+ stromal cells), а также нестин'-мезенхимальными стромальными клетками (nestin+ MSC) и синусоидальными эндотелиальными клетками. Клетки симпатической нервной системы (SNS) оказывают негативное влияние на нестин+ мезенхимальные стромальные клетки. Ретикулярные клетки, обильно экспрессирующие CXCL12 (CAR), продуцируют хемокин CXCL12, который облегчает привлечение и приживление гемопоэтических клеток, аналогично высокому содержанию кальция (Са2+) в области эндостальных остеобластов. Относительно четырех популяций клеток стромы, выделенных зеленым цветом, нет однозначного представления (Lander et al., 2012).

Было показано, что костные макрофаги (osteomacs) совместно с остеобластами регулируют приживление ГСК, а также их мобилизацию, индуцированную гранулоцитарным колониестимулирующим фактором (Ehninger & Trumpp, 2011). Другие

клетки костномозговой ниши удалось определить с использованием knock-in мышей, у которых зеленый флуоресцентный белок (GFP) был генетически вставлен в гены, предположительно экспрессирующиеся в клетках ниши. Удалось установить, что ГСК частично связаны с ретикулярными клетками, обильно экспрессирующими CXCL12 (CXCL12-abundant reticular (CAR) cells) (Omatsu et al., 2010). CAR-клетки являются адипо-остеогенными предшественниками. In vivo абляция CAR клеток приводит к 50% снижению способности репопулирования костного мозга, замедлению клеточного цикла и увеличению экспресии маркеров миелоидного ростка PU.1 и c-fms у ГСК (Omatsu et al., 2010). Некоторые CAR-клетки являются частью небольшой популяции нестин+-стромальных клеток, в которую также входят ММСК (Mendez-Ferrer et al., 2010). CAR клетки также, как и нестин+-ММСК являются основными источниками CXCL12 и Kit лиганда в костном мозге. Кроме того, ММСК экспрессируют высокий уровень ангиопоэтина-1 и VCAM-1, необходимых для поддержания ГСК (Omatsu et al., 2010; Mendez-Ferrer et al., 2010).

Активность нестин+ ММСК, по крайней мере частично, регулируется сигналами, поступающими от макрофагов и симпатических нервных окончаний. Экспрессирующие глиальный фибриллярный кислый белок Шванновские клетки симпатической нервной системы были также обнаружены в популяции нестин+-стромальных клеток, хотя они и имеют явные отличия от ММСК (Yamazaki et al., 2010). Стоит подчеркнуть, что Шванновские клетки могут модифицировать неактивный TGF-B в активный TGF-B, который, в свою очередь, активирует рецептор TGF-B2 типа (RII), экспрессирующийся у ГСК, что может играть немаловажную роль в регуляции их функциональной активности. Непосредственная связь между нестин-экспрессирующими ММСК и Шванновскими клетками и какое участие они принимают в судьбе ГСК, остается пока неясным.

Нужно отметить, что мезенхимальные стромальные клетки впервые были получены из стромы костного мозга, а затем обнаружены практически во всех тканях организма. А.Я. Фриденштейн и соавторы первыми показали существование клеток, образующих in vitro клональные колонии фибробластов, способных дифференцироваться в костную и хрящевую ткани. Эта группа исследователей также впервые продемонстрировала важную роль стромальных клеток костного мозга в поддержании гемопоэза. Было обнаружено, что при трансплантации клеток костного мозга под капсулу почки, происходит формирование структур повторяющих гистологические особенности кости. В данных структурах происходит развитие клеток крови, при этом строма, поддерживающая гемопоэз, происходит от донорских клеток, а гемопоэтические

предшественники, ее заселяющие, - от реципиента (Friedenstein et al., 1966, 1974, 1976, 1987).

Используя трансгенных мышей, имеющих GFP под промотером нестина, группа Paul Frenette получила убедительное доказательство того, что стромальные клетки, экспрессирующие белок промежуточного филамента нестина, являются мультипотентными мезенхимальными стромальными клетками с адипо-, хондро- и остеогенным потенциалом in vivo и in vitro, и что эти нестин+-ММСК участвуют в поддержании ГСК в костном мозге (Mendez-Ferrer et al., 2010). In vivo абляция нестин+-ММСК приводит к 50% снижению фенотипически мультипотентных гемопоэтических предшественников и ГСК, а также к их миграции в селезенку. Абляция нестин+-ММСК в костном мозге реципиентов снижает хоминг трансплантируемых гемопоэтических предшественников на 90%, что показывает важную роль нестин+-ММСК в функционировании гемопоэтической ниши. Около 60% нестин+-ММСК располагаются совместно с ГСК, имеющими фенотип Lin"CD48"CD150+, что также свидетельствует в пользу их участия в поддержании гемопоэза (Mendez-Ferrer et al., 2010).

Таким образом, различные клетки остеогенного дифферона участвуют в поддержании гемопоэтической ниши, включая как малодифференцированные мультипотентные мезенхимальные клетки с адипо-, остео- и хондрогенным потенциалом так и остеопредшественники, экспрессирующие остеобластный линейно-специфический фактор транскрипции Osterix (Omatsu et al., 2010; Nakamura et al., 2010; Raaijmakers et al., 2010). Интересно, что большинство нестин+ ММСК были обнаружены в периваскулярной области, вокруг эндотелиальных клеток сосудов, как в эндостальном регионе, так и в центральной области костного мозга (Mendez-Ferrer et al., 2010).

В последнее время все больше внимания уделяется изучению роли периваскулярного компартмента в развитии гемопоэтических клеток. Показано, что локальное удаление эндостальной ниши путем местного облучения радиоизотопом Sr89 приводит к перемещению очага гемопоэза из костного мозга в более васкуляризированный орган - селезенку (Klassen et al., 1972). Известно, что во время эмбрионального периода эндотелиальные клетки участвуют в гемопоэзе. Роль эндотелиальных клеток в регуляции и поддержании ГСК in vitro была показана с использованием взрослых и эмбриональных клеток. Сокультивирование клеток костного мозга взрослого человека с эндотелиальными клетками головного мозга (human brain endothelial cells - HUBEC) увеличивает способность гемопоэтических клеток репопулировать костный мозг SCID мышей (Chute et al., 2002). Аналогичным образом совместное культивирование CD34+ клеток костного мозга человека с микрососудистыми

эндотелиальными клетками свиней приводит к экспансии ex vivo клеток, способных эффективно восстанавливать гемопоэз у SCID мышей (Brandt et al., 1998). Эндотелиальные клетки (Tie2-GFP+Flk-1+CD41"), формирующиеся первыми в эмбриогенезе и получаемые из желточного мешка и аорто-гонадного мезонефроса Е9.5, также увеличивают в 9,4 и 11,4 раза, соответственно, экспансию гемопоэтических предшественников, а также клеток, способных длительно поддерживать кроветворение (Li et al., 2003).

Интересно, что эндотелиальные клетки, полученные из различных тканей, отличаются по способности поддерживать ГСК in vitro. Так, Tie2-GFP эндотелиоциты, выделенные из негемопоэтических тканей взрослой мыши, в том числе мозга, сердца, легкого, печени и почки, культивировали совместно с ГСК. Было показано, что эндотелиальные клетки сердца и печени могут поддерживать гемопоэтические клетки, способные долгосрочно репопулировать, однако, эндотелиальные клетки почки были не эффективны даже в присутствии экзогенных гемопоэтических факторов (Li et al., 2004).

Сосуды костного мозга уникальны по профилю экспрессируемых молекул адгезии. Было показано, что эндотелиальные клетки костного мозга экспрессируют Е-селектин, Р-селектин и VCAM1 - молекулы адгезии, которые не экспрессируют другие эндотелиальные клетки в условиях нормального гомеостаза, но экспрессируют в ответ на воспаление (Mazo et al., 1998). При исследовании костей свода черепа было продемонстрировано, что сосуды костного мозга содержат уникальные регионы, обнаруживающие высокую экспрессию Е-селектина и SDF, которые, как было показано, участвуют в хоминге циркулирующих ГСК. Существуют ли подобные области васкуляризации в длинных костях пока не установлено. Эндотелиальные клетки в костном мозге экспрессируют некоторые ГСК-регулирующие белки, в частности, CXCL12, VCAM-1, Kit-лиганд, ангиопоэтин-1, аннексии II и TIMP-3 (Levesque et al., 2010; Shen et al., 2010). SDF-1 и CXCL12 наиболее изученные цитокины, экспрессирующиеся эндотелиальными клетками костного мозга (Sipkins et al., 2005), а также остеобластами, ММСК (Ponomaryov et al., 2000) и CAR клетками (Sugiyama et al., 2006). Низкое парциальное давление кислорода в костном мозге способствует конститутивной экспрессии SDF-1, опосредуемой фактором транскрипции HIF-1 (Ceradini et al., 2004). SDF-1 и CXCL12 управляют миграцией и интегрин-опосредованным взаимодействием с ГСК посредством CXCR4 рецептора. У мышей дефицитных по SDF-1 и CXCR4, показано отсутствие гемопоэза в костном мозге в эмбриональный период (Ara et al., 2003), при том, что нормальный гемопоэз происходит в печени. Кроме того, иммортализованные эндотелиальные клетки могут поддерживать экспансию долго-живущих репопулирующих

ГСК in vitro (Butler et al., 2010). Хотя эндотелиальные клетки человека, иммортализованные вирусной конструкцией, существенно отличаются от нормальных синусоидальных эндотелиальных клеток костного мозга, эти результаты наглядно демонстрируют, что некоторые эндотелиальные клетки могут непосредственно поддерживать самообновление ГСК. В исследовании in vivo эти же авторы показали, что синусоидальные эндотелиальные клетки костного мозга экспрессируют VEGFR2 и VE-кадгерин (Hooper et al., 2009), и при блокировании in vivo антителами против этих молекул не происходит восстановление гемопоэза после сублетального облучения (Butler et al., 2010). Это свидетельствует о том, что синусоидальные эндотелиальные клетки в периваскулярной нише также играют важную роль в регуляции пролиферации ГСК in vivo. В свою очередь, это совпадает с наблюдением, что ГСК в более перфузируемых нишах, которые предположительно являются периваскулярными, размножаются быстрее, чем ГСК в плохо перфузируемых нишах (Winkler et al., 2010). Очевидно, что синусоидальные эндотелиальные клетки костного мозга напрямую регулируют активность ГСК, принимая непосредственное участие в работе периваскулярной ниши через специфические эндотелиальные взаимодействия.

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Маслова, Елена Викторовна, 2013 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Анисимов C.B. Ксеногенные риски в применении стволовых клеток // Цитология. - 2012. - Т. 54. - №4. - С. 289-297.

2. Буравкова Л.Б., Гринаковская О.С., Андреева Е.Р. и др. Характеристика мезенхимальных стромальных клеток из липоаспирата человека, культивируемых при пониженном содержании кислорода. // Цитология. - 2009. - Т. 51. - № 1. - С. 5-12.

3. Дмитриева Р.И., Анисимов C.B. Возможности экспансии гемопоэтических стволовых клеток in vitro // Цитология. - 2013. - Т. 55.-№ 1.-С. 11-15

4. Жамбалова А.П., Даревская А.Н., Кабаева Н.В. и др. Особенности взаимодействия культивируемых мезенхимальных и гемопоэтических стволовых клеток человека в условиях пониженного содержания кислорода // Клеточные технологии в биологии и медицине. - 2009. - №2. - С. 89-95.

5. Паюшина О.В., Домарацкая Е.И., Старостин В.И. Мезенхимные стволовые клетки: источникик, фенотип и потенции к дифференцировке // Известия Российской академии наук, серия биологическая. - 2006. - №1. - С. 6-25.

6. Петёвка Н.В., Гончарова Н.В., Северин И.Н. и др. Пролиферация и дифференцировка предшественников миелоидного ростка кроветворения пуповинной крови человека при экспансии in vitro Н Клеточная трансплантология и тканевая инженерия. - 2012. - Т: 7. - №1. - С. 40^8.

7. Петрова Т.Е., Свинарева Д.А., Нифонтова К.Н и др. Стромальная регуляция стволовых кроветворных клеток в длительных культурах костного мозга человека под действием паратиреоидного гормона // Клеточные технологии в биологии и медицине. - 2006. - № 4. - С. 218-222.

8. Уфимцева А.И., Канов Е.В. Характеристика и ex vivo экспансия гемопоэтических стволовых и прогениторных клеток пуповинной крови // Клеточная трансплантология и тканевая инженерия. - 2012. -T. VII. - №4. - С. 21-27

9. Буравкова Л.Б., Андреева Е.Р., Григорьев А.И. Роль кислорода как физиологического фактора микроокружения в проявлении функциональных

свойств мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток человека // Физиология человека. - 2012. - Т. 38. - № 4. - С. 1-10.

10. Грииаковская О.С., Андреева Е.Р., Буравкова Л.Б. и др. Пониженное содержание С>2 замедляет коммитирование культивируемых мезенхимальных стромальных клеток-предшественников из жировой ткани в ответ на остеогенные стимулы. // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 2009. - Т. 147. - № 6. - С. 704-707.

11. Мусина P.A., Бекчанова Е.С., Белявский A.B. и др. Мезенхимальные стволовые клетки пуповинной крови. // Клеточные технологии в биологии и медицине. - 2007. -№1. - С. 16-20.

12. Останин A.A., Петровский Я.Л., Шевелева Е.Я. и др. Мультиплексный анализ цитокинов, хемокинов, ростовых факторов, ММР-9 и TIMP-, продуцируемых мезенхимальными сромальными клетками костного мозга, жировой ткани и плаценты человека // Клеточные технологии в биологии и медицине. - 2011. - № 1. -С. 29-37

13. Романов Ю.А., Даревская А.Н., Кабаева Н.В. и др. Выбор оптимальных условий культивирования мезенхимальных клеток-предшественников костного мозга и жировой ткани человека // Клеточные технологии в биологии и медицине. - 2006. -№4. -С. 206-211.

14. Тепляшин A.C., Коржикова C.B., Шарифуллина С.З. и др. Характеристика мезенхимальных стволовых клеток человека, выделенных из костного мозга и жировой ткани // Цитология. - 2005. - Т. 47. - № 2. - С. 130-135.

15. Шахпазян Н.К., Астрелина Т.А., Яковлева М.В. Мезенхимальные стволовые клетки из различных тканей человека: биологические свойства, оценка качества и безопасности для клинического применения // Клеточная трансплантология и тканевая инженерия. - 2012. - Т. 7. - № 1. - С. 23-33.

16. Лупатов А.Ю., Каралкин П.А., Суздальцева Ю.Г. и др. Цитофлюориметрический анализ фенотипов фибробластоподобных клеток из костного мозга и пуповины человека // Клеточные технологии в биологии и медицине. - 2006. - № 4. - С. 212217.

17. Буравкова Л.Б., Рылова Ю.В., Гальчук С.В. и др. Особенности метаболизма и экспрессии генов ММСК из жировой ткани человека, культивируемых при различном содержании кислорода. // Стволовые клетки и регенеративная медицина // Под ред. В.А. Ткачука. М.: Макс Пресс. - 2011. - С. 113-130.

18. Повещенко О. В., Повещенко А. Ф., Коненков В. И. Эндотелиальные прогениторные клетки и неоваскулогенез // Успехи современной биологии. - 2012. -Т. 132 -№1._ С. 69-76.

19. Abedin М, Tintut Y, Demer LL. Mesenchymal stem cells and the artery wall // Circ Res. - 2004. - Vol. 95 - №7 - P. 671-6.

20. Adams GB, Chabner KT, Alley IR et al. Stem cell engraftment at the endosteal niche is specified by the calcium-sensing receptor // Nature. - 2005. - Vol. 439 - P. 599-603

21. Ahmed N, Sammons J, Carson RJ, et al. Effect of bone morphogenetic protein-6 on haemopoietic stem cells and cytokine production in normal human bone marrow stroma // Cell Biol Int. - 2001. - Vol. 25 - P. 429-35.

22. Andrade PZ, de Soure AM, Dos Santos F, et al. Ex vivo expansion of cord blood haematopoietic stem/progenitor cells under physiological oxygen tensions: clear-cut effects on cell proliferation, differentiation and metabolism // J Tissue Eng Regen Med. -2013 - опубликована онлайн в Wiley Online Library (wileyonlinelibrary.com): doi: 10.1002/term. 1731.

23. Ara T, Tokoyoda K, Sugiyama T, et al. Long-term hematopoietic stem cells require stromal cell-derived factor- 1 for colonizing bone marrow during ontogeny // Immunity -2003.-Vol. 19.-P. 257-267.

24. Au P, Daheron LM, Duda DG, et al. Differential in vivo potential of endothelial progenitor cells from human umbilical cord blood and adult peripheral blood to form functional long-lasting vessels // Blood. - 2008. - Vol. 111. - № 3. - P. 1302-1305.

25. Awad O, Dedkov EI, Jiao C, et al. Differential healing activities of CD34+ and CD 14+ endothelial cell progenitors //Arterioscler Thromb Vase Biol. - 2006. - Vol. 26. - № 4. -P. 758-764.

26. Barker JN, Weisdorf DJ, DeFor TE, et al. Rapid and complete donor chimerism in adult recipients of unrelated donor umbilical cord blood transplantation after reduced-intensity conditioning//Blood.-2003.-Vol. 102.- №5. -P. 1915-1919.

27. Basciano L., Nemos C., Foliguet B. et al. Long term culture of mesenchymal stem cells in hypoxia promotes a genetic program maintaining their undifferentiated and multipotent status // BMC Cell Biology. - 2011. - Vol. 12. - № 1. - P. 12-24.

28. Basford C, Forraz N, McGuckin C. Optimized multiparametric immunophenotyping of umbilical cord blood cells by flow cytometry // Nat Protoc. - 2010. - Vol. 5 - №7. -P. 1337-1346.

29. Bieback K, Kern S, Kluter H, et al. Critical parameters for the isolation of mesenchymal stem cells from umbilical cord blood // Stem Cells. - 2004. - Vol. 22. - P. 625-634.

30. Bourke VA, Watchman CJ, Reith JD, et al. Spatial gradients of blood vessels and hematopoietic stem and progenitor cells within the marrow cavities of the human skeleton // Blood. - 2009. - Vol. 114. - P. 4077-4080.

31. Bouzianas DG, Cobblestone area measuring (CAM) assay: a new way of assessing the potential of human haemopoietic stem cells // Methods in Cell Science. - 2003. - Vol. 25. -№3-4. -p. 201-210.

32. Bradford, G. B., Williams, B., Rossi, R. et al. Quiescence, cycling, and turnover in the primitive hematopoietic stem cell compartment // Exp. Hematol. - 1997. - Vol. 25. - P. 445-453.

33. Brandt JE, Galy AH, Luens KM, et al. Bone marrow repopulation by human marrow stem cells after longterm expansion culture on a porcine endothelial cell line // Exp Hematol. - 1998. - Vol. 26. - P. 950-961

34. Briddell RA, Kern BP, Zilm KL, Stoney GB, McNiece IK. Purification of CD34+ cells is essential for optimal ex vivo expansion of umbilical cord blood cells. // J Hematother. 1997 V. 6. №2. P. 145-50.

35. Broxmeyer HE, Cooper S, Cacalano G, et al. Involvement of Interleukin (IL) 8 receptor in negative regulation of myeloid progenitor cells in vivo: evidence from mice lacking the murine IL-8 receptor homologue // J Exp Med. - 1996. - Vol. 184. - №5. P. 1825-1832.

36. Broxmeyer HE, Srour EF, Hangoc G, et al. High-efficiency recovery of functional hematopoietic progenitor and stem cells from human cord blood cryopreserved for 15 years // Proc Natl Acad Sci USA.- 2003. - Vol. 100. - №2. - P. 645-650.

37. Broxmeyer HE. Biology of cord blood cells and future prospects for enhanced clinical benefit // Cytotherapy. - 2005. - Vol. 7. - №3. - P. 209-218.

38. Broxmeyer, H. E., Sherry B., Cooper S., et al. Macrophage inflammatory protein (MIP)- Ip abrogates the capacity of MIP- 1 a to suppress myeloid progenitor cell growth. // J. Inmunol. - 1991. - Vol. 147 - №8. - P. 2586-2594.

39. Broxmeyer, H. E., Sherry B., Lu L., et al. Enhancing and suppressing effects of recombinant murine macrophage inflammatory proteins on colony formation i n vim by bone marrow myeloid progenitor cells // Blood. - 1990. - Vol. 76. - №6. - P.l 110-1116.

40. Brugger W, Mocklin W, Heimfeld S, et al. Ex vivo expansion of enriched peripheral blood CD34' progenitor cells by stem cell factor, interleukin-lg (IL- ID), IL-6, IL-3, interferon-y, and erythropoietin // Blood. - 1993. - Vol. 81 - № 10. - P. 2579-2584

41. Bunting, K. D. ABC Transporters as phenotypic markers and functional regulators of stem cells // Stem Cells. - 2002. - Vol. 20. -№1. - P. 11-20.

42. Butler JM, Nolan DJ, Vertes EL, et al. Endothelial cells are essential for the selfrenewal and repopulation of Notch-dependent hematopoietic stem cells // Cell Stem Cell. - 2010. -Vol. 6. -№3. - P. 251-264.

43. Calvi LM, Adams GB, Weibrecht KW, et al. Osteoblastic cells regulate the hematopoietic stem cell niche // Nature. - 2003 - Vol. 425. - №6960. - P. 841-846.

44. Campbell, A. D., & Wicha, M. S., Extracellular matrix and the hematopoietic microenvironment // J. Lab. clin. Med. - 1988. - Vol. 112 - P. 140-146

45. Ceradini DJ, Kulkarni AR, Callaghan MJ, et al. Progenitor cell trafficking is regulated by hypoxic gradients through HIF-1 induction of SDF-1 // Nat Med. - 2004. - Vol. 10 -P.858-864.

46. Chattopadhyay, N., Vassilev, P.M., Brown, E.M. Calcium-sensing receptor: roles in and beyond systemic calcium homeostasis // Biol. Chem. - 1997. - Vol. 378. - P. 759768.

47. Cheshier, S. H., Morrison, S. J., Liao, X. et al. In vivo proliferation and cell cycle kinetics of long-term self- renewing hematopoietic stem cells // Proc. Natl Acad. Sci. USA. - 1999. - Vol. 96. - №6. - P. 3120-3125.

48. Chow DC, Wenning LA, Miller WM et al. Modeling p(C>2) distributions in the bone marrow hematopoietic compartment. II. Modified Kroghian models. // Biophys J. - 2001. - Vol. 81 - №2. - P. 685-696.

49. Chute JP, Saini AA, Chute DJ, et al. Ex vivo culture with human brain endothelial cells increases the SCID-repopulating capacity of adult human bone marrow // Blood. - 2002. -Vol. 100. -P. 4433-4439.

50. Cipolleschi MG, P Dello Sbarba, M Olivotto. The role of hypoxia in the maintenance of hematopoietic stem cells // Blood. - 1993. -Vol. 82. - P. 2031-2037.

51. Corre J, Barreau C, Cousin B, et al. Human subcutaneous adipose cells support complete differentiation but not self-renewal of hematopoietic progenitors // J Cell Physiol. - 2006. - Vol. 208. - №2. - P. 282-288.

52. Coulombel, L., Rosemblatt, M., Gaugler, M. H., et al. Cell-cell matrix and cell-cell interactions during hematopoietic differentiation // Bone Marrow Transplant. - 1992. - 9 Suppl. l.-P. 19-22.

53. Cutler C, Antin JH. Peripheral blood stem cells for allogeneic transplantation: a review // Stem Cells. - 2001 -Vol. 19. -№2 - P. 108-117.

54. D'lppolito, G., Diabira, S., Howard, G.A., et al. Low oxygen tension inhibits osteogenic differentiation and enhances sternness of human MIAMI cells // Bone. - 2006. -Vol. 39.-№3.-P. 513-522.

55. Danet GH, Pan Y, Luongo JL, et al. Expansion of human SCID-repopulating cells under hypoxic conditions // J Clin Invest. - 2003. - Vol. 112. - №1. - P. 126-135.

56. De Angeli S, Di Liddo R, Buoro S, et al. New immortalized human stromal cell lines enhancing in vitro expansion of cord blood hematopoietic stem cells // Int J Mol Med. -2004. - Vol. 13. - №3. - P. 363-371

57. de Toni F, Poglio S, Youcef AB, et al. Human adipose-derived stromal cells efficiently support hematopoiesis in vitro and in vivo: a key step for therapeutic studies // Stem Cells Dev. - 2011. - Vol. 20. - №12. - P. 2127-2138.

58. de Wynter EA, Buck D, Hart C, et al. CD34+AC133+ cells isolated from cord blood are highly enriched in long-term culture-initiating cells, NOD/SCID-repopulating cells and dendritic cell progenitors // Stem Cells. - 1998. - Vol. 16. - №6. - P. 387-396.

59. Dexter TM, Allen TD, Lajtha LG. Conditions controlling the proliferation of haemopoietic stem cells in vitro // J Cell Physiol. - 1977. - Vol. 91. -№3. - P. 335-344.

60. Eaves CJ, Cashman JD, Kay RJ, Dougherty GJ, et al. Mechanisms that regulate the cell cycle status of very primitive hematopoietic cells in long-term human marrow cultures. II. Analysis of positive and negative regulators produced by stromal cells within the adherent layer//Blood.- 1991.-Vol. 78.-№3.-P. 110-117.

61. Ehninger A, Trumpp A. The bone marrow stem cell niche grows up: mesenchymal stem cells and macrophages move in // J Exp Med. - 2011. - Vol. 208. - №3. -P. 421428.

62. Erices A, Conget P, Minguell J J. Mesenchymal progenitor cells in human umbilical cord blood // Br J Haematol. - 2000. - Vol. 109. - №1. - P. 235-242.

63. Fahey, T. J., Tracey K. J., Tekamp-Olson P., et al. Macrophage inflammatory protein 1 modulates macrophage function // J. Immunol. - 1992. - Vol. 148. - № 49. - P. 27642769.

64. Fehrer, C., Brunauer, R., Laschober, G., et al. Reduced oxygen tension attenuates differentiation capacity of human mesenchymal stem cells and prolongs their lifespan // Aging Cell. - 2007. - Vol. 6. -№6. - P. 745-757.

65. Fernandez M, Regidor C, Cabrera R et al. Unrelated umbilical cord blood transplants in adults: early recovery of neutrophils by supportive co-transplantation of a low number of highly purified peripheral blood CD34+ cells from an HLA-haploidentical donor // Exp Hematol. - 2003. -Vol. 31.-№6.-P. 535-44

66. Fickert S, Fiedler J, Brenner RE. Identification, quantification and isolation of mesenchymal progenitor cells from osteoarthritic synovium by fluorescence automated cell sorting // Osteoarthritis Cartilage. - 2003. - Vol. 11. - №11. - P. 790-800.

67. Frassoni F, Gualandi F, Podestä M, et al. Direct intrabone transplant of unrelated cord-blood cells in acute leukaemia: a phase I/II study // Lancet Oncol. - 2008. - Vol. 9. - № 9. P. 831-839.

68. Friedenstein AJ, Chailakhyan RK, Gerasimov UV. Bone marrow osteogenic stem cells: in vitro cultivation and transplantation in diffusion chambers // Cell Tissue Kinet. - 1987. - Vol. 20. - №3. - P. 263-272.

69. Friedenstein AJ, Chailakhyan RK, Latsinik NV, et al. Select Stromal cells responsible for transferring the microenvironment of the hemopoietic tissues. Cloning in vitro and retransplantation in vivo II Transplantation. - 1974. - Vol. 17. - №4. - P. 331-340.

70. Friedenstein AJ, Gorskaja JF, Kulagina NN. Fibroblast precursors in normal and irradiated mouse hematopoietic organs // Exp Hematol. - 1976. - Vol. 4. - №5. - P. 267274.

71. Friedenstein AJ, Piatetzky II, Petrakova KV. Osteogenesis in transplants of bone marrow cells // J Embryol Exp Morphol. - 1966. - Vol. 16. - №3 - P. 381-390.

72. Gang EJ, Hong SH, Jeong JA, et al. In vitro mesengenic potential of human umbilical cord blood-derived mesenchymal stem cells // Biochem Biophys Res Commun. - 2004. -Vol. 321.-№1.-P. 102-108.

73. Gilner JB, Walton WG, Gush K, et al. Antibodies to stem cell marker antigens reduce engraftment of hematopoietic stem cells // Stem Cells. - 2007. - Vol. 25. - №2. - P. 279288.

74. Gimble JM, Katz AJ, Bunnell BA. Adipose-derived stem cells for regenerative medicine // Circ Res. - 2007. - Vol. 100. - №9. - P. 1249-1260.

75. Gluckman E, Rocha V. Cord blood transplantation: state of the art // Haematologica. -2009. - Vol. 94. - № 4. - P. 451-454.

76. Gluckman E, Ruggeri A, Rocha V, et al. Family-directed umbilical cord blood banking // Haematologica. - 2011. - Vol. 96. - №11. - P. 1700-1707.

77. Goodell MA, Rosenzweig M, Kim H, et al. Dye efflux studies suggest that hematopoietic stem cells expressing low or undetectable levels of CD34 antigen exist in multiple species // Nat Med. - 1997. - Vol. 3. - №12. - P. 1337-1345.

78. Goodell, M. A., McKinney-Freeman, S., Camargo, F. D. Isolation and characterization of side population cells // Methods Mol. Biol. - 2005. - Vol. 290. - P. 343-352.

79. Goodwin HS, Bicknese AR, Chien SN, et al. Multilineage differentiation activity by cells isolated from umbilical cord blood: expression of bone, fat, and neural markers // Biol Blood Marrow Transplant. - 2001. - Vol. 7. - № 11. - P. 581-588.

80. Gordon, M. Y., Extracellular matrix of the marrow micorenvironment // Br. J. Haemat. - 1988.-Vol. 70.-№1.-P. 1-4.

81. Graham, G. J., Wright E. C., Hewick R., et al. Identification and characterization of an inhibitor of haematopoietic stem cell proliferation // Nature. - 1990. - Vol. 344. -№6265. -P. 442-444.

82. Grassinger J, Haylock DN, Williams B, et al. Phenotypically identical hemopoietic stem cells isolated from different regions of bone marrow have different biologic potential // Blood. - 2010. - Vol. 116. - №17. - P. 3185-3196.

83. Greschat S, Schira J, Kury P, et al. Unrestricted somatic stem cells from human umbilical cord blood can be differentiated into neurons with a dopaminergic phenotype // Stem Cells Dev. - 2008. - Vol. 17. - №2 - P. 221-232.

84. Guba SC, Sartor CI, Gottschalk LR, et al. Bone marrow stromal cells secrete IL-6 and GM-CSF in the absence of inflammatory stimuli: Demonstration by serum-free bioassay, ELISA, and reverse transcriptase polymerase chain reaction // Blood. - 1992. - Vol. 80. -№5.-P. 1190-1998.

85. Harrison JS, Rameshwar P, Chang V, Bandari P. Oxygen saturation in the bone marrow of healthy volunteers // Blood. - 2002. - Vol. 99. - №1. - P. 394.

86. Haylock DN, To LB, Dowse TL, et al. Ex vivo expansion and maturation of peripheral blood CD34' cells into the myeloid lineage // Blood. - 1992. - Vol. 80. -№ 6. - P. 14051412.

87. Haynesworth SE, Baber MA, Caplan Al. Cytokine expression by human marrow-derived mesenchymal progenitor cells in vitro: effects of dexamethasone and IL-1 alpha // J Cell Physiol. - 1996. - Vol. 166. - №3. - P. 585-592.

88. Hofmeister CC, J Zhang, KL Knight, et al. Ex vivo expansion of umbilical cord blood stem cells for transplantation: growing knowledge from the hematopoietic niche // Bone Marrow Transplant. - 2007. - Vol. 39. - №1. - P. 11-23.

89. Holzwarth, C., Vaegier, M., Gieseke, F et al. Low physiologic oxygen tensions reduce proliferation and differentiation of human multipotent mesenchymal stromal cells // BMC Cell Biol. - 2010. - Vol. 11. - P. 11.

90. Hooper AT, Butler JM, Nolan DJ, et al. Engraftment and reconstitution of hematopoiesis is dependent on VEGFR2-mediated regeneration of sinusoidal endothelial cells // Cell Stem Cell. - 2009. - Vol. 4. - №3. - P. 263-274.

91. In't Anker PS, Scherjon SA, Kleijburg-van der Keur C, et al. Isolation of mesenchymal stem cells of fetal or maternal origin from human placenta // Stem Cells. - 2004. - Vol. 22. -№7. - P. 1338-1345.

92. Ivanovic Z, Dello Sbarba P, Trimoreau F, et al. Primitive human HPCs are better maintained and expanded in vitro at 1 percent oxygen than at 20 percent. // Transfusion. -2000. - Vol. 40. - №12. - P. 1482-1488.

93. Ivanovic Z, Hermitte F, Brunet de la Grange P, et al. Simultaneous maintenance of human cord blood SCID-repopulating cells and expansion of committed progenitors at low 02 concentration (3%) // Stem Cells. - 2004. - Vol. 22. - № 5. - P. 716-724.

94. Jang YK, Jung DH, Jung MH, et al. Mesenchymal stem cells feeder layer from human umbilical cord blood for ex vivo expanded growth and proliferation of hematopoietic progenitor cells. // Ann Hematol. - 2006. - Vol. 85. - №4. - P. 212-225.

95. Jauniaux E, Watson AL, Hempstock J et al. Onset of maternal arterial blood flow and placental oxidative stress. A possible factor in human early pregnancy failure. // Am J Pathol. - 2000. - Vol. 157. - №6. - P. 2111-2122.

96. Jing D, Fonseca AV, Alakel N, et al. Hematopoietic stem cells in co-culture with mesenchymal stromal cells—modeling the niche compartments in vitro II Haematologica. -2010.-Vol. 95.-№4.-P. 542-550.

97. Jing D, Wobus M, Poitz DM, et al. Oxygen tension plays a critical role in the hematopoietic microenvironment in vitro II Haematologica. - 2012. - Vol. 97. - №3. - P. 331-339.

98. Jones, D.L., & Wagers, A.J. No place like home: anatomy and function of the stem cell niche // Nat. Rev. Mol. Cell Biol. - 2008. - Vol. 9. - №1. - P. 11-21.

99. Jordan, C. T. & Lemischka, I. R. Clonal and systemic analysis of long-term hematopoiesis in the mouse // Genes Dev. - 1990. - Vol. 4. - №2. - P. 220-232.

100. Kaushansky K, Lin N, Adamson JW. Interleukin 1 stimulates fibroblasts to synthesize granulocyte-macrophage and granulocyte colony-stimulating factors. Mechanism for the hematopoietic response to inflammation. // J Clin Invest. - 1988. - Vol. 81. - №1. - P. 92-97.

101. Kiel MJ, Morrison SJ. Uncertainty in the niches that maintain haematopoietic stem cells // Nat Rev Immunol. - 2008. - Vol. 8. - №4. - P. 290-301.

102. Kiel MJ, Morrison SJ. Uncertainty in the niches that maintain haematopoietic stem cells // Nat Rev Immunol. - 2008. - Vol. 8. - № 4. - P. 290-301.

103. Kiel MJ, Radice GL, Morrison SJ. Lack of evidence that hematopoietic stem cells depends on N-cadherin-mediated adhesion to osteoblasts for their maintenance // Stem Cell. - 2007. - Vol. 1. - №2. - P. 204-217.

104. Kiel MJ, Yilmaz OH, Iwashita T, et al. SLAM family receptors distinguish hematopoietic stem and progenitor cells and reveal endothelial niches for stem cells // Cell.-2005.-Vol. 121.-№7.-P. 1109-1121.

105. Kilroy GE, Foster SJ, Wu X, et al. Cytokine profile of human adipose-derived stem cells: expression of angiogenic, hematopoietic, and pro-inflammatory factors // J Cell Physiol. - 2007. - Vol. 212. - №3. - P. 702-709.

106. Kim JW, Kim SY, Park SY, et al. Mesenchymal progenitor cells in the human umbilical cord // Ann Hematol. - 2004. - Vol. 83. - №12. - P. 733-738.

107. Kimura T, Asada R, Wang J, et al. Identification of long-term repopulating potential of human cord blood-derived CD34-flt3- severe combined immunodeficiency-repopulating cells by intra-bone marrow injection // Stem Cells. - 2007. - Vol. 25. - №6. - P. 13481355.

108. King KY, Goodell MA. Inflammatory modulation of HSCs: viewing the HSC as a foundation for the immune response // Nat Rev Immunol. - 2011. - Vol. 11.- №10. - P. 685-692.

109. Klassen LW, Birks J, Allen E, Gurney CW. Experimental medullary aplasia // J Lab Clin Med. - 1972.-Vol. 80.-№l.-P. 8-17.

110. Kogler G, Radke TF, Lefort A, et al. Cytokine production and hematopoiesis supporting activity of cord blood-derived unrestricted somatic stem cells // Exp Hematol. -2005. - Vol. 33. -№5. - P. 573-583.

111. Kogler G, Sensken S, Airey JA, et al. A new human somatic stem cell from placental cord blood with intrinsic pluripotent differentiation potential // J Exp Med. - 2004. - Vol. 200.-№2.-P. 123-135.

112. Kogler G, Sensken S, Wernet P. Comparative generation and characterization of pluripotent unrestricted somatic stem cells with mesenchymal stem cells from human cord blood // Exp Hematol. - 2006. - Vol. 34. - №11. - P. 1589-1595.

113. Koller MR, Bradley MS, Palsson BO: Growth factor consumption and production in perfusion cultures of human bone marrow correlates with specific cell production. // Exp Hematol. -1995. - Vol. 23. - №12. - P. 1275-1283.

114. Koller MR, Manchel I, Newsom BS, et al. Bioreactor expansion of human bone marrow: comparison of unprocessed, density-separated, and CD34-enriched cells. // J Hematother. - 1995. - Vol. 4. -№3. - P. 159-169.

115. Koller MR, Manchel I, Palsson BO. Importance of parenchymal:stromal cell ratio for the ex vivo reconstitution of human hematopoiesis // Stem Cells. - 1997. - Vol. 15. - №4. -P. 305-313.

116. Kondo Y, Yasui K, Yashiro M, et al. Multi-nucleated giant cell formation from human cord blood monocytes in vitro, in comparison with adult peripheral blood monocytes // Clin Exp Immunol. - 2009. - Vol. 158. - №1. - P. 84-90.

117. Krause DS, Fackler MJ, Civin CI, May WS. CD34: structure, biology, and clinical utility//Blood. - 1996.-Vol. 87.-№l.-P. 1-13.

118. Kuhn, N.Z., & Tuan, R.S. Regulation of sternness and stem cell niche of mesenchymal stem cells: implications in tumorigenesis and metastasis. // J. Cell. Physiol. - 2010. -Vol. 222. - №2. - P. 268-277.

119. Lackman F, Capewell V, Gagnon R, Richardson B. Fetal umbilical cord oxygen values and birth to placental weight ratio in relation to size at birth // Am J Obstet Gynecol. -2001.-Vol. 185.-№3.-P. 674-82.

120. Lander AD, Kimble J, Clevers H, et al. What does the concept of the stem cell niche really mean today? // BMC Biol. - 2012. - Vol. 10. - P. 19.

121. Le' vesque JP, Helwani FM, Winkler IG. The endosteal 'osteoblastic' niche and its role in hematopoietic stem cell homing and mobilization // Leukemia. - 2010. - Vol. 24. -№12.-P. 1979-1992.

122. Le'vesque J-P, Winkler IG, Hendy J, et al. Hematopoietic progenitor cell mobilization results in hypoxia with increased hypoxia-inducible transcription factor-la and vascular endothelial growth factor A in bone marrow // Stem Cells. - 2007. - Vol. 25. - №8. - P. 1954-1965.

123. Lee OK, Kuo TK, Chen WM, et al. . Isolation of multipotent mesenchymal stem cells from umbilical cord blood // Blood. - 2004. - Vol. 103. - №5. - P. 1669-1675.

124. Lemieux, M. E., Rebel, V. I., Lansdorp, P. M., Eaves, C. J. Characterization and purification of a primitive hematopoietic cell type in adult mouse marrow capable of lymphomyeloid differentiation in long-term marrow "switch" cultures // Blood. - 1995. -Vol. 86.-№4.-P. 1339-1347.

125. Lerner, C. & Harrison, D. E. 5-Fluorouracil spares hemopoietic stem cells responsible for long-term repopulation // Exp. Hematol. - 1990. - Vol. 18. - №2. - P. 114-118.

126. Li W, Johnson SA, Shelley WC, et al. Primary endothelial cells isolated from the yolk sac and para-aortic splanchnopleura support the expansion of adult marrow stem cells in vitro Ü Blood. - 2003. - Vol. 102. - №13. - P. 4345^1353.

127. Li W, Johnson SA, Shelley WC, Yoder MC. Hematopoietic stem cell repopulating ability can be maintained in vitro by some primary endothelial cells // Exp Hematol. -2004. - Vol. 32. - №12. - P. 1226-1237.

128. Li, L., & Xie, T. Stem cell niche: structure and function // Annu. Rev. Cell Dev. Biol. -2005.-Vol. 21.-P. 605-631.

129. Lisovsky M, Braun SE, Ge Y, et al. Flt3-ligand production by human bone marrow stromal cells//Leukemia.- 1996.-Vol. 10.-№6.-P. 1012-1018.

130. Lo Celso C, Fleming HE, Wu JW, et al. Live-animal tracking of individual haematopoietic stem/progenitor cells in their niche // Nature. - 2009. - Vol. 457. -№7225.-P. 92-97.

131. Long, M. W., Briddell, R., Walter, A. W. et al. Human hematopoietic stem cell adherence to cytokines and matrix molecules // J. clin. Invest. - 1992. - Vol. 90. - №1. -P.251-255

132. Lymperi S, Horwood N, Marley S, et al. Strontium can increase some osteoblasts without increasing hematopoietic stem cells. // Blood. - 2008. - Vol. 111. - №3. - P. 1173-1181.

133. Ma YD, Park C, Zhao H, et al. Defects in osteoblast function but no changes in long-term repopulating potential of hematopoietic stem cells in a mouse chronic inflammatory arthritis model. // Blood. - 2009. - Vol. 114. - №20. - P. 4402^1410.

134. Majumdar MK, Thiede MA, Mosca JD, et al. Phenotypic and functional comparison of cultures of marrow-derived mesenchymal stem cells (MSCs) and stromal cells // J Cell Physiol.- 1998.-Vol. 176.-№1.-P. 57-66.

135. Malladi, P., Xu, Y., Chiou, M., et al. Effect of reduced oxygen tension on chondrogenesis and osteogenesis in adiposederived mesenchymal cells // Am. J. Physiol. Cell Physiol. - 2006. - Vol. 290. - №4. - P. 1139-1146.

136. Matsumoto, A., Matsumoto, S., Sowers, A.L., et al. Absolute oxygen tension (pO(2)) in murine fatty and muscle tissue as determined by EPR // Magn. Reson. Med. - 2005. -Vol. 54.-№6.-P. 1530-1535.

137. Mazo IB, Gutierrez-Ramos JC, Frenette PS, et al. Hematopoietic progenitor cell rolling in bone marrow micro vessels: parallel contributions by endothelial selectins and vascular cell adhesion molecule 1 // J Exp Med. - 1998. -Vol. 188. -№3. - P. 465-474.

138. McNiece I, Harrington J, Turney J, et al. Ex vivo expansion of cord blood mononuclear cells on mesenchymal stem cells // Cytotherapy. - 2004. - Vol. 6. - №4. - P. 311-317.

139. Mendez-Ferrer S, Michurina TV, Ferraro F, et al. Mesenchymal and haematopoietic stem cells form a unique bone marrow niche // Nature. - 2010. -Vol. 466. - №7308 . - P. 829-834

140. Mishima S, Nagai A, Abdullah S, et al. Effective ex vivo expansion of hematopoietic stem cells using osteoblast-differentiated mesenchymal stem cells is CXCL12 dependent // Eur J Haematol. - 2010. - Vol. 84. - №6. - P. 538-546.

141. Miura, M., Gronthos, S., Zhao, M., et al. SHED: stem cells from human exfoliated deciduous teeth // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. - 2003. Vol. 100. - №10. -P. 5807-5812.

142. Morrison SJ, Spradling AC. Stem cells and niches: mechanisms that promote stem cell maintenance throughout life // Cell. - 2008. - Vol. 132. - № 4. - P. 598-611.

143. Morrison, S. J., Uchida, N., Weissman, I. L. The biology of hematopoietic stem cells // Annu. Rev. Cell Dev. Biol. - 1995. - Vol. 11. - P. 35-71.

144. Nakamura Y, Arai F, Iwasaki H, et al. Isolation and characterization of endosteal niche cell populations that regulate hematopoietic stem cells // Blood. - 2010. -Vol. 116. - № 9.-P. 1422-1432.

145. Nakao N, Nakayama T, Yahata T, et al. Adipose tissue-derived mesenchymal stem cells facilitate hematopoiesis in vitro and in vivo: advantages over bone marrow-derived mesenchymal stem cells // Am J Pathol. - 2010. - Vol. 177. - №2. - P. 547-554.

146. Noll T, Jelinek N, Schmid S, et al. Cultivation of hematopoietic stem and progenitor cells: biochemical engineering aspects // Adv Biochem Eng Biotechnol. - 2002. -Vol. 74.-P. 111-28.

147. Oh, K. O., Zhou Z., Kim K. K., et al. Identification of cell surface receptors for murine macrophage inflammatory protein- 1 // J. Immunol. - 1991. - Vol. 147. - № 9. - P. 2978-2983.

148. Omatsu Y, Sugiyama T, Kohara H, et al. The essential functions of adipoosteogenic progenitors as the hematopoietic stem and progenitor cell niche // Immunity. - 2010. -Vol. 33. -№3.- P. 387-399.

149. Parmar K, Mauch P, Vergilio J-A, et al. Distribution of hematopoietic stem cells in the bone marrow according to regional hypoxia // Proc Natl Acad Sei USA.- 2007. - Vol. 104.-№ 13.-P. 5431-5436.

150. Pasarica, M., Sereda, O.R., Redman, L.M., et al. Reduced adipose tissue oxygenation in human obesity: evidence for rarefaction, macrophage Chemotaxis, and inflammation without an angiogenic response // Diabetes. - 2009. - Vol. 58. - №3. - P. 718-25

151. Pelosi E, Valtieri M, Coppola S, et al. Identification of the hemangioblast in postnatal life // Blood. - 2002. - Vol. 100. - №9. - P. 3203-3208.

152. Petit I, Szyper-Kravitz M, Nagler A, et al. G-CSF induces stem cell mobilization by decreasing bone marrow SDF-1 and up-regulating CXCR4 // Nat Immunol. - 2002. -Vol. 3. -№ 7. - P. 687-694.

153. Ploemacher RE, van der Sluijs JP, Voerman JS, Brons NH. An in vitro limiting-dilution assay of long-term repopulating hematopoietic stem cells in the mouse // Blood. - 1989. - Vol. 74. - № 8. - P. 2755-2763.

154. Ploemacher, R. E. Stem cells: characterization and measurement // Baillieres Clin. Haematol. - 1997. - Vol. 10. -№3. - P. 429-444.

155. Pollard PJ, Krane KR. Hypoxia signaling in hematopoietic stem cells: a doubleedged sword // Cell Stem Cell. - 2010. - Vol. 7. - №3. - P. 276-278.

156. Ponomaryov T, Peled A, Petit I, et al. 2000. Induction of the chemokine stromal-derived factor-1 following DNA damage improves human stem cell function // J Clin Invest.-Vol. 106.-№11.-P. 1331- 1339

157. Purton LE, Scadden DT. Limiting factors in murine hematopoietic stem cell assays // Cell Stem Cell. - 2007. - Vol. 1. -№ 3. - P. 263-270.

158. Raaijmakers MHGP, Mukherjee S, Guo S, et al. Bone progenitor dysfunction induces myelodysplasia and secondary leukaemia // Nature. - 2010. -Vol. 464. -№ 7290. - P. 852- 857.

159. Rosenau EH, Sugrue MW, Haller M, et al. Characteristics of thawed autologous umbilical cord blood // Transfusion. - 2012. - Vol. 52. - №10. - P. 2234-2242.

160. Roy S, Tripathy M, Mathur N. et al. Hypoxia improves expansion potential of human cord blood-derived hematopoietic stem cells and marrow repopulation efficiency // Eur J Haematol. - 2012. - Vol. 88. - №5. - P. 396-405.

161. Sacchetti B, Funari A, Michienzi S, et al. Self-renewing osteoprogenitors in bone marrow sinusoids can organize a hematopoietic microenvironment // Cell. - 2007. - Vol. 131.-№2.-P. 324-336

162. Scadden, D.T. The stem-cell niche as an entity of action // Nature. - 2006. - Vol. 441. -№7097.-P. 1075-1079.

163. Schofield R. The relationship between the spleen colony-forming cell and the haemopoietic stem cell // Blood Cells. - 1978. - Vol. 4. - № 1-2. - P. 7-25.

164. Sensken S, Waclawczyk S, Knaupp AS, et al. In vitro differentiation of human cord blood-derived unrestricted somatic stem cells towards an endodermal pathway // Cytotherapy. - 2007. - Vol. 9. - №4. - P. 362-378.

165. Shen Y, Winkler IG, Barbier V, et al. Tissue inhibitor of metalloproteinase-3 (TIMP-3) regulates hematopoiesis and bone formation in vivo II PLoS One. - 2010. - Vol. 5. - № 9. -pii: el3086.

166. Shima H, Takubo K, Iwasaki H, et al. Reconstitution activity of hypoxic cultured human cord blood CD34-positive cells in NOG mice // Biochem Biophys Res Commun. - 2009. - Vol. 378. - № 3. - P. 467^72.

167. Song K, Zhao G, Liu T, et al. Effective expansion of umbilical cord blood hematopoietic stem/progenitor cells by regulation of microencapsulated osteoblasts under hypoxic condition // Biotechnol Lett. - 2009. - Vol. 31. - № 7. - P. 923-928.

168. Sonoda Y. Immunophenotype and functional characteristics of human primitive CD34-negative hematopoietic stem cells: the significance of the intra-bone marrow injection // J Autoimmun. - 2008. - Vol. 30. - № 3. - P. 136-144.

169. Spees JL, Gregory CA, Singh H, et al. Internalized antigens must be removed to prepare hypoimmunogenic mesenchymal stem cells for cell and gene therapy // Mol. Ther. - 2004. - Vol. 9. - №5. - P. 747-756.

170. Sugiyama T, Kohara H, Nöda M, Nagasawa T. Maintenance of the hematopoietic stem cell pool by CXCL12-CXCR4 chemokine signaling in bone marrow stromal cell niches // Immunity. - 2006. - Vol. 25. - №6. - P. 977-988.

171. Sullivan M, Galea P, Latif S. What is the appropriate oxygen tension for in vitro culture? // Mol Hum Reprod. - 2006. - Vol. 12. - №11. - P. 653.

172. Summers YJ, Heyworth CM, De Wynter EA, et al. Cord blood GO CD34+ cells have a thousand-fold higher capacity for generating progenitors in vitro than Gl CD34+ cells // Stem Cells.-2001.-Vol. 19.-№.-P. 505-513.

173. Sundin M, Ringden O, Sundberg B, Nava et al. No alloantibodies against mesenchymal stromal cells, but presence of anti-fetal calf serum antibodies, after transplantation in allogeneic hematopoietic stem cell recipients // Haematologica. - 2007. - Vol. 92. - № 9. -P. 1208-1215.

174. Sutherland, H. J., Eaves, C. J., Eaves, A. C., et al. Characterization and partial purification of human marrow cells capable of initiating long-term hematopoiesis in vitro II Blood. - 1989. - Vol. 74. - № 5. - P. 1563-1570.

175. Taichman RS, Reilly MJ, Verma RS, Emerson SG. Augmented production of interleukin-6 by normal human osteoblasts in response to CD34+ hematopoietic bone marrow cells in vitro II Blood. - 1997. - Vol. 89. - № 4. - P. 1165-72.

176. Takizawa H, Regoes RR, Boddupalli CS, et al. Dynamic variation in cycling of hematopoietic stem cells in steady state and inflammation // J Exp Med. - 2011. - Vol. 208.-№2.-P. 273-284.

177. Takizawa H, Schanz U, Manz MG. Ex vivo expansion of hematopoietic stem cells: mission accomplished? // Swiss Med Wkly. - 2011. - Vol. 141. - wl 3316.

178. Takubo K, Goda N, Yamada W, et al. Regulation of the HIF-lalpha level is essential for hematopoietic stem cells // Cell Stem Cell. - 2010. -Vol. 7. - № 3. - P. 391^02.

179. Tursky ML, Collier FM, Ward AC, Kirkland MA. Systematic investigation of oxygen and growth factors in clinically valid ex vivo expansion of cord blood CD34(+) hematopoietic progenitor cells II Cytotherapy. - 2012. - Vol. 14. - № 6. - P. 679-685.

180. van Os RP, Dethmers-Ausema B, de Haan G In vitro assays for cobblestone area-forming cells, LTC-IC, and CFU-C // Methods Mol Biol. - 2008. - Vol. 430. - P. 14357.

181. Visser, J. W., Bauman, J. G., Mulder, A. H., et al. Isolation of murine pluripotent hemopoietic stem cells // J. Exp. Med. - 1984. - Vol. 159. -№ 6. - P. 1576-1590.

182. Wagner W, Roderburg C, Wein F, et al. Molecular and secretory profiles of human mesenchymal stromal cells and their abilities to maintain primitive hematopoietic progenitors // Stem Cells. - 2007. - Vol. 25. - №10. - P. 2638-2647.

183. Wagner W, Wein F, Roderburg C, et al. Adhesion of hematopoietic progenitor cells to human mesenchymal stem cells as a model for cell-cell interaction // Exp Hematol. -2007. - Vol. 35. - № 2. - P. 314-325.

184. Wang J, Kimura T, Asada R, et al. SCID-repopulating cell activity of human cord blood-derived CD34- cells assured by intra-bone marrow injection // Blood. - 2003. -Vol. 101. -№ 8. -P. 2924-2931.

185. Wang, D.W., Fermor, В., Gimble, J.M., et al. Influence of oxygen on the proliferation and metabolism of adipose derived adult stem cells // J. Cell. Physiol. - 2005. - Vol. 204. -№ l.-P. 184-191.

186. Wilson A, Laurenti E, Oser G, et al. Hematopoietic stem cells reversibly switch from dormancy to self-renewal during homeostasis and repair // Cell. - 2008. - Vol. 135. - № 6.-P. 1118-1129.

187. Wilson A., Murphy MJ, Oskarsson T, et al. c-Myc controls the balance between hematopoietic stem cell self-renewal and differentiation // Genes Dev. - 2004. - Vol. 18 -№22.-P. 2747-2763.

188. Winkler IG, Barbier V, Wadley R, et al. Positioning of bone marrow hematopoietic and stromal cells relative to blood flow in vivo: serially reconstituting hematopoietic stem cells reside in distinct nonperfused niches 11 Blood. - 2010. - Vol. 116. - № 3. - P. 375385.

189. Wognum A. Mini-Review: Hematopoietic Stem and Progenitor Cells [Электронный ресурс]. - Режим доступа:

http://www.stemcell.eom/~/media/Technical%20Resources/F/B/7/E/9/MR019Hematopoi esisOnline_29784WEB.pdf

190. Xie Y, Yin T, Wiegraebe W, et al. Detection of functional haematopoietic stem cell niche using real-time imaging // Nature. - 2009. - Vol. 457. - № 7225. - P. 97-101.

191. Xu, Y., Malladi, P., Chiou, M., et al. In vitro expansion of adipose-derived adult stromal cells in hypoxia enhances early chondrogenesis // Tissue Eng. - 2007. - Vol. 13. -№ 12.-P. 2981-2993.

192. Yahata T, Ando K, Sato T, et al. A highly sensitive strategy for SCID-repopulating cell assay by direct injection of primitive human hematopoietic cells into NOD/SCID mice bone marrow // Stem Cells. - 2007. - Vol. 25. - № 6. - P. 1348-1355.

193. Yamazaki S, Ema H, Karlsson G, et al. Nonmyelinating Schwann cells maintain hematopoietic stem cell hibernation in the bone marrow niche // Cell. - 2011. -Vol. 147. - № 5. - P. 1146-1158.

194. Yang H, Acker JP, Cabuhat M, et al. Association of post-thaw viable CD34+ cells and CFU-GM with time to hematopoietic engrafiment // Bone Marrow Transplant. - 2005. -Vol. 35.-№9.-P. 881-887.

195. Yang SE, Ha CW, Jung M, et al. Mesenchymal stem/progenitor cells developed in cultures from UC blood // Cytotherapy. - 2004. - Vol. 6. - № 6. - P. 476-486.

196. Yang YC, Tsai S, Wong GG, Clark SC. Interleukin-1 regulation of hematopoietic growth factor production by human stromal fibroblasts // J Cell Physiol. - 1988. -Vol. 134.-№2.-P. 292.

197. Yin T, Li L. The stem cell niches in bone // J Clin Invest. - 2006. - Vol. 116. - № 5 -P. 1195-1201.

198. Yoder MC, Mead LE, Prater D, et al. Redefining endothelial progenitor cells via clonal analysis and hematopoietic stem/progenitor cell principals // Blood. - 2007. - Vol. 109. -№5.-P. 1801-1809.

199. Zhang J, Niu C, Ye L, et al. Identification of the haematopoietic stem cell niche and control ofthe niche size //Nature. - 2003. - Vol. 425. -№ 6960. -P. 836-841.

200. Ziegler BL, Valtieri M, Almeida Porada G et al. KDR receptor: A key marker defining hematopoietic stem cells // Science. - 1999. - Vol. 285. - № 5433. - P. 1553- 1558.

201. Zsebo KM, Williams DA, Geissler EN, et al. Stem cell factor is encoded at the SI locus of the mouse and is the ligand for the c-kit tyrosine kinase receptor // Cell. - 1990. - Vol. 63.-№ 1.-P. 213-224.

202. Zuckerman K.S., Prince C.W., Gay S. The hemopoietic extracellular matrix // In Tavassoli M., ed. The handbook of the hemopoietic microenvironment. Humana Press Inc. - 1989.-P. 399—432.