«Регуляция экспрессии гена аполипопротеина А-I под действием инсулина в клетках гепатомы человека HepG2» тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.01.04, кандидат наук Шавва, Владимир Станиславович

• Шавва, Владимир Станиславович
• кандидат наук
• 2017

Оглавление диссертации кандидат наук Шавва, Владимир Станиславович

ОГЛАВЛЕНИЕ

1. ВВЕДЕНИЕ

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

2.1. Роль ЛПНП и воспаления в патогенезе атеросклероза

2.2. Сигнальные каскады ЛПНП в патогенезе атеросклероза

2.3. Роль воспаления в патогенезе атеросклероза

2.4. Роль ЛПВП в регрессии атеросклеротической бляшки

2.5. Противовоспалительные свойства ЛПВП

2.6. Роль аполипопротеина A-I в регуляции липидного обмена и воспаления

2.7. Сигнальные каскады, активируемые инсулином

2.8. Транскрипционный фактор FOXO1

2.9. Ядерные рецепторы семейства LXR

2.10. Регуляция экспрессии гена apoA-I

3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

3.1. Ингибиторы сигнальных киназ, синтетические лиганды ядерных рецепторов и рекомбинантные белки

3.2. Антитела

3.3. Генетические конструкции

3.4. Сайт-направленный мутагенез

3.5. Клеточные культуры и трансфекция

3.6. ß-галактозидазный и люциферазный тесты

3.7. Обратная транскрипция (ОТ)

3.8. Полимеразная цепная реакция в реальном времени - RealTime-PCR

3.9. Иммунопреципитация хроматина (ChIP)

3.10. Иммуноферментный анализ (ELISA)

3.11. Иммуноблоттинг

3.12. Получение ядерных экстрактов, ДНК-аффинная хроматография

3.13. Иммунопреципитация

3.14. Иммуноцитохимия

3.15. Статистический анализ

4. РЕЗУЛЬТАТЫ

4.1. Перекись водорода подавляет экспрессию гена apoA-I

4.2. Транскрипционные факторы LXRa и FOXO1 участвуют в уменьшении уровня мРНК apoA-I при оксидативном стрессе

4.3. FOXO1 связывается с сайтом В гепатоцитарного энхансера

4.4. АМРК подавляет активность гена ароА-1

4.5. Сайты В и С гепатоцитарного энхансера необходимы для подавления активности гена ароА-1 при оксидативном стрессе

4.6. Инсулин регулирует экспрессию гена ароА-1

4.7. Инсулин модулирует активность гена ароА-1 через различные участки 5'-регуляторной области

4.8. Участие различных сигнальных каскадов в подавлении активности гена ароА-1 инсулином

4.9. !МБ-кВ и Н№Ча участвуют в подавлении активности гена ароА-1 инсулином через сайт А гепатоцитарного энхансара

4.10. Ядерные рецепторы LXRs участвуют в подавлении активности гена ароА-1 инсулином

4.11. FOXO1 и FOXA2 участвуют регуляции экспрессии гена ароА-1 инсулином

4.12. Сайт В гепатоцитарного энхансера участвует в подавлении экспрессии гена ароА-1 инсулином

4.13. Транскрипционные факторы Б0Х01 и ЬХЯР, а также Б0ХА2 и ЬХЯа взаимодействуют в клетках HepG2

4.14. ЬХЯб и Б0Х01 связываются с сайтами В и С гепатоцитарного энхансера

4.15. Инсулин уменьшает связывание Б0Х01 с гепатоцитарным энхансером

4.16. Т0901317 защищает комплекс Е0Х01/ЬХЯЗ от инсулин-зависимого экспорта из ядра

4.17. Б0Х01 и ЬХЯР возвращаются на гепатоцитарный энхансер после 48-часовой инкубации с инсулином

4.18. Комплекс транскрипционных факторов Б0Х01/ЬХКР необходим для подавления экспрессии гена ароА-1 цитокином Т№а

4.19. Инсулин усиливает активность проксимального промотора гена ароА-1

4.20. Инсулин влияет на экспрессию генов транскрипционных факторов

5. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ

6. ЗАКЛЮЧЕНИЕ

7. ВЫВОДЫ

8. СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

9. СПИСОК ЦИТИРУЕМОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

10. ПРИЛОЖЕНИЕ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему ««Регуляция экспрессии гена аполипопротеина А-I под действием инсулина в клетках гепатомы человека HepG2»»

1. ВВЕДЕНИЕ

Актуальность проблемы. Аполипопротеин A-I (apoA-I) является ключевым участником липидного обмена. В качестве основного белка липопротеидов высокой плотности, apoA-I выполняет функции как акцептора холестерина и фосфолипидов в периферических тканях, так и противовоспалительного и антитромбического агента. Многочисленные фундаментальные и клинические исследования подтверждают ключевую роль apoA-I в защите от развития атеросклероза. Основная часть apoA-I плазмы крови синтезируется в клетках печени и тонкой кишки. Именно продукция apoA-I этими клетками и определяет уровень белка в плазме крови [1-3]. Таким образом, изучение механизмов регуляции продукции apoA-I гепатоцитами и энтероцитами представляет значительный интерес.

Экспрессия гена и секреция белка apoA-I гепатоцитами регулируется большим количеством факторов. Подавление продукции apoA-I клетками печени в острой фазе воспаления происходит за счет угнетения экспрессии гена apoA-I цитокинами TNFa и IL-ip. Ранее в отделе биохимии НИИЭМ было показано, что ядерные рецепторы семейств LXR и PPAR играют ключевую роль в этом процессе [4, 5]. Гормон инсулин регулирует метаболические пути во многих тканях организма, в том числе в печени, мышцах и жировой ткани. Экспрессия многих генов находится под контролем инсулин-зависимых сигнальных путей. Значительное внимание уделяется изучению влияния инсулина на экспрессию генов метаболизма глюкозы, таких как GK, PEPCK и G6Pase, однако известно, что инсулин регулирует и работу генов-участников метаболизма холестерина [6]. В ранних работах по изучению экспрессии гена apoA-I было показано, что инсулин регулирует экспрессию гена apoA-I, однако детали этого процесса остались не изученными [7]. В то же время оказалось, что apoA-I, входящий в состав ЛПВП, регулирует секрецию инсулина Р-клетками поджелудочной железы [8]. Эти данные указывают на возможное существование отрицательной обратной связи между продукцией apoA-I и секрецией инсулина.

Известно, что ядерные рецепторы, участвующие в инсулиновом сигналинге, контролируют экспрессию гена apoA-I в клетках печени [4]. Кроме того, гепатоцитарный энхансер гена apoA-I содержит участок потенциального связывания одного из ключевых факторов сигналинга инсулина - белка FOXO1. Эти данные указывают на ядерные рецепторы и фактор FOXO1 как на потенциальных регуляторов экспрессии гена apoA-I. Учитывая ключевую роль инсулина в регуляции метаболизма и важнейшую роль apoA-I в предотвращении развития атеросклероза, были сформулированы цель и задачи данного исследования.

Цель работы. Целью данной работы служило установление влияния инсулина и оксидативного стресса на экспрессию гена apoA-I в клетках гепатомы человека HepG2, а также выяснение роли сигнальных каскадов и транскрипционных факторов в этом процессе.

Задачи исследования.

1. Изучить регуляцию экспрессии гена apoA-I при оксидативном стрессе и установить сигнальные каскады и транскрипционные факторы, участвующие в этом процессе в клетках HepG2.

2. Изучить роль транскрипционного фактора FOXO1 в регуляции экспрессии гена apoA-I и выявить сайт связывания FOXO1 в 5-регуляторной области гена apoA-I.

3. Изучить регуляцию экспрессии гена apoA-I при обработке клеток HepG2 инсулином и определить сигнальные каскады и транскрипционные факторы, участвующие в регуляции экспрессии гена apoA-I инсулином.

4. Изучить взаимодействие белков FOXO1 и LXRP, а также FOXA2 и LXRa в клетках HepG2.

5. Определить влияние инсулина на стабильность комплексов транскрипционных факторов FOXO1, LXRP, FOXA2, LXRa, и на их способность взаимодействовать с 5'-регуляторной областью гена apoA-I и клеточную локализацию комплексов.

Научная новизна полученных результатов. Впервые показано, что регуляция гена apoA-I инсулином зависит от времени инкубации концентрации гормона, и изучена роль белков FOXO1, FOXA2, LXRa и LXRP в этом процессе. Впервые показано подавление экспрессии гена apoA-I транскрипционным фактором FOXO1 в клетках гепатомы человека HepG2, а также участие данного фактора в регуляции экспрессии гена apoA-I при оксидативном стрессе. Показано, что подавление экспрессии гена apoA-I при оксидативном стрессе происходит за счет активации сигнальных каскадов p38, JNK, Src и AMPK, а также транскрипционного фактора LXRa. Впервые показано образование комплекса белков FOXO1 и LXRP, а также FOXA2 и LXRa in vivo, и установлена необходимость данных комплексов для подавления экспрессии гена apoA-I инсулином. Показано, что подавление экспрессии гена apoA-I инсулином происходит за счет активации сигнальных каскадов PI3K/Akt/mTOR, p38, JNK, NF-kB и MEK в регуляции экспрессии гена apoA-I инсулином.

Теоретическое и практическое значение результатов исследования. Полученные результаты расширяют представление о регуляции экспрессии гена apoA-I факторами, играющими ключевую роль в регуляции метаболизма и ответа на оксидативный стресс. Учитывая ранее опубликованные данные об активации секреции инсулина Р-клетками поджелудочной железы аполипопротеином А-I, в настоящей работе выявлена отрицательная обратная связь между концентрацией инсулина и продукцией белка apoA-I клетками HepG2. Эти данные необходимо учитывать при разработке антиатеросклеротических препаратов на основе лигандов ядерных рецепторов и ингибиторов сигнальных белков, а также препаратов, повышающих содержание инсулина в крови. Выявленное в настоящей работе подавление экспрессии apoA-I при оксидативном стрессе позволяет предложить снижение уровня

эндогенной H2O2 в клетках печени в качестве мишени антиатерогенных препаратов. Полученные результаты необходимо учитывать при разработке препаратов для терапии инсулин-резистентности и метаболического синдрома.

Методология исследования. Исследование влияния инсулина и оксидативного стресса на экспрессию гена apoA-I проводилось с использованием культуры клеток гепатомы человека HepG2. Изменения уровня мРНК исследованных генов проводились с помощью ПЦР, а количества внутриклеточных и секретируемых белков - с помощью иммуноблоттинга и ИФА. Участие сигнальных каскадов и транскрипционных факторов в исследуемых процессах изучалось с помощью специфических ингибиторов, агонистов ядерных рецепторов и трансфекции клеток siRNA. Роли различных участков регуляторной области гена apoA-I в исследуемых процессах изучались с использованием иммунопреципитации хроматина, ДНК-аффинной хроматографии и плазмидных конструкций. Образование комплексов белков и их ядерно-цитоплазматическую транслокацию изучали с помощью иммунопреципитации и иммуноцитохимии.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Экспрессия гена apoA-I в клетках HepG2 подавлена при оксидативном стрессе за счет активации сигнальных каскадов JNK, p38, Src и AMPK, а также транскрипционных факторов FOXO1 и LXRa.

2. FOXO1 связывается с сайтом B гепатоцитарного энхансера гена apoA-I.

3. Инсулин подавляет экспрессию гена apoA-I в клетках HepG2 за счет активации сигнальных каскадов Akt, p38, MEK, mTORCl и NF-kB и транскрипционных факторов FOXO1, LXRß, FOXA2 и LXRa.

4. Белки FOXO1 и LXRß, а также FOXA2 и LXRa образуют комплексы в клетках HepG2. Обработка клеток инсулином вызывает ослабление связывания комплекса FOXO1/LXRß с гепатоцитарным энхансером и его транслокацию в цитоплазму.

Апробация работы. Материалы работы докладывались в виде устных и стендовых сообщений на следующих конференциях: 14ая Пущинская международная школа-конференция молодых ученых, 19 - 23 апреля 2010 г., Пущино; II всероссийская научная конференция молодых ученых "Проблемы биомедицинской науки третьего тысячелетия", ФГБУ "НИИЭМ" СЗО РАМН, 12 - 14 ноября 2012 года, Санкт-Петербург; XXII Международная научная конференция студентов, аспирантов и молодых ученых Ломоносов-2015, МГУ, 13-17 апреля 2015 г., Москва; Фундаментальная наука и клиническая медицина - человек и его здоровье, СПбГУ, 18 апреля 2015; Symposium of the International Atherosclerosis Society "Anitschkow Days", Санкт-Петербург, 2 - 4 июня, 2016.

Личный вклад автора в проведении исследования. Соискателем были проведены: анализ литературы по теме исследования, планирование экспериментов, получение основной части результатов, написание статей и подготовка докладов на конференциях. Выделение РНК и клеточных белков, реакции обратной транскрипции и ПЦР в реальном времени, иммунопреципитация хроматина, иммунопреципитация, иммуноблоттинг, конструирование генетических конструкций и сайт-направленный мутагенез, люциферазный тест, выделение ядерных белков и ДНК-аффинная хроматография выполнены соискателем. Культивирование клеточной линии HepG2 выполнено совместно с ведущим научным сотрудником отдела биохимии, к.б.н. Э.Б. Диже.

Структура диссертации. Диссертация построена по традиционной схеме и содержит разделы «Введение», «Обзор литературы», «Материалы и методы», «Результаты», «Обсуждение результатов», «Заключение», «Выводы», «Список сокращений», «Список цитируемой литературы», включающий 361 наименований, из них 361 наименований на английском языке, и «Приложение», содержащее 2 рисунка. Диссертация изложена на 1 28 страницах. Диссертация иллюстрирована 39 рисунками.

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

2.1. Роль ЛПНП и воспаления в патогенезе атеросклероза

Многие исследователи склонны рассматривать атеросклероз как заболевание, в истоках которого лежат нарушения в регуляции воспалительных процессов, происходящих в стенках сосудов [3, 9]. Такие процессы приводят к образованию атеросклеротической бляшки, а также ее дальнейшему росту [3, 9].

Первым этапом возникновения атеросклероза является активация клеток эндотелия сосудов вследствии нарушения нормального ламинарного тока крови [10]. Увеличение содержания холестерина в ЛПНП также способствует активации клеток эндотелия сосудов [2]. Активированные клетки эндотелия продуцируют провоспалительные цитокины, привлекающие лимфоциты крови и тромбоциты, и усиливают синтез молекул клеточной адгезии. Это стимулирует взаимодействие между клетками стенок сосуда и иммунной системы, а ремодуляция цитоскелета активированных клеток эндотелия позволяет лимфоцитам проникать внутрь стенок сосудов [11]. Ростовые факторы, секретируемые эндотелиальными клетками, способствуют пролиферации гладкомышечных клеток сосуда, что приводит к росту бляшки [12].

Процессы, происходящие с моноцитами, привлеченными в бляшку хемокинами и цитокинами, отражены на рисунке 1. Проникающие в область роста бляшки моноциты дифференцируются в макрофаги под влиянием провоспалительных цитокинов (ШБу, ГЬ-1Р, Т№а, МСР-1), синтезируемых эндотелиальными клетками. Значительную роль в этих процессах играют различные Т-лимфоциты [13]. ЛПНП связываются с протеогликанами стенок сосудов за счет ионных взаимодействий между молекулами протеогликанов и основного белка ЛПНП ароВ [14], что повышает их локальную концентрацию. В условиях гиперхолестеринемии этот процесс значительно повышает вероятность образования модифицированных липопротеидов низкой плотности (мЛПНП) непосредственно в стенках сосудов. Фагоцитоз макрофагами мЛПНП приводит к образованию пенистых клеток, пересыщенных эфирами холестерина, а также свободным холестерином. Такие макрофаги гибнут апоптозом или некрозом, что, во-первых, вызывает привлечение в область бляшки новых лимфоцитов, а во-вторых, стимулирует поглощение образовавшихся частиц фагоцитами и, как следствие, образование новых пенистых клеток и разрастание бляшки. Растущая бляшка привлекает не только иммунные клетки - также в нее проникают и фибробласты, со временем формирующие фиброзную капсулу. Рост числа клеток внутри капсулы, а также секреция клетками металлопротеиназ и подавление синтеза коллагена цитокинами вызывают нестабильность бляшки. Такая бляшка может оторваться от стенки сосуда и стать причиной образования тромба [3, 15].

Рисунок 1. Привлечение моноцитов в бляшку и формирование пенистых клеток.

Центральным событием в развитии атеросклероза является образование пенистых клеток [9]. Этот процесс, по-видимому, является следствием нарушения липидного обмена в макрофагах и гладкомышечных клетках сосуда. В норме одной из ключевых функций макрофагов является удаление потенциально вредоносных субстанций из тканей, таких как бактерии, частицы апоптозировавших клеток или же модифицированные ЛИНИ. Функцией ЛПНП считается перенос холестерина и фосфолипидов из тонкой кишки и печени в периферические ткани организма [9]. В процессе метаболизма ЛПНП часть из них претерпевает различные модификации, среди которых окисление [16, 17], агрегация [18], гликирование [9]. Выделяют несколько субфракций ЛПНП. Показано, что так называемые малые плотные ЛПНП (мпЛПНП;

диаметр — 18-20 нм, плотность — 1.044-1.063 г/мл) являются проатерогенными в отличие от более крупных и менее плотных субтипов. По сравнению с другими субтипами ЛПНП, в составе мпЛПНП повышено содержание ароС-Ш, что, по всей видимости, усиливает их способность связываться с артериальными протеогликанами [19] и, таким образом, увеличивает их проатерогенность.

Накопление холестерина в макрофагах вызывает секрецию провоспалительных цитокинов, таких как ГЬ-6 и ТОТа [20], и преобразование макрофагов в пенистые клетки. Такие клетки претерпевают клеточную смерть в ходе апоптоза или некроза [21]. Роль апоптоза в развитии бляшки неоднозначна. КиЬо et а1. показали, что агрегированные ЛПНП подавляют апоптоз, вызванный активацией протеин киназы С (РКС) форболовым эфиром, но способствуют апоптозу при обработке макрофагов цитокином М-С8Б [22]. При этом окисленные ЛПНП подавляют макрофагальную синтетазу N0 (¡N08), что ускоряет клеточную смерть [16]. Интерпретация результатов КиЬо et а1. усложняется тем фактом, что в данной работе использовались агрегированные ЛПНП, а не окисленные или минимально модифицированные ЛПНП. Кроме того, протокол выделения ЛПНП, использованный в данной работе, не предполагал отделения ЛПОНП от ЛПНП, что также могло повлиять на результаты исследования.

Инактивация внутриклеточного транспортера холестерина АВСА2 в макрофагах предотвращает накопление эфиров холестерина в макрофагах и вызывает ускоренный апоптоз клеток и уменьшение как размера бляшки, так и количества холестерина в ней [23]. Многие исследователи полагают, что апоптоз в ранней бляшке носит целительный характер, способствуя быстрому очищению бляшки от мЛПНП, в то время как апоптоз в развитой бляшке приводит к аккумуляции мЛПНП и макрофагов в бляшке из-за ускоренного превращения макрофагов в пенистые клетки [3, 22]. В развитой бляшке массовый апоптоз макрофагов приводит к накоплению большого числа апоптотических частиц, содержащих большие количества эфиров холестерина и остатков мЛПНП. Апоптотические частицы поглощаются другими макрофагами и вызывают миграцию новых моноцитов в бляшку, что приводит к амплификации воспаления [15].

Поглощение нативных ЛПНП происходит с помощью рецептора к ЛПНП (LDLR) [24, 25], однако модификации ЛПНП приводят к потере сродства к данному рецептору. Удаление мЛПНП из плазмы осуществляется с помощью скэвенджер рецепторов: 8Я-А [26], СБ36 [27], 8Я-В1 [28], СБ68 [17], 8Я-Р80Х [29] и ЬОХ-1 [30].

Необходимость удаления мЛПНП из плазмы вызвана их высокой проатерогенностью. Модифицированные ЛПНП подавляют активность нейтральной гидролазы эфиров холестерина (№СЕН1), ответственной за деэтерификацию внутриклеточного холестерина, угнетая обратный транспорт холестерина [31, 32]. Модифицированные ЛПНП стимулируют продукцию

специфических антител и являются антигенами для Т-лимфоцитов [33]. Такие специфические антитела связываются с мЛПНП, что ускоряет их поглощение макрофагами [34, 35]. Модифицированные ЛПНП вызывают апоптоз клеток эндотелия в культуре [36], а также подавляют вазадилатацию и увеличивают проницаемость стенок сосудов in vivo [3]. Кроме того, мЛПНП являются хемоатрактантами для моноцитов [17, 37]. Окисление фосфатидилхолина, входящего в ЛПНП, приводит к образованию молекул, чья структура напоминает структуру провоспалительного липидного медиатора, активирующего тромбоциты (PAF) [38]. Окисленный фосфатидилхолин способен взаимодействовать с рецепторами PAF, что усиливает воспалительный ответ макофагов и препятствует выходу дендритных клеток из бляшки [38]. Все эти свойства мЛПНП свособствуют разрастанию бляшки [3].

Эти эффекты достигаются за счет стимулирования экспрессии и секреции MCP-1, M-CSF, фактора роста, синтезируемого тромбоцитами (PDGF), фактора роста эпителия сосудов (VEGF) клетками эндотелия [17, 39, 40], а также активации ренин-ангиотензиновой системы [3]. Ангиотензин является сильным стимулятором экспрессии скэвенджер рецептора LOX-1, что способствует усилению поглощения мЛПНП клетками [41]. мЛПНП вызывают продукцию свободных радикалов (ROS) [42] и угнетают экспрессию iNOS макрофагами [43], что формирует петлю положительной обратной связи в развитии бляшки.

2.2. Сигнальные каскады ЛПНП в патогенезе атеросклероза

Известно несколько сигнальных путей, активируемых мЛПНП. мЛПНП обладают способностью связываться с толл-подобного рецептора 4 (TLR4) на поверхности клеток эндотелия и макрофагов, стимулируя сигнальные каскады, приводящие к активации этих клеток [44-46]. Классический сигнальный каскад TLR4 начинается с привлечения адаптора MyD88, в состав которого входит Death Domain (Рис. 2). С помощью этого домена происходит связывание киназ IRAKI и IRAK4, содержащих такой же домен, с MyD88 и их активация. Получившийся комплекс привлекает убиквитин-лигазы TRAF6 и cIAP1/2. Данные ферменты синтезируют K63-связанные цепи полиубиквитина на белках TRAF6 и IRAK1. С этими цепями взаимодействуют два комплекса: киназа TAK1 с адапторными белками TAB1/2 и киназы IKKa и IKKß со скэффолдом IKKy (NEMO). TAK1 активирует IKKß, что приводит к фосфорилированию белка ингибитора kB (IkB), стимулируя его деградацию в протеасоме, тем самым высвобождая гетеродимер транскрипционного фактора NF-kB. Данный транскрипционный фактор направляется в ядро и, связываясь с ДНК, участвует в активации экспрессии многих провоспалительных генов и подавлении транскрипции противовоспалительных генов. Схожим образом происходит активация киназы Tlp2, которая далее активирует киназы MEK1/2. Помимо

активации ГККР, ТАК1 также способен активировать киназы МКК3/6 и МКК4/7, что ведет к активации МАРК-каскадов [47].

Рисунок 2. Активация различных сигнальных каскадов при взаимодействии мЛПНП и TLR4.

Связывание мЛПНП с TLR4 приводит и к активации альтернативного, MyD88-независимого пути. Этот каскад начинается с фосфорилирования киназы Syk киназой Lyn, что приводит к ее активации. Syk конститутивно связана с TLR4 за счет своего Sffi-домена. Активация Syk приводит к усилению активности малой ГТФазы Vav, фосфолипазы PLCy и киназы PI3K. Это приводит к активации MAP-киназного каскада, стимулированию активности инфламмосом и усилению транскрипции генов провоспалительных цитокинов и других генов. В результате

активации ГТФаз происходит ремодулирование цитоскелета и усиление макропиноцитозной активности клетки, приводящее к беспорядочному поглощению как мЛПНП, так и нативных ЛПНП [48-50]. Активизация Vav и PLCy стимулирует работу синтетазы свободных радикалов NOX2 и вызывает увеличение концентрации ROS в клетке [42, 45, 50].

Модифицированные ЛПНП обладают и ^Я4-независимыми эффектами. В частности, мЛПНП активируют PI3K, что способствует активизации макропиноцитоза и синтезу провоспалительных цитокинов TNFa и MIP-1 [48, 49].

Эндотелиоциты, провзаимодействовавшие с мЛПНП, приобретают провоспалительный фенотип. Активация сигнальных каскадов NF-kB и MAPK приводит к активации синтеза провоспалительных цитокинов MCP-1, BMP2 и др., а также синтетазы NO (eNOS) и усилению синтеза ROS через активацию NOX2. Результатом подавления синтеза антиоксидантов является увеличение концентрации ROS в клетке, что приводит к дальнейшей активации провоспалительных ветвей MAPK каскадов. Взаимодействие ROS и NO вызывает появление пероксинитрита, который, в свою очередь, окисляет ЛПНП и увеличивает локальную концентрацию мЛПНП, способствуя развитию бляшки [3, 51, 52].

Несмотря на то что чрезмерная продукция ROS является патогенной, а высокие концентрации ROS в клетках наносят поврежения ДНК, липидам мембран и белкам за счет их окисления [52], в низких концентрациях ROS играют важную роль в сигналинге в качестве вторичных мессенджеров [53]. В частности, перекись водорода синтезируется в ответ на провоспалительные или гормональные стимулы и активирует сигнальные каскады напрямую либо за счет инактивации фосфатаз [52, 54].

MAP-киназные каскады играют важную роль в передаче сигнала от рецепторов гормонов и провоспалительных факторов. Одним из механизмов их активации является продукция пероксида водорода [51]. Пероксид водорода окисляет скэффолдный белок Trx, в норме взаимодействующий с киназами Ask1/2 (Рис. 3). Киназы Ask1/2, находящиеся в составе данного комплекса, неактивны, а диссоциация комплекса, происходящая за счет окисления Trx пероксидом водорода, приводит к их взаимодействию со скэффолдным белком TRAF6 и активации. Ask1/2 фосфорилирует белки MKK4/7 и MKK3/6, что приводит к активации киназ JNK и p38 соответственно [51].

Схожим образом происходит активация киназы Src. В состоянии покоя киназа Src неактивна за счет того, что в результате ингибирующего фосфорилирования происходит взаимодействие ее SH2 домена с фосфорилированным сайтом внутри киназы. Перекись водорода окисляет цистеины, входящие в состав Src, что приводит к формированию цистеиновых мостиков, изменению конформации киназы и ее активации [55]. Активированная Src фосфорилирует адаптерный протеин Shc, с которым за счет Sffi-домена связывается белок Grb2 [56]. Grb2

является активатором Ras за счет своей способности ускорять диссоциацию комплекса Ras/GDP и формирование комплекса Ras/GTP. Ras, в свою очередь, активирует каскад Raf/MEK1/2/Erk1/2 [51, 57]. Кроме того, Ras способен активировать GEF другой малой ГТФазы Ral [58]. Ral, в свою очередь, активирует JNK и p38 [59, 60]. Таким образом происходит активация JNK и p38 по Src-зависимому пути [61, 62]. Любопытно, что Src также способен инактивировать Ras за счет фосфорилирования по Tyr32 [63]. Вероятно, данный механизм необходим для предотвращения гиперактивации Ras.

Рисунок 3. Сигнальные каскады, активируемые перекисью водорода.

При оксидативном стрессе также происходит активация киназы сигнального каскада Hippo MST1 и метаболической киназы AMPK. Активация MST1 при оксидативном стрессе может приводить как к апоптозу [64], так и к запуску механизмов защиты клеток от свободных радикалов [65]. Активация AMPK также усиливает транскрипцию генов ферментов, инактивирующих свободные радикалы [66, 67]. Любопытно, что активация AMPK при оксидативном стрессе также может происходить по Src-зависимому механизму [68].

Скэвенджер рецепторы также обладают способностью передавать сигнал внутрь клетки при взаимодействии с мЛПНП. Скэвенджер рецептор CD36 активирует киназы семейства Src Fyn и Lyn, что приводит к фосфорилированию MEKK2, JNK1 и JNK2 и активации макрофагов. Другой мишенью Lyn является киназа PYK2, которая также участвует в активации JNK и Erk и усиливает продукцию ROS. Фосфорилирование цитоплазматического домена CD36 киназой Lyn способствует образованию комплекса CD36-TLR4. Таким образом, CD36 участвует в активации NF-кБ под действием мЛПНП в макрофагах. CD36 взаимодействует с TLR4 и мЛПНП-зависимо активирует Vav, который запускает эндоцитоз мЛПНП за счет взаимодействия с dynamin-2, активации PLCy и кальциевого сигналинга. Что особенно важно, способность мЛПНП блокировать эмиграцию макрофагов из бляшки зависит от CD36-опосредованной активации киназы FAK и продукции ROS [3].

Скэвенджер рецептор LOX-1, являющийся основным скэвенджер рецептором эндотелиоцитов, также играет важную роль в проатерогенном сигналинге мЛПНП [3, 41, 69]. Его вклад в эндоцитоз ЛПНП в макрофагах в норме невысок, но при стимуляции клеток ЛПНП экспрессия LOX-1 значительно усиливается, и доля его участия в поглощении мЛПНП существенно возрастает. LOX-1 участвует в мЛПНП-зависимой активации экспрессии генов хемокинов MCP-1, IL-8, CXCL2, CXCL3, ростовых факторов PDGF, VEGF и HB-EGF, молекул клеточной адгезии ICAM-1, VCAM-1, P-selectin, E-selectin, металлопротеиназ MMP-1 и MMP-9. Блокирование сингналинга LOX-1 уменьшает вероятность апоптоза при обработке эндотелиоцитов мЛПНП и ослабляет мЛПНП-зависимое усиление экспрессии Fas. При этом увеличение количества молекул LOXIN, альтернативной сплайс-изоформы LOX-1, защищает клетки от апоптоза. мЛПНП активируют экспрессию гена вазоконстриктора ET-1, который, в свою очередь, усиливает экспрессию гена LOX-1, что приводит к созданию петли положительной обратной связи. Цитоплазматический домен LOX-1 служит доком для сборки комплекса ARHGEF1/MMP1/ROCK2, взаимодействие которого с RhoA приводит к активации киназной активности ROCK2 и последующему фосфорилированию и инактивации PI3K, PKB и eNOS. Этим частично объясняется вклад LOX-1 в апоптоз эндотелиоцитов и вазоконстрикцию. ROCK2 также активирует NF-кБ, способствуя усилению экспрессии провоспалительных генов. LOX-1 также способствует продукции ROS через взаимодействие с Rac1 [3, 41, 69].

2.3. Роль воспаления в патогенезе атеросклероза

Ключевую роль во всех вышеописанных процессах играет воспаление. Провоспалительные цитокины как правило способствуют развитию атеросклероза, то есть являются проатеросклеротическими, вызывая увеличение количества макрофагов М1 типа и Th1 лимфоцитов в бляшке. В тоже время цитокины, лимитирующие развитие воспаления и

способствующие специализации макрофагов по М2 фенотипу и привлечению Treg и Th2 лимфоцитов, как правило, являются антиатеросклеротическими [26, 70]. Макрофаги M2 типа секретируют противовоспалительные цитокины, ограничивая развитие бляшки. В то же время, они синтезируют факторы роста и ангиогенеза, такие как VEGF, что может способствовать пролиферации гладкомышечных и эпителиальных клеток и росту бляшки. В регрессирующих бляшках отношение количества М2 макрофагов к числу М1 макрофагов существенно выше, чем в растущих бляшках, что подчеркивает антиатеросклеротические свойства М2 макрофагов. При этих условиях синтез факторов ангиогенеза М2 макрофагами, очевидно, не является атерогенным. Однако в растущих бляшках продукция VEGF и других факторов М2 макрофагами может вносить вклад в развитие атеросклероза [11, 26].

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Шавва, Владимир Станиславович, 2017 год

9. СПИСОК ЦИТИРУЕМОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

1. Kontush A. HDL-mediated mechanisms of protection in cardiovascular disease / Kontush A. //

Cardiovascular Research - 2014. - Т. 103 - № 3 - С.341-349.

2. Kontush A. Functionally defective high-density lipoprotein: a new therapeutic target at the crossroads

of dyslipidemia, inflammation, and atherosclerosis. / Kontush A., Chapman M.J. // Pharmacological reviews - 2006. - Т. 58 - № 3 - С.342-374.

3. Hopkins P.N. Molecular Biology of Atherosclerosis / Hopkins P.N. // Physiol Rev - 2013. - Т. 93 -

С.1317-1542.

4. Mogilenko D. Role of the nuclear receptors HNF4a, PPARa, and LXRs in the TNFa-mediated

inhibition of human apolipoprotein A-I gene expression in HepG2 cells / Mogilenko D., Dizhe E.B., Shavva V.S., Lapikov I., Orlov S. V, Perevozchikov A.P. // Biochemistry - 2009. - Т. 48 -№ 50 - С.11950-11960.

5. Orlov S. V. Effect of TNFa on activities of different promoters of human apolipoprotein A-I gene /

Orlov S. V., Mogilenko D., Shavva V.S., Dizhe E.B., Ignatovich I., Perevozchikov A.P. // Biochemical and Biophysical Research Communications - 2010. - Т. 398 - № 2 - С.224-230.

6. Siddle K. Signalling by insulin and IGF receptors: Supporting acts and new players / Siddle K. //

Journal of Molecular Endocrinology - 2011. - Т. 47 - № 1.

7. Murao K. Effects of glucose and insulin on rat apolipoprotein A-I gene expression. / Murao K., Wada

Y., Nakamura T., Taylor A.H., Mooradian A.D., Wong N.C. // The Journal of biological chemistry

- 1998. - Т. 273 - № 30 - С.18959-18965.

8. Fryirs M.A. Effects of high-density lipoproteins on pancreatic P-cell insulin secretion / Fryirs M.A.,

Barter P.J., Appavoo M., Tuch B.E., Tabet F., Heather A.K., Rye K.A. // Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology - 2010. - Т. 30 - № 8 - С.1642-1648.

9. Ross R. Atherosclerosis - an Inflammatory Disease / Ross R. // The New Engand Journal of Medicine

- 1999. - Т. 340 - № 2 - С.115-126.

10. Chatzizisis Y.S. Role of Endothelial Shear Stress in the Natural History of Coronary Atherosclerosis

and Vascular Remodeling. Molecular, Cellular, and Vascular Behavior / Chatzizisis Y.S., Coskun A.U., Jonas M., Edelman E.R., Feldman C.L., Stone P.H. // Journal of the American College of Cardiology - 2007. - Т. 49 - № 25 - С.2379-2393.

11. Atherosclerosis. Molecular and Cellular Mechanisms / / под ред. S.J. George, J. Johnson. — Wiley-

VCH Verlag GmbH & Co. KGaA, 2010.- 1-398c.

12. Allahverdian S. Contribution of monocyte-derived macrophages and smooth muscle cells to arterial

foam cell formation / Allahverdian S., Pannu P.S., Francis G.A. // Cardiovascular Research - 2012.

- Т. 95 - № 2 - С.165-172.

13. Robertson A.K.L. T cells in atherogenesis: For better or for worse? / Robertson A.K.L., Hansson

G.K. // Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology - 2006. - Т. 26 - № 11 - С.2421-2432.

14. Khalil M.F. Molecular interactions leading to lipoprotein retention and the initiation of

atherosclerosis / Khalil M.F., Wagner W.D., Goldberg I.J. // Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology - 2004. - Т. 24 - № 12 - С.2211-2218.

15. Tall A.R. Cholesterol efflux pathways and other potential mechanisms involved in the athero-

protective effect of high density lipoproteins / Tall A.R. // Journal of Internal Medicine - 2008. -Т. 263 - № 3 - С.256-273.

16. Navab M. The Yin and Yang of Oxidation in the Development of the Fatty Streak: A Review Based

on the 1994 George Lyman Duff Memorial Lecture / Navab M., Berliner J.A., Watson A.D., Hama

17

18

19

20

21

22

23

24

25

26

27

28

29

30

S.Y., Territo M.C., Lusis A.J., Shih D.M., Lenten B.J. Van, Frank J.S., Demer L.L., Edwards P.A., Fogelman A.M. // Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology - 1996. - T. 16 - № 7 -C.831-842.

Steinberg D. Oxidation and Its Pathobiological Significance / Steinberg D. // J. Biol. Chem. Bio -1997. - T. 272 - № 34 - C.20963-20966.

Khoo J.C. Enhanced macrophage uptake of low density lipoprotein after self-aggregation. / Khoo J.C., Miller E., McLoughlin P., Steinberg D. // Arteriosclerosis (Dallas, Tex.) - 1988. - T. 8 - № 4 - C.348-358.

Diffenderfer M.R. The composition and metabolism of large and small LDL. / Diffenderfer M.R., Schaefer E.J. // Current opinion in lipidology - 2014. - T. 25 - № 3 - C.221-6.

Li Y. Free cholesterol-loaded macrophages are an abundant source of tumor necrosis factor-a and interleukin-6: Model of NF-kB- and MAP kinase-dependent inflammation in advanced atherosclerosis / Li Y., Schwabe R.F., DeVries-Seimon T., Yao P.M., Gerbod-Giannone M.C., Tall A.R., Davis R.J., Flavell R., Brenner D.A., Tabas I. // Journal of Biological Chemistry - 2005.

- T. 280 - № 23 - C.21763-21772.

Reid V.C. Fragmentation of DNA in P388D1 macrophages exposed to oxidised low-density lipoprotein. / Reid V.C., Hardwick S.J., Mitchinson M.J. // FEBS letters - 1993. - T. 332 - № 3 -C.218-220.

Kubo N. Regulatory effects of aggregated LDL on apoptosis during foam cell formation of human peripheral blood monocytes / Kubo N., Kikuchi J., Furukawa Y., Sakai T., Ohta H., Iwase S., Yamada H., Sakurabayashi I. // FEBS Letters - 1997. - T. 409 - № 2 - C.177-182.

Calpe-Berdiel L. Macrophage ABCA2 deletion modulates intracellular cholesterol deposition, affects macrophage apoptosis, and decreases early atherosclerosis in LDL receptor knockout mice / Calpe-Berdiel L., Zhao Y., Graauw M. De, Ye D., Santbrink P.J. Van, Mommaas M., Foks A., Bot M., Meurs I., Kuiper J., Mack J.T., Eck M. Van, Tew KD., Berkel T.J.C. Van // Atherosclerosis - 2012. - T. 223 - № 2 - C.332-341.

Brown M.S. Receptor-mediated endocytosis: insights from the lipoprotein receptor system. / Brown M.S., Goldstein J.L. // Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America - 1979. - T. 76 - № 7 - C.3330-3337.

Francket U. Assignment of the human gene for the low density lipoprotein receptor to chromosome 19: Synteny of a receptor, a ligand, and a genetic disease / Francket U., Browns M.S., Goldsteint J.L. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA - 1984. - T. 81 - № May - C.2826-2830.

Tedgui A. Cytokines in atherosclerosis: pathogenic and regulatory pathways. / Tedgui A., Mallat Z. // Physiological reviews - 2006. - T. 86 - № 2 - C.515-581.

Nicholson A.C. Role of CD36, the macrophage class B scavenger receptor, in atherosclerosis. / Nicholson A.C., Han J., Febbraio M., Silversterin R.L., Hajjar D.P. // Annals of the New York Academy of Sciences - 2001. - T. 947 - C.224-228.

Ikonen E. Mechanisms for cellular cholesterol transport: defects and human disease. / Ikonen E. // Physiological reviews - 2006. - T. 86 - № 4 - C.1237-1261.

Minami M. Expression of SR-PSOX, a novel cell-surface scavenger receptor for phosphatidylserine and oxidized LDL in human atherosclerotic lesions. / Minami M., Kume N., Shimaoka T., Kataoka H., Hayashida K., Akiyama Y., Nagata I., Ando K., Nobuyoshi M., Hanyuu M., Komeda M., Yonehara S., Kita T. // Arteriosclerosis, thrombosis, and vascular biology - 2001. - T. 21 - № 11

- C.1796-1800.

Kume N. Lectin-Like Oxidized Low-Density in Atherogenesis / Kume N., Kita T. // Science - 2001.

- T. 11 - № 1 - C.22-25.

31. Brown M.S. Reversible Accumulation of cholesteryl Esters in Macrophages Incubated with

Acetylated Lipoproteins / Brown M.S., Goldstein J.L., Krieger M., Ho Y.K., Anderson R.G.W. // J. Cell. Biol. - 1979. - T. 82 - № September - C.597-613.

32. Inaba T. Macrophage colony-stimulating factor regulates both activities of neutral and acidic

cholesteryl ester hydrolases in human monocyte-derived macrophages / Inaba T., Shimano H., Gotoda T., Harada K., Shimada M., Kawamura M., Yazaki Y., Yamada N. // Journal of Clinical Investigation - 1993. - T. 92 - № 2 - C.750-757.

33. Stemme S. T lymphocytes from human atherosclerotic plaques recognize oxidized low density

lipoprotein. / Stemme S., Faber B. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA - 1995. - T. 92 - № 9 - C.3893-7.

34. Khoo J.C. Monoclonal antibodies against LDL further enhance macrophage uptake of LDL

aggregates. / Khoo J.C., Miller E., Pio F., Steinberg D., Witztum J.L. // Atherosclerosis and Trombosis - 1992. - T. 12 - № 11 - C.1258-1266.

35. Klimov A.N. Lipoprotein-antibody immune complexes. Their catabolism and role in foam cell

formation. / Klimov A.N., Denisenko A.D., Popov A. V, Nagornev V.A., Pleskov V.M., Vinogradov A.G., Denisenko T. V, Magracheva E Y, Kheifes G.M., Kuznetzov A.S. // Atherosclerosis - 1985. - T. 58 - № 1-3 - C.1-15.

36. Hessler J.R. Lipoprotein oxidation and lipoprotein-induced cytotoxicity / Hessler J.R., Morel D.W.,

Lewis L.J., Chisolm G.M. // Atherosclerosis - 1983. - T. 3 - № 3 - C.215-22.

37. Quinn M.T. Oxidatively modified low density lipoproteins: a potential role in recruitment and

retention of monocyte/macrophages during atherogenesis. / Quinn M.T., Parthasarathy S., Fong L.G., Steinberg D. // Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America - 1987. - T. 84 - № 9 - C.2995-2998.

38. Angeli V. Dyslipidemia Associated with Atherosclerotic Disease Systemically Alters Dendritic Cell

Mobilization / Angeli V., Llodra J., Rong J.X., Satoh K., Ishii S., Shimizu T., Fisher E.A., Randolph G.J. // Immunity - 2004. - T. 21 - C.561-574.

39. Ramos M.A. Induction of macrophage VEGF in response to oxidized LDL and VEGF accumulation

in human atherosclerotic lesions. / Ramos M.A., Kuzuya M., Esaki T., Miura S., Satake S., Asai T., Kanda S., Hayashi T., Iguchi A. // Arteriosclerosis, thrombosis, and vascular biology - 1998. - T. 18 - № 7 - C.1188-1196.

40. Inoue M. Oxidized LDL Regulates Vascular Endothelial Growth Factor Expression in Human

Macrophages and Endothelial Cells Through Activation of Peroxisome Proliferator-Activated Receptor-y / Inoue M., Itoh H., Tanaka T., Chun T.-H., Doi K., Fukunaga Y., Sawada N., Yamshita J., Masatsugu K., Saito T., Sakaguchi S., Sone M., Yamahara K. -i., Yurugi T., Nakao K. // Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology - 2001. - T. 21 - № 4 - C.560-566.

41. Mehta J.L. Lectin-like, oxidized low-density lipoprotein receptor-1 (LOX-1): A critical player in the

development of atherosclerosis and related disorders / Mehta J.L., Chen J., Hermonat P.L., Romeo F., Novelli G. // Cardiovascular Research - 2006. - T. 69 - № 1 - C.36-45.

42. Bae Y.S. Macrophages generate reactive oxygen species in response to minimally oxidized low-

density lipoprotein: Toll-like receptor 4- and spleen tyrosine kinase-dependent activation of NADPH oxidase 2 / Bae Y.S., Lee J.H., Choi S.H., Kim S., Almazan F., Witztum J.L., Miller Y.I. // Circulation Research - 2009. - T. 104 - № 2 - C.210-218.

43. Yang X. Oxidized Low Density Lipoproteins Alter Macrophage Lipid Uptake , Apoptosis , Viability

and Nitric Oxide / Yang X., Galeano N.F., Szabolcs M., Sciacca R.R., Cannon P.J. // The Journal of Nutrition - 1996. - T. 126 - C.1072S-1075S.

44. Miller Y.I. Actin polymerization in macrophages in response to oxidized LDL and apoptotic cells:

Role of 12/15-lipoxygenase and phosphoinositide 3-kinase / Miller Y.I., Worrall D.S., Funk C.D.,

Feramisco J.R., Witztum J.L. // Molecular Biology of the Cell - 2003. - T. 14 - № 10 - C.4196-4206.

45. Miller Y.I. Toll-like receptor 4-dependent and -independent cytokine secretion induced by minimally

oxidized low-density lipoprotein in macrophages / Miller Y.I., Viriyakosol S., Worrall D.S., Boullier A., Butler S., Witztum J.L. // Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology - 2005. - T. 25 - № 6 - C.1213-1219.

46. Miller Y.I. Oxidation-Specific Epitopes are Danger Associated Molecular Patterns Recognized by

Pattern Recognition Receptors of Innate Immunity / Miller Y.I., Choi S., Wiesner P., Fang L., Harkewicz R., Hartvigsen K., Boullier A., Gonen A., Diehl C.J., Que X., Montano E., Shaw P.X., Tsimikas S., Binder C.J., Witztum L. // Circ Res - 2011. - T. 108 - № 2 - C.235-248.

47. Newton K. Signaling in Innate Immunity and Inflammation / Newton K., Dixit V.M. // Cold Spring

Harbor Perspectives in Biology - 2012. - T. 4 - № 3 - C.a006049-a006049.

48. Miller Y.I. Minimally modified LDL binds to CD14, induces macrophage spreading via TLR4/MD-

2, and inhibits phagocytosis of apoptotic cells / Miller Y.I., Viriyakosol S., Binder C.J., Feramisco J R., Kirkland T.N., Witztum J.L. // Journal of Biological Chemistry - 2003. - T. 278 - № 3 -C.1561-1568.

49. Miller Y.I. Toll-Like Receptor-4 and Lipoprotein Accumulation in Macrophages / Miller Y.I., Choi

S.-H., Fang L., Harkewitz R. // Trends in Cardiovascular Medicine - 2009. - T. 19 - № 7 - C.227-232.

50. Miller Y.I. The SYK side of TLR4: Signalling mechanisms in response to LPS and minimally

oxidized LDL / Miller Y.I., Choi S.H., Wiesner P., Bae Y.S. // British Journal of Pharmacology -2012. - T. 167 - № 5 - C.990-999.

51. Kyriakis J.M. Mammalian MAPK signal transduction pathways activated by stress and

inflammation: a 10-year update. / Kyriakis J.M., Avruch J. // Physiological reviews - 2012. - T. 92 - № 2 - C.689-737.

52. Schieber M. ROS function in redox signaling and oxidative stress / Schieber M., Chandel N.S. //

Current Biology - 2014. - T. 24 - № 10 - C.R453-R462.

53. Rani V. Oxidative stress and metabolic disorders: Pathogenesis and therapeutic strategies. / Rani V.,

Deep G., Singh R.K., Palle K., Yadav U.C.S. // Life sciences - 2016. - T. 148 - C.183-193.

54. Bedard K. The NOX family of ROS-generating NADPH oxidases: physiology and pathophysiology.

/ Bedard K., Krause K.-H. // Physiological reviews - 2007. - T. 87 - № 1 - C.245-313.

55. Giannoni E. Intracellular Reactive Oxygen Species Activate Src Tyrosine Kinase during Cell

Adhesion and Anchorage-Dependent Cell Growth / Giannoni E., Buricchi F., Raugei G., Ramponi G., Chiarugi P. // Molecular and cellular biology - 2005. - T. 25 - № 15 - C.6391-6403.

56. Geer P. van der The Shc adaptor protein is highly phosphorylated at conserved, twin tyrosine residues

(Y239/240) that mediate protein-protein interactions / Geer P. van der, Wiley S., Gish G.D., Pawson T. // Current Biology - 1996. - T. 6 - № 11 - C.1435-1444.

57. Aikawa R. Oxidative Stress Activates Extracellular Signal - regulated Kinases through Src and Ras

in Cultured Cardiac Myocytes of Neonatal Rats / Aikawa R., Komuro I., Yamazaki T., Zou Y., Kudoh S., Tanaka M., Shiojima I., Hiroi Y., Yazaki Y. // J. Clin. Invest. - 1997. - T. 100 - C.1813-1821.

58. Wolthuis R.M.F. Ras-dependent activation of the small GTPase Ral / Wolthuis R.M.F., Zwartkruis

F., Moen T.C., Bos J.L. // Current Biology - 1998. - T. 8 - C.471-474.

59. Ruiter N.D. de Ras-dependent regulation of c-Jun phosphorylation is mediated by the Ral guanine

nucleotide exchange factor-Ral pathway. / Ruiter N.D. de, Wolthuis R.M., Dam H. van, Burgering B.M., Bos J.L. // Molecular and cellular biology - 2000. - T. 20 - № 22 - C.8480-8.

60. Wang W. Sequential Activation of the MEK - Extracellular Signal-Regulated Kinase and MKK3/6-

p38 Mitogen-Activated Protein Kinase Pathways Mediates Oncogenic ras-Induced Premature Senescence / Wang W., Chen J.X., Liao R., Deng Q., Zhou J.J., Huang S., Sun P. // Molecular and cellular biology - 2002. - T. 22 - № 10 - C.3389-3403.

61. Kim M.-J. c-Src-p38 mitogen-activated protein kinase signaling is required for Akt activation in

response to ionizing radiation. / Kim M.-J., Byun J.-Y., Yun C.-H., Park I.-C., Lee K.-H., Lee S.-J. // Molecular cancer research : MCR - 2008. - T. 6 - № 12 - C.1872-80.

62. Yoshizumi M. Src and Cas mediate JNK activation but not ERK1/2 and p38 kinases by reactive

oxygen species / Yoshizumi M., Abe J.I., Haendeler J., Huang Q., Berk B.C. // Journal of Biological Chemistry - 2000. - T. 275 - № 16 - C.11706-11712.

63. Bunda S. Src promotes GTPase activity of Ras via tyrosine 32 phosphorylation. / Bunda S., Heir P.,

Srikumar T., Cook J.D., Burrell K., Kano Y., Lee J.E., Zadeh G., Raught B., Ohh M. // Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America - 2014. - T. 111 - № 36 -C.E3785-94.

64. Yuan Z. Regulation of neuronal cell death by MST1-FOXO1 signaling. / Yuan Z., Lehtinen M.K.,

Merlo P., Villen J., Gygi S., Bonni A. // The Journal of biological chemistry - 2009. - T. 284 - № 17 - C.11285-11292.

65. Choi J. Mst1-FoxO signaling protects naive T lymphocytes from cellular oxidative stress in mice /

Choi J., Oh S., Lee D., Oh HJ., Park J.Y., Lee S.B., Lim D.S. // PLoS ONE - 2009. - T. 4 - № 11 - C.1-10.

66. Awad H. AMPK and FoxO1 regulate catalase expression in hypoxic pulmonary arterial smooth

muscle / Awad H., Nolette N., Hinton M., Dakshinamurti S. // Pediatric Pulmonology - 2014. - T. 49 - № 9 - C.885-897.

67. Liu X. Cobalt protoporphyrin induces HO-1 expression mediated partially by FOXO1 and reduces

mitochondria-derived reactive oxygen species production / Liu X., Cui Y., Li M., Xu H., Zuo J., Fang F., Chang Y. // PLoS ONE - 2013. - T. 8 - № 11 - C.1-9.

68. Zou M.H. Activation of the AMP-activated protein kinase by the anti-diabetic drug metformin in

vivo: Role of mitochondrial reactive nitrogen species / Zou M.H., Kirkpatrick S.S., Davis B.J., Nelson J.S., Wiles IV W.G., Schlattner U., Neumann D., Brownlee M., Freeman M.B., Goldman M.H. // Journal of Biological Chemistry - 2004. - T. 279 - № 42 - C.43940-43951.

69. Pirillo A. LOX-1 , OxLDL , and Atherosclerosis / Pirillo A., Norata G.D., Catapano A.L. // Mediators

of Inflammatio - 2013. - T. 2013 - C.1-12.

70. Shimada K. Immune system and atherosclerotic disease: heterogeneity of leukocyte subsets

participating in the pathogenesis of atherosclerosis. / Shimada K. // Circulation journal: official journal of the Japanese Circulation Society - 2009. - T. 73 - № 6 - C.994-1001.

71. Autieri M.V. Pro- and anti-inflammatory cytokine networks in atherosclerosis / Autieri M.V. // ISRN

Vascular Medicine - 2012. - T. 2012 - № Ldl - C.1-17.

72. Huang Y. Effects of Genotype and Diet on Cholesterol Efflux into Plasma and Lipoproteins of

Normal, Apolipoprotein A-I-, and Apolipoprotein E-Deficient Mice / Huang Y., Zhu Y., Langer C., Raabe M., Wu S., Wiesenhutter B., Seedorf U., Maeda N., Assmann G., Eckardstein A. von // Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology - 1997. - T. 17 - № 10 - C.2010-2019.

73. Thorngate F.E. Testing the role of apoA-I, HDL, and cholesterol efflux in the atheroprotective action

of low-level apoE expression. / Thorngate F.E., Yancey P.G., Kellner-Weibel G., Rudel L.L., Rothblat G.H., Williams D.L. // Journal of lipid research - 2003. - T. 44 - № 12 - C.2331-2338.

74. Hu Y.W. Characteristics of apolipoprotein M and its relation to atherosclerosis and diabetes / Hu

Y.W., Zheng L., Wang Q. // Biochimica et Biophysica Acta - Molecular and Cell Biology of Lipids - 2010. - T. 1801 - № 2 - C.100-105.

75. Vanhollebeke B. The function of apolipoproteins L / Vanhollebeke B., Pays E. // Cellular and

Molecular Life Sciences - 2006. - T. 63 - № 17 - C.1937-1944.

76. Srivastava R.A.K. High density lipoprotein, apolipoprotein A-I, and coronary artery disease /

Srivastava R.A.K., Srivastava N. // Molecular and Cellular Biochemistry - 2000. - T. 209 - C.131-144.

77. Lewis G.F. New insights into the regulation of HDL metabolism and reverse cholesterol transport /

Lewis G.F., Rader D.J. // Circulation Research - 2005. - T. 96 - № 12 - C.1221-1232.

78. Vuilleumier N. Pro- or anti-inflammatory role of apolipoprotein A-1 in high-density lipoproteins? /

Vuilleumier N., Dayer J.M., Eckardstein A. Von, Roux-Lombard P. // Swiss Medical Weekly -2013. - T. 143 - № May - C.1-12.

79. Scanu A.M. HDL: bridging past and present with a look at the future. / Scanu A.M., Edelstein C. //

The FASEB journal: official publication of the Federation of American Societies for Experimental Biology - 2008. - T. 22 - № 12 - C.4044-4054.

80. Schultz J.R. Protein composition determines the anti-atherogenic properties of HDL in transgenic

mice. / Schultz J.R., Verstuyft J.G., Gong E.L., Nichols A. V, Rubin E.M. // Nature - 1993. - T. 365 - № 6448 - C.762-764.

81. Oram J.F. ABCA1-mediated transport of cellular cholesterol and phospholipids to HDL

apolipoproteins. / Oram J.F., Vaughan A.M. // Current opinion in lipidology - 2000. - T. 11 - № 3 - C.253-260.

82. Oram J.F. Tangier disease and ABCA1 / Oram J.F. // Biochimica et Biophysica Acta - Molecular

and Cell Biology of Lipids - 2000. - T. 1529 - № 1-3 - C.321-330.

83. Wang N. Specific binding of ApoA-I, enhanced cholesterol efflux, and altered plasma membrane

morphology in cells expressing ABC1. / Wang N., Silver D.L., Costet P., Tall A.R. // J Biol Chem

- 2000. - T. 275 - № 42 - C.33053-33058.

84. Klucken J. ABCG1 (ABC8), the human homolog of the Drosophila white gene, is a regulator of

macrophage cholesterol and phospholipid transport. / Klucken J., Buchler C., Orso E., Kaminski W.E., Porsch-Ozcurumez M., Liebisch G., Kapinsky M., Diederich W., Drobnik W., Dean M., Allikmets R., Schmitz G. // Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America - 2000. - T. 97 - № 2 - C.817-822.

85. Kaminski W.E. ABC A-subfamily transporters: Structure, function and disease / Kaminski W.E.,

Piehler A., Wenzel J.J. // Biochimica et Biophysica Acta - Molecular Basis of Disease - 2006. -T. 1762 - № 5 - C.510-524.

86. Rader D.D.J. Molecular regulation of HDL metabolism and function: implications for novel

therapies / Rader D.D.J. // Journal of Clinical Investigation - 2006. - T. 116 - № 12 - C.3090-3100.

87. Wang X. Macrophage ABCA1 and ABCG1, but not SR-BI, promote macrophage reverse cholesterol

transport in vivo / Wang X., Collins H.L., Ranalletta M., Fuki I. V, Billheimer J.T., Rothblat G.H., Tall A.R., Rader D.J. // J. Clin. Invest. - 2007. - T. 117 - C.2216-2224.

88. Takahashi Y. Cholesterol efflux to apolipoprotein AI involves endocytosis and resecretion in a

calcium-dependent pathway. / Takahashi Y., Smith J.D. // Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America - 1999. - T. 96 - № 20 - C.11358-11363.

89. Scott B.R. The N-terminal Globular Domain and the First Class A Amphipathic Helix of

Apolipoprotein A-I Are Important for Lecithin: Cholesterol Acyltransferase Activation and the Maturation of High Density Lipoprotein in Vivo / Scott B.R., McManus D.C., Franklin V., McKenzie A.G., Neville T., Sparks D.L., Marcel Y.L. // Journal of Biological Chemistry - 2001.

- T. 276 - № 52 - C.48716-48724.

90. Reis E.D. Dramatic remodeling of advanced atherosclerotic plaques of the apolipoprotein E-

deficient mouse in a novel transplantation model / Reis E.D., Li J., Fayad Z.A., Rong J.X., Hansoty

D., Aguinaldo J.-G., Fallon J.T., Fisher E.A. // Journal of Vascular Surgery - 2001. - T. 34 - № 3

- C.541-2A.

91. Trogan E. Serial Studies of Mouse Atherosclerosis by In Vivo Magnetic Resonance Imaging Detect

Lesion Regression After Correction of Dyslipidemia / Trogan E. // Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology - 2004. - T. 24 - № 9 - C.1714-1719.

92. Randolph G.J. Differentiation of monocytes into dendritic cells in a model of transendothelial

trafficking. / Randolph G.J., Beaulieu S., Lebecque S., Steinman R.M., Muller W.A. // Science (New York, N.Y.) - 1998. - T. 282 - № 5388 - C.480-483.

93. Llodrá J. Emigration of monocyte-derived cells from atherosclerotic lesions characterizes regressive,

but not progressive, plaques. / Llodrá J., Angeli V., Liu J., Trogan E., Fisher E.A., Randolph G.J. // Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America - 2004. - T. 101 - № 32 - C.11779-11784.

94. Trogan E. Gene expression changes in foam cells and the role of chemokine receptor CCR7 during

atherosclerosis regression in ApoE-deficient mice. / Trogan E., Feig J.E., Dogan S., Rothblat G.H., Angeli V., Tacke F., Randolph G.J., Fisher E.A. // Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America - 2006. - T. 103 - № 10 - C.3781-3786.

95. Tangirala R.K. Identification of macrophage liver X receptors as inhibitors of atherosclerosis. /

Tangirala R.K., Bischoff E.D., Joseph S.B., Wagner B.L., Walczak R., Laffitte B.A., Daige C.L., Thomas D., Heyman R.A., Mangelsdorf D.J., Wang X., Lusis A.J., Tontonoz P., Schulman I.G. // Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America - 2002. - T. 99

- № 18 - C.11896-11901.

96. Levin N. Macrophage liver X receptor is required for antiatherogenic activity of LXR agonists /

Levin N., Bischoff E.D., Daige C.L., Thomas D., Vu C.T., Heyman R.A., Tangirala R.K., Schulman I.G. // Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology - 2005. - T. 25 - № 1 -C.135-142.

97. Joseph S.B. Synthetic LXR ligand inhibits the development of atherosclerosis in mice. / Joseph S.B.,

McKilligin E., Pei L., Watson M., Collins A.R., Laffitte B. a, Chen M., Noh G., Goodman J., Hagger G.N., Tran J., Tippin T.K., Wang X., Lusis A.J., Hsueh W., Law R.E., Collins J.L., Willson T.M., Tontonoz P. // Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America - 2002. - T. 99 - № 11 - C.7604-7609.

98. Feig J.E. LXR promotes the maximal egress of monocyte-derived cells from mouse aortic plaques

during atherosclerosis regression / Feig J.E., Pineda-Torra I., Sanson M., Bradley M.N., Vengrenyuk Y., Bogunovic D., Gautier E.L., Rubinstein D., Hong C., Liu J., Wu C., Rooijen N. van, Bhardwaj N., Garabedian M.J., Tontonoz P., Fisher E.A. // J. Clin. Invest. - 2010. - T. 120 -№ 12 - C.4415-4424.

99. Wu C. Modulation of macrophage gene expression via LXRa serine 198 phosphorylation. / Wu C.,

Hussein M., Shrestha E., Leone S., Aiyegbo M.S., Lambert W.M., Pourcet B., Cardozo T., Gustaffson J.-A., Fisher E.A., Pineda-Torra I., Garabedian M.J. // Molecular and cellular biology

- 2015. - T. 35 - № 11 - C.2024-2034.

100. Duivenvoorden R. A statin-loaded reconstituted high-density lipoprotein nanoparticle inhibits atherosclerotic plaque inflammation / Duivenvoorden R., Tang J., Cormode D.P., Mieszawska A.J., Izquierdo-Garcia D., Ozcan C., Otten M.J., Zaidi N., Lobatto M.E., Rijs S.M. van, Priem B., Kuan

E.L., Martel C., Hewing B., Sager H., Nahrendorf M., Randolph G.J., Stroes E.S.G., Fuster V., Fisher E.A., Fayad Z., Mulder W.J.M. // Nature Communications - 2014. - T. 5 - C.1-12.

101. Feig J.E. Statins promote the regression of atherosclerosis via activation of the CCR7-dependent

emigration pathway in macrophages / Feig J.E., Shang Y., Rotllan N., Vengrenyuk Y., Wu C.,

Shamir R., Torra I.P., Fernandez-Hernando C., Fisher E.A., Garabedian M.J. // PLoS ONE - 2011. - T. 6 - № 12.

102. Potteaux S. Suppressed monocyte recruitment drives macrophage removal from atherosclerotic plaques of Apoe-/- mice during disease regression / Potteaux S., Gautier E.L., Hutchison S.B., Rooijen N. van, Rader D.J., Thomas M.J., Sorci-Thomas M.G., Randolph G.J. // Journal of Clinical Investigation - 2011. - T. 121 - № 5 - C.2025-2036.

103. Feig J.E. HDL promotes rapid atherosclerosis regression in mice and alters inflammatory properties

of plaque monocyte-derived cells. / Feig J.E., Rong J.X., Shamir R., Sanson M., Vengrenyuk Y., Liu J., Rayner K., Moore K., Garabedian M., Fisher E.A. // Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America - 2011. - T. 108 - № 17 - C.7166-7171.

104. Hughes S.D. HDL deficiency in genetically engineered mice requires elevated LDL to accelerate

atherogenesis. / Hughes S.D., Verstuyft J., Rubin E.M. // Arteriosclerosis, thrombosis, and vascular biology - 1997. - T. 17 - № 9 - C.1725-9.

105. Srivastava R.A. Apolipoprotein E gene expression is reduced in apolipoprotein A-I transgenic mice.

/ Srivastava R.A. // Mol Cell Biochem - 2000. - T. 209 - № 1-2 - C.125-129.

106. Klimov A.N. Antioxidative activity of high density lipoproteins in vivo / Klimov A.N., Gurevich

V.S., Nikiforova A.A., Shatilina L. V., Kuzmin A.A., Plavinsky S.L., Teryukova N.P. // Atherosclerosis - 1993. - T. 100 - № 1 - C.13-18.

107. Navab M. Normal high density lipoprotein inhibits three steps in the formation of mildly oxidized

low density lipoprotein: steps 2 and 3. / Navab M., Hama S.Y., Anantharamaiah G.M., Hassan K., Hough G.P., Watson a D., Reddy S.T., Sevanian a, Fonarow G.C., Fogelman a M. // Journal of lipid research - 2000. - T. 41 - № 9 - C.1495-1508.

108. Navab M. Normal high density lipoprotein inhibits three steps in the formation of mildly oxidized

low density lipoprotein: step 1 / Navab M., Hama S.Y., Cooke C.J., Anantharamaiah G.M., Chaddha M., Jin L., Subbanagounder G., Faull K.F., Reddy S.T., Miller N.E., Fogelman A.M. // J. Lipid Res. - 2000. - T. 41 - C.1481-1494.

109. Catapano A.L. HDL in innate and adaptive immunity / Catapano A.L., Pirillo A., Bonacina F., Norata G.D. // Cardiovascular Research - 2014. - T. 103 - № 3 - C.372-383.

110. Saddar S. Signaling by the high-affinity HDL receptor scavenger receptor B type I / Saddar S., Mineo C., Shaul P.W. // Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology - 2010. - T. 30 - № 2 - C.144-150.

111. Linthout S. Van Vascular-protective effects of high-density lipoprotein include the downregulation

of the angiotensin II type 1 receptor / Linthout S. Van, Spillmann F., Lorenz M., Meloni M., Jacobs F., Egorova M., Stangl V., Geest B. De, Schultheiss H.P., Tschöpe C. // Hypertension - 2009. - T. 53 - № 4 - C.682-687.

112. Vickers K.C. MicroRNAs are Transported in Plasma and Delivered to Recipient Cells by High-Density Lipoproteins / Vickers K.C., Palmisano B.T., Shoucri B.M., Shamburek R.D., Remaley A T. // Nat Cell Biol - 2011. - T. 13 - № 4 - C.423-433.

113. Wagner J. Characterization of levels and cellular transfer of circulating lipoprotein-bound microRNAs / Wagner J., Riwanto M., Besler C., Knau A., Fichtlscherer S., Röxe T., Zeiher A.M., Landmesser U., Dimmeler S. // Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology - 2013. - T. 33 - № 6 - C.1392-1400.

114. Alvarez S.E. Sphingosine-1-Phosphate: a Missing Cofactor for the E3 Ubiquitin Ligase TRAF2 / Alvarez S.E., Harikumar K.B., Hait N.C., Allegood J., Strub G.M., Kim E., Maceyka M., Jiang H., Luo C., Kordula T., Milstien S., Spiegel S. // Nature - 2010. - T. 465 - № 7301 - C.1084-1088.

115. Spiegel S. The outs and the ins of sphingosine-1-phosphate in immunity / Spiegel S., Milstien S. //

116

117

118

119

120

121

122

123

124

125

126

127

128

129

Nat Rev Immunol - 2011. - T. 11 - № 6 - C.403-415.

Arkensteijn B.W.C. The apolipoprotein M-sphingosine-1-phosphate axis: Biological relevance in lipoprotein metabolism, lipid disorders and atherosclerosis / Arkensteijn B.W.C., Berbée J.F.P., Rensen P.C.N., Nielsen L.B., Christoffersen C. // International Journal of Molecular Sciences -2013. - T. 14 - № 3 - C.4419-4431.

Liu G. S1P1-mTOR axis directs the reciprocal differentiation of Th1 and regulatory T cells / Liu G., Yang K., Burns S., Shrestha S., Chi H. // Nature immunology - 2010. - T. 11 - № 11 - C.1047-1056.

Fielding C.J. Molecular physiology of reverse cholesterol transport / Fielding C.J., Fielding P.E. // J. Lipid Res. - 1995. - T. 36 - C.211-228.

Angelantonio E. Di Major lipids, apolipoproteins, and risk of vascular disease. / Angelantonio E. Di, Sarwar N., Perry P., Kaptoge S., Ray K.K., Thompson A., Wood A.M., Lewington S., Sattar N., Packard C.J., Collins R., Thompson S.G., Danesh J. // JAMA : the journal of the American Medical Association - 2009. - T. 302 - № 18 - C.1993-2000.

Gordon D.J. High-density lipoprotein cholesterol and cardiovascular disease. Four prospective American studies. / Gordon D.J., Probstfield J.L., Garrison R.J., Neaton J.D., Castelli W.P., Knoke J.D., Jacobs D R., Bangdiwala S., Tyroler H.A. // Circulation - 1989. - T. 79 - № 1 - C.8-15.

Schaefer E.J. Factors associated with low and elevated plasma high density lipoprotein cholesterol and apolipoprotein A-I levels in the Framingham Offspring Study. / Schaefer E.J., Lamon-Fava S., Ordovas J.M., Cohn S.D., Schaefer M.M., Castelli W.P., Wilson P.W. // Journal of lipid research - 1994. - T. 35 - № 5 - C.871-82.

Schaefer E.J. Plasma apolipoprotein A-1 absence associated with a marked reduction of high density lipoproteins and premature coronary artery disease. / Schaefer E.J., Heaton W.H., Wetzel M.G., Brewer H.B. // Arteriosclerosis (Dallas, Tex.) - 1982. - T. 2 - № 1 - C.16-26.

Rubin E.M. Inhibition of early atherogenesis in transgenic mice by human apolipoprotein AI. / Rubin E.M., Krauss R.M., Spangler E.A., Verstuyft J.G., Clift S.M. // Nature - 1991. - T. 353 -№ 6341 - C.265-7.

Tsukamoto K. Comparison of human apoA-I expression in mouse models of atherosclerosis after gene transfer using a second generation adenovirus. / Tsukamoto K., Hiester K.G., Smith P., Usher D C., Glick J.M., Rader D.J. // Journal of lipid research - 1997. - T. 38 - № 9 - C.1869-1876.

Plump A.S. Human apolipoprotein A-I gene expression increases high density lipoprotein and suppresses atherosclerosis in the apolipoprotein E-deficient mouse. / Plump A.S., Scott C.J., Breslow J.L. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA - 1994. - T. 91 - № 20 - C.9607-9611.

Pâszty C. Apolipoprotein AI Transgene Corrects Apolipoprotein E Deficiency-induced Atherosclerosis in Mice / Pâszty C., Maeda N., Verstuyft J., Rubin E.M. // J. Clin. In - 1994. - T. 94 - C.899-903.

Rong J.X. Elevating high-density lipoprotein cholesterol in apolipoprotein E-deficient mice remodels advanced atherosclerotic lesions by decreasing macrophage and increasing smooth muscle cell content / Rong J.X., Li J., Reis E.D., Choudhury R.P., Dansky H.M., Elmalem V.I., Fallon J.T., Breslow J.L., Fisher E.A. // Circulation - 2001. - T. 104 - № 20 - C.2447-2452.

Tangirala R.K. Regression of atherosclerosis induced by liver-directed gene transfer of apolipoprotein A-I in mice. / Tangirala R.K., Tsukamoto K., Chun S.H., Usher D., Puré E., Rader D.J. // Circulation - 1999. - T. 100 - № 17 - C.1816-1822.

Voyiaziakis E. ApoA-I deficiency causes both hypertriglyceridemia and increased atherosclerosis in human apoB transgenic mice. / Voyiaziakis E., Goldberg I.J., Plump A.S., Rubin E.M., Breslow J.L., Huang L.S. // Journal of lipid research - 1998. - T. 39 - № 2 - C.313-321.

130

131

132

133

134

135

136

137

138

139

140

141

142

143

Liu A.C. Human apolipoprotein A-I prevents atherosclerosis associated with apolipoprotein[a] in transgenic mice. / Liu A.C., Lawn R.M., Verstuyft J.G., Rubin E.M. // J Lipid Res - 1994. - T. 35

- № 12 - C.2263-2267.

Moore R.E. Apolipoprotein A-I deficiency results in markedly increased atherosclerosis in mice lacking the LDL receptor / Moore R.E., Kawashiri M.A., Kitajima K., Secreto A., Millar J.S., Pratico D., Rader D.J. // Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology - 2003. - T. 23 - № 10 - C.1914-1920.

Moore R.E. Increased atherosclerosis in mice lacking apolipoprotein A-I attributable to both impaired reverse cholesterol transport and increased inflammation / Moore R.E., Navab M., Millar J.S., Zimetti F., Hama S., Rothblat G.H., Rader D.J. // Circulation Research - 2005. - T. 97 - № 8 - C.763-771.

Williamson R. Marked reduction of high density lipoprotein cholesterol in mice genetically modified to lack apolipoprotein A-I. / Williamson R., Lee D., Hagaman J., Maeda N. // Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America - 1992. - T. 89

- № 15 - C.7134-7138.

Li H. Lack of apoA-I is not associated with increased susceptibility to atherosclerosis in mice. / Li H., Reddick R.L., Maeda N. // Arteriosclerosis and thrombosis : a journal of vascular biology / American Heart Association - 1993. - T. 13 - № 12 - C.1814-1821.

Paigen B. Atherosclerosis susceptibility differences among progenitors of recombinant inbred strains of mice. / Paigen B., Ishida B.Y., Verstuyft J., Winters R.B., Albee D. // Arteriosclerosis (Dallas, Tex.) - 1990. - T. 10 - № 2 - C.316-323.

Paigen B. Variation in susceptibility to atherosclerosis among inbred strains of mice. / Paigen B., Morrow A., Brandon C., Mitchell D., Holmes P. // Atherosclerosis - 1985. - T. 57 - № 1 - C.65-73.

Gordon D.J. High-density lipoprotein--the clinical implications of recent studies. / Gordon D.J., Rifkind B.M. // The New England journal of medicine - 1989. - T. 321 - № 19 - C.1311-6.

Zabalawi M. Induction of fatal inflammation in LDL receptor and ApoA-I double-knockout mice fed dietary fat and cholesterol. / Zabalawi M., Bhat S., Loughlin T., Thomas M.J., Alexander E., Cline M., Bullock B., Willingham M., Sorci-Thomas M.G. // The American journal of pathology

- 2003. - T. 163 - № 3 - C.1201-1213.

Zabalawi M. Inflammation and skin cholesterol in LDLr-/-, apoA-I-/- mice: link between cholesterol homeostasis and self-tolerance? / Zabalawi M., Bharadwaj M., Horton H., Cline M., Willingham M., Thomas M.J., Sorci-Thomas M.G. // Journal of lipid research - 2007. - T. 48 -№ 1 - C.52-65.

Wilhelm A.J. Apolipoprotein A-I and its role in lymphocyte cholesterol homeostasis and autoimmunity / Wilhelm A.J., Zabalawi M., Grayson J.M., Weant A.E., Major A.S., Owen J., Bharadwaj M., Walzem R., Chan L., Oka K., Thomas M.J., Sorci-Thomas M.G. // Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology - 2009. - T. 29 - № 6 - C.843-849.

Wilhelm A.J. Apolipoprotein A-I modulates regulatory T cells in autoimmune LDLr -/-, ApoA-I-/- mice / Wilhelm A.J., Zabalawi M., Owen J.S., Shah D., Grayson J.M., Major A.S., Bhat S., Gibbs D P., Thomas M.J., Sorci-Thomas M.G. // Journal of Biological Chemistry - 2010. - T. 285

- № 46 - C.36158-36169.

Epand R.M. HDL and Apolipoprotein A-I Protect Erythrocytes Against the Generation of Procoagulant Activity / Epand R.M., Stafford A., Leon B., Lock P.E., Tytler E.M., Segrest J.P., Anantharamaiah G.M. // Arterioscler Thromb - 1994. - T. 14 - C.1775-1783.

Burger D. Cytokines, acute-phase proteins, and hormones: IL-1 and TNF-alpha production in contact-mediated activation of monocytes by T lymphocytes. / Burger D., Dayer J.-M. // Annals

of the New York Academy of Sciences - 2002. - T. 966 - C.464-473.

144. Burger D. High-density lipoprotein-associated apolipoprotein A-I: The missing link between infection and chronic inflammation? / Burger D., Dayer J.M. // Autoimmunity Reviews - 2002. -T. 1 - № 1-2 - C.111-117.

145. Hyka N. Apolipoprotein A-I inhibits the production of interleukin-1ß and tumor necrosis factor-a

by blocking contact-mediated activation of monocytes by T lymphocytes / Hyka N., Dayer J.M., Modoux C., Kohno T., Edwards C.K., Roux-Lombard P., Burger D. // Blood - 2001. - T. 97 - № 8 - C.2381-2389.

146. Tanaka N. Helical apolipoproteins of high-density lipoprotein enhance phagocytosis by stabilizing

ATP-binding cassette transporter A7. / Tanaka N., Abe-Dohmae S., Iwamoto N., Fitzgerald M.L., Yokoyama S. // Journal of lipid research - 2010. - T. 51 - № 9 - C.2591-2599.

147. Cockerill G.W. High-density lipoproteins inhibit cytokine-induced expression of endothelial cell adhesion molecules. / Cockerill G.W., Rye K.A., Gamble J.R., Vadas M.A., Barter P.J. // Arteriosclerosis, thrombosis, and vascular biology - 1995. - T. 15 - № 11 - C.1987-94.

148. Ashby D.T. Factors influencing the ability of HDL to inhibit expression of vascular cell adhesion

molecule-1 in endothelial cells. / Ashby D.T., Rye K., Clay M.A., Vadas M., Gamble J.R., Barter P.J. // Arterioscler Thromb Vasc Biol - 1998. - T. 18 - № 9 - C.1450-1455.

149. Cheng A.M. Apolipoprotein A-I attenuates palmitate-mediated NF-kB activation by reducing toll-

like receptor-4 recruitment into lipid rafts / Cheng A.M., Handa P., Tateya S., Schwartz J., Tang C., Mitra P., Oram J.F., Chait A., Kim F. // PLoS ONE - 2012. - T. 7 - № 3 - C.1-8.

150. Kim K.D. Apolipoprotein A-I induces IL-10 and PGE2 production in human monocytes and inhibits dendritic cell differentiation and maturation / Kim K.D., Lim H.Y., Lee H.G., Yoon D.Y., Choe Y.K., Choi I., Paik S.G., Kim Y.S., Yang Y., Lim J.S. // Biochemical and Biophysical Research Communications - 2005. - T. 338 - № 2 - C.1126-1136.

151. Horani M.H. Cyclooxygenase Inhibition Is Associated with Downregulation of Apolipoprotein AI

Promoter Activity in Cultured Hepatoma Cell Line HepG2 / Horani M.H., Gobal F., Haas M.J., Wong N.C.W., Mooradian A.D. // Metabolism: Clinical and Experimental - 2004. - T. 53 - № 2

- C.174-181.

152. Murphy A.J. High-density lipoprotein reduces the human monocyte inflammatory response / Murphy A.J., Woollard K.J., Hoang A., Mukhamedova N., Stirzaker R.A., McCormick S.P.A., Remaley A.T., Sviridov D., Chin-Dusting J. // Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology

- 2008. - T. 28 - № 11 - C.2071-2077.

153. Niculescu L.S. Apolipoprotein A-I stimulates cholesteryl ester transfer protein and apolipoprotein

E secretion from lipid-loaded macrophages; the role of NF-kB and PKA signaling pathways / Niculescu L.S., Robciuc M.R., Sanda G.M., Sima A. V. // Biochemical and Biophysical Research Communications - 2011. - T. 415 - № 3 - C.497-502.

154. Oram J.F. ATP-binding cassette transporter A1: a cell cholesterol exporter that protects against cardiovascular disease. / Oram J.F., Heinecke J.W. // Physiological reviews - 2005. - T. 85 - № 4 - C.1343-1372.

155. Brooks-Wilson A. Mutations in ABC1 in Tangier disease and familial high-density lipoprotein deficiency. / Brooks-Wilson A., Marcil M., Clee S.M., Zhang L.H., Roomp K., Dam M. van, Yu L., Brewer C., Collins J.A., Molhuizen H.O., Loubser O., Ouelette B.F., Fichter K., Ashbourne-Excoffon K.J., Sensen C.W., Scherer S., Mott S., Denis M., Martindale D., Frohlich J., Morgan K., Koop B., Pimstone S., Kastelein J.J., Genest J., Hayden M.R. // Nature genetics - 1999. - T. 22 - № 4 - C.336-45.

156. Bodzioch M. The gene encoding ATP-binding cassette transporter 1 is mutated in Tangier disease.

/ Bodzioch M., Orso E., Klucken J., Langmann T., Böttcher A., Diederich W., Drobnik W., Barlage

S., Büchler C., Porsch-Ozcürümez M., Kaminski W.E., Hahmann H.W., Oette K., Rothe G., Aslanidis C., Lackner K.J., Schmitz G. // Nature genetics - 1999. - T. 22 - № 4 - C.347-51.

157. Rust S. Tangier disease is caused by mutations in the gene encoding ATP-binding cassette transporter 1. / Rust S., Rosier M., Funke H., Real J., Amoura Z., Piette J.C., Deleuze J.F., Brewer H.B., Duverger N., Denèfle P., Assmann G. // Nature genetics - 1999. - T. 22 - № 4 - C.352-5.

158. Remaley A.T. Apolipoprotein specificity for lipid efflux by the human ABCAI transporter. / Remaley A.T., Stonik J.A., Demosky S.J., Neufeld E.B., Bocharov A. V, Vishnyakova T.G., Eggerman T.L., Patterson A.P., Duverger N.J., Santamarina-Fojo S., Brewer H.B. // Biochemical and biophysical research communications - 2001. - T. 280 - № 3 - C.818-23.

159. Okuhira K. Potential involvement of dissociated apoA-I in the ABCA1-dependent cellular lipid release by HDL. / Okuhira K., Tsujita M., Yamauchi Y., Abe-Dohmae S., Kato K., Handa T., Yokoyama S. // Journal of lipid research - 2004. - T. 45 - № 4 - C.645-652.

160. Drobnik W. Apo AI/ABCA1-dependent and HDL3-mediated lipid efflux from compositionally distinct cholesterol-based microdomains. / Drobnik W., Borsukova H., Böttcher A., Pfeiffer A., Liebisch G., Schütz G.J., Schindler H., Schmitz G. // Traffic (Copenhagen, Denmark) - 2002. - T. 3 - № 4 - C.268-278.

161. Mendez A.J. Membrane Lipid Domains Distinct from Cholesterol/Sphingomyelin-Rich Rafts Are

Involved in the ABCA1-mediated Lipid Secretory Pathway / Mendez A.J., Lin G., Wade D.P., Lawn R.M., Oram J.F. // Journal of Biological Chemistry - 2001. - T. 276 - № 5 - C.3158-3166.

162. Jessup W. Roles of ATP binding cassette transporters A1 and G1, scavenger receptor BI and membrane lipid domains in cholesterol export from macrophages. / Jessup W., Gelissen I.C., Gaus K., Kritharides L. // Current opinion in lipidology - 2006. - T. 17 - № 3 - C.247-257.

163. Oram J.F. ABCA1 is the cAMP-inducible apolipoprotein receptor that mediates cholesterol secretion from macrophages / Oram J.F., Lawn R.M., Garvin M.R., Wade D.P. // Journal of Biological Chemistry - 2000. - T. 275 - № 44 - C.34508-34511.

164. Denis M. Expression, regulation, and activity of ABCA1 in human cell lines / Denis M., Bissonnette

R., Haidar B., Krimbou L., Bouvier M., Genest J. // Molecular Genetics and Metabolism - 2003. - T. 78 - № 4 - C.265-274.

165. Timmins J.M. Targeted inactivation of hepatic Abca1 causes profound hypoalphalipoproteinemia

and kidney hypercatabolism of apoA-I / Timmins J.M., Lee J., Boudyguina E., Kluckman K.D., Brunham L.R., Mulya A., Gebre A.K., Coutinho J.M., Colvin P.L., Smith T.L., Hayden M.R., Maeda N., Parks J.S. // Journal of Clinical Investigation - 2005. - T. 115 - № 5 - C.1333-1342.

166. Brunham L.R. Tissue-specific roles of ABCA1 influence susceptibility to atherosclerosis / Brunham L.R., Singaraja R.R., Duong M., Timmins J.M., Fievet C., Bissada N., Kang M.H., Samra A., Fruchart J.C., McManus B., Staels B., Parks J.S., Hayden M.R. // Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology - 2009. - T. 29 - № 4 - C.548-554.

167. Zhu X. Increased cellular free cholesterol in macrophage-specific Abca1 knock-out mice enhances

pro-inflammatory response of macrophages / Zhu X., Lee J.Y., Timmins J.M., Brown J.M., Boudyguina E., Mulya A., Gebre A.K., Willingham M.C., Hiltbold E.M., Mishra N., Maeda N., Parks J.S. // Journal of Biological Chemistry - 2008. - T. 283 - № 34 - C.22930-22941.

168. Wellington C.L. Alterations of plasma lipids in mice via adenoviral-mediated hepatic overexpression of human ABCA1. / Wellington C.L., Brunham L.R., Zhou S., Singaraja R.R., Visscher H., Gelfer A., Ross C., James E., Liu G., Huber M.T., Yang Y.-Z., Parks R.J., Groen A., Fruchart-Najib J., Hayden M.R. // Journal of lipid research - 2003. - T. 44 - № 8 - C.1470-1480.

169. Joyce C.W. ABCA1 overexpression in the liver of LDLR-KO mice leads to accumulation of pro-

atherogenic lipoproteins and enhanced atherosclerosis / Joyce C.W., Wagner E.M., Basso F., Amar M.J., Freeman L.A., Shamburek R.D., Knapper C.L., Syed J., Wu J., Vaisman B.L., Fruchart-

Najib J., Billings E.M., Paigen B., Remaley A.T., Santamarina-Fojo S., Brewer H.B. // Journal of Biological Chemistry - 2006. - T. 281 - № 44 - C.33053-33065.

170. Eck M. Van Macrophage ATP-binding cassette transporter A1 overexpression inhibits atherosclerotic lesion progression in low-density lipoprotein receptor knockout mice / Eck M. Van, Singaraja R.R., Ye D., Hildebrand R.B., James E.R., Hayden M.R., Berkel T.J.C. Van // Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology - 2006. - T. 26 - № 4 - C.929-934.

171. Yvan-Charvet L. Combined deficiency of ABCA1 and ABCG1 promotes foam cell accumulation

and accelerates atherosclerosis in mice / Yvan-Charvet L., Ranalletta M., Wang N., Han S., Terasaka N., Li R., Welch C., Tall A.R. // Journal of Clinical Investigation - 2007. - T. 117 - № 12 - C.3900-3908.

172. Aiello R.J. Increased atherosclerosis in hyperlipidemic mice with inactivation of ABCA1 in macrophages / Aiello R.J., Brees D., Bourassa P., Royer L., Lindsey S., Coskran T., Haghpassand M., Francone O.L. // Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology - 2002. - T. 22 - № 4 -C.630-637.

173. Koseki M. Increased lipid rafts and accelerated lipopolysaccharide-induced tumor necrosis factor-

a secretion in Abca1-deficient macrophages. / Koseki M., Hirano K.-I., Masuda D., Ikegami C., Tanaka M., Ota A., Sandoval J.C., Nakagawa-Toyama Y., Sato S.B., Kobayashi T., Shimada Y., Ohno-Iwashita Y., Matsuura F., Shimomura I., Yamashita S. // J. Lipid. Res. - 2007. - T. 48 - № 2 - C.299-306.

174. Adorni M.P. The roles of different pathways in the release of cholesterol from macrophages. / Adorni M.P., Zimetti F., Billheimer J.T., Wang N., Rader D.J., Phillips M.C., Rothblat G.H. // Journal of lipid research - 2007. - T. 48 - № 11 - C.2453-2462.

175. Yvan-Charvet L. ABCA1 and ABCG1 protect against oxidative stress-induced macrophage apoptosis during efferocytosis / Yvan-Charvet L., Pagler T. a., Seimon T. a., Thorp E., Welch C.L., Witztum J.L., Tabas I., Tall A.R. // Circulation Research - 2010. - T. 106 - № 12 - C.1861-1869.

176. Pagler T.A. Deletion of ABCA1 and ABCG1 impairs macrophage migration because of increased

Rac1 signaling / Pagler T.A., Wang M., Mondal M., Murphy A.J., Westerterp M., Moore K.J., Maxfield F.R., Tall A.R. // Circulation Research - 2011. - T. 108 - № 2 - C.194-200.

177. Olefsky J.M. Macrophages, inflammation, and insulin resistance. / Olefsky J.M., Glass C.K. // Ann

Rev Physiol - 2010. - T. 72 - C.219-246.

178. Mogilenko D.A. Endogenous apolipoprotein A-I stabilizes ATP-binding cassette transporter A1 and modulates Toll-like receptor 4 signaling in human macrophages / Mogilenko D.A., Orlov S. V., Trulioff A.S., Ivanov A. V., Nagumanov V.K., Kudriavtsev I. V., Shavva V.S., Tanyanskiy D A., Perevozchikov A.P. // The FASEB Journal - 2012. - T. 26 - № 5 - C.2019-2030.

179. Beers A. Inhibition of apolipoprotein AI gene expression by tumor necrosis factor alpha: roles for

MEK/ERK and JNK signaling. / Beers A., Haas M.J., Wong N.C.W., Mooradian A.D. // Biochemistry - 2006. - T. 45 - № 7 - C.2408-2413.

180. Parseghian S. Inhibition of apolipoprotein A-I expression by TNF-a in HepG2 cells: Requirement

for c-jun / Parseghian S., Onstead-Haas L.M., Wong N.C.W., Mooradian A.D., Haas M.J. // Journal of Cellular Biochemistry - 2014. - T. 115 - № 2 - C.253-260.

181. O'Brien R.M. Regulation of gene expression by insulin / O'Brien R.M., Granner D.K. // Physiol Rev - 1996. - T. 76 - № 4 - C.1109-1161.

182. Nasrin N. An insulin response element in the glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase gene binds a nuclear protein induced by insulin in cultured cells and by nutritional manipulations in vivo. / Nasrin N., Ercolani L., Denaro M., Kong X.F., Kang I., Alexander M. // Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America - 1990. - T. 87 - № 14 - C.5273-5277.

183

184

185

186

187

188

189

190

191

192

193

194

195

196

197

Yeagley D. Gene- and activation-specific mechanisms for insulin inhibition of basal and glucocorticoid-induced insulin-like growth factor binding protein-1 and phosphoenolpyruvate carboxykinase transcription. Roles of forkhead and insulin response sequences / Yeagley D., Guo S., Unterman T., Quinn P.G. // Journal of Biological Chemistry - 2001. - T. 276 - № 36 -C.33705-33710.

Saltiel A.R. Insulin signalling and the regulation of glucose and lipid metabolism / Saltiel A.R., Kahn C.R. // Nature - 2001. - T. 414 - № 6865 - C.799-806.

Kamagate A. FoxO1 mediates insulin dependent regulation of hepatic VLDL production in mice / Kamagate A., Qu S., Perdomo G., Su D., Kim D.H., Slusher S., Meseck M., Dong H.H. // Journal of Clinical Investigation - 2008. - T. 6 - № 6 - C.2347-2364.

Han S. Macrophage insulin receptor deficiency increases ER stress-induced apoptosis and necrotic core formation in advanced atherosclerotic lesions. / Han S., Liang C.-P.P., DeVries-Seimon T., Ranalletta M., Welch C.L., Collins-Fletcher K., Accili D., Tabas I., Tall A.R. // Cell metabolism

- 2006. - T. 3 - № 4 - C.257-266.

Liang C.P. Increased CD36 protein as a response to defective insulin signaling in macrophages / Liang C.P., Han S., Okamoto H., Carnemolla R., Tabas I., Accili D., Tall A.R. // Journal of Clinical Investigation - 2004. - T. 113 - № 5 - C.764-773.

Burgering B.M. Insulin stimulation of gene expression mediated by p21ras activation. / Burgering

B.M., Medema R.H.R.R.H., Maassen J.A., Wetering M L. Van de, Eb A.J. van der, McCormick F., Bos J.J.L. // The EMBO journal - 1991. - T. 10 - № 5 - C.1103-9.

Fujishiro M. MKK6/3 and p38 MAPK Pathway Activation Is Not Necessary for Insulin-induced Glucose Uptake but Regulates Glucose Transporter Expression / Fujishiro M., Gotoh Y., Katagiri H., Sakoda H., Ogihara T., Anai M., Onishi Y., Ono H., Funaki M., Inukai K., Fukushima Y., Kikuchi M., Oka Y., Asano T. // Journal of Biological Chemistry - 2001. - T. 276 - № 23 -

C.19800-19806.

Pearce L.R. The nuts and bolts of AGC protein kinases. / Pearce L.R., Komander D., Alessi D.R. // Nature reviews. Molecular cell biology - 2010. - T. 11 - № 1 - C.9-22.

Hao Y. RalGDS couples growth factor signaling to Akt activation / Hao Y., Wong R., Feig L.A. // Mol. Cell. Biol. - 2008. - T. 28 - № 9 - C.2851-2859.

McGuire V.A. Cross talk between the Akt and p38a pathways in macrophages downstream of Tolllike receptor signaling. / McGuire V.A., Gray A., Monk C.E., Santos S.G., Lee K., Aubareda A., Crowe J., Ronkina N., Schwermann J., Batty I.H., Leslie N.R., Dean J.L.E., O'Keefe S.J., Boothby M., Gaestel M., Arthur J S C. // Molecular and cellular biology - 2013. - T. 33 - № 21 - C.4152-65.

Cabane C. The p38 pathway regulates Akt both at the protein and transcriptional activation levels during myogenesis / Cabane C., Coldefy A.S., Yeow K., Derijard B. // Cellular Signalling - 2004.

- T. 16 - № 12 - C.1405-1415.

Ozes O.N. NF-kB activation by tumour necrosis factor requires the Akt serine- threonine kinase / Ozes O.N., Mayo L.D., Gustin J.A., Pfeffer S.R., Pfeffer L.M., Donner D.B. // Nature - 1999. -T. 401 - № 6748 - C.82-85.

Pandey S.K. Wortmannin-sensitive pathway is required for insulin-stimulated phosphorylation of inhibitor kappaBalpha. / Pandey S.K., He H.-J., Chesley A., Juhaszova M., Crow M.T., Bernier M. // Endocrinology - 2002. - T. 143 - № March - C.375-385.

Avruch J. Insulin and amino-acid regulation of mTOR signaling and kinase activity through the Rheb GTPase. / Avruch J., Hara K., Lin Y., Liu M., Long X., Ortiz-Vega S., Yonezawa K. // Oncogene - 2006. - T. 25 - № 48 - C.6361-6372.

Harrington L.S. The TSC1-2 tumor suppressor controls insulin-PI3K signaling via regulation of

IRS proteins / Harrington L.S., Findlay G.M., Gray A., Tolkacheva T., Wigfield S., Rebholz H., Barnett J., Leslie N.R., Cheng S., Shepherd P.R., Gout I., Downes C.P., Lamb R.F. // Journal of Cell Biology - 2004. - T. 166 - № 2 - C.213-223.

198. Ozes O.N. A phosphatidylinositol 3-kinase/Akt/mTOR pathway mediates and PTEN antagonizes tumor necrosis factor inhibition of insulin signaling through insulin receptor substrate-1. / Ozes O.N., Akca H., Mayo L.D., Gustin J.A., Maehama T., Dixon J.E., Donner D.B. // Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America - 2001. - T. 98 - № 8 -C.4640-4645.

199. Liu L.Z. Protein Kinase C Z and Glucose Uptake / Liu L.Z., He A. Bin, Liu X.J., Li Y., Chang Y.S.,

Fang F. De // Biochemistry (Moscow) - 2006. - T. 71 - № 7 - C.869-875.

200. Zhang Y. Phosphatidylinositol 3-kinase/protein kinase CZ-induced phosphorylation of Sp1 and p107 repressor release have a critical role in histone deacetylase inhibitor-mediated derepression of transcription of the luteinizing hormone receptor gene. / Zhang Y., Liao M., Dufau M.L. // Molecular and cellular biology - 2006. - T. 26 - № 18 - C.6748-6761.