Разработка ускоренных способов ДНК-диагностики для определения бактерий в мясе и мясопродуктах тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 16.00.08, кандидат ветеринарных наук Мамаев, Максим Александрович

• Мамаев, Максим Александрович
• кандидат ветеринарных наук
• 2000

Оглавление диссертации кандидат ветеринарных наук Мамаев, Максим Александрович

ВВЕДЕНИЕ.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Бактериологический анализ мяса и мясопродуктов при ветеринарно-санитарной экспертизе и сертификации.

1.2. Сравнительная оценка методов ДНК-диагностики при индикации и идентификации микроорганизмов.

1.2.1. Гибридизация нуклеиновых кислот.

1.2.2. Амплификация генов.

2.СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1.Цель и задачи исследований.

2.2.Объекты и методы исследований.

2.2.1.Объекты исследований.'.

2.2.2.Методика бактериологического анализа мяса и мясопродуктов.

2.2.3 .Контаминация мяса и мясопродуктов микроорганизмами.

2.2.4.Выделение и очистка тотальных ДНК для идентификации бактерий.

2.2.5.Выделение и очистка ДНК с использованием гуанидинтиоизоционата.

2.2.6. Мечение тритием бактериальных ДНК методом ник-трансляции.

2.2.7.Мечение биотином бактериальных ДНК методом ник-трансляции.

2.2.8. Мечение ДНК методом рассеянной затравки.

2.2.9. Получение меченых ДНК-зондов с помощью полимеразной цепной реакции.

2.2.10.ДНК гибридизация на мембранных нитроцеллюлозных фильтрах с реперными, ДНК меченными тритием.

2.2.11. Точечная ДНК гибридизация на мембранных фильтрах с биотинилированными ДНК.

2.2.12. ДНК гибридизация с использованием тест-набора с ДНК-зондами, меченными биотином.

2.2.13. Методика полимеразной цепной реакции.

2.2.14. Статистическая обработка результатов.

2.3. Результаты исследований

2.3.1.Разработка модификации метода ускоренной идентификации бактерий на основе гомологии тотальных ДНК, меченных биотином.

2.3.2. Усовершенствование способа ускоренной индикации энтеробактерий в мясе и мясопродуктах на основе ДНК-зондов с возможностью дифференциации токсигенных форм.

2.3.3.Разработка модификации метода количественного определения бактерий, в мясе и мясопродуктах на основе ПЦР с мечеными дезоксинуклеозидтрифосфатами.

2.3.4. Сравнительная оценка результатов индикации и идентификации бактерий в мясе и мясопродуктах полученных, с помощью разработанных и общепринятых методов.

3. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ.

ВЫВОДЫ.

ПРЕДЛОЖЕНИЯ ДЛЯ ПРАКТИКИ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Разработка ускоренных способов ДНК-диагностики для определения бактерий в мясе и мясопродуктах»

При бактериологическом исследовании мяса и мясопродуктов требуется решение задач, связанных с определением общей микробной обсеменённости продукции, индикацией конкретных возбудителей токсикоинфекций и идентификацией микроорганизмов различных таксономических групп. Существующие методы микробиологического исследования мяса и мясопродуктов, изложенные в соответствующей нормативной документации (ГОСТ 21237-75 и др.), достаточно длительны и трудоёмки, требуют использования значительного количества дифференциальных питательных сред и вспомогательных операций (окраска по Граму, определение подвижности, проба на ферментативную активность и т.д.). При ускоренном выявлении возбудителей с помощью различных иммунологических методов (например, иммуноферментный анализ) необходимо предварительно выделить чистую культуру и для повышения чувствительности провести обогащение материала. Кроме того, идентификация возбудителей с неясной этиологией связана с использованием большого количества иммунных тест-систем для разных микроорганизмов.

В последние годы для обнаружения и идентификации микроорганизмов в различных объектах исследования стали успешно применяться методы генной диагностики (гибридизация нуклеиновых кислот, секвенирование нуклеотидных последовательностей, полимеразная цепная реакция - ПЦР). Эти методы позволяют проводить индикацию и идентификацию микроорганизмов с высокой специфичностью в присутствии сопутствующей микрофлоры и чувствительностью до единичных клеток (Грановский и др., 1986; Мальков и др., 1993; Белоусова и др., 1994; Коромыслов и др., 1994; Светличкин и др., 1998, 1999; Asai et al, 1971; Brenner et al, 1978, 1980, 1986; Falkow et al, 1982; Hill et al, 1983; Bryau et al, 1984; Moseley 1985; Brechot et al, 1985; Lim et al, 1998; Conner et al, 1998; Kim et al, 1999).

Более 30 лет назад для идентификации бактерий и уточнения их таксономического положения стал применяться метод, основанный на определении уровня гомологии сравниваемых ДНК (Блохина, Леванова, 1976; Антонов, 1980; Медников, Леванова, 1980; Турова, 1989; Branner et al, 1978, 1980, 1986; Brechot etal, 1985).

При этом было установлено, что степень генетического родства бактерий дискретна, а уровень гомологии ДНК соответствует определённому таксономическому рангу: -70-100 % гомологии ДНК свидетельствует о принадлежности к одному виду, -40-60% - к одному роду, -25% - к одному семейству, ближе к 0% - к разным семействам (Медников, Леванова, 1974; Медников, 1978).

Однако применяемая в исследованиях по определению гомологии ДНК изотопная метка затрудняла широкое практическое использование подобных методов для индикации и идентификации бактерий.

Имеются многочисленные данные об использовании различных модификаций метода гибридизации нуклеиновых кислот без применения радиоактивных изотопов (Урываев и др., 1990; Синагатуллина, 1992; Фрумгарц и др., 1995; Доля, 1997; Квятковская, 1998; Longen et al, 1981; Forster et al, 1985; Hopmar, 1986). Однако неизотопно меченые тотальные ДНК микроорганизмов не применялись в качестве реперов для определения уровня гомологии нуклеотидных последовательностей. Для использования данного направления при идентификации бактерий необходимо усовершенствовать многие этапы определения уровня гомологии, в том числе выделение ДНК, включение метки в ДНК, постановку реакции гибридизации и регистрацию конечного результата с количественной оценкой гибридных молекул.

За последние 20 лет появились также сведения об использовании ДНК— зондов для индикации микроорганизмов и вирусов в различных объектах исследования (Kingsberry, Falkow., 1987; Tenover., 1988). В геноме микроорганизмов содержатся уникальные специфичные нуклеотидные последовательности, которые могут использоваться в качестве генных зондов для идентификации микроорганизмов до уровня видового таксона, а также для дифференциации патогенных форм. Это позволяет выявлять микроорганизмы которые трудно обнаружить с помощью культивирования при конкурентном росте на различных питательных средах.

Известно, что факторы патогенности могут передаваться от одних штаммов бактерий в другие путем горизонтального переноса генов (Гольдфарб, 1966; Стент, 1974). Исходя из этого7 оценка мяса и других объектов ветеринарно-санитарной экспертизы,.; должна базироваться не только на групповой или видовой идентификации, но и дифференциации патогенных форм микроорганизмов.

Согласно нормативным документам (ГОСТ 21237-75, СанПиН 2.3.2.56096) при сертификации мяса необходимо, в частности, выявление бактерий группы кишечной палочки и сальмонелл. Из литературных источников известно, что ДНК-зонды и ПЦР можно использовать для выявления указанных бактерий в различных объектах исследований (Доля, 1997; Квятковская, 1998; Светличкин и др., 1998, 1999; Asai et al, 1971; Conner et al, 1998; Kim et al, 1999). Для решения этой задачи применялись некоторые модификации методов ДНК-гибридизации и ПЦР с ДНК-зондами и праймерами определенных локусов ДНК. Однако применение методов ДНК-диагностики при ветеринарно-санитарной экспертизе и сертификационных испытаниях для конкретных объектов исследования, в частности мяса и мясопродуктов^остаётся достаточно актуальной проблемой, так как многие способы индикации и идентификации микроорганизмов далеки от совершенства. Поэтому в задачи нашего исследования входила разработка более совершенных способов ДНК-диагностики бактерий, контаминирующих мясо и мясопродукты.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1Л. Бактериологический анализ мяса и мясопродуктов при ветеринарно-санитарной экспертизе и сертификации

Ветеринарно-санитарная экспертиза - совокупность мероприятий, позволяющих сделать обоснованные ветеринарно-санитарные оценки продуктов животного и растительного происхождения (Карелин и др., 1990). Ветеринарно-санитарная экспертиза мяса в основном изложена в «Правилах ветеринарного осмотра убойных животных и ветеринарно-санитарной экспертизы мяса и мясных продуктов» (1988).

Бактериологическое исследование мяса и мясопродуктов проводят в следующих случаях: при подозрении на инфекционные болезни; при вынужденном убое животных независимо от причины убоя и принадлежности животных, в том числе при отравлениях и подозрении в отравлении ядами; при желудочно-кишечных заболеваниях, при тяжело протекающих заболеваниях дыхательных органов, при септико-пиемических заболеваниях; при обнаружении серозных и фибринозных перикардитов у свиней, при общирных ожогах, во всех случаях при подозрении на сальмонеллы или другие токсигенные кокки; при удалении кишечника из туши познее 2 часов с момента обескровливания животного; при наличии сомнений в отношении пригодности мяса и невозможности определить пригодность его в пищу путем ветеринарного осмотра (Сидоров и др., 1996).

Бактериологическая диагностика . предусматривает следующие этапы исследования: 1. Микроскопическое исследование исходного материала при изготовлении мазков-отпечатков, окрашенных по Граму; 2. Посев на питательные среды; 3. Идентификация выделенных культур по морфологическим, культурально - биохимическим, антигенным и другим свойствам; 4. Проведение биопробы в необходимых случаях (Микерин, 1991; Сидоров и др., 1996).

При сертификации мяса в системе ГОСТ Р определяется наличие сальмонелл и эшерихий. Однако это не исключает возможности контаминации мяса другими микроорганизмами. Контаминация мясо различными микроорганизмами может быть обусловлена как эндогенными возбудителями, не выявленными в процессе ветеринарно-санитарной экспертизы убойных животных, так и экзогенным внесением различных возбудителей. Экзогенная контаминация мяса и мясопродуктов может быть обусловлена различными факторами (несоблюдение условий технологии получения, транспортировки и хранения продукции, а также направленным введением бактериологических агентов). При этом контаминантами могут являться бактерии различных таксономических групп (возбутители сальмонеллёза, бруцеллёза, сибирской язвы, иерсиниоза, кампилобактериоза, листериоза и др.).

При сертификации мяса и мясных продуктов в системе сертификации ГОСТ Р основным нормативным документом, определяющим показатели безопасности, являются «Гигиенические требования к качеству и безопасности продовольственного сырья и пищевых продуктов. Санитарные правила и нормы. СанПиН 2.3.2.560-96» (1997).

За рубежом контроль качества мяса и мясных продуктов осуществляется в рамках различных систем сертификации. Международной организацией по стандартизации (ИСО) и Европейской организацией по контролю качества (ЕОКК) разрабатываются международные и европейские стандарты, унифицированные документы и различного рода рекомендации.

Комиссия Кодекс Алиментариус является международным органом, ответственным за выполнение программы стандартов на пищевые продукты, включая мясо и мясопродукты. Кодекс Алиментариус (Codex Alimentarius, 1991) включает все международные стандарты, включая микробиологические нормы, на продовольственное сырье и продукты питания, одобренные комиссией ООН по вопросам продовольствия и сельского хозяйства (ФАО) и Всемирной организацией здравоохранения (ВОЗ). Согласно международным стандартам, исследования по ветеринарно-санитарной экспертизе мяса должны применяться на каждой ступени производства, начиная с ферм. Ответственность за безопасность и качество произведенного мяса разделяется между производителем и контролирующими органами.

Микробиологические критерии традиционно являются одними из главных показателей безопасности пищевых продуктов. Международные стандарты по микробиологической оценке пищевых продуктов включают различные вопросы микробиологического контроля, в том числе определение спектра идентифицируемых микроорганизмов и их количественные характеристики (ISO 9001, 1987; Huss, 1997).

Несмотря на гармонизацию критериев оценки мяса и мясопродуктов в разных странах, существуют специфические подходы, связанные с экологическими и национальными особенностями. Кроме того, различные системы добровольной сертификации в одной стране могут включать дополнительные критерии микробиологических показателей как в плане спектра определяемых возбудителей, так и их количественной оценки.

Согласно санитарным правилам и нормам (СанПиН 2.3.2.560-96) при микробиологическом анализе мяса и мясопродуктов определяются бактерии группы кишечной палочки и сальмонеллы. Эти возбудители относятся к семейству Enterobacteriaceae и к родам Salmonella и Escherichia.

Сальмонеллы вызывают первичные инфекции у животных и человека, нередко сопровождающиеся смертельным исходом. Они чаще локализуютя в печени, кишечнике, лимфатических узлах. Для выявления бактерий рода Salmonella производят посев на дифференциально-диагностические среды (Miller et al., 1991). Дифференциация сальмонелл от кишечной палочки основана на способности последних ферментировать лактозу. На среде Эндо кишечная палочка, разлагая лактозу до молочной кислоты, восстанавливает обесцвеченный сульфидом натрия фуксин, образуя колонии красного цвета с металлическим блеском. На среде Левина эшерихии образуют синие или чёрные колонии, на среде Плоскирева - розовые. Сальмонеллы лактозу не ферментируют, поэтому на указанных средах образуют бесцветные колонии (ГОСТ 21237-75; Голубева, 1977).

Сальмонеллы - грамотрицательные, не образующие спор и капсул бактерии, представляющие собой палочки с закруглёнными концами, длиной 24 мкм, шириной 0,5-0,8 мкм. В большинстве своём они подвижны, оптимальная реакция среды - слабо щелочная (рН 7,2-7,4), температура 37°С.

Сальмонеллы имеют сложную антигенную структуру: О, Н, М, К, и VI -антигены. Антигенная структура сальмонелл подвержена изменчивости и вариации при переходе из б- в г-форму, а также в результате трансдукции, лизогенной конверсии и коньюгации (Голубева, 1977; Поляков, 1989; Кисленко, 1992).

Для серологической типизации выделяемых штаммов сальмонелл используют групповые и видовые агглютинирующие сыворотки. Для полной типизации выделенной культуры её пересевают на развёрнутый пёстрый ряд, включающий бульон Штерна, среду с рамнозой, лакмусовое молоко, среды с арабинозой, салицином, дульцитом и другими углеводами (Краснобаев и др., 1995; Голубева, 1997).

Показана возможность индикации сальмонелл бактериофагами и различными иммунологическими тест-системами (Серегин и др., 1995; Бровкина, 1999; МкоЫ, 1999).

Таким образом, индикация сальмонелл представляет достаточно сложную процедуру, и её упрощение и совершенствование является необходимой задачей ветеринарно-санитарной экспертизы.

Другие бактерии, контаминирующие мясо и мясопродукты, в основном относятся к группе кишечной палочки. Эшерихии вызывают у животных и человека кишечные инфекции, а также менингит, сепсис, энцефалит, пиелонефрит, цистит, мастит и др.

Escherichia coli - полиморфные палочки размером от 0,2-0,3 мкм и шириной до 0,8 мкм, с закруглёнными концами, чаще расположены одиночно. Имеются подвижные и не подвижные особи, некоторые образуют капсулу.

Эшерихии не устойчивы к высокой температуре: при 60° С гибель клеток наступает в течение 15 мин, а при 100 С°- моментально. Эшерихии более чувствительны к неомицину, полимиксину, нитрофурановым и сульфаниламидным препаратам, менее чувствительны к стрептомицину и пенициллину.

Кишечная палочка растёт и размножается при значительных колебаниях рН среды (5,0-8,0) и температуры (15-45 С). На плотных средах формируют слабо выпуклые полупрозрачные, сероватые колонии с ровными краями и блестящей поверхностью. В жидких средах образуется равнмерное помутнение и осадок (Лабинская, 1978; Краснобаев и др, 1995).

Кишечная палочка обладает термостабильным эндотоксином, вызавающим лихорадку, диарею, геморрагию, лейкопению с последующим лейкоцитозом.

Кишечную форму колибактериоза вызывают эшерихии содержащие термолабильный (LT) и термостабильный (ST) экзотоксины, которые активируют аденилатциклазы и гуанилатциклазы соответственно. Гены этих токсинов локализованы в плазмидах. В 1977 г у кишечной палочки были обнаружены шигеллоподобные токсины (SLT1 и SLT2) или веротоксины Гены, кодирующие эти веротоксины (VT) обнаружены в хромосомах в районе профага. Кроме того, бактерии Escherichia coli, содержащие токсин, могут вызывать геморрагический синдром. Прототип этих энтерогеморрагических форм Escherichia coli (Е.Н, Е.К) был впервые описан в 1982г, оказалось, что он принадлежит к серотипу 0157:Н7, со временем были обнаружены штаммы различных О-серотипов (Louie et al., 1994).

Диапазон клинических симптомов, вызываемых эшерихиями, содержащими веротоксин, широк - от лёгких и тяжёлых гастроэнтеритов, до геморрагических колитов с проявлениями гемолитического, уремического синдрома или тромбоцитолитического синдрома. При ослабленной иммунной системе возможен летальный исход. Продолжительность инкубационного периода зависит от степени инфицирования и обычно составляет от одного до трёх дней, иногда до восьми дней. В силу высокой устойчивости к воздействию факторов окружающей среды уровень инфицирования составляет приблизительно 100 бактерий. При этом главным источником инфекции являются продукты питания, получаемые из сырья крупного рогатого скота, овец, коз и молока. В особенности это мясо и мясные продукты, при хранении которых нарушался температурный режим.

Диагностика этих штаммов бактериологическим анализом требует соблюдения значительных мер предосторожности. Разработанные специфические тест-системы диагностики на основе иммунологических методов дают хорошие результаты в плане специфичности. Однако недостаточная чувствительность требует предварительного обогащения материала (March, Ratnam, 1989; Wright et al., 1994; Flint, Hartley, 1995).

Кишечная палочка, как и многие другие микроорганизмы, в ответ на различные стрессовые условия окружающей среды могет терять способность расти на средах, на которых она обычно культивируются. Некультивируемые формы бактерий не образуют колоний, что затрудняет обнаружение подобных колоний и их идентификацию при бактериологическом анализе (Госионов, 2000).

Таким образом, индикация и идентификация возбудителей инфекций классическими бактериологическими методами связаны с использованием многочисленных селективных питательных сред и различных субстратов. Это делает процесс идентификации длительным и трудоёмким.

Кроме того выращивание контаминирующих микроорганизмов на различных средах в условиях конкуренции не всегда приводит к адекватным результатам идентификации. Более того, идентификация in vivo трансформированных бактерий или искусственно генетически изменённых форм, несущих гены патогенности, неприсущие данному штамму, затруднительна при классическом бактериологическом анализе.

Динамика развития ветеринарно-санитарной экспертизы и сертификации мяса в России и за рубежом характеризуется переходом к наиболее специфичным, чувствительным и ускоренным методам индикации и идентификации бактерий.

Заключение диссертации по теме «Гигиена животных, продуктов животноводства и ветеринарно-санитарная экспертиза», Мамаев, Максим Александрович

ВЫВОДЫ

1. С помощью количественного фотометрирования результатов точечной гибридизации тотальных ДНК, меченных биотином, разработана модификация способа определения уровня гомологии нуклеиновых кислот, позволяющая проводить идентификацию бактерий до вида.

2. На основе определения гомологии нуклеиновых кислот с меченными биотином ДНК разработана модифицированная схема ускоренной идентификации бактерий различных таксономических групп в мясе и мясопродуктах, сокращающая время анализа в 2-3 раза по сравнению с общепринятым методом. х 7

3. С использованием нуклеотидных последовательностей fimA структурного гена Escherichia coli в качестве специфичного ДНК-зонда показана возможность индикации Escherichia coli в мясе и "мясопродуктах в присутствии сопутствующей микрофлоры без предварительного обогащения.

4. С использованием нуклеотидных последовательностей Stn гена основного токсина Salmonella typhimuriuirr в качестве специфичного ДНК-зонда показана возможность обнаружения токсигенных форм сальмонелл в мясе и мясопродуктах в присутствии близкородственной микрофлоры без предварительного обогащения. ■ „

5. С применением гуанидинтиоизоцизоционата разработана модификация способа ускоренного обнаружения бактерий в мясе и мясопродуктах, позволяющая проводить анализ в течение 5-7 чаёов.

6. На основе специфичных ДНК-зондов, меченных биотином, разработаны тест-наборы для индикации Escherichia coli и Salmonella typhimurium в мясе и мясопродуктах с чувствительностью до 103-104 клеток в пробе и возможностью дифференциации токсигенных форм сальмонелл.

7. На основе полимеразной цепной реакции с мечеными дезоксинуклеозидтрифосфатами разработаны модификации метода

94 количественного определения бактерий в мясе и мясопродуктах, позволяющие проводить анализ в присутствии сопутствующей микрофлоры без предварительного обогащения.

8. Чувствительность количественного определения бактерий составляет 102л ,

10 клеток в пробе, и время анализа не превышает 2-3 часа.

9. Сравнительная оценка разработанных нами ускоренных модификаций методов ДНК-диагностики и общепринятых микробиологических методов показала высокую степень корреляции результатов анализа, что позволяет рекомендовать их для практического использования при ветеринарно-санитарной экспертизе и сертификации мяса и мясопродуктов.

ПРЕДЛОЖЕНИЯ ДЛЯ ПРАКТИКИ

Для использования в практике работы научных и производственных ветеринарных учреждений и лабораторий могут быть рекомендованы разработанные нами:

Методические рекомендации по индикации и идентификации энтеробактерий в объектах ветеринарно-санитарного надзора на основе ДНК-диагностики» (утверждены Отделением ветеринарной медицины РАСХН 28.03.2000 г.);

Методические указания по индикации энтеробактерий в объектах ветеринарно-санитарного надзора на основе ДНК-гибридизации» (утверждены Департаментом ветеринарии МСХиП РФ 28.03.2000 г, № 13-7-2/12);

Тест-наборы на основе специфичных ДНК-зондов меченных биотином для индикации кишечной палочки и сальмонелл.

Список литературы диссертационного исследования кандидат ветеринарных наук Мамаев, Максим Александрович, 2000 год

1. Антонов A.C. Молекулярные основы геносистематики. Изд. МГУ, М., 1980.л

2. Асеев Н. В., Светличкин В.В., Астахова О.И. Тест-система для ускоренной индикации и идентификации сальмонелл и кишечной палочки в продуктах убоя с/х животных на основе генных зондов. Труды ВНИИВСГЭ, т. 94, 1994, с.95-98.

3. Белоусова Р.В., Гончарова Т.М., Асеев Н.В. и др. Разработка способов и технических средств полевой индикации возбудителей инфекционныхзаболеваний животных на основе генных зондов. В кн.: Вопросы ветеринарной биологии. М, 1994, с. 68-70.

4. Блохина И.Н., Леванова Г.Ф. Геносистематика бактерий. М., 1976.

5. Бочков Ю.В., Дрыгин В.В., Борисов A.B., Гусев A.A. Методические указания по индикации генома и штаммовой дифференциации вируса инфекционного бронхита кур методом полимеразной цепной реакции

6. ПЦР) и секвенированием вариабельной области S1 гена. Утв.

7. Департаментом ветеринарии Минсельхозпрода РФ, 21.02.1997.

8. Ю.Бровкина А.Н. Характеристика поливалентных сальльмонеллёзных диагностикумов для реакции латекс-агглютинации.// Сб. науч. Трудов ВНИИВСГЭ, том 107, М., 1999, с.22-26.

9. Вальехо-Роман К. М. Гибридизация ДНК В кн.: Молекулярные основы геносистематики. Изд-во МГУ, М, 1980, с.86-105.

10. Голубева И.В. Дифференциация и идентификация бактерий семейства Enterobacteriaceae. // Труды МосНИИ вакцин и сывороток. .1977, т.77, с. 2330.

11. М.Горбовицкая М. Диагностика болезни Марека с использованием ДНК-зондов. // Птицеводство. М. 1996. №2, с 27-28.

12. Госионов Р. Некультивируемые формы микроорганизмов.// Ветеринарная газета. №5, март 2000.

13. ГОСТ 21237-75. «Мясо. Методы бактериологического анализа».

14. Грановский H.H., Власихина Е.М., Доценко Г.Н. и др. Вопросы вирусологии, 1986, т. 31, №4, с.449-452.

15. Гринькевич В.А., Лысенко A.M., Мунтян М.С., Скрипникова Е.В., Африкян Э.К. Идентификация штамма Bacillus Sp. FTU и изучение гомологии оксидаз сааз-типа. // «Биохимия», 1997, том 62, №7, с.842-849.

16. Дерюшева С.Е. Биотинилирование ДНК-зондов с помощью полимеразной цепной реакции. Труды ВНИИ генетики и разведения с/х животных. Санкт-Петербург, 1993,с.43-45.

17. Доронина Н.В., Говорухина Н.И., Лысенко A.M., Троценко Ю.А. Анализ ДНК-ДНК гомологий у облигатно-метилотрофных бактерий.// «Микробиология», 1988,том 57, №4, с.629-633.

18. Друца В.Л. Радиоизотопное мечение ДНК. В. кн.: Молекулярные основы геносистематики. Изд. МГУ. М., 1980, с.35-50.

19. Золотарев Ф.Н, Голубев Д.Б., Петров H.A. Метод точечной гибридизации в вирусологии.//Успехи современной биологии.- 1989.-том 108.- с. 375-382.

20. Иванов Л.Г. Систематика, морфологическая характеристика и биологические свойства возбудителей токсикоинфекций. Автореф. на соискание ученой степени доктора биологических наук МГУ им. Ломоносова. 1992.

21. Калюжная М.Г., Хмелленина В.Н., Сузина Н.Е., Лысенко A.M., Троценко Ю.А. Новые метанотрофные изоляты из щелочных озер южного Забайкалья. «Микробиология», 1999, том 68, №5, с.677-685.

22. Карелин А.И., Макаров В.А., Боровков М.Ф. Словарь ветеринарных, зоогигиенических и санитарных терминов. М.: Росагропромиздат., 1990.

23. Квятковская А.Ю. Разработка автоматизированных методов ДНК -диагностики эшерихий и сальмонелл в объектах ветеринарно-санитарного надзора.// Автореферат диссертации на соискание учёной степени кандидата биологических наук. М, 1998.

24. Кисленко В.Н. Патогенные сальмонеллы. Лекция. Новосибирск, агр. ин-т. Новосибирск, 1992.

25. Коромыслов Г.Ф., Фомин Б. А., Артюшин С.К. и др. Диагностикумы инфекционных болезней сельскохозяйственных животных на основе генной инженерии. Труды ВИЭВ, 1994, т. 69, с. 8-14.

26. Красько А.Г., Ркхадзе Г.Г., Сергеев В.А. и др. Диагностика ротавирусной инфекции человека методом точечной гибридизации. «Вопросы вирусологии», 1987, т.32, №2, с.208-212.

27. Лабинская A.C. Микробиология с техникой микробиологических исследований. М," Медицина", 1978.

28. Лысенко A.M., Суходолец В.В. Дивергенция Streptococcus thermophilus по уровню гомологии ДНК. «Микробиология», 1999, №4, с.448-451.

29. Макаров В.Б., Сафронов В.В. Цитогенетические методы анализа хромосом. М, «Наука», 1978.

30. Маккреди Б.Д., Чимера Д.А. Обнаружение и идентификация патогенных микроорганизмов молекулярными методами. В кн. Молекулярная клиническая диагностика. М, Мир, 1999, с.496-506.

31. Мальков И.Г. Нетрадиционные методы анализа в ускоренной диагностике патогенных микробактерий. В кн.: Проблемы ветеринарной санитарии, 1992, с. 3-14.

32. Мальков И.Г., Артюшин С.К., Фомин Б.А., Коромыслов Г.Ф. Разработка метода идентификации микобактерий человеческого и бычьего видов с использованием ПЦР.// Молек. генетика микроб, вирусол. , 1993. -2.- С. 3-9. М.-" Медицина".

33. Маниатис Т, Фритч Э., Сэмбрук Дж. Методы генетической инженерии. Молекулярное клонирование. М., «Мир»., 1994.

34. Медников Б.Н. Дивергенция геномов и некоторые вопросы эволюционной теории. Автореф. на соискании ученой степени доктора биологических наук. Москва, 1978.

35. Медников Б.Н., Леванова Г.Ф. О возможных принципах построения естественной системы микроорганизмов. Физиология и биохимия микроорганизмов. Межвуз. Сб. №2, Горький, 1980.

36. Микерин С.М. Способ бактериологической диагностики пищевых токсикоинфекций сальмонеллезной этиологии. Тез. докл. Нижний Новгород, 1991, т. I.e. 107-108.

37. Монахова Е.В., Власов В.П., Вуцан В.Н., Е.И.Седых, Н.К.Михась.// Видоспецифический ДНК-зонд для идентификации холерных вибрионов. // Молекул, генетика микроб.вирусол. 1993.-4,- с.8-1 1.- М.-"Медицина".

38. Неплюев И.В., Дорошенко Н.В., Стаханова В.М. «Молекулярная генетика, микробиология, вирусология», 1987, №9, с. 35-38.

39. Пак С. П., Пальцев П.А. Сальмонеллез. М., «Медицина», 1989.

40. Петров Н.Б. Методы изучения реассоциации ДНК. В кн. Молекулярные основы геносистематики. Антонов A.C. М. ИздМГУ, 1980, с. 51-75.

41. Поляков A.A. Ветеринарная санитария. М., "Колос"., 1989.

42. Поставин В.А. Пищевые токсикоинфекции. М., "Медицина", 1980.

43. Правила ветеринарного осмотра убойных жиаотных и ветеринарносанитарной экспертизы мяса и мясопродуктов. Утв. Главным упрравлением ветеринарии Министерства сельского хозяйства СССР, 27 декабря 1983 г. М, ВО «Агропромиздат», 1988.

44. Прохватилова Л.Б., Ломакин А.И., Дрыгин В.В., Гусев A.A. Методические указания по индикации генома провируса лейкоза" крупногорогатого скота методом полимеразной цепной реакции. Утв. Департаментом ветеринарии Минсельхозпрода РФ, 21.02.1997.

45. Пыльнов В.А., Андреев В.Г., Гусев АА. Методические указания по индикации генома вируса респираторно-репродуктивного синдрома свиней методом полимеразной цепной реакции. Утв. Департаментом ветеринарии Минсельхозпрода РФ, 21.02.1997.

46. Романенко Л.А., Лысенко A.M., Михайлов В.В., Курика A.B. Новый вид буропегментированных агарлитических бактерий рода Alteromonas. «Микробиология», 1994, том 63, №6, с. 1081-1087.

47. Романенко Л.А., Михайлов В.В., Лысенко A.M., Степаненко В.И. Новый вид меланинсинтезирующих бактерий рода Alteromonas. // «Микробиология», 1995, том 64, №1, с.74-77.

48. Романова Л.В., Мишанкин Б.Н.Сучков И.Ю. Полимеразная цепная реакция: генотипический скрининг штаммов Fran. tularensis с использованием неспецифических праймеров.// Биотехнология, 1993. N6.-с. 8-9.

49. Санитарные правила и нормы. СанПиН 2.3.2. 560-96. Гигиенические требования к качеству и безопасности продовольственного сырья и пищевых продуктов. М, 1997, п.6, с.22-50.

50. Светличкин В.В., Лысенко A.M., Петров Н.Б. и др. Сравнение различных способов введения метки в ДНК микроорганизмов. "Биологические науки", 1985, №6, с. 130-135.

51. Сидоров М.А., Билетова Н.В. КорпелаеваЛ.М. Микробиология мяса, мясопродуктов и птицепродуктов. М., Агропромиздат, 1996.

52. Синагатуллина Э.М. Разработка тест-систем для выявления инфекционных агентов с использованием нерадиоактивных биотиниллированных ДНК-зондов. Автореферат диссертации на соискание учёной степени кандидата биологических наук. М., 1992.

53. СтентГ. Молекулярная генетика. М, Мир. 1974, с. 1-535.

54. Стикланд Ю.Е. Получение зондов и их мечение. В кн. Молекулярная клиническая диагностика. М, Мир, 1999. с. 329-372.

55. Тимошин В.Б., Замараев B.C., Антонов В.А., Липницкий A.B. Видоспецинфический ДНК-зонд для идентификации токсигенных штаммов возбудителя сибирской язвы. // Молекулярная генетика, микробиология и вирусология. 1994, № 1, с. 30-33.

56. Турова Т.П. Определение таксономического положения микроорганизмов с помощью метода гибридизации ДНК. "Биологические науки ", 1989, № 2, с.26-28.

57. Турова Т.П., Троицкий A.B., Игнашёв В.Г., Светличкин В.В. Применение метода ДНК-ДНК гибридизации для идентификации бактерий из смешанных культур. «Лабораторное дело», 1981, с.48-51.

58. Фрумгарц Л.Ф., Киприянов С.М., Калачиков С.М. и др. Получение флуоресцентной меченой ДНК и использование ее в качестве зонда при молекулярной гибридизации. "Биоорганическая химия", 1986, №11, с. 15081513.

59. Херрингтон С., Макги Дж. Молекулярная клиническая диагностика. // М, Мир., 1999. с.558.

60. Чан Т.В.Т. Гибридизация нуклеиновых кислот. В кн. Молекулярная клиническая диагностика. Методы. М, Мир. с.374-394.

61. Шибата Д.К. Полимеразная цепная реакция и молекулярно-генетический анализ биоптатов. В кн. Молекулярная клиническая диагностика. Методы. М, Мир, 1999. с.395-425.

62. Эйзендерг М., Чимера Д. А. Идентификация личности: анализ полиморфизма длины амплификационных фрагментов. В кн. Молекулярная клиническая диагностика. Методы. Под ред. Херрингтона С., Макги Дж. М, Мир, 1999, с.507-516.

63. Agrowal S., Cristodoulou C., Gait M. Efficient methods for attaching nonradioactive labels to the 5 ends of syntheticaligodeoxy ribonucleotides.// Nucl. Acid. Res. 1986. V. 14, p. 6227-6245.

64. Andrew V., Sayler G. The use of gene probes in the rapid analysis of natural microbial communities.//" J. Ind. Microbiol." 1988, 3, №5, p. 281-292.

65. Andriman W., Gradoville L., Heston L. Use of cloned probes to detect Epstein Barr viral DNA in tissues of patients with neoplastic and lympho-proliferative diseases.//. Journal of infectious Disease. 1983, V.148, p. 967-977.

66. Arends M.J. Identification of HPV: in situ hybridization or polymerase chain reaction. //J. Pathol. 1991, V. 164, № 3, p. 191-193.

67. Arrand J. Preparation of nucleic acid probes: Nucleic acid hydridization: a practical approach.// Ed. By BD Harnes, IRL Rpess. 1986, p.40.

68. Asai T., Zaporojets D., Squires C., Squires C.L. // An Escherichia coli strain with all chromosomal rRNA operons inactivated: Complete exchange of rRNA genes between bacteria. // PNAS, 1996, v.96, p. 1971-1976.

69. Ashall F., Miless M. Diagnosis of parasitic diseases using DNA to DNA hybridization.// «Trans Roy Soc trop. Med. Hyg.». 1988, № 2, p. 235-236.

70. Baker R.F. Binding of DNA to cellulose nitrate filters under denaturing conditions. // "Anal. Biochem.", 1977, v.78, p.569-571.

71. Berger C., Melchers F. In situ hybridization ofmRNA molecule in single cells.// «Annu rep., 1985, Basel Inst. Lmmunol», Basel, p. 1-10.

72. Bernet C., Carret M., de Barbeyrac B. Detection ofMycoplasma pneumoniae by Using the Polymerase chain Reaction.// J.clin. Microbiol.-1989.-Vol. 27. N II.- p. 2492-2495.

73. Bevan I.S„ Daw R.A., Day P.J.R., Ala F.A., Walker M.R. Polymerase chain reaction for detection of human cytomegalovirus infection in a blood donor population.// Brit. J. Haematol. 1991. v.78, N I, p. 94-99.

74. Böhm H., Karch H. DNA fingerprinting of Escherichia coli 0157:H7 strains by pilsed-fild gel electroforesis.//J. Clin. Microbiol., 1992, v.30, p.2169-2172.

75. Boom R, Sol C, Beld M., Weel J., Goudsmit J., Wertheim-van Dillen. Improved Silica-Guanidiniumthiocyanate DNA isoation Procedure Based on Selectiv Binding of Bovin Alpha-Casein to Silica Particles. //J. Clin. Microbiol, 1999, v.37, №3, p.615-619.

76. Brechot C. Application du donare de 1 DNA du virus de 1 hepatite B pour le diagnostic des infection lines au virus de 1 hepatite B.// "Ann. Biol. Clin", 1985, №4, p. 351.

77. Brenner D. Gene Probes in Detection and identification of Pathogenic Bacteria.// "Clinical Microbiol", 1986, №7, p. 106-109.

78. Britten R. J., Kohe D.E. Repeated sequences in DNA.// "Science", 1968, v.161, p.529-540.

79. Brytting M, Sundgvist V.-A., Stahlhandske P., Linde A., Wahren B. Cytomegalovirus DNA detection of an immediate early protein gene with nested primer oligonucleotides. // J. Virol. Meth. 1991. v. 32, №2-3, p. 1127-138.

80. Cassiman I. Diagnosis of genetic diseases by probes.// "Acta clin. Belg.", 1988, p. 181-184.

81. Chou S., Merigan T.C. Rapid detection and quantitation of human cytomegalovirus in urine through DNA hybridization. // New England Journal of Medicine. 1985, v. 308, p. 921-925.

82. Chu B.C.F., Wahl G.M., Orgel L.E. Derivatization of unprotected polynucleotides.//Nucl. Acid Res. 1983,v.ll,p. 6513-6529.

83. Church R.B. Method for study of hybridization and reassociation of nucleic acids axtracted from cells of higher animals. In: Molecular techniques and approach in developmental biology, ed. by M. J. Chrispeels. N. Y., 1973, p. 223301.

84. Coates P.J., Mak W.P., Slavin G., Ardenne A.J. Detection of singl copies of Epstein-Barr virus in paraffin wax sections by nonradioactive in situ hybridization. // J. Clin. Pathol., 1991, v.44, №6, p. 487-491.

85. Codex Alimentarius. Vol. 10, FAO, WHO, 1991, 223 p.

86. Conner C.P., Heithoff D.M., Julio S.M., Sinseheimer R.L., Mahan M.J. // Differential papperns of acquired virulence genes distinguish Salmonella ctrains. PNAS, 1998, v.95, p.4641-4645.

87. Сох K.H., DeLeon D.V., Angerer L.M. Detection of mRNAs in sea unchin embryos by in situ hibridization using asymmetric RNA probes. // Developmental Biology, 1987, V. 101, p.485-502.

88. Day P.J.R., Bevan I.S., Gurney S.J., Young L. S., Walker M.R. Synthesis in vitro and application of biotinylated DNA probes for human papiloma virus type 16 by utilizing the polimerase chain reaction. // Biochm.I. 1990. v.267, №1, p.119-123.

89. De Ley I., Cattoir H., Reynaerts A. The quantitative measurement of DNA hybridization from renaturatiun rates. // "Europ. J. Biochem.", 1970, v. 12, p.133-142.

90. Denhardt D.T. A membrane filter technique for the detection of complementery DNA.// "Biochem. Biophys. Res. Commun.", 1966, v.23, p. 641646.

91. Erlich H.A. PCR technology.// Stockton Press, New York, 1989.

92. Falkow S., Moseley S. Application oftechique of DNA-DNA hybridization in diagnostic microbiology.// Патент CUIA№ 4187351, 03.04.1980, 435/5.

93. Falkow S., Moseley S. Specific DNA probes in diagnostic microbiology.// Патент США №4358535,10.11.1982,435/15.

94. Ferenezy A. Latent papilomavirus and recurring genital warts.// N. Engl. J. Mod., 1985, №14, p. 784.

95. Fine S.P., Reddy G.R., Marnett L.J. Mutagenicity in Escherichia coli of the mayor DNA adduct derived from the endogenous mutagen malondialdehyde. // Proc. Natl. Acad. Sei, 1997, v.94, p. 8652-8657.

96. Flint S.H., Hartley N.J. Evaluation of the TECRA Escherichia coli 0157 visual immunoassay for tests on dairy products.// "Lett Appl Microbiol", 1995, v. 21(2), p.79-82.

97. Forster A., Modness J., Skingle D. Non-radioactive hybridization probes prepared by chemical labeling of DNA and RNA with novel reagent, photobiotin.// "Nuc. Acid Res", 1985, №3, p.745.

98. Gaillot O., Camillo P.D., Berche P. Comparison of CHROMagar Salmonella Medium and Hektoen Enteric Agar for isolation of Salmonellae from stool samples.//J. Clin. Microbiol, 1999, v.37, p.762-765.

99. Gannon V. P., King R.K, Kim J.Y, Thomas E.J. Rapid and sensitive metod for detection of Shiga-like toxin-produsing Escherichia coli in ground beef using the polimerase chain reaction.// Appl. Environ Microbiol, 1992; v.58, p.3809-3815.

100. Garger S, Turpen T. Use of RNA probes to detect plant RNA viruses.// «Meth Enzymol.», v.l 18, Orlando, 1986, p. 717-722.

101. Gillespie D, Spiegelman S. A quantive assay for DNA-RNA hybrids with DNA-RNA immobilized on a membrane.// "J. Molecul. Biol.", 1965, v. 12, p.829-842.

102. Gou D. F, Kubota H, Onuma N, Kodama H. Detection of salmonid heipes virus in fisli by Southern-blot technique.// J. Vet. Mod. Sei. 1991. v. 53, NI.P 4348.

103. Gramley W.A., Asghar A, Frierson H.F, Powell J.M, Powell S.M. Detection of Helicobacter pylori DNA in Fecal Samples from in fected individuals.// J. Clin. Microbiol, 1999, v.37, p.2236-2240.

104. Haase A. Analysis of infections and pothological conditions by in situ hybridization . «DNA Probes: Appli. Genet, and Infic. Disease and Cancer; Cent,

105. Cold Spring Harbor. Apr. 20-23, 1986», Cold Spring. Harbor. N. Y., 1986, p.l 13- 118.

106. Haase A., Brahic M., Blum H. Detection of viral nucleic acids by in situ hybridization.// «Meth. Virol. Vol.», Orlando c. a., 1984, p. 189-226.

107. Halt C.,Ward M.E.,Clarke l.N. Analysis of the entire nucleotide sequence of the ciyptic plasrnid of Chlamidia trachomatis serovar L I .Evidence for involvement in DNA replication. // "Nucl. Acid. Res.", 1988, v. 16.- p.4053-4067.

108. Hames B.D., Higgins S.J. Nucleic acid hybridisation: a practical approach.// IRL Press, Oxford, 1985.

109. Hashimoto Y., Itho Y., Fujinada Y., Khan A.Q., Sultana F., Miyake M., Hirose K., Yamamoto H., Ezaaki T. // Development of nested PCR based on the ViaB sequence to detect Salmonella thyphi. // J. Clin. Microbiol., 1995, v.33, p.775-777.

110. Hayashi K. Manipulation of DNA by PCR. In. PCR the Polimerase chain reaction, Eds.: Mullis K.B., Ferre F. & Gibbs R.A., Birkhauser, 1994, p. 3-14.

111. Herrick J., Michalet X., Conti C., Schurra C., Bensimon A. Quantifying single gene copy number by measuring fluorescent probe lengths on combed genomic DNA.// "Proc. Natl. Acad. Sci", 2000, v. 97 (1), p 222-227.

112. Hill W., Madden J. Foodbome enterotoxigenis Escherichia coli: detection and enumeration by DNA hybridization.// «Appl. and Enviro. Microbiol», 1983, №4, p.1324-1330.

113. Hill W., Payne A. Detection and enumeration of virulent Yersinia enterocalitica in food by DNA colony hybridization.// "Appl. F Environmental Microbiology", 1984, №4, 801-807.

114. Hopmar A., Wiegant J., Tesser G. A no-radioactive in situ hybridization method based on mercurated nuelcie acid probes and sulfhydryl-hapten ligands.// «Nuel. Acid. Res.», 1986, v.14, №16, p. 6471-6488.

115. Huck L.G., Dorn C.R., Angrick E.J. DNA probe for detection of serogroup 0157 enterohemorrhagic Escherichia coli.// Int. J. Food Microbiol; 1995, v.25, №3, p.277-287.

116. Huss H.H. Control of indigenous pathogenic bacteria in seafood. Food control, 1997, v.8, №2, p.91-98.

117. Ikeda S., Yamamoto M., Nagao K., Zhang B., Watanabe S., Oda T. Nonradioactive hybridization probes prepared using M13 phage vector and the universal sequencing primer.// Acta mod. Okajama. 1989. v.43, № 4, p. 11971202.

118. Innis M.A., Gelfand D.H., Sninsky J.J., White T.J. Optimization of PCRs. In: PCR protocols, a guide to methods and applications.// Academic Press, San Diego, California, 1990.

119. ISO 9001. Quality systems models for quality assurance in design, 1987, pp. 6-8.

120. Ivanova T., Turova T., Antonov A. DNA-DNA and rRNA-DNA hybridization studies in the genus Ectothiorhodosrira and other purple sulfur bacreria.// "Arch. Microbiol", 1985, №2, p. 154-156.

121. Jaulhac B., Nowicki V.,Boznstein N.Detectoin Legionella pneurnofila method PCR.//J.Clin. Microbiol.-1992.-v.30 № 4.p 92-94.

122. Joseph T., Navo P.E., Caron C.F. Molecula characterization of Chlamidia trachomatis and Chlamidia psitace; Plasmids. //Infect. Innwn.-1986.-Vol.5L-p.699- 703.

123. Jremstein M. and Hognes D. Colony hybridization: A method for the isolation of cloned DNAs that contain a specific gene.// "Proc. Nail. Acad. Sci. USA", 1975, p. 3961-3965.

124. Kacian D., Lawrence T., Sanders M., Putnam J., Majlessi M., McDonough S., Ryder T. A rapid and sensitive chemiluminescent DNA probe system for detection of amplified HIV and HBV DNA. // Fresenius J. Anal. Chem. 1990. v.337, №1, p. 95.

125. Karh H., Meyer T. Evalution of oligonucleotide probes for identification of shiga-like-toxin-producing Esherichia coli.// J. Clin Microbiol, 1998, v.27, p.1180-1186.

126. Kauffmann F., Edwards P.R. Classification and nomenclature of Hntcrobacteriaccae.// Int. Bull. Bact. Norn.Tax. 1952, p. 20-37.

127. Kim J., Nietfeldt J., Benson A.K. Octamer-based genome scanning distinguishes a unigue subpopulation of Escherichia coli 0157:H7 strains in cattle.// Proc. Nail. Acad. Sci. USA, 1999, v. 96, Issue 23, p. 13288-13293.

128. Kimpton C.P., Morris D.J., Corbit G. Sensitive non-isotopic DNA hybridisation assay or immerdiate-early antigen detection for rapid identification of human cytomegalovirus in urin.//J. Virol. Meth. 1991, v.32, №1, p. 189-199.

129. Kohne D. Novel approach for rapid and sensitive detection of microorganisms.//"Clinicae Microbiol", 1987, №6, p. 110-112.

130. Lakshmi D., James D. A solution hybridization assay for the quantitation of prodynorphin mRNA.// "Mol. Brain Res.", 1987, №2, p. 173-176.

131. Lanata C. Sensitivity and specifity of DNA probes with the stool blot technique for detection of Eschenchia coli enterotoxins.// "J. Infec. Diseases", 1985, №5, p. 1087-1090.

132. Langer P. R., Waldrop A.A., Ward D.C. Enzymatic synthesis of biotimlabelled polynucleotides: novel nucleic acid affinity probes.// Proc. Nat. Acad. Science. 1982. v.79. p. 4381-4385.

133. Leiser R., Schubert J. Nachweis phytopathogener Virren mit Hilfe der RNA-RNA-hydridisierung auf Filtern.// "Acta biotechnol", 1986, №1, p. 14-16.

134. Lim J.K., Gunther N. W., Zhao H., Johnson D.E., Keay S.K., Mobley H.L.T. // In Vivo Phase Variation of Escherichia coli Type 1 Fimbrial Genes in Women with Urinary Tract Infection. // Infection and immunity, 1998, v. 66, №7, p.3303-3310.

135. Lockcnsgard J.R., Thawley D.G., Molitor T.W. Enzymatic aimplification of latent Pseudorabies virus nucleic acids sequences.//J.Virol.Meth. 1991. v.34, № 1. P. 45-55.

136. Longer P. Enzymatic synthesis of biotin-labelekl polynucleotides novel nucleic acid affinity probes.// Proc. Natl. Acad. Sei USA, 1981, №11, p. 6633.

137. Louie M., de Azavedo J, Clarke R., Borczyk A., Lior H., Richter M., Brunton J. Sequence heterogeneity of the eae gene and detection of verotoxin-produsing Escherichia coli using serotype-specific primers.// Epidemiol Infect; 1994, №112, p. 449-461.

138. Luk J.M., Kongmuang U., Trans R.S., Lindberg A.A. An enzyme-linked immunosorbent assay to detect PCR products of the rfbS gene from serogroup D salmonellae: a rapid screening prototype.// J. Clin. Microbiol. 1997, v.35, p.714-718.

139. March S.B., Ratnam S. Latex agglutination test for detection of Escherichia coli serotype 0157.// J. Clin Microbiol, 1989, v. 27, p.1675-1677.

140. Marmur J., Doty P. Heterogeneity in deoxyribonucleic acids. I. Dependens on composition of the configurational stbility of deoxyribonucleic acid.// "Nature", 1959, v.183, p.1427-1431.

141. Marmur J., Doty P. Thermal renaturation of deoxyribonucleic acid. // "J. Molecul. Biol.", 1961, v.3, p.585-594.

142. Martm R. H. Non-radioactive techiques for the labelling of nucleic acids.// Biotech. Adv. 1991, v.9, p. 185-196.

143. Maxwell J.H., Van Ness J., Hahn W.E. Assay of DNA-RNA hybrids by SI nuclease digestion and adsorption to DEAE-cellulose Filters.// "Nucl. Acids. Res.", 1978, v.5, p.2033-2037.

144. McCol K. A., Gould A. R. Detection and characterisation of bilietongue virus using the polymerase chain reaction.// Virus. Res. 1991. v.21, № 1, p. 1934.

145. Meyer R. F., Brown C.C., House C., House J. A., Monitor T. W. Rapid and sensitive detection of foot-and-mouth disease virus in tissues by enzymatic RNAamplification of the polymerase gene.// J. Virol. Meth. 1991. v.34, № 2, p. 161-172.

146. Metcalf T. G., Jiang X., Ester M. K., Melnick J. L. Nucleic acid probes and molecular hybridization for detection of viruses in environmental samples.// Progr. Med.ViroL 1988. v. 35, p. 186-214.

147. Miller G., Tare C. R. Mallmson E.T. Salmonella. Xylose-lysine-tergitol 4: an unproved selective agar medium for the isolation of Salmonella.// Poultry Sci, 1991, № 12, p. 2429-2432.

148. Moore R., Schmid J. Gounder J and Stuley J Deoxyribonuclei acid Hology Among the Gaulobacters.// Inter J of Systemat. Bacter, 1978, v.28, №3, p.349-353.

149. Moseley S.L., Hyg J. Detection of enterotoxigen Esherichia coli by DNA colong hybridization.// "J. Infect", 1989, №6, p. 892-898.

150. Murtanyh M.P., Lin G.F., Haggard D.L., Weber A.F., MeiskeJ.C. Detection of bovine leukemia virus in cattle by the polymerase chain reaction.// J. Virol. Meth. 1991 .v. 33, № 11-12, p. 73-85.

151. Montor T.W., Oraveerakul K., Zhang Q.Q., Choi C.S., Ludemann L.R. Polymerase chain reaction amplification for the detection of porcin parvovirus.//J. Virol. Meth. 1991. v.32, № 2-3, p. 201-211.

152. Nataro J.P. Detection of an abherence factor of enteropathogenes Escherichia coli with a DNA probe.// "J. Infec. Diseases", 1985, №3, p.560-565.

153. Palva A. A gene in the detection ofEscherichia coli and other Enterobacteriaceae by nucleic acid sandwich hybridization.// «J. Clin. Microbiol.», 1983, №1, p.92-100.

154. Paul P.S. Application of nucleic acid probes in veterinary infectious diseases. // Voter. Microbiol. 1990, v. 24, № 3/4, p. 409-417.

155. Peirce C., DNA technology provides new tools for identifycirung genetic causes of disease.// «Res. Resour. Report.», 1988, №8, p. 1-4. .

156. Persing D.H., Smith T.F., Tenover F.C., White T.J. Target selection and optimization of amplification reaction.// In: Diagnostic molecular microbiology, ASM, 1993, p. 88-102.

157. Piiparinen H., Vaheri A. Genotyping of herpes simplex virusesby polymerase chain reaction.//Arch. Virol. 1991. v. 119 №13-4, p. 275-283.

158. Pulco P R., Khatib R., Barientes S., Atmar R., Tony M.A. Detection of all 6 Coxsackieviral serotypes by polymerase chain reaction.// J. Cell Biochem. 1991. Suppl. 15 c. p. 194.

159. Ranki M. Sandweich hybridization as a convmient method for detection ofnucleic acids in crude samples.// «Gene 21», 1983, p. 77.

160. Renz M, Kiirz C. A colorirnetric method for DNA hybridization.// Nlicleic Acids Res. 1984. v. 12, № 8, p. 13435-13444.

161. Rifai S, Barbancon V, Prevost G, Piemont Y. Staphylococcus aureus Synthetic exfoliative toxin A and B DNA probes for detecton of toxigenic Staphylococcus aureus strains.// "J. Clin. Microbiol.", 1989, №3, p. 504-506.

162. Rowley A. H., Wolinsky S. M, Sambol S. P, Barkholt L, Elirnst A., Andersson J. P. Rapid detection of citomegalovirus DNA in blood of renal transplant patients by in vitro enzymatic amplification.// Transplantation. 1991. v. 51, №5, p. 1028-1033.

163. Rubin F, Lane E, Lesman M, Hoffman S. Use of a DNA probe to detect Salmonella typhi in the blood patiens with typhoid fever.// "J. Clin. Microbiol", 1989, №5, p. 1112-1114.

164. Rusvai M, Belak S. Detection of bovine adenovirus nuclric acid sequences in nasal specimens by biotinylated DNA probes. 1992, №4, p.311-316.

165. Saiki R. X, Chu-An Chang B.S, Levenson C.H, Warren T.C, Bochm C.D, Kazazian J.H, ErilchH.A. //NewEng. J. Mod. 1988. v. 391. p. 537-541.

166. Sallie R, Rayner A, Portmann B, Eddieston A.L.W.F, Williams R, Detection of hepatitis "C" virus informalin-fixed liver tissue by nested polymerase chain reaction.// J. Mod. Virol. 1992. v.37, №4.

167. Samadpour M, Liston J, Ongerth J.E, Tarr P.I. Evalution of DNA probes for detection of Shiga-like-toxin-producing Escherichia coli in food and calf fecals samples.// Appl. Environ Microbiol, 1990, v.56, p. 1212-1215.

168. Sansonetti P., Boileau С. H Sonde d" DN et procede pour la detection de Shigelles et des souches entero-invasives de Esherichia coli. Патент ЕР, №170584, 12.07.1985, С 12 Q 1/68.

169. Sausern J. Detection of specific sequences among DNA fragments separated by gel electroohoresis.//J.Molec.Biolog.- 1975.-98.-p. 503.

170. Seeling R., Renz M., Seelig H. P. PCR in the diagnosis of viral hepatitis.// Ann. Mod. 1992. v.24,№3.

171. Serhir В., Dugord D., Jacques M., Higgins R., Harel J. Cloning and characterization gene (dexS) from Streptococcus suis.// GENE, 1997, № 190, p. 257-261.

172. Sharma K.B. Arya S.C. Detection of Salmonella typhi by Nested PCR Based on the ViaB Sequence. // J. Clin. Microbiol., Dec., 1995, p.3361.

173. Shibata D., Martin W., Appiemen M. Detection of cytomegalovirus DNA in periferal blood of patients infected with human immunodefficiency virus. «Infec. Deseases» 1988, №6, p. 1185-1192.

174. Tchen P., Ranki M. Time-resolved fluoromentri, a sensitive method to quantify DNA-hybrids. "Nucl. Acid Res.", 1986, №2, p. 1017-1028.

175. Tenover F. Studies ofantimicrobiol resistance genes using DNA probes. "Antimicrob Ag Chemother. ", 1986, N5, p.721-725.

176. Todd D., Creelan J. L., MeNulty M. S. Dot-hybridization assay for chicken anemia agent using a cloned DNA probe.// J. Clin. Microbiol. 1991. v.29, № 5, p. 933-939.

177. Trainer G., Hobbs F. New methods for labeling nucleic acids with reporter groups.// «J. Cell. Biochem.» 1989, suppl., №13 E., p. 289.

178. Van der Giessen J.W.B., Eger A., Haagsma J., Haring R., Gaastra., van der Zeijst B. A. M. Micobacterium paratuberculosis. Amplification of 165 rRNA sequences to detect Mycobacterium paratuberculosis.// L. Med. Microbiol, 1992, №4, p. 255-256.

179. Verger J. M., Grimont F. Grimon PAD Grayon M Brucella, a monospicific genus as shocon by dioxyribonucleic acid hydridisation.// "Int J-Syst Bacteriol", 1985, p.292-295.

180. Viscidi R.P., Yolken R.G. Molecular diagnosis of infection diseases by nucleic acid hybridization.// Mol. and Cell. Probes. 1987. №1, p. 3-14.

181. Wetmur J. G., Davidson W. Kinetics ofrenaturation of DNA.//J. Mol. Biol. 1968. №31, p. 349-370.

182. Wilde J., Yolken R., Willoughby R., Eiden J. Improved detection of rotavirus shedding by polymerase chain reaction.// Lancet. 1991. v.337. № 8737, p. 323326.

183. Wright D.J., Chapman P.A., Siddons C.A. Immunomagnetic separation as a sensitive method for isolating Escherichia coli 0157 from food samples.// "Epidemiol infect", 1994, v. 113, p. 31-39.

184. Министерства тйства и П1Я РФ

185. В.В. Селиверстов « 28.' » марта 2000г.

186. МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ' по индикации энтеробактерий в объектах ветеринарно-санитарного надзора на основе ДНК-гибридизации1.Общие положения

187. Настоящие методические указания предназначены для ускоренной индикации бактерий родов Escherichia и Salmonella в мясе, мясе птицы и мясном . фарше на основе реакции гибридизации нуклеиновых кислот с использованием меченых биотином ДНК-зондов.

188. Компонентами реакции являются: испытуемый материал (выделенная из объекта исследования ДНК контаминируемых микроорганизмов) и меченые биотином ДНК-зонды. Реакция проводится на мембранных нитроцеллюлозных фильтрах с диаметром пор 0,45 мкм.2.ДНК-ЗОНДЫ

189. РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ НАУК (РАСХН)

190. Отделение ветеринарной медицины

191. МЕТОДИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ИНДИКАЦИИ И ИДЕНТИФИКАЦИИ ЭНТЕРОБАКТЕРИЙ В ОБЪЕКТАХ ВЕТЕРИНАРНО-САНИТАРНОГО НАДЗОРА НА ОСНОВЕ1. ДНК-ДИАГНОСТИКИ

192. УТВЕРЖДАЮ: Академик-секретарь отделения ветеринарной медицины академик РАСХН1. А.М.Смирнов 2000г.1. МОСКВА 2000.