Новые бактериальные патогены в пищевых продуктах: экспериментальное обоснование и разработка системы контроля с применением методов микробиологического и молекулярно-генетического анализа тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.02.01, доктор биологических наук Ефимочкина, Наталья Рамазановна

• Ефимочкина, Наталья Рамазановна
• доктор биологических наук
• 2010

Оглавление диссертации доктор биологических наук Ефимочкина, Наталья Рамазановна

ВВЕДЕНИЕ

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Глава 1. ЗНАЧЕНИЕ НОВЫХ ВОЗБУДИТЕЛЕЙ ЗАБОЛЕВАНИЙ С 13 ПИЩЕВЫМ ПУТЕМ ПЕРЕДАЧИ

1.1. Виды эмерджентных бактериальных патогенов

1.2. Общая характеристика пищевых эмерджентных инфекций

Глава 2. ИЗМЕНЧИВОСТЬ БАКТЕРИЙ КАК ОСНОВА ЭВОЛЮЦИ- 20 ОННЫХ ПРОЦЕССОВ ВОЗНИКНОВЕНИЯ НОВЫХ ВИДОВ ПАТОГЕНОВ

2.1. Генетические аспекты формирования патогенного потенциала неко- 21 торых видов возбудителей пищевых заболеваний

2.2. Основные факторы патогенности

2.3. Рейтинг приоритетных факторов, обуславливающих появление бак- 39 териальных патогенов с измененными свойствами

Глава 3. ВЛИЯНИЕ УСЛОВИЙ ПРОИЗВОДСТВА И НЕКОТОРЫХ

СВОЙСТВ ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТОВ НА ФОРМИРОВАНИЕ ЭКОЛОГИЧЕСКОЙ НИШИ ПАТОГЕННЫХ МИКРООРГАНИЗМОВ

3.1. Роль физико-химических и биологических воздействий в формиро- 46 вании некоторых типов толерантности бактерий, контаминирующих пищевые продукты

3.2. Регуляторные механизмы ответных реакций микроорганизмов на 48 неблагоприятные воздействия факторов окружающей среды.

3.3. Прикрепление микроорганизмов к поверхностям и стрессовая толе- 54 рантность

3.4. Влияние индуцированной стрессовой толерантности на проявление 55 вирулентных свойств пищевых патогенов

3.5. Некультивируемые формы бактерий в пищевых продуктах

Глава 4. РОЛЬ НОВЫХ ПАТОГЕНОВ В ИНФЕКЦИОННОЙ ПАТО- 62 ЛОГИИ ЧЕЛОВЕКА И ЭПИДЕМИОЛОГИЯ ПИЩЕВЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ

4.1. Структура заболеваемости и эпидемиологические аспекты проблемы

4.2. Анализ эпидемиологической ситуации, экологии и путей передачи 67 некоторых эмерджентных возбудителей

4.3. Листерии как болезнетворные микроорганизмы и их роль в возник- 78 новении эпидемических инфекций

4.4. Новый вид пищевых бактериальных патогенов Enterobacter sakazakii

Глава 5. СОВРЕМЕННЫЕ МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ ПИЩЕВЫХ

ПАТОГЕНОВ

5.1. Выявление диагностически значимых фенотипических признаков 91 эмерджентных патогенов: роль бактериологических и биохимических методов исследования

5.2. Иммунологические методы исследования некоторых эмерджентных 99 патогенов

5.3. Молекулярно-генетическая диагностика эмерджентных пищевых 107 патогенов

5.3.1. Методы ДНК гибридизации

5.3.2. Применение полимеразной цепной реакции для выявления, идеи- 111 тификации и определения количественных уровней эмерджентных патогенов

5.3.3. Использование ДНК-типирования для внутривидовой дифферен- 119 циации эпидемиологически значимых клональных линий патогенных микроорганизмов

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

Глава 6. ОРГАНИЗАЦИЯ ПРОВЕДЕНИЯ РАБОТ, МАТЕРИАЛЫ И 123 МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Глава 7. АНАЛИЗ РАСПРОСТРАНЕННОСТИ НЕКОТОРЫХ ПАТО- 128 ГЕННЫХ МИКРООРГАНИЗМОВ В ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТАХ И ОБЪЕКТАХ ОКРУЖАЮЩЕЙ СРЕДЫ

7.1 БГКП и энтерогеморрагические Е. coli

7.2 Listeria monocytogenes

7.3 Campylobacter spp.

7.4 Salmonella spp.

7.5 Количественная оценка уровней контаминации сырья и пищевых 147 продуктов эмерджентными патогенами.

Глава 8. ОЦЕНКА РОЛИ L. MONOCYTOGENES КАК ОДНОГО ИЗ

НАИБОЛЕЕ ЗНАЧИМЫХ НОВЫХ ПАТОГЕНОВ

8.1. Межвидовая дифференциация и изучение фенотипических свойств 150 выделенных штаммов листерий

8.2. Современный комплексный подход к идентификации листерий при 157 микробиологическом контроле на предприятиях пищевой индустрии

8.2.1. Применение метода иммуномагнитной сепарации

8.2.2. Изучение возможности применения метода ДНК-гибридизации 161 для выявления L.monocytogenes

8.2.3. Применение метода ПЦР для изучения L. monocytogenes

8.3. Экспериментальное изучение некоторых закономерностей выжива- 174 ния и размножения листерий в модельных системах

8.3.1. Влияние тепловой обработки наL.monocytogenes

8.3.2. Изучение выживаемости L.monocytogenes в молоке в процессе дли- 178 тельного хранения

8.3.3. Чувствительность листерий к неблагоприятным воздействиям 180 внешней среды

8.3.4. Исследование взаимодействия L.monocytogenes и других эмерд- 187 жентных патогенов с антагонистически активной микрофлорой пищевых продуктов

8.4. Применение общих принципов обеспечения микробиологической 199 безопасности для эффективного контроля L.monocytogenes в пищевых продуктах

Глава 9. ENTEROBACTER SAKAZAKII - НОВЫЙ ВИД ЭМЕРДЖЕНТ- 206 НЫХ ЭНТЕРОБАКТЕРИЙ В ОБЩЕЙ СИСТЕМЕ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОЙ ОЦЕНКИ ПРОДУКТОВ ДЕТСКОГО ПИТАНИЯ

9.1. Выделение и биохимическая идентификация штаммов Е. säkazakii

9.2. Нормирование и методическая схема обнаружения патогенных мик- 210 роорганизмов Е. sakazakii в продуктах для питания детей раннего возраста

9.3. Таксономия Е. sakazakii и совершенствование методов типирования 213 возбудителя

Глава 10. ЗНАЧЕНИЕ НЕКОТОРЫХ ПОТЕНЦИАЛЬНО ПАТОГЕН

НЫХ МИКРООРГАНИЗМОВ В ВОЗНИКНОВЕНИИ ЭМЕРДЖЕНТ-НЫХ ПИЩЕВЫХ ТОКСИКОЗОВ

10.1. S.aureus и стафилококковые энтеротоксипы

10.2. Обнаружение энтеротоксигенных стафилококков в пищевых про- 226 дуктах

10.3. Изучение условий, влияющих на жизнедеятельность стафилокок- 236 ков и биосинтез энтеротоксинов в некоторых видах пищевых продуктов

10.4. Разработка методов определения стафилококковых энтеротоксинов 241 в пищевых продуктах с применением иммуноферментного анализа.

10.5. Изучение взаимодействия S.aureus с другими эмерджентными мик- 251 роорганизмами; роль mixt-возбудителей в возникновении вспышек пищевых заболеваний

10.6. Изучение токсигенных свойств новых видов мицелиальных грибов 257 - возбудителей пищевых микотоксикозов

10.6.1. Изучение токсинообразования, культурально-морфологических и 258 ростовых свойств штаммов Pénicillium citrinum

10.6.2. Изучение влияния условий хранения на интенсивность токсино- 261 образования микромицетами Pénicillium citrinum.

10.6.3. Оценка специфичности и чувствительности иммуноферментного 266 метода определения микотоксина цитринина.

10.6.4. Изучение распространенности продуцентов цитринина в продо- 267 вольственном сырье, пищевых продуктах и биологически активных добавках к пище.

Глава 11. Разработка методологии внедрения новых диагностических систем и средств измерения в лабораторную практику микробиологического контроля пищевых продуктов

11.1. Стандартизация и адаптация молекулярно-генетических методов 272 исследования эмерджентных пищевых патогенов

11.1.1. Разработка молекулярно-генетических методов идентификации 277 эмерджентных патогенов.

11.1.2. Применение молекулярно-генетических методов для прямого об- 288 наружения эмерджентных патогенов в пищевых продуктах

11.1.3. Оптимизация бактериологических методов обнаружения эмерд- 300 жентных патогенов на основе создания стандартизованных дифференциально-диагностических сред и селективных питательных субстратов ЗАКЛЮЧЕНИЕ. 308 ВЫВОДЫ 325 СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Новые бактериальные патогены в пищевых продуктах: экспериментальное обоснование и разработка системы контроля с применением методов микробиологического и молекулярно-генетического анализа»

Производство продуктов питания, соответствующих современным гигиеническим требованиям качества и безопасности, предполагает всестороннюю комплексную оценку факторов, воздействующих на здоровье человека, наиболее значимым из которых на современном этапе является микробное загрязнение пищевых продуктов возбудителями так называемых вновь возникающих инфекций с пищевым путем передачи. Это требует разработки новых подходов и критериев в системе санитарно-эпидемиологического контроля продовольственного сырья и готовой продукции, в том числе на основе создания и внедрения высокочувствительных и эффективных методов микробиологического и молекулярно-генетического анализа.

Оценка безопасности пищевых продуктов в первую очередь связана с возможностью выживания в них микроорганизмов, обладающих измененными биологическими свойствами, полифункциональными механизмами адаптации и высоким патогенным потенциалом.

На современном этапе происходит формирование новых представлений о том, какие эволюционные изменения претерпевают пищевые бактериальные патогены в условиях антропогенной трансформации внешней среды, влияющие на этиологические и патогенетические свойства возбудителя, пути передачи инфекции и восприимчивость к ним человеческой популяции.

В последние 10-15 лет во всем мире наметилась тенденция к увеличению удельного веса заболеваний с пищевым путем передачи в общей структуре кишечных инфекций и бактериальных отравлений.

Нарастающая озабоченность мировой общественности проблемой микробиологической безопасности пищи обусловила появление концепции «эмерджентных пищевых инфекций», в соответствии с которой они рассматриваются не только в медико-генетических аспектах, но и с учетом экологических и технологических факторов, что позволяет расшифровать структуру заболеваемости и прогнозировать появление новых возбудителей.

Термин «эмерджентные пищевые инфекции» широко используется в научных публикациях и официальных документах международного сообщества и Всемирной организации здравоохранения, он происходит от английского «emergent» и означает «внезапно появляющиеся» или «вновь возникающие»; в отечественной терминологии используется понятие «новые или возвращающиеся» инфекции.

По определению ВОЗ эмерджентные инфекции - это болезни (и возбудители), возникающие или появляющиеся внезапно и этим обуславливающие чрезвычайные эпидемиологические ситуации, как правило, очень напряженные. Эти заболевания, особенно пищевые зоонозы, являются наиболее эпидемиологически значимыми, наносящими большой социально-экономический ущерб.

Для большинства возбудителей эмерджентных пищевых зоонозов характерна повсеместная распространенность, а также способность не только выживать, но и размножаться во внешней среде и пищевых продуктах.

Выживание бактерий, находящихся в той или иной экологической нише, непосредственно связано с генетически закрепленной способностью включать регулятор-ные системы изменчивости и адаптации на различных стадиях развития бактериальной популяции. Однако в свете современных концепций перестройка популяционных структур патогенов по вирулентности и факторам патогенности в условиях окружающей среды существенно отличается от характера персистенции возбудителя в клеточных системах макроорганизма при разных типах инфекций, что требует углубленного изучения биохимических и молекулярно-генетических аспектов этой проблемы.

Рассматривая феномен эмерджентных пищевых инфекций, следует отметить высокую динамичность процессов адаптации бактериальных патогенов в неблагоприятных условиях внешней среды, вследствие чего микроорганизмы даже с весьма ограниченным ареалом распространения способны в короткие сроки превращаться в возбудителей острых пищевых инфекций с тяжелым течением и высоким процентом летальных исходов (например листериоз, энтерогеморрагический эшерихиоз и др. инфекции).

Современные подходы к организации системы обеспечения безопасности пищевых продуктов требуют детального исследования особенностей новых патогенов, биохимических и генетических механизмов их вирулентности, а также регулирующей роли технологических факторов в условиях индустриального производства. Это обосновывает необходимость разработки новых критериев в системе санитарно - эпидемиологического контроля продовольственного сырья и готовой продукции, в том числе на основе создания и внедрения высокочувствительных и эффективных методов микробиологического и молекулярно-генетического анализа.

Цель работы: совершенствование системы обеспечения микробиологической безопасности пищевых продуктов путем разработки и внедрения современных методов микробиологического и молекулярно-генетического анализа и новых нормативов безопасности для основных групп пищевых продуктов на основе подробного изучения экологии и особенностей выживания новых видов патогенных микроорганизмов, оценки роли технологических факторов в формировании измененных свойств этих патогенов в условиях пищевых производств.

Задачи исследования:

1. Провести анализ распространенности наиболее значимых эмерджентных пищевых патогенов {Listeria monocytogenes, Salmonella, энтерогеморрагических E.coli (ЕНЕС), Campylobacter jejuni, Enterobacter sakazakii и др.) в пищевых продуктах и объектах окружающей среды;

2. Изучить основные закономерности эпидемиологии и экологии бактерий Listeria monocytogenes, роль физических, химических и биологических стрессовых факторов в формировании различных типов поведения патогенных листерий, конта-минирующих пищевые продукты в процессе их производства и хранения, и обосновать необходимость введения нового норматива безопасности для основных групп пищевых продуктов;

3. Разработать новые методические подходы, позволяющие проводить ускоренную индикацию L. monocytogenes в различных видах пищевых продуктов с использованием высокоспецифичных комбинированных схем бактериологического и молекулярно-генетического анализа;

4. На основе изучения культурально-биохимических свойств и генетических характеристик нового вида патогенных микроорганизмов Е. sakazakii сделать анализ диагностической значимости ряда фенотипических и генотипических тестов идентификации и разработать на их основе схему и методику выделения возбудителя; теоретически и экспериментально обосновать необходимость введения нового микробиологического норматива для продуктов питания детей раннего возраста;

5. Определить значение некоторых потенциально патогенных микроорганизмов в возникновении эмерджентных пищевых токсикозов; изучить условия, влияющие на жизнедеятельность токсигенных стафилококков и биосинтез энтероток-синов в пищевых продуктах; разработать методы выделения и количественной оценки стафилококковых энтеротоксинов в пищевых продуктах с применением иммуноферментного анализа; исследовать токсигенные свойства новых видов мицелиальных грибов - возбудителей пищевых микотоксикозов.

6. Провести сравнительные испытания методов ПЦР, ДНК- гибридизации и иммуномагнитной сепарации для выделения патогенных микроорганизмов родов Salmonella, Listeria, Campylobacter и Escherichia с традиционными стандартизованными методами анализа; на основе полученных данных разработать критерии стандартизации и гармонизации бактериологических и молекулярно-генетических методов с целью создания единой системы внедрения современных диагностических систем и средств измерений в лабораторную практику микробиологического контроля пищевых продуктов.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Изменение свойств микроорганизмов в условиях развитого индустриального производства и антропогенной трансформации внешней среды сопровождается нарастанием патогенного потенциала некоторых видов бактерий, появлением новых или эволюционно измененных возбудителей заболеваний с пищевым путем передачи (эмерджентных пищевых патогенов).

2. В свете современных концепций микроорганизмы Listeria monocytogenes, Salmonella, энтерогеморрагические E.coli (ЕНЕС), Campylobacter jejuni, Enterobacter sakazakii, S.aureus характеризуются экологическим своеобразием, детерминированностью источников выделения и по частоте обнаружения являются доминирующими среди обширной группы возбудителей пищевых зоонозов.

3. Феномен появления новых и вновь возникающих патогенов сопровождается усилением роли оппортунистических инфекций и их возбудителей: обнаружение среди энтеробактерий нового вида Enterobacter sakazakii характеризует тенденцию изменения экологической ниши и расширения спектра эмерджентных патогенных бактерий среди хорошо изученных популяций семейства Enterobacteriaceae\ уточнение таксономических характеристик потенциальных патогенов с неясным систематическим положением повышает надежность системы микробиологического контроля.

4. Изучение основных закономерностей эпидемиологии, экологии и биологических свойств Listeria monocytogenes, а также экспериментальное исследование поведения этих микроорганизмов в модельных системах, имитирующих условия производства пищевых продуктов, позволит расширить базу данных для разработки новых критериев безопасности и анализа степени микробиологического риска возникновения пищевого листериоза.

5. Появление среди известных токсических метаболитов бактерий и грибов «суперантигенов» и других модуляторов системных иммунных реакций повышает степень риска, связанную с накоплением в пищевых продуктах токсинов потенциально патогенных и токсигенных микроорганизмов (S.aureus, B.cereus, микромицеты и др.), что диктует необходимость изучения условий токсинообразования и создания методов их выявления и идентификации.

6. Изучение биологии эмерджентных патогенов и системных механизмов регуляции экспрессии генов факторов патогенности этих бактерий позволяет разработать новые методические подходы с использованием высокоспецифичных комбинированных схем бактериологического и молекулярно-генетического анализа путем подбора наиболее информативных биохимических тестов и генотипирования.

Научная новизна.

Впервые детально изучены экологические особенности, распространение, видовой состав и свойства эмерджентных патогенов Listeria spp., Escherichia coli, Salmonella spp., Enterobacter sakazakii, выделенных из сырья молочного и мясного происхождения, пищевой продукции на различных этапах изготовления и объектов внешней среды (свыше 1500 образцов). Полученные новые данные о характере и количественных уровнях контаминации различных звеньев пищевой цепи позволили выявить наиболее вероятные источники попадания опасных возбудителей в готовые продукты, обуславливающие высокую степень риска даже при соблюдении технологических режимов производства и хранения продукции.

Обоснованы теоретические положения о возможном присутствии в пищевых продуктах новых видов патогенных бактерий семейства Enterobacteriaceae, подтвержденные наличием филогенетических связей между таксономически родственными группами микроорганизмов родов Enterobacter и Pantoea с обнаруженными возбудителями неонатальных инфекций. Впервые в РФ из детских инстантных смесей выделены колиформные микроорганизмы с измененными биологическими свойствами, детальное исследование которых позволило идентифицировать их как малоизученный вид Enterobacter sakazakii. Установлена высокая степень идентичности фенотипиче-ских профилей выделенного нового патогена с бактериями вида E.cloacae и фитопа-тогенными вариантами P.agglomerans, свидетельствующая о возможных единых генетических регуляторных механизмах экспрессии вирулентных свойств этих микроорганизмов.

С использованием новейшей классификации теоретически обоснована таксономическая принадлежность ряда штаммов E.sakazakii и Pantoea spp., выделенных из детских продуктов, к роду Cronobacter. Введение новых таксономических единиц расширяет перечень потенциальных патогенов, которые не входят по традиционной классификации в группу колиформных бактерий и не учитываются при оценке безопасности детских инстантных продуктов. С учетом значимости Е. sakazakii как оппортунистического патогена для новорожденных и вариабельности биологических свойств возбудителя разработана новая схема идентификации.

Анализ основных закономерностей эпидемиологии, экологии и биологических свойств эмерджентных бактерий L.monocytogenes, а также экспериментальное изучение поведения этих микроорганизмов в модельных системах, имитирующих условия производства пищевых продуктов и основные физико-химические параметры технологических процессов, позволили расширить отечественную базу данных о функциональных признаках возбудителя для разработки новых критериев безопасности и анализа степени микробиологического риска возникновения пищевого листериоза. Впервые подробно изучены особенности выживания листерий в процессе длительного хранения в молоке при низких температурах. Установлены исключительно высокая жизнеспособность штаммов L.monocytogenes в этих условиях и длительный период выживания, составивший более 7 месяцев. Выявлена изменчивость основных морфологических и культурально-физиологических свойств штаммов в процессе их длительного хранения в молоке, в частности, постепенное ослабление патогенности, вплоть до полной утраты этого признака после 6-7 месячного периода наблюдения.

В результате изучения биологии L. monocytogenes и системных механизмов регуляции экспрессии генов факторов патогенности этих бактерий разработаны новые методические подходы, позволяющие проводить ускоренную индикацию возбудителя в различных видах пищевых продуктов с использованием высокоспецифичных комбинированных схем бактериологического и молекулярно-генетического анализа на основе подбора наиболее информативных биохимических тестов и их генотипирования с применением ПЦР. Разработанные методические подходы могут быть распространены на другие виды эмерджентных возбудителей заболеваний, имеющих близких непатогенных представителей в пределах рода, идентификация которых должна основываться на определении патогенетических признаков.

На основе проведенного анализа и экспериментального сравнения эффективности существующих модификаций молекулярно-биологических методов, обладающих технологической новизной и универсальностью в отношении различных групп эмерджентных бактериальных патогенов, осуществлены подбор и адаптация твердофазного метода ДНК-гибридизации. Метод включает использование специфических ДНК-зондов для выявления кодируемых признаков патогенности L.monocytogenes или видоспецифических последовательностей рибосомальной ДНК бактерий рода Salmonella, с последующей хемилюминесцентной детекцией продуктов гибридизации нуклеиновых кислот.

Разработана новая методология внедрения современных диагностических систем и средств измерения на основе создания специальных требований и общих критериев стандартизации методик для гармонизации их с традиционными и общепринятыми схемами контроля в пищевой микробиологии; интеграция новых методов молекулярной биологии в действующую систему микробиологического контроля позволит повысить эффективность проводимых исследований, обеспечит сопоставимость и достоверность результатов испытаний. Практическая значимость.

В результате проведенных аналитических и экспериментальных исследований: обоснованы и введены в действие новые дифференцированные микробиологические нормативы безопасности, регламентирующие отсутствие патогенных микроорганизмов Listeria monocytogenes в основных группах пищевых продуктов, предназначенных для различных категорий населения; предложено введение нового микробиологического норматива («отсутствие Е. sakazakii в 300 г продукта») для снижения риска возникновения новой пищевой инфекции и обеспечения безопасности продуктов, предназначенных для новорожденных, недоношенных и больных детей раннего возраста; экспериментально обоснован системный подход к исследованию пищевых продуктов на обсемененность S.aureus и наличие стафилококковых энтеротоксинов, который включает разработанный способ экстракции токсинов из различных пищевых продуктов и использование высокоразрешающих методов иммуноферментного анализа.

Разработаны, адаптированы и стандартизованы новые методы исследования условно-патогенных и патогенных микроорганизмов - контаминантов пищевых продуктов, основанные на применении бактериологического, биохимического, иммуноферментного анализа, ДНК-гибридизации и ПЦР в реальном времени. Апробированы и внедрены в практику микробиологического контроля пищевых продуктов: методы выявления бактерий Listeria monocytogenes в пищевых продуктах (МУК 4.2.1122-02); метод выявления и определения бактерий рода Salmonella и Listeria monocytogenes на основе гибридизационного ДНК-рРНК анализа (МУК 4.2.1955-05); метод определения бактерий Enterobacter sakazakii в продуктах для питания детей раннего возраста (МУК 4.2.2428-08); методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов (МУК 4.2.577-96); метод определения бактерий рода Campylobacter в пищевых продуктах (МУК 4.2.2321-08); метод определения стафилококковых энтеротоксинов в пищевых продуктах (МУК 4.2.2429-08); метод real-time ПЦР для идентификации патогенных бактерий, выделенных при контроле пищевых продуктов (MP № 02.036-08); количественный микробиологический анализ пищевых продуктов НВЧ-методом при использовании автоматического анализатора ТЕМПО (MP № 02.031-08).

Результаты работы использованы при разработке 27 нормативных и методических документов, в том числе СанПиН 2.3.2.1078-01 «Гигиенические требования безопасности и пищевой ценности пищевых продуктов», ГОСТ Р 51921-2002 «Продукты пищевые. Методы определения и выделения Listeria monocytogenes», СанПиН 2.3.2.1324-03 «Гигиенические требования к срокам годности и условиям хранения пищевых продуктов», МУК 4.2.1847-2004 «Санитарно-эпидемиологическая оценка обоснования сроков годности и условий хранения пищевых продуктов».

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Заключение диссертации по теме «Гигиена», Ефимочкина, Наталья Рамазановна

выводы

1. Рассмотрен феномен новых и вновь возникающих заболеваний с пищевым путем передачи («эмерджентных пищевых инфекций»), связанных с появлением новых или эволюционно измененных патогенных микроорганизмов; анализ мирового рейтинга эмерджентных пищевых патогенов позволил выделить среди них в качестве объектов научного исследования наиболее эпидемиологически значимые бактерии: Listeria monocytogenes, Salmonella, энтерогеморрагические E.coli (ЕНЕС), Campylobacter jejuni, Enterobacter sakazakii.

2. Установлено, что общим и ведущим признаком для L.monocytogenes, Campylobacter spp., ЕНЕС, Salmonella spp. является переход их во внешнюю среду, сырье и готовую продукцию вследствие фекальной контаминации с последующим пищевым путем передачи инфекта. Уровень загрязненности сырья молочного и мясного происхождения для отдельных видов патогенов достигает значительных величин (Campylobacter spp. - 100% в мясе кур, Salmonella spp. — до 23% в сырьевых птицепро-дуктах, L.monocytogenes - до 12% в сыром молоке) и находится в прямой зависимости от санитарно-гигиенических условий получения, хранения и первичной переработки животноводческой продукции.

3. Впервые в РФ при исследовании детских молочных продуктов выделены колиформные микроорганизмы с измененными биологическими свойствами, детальное исследование которых позволило идентифицировать их как малоизученный вид Enterobacter sakazakii', обнаружение среди хорошо изученных популяций семейства Enterobacteriaceae нового вида Е. sakazakii свидетельствует о расширении сферы влияния эмерджентных патогенов и усилении роли оппортунистических инфекций.

4. Установлено наличие филогенетических связей между таксономически родственными группами микроорганизмов родов Enterobacter, Pantoea и вновь обнаруженными возбудителями неонатальных инфекций Е. sakazakii. Сформулирован новый подход к контролю продуктов для питания детей раннего возраста, включающий подсчет бактерий семейства Enterobacteriaceae и расширенную биохимическую идентификацию всех культурально - морфологических типов изолятов для исключения возможного присутствия Е. sakazakii и других новых патогенов кишечной группы.

5. Теоретически обоснована таксономическая принадлежность к роду Cronobacter выделенных штаммов E.sakazakii и Pantoea spp. Введение новых таксономических единиц расширяет перечень потенциальных патогенов, которые не входят по традиционной классификации в группу колиформных бактерий и не учитываются при оценке безопасности детских инстантных продуктов, что повышает надежность системы контроля на наличие патогенных бактерий семейства Enterobacteriaceae.

6. С учетом значимости одного из наиболее опасных эмерджентных патогенов - L.monocytogenes проведено многоплановое изучение основных закономерностей эпидемиологии, экологии и биологических свойств возбудителя, включая экспериментальное исследование поведения этих микроорганизмов в модельных системах, имитирующих условия производства пищевых продуктов и основные физико-химические параметры технологических процессов. Результаты исследования свойств 125 штаммов листерий, персистирующих в продуктах, сырье и объектах внешней среды, позволили расширить базу данных о функциональных признаках возбудителя для оценки степени микробиологического риска пищевого листериоза.

7. Изучен характер воздействия физико-химических и биологических факторов на жизнедеятельность листерий, показана их высокая устойчивость, вариабельность основных функциональных свойств и механизмов патогенности. Разработана экспериментальная модель совместного культивирования, позволившая доказать способность молочнокислых микроорганизмов проявлять антагонистические свойства в сложном биоценозе не только с листериями, но и с другими патогенными микроорганизмами - возбудителями эмерджентных пищевых инфекций.

8. Впервые в системе санитарно-эпидемиологического нормирования в России обоснован и введен в действие новый гигиенический норматив безопасности: «Listeria monocytogenes в 25 г продукта не допускается». Этот показатель конкретизирован в виде дифференцированных нормативов по основным группам пищевой продукции с учетом специальных требований к продуктам, предназначенным для наиболее уязвимых групп населения по степени риска заболеваемости листериозом.

9. В свете новых данных о появлении среди известных токсических метаболитов «суперантигенов» и других модуляторов системных иммунных реакций выполнена работа по изучению условий накопления в пищевых продуктах бактериальных токсинов; проведен анализ культуральных и биохимических свойств 137 штаммов стафилококков, установлена высокая степень корреляции между способностью S.aureus продуцировать энтеротоксины и наличием ферментов коагулазы, термостабильной ДНКазы и другими факторами патогенности; изучены условия выживания энтеротоксигенных стафилокков при моделировании процессов производства и хранения пищевых продуктов; теоретически и экспериментально обоснован системный подход к исследованию пищевых продуктов на обсемененность S.aureus и наличие стафилококковых энтеротоксинов: система включает разработанный способ экстракции токсинов из различных пищевых продуктов и использование высокоразрешающих методов иммуноферментного анализа.

10. Проведены экспериментальные исследования токсигенных свойств мик-ромицетов — продуцентов малоизученных видов микотоксинов, выявлена способность грибов Pénicillium citrinum накапливать микотоксин цитринин в количествах, представляющих опасность для здоровья потребителей, при нарушениях режимов хранения продовольственного зернового сырья.

11. На основе изучения биологии эмерджентных патогенов и системных механизмов регуляции экспрессии генов факторов патогенности этих бактерий разработаны новые методические подходы, позволяющие проводить ускоренную индикацию возбудителей в различных видах пищевых продуктов с использованием высокоспецифичных комбинированных схем бактериологического и молекулярно-генетического анализа путем подбора наиболее информативных биохимических тестов и генотипи-рования с применением методов ПЦР и ДНК-гибридизации. Для видовой идентификации L.monocytogenes предложен комплексный метод, включающий определение диагностически значимых фенотипических тестов (подвижность, способность к гемолизу, наличие специфичных лецитиназ) в сочетании с ПЦР-анализом участков генома, кодирующих выработку фосфолипаз, факторов инвазии и цитотоксичности. Разработан и впервые в России внедрен метод выявления эмерджентных патогенов Salmonella и L.monocytogenes на основе твердофазного гетерогенного гибридизационного ДНК-РНК анализа с хемилюминесцентным детектированием.

12. Предложены принципиальная схема стандартизации и алгоритм оценки пригодности новых методов на основе комплекса критериев, обеспечивающих успешную адаптацию и интеграцию средств измерений и диагностических тест-наборов в системе микробиологического контроля пищевых продуктов. На основе предложенной методологии проведены стандартизация и адаптация метода идентификации бактерий Salmonella spp., Listeria spp., L.monocytogenes, E.coli 0157:H7, Campylobacter spp., выделенных из пищевых продуктов, с использованием ПЦР в режиме реального времени в системе ВАХ® Q7. Для прямого обнаружения эмерджентных патогенов в пищевых продуктах апробирован и рекомендуется к практическому использованию метод ПЦР в реальном времени с гибридизационно-флуоресцентной детекцией, обеспечивающий с высокой степенью чувствительности выявление этих патогенов на заданном уровне нормируемых показателей.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Формирование новых взглядов на изменение свойств патогенных микроорганизмов в условиях развитого индустриального производства и многофакторной структуры потребления пищевых продуктов происходит на основе анализа популяци-онных параметров патогенного потенциала микроорганизмов, механизмов и путей передачи возбудителей с учетом иммунного статуса и конституционально-генетической предрасположенности населения к различным, в том числе алиментарно-зависимым заболеваниям.

Исследователи многих стран склонны прогнозировать массовое распространение той или иной инфекционной болезни в отдельных регионах и даже во всем мире в зависимости от свойств возбудителя, способности его выживать в той или иной экологической нише, адаптации к неблагоприятным условиям внешней среды и трансформации бактериальных геномов, сопровождающихся появлением острых пищевых заболеваний человека с тяжелым течением и высокой летальностью (например, листе-риоз, сальмонеллез, энтерогеморрагический эшерихиоз и др.).

Этим обусловлено появление в конце XX века концепции «эмерджентных пищевых инфекций», в соответствии с которой возможно внезапное возникновение новых зоонозных заболеваний и быстрое распространение эпидемиологически значимых возбудителей с вновь приобретенными признаками агрессии и высоким уровнем вирулентности, способных мигрировать во внешней среде, выживать и размножаться в пищевых продуктах.

Обобщение результатов многочисленных научных исследований по проблеме эмерджентных пищевых инфекций и сравнительный анализ эпидемиологии этих заболеваний позволили выделить и отнести к числу наиболее значимых пищевых бактериальных патогенов микроорганизмы Listeria monocytogenes, Salmonella, энтерогемор-рагические E.coli (ЕНЕС), Campylobacter jejuni, Yersinia enterocolitica, Enterobacter sa-kazakii, рассмотренные в данной работе в свете современных концепций.

Изучение источников и частоты выделения эмерджентных пищевых патогенов, а также условий выживания и развития их в пищевых продуктах позволило выявить экологическое своеобразие распространения этих возбудителей, специфические закономерности их эпидемиологии, выходящие за рамки привычных трактовок резервуара, источника, механизма передачи инфекции и характера эпидемического процесса.

Проведенный анализ литературных данных и материалы собственных исследований дали возможность установить, что общим признаком зоонозных патогенов Listeria monocytogenes, Salmonella, энтерогеморрагические E.coli (ЕНЕС), Campylobacter jejuni является попадание их в сырье и внешнюю среду путем фекальной контаминации, поскольку они являются комменсалами желудочно-кишечного тракта сельскохозяйственных животных и птиц. Так, энтеротоксигенные E.coli (в том числе ЕНЕС), обладая наибольшей распространенностью в содержимом кишечника жвачных, с достаточно высокой частотой обнаруживаются в мясном и молочном сырье (3,8 - 16%), что сопровождается высокой степенью риска их обнаружения в готовых пищевых продуктах. Распространенность и частота выделения наиболее важных серотипов сальмонелл также характеризуются эпидемиологически значимыми показателями, достигая в молоке - сырье 6,1%, в говядине и птицепродуктах — 19 - 23%. Основным источником попадания в пищевые продукты бактерий рода Campylobacter является контаминированное куриное мясо, загрязненность которого при определенных условиях может достигать 100%. Для широко распространенных во внешней среде бактерий L.monocytogenes типичным считают силосный путь контаминации молока - сырья, при этом процент обнаружения листерий может достигать 5,7%. Наиболее вероятным источником попадания этого возбудителя в мясное сырье является фекальное загрязнение (степень обсеменения L.monocytogenes может достигать 3.2%). Обращает внимание значительный уровень контаминации всех объектов внешней среды молочных и мясоперерабатывающих предприятий (оборудование, инвентарь, вспомогательные материалы и др.), соприкасающихся с сырьем, содержащим L.monocytogenes'. частота обнаружения возбудителя достигает 10%.

Следует отметить, что неудовлетворительные условия получения, первичной обработки и хранения сырья становятся основной причиной интенсивного накопления широкого спектра условно патогенной и патогенной микрофлоры, на фоне которого возможно присутствие наиболее опасных возбудителей пищевых инфекций, в том числе энтерогеморрагических E.coli, сальмонелл, C.jejuni, L.monocytogenes и др. Дальнейшая переработка такого сырья сопровождается перекрестной контаминацией и попаданием возбудителей в готовые продукты, обуславливая высокую степень риска даже при соблюдении технологических режимов производства и хранения пищевой продукции. В свою очередь имеющие место нарушения традиционной технологии и внедрение новых, порой недостаточно изученных способов переработки, упаковки и хранения продуктов и полуфабрикатов являются не менее важными факторами риска обнаружения новых патогенов.

Представлены современные взгляды на основные факторы патогенности и формирование вирулентных фенотипов у эмерджентных возбудителей, приобретение маловирулентными микроорганизмами новых генов патогенности, а таюке на процессы перехода неспорообразующих бактерий в покоящееся (некультивируемое состояние) как проявление множественных полидетерминантных механизмов адаптации к неблагоприятным условиям внешней среды.

Рейтинг приоритетных факторов, влияющих на появление новых патогенов, позволил выявить определенный баланс между экологическими и технологическими воздействиями на микробные популяции и пищевые продукты, что сопровождается расширением сферы проявления эмерджентных инфекций с новым «сценарием» пищевых заболеваний, усилением роли оппортунистических инфекций, повышением резистентности возбудителей к антимикробным препаратам.

Анализ уровней фенотипического полиморфизма и направленности адаптационных сдвигов в популяциях Escherichia coli, Salmonella, Campylobacter jejuni, Yersinia enterocolitica, выделенных из различных экониш, выявил наиболее уязвимые звенья пищевой цепи, в которых может происходить контаминация сырья и готовой продукции, а таюке географические, климатические и социальные особенности возникновения вспышек и спорадических заболеваний с пищевым путем передачи. Эти закономерности обосновывают необходимость объективного сравнительного изучения эпидемиологии инфекционных болезней, вызываемых упомянутыми возбудителями, и теоретического обоснования вероятного прогноза в отношении них.

Одним из наиболее наглядных примеров появления таких эмерджентных патогенов среди хорошо изученных популяций непатогенных и условно патогенных энте-робактерий является обнаружение среди бактерий Enterobacter cloacae нового вида Enterobacter sakazaki - возбудителя эмерджентных инфекций у новорожденных и детей раннего возраста.

Исходя из общего положения о возможном присутствии в пищевых продуктах новых видов патогенных бактерий семейства Enterobacteriaceae установлено наличие филогенетических связей между таксономически родственными группами микроорганизмов родов Enterobacter, Pantoea и вновь обнаруженными возбудителями неона-тальных инфекций. Впервые в РФ из детских инстантных смесей выделены коли-формные микроорганизмы с измененными биологическими свойствами, детальное исследование которых позволило идентифицировать их как малоизученный вид Enterobacter sakazakii. Изучены культурально-биохимические свойства, дифференцирующие E.sakazakii от близкородственных представителей энтеробактерий E.cloacae и P.agglomerans, на основе анализа диагностической значимости ряда фенотипических тестов предложена схема идентификации возбудителя.

Оценивая значение Е. sakazakii как оппортунистического патогена для новорожденных, установлена вариабельность биологических свойств возбудителя и необходимость уточнения классификации на основе подробного анализа филогенетических связей выделяемых штаммов.

Общая направленность экспериментальных исследований по проблеме оценки риска возникновения Е. sakazakii —ассоциированных заболеваний у новорожденных определялась и интерпретировалась в свете новейших данных о таксономическом положении возбудителя. С использованием последней (альтернативной) классификации Е. sakazakii как пяти отдельных видов в составе нового рода «Cronobacter» были изучены и заново типированы штаммы Е. sakazakii и Pantoea spp., выделенные при посеве 85 образцов продуктов, предназначенных для питания детей первого года жизни. С учетом полученных развернутых биохимических профилей все выделенные штаммы, идентифицированные как E.sakazakii, соответствовали характеристикам вида Cronobacter sakazakii (subsp. sakazakii и subsp. malonaticus). Наиболее часто выделяемые микроорганизмы рода Pantoea, которые не входят по традиционной классификации в группу колиформных бактерий и не учитываются при оценке безопасности детских инстантных продуктов, по результатам проведенных исследований были отнесены к роду Cronobacter: два из четырех изученных штаммов были реклассифицированы как Cronobacter turicensis и Cronobacter sakazakii subsp. malonaticus.

Установлено, что виды Cronobacter sakazakii subsp. sakazakii, Cronobacter sakazakii subsp. malonaticus и Cronobacter turicensis ассоциируются с неонатальными инфекциями, в то время как штаммы, идентифицированные как Cronobacter muytjensii и Cronobacter dublinensis, были выделены из асептически полученного клинического материала (костной ткани и крови). Введение новых таксономических единиц упрощает включение вышеназванных потенциальных патогенов в систему контроля на наличие E.sakazakii, поскольку схемы идентификации, предложенные для этого вида микроорганизмов, могут быть распространены на весь род Cronobacter.

Результаты экспериментальных исследований доказали возможность неполного выявления патогенных представителей вида E.sakazakii (Cronobacter) при использовании общепринятых систем и тестов биохимической идентификации энтеробактерий. Поэтому в целях дальнейшего совершенствования дифференциации бактерий рода Cronobacter от других представителей семейства Enterobacteriaceae, включая новые недостаточно изученные группы бактерий с неясным таксономическим положением {Enterobacter tnricensis, Enterobacter helveticus, Buttianxella agrestis, Klnyvera spp., Leclercia adecarboxylata, Hafnia alvei и др.), предложена новая схема идентификации Cronobacter spp, включающая основные биохимические тесты — маркеры (образование желтого пигмента; а-глюкозидазная активность; способность к утилизации цитратов; реакция Фогес-Проскауэра; наличие аргинин дегидрогеназы; ферментация раффинозы и сахарозы).

Результаты проведенных исследований позволили сформулировать новый подход к контролю сухих инстантных смесей для питания детей раннего возраста (в том числе для недоношенных и новорожденных детей), включающий количественный подсчет бактерий семейства Enterobacteriaceae и расширенную биохимическую идентификацию всех культурально - морфологических типов изолятов для исключения возможного присутствия Е. sakazakii и других новых патогенов кишечной группы.

Обнаружение Е. sakazakii в 300 г инстантных молочных продуктов, предназначенных для детей 1 года жизни должно рассматриваться как присутствие патогенных бактерий в исследуемых образцах, свидетельствующее о высокой степени риска для детей данной возрастной категории, и служить основанием для запрета использования такой продукции с принятием соответствующих мер, направленных на обеспечение безопасности продуктов детского питания.

Новый микробиологический показатель безопасности (отсутствие Е. sakazakii в 300 г продукта) послужил отправной точкой при пересмотре действующих нормативов с целью ужесточения требований в отношении продуктов для питания детей раннего возраста. Этот показатель включен в проект Санитарных правил «Дополнения и изменения к СанПиН 2.3.2.1078-01 «Гигиенические требования безопасности и пищевой ценности пищевых продуктов», дополняющий требования безопасности продуктов детского питания микробиологическим нормативом «Патогенные микроорганизмы Enterobacter sakazakii».

Для практической реализации нового подхода к контролю детских продуктов разработаны и введены в действие Методические указания МУК 4.2.2428-08 «Метод определения бактерий Enterobacter sakazakii в продуктах для питания детей раннего возраста».

Учитывая большую значимость проблемы, представляется необходимым проведение дальнейших исследований для выяснения природных источников распространения E.sakazakii, факторов вирулентности, патогенеза и механизмов возникновения инфекций, обусловленных эмерджентными патогенными микроорганизмами. Это позволило бы сформировать расширенную базу данных о циркуляции отдельных штаммов и структуре популяций возбудителя, способствовало бы созданию новых алгоритмов и диагностических систем быстрой идентификации патогенов, позволяющих снизить риск получения некорректных ложноположительных или ложноотрицательных результатов исследования.

Рассмотрение основных закономерностей эпидемиологии, экологии и биологических свойств L.monocytogenes, а также экспериментальное изучение поведения этих микроорганизмов в модельных системах, имитирующих условия производства пищевых продуктов и основные физико-химические параметры технологических процессов, позволили расширить базу данных о функциональных признаках возбудителя для разработки новых критериев безопасности и анализа степени микробиологического риска возникновения пищевого листериоза.

С целью накопления данных о циркуляции различных видов листерий на основных стадиях пищевой цепи проведена многоплановая работа, включающая изучение свойств листерий, скрининг новых штаммов L.monocytogenes и создание коллекции отечественных культур, персистирующих в пищевых продуктах, сырье и объектах внешней среды продовольственных предприятий. Всего в течение 2000-2009 гг. было проанализировано свыше 200 культур, выделенных из мясного и молочного сырья, полуфабрикатов, готовых мясопродуктов, сыра, творога, и различных объектов внешней среды (смывы с оборудования, инвентаря, посуды и др.). Изучены морфологические, тинкториальные и культурально-биохимические свойства штаммов, определена их патогенность на биологических моделях, составлена подробная характеристика коллекционных культур листерий.

По результатам родовой идентификации к листериям были отнесены 125 штаммов, которые имели типичные морфологические и культурально-биохимические свойства. Все исследованные штаммы по комплексу фенотипических характеристик были отнесены к 4 видам: L.monocytogenes — 48 штаммов, L.innocua — 69 штаммов, L.welshimeri — 6 штаммов , L.ivanovii — 2 штамма.

На основе анализа зарубежного опыта и обобщения накопленных экспериментальных материалов в 2002 г. были разработаны и введены в действие Методические указания МУК 4.2.1122-02 «Организация контроля и методы выявления и определения бактерий Listeria monocytogenes в пищевых продуктах» и ГОСТ Р 51921-2002 «Продукты пищевые. Методы выявления и определения бактерий Listeria monocytogenes». Этими документами регламентируется применение ряда бактериологических и биохимических тестов, позволяющих проводить выделение и идентификацию листерий по комплексу основных родовых и видовых фенотипических признаков.

Исследованы свойства и особенности выживания листерий в процессе длительного хранения в молоке при низких температурах. Установлены исключительно высокая жизнеспособность штаммов L.monocytogenes в этих условиях и длительный период выживания, составивший более 7 месяцев. Выявлена изменчивость основных морфологических и культурально-физиологических свойств штаммов в процессе их длительного хранения в молоке, в частности, постепенное ослабление патогепности, вплоть до полной утраты этого признака после 6-7 месячного периода наблюдения. Наблюдаемые изменения характерны для стареющих культур листерий, они являются одним из признаков изменчивости микроорганизмов и должны учитываться при установлении видовой принадлежности штаммов L.monocytogenes, выделяемых при исследованиях сырья и пищевых продуктов длительного хранения.

При испытании чувствительности листерий к неблагоприятным воздействиям внешней среды изучено влияние ряда параметров, в том числе режимов тепловой обработки, условий выживания при низких температурах и в значительном температурном диапазоне, при различных значениях рН и др.

Выявлена довольно высокая термоустойчивость испытанных штаммов листерий: общепринятые температурные режимы пастеризации молока обеспечивали надежный бактерицидный эффект лишь при умеренном исходном обсеменении сырья L.monocytogenes — 103 КОЕ/см3. При более массивной контаминации молока наблюдалось лишь ингибирующее действие на листерии и снижение их количествоа в среднем на 2 - 3 порядка. Применение режимов двойной тепловой обработки молока значительно повышало эффективность воздействия даже при значительных дозах контами-нантов.

Показано, что надежная мера предотвращения быстрого размножения бактерий в молоке и молочных продуктах путем хранения их при низких температурах оказывается несостоятельной по отношению к листериям вследствие их психротрофных свойств и способности развиваться уже при температуре выше 1°С, при которой большая часть других бактерий оказывается подавленной.

При изучении жизнеспособности листерий в условиях повышенной кислотности среды установлена их возможность размножаться при рН 5,2 и выживать при рН 4,2 в присутствии молочной кислоты. При установлении заданной реакции среды уксусной кислотой отмечено значительное ингибирующее влияние даже при рН 5,0. Наиболее выраженное бактерицидное действие на L.monocytogenes отмечено при внесении их в культуральную среду совместно с L.acidophilus, а также под влиянием растворов низина в концентрации 10 МЕ/см3.

Высокая устойчивость листерий к снижению величины рН, посолке и низким значениям активности воды, а также их способность одинаково размножаться в аэробных и микроаэрофильных условиях при низких температурах затрудняют возможность предупреждения развития этого патогена в различных видах продуктов длительного хранения.

Полученные данные о характере воздействия разнообразных физико-химических и биологических факторов в отношении L.monocytogenes обусловили проведение специальных исследований по изучению способности некоторых молочнокислых микроорганизмов проявлять симбиотические или антагонистические свойства в сложном биоценозе не только с листериями, но и с другими патогенными микроорганизмами - возбудителями эмерджентных пищевых инфекций.

С целью поиска штаммов - антагонистов на основе проведенного скрининга и комплексных исследований изучена микрофлора 200 образцов ферментированных молочных и овощных продуктов непромышленного приготовления из 7 регионов Российской Федерации. Во всех образцах установлено присутствие молочнокислых микроорганизмов различных родов и видов. Идентификация 66 изолятов (штаммов) по комплексу культурально-биохимических (фенотипических) и генотипических признаков показала их таксономическую принадлежность к 3 родам молочнокислых бактерий, а именно: Lactococcus, Leuconostoc и Lactobacillus. Наиболее часто в ферментированных молочных продуктах обнаруживались микроорганизмы рода Lactococcus (50%), в овощных - Lactobacillus (70,6%).

Отработана модель совместного культивирования молочнокислых микроорганизмов и патогенных бактерий - возбудителей пищевых токсикоинфекций. Все выделенные из пищевых продуктов штаммы различались по степени их антагонистической активности против наиболее распространенных и малоизученных возбудителей новых и вновь возникших (эмерджентных) пищевых токсикоинфекций. Отобрано 5 штаммов с наиболее выраженным антагонистическим потенциалом в отношении

L.monocytogenes, которые могут быть рекомендованы для промышленного использования в составе бактериальных заквасок в производстве ферментированных и новых видов пищевых продуктов, а также микробных ассоциаций с направленным антилис-териозным действием.

Результаты изучения свойств и распространенности L.monocytogenes, эпидемиологии листериозных заболеваний возбудителя постоянно систематизируются, обобщаются и используются гигиенистами в различных странах мира для разработки национальных программ и организационных мероприятий, направленных на производство и потребление безопасных пищевых продуктов. Принято считать, что анализ риска для одного из наиболее опасных эмерджентных возбудителей пищевых инфекций L.monocytogenes практически завершен, однако решение практических задач по внедрению программ НАССР в системы контроля предприятий отечественной пищевой индустрии остается чрезвычайно актуальным. Использование универсальной структурной модели AMP (анализ микробиологического риска) обеспечивает более целостный подход к безопасности пищи путем интеграции рисков по всей пищевой цепи, направлено на уменьшение количества связанных с ней инфекций, и способствует гармонизации национальных и международных стандартов, норм и санитарных правил.

Актуальность проблемы в условиях современной пищевой индустрии, переработки и хранения продукции, благоприятствующих выживанию листерий в пище, чрезвычайно обострилась. Она в первую очередь связана со способностью микроорганизма при пищевом пути передачи вызывать тяжелую, часто смертельную инфекцию у людей всех возрастов, его возрастающей ролью в перинатальной и неонатальной смертности. А во-вторых, обусловлена биологическими свойствами Listeria monocytogenes - психротрофных, факультативно-анаэробных и галотолерантных микроорганизмов, способности размножаться при холодильном хранении продуктов и в современных видах упаковки, ограничивающей доступ кислорода.

Необходимость создания в нашей стране свода правил, предупреждающих возможность пищевого листериоза, анализ изученности этой проблемы за рубежом, материалов международных организаций, собственные экспериментальные данные и методические проработки позволили впервые в системе санитарно-эпидемиологического нормирования в России обосновать и ввести в действие новый гигиенический норматив безопасности: «Listeria monocytogenes в 25 г продукта не допускается».

Этот показатель конкретизирован с учетом результатов собственных экспериментальных исследований и сформулирован в виде дифференцированных нормативов для наиболее значимых групп пищевой продукции в Санитарных правилах и нормативах 2.3.2.1078-01 «Гигиенические требования безопасности и пищевой ценности пищевых продуктов». В разработанном документе отражены также специальные (более жесткие) требования к продуктам, предназначенным для наиболее уязвимых групп населения по степени риска заболеваемости листериозом, в том числе детей раннего возраста, беременных и кормящих женщин, больных и ослабленных людей.

Новые данные о появлении среди известных токсических метаболитов бактерий и грибов так называемых «суперантигенов» и других модуляторов системных иммунных реакций (в результате длительного селекционного давления, в том числе в окружающей среде) требуют углубленного изучения свойств этих микроорганизмов и их потенциальной роли в возникновения эмерджентных пищевых токсикозов.

К ним относятся заболевания, вызываемые токсигенными штаммами S.aureus, пищевые отравления смешанной этиологии, вызываемые S.aureus в сочетании с B.cereus, протеем, E.coli и другими условно патогенными бактериями, а также микроскопическими грибами - продуцентами новых видов микотоксинов. Появление новых токсигенных штаммов и усиление вирулентных свойств продуцируемых ими метаболитов обусловили необходимость проведения микробиологических и токсикологических исследований в этой области применительно ко всем аспектам безопасности питания.

Проведенный анализ современного состояния проблемы бактериальных отравлений позволил обобщить новые данные о номенклатуре, классификации и свойствах обнаруживаемых штаммов стафилококков и расширенном спектре продуцируемых стафилококковых энтеротоксинов, которые в свете новых взглядов на экологию и эволюцию патогенов могут рассматриваться как возбудители эмерджентных пищевых токсикозов.

В целях совершенствования системы микробиологического контроля пищевых продуктов выполнена работа по изучению условий накопления в них токсинов потенциально патогенными и токсигенными микроорганизмами с созданием методов их выявления, идентификации и количественного определения.

Установлена высокая степень контаминации сырого молока коагулазоположи-тельными стафилококками, продуцирующими энтеротоксины типов А и В, обладающими т-ДНКазной и лецитиназной активностью (в количестве 103 - 105 КОЕ/см3 свыше 30% изученных проб). В 23,7% образцов «российского» сыра обнаружены S.aureus в количестве 45 — 500 КОЕ/г продукта. Показано, что молоко и сыр могут служить источником попадания в организм человека энтеротоксигенных стафилококков, способных стать причиной возникновения пищевых интоксикаций.

Проведен анализ культуральных и биохимических свойств 137 штаммов стафилококков, выделенных из молока и сыров, установлена высокая степень корреляции между способностью S.aureus продуцировать энтеротоксины и наличием ферментов коагулазы, термостабильной ДНКазы и другими факторами патогенности.

Изучены условия выживания энтеротоксигенных стафилокков при моделировании процессов производства и хранения плавленых сыров. Установлена возможность размножения S.aureus в сырной массе до плавления и накопления значительных доз энтеротоксина, устойчивого при термической обработке. Показана вероятность обнаружения стафилококковых энтеротоксинов в плавленых сырах, выработанных из недоброкачественного сырья.

При исследовании кондитерских изделий установлено, что они могут служить 1 источником попадания в организм человека энтеротоксигенных стафилококков и патогенных штаммов энтеробактерий, способных при определенных условиях стать причиной возникновения пищевых интоксикаций и токсикоинфекций. Факторами, способствующими массивной контаминации этой микрофлорой кондитерских изделий, является использование в их производстве наполнителей, не прошедших термическую обработку и содержащих в составе молоко, сливки, сырые яйца или яичный порошок; ручная обработка изделий и нарушение рецептур усиливают степень риска размножения патогенов и появления вспышек пищевых отравлений.

Углубленное комплексное исследование свойств энтеротоксигенных стафилококков послужило основой для совершенствования микробиологического нормирования возбудителя, а также для разработки эффективных ускоренных методов контроля пищевых продуктов на наличие стафилококков и стафилококковых энтеротоксинов.

Экспериментально обоснован системный подход к исследованию пищевых продуктов на обсемененность S.aureus и наличие стафилококковых энтеротоксинов. Система включает разработанный способ экстракции токсинов из различных пищевых продуктов и использование высокоразрешающих методов иммуноферментного анализа. Показано, что рекомендуемая схема подготовки образцов позволяет повысить чувствительность ИФА и степень выявления малых доз энтеротоксинов, не обнаруживаемых другими серологическими методами.

Выявленные при использовании данного метода количественные закономерности степени сорбции энтеротоксинов позволяют расчетным путем устанавливать их фактическое содержание в продуктах различного физико-химического состава. Тем самым создается возможность коррекции результатов анализа и установление истинных количеств токсина в исследуемых образцах, что имеет практическое значение при расследовании вспышек пищевых отравлений стафилококковой этиологии.

В результате проведенных исследований разработаны и утверждены Методические указания МУК 4.2.2429-08 «Методы определения стафилококковых энтеротоксинов в пищевых продуктах», внедренные с 2009 г в лабораториях Роспотребнадзора и других ведомств, осуществляющих контроль качества и безопасности продовольственного сырья и пищевых продуктов.

Совместное вегетирование S. aureus с другими условно-патогенными и патогенными микроорганизмами в различных видах пищевой продукции регистрируется довольно часто, в том числе и при вспышках отравлений. Эта проблема заслуживает особого внимания, поскольку закономерности формирования смешанных биоценозов изучены недостаточно, что обусловило более детальную ее проработку в плане исследования взаимовлияния токсигенных штаммов B.cereus, S.aureus, E.coli и др., а также возможности их развития в различных питательных средах и пищевых продуктах.

При изучении взаимодействия различных эмерджентных микроорганизмов проведены серии экспериментов по совместному культивированию штаммов стафилококков - продуцентов энтеротоксина А с наиболее распространенными условно-патогенными бактериями, в том числе споровыми аэробами B.cereus, бактериями рода Proteus и E.coli. Установлено, что при одновременном культивировании S.aureus и B.cereus отмечается определенное взаимное синергетическое воздействие, сопровождающееся активизацией процесса токсинообразования энтеротоксигенными штаммами S. aureus. Степень этого взаимовлияния в значительной мере определяется условиями культивирования, составом питательных сред и соотношением исходных уровней контаминантов. Совместное вегетирование S.aureus и B.cereus приводило к более интенсивному накоплению стафилококковых энтеротоксинов как в среде культивирования, так и в модельных продуктах, тогда как выращивание S.aureus совместно с бактериями рода Proteus или с E.coli не оказывало потенцирующего эффекта на интенсивность продукции энтеротоксинов стафилококками.

В связи с появлением новых продуцентов токсических метаболитов мицелиаль-ных грибов проведены микологические исследования по изучению условий, способствующих загрязнению продовольственного сырья одним из малоизученных микотокси-нов — цитринином. Представлены результаты экспериментов, выполненных в модельных системах, имитирующих нарушения условий хранения зерна и зернопродуктов, показавшие возможность интенсивного накопления цитринина в зараженных токси-генными плесневыми грибами Pénicillium citrinum зерновых субстратах. Наиболее высокие уровни цитринина обнаруживали в результате роста P.citrinum в рисе (300-350 мг/кг) при хранении зерна в условиях повышенной влажности и при температуре 30°С. Установлена высокая частота обнаружения среди грибов рода Pénicillium токсиген-ных штаммов — продуцентов цитринина (5,9%), что указывает на значительную степень риска для здоровья потребителей контаминации продовольственного зерна этим достаточно широко распространенным видом микроскопических грибов. Для получения данных о частоте и уровнях загрязненности цитринином исследуемых субстратов предложено использовать метод твердофазного иммуноферментного анализа с применением тест-систем «Ридаскрин фаст цитринин».

Анализ современной методологии и новых подходов к изучению ключевых таксономических и патогенетических свойств микроорганизмов послужили основой для разработки комплексных схем выделения и идентификации эмерджентных патогенов, включающих наряду с бактериологическими и иммунологическими тестами методы молекулярно-генетического анализа нового поколения, направленных на повышение эффективности лабораторной диагностики и развитие методической базы микробиологических исследований пищевых продуктов.

Приведенный в работе подробный аналитический обзор существующих методов исследования пищевых патогенов включает не только их детальные характеристики, но и может служить отправной точкой при выборе наиболее эффективных и адекватных схем микробиологического анализа. При этом методы, основанные на новейших достижениях молекулярной биологии, находят все более широкое применение в пищевой микробиологии и при исследованиях разнообразного биологического материала. Эти методы позволяют не только выявить наличие и этиологическую роль возбудителя в возникновении инфекционной патологии, но и расшифровать природу па-тогенности, которая генетически заложена в исследуемом микроорганизме.

В результате изучения биологии эмерджентного микроорганизма L. monocytogenes и системных механизмов регуляции экспрессии генов факторов патогенности этих бактерий разработаны новые методические подходы, позволяющие проводить ускоренную индикацию возбудителя в различных видах пищевых продуктов с использованием высокоспецифичных комбинированных схем бактериологического и молеку-лярно-генетического анализа на основе подбора наиболее информативных биохимических тестов и их генотипирования с применением методов ПЦР и ДНК-гибридизации.

Для видовой идентификации L. monocytogenes предлагается применение наиболее информативных фенотипических тестов (подвижность, способность к гемолизу, наличие специфичных лецитиназ) в сочетании с ПЦР-анализом участков генома, кодирующих выработку фосфолипаз, факторов инвазии и цитотоксичности. Эффективность предложенной схемы подтверждена положительными результатами ПЦР с ви-доспецифическими для L. monocytogenes праймерами PlcA и ActA только у штаммов, обладающих лецитиназной и гемолитической активностью.

Применение комбинированного метода повышает диагностическую достоверность идентификации L. monocytogenes за счет снижения числа ложнопозитивных результатов, получаемых при использовании только биохимических тестов, на проявление которых существенное влияние оказывает физиологическое состояние исследуемых штаммов.

Разработанные методические подходы позволяют создать систему эффективного мониторинга за L. monocytogenes в продуктах питания на этапах их изготовления и хранения, обеспечивают получение более достоверных сведений о циркуляции этого возбудителя на предприятиях пищевой индустрии и в окружающей среде; позволяют повысить качество лабораторной диагностики пищевого листериоза.

На основании проведенных исследований впервые в России внедрен и применяется с 2005 года метод выявления и определения бактерий рода Salmonella и Listeria monocytogenes на основе гибридизационного ДНК-РНК анализа (МУК 4.2.1955-05). Метод позволяет проводить ускоренное обнаружение и идентификацию вышеназванных эмерджентных патогенов в пищевых продуктах и смывах на основе твердофазного гетерогенного гибридизационного ДНК-анализа с хемилюминесцентным детектированием.

Данными, полученными при проведении сравнительных испытаний методов ПЦР, ДНК-рРНК гибридизации и иммуномагнитной сепарации для выделения патогенных микроорганизмов родов Salmonella, Listeria и Escherichia, подтверждена необходимость их обязательной межлабораторной апробации для оценки эффективности и успешной интеграции в традиционные схемы микробиологического анализа.

Между тем молекулярно-генетические методы исследования, для которых характерны технологическая новизна, высокая инвестиционная стоимость и отсутствие официально одобренных регламентов и инструкций, не получили еще широкого распространения в пищевой микробиологии. Это определило необходимость разработки общих критериев стандартизации и гармонизации бактериологических и молекуляр-но-генетических методов с целью создания единой методологии внедрения современных диагностических систем и средств измерений.

Предлагаемые критерии стандартизации молекулярно-генетических методов должны обеспечивать: аналитическую и диагностическую точность анализа с минимальным уровнем ложнопозитивных и ложнонегативных результатов; чувствительность метода - нижний предел определения 1 КОЕ на 25 г продукта; сходимость и межлабораторную воспроизводимость результатов исследований; наличие реагентных, внешних и внутренних контролей; минимальный риск контаминации ампликонами; возможность быстрой детекции патогена (минимальная или в режиме on-line скорость проведения анализа); доступность и низкая стоимость стандартизованных непатентованных реагентов и наборов праймеров; простота выполнения анализа и возможность его автоматизации; универсальность способов пробоподготовки пищевых продуктов; возможность определения количественных уровней загрязнения данным патогеном (количественный анализ).

Применение разработанных критериев позволило провести стандартизацию и адаптацию метода идентификации бактерий Salmonella spp., Listeria spp., Listeria monocytogenes, E.coli 0157:H7, Campylobacter spp., выделенных из пищевых продуктов, с использованием системы ВАХ® Q7 на основе полимеразной цепной реакции (ПЦР) в режиме реального времени.

Проведенная сравнительная оценка специфичности, чувствительности и воспроизводимости метода, выполненная путем тестирования 250 проб суспензий, экспериментально контаминированных штаммами листерий, кампилобактеров, сальмонелл и эшерихий, показала его пригодность и перспективность для экспресс-идентификации и подтверждения видовой принадлежности бактерий, выделенных на дифференциально-диагностических средах в виде чистых культур.

Сопоставление ПЦР-анализа на основе ВАХ® Q7 с культурально-биохимическими методами показало, что применение ПЦР на этапе идентификации позволяет повысить диагностическую достоверность исследования за счет снижения числа ложнопозитивных и ложнонегативных результатов и сократить общую длительность анализа. По результатам проведенной работы разработаны и введены в действие Методические рекомендации № 02.036-08 «Идентификация патогенных бактерий, выделенных при контроле пищевых продуктов, с применением системы ВАХ® System Q7».

С учетом специфики оснащения отечественных лабораторий проведены подбор и адаптация методов генодиагностики с использованием имеющихся в стране тест-систем и амплификаторов, предназначенных для проведения традиционной ПЦР в сочетании с электрофоретической детекцией результатов. Установлено, что использование отечественных тест-наборов для клинической диагностики «АмплиСенс» обеспечивает возможность проведения родовой и видовой идентификации штаммов эмерд-жентных патогенов, выделенных из пищевых продуктов. При этом специфичность метода идентификации L.monocytogenes составляла 100% (при исследовании в ПЦР 16 штаммов различных видов листерий). Высокая специфичность ПЦР-метода и его преимущества выявлены и при анализе проб, содержащих смешанные ассоциации различных видов листерий, идентификация которых затруднена в связи с отсутствием различий культурально-морфологических свойств при росте на дифференциально-диагностических средах.

На основании полученных данных установлена пригодность метода ПЦР с электрофоретической детекцией для подтверждения принадлежности бактерий, выделенных на дифференциально-диагностических средах в виде чистых культур, к группе патогенных бактерий L. monocytogenes. Использование различных моделей амплификаторов отечественного и импортного производства обеспечивает в достаточной степени воспроизводимость и сопоставимость результатов испытаний, проведенных в разных лабораториях, использующих наборы «АмплиСенс L.monocytogenes».

Для осуществления основной задачи микробиологического контроля - выявления возбудителей непосредственно в пищевом продукте проведены подбор, адаптация и стандартизация методов генной диагностики, обеспечивающих с высокой степенью чувствительности экспресс-детекцию патогенных микроорганизмов на заданном уровне нормируемых показателей (1 КОЕ в 25, 50 или 100 г продукта). Предложен для практической реализации вариант ПЦР с гибридизационно-флуоресцентной детекцией в реальном времени. Для обеспечения заданных параметров чувствительности и специфичности метода ПЦР-FRT проведен подбор оптимальных способов предварительной пробоподготовки и селективного обогащения различных видов пищевых продуктов для детекции в них бактерий рода Salmonella и L.monocytogenes. Предложенные режимы подготовки проб обеспечивают ускорение проведения анализов в 2 -3 раза за счет сокращения длительности предварительных этапов обогащения исследуемых образцов без снижения уровня чувствительности реакции и открываемое™ проб. Проведенный сравнительный анализ использованных способов детекции позволил выявить преимущества метода ПЦР-FRT, который обеспечивал возможность обнаружения jL.monocytogenes и Salmonella spp. в пороговых дозах, соответствующих требованиям норматива (отсутствие патогена в 25 г продукта). При тех же условиях традиционный метод посева был недостаточно чувствительным: при дозах 1-10 КОЕ в 25 г продукта выявить рост L.monocytogenes удавалось лишь в 30% случаев.

На основании полученных результатов разработаны и рекомендуются для практического внедрения комбинированные схемы микробиологического анализа пищевых продуктов на наличие патогенных микроорганизмов рода Salmonella и L.monocytogenes, включающие этапы селективного обогащения проб, экстракции ДНК и ПЦР в реальном времени. Предлагаемые методические схемы могут быть адаптированы и распространены на другие виды эмерджентных возбудителей заболеваний, имеющих близких непатогенных представителей в пределах рода, идентификация которых должна основываться на определении патогенетических признаков.

Методы молекулярно-генетического типирования патогенов многочисленны и разнообразны, они обладают высокой дискриминационной способностью и могут быть использованы для дифференциации штаммов эмерджентных микроорганизмов, а также при изучении механизмов патогенности, эволюционных и генетических связей между клональными линиями. Эти методы могут взаимно дополнять друг друга, поскольку направлены на разные мишени в геноме бактерий, что обуславливает возможность получения комплексных генетических характеристик возбудителей заболеваний. В перспективе методы ДНК-типирования могут использоваться для мониторинга и создания баз данных о генетических профилях эпидемиологически значимых штаммов эмерджентных патогенов.

Внедрение современных гармонизированных и стандартизованных схем анали за бактериальных патогенов ознаменует переход системы микробиологического контроля пищевых продуктов на новый научно-методический уровень.

Список литературы диссертационного исследования доктор биологических наук Ефимочкина, Наталья Рамазановна, 2010 год

1. Акатов А.К. Изучение корреляции между различными признаками патогенных стафилококков./ Сообщение 1. О связи между происхождением штаммов и их биологическими свойствами./ЖМЭИ, 1968, №2, с.150-151.

2. Аль-Асбахи Н.Х. Автореферат дисс. канд. биол. наук. Гетерогенность популяций Listeria monocytogenes по идентификационным признакам в окружающей среде и рыбных продуктах.// С-Пб, 2003, 17с.

3. Бакулов И.А., Васильев ДА. Листериоз как пищевая инфекция.// Вопросы диагностики и профилактики, Ульяновск, 1991.

4. Бондаренко В.М. Общий анализ представлений о патогенных и условно-патогенных бактериях.// Журн.микробиол., 1997, № 4, с.20-26.

5. Бондаренко В.М., Е.В.Рябиченко, Л.Г.Веткова. Молекулярные аспекты повреждающего действия бактериальных липополисахаридов./Журн. микробиол.- 2004, № 3.-С.98-105.

6. Бугрова В.И. Сравнительные данные о способности Staphylococcus aureus вырабатывать энтеротоксины и другие биологически активные вещества./Вопросы питания, 1982, №4, с.70-72.

7. Бугрова В.И. О корреляции между выработкой энтеротоксинов и термостабильной нуклеазы штаммами Staphylococcus aureus, выделенными из разных объектов внешней среды./ Вопросы питания, 1981, № 3, с.57-59.

8. Бухарин О.В. Персистенция бактериальных патогенов как результат отношений в системе паразит-хозяин// Журн. микробиол., 1997, № 4, с.3-9.

9. Бухарин О.В. Инфекция модельная система ассоциативного симбиоза. / ЖМЭИ, 2009, № 1, с.83-86.

10. П.Бухарин О.В., Гриценко В.А., Дерябин Д.Г. Место внутривидового фенотипического разнообразия в экологии Eschericha coli и Staphylococcus aureus // Вестник РАМН, М., Медицина, 1997, №с.34-40.

11. Вестник программы ВОЗ по наблюдению и контролю за пищевыми инфекциями и интоксикациями в Европе, N 79, март 2004 г.\ Федеральный институт оценки рисков, Берлин

12. Галынкин В.А., Заикина Н.А., Карцев В.В., Шевелева С.А., Белова Л.В., Пушкарев А.А. Микробиологические основы ХАССП при производстве пищевых продуктов.//СПб, «Проспект науки», 2007, 288 с.

13. ГОСТ Р 51921-2002 «Продукты пищевые. Методы выявления и определения бактерий Listeria monocytogenes»

14. Далин М.В., Фиш Н.Г. Белковые токсины микробов. М., Медицина, 1980, 223 с.

15. Добровольская Т.Г. Структура бактериальных сообществ почв.// М., Академкнига, 2002, 282 с.

16. Доморадский И.В. Вирулентность бактерий как функция адаптации. Журн. Микробиол., 1997, № 4, с. 16-19.

17. Езепчук Е.В. Патогенность как функция биомолекул. М., Медицина, 1985, 235 с.

18. Ермолаева С.А. Генетические механизмы вирулентности Listeria monocytogenenes. Генетика, 2001, 37:286-293.

19. Ермолаева С.А., Тартаковский И.С. Регуляция экспрессии факторов вирулентности у Listeria monocytogenes. Журн. микробиол., 2001, 3:106-110.

20. Ерусланов Б.В., Баннов В.А., Степаншин Ю.Г., Светоч Э.А. Комплексная тест-система для экспресс-идентификации энтерогеморрагических эшерихий (включая E.coli 0157:Н7) в продуктах питания и клиническом материале.//!! Московский

21. Международный Конгресс. «Биотехнология: состояние и перспективы развития», 2004, с.92-93.

22. Ефимочкина Н.Р., Быкова И.Б., Барбер Н.В., Нитяга И.М., Шевелева С.А. Обнаружение Enterobacter sakazakii в детских сухих молочных продуктах.// ж. Вопросы детской диетологии, 2005, т.З, № 4, с.46-49.

23. Ефимочкина Н.Р., С.А. Шевелева, И.Б. Куваева, Ф.С. Флуер, С.Ю.Батищева и др. Индикация и серологический скрининг условно-патогенных энтеробактерий, выделенных из продуктов питания и объектов внешней среды. Ж. «Вопросы питания», 2002, № 6, с.29-34.

24. Ефимочкина Н.Р., С.Н.Карликанова, В.Ф. Семенихина, И.В.Рожкова. Расширение ассортимента сухих питательных сред для санитарно-гигиенической оценки молочных продуктов./ Молочная промышленность, №7, 2005, с.44-45.

25. Ефимочкина Н.Р., Миргородский Б.Г., С.Н.Карликанова и др. Совершенствование методических подходов к конструированию и оценке качества сухих питательных сред./ Молочная промышленность, 2006, № 3, с.36-38.

26. Ефимочкина Н.Р., Шевелева CA., Нитяга И.М., Тартаковский И.С., Ермолаева С.А., Карпова Т.И. Современные подходы к идентификации листерий при производственном контроле ферментированных мясных продуктов./ Вопросы питания, 2005, № 2, с.39-45.

27. Зайцева Е.А., Беляев K.P., Егорова И.Ю. и др. Дифференциация штаммов Listeria monocytogenes, изолированных на Дальнем Востоке и в Европейской части России, на основе полиморфизма генов, кодирующих факторы инвазии. /ЖМЭИ, 2008, № 6, с. 1014

28. Карликанова Н.Р, Куваева И.Б, Карликанова С.Н. Листерии в молоке и молочных продуктах. 1999. Москва-Углич. 124 с.

29. Карликанова Н.Р., Куваева И.Б., Захарова Н.П. Исследование возможности накопления энтеротоксинов S.aureus при выработке и хранении плавленых сыров.// Вопросы питания, 1995, № 1, с. 15 17.

30. Карликанова Н.Р., Семенихина В.Ф., Рожкова И.В., Карликанова С.Н., Шевелева С.А., Флуер Ф.С. Сухие питательные среды для микробиологического контроля. / ж. Молочная промышленность, 1999, № 3, с. 14-15

31. Карликанова Н.Р., Шевелева С.А. Выявление бактерий рода Erwinia при санитарно-микробиологическом контроле детских сухих молочных продуктов./ Вопросы питания, 1991, № З.с.42-45.

32. Карликанова С. Изучение свойств и продолжительности выживания Listeria monocytogenes в охлажденном молоке.//Материалы XXIY Международного конгресса, Мельбурн, 1994, с. 166.

33. Карпова Т.И., С.А. Ермолаева, И.В. Лопырев., Н. С. Бородина., И.С. Тартаковский., Х.А. Васкез-Боланд. Новые методы идентификации L. Monocytogenes. Клиническая микробиология и антимикробная химиотерапия, 2001, т. 3., №3. с. 15-21

34. Кирик Д.Л., Шаболовская Е.А. Особенности эпидемиологии кампилобактериоза в современных условиях. ЖМЭИ, 1995, №5, с.60-63.

35. Королева Н.С., Семенихина В.Ф. Санитарная микробиология молока и молочных продуктов,- М., 1980, 255 с.

36. Краткий определитель бактерий Берги. 8-е издание, /под ред. Дж. Хоулта. М., Мир, 1980, 495 с.

37. Куваева И.Б., Карликанова Н.Р., Лукина И.Б. Обнаружение энтеротоксигенных стафилококков в молоке и сыре.// Вопросы питания, 1994, №4, с.29-31.

38. Куликовский А.В. Эмерджентные пищевые зоонозы.//М., 2004, 174 с.

39. Лабораторная диагностика листериоза животных и людей, меры борьбы и профилактика. Госагропром, МЗ СССР, М., 1987.

40. Латкин А.Т. Иммуномагнитная сепарация с последующей АТФ-метрией в экспресс-ипдикации шигелл Зонне. //Дисс. на соискание ученой степени кандидата медицинских наук, 2005, М.

41. Ленченко Е.М. Биология и экология йерсиний — возбудителей пищевых токсикоинфекций. Автореферат докт.дисс. М., 2000, 35 с.

42. Литвин В.Ю., Гинцбург А.Л., Пушкарева В.И., Романова Ю.И., Боев Б.В. Эпидемиологические аспекты экологии бактерий.\\ М., «Фармарус-Принт», 1997, 255 с.

43. Лысак Л.В., Добровольская Т.Г., Скворцова И.Н. Методы оценки бактериального разнообразия почв и идентификации почвенных бактерий.//М., Макс Пресс, 2003, 178с.

44. Маккреди Б.Д., Чимера Д.А. Обнаружение и идентификация патогенных микроорганизмов молекулярными методами, //в кн. Молекулярная клиническая диагностика. Методы. М., Мир, 1999, с.496-506/

45. Маркова Ю.А., Беловежец Л.А., Баров И.Ю., Савилов Е.Д. Возможности адаптации условно патогенных энтеробактерий к различным температурам./ЖМЭИ, 2009, № 2, с.15-18.

46. Международный стандарт ISO 10560-93. Микробиологические исследования в молочном производстве. Секция 3.15. Определение Listeria monocytogenes.

47. Международный стандарт ISO 11290 -01. Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Горизонтальный метод определения и подсчёта L. monocyfogenes.

48. Методические рекомендации «Метициллинрезистентные Staphylococcus aureus — возбудители внутрибольничных инфекций: идентификация и генотипирование», М., Роспотребнадзор, утв. 23.07.2006.

49. Методические указания МУК 4.2.577-96 «Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов».

50. Минаев В.И. Ведущие пути и факторы передачи кампилобактериоза в современных условиях. -ЖМЭИ, № 2, 1995, с.39-41.

51. Минор Т.Е., Март Е.Х. Стафилококки в пищевых продуктах. М., 1980,231 с.

52. Момыналиев К.Т., Говорун В.М. Перспективы применения методов ДНК-диагностики в лабораторной службе., 2004, цит. по http://www.lytech.ru/.

53. МУК 4.2.1122-02 «Организация контроля и методы выявления бактерий Listeria monocytogenes в пищевых продуктах»;

54. Николаева Т.Н., Макарова Г.Л., Белавина Н.И. и др. //Материалы YIII съезда Всеросс. общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов, М., 2002, Т.З, С. 304.

55. Определитель бактерий Берджи.//под ред. Дж. Хоулта, Н.Крига, П.Снита и др. 9-е издание. М., Мир, 1997, 800 с.

56. Петрушина Л.И. Изменение чувствительности стафилококков к фагам и возможные методические приемы при их фаготипировании./ Вопросы питания, 1977, №3, с.75-79.

57. Петрушина Л.И., Колосницына Н.В. Повышение эффективности метода фаготипирования стафилококков./ Вопросы питания, 1989, № 2, с.51-54.

58. Пименова В.А., Бугрова В.И. Серологическая диагностика пищевых стафилококковых интоксикаций./ Вопросы питания, 1977, № 5, с.93.

59. Покровский В.И., Годоваиный В.А. Листериоз.// В кн.: Инфекционные болезни. М., Медицина, 1996, с.291-296.

60. Рахманова А.Г., Пригожина В.К. Справочник по инфекционным болезням. Листериоз. С.-Петербург, 1999, с. 172-174.

61. Романова Ю.М., Алексеева Н.В., Гинцбург А.Л. Некультивируемое состояние у патогенных бактерий на модели Salmonella typhimurium: феномен и генетический контрольА\ ЖМЭИ, 1997, № 4, с.35-41.

62. Саттон Д., Фотергилл А., Ринальди М. Определитель патогенных и условно патогенных грибов. Москва «Мир» 2001.

63. Световидова В.М. Связь лецитиназы или желточного фактора стафилококков с их токсигенностью./ЖМЭИ, 1967, № 5, с.64-69.

64. Светоч Э.А., Степаншип Ю.Г., Манзенюк И.Н. с соавт. Чувствительность Escherichia coli 0157:Н7, возбудителя геморрагического колита, к антибактериальным препаратам.// 2002, цит. по http://www.nature.nl/db/msg.html

65. Северин Е.С., Муйжнек Е.Л., С.Е.Северин. Концепция вторичных мессенджеров: от фундаментальных основ к клинической практике // М., изд. «Димитрейд График Групп», 2005, 336 с.

66. Седова Н.Н., Попова Г.Я. Обнаружение стафилококковой термостабильной ДНКазы в бульонных культурах и пищевых продуктах./Вопросы питания, 1982, № 4, с.67-69.

67. Семенихина В.Ф., Рожкова И.В., Карликанова С.Н. и др. Сухие питательные среды для микробиологического контроля молока и молочных продуктов./ Молочная промышленность, 1999, №3, с. 14-15.

68. Сидоренко М.Л., Бузолева Л.С. Влияние различных видов минеральных удобрений на размножение Listeria monocytogenes в почвах.//ЖМЭИ, 2007, № 4, с.61-64.

69. Сидоренко М.Л., Бузолева Л.С. Влияние химических и физических свойств почв морского побережья Приморского края на сохранение и размножение листерий и иерсиний.// ЖМЭИ, 2007, №3, с.83-86.

70. Сидоренко С.В. Инфекционный процесс как «диалог» между хозяином и паразитом. КМАХ, 2001, т.З, № 4, цит. по http://www.antibiotic.ru/kmac/2001

71. Солодовников Ю.П., Иваненко А.В., Ефремова Н.В. и др. Ускоренная эпидемиологическая диагностика вспышек и эпидемий пищевых отравлений бактериальной природы: кишечные пищевые токсикоинфекции и интоксикации./ЖМЭИ, 2009, № 3, с.119-122.

72. Солодовников Ю.П., Иваненко А.В., Ефремова Н.В. и др. Локальные вспышки и генерализованные эпидемии кишечных инфекций: основные качественные и количественные характеристики./ЖМЭИ, 2009, № 3, с.117-119.

73. Сомов Г.П., Литвин В.Ю. Сапрофитизм и паразитизм патогенных бактерий. Новосибирск. Наука, 1988.

74. Сомов Г.П., Литвин В.Ю. Сапрофитизм и паразитизм патогенных бактерий. Новосибирск. Наука, 1988.

75. Супотницкий М.В. Микроорганизмы, токсины и эпидемии. М., Вузовская книга. 2005, 230 с.

76. Тартаковский И.С., В.В.Малеев, С.А.Ермолаева. Листерии: роль в инфекционной патологии человека и лабораторная диагностика.,М., Медицина для всех., 2002, 200 с.

77. Флуер Ф.С., Михеева Г.В., Акатов А.К. и др. Определение стафилококковых энтеротоксинов типов А и В в пищевых продуктах иммуноферментным методом. //Вопросы питания, 1991, № 3, с.136-142.

78. Херрингтон С., О'Д Макги Д. Методика выявления ДНК/РНК с помощью гибридизации in situ. // в кн. Молекулярная клиническая диагностика. Методы. М., Мир, 1999, с.91-131.

79. Чан В.Т.-В. Гибридизация нуклеиновых кислот. // в кн.: Молекулярная клиническая диагностика. Методы. М., Мир, 1999, с.374-394

80. Чемерис А.В., Вахитов В.А. Новая старая ДНК// Институт биохимии и генетики Уфимского научного центра РАН, Уфа, 2002, 80с.

81. Черкасский Б.Л. Инфекционные и паразитарные болезни человека. М., Медицинская газета. 1994-617 с.

82. Черкасский Б.Л. Мат. Международного Симпозиума «Пищевые зоонозы, сальмонеллезы, кампилобактериоз, иерсиниозы, листериоз. Методы и средства диагностики, лечения и профилактики». М., 1995, с. 18, 34.

83. Шабанова Н.А., Бондаренко В.М. Различия по набору генов патогенности у штаммов Escherichia coli, продуцирующих шига-подобные токсины./ ЖМЭИ, 2009, № 5, с.4- 8.

84. Шабанова Н.А., В.В.Гостева, Н.В.Клицунова, В.М.Бондаренко. Влияние метаболитов Lactobacillus fermentum на ультраструктуру патогенных эшерихий./ЖМЭИ, 2009, № 2, с.З 6.

85. Шевелева С.А., Ефимочкина Н.Р. Иванов А.А. и др. Пищевые отравления и инфекции в Российской Федерации за период 1992-2001 г.г.: состояние проблемы и тенденции. Гигиена и санитария. 2003, № 3, с.38-45.

86. Шибата Д.К. Полимеразная цепная реакция и молекулярно-генетический анализ биоптатов.// в кн. Молекулярная клиническая диагностика. Методы. М., Мир, 1999, с.395-427.

87. Abe J., Ito Y., Onimaru M. et al. Characterization and distribution of a new enterotoxin-related superantigen produced by Staphylococcus aureus.I I Microbiol. Immunol. 2000, v.44, p.79-88.

88. Amagliani G., brandi G., Omiccioli E. et al. Direct detection of Listeria monocytogenes from milk by magnetic based DNA isolation and PCR.// Food Microbiology, 2004, v.21, issue 5, p.579-603.

89. Amann R.I., Ludwig W., Schleifer K. Phylogenic identification and in situ detection of individual microbial cells without cultivation.//Microbiol Rev., 1995, v.59, N 1, p.143-169.

90. Anderson E.S., Ward L.R., Saxe M.J. de Sa J.D. Bacteriophage-typing designations of Salmonella typhimurium.//J. Hyg., 1977, v.78, p.297-300.

91. Anon. Worldwide spread of infections with Yersinia enterocolitica. WHO Chronicle, 30, 1976, pp. 494-496.

92. ILSI Europe Report Series. Approach to the control of Enterohaemorrhagic Escherichia coli (EHEC).// 2001, 35pp,.

93. Archer D.L., Kvenberg J.E. Incidence and cost of foodborne diarrheal Disease in the united states. Journ. Of Food protection, V.48,1985, c.887-893.

94. Aslam M., Hogan J., Smith K.L. Development of a PCR-based assay to detect Shiga toxin-producing Escherichia coli, Listeria monocytogenes and Salmonella in milk.// Food Microbiology, 2003, v.20, issue 3, p.345-350.

95. Asperger A. Et al. Interactions between Listeria and the ripening flora of cheese.//Neth. Milk and Dairy J., 1989, v.43(3), p.287-298.

96. Bao-jun Xu, Xiao-qin Jia, Li-juan Gu, Chang-keun Sung. Rewiev on the qualitative and quantitative analysis of the mycotoxin citrinin. /Food Control, 2006, v,17, p.271-285.

97. Baranyi J., Roberts nT.A., McClure P. A non-autonomous differential equation to model bacterial growth.//Food Microbiol., 1993, v.10, p.43-59.

98. Baranyi J., Roberts T.A. A dynamic approach to predicting bacterial growth in food.// Int.J. Food Microbiol., 1994, v.23, p.277-294.

99. Barkocy-Gallagher G.A., Berry E.D., Rivera-Betancourt V. et al.// J.Food Protection, 2002, v.65, N 10, p.1527-1534.

100. Bassler B.L. How bacteria talk to each other: regulation of gene expression by quorum sensing. Curr. Opin. Microbiol. 1999, 2:582-587.

101. Batish U.K. Variation in the behavior of enterotoxigenic Staphylococcus aureus after heat stress in milk./ J. of Appl. Microbiol., 1989, N 1, p.69-74.

102. Bauwens L., Vercammen F., Herstcns A. Detection of pathogenic Listeria spp. in zoo animal: immunomagnetic separation and a chromogenic isolation medium. // Veterinary Microbiology.,2003, v.91, N2-3, p. 115-123.

103. Becker K., Keller B., von Eiff C. et al. Enterotoxigenic potential of Staphylococcus intermedins ./ Appi. Environ. Microbiol., 2001, v.67, p.5551-5557.

104. Beckers H.J. et al. The occurrence of L.monocytogenes in soft cheese and raw milk and its resistance to heat.// Int. J. Food Microbiol., 1987, v.4, p.249-256.

105. Bell C. Approach to the Control of Entero-haemorrhagic Escherichia coli (EHEC)// Internaional Journal of Food Microbiology, V.7, Issue 1, p. 197-216, 2002.

106. Bennett A.R., MacPhee S., Betts R.P. The isolation and detection of Escherichia coli 0157 by use of immunomagnetic separation and immunoassay procedures.// Lett.Appl. Microbiol., 1996, v.22, N3, p.237-243.

107. Bennett R.W. Staphylococcus aureus identification characteristics and enterotoxigenicity.// J.Food Science, 1986, v.51, N5, p.1337-1339.

108. Bergdoll M.S. Staphylococcal intoxications. //In: Foodborne Infections and Intoxications, 1979, H.Riemann, F.L. Bryan, eds, Academic Press, New York, pp.443-494.

109. Bergdoll M.S. Entrotoxins.// In: Staphylococci and Staphylococcal Infections., 1983, vol.2, C.S.F. Easmon and C.Adlum, eds. Academic Press, London, pp. 559-598.

110. Bergdoll M.S., Crass B.A., Reiser R.F. et al. A new staphylococcal enterotoxin, enterotoxin F, associated with toxic-shock-syndrome Staphylococcus aureus isolates.// Lancet, 1981, 1, p.1017-1021.

111. Beumer R.R., Brinkman E. Detection of Listeria spp. with a monoclonal antybody-based enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA).//Food Microbiology, 1989, v.6, N3, p. 171177.

112. Beumer, R.R., M.C. te Giffel, E.de Boer, F.M.Rombouts. Growth of Listeria monocytogenes on sliced cooked meat products. Food Microbiology. 1996. 13:333-340

113. Bhunia A.K., Wampler J.L. Animal and cell culture models for foodborne bacterial pathogens.// In: Foodborne Pathogens. Microbiology and Molecular Biology.2005, Caister Academic Press, p. 15-32.

114. Biering G., Karlsson S., Clark N.V.C et al. Three cases of neonatal meningitis caused by Enterobacter sakazakii in powdered milk. J Clin Microbiol. 1989 Sep; 27(9):2054-2056.

115. Bischoff C., Luthy J., Altwegg M., Baggi F. Rapid detection of diarrheagenic E.coli by real-time PCR.//J. of Microbiological Methods, 2005, v.61, iss.3, p335-341.

116. Bockemuhl J., Aleksic S., Karch H. Serological and biochemical properties of Shiga-like toxin (Verocytotoxin) -producing strains of Escherichia coli, other than O-group 157, from patients in Germany. //Zentralbl. Bacteriol., 1992, N 276, p.189-195.

117. Bockman R., Dickneite C., Goebel W., Bohne J. PrfA mediates specific binding to RNA polymerase of Listeria monocytogenes to PrfA-dependent virulence gene promoters resulting in atranscriptionally active complex. 2000. Mol. Microbiol. 36:487-497.

118. Boerlin P., S. Chen, J.K. Colbourne et al. Evolution of enterohaemorrhagic Escherichia coli hemolysin plasmids and the locus for enterocyte effacment in Shiga-toxin-producing E.coli. 1998, Infect. Immunol. 66:2553-2561.

119. Boileau C.R., d'Hauteville H.M., Sansonetti P.J. DNA hybridization technique to detect Shigella species and enteroinvasive Escherichia coli. // J. Clin. Microbiol., 1984, v.20, p.959-961.

120. Bozarias I.S., Adams I.R. Temperature shock, injury and transient sensitivity to nisin in Gram-negatives.//J. Appl. Microbiol., 2001, v. 91, p.715-724.

121. Breeuwer P., Abee T. Assessment of viability of microorganisms employing fluorescence techniques. //Int. J. of Food Microbiol., 2000, v.55, p. 193-200.

122. Brosch R., Chen J., Luchansky J.B. Pulsed-field fingerprinting of Listeriae: identification of genomic divisions for Listeria monocytogenes and their correlation with serovar.// Appl. Environ. Microbiol. 1994, v. 60, p.2584-2592.

123. Bruce J., Hubner R., Cole E. et al. Sets of EcoRl fragments containing rRNA sequances are conserved among different strains of Listeria monocytogenes.//Proc.Natl. Acad Sci USA, 1995, v.92, p.5229-5233.

124. Butman B.T., Plank M.C., Durham R.J. et al. Monoclonal antibodies whith identify a genus-specific Listeria antigen. // Appl. Environ. Microbiol., 1988, v.54, p.1564-1569.

125. Carminati D. et al. Bactericine-like inhibitors of Streptococcus lactis against L.monocytogenes .// J. of Food Protection, 1989, v. 52(9), p.614-617.

126. Cassiday P.K., Brackett R.E. Method and media to isolate and enumerate Listeria monocytogenes: a review.//J.of Food Protection, 1989, N52(3), p.207-214.

127. CDC, 1997. Escherichia coli 0157:H7 infections associated with eating a nationally distributed commercial brand of frozen ground beef patties and burgers—Colorado, 1997. Morbidity and Mortality Weekly Report 46, 777-778.

128. CDC, 1999. Update: Multistate outbreak of listeriosis—United States, Morbidity and Mortality Weekly Report 47, 1085-1086.

129. CDC, 2002. National Antimicrobial Resistance Monitoring System for Enteric Bacteria— Annual Report for 2000, CDC. 2002./ mrr. no http://www.cdc.gov/ncidod/dbmd/narms/

130. CDC,1993. Isolation of Vibrio cholerae 01 from oysters Mobile Bay, 1991-1992. Morbidity and Mortality Weekly Report, 42, 91-93

131. Chapman P.A., Cerdan A.T., Siddons C.A.et al. Use of Commercial Enzyme Immunoassays and Immunomagnetic Separation Systems for Detecting Escherichia coli 0157 on Bovine Fecal Samples. Appl. And Environment. Microbiol. 1997, p.2549-2553.

132. Chapman P.A., Cerdan Malo A.T., Siddons C.A., Harkin M. Use of Commercial Enzyme Immunoassays and Immunomagnetic Separation Systems for Detecting Escherichia coli 0157 in bovine fecal samples. // Appl. And Environmental microbiology, 1997, p.2549-2553

133. Chapman P.A., Siddons C.A., Zadik P.M. An improved selective medium for the isolation of Escherichia coli 0157.//J. Med. Microbiol., 1991, v.35, p.107-110.

134. Chapman P.A., Wright D.J., Siddons C.A. A comparison of immunimagnetic separation and direct culture for the isolation of verocytotoxin-producing Escherichia coli 0157 from bovine faeces. // J.Med. Microbiol., 1994, v.40, N 6, p.424-427.

135. Cocolin L., Rantsiou K., Lacumin L. et al. Direct Identification in Food Samples of Listeria spp. and Listeria monocytogenes by Molecular methods.// Appl. and Environm. Microbiology, 2002, v.68, N 12, p.6273-6282,.

136. Colwell R.R., Brayton P.R., Grimes D.J. et al. Viable, but non-culturable Vibrio cholerae and related pathogens in the environment: implication for release of genetically engineered microorganisms. //Biotechnology, 1985, v.3, p.817-820.

137. Colwell R.R., Brayton P.R., Herrington D. et al. Viable but non-culturable Vibrio cholerae 01 revert to a culturable state in human intestine. //World J. Microb. Biotechnol. 1996, v. 12, p. 28-31.

138. Comerio R., Fernandez Pinto,V.E., Vaamonde,G.(1998). Influence of water activity on Penicillhim citrimun growth and kinetics of citrinin accumulation in wheat. //International Journal of Food Microbiology, 42, p.219-223

139. Controlling listeria the Danish solution. Dairy Ind. Int., 1989, 54, 5, 30-31, 35.

140. Cossart P., Kocks C. The actin-based motility of the facultative intracellular pathogen Listeriamonocytogenenes. 1994, Molecular Microbiol., 13:395-402.

141. Cossart P., Pizarro-Cerda J., Lecuit M. Invasion of mammalian cells by Listeria monocytogenes functional mimicry to subvert cellular functions.//Trends Cell. Biol., 2003, v.13, p.23-31.

142. Cousin M.A., Riley R.T., Pestka J.J. Foodborne Mycotoxins: Chemistry, Biology, Ecology and Toxicology. .// In: Foodborne Pathogens. Microbiology and Molecular Biology.2005, Caister Academic Press, p. 163-226.

143. Cox T., Frazier C., Tuttle J. et al. Rapid detection of Listeria monocytogenes in dairy samples utilizing a PCR-based fluorogenic 5'nuclease assay .//J. Industr. Microbiology & Biotechnology, 1998, N 21, p. 167-174.

144. Crump J.A., Murdoch D.R., Baker H.G. Emerging infectious diseases in an island ecosystem: the New Zeland perspective. Emerging Infectious Diseases, 7, 2001, pp.767-772.

145. Curiale M.S., Klatt M.J., Mozola M.A. Colorimetric deoxyribonucleic acid hybridization assay for rapid screening of Salmonella in food: collaborative study.//J. Assoc. Off. Anal. Chem., 1990, v.73, p.248-256.

146. Datta A.R., Wentz B.A., Russell J. Cloning of the listeriolysin O gene and development of specific gene probes for Listeria monocytogenes.// App. Environ. Microbiol., 1990, v.56, p.3 874-3 877/

147. Datta A.R., Wentz B.A., Shook D. et al. Synthetic oligodeoxyribonucleotide probes for detection of Listeria monocytogenes.// App. Environ. Microbiol.,1988, v. 54, p.2933-2937.

148. Davidson R.J. Occurrence of Listeria monocytogenes, Campylobacter spp. and Yersinia enterocolitica in manitoba raw milk. Can. Inst. Food Sci. and Technol. 1989, 22, 1, 70-74

149. Day A.P., Oliver J.D. Changes in membrane fatty acid composition during entry of Vibrio vulnificus into the viable but nonculturable state.// J. Microbiol., 2004, v.42, p.69-73.

150. Denis F. et al. Activite antibacterienne du systeme Lactoperoxydase sur L. monocytogenes.// Microbiol. Alim. Nutr., 1989, v.7 (1), p.25-30.

151. Detection and Enumeration of Listeria monocytogenes. IDF Doc, 1988, group E64, 359.

152. Dickneite C., Bockmann R., Spory A., Goebel W., Sokolovic Z. Differential interaction of the transcription factor PrfA and the PrfA-activating factor (Paf) of Listeria monocytogenes with targets seguences. 1998. Mol. Microbiol. 27:915-928.

153. Dominguez L. et al. Viability of L.monocytogenes in milk treated with hydrogen peroxide.// J. of Food Protection, 1987, v.50(8), p/636-639.

154. Donker-Voet J. Listeria monocytogenes: some biochemical and serological aspects. //Acta Microbiol. Acad.Sci. Hung., 1972, N 19, p.287-291.

155. Dontorou C., Papadopoulou C., Filioussis G. et al. Isolation of Escherichia coli 0157:H7 from foods in Greece.//Int. J. Food Microbiol., 2003, v. 15, N82(3), p. 273-279.

156. Downes F.P., Green J.H., Greene K. et al. Development and evoluation enzyme-linked immunosorbent assay for detection Shiga-like toxin I and Shiga-like toxin II.// J. Clin., Microbiol., 1989, v.27, p. 1292-1297.

157. Doyle M.P. et al. Survival of L.monocytogenes in milk during high-temperature, short time pasteurization.//Appl. Environ. Microbiol., 1987, v.53 (7), p.1433-1438.

158. Drudy D., Mullane N.R., Quinn N. et al. Enterobacter sakazakii: an emerging pathogen in powdered infant formula./ Clin. Infect Dis., 2006, v.42, p.996-1002.

159. Druggan P., Forsythe S.J., Iversen C., Roberts P. The Druugan-Forsythe-Iversen agar (DFI), a chromogenic medium for the detection of Enterobacter sakazakii .//104th Gen.Mtg, Am.Soc.Microb., 2004, New Orlean, USA.

160. Dunbar S.A., Vander Zee C.A., Oliver K.G. et al. Quantative, multiplexed detection of bacterial pathogens: DNA and protein applications of the Luminex LabMAP™ system.// J. of Microbiological Methods, 2003, v.53, issue 2, p.245-252.

161. Eaton T.J., Gasson M.J. Molecular screening of Enterococcus virulence determinants and poterntial for genetic exchange between food and medical isolates. Appl. Envirom. Microbiol. 2001. 67:1628-1635.

162. Edelson-Mammel S.G. and Buchanan R.L. Thermal inactivation of Enterobacter sakazakii in rehydrated infant formula./ J. Food Prot., 2004, v. 67, p.60-63.

163. Elliot T.R., Elmer H.M. Listeria, listeriosis, and Food Safety. 2nd Edition, 1998, 720p

164. Embarek, P.K. Presence, detection, and growth of Listeria monocytogenes in seafoods: A review. Int. J. of Food Microbiology. 1994, 23:17-34.

165. INFOSAN (International Food Safety Authorities Network). Enterobacter sakazakii in powdered infant formula.// Information Note №1, 2005, http://www.who.int/

166. Enterobacter sakazakii and other microorganisms in powdered infant formula. Geneva, FAO/WHO, 2004. Microbiological Risk Assessment Series, N6, http:// www.who.int/

167. Ermolaeva S, T.Karpova, S.Novella, et al. A simple method for the differentiation of Listeria monocytogenes based on induction of lecithinase activity by charcoal. Int. J. Food Microbiol. 2003; 82; p.87-94.

168. Espy M.J., Uhl J.R., Sloan L.M. et al. Real-time PCR in clinical Microbiology: applications for routine laboratory testing.// Clinical Microbiology Reviews, 2006, v. 19, N 1, p. 165-256.

169. Farber J.M. Thermal resistance of L. monocytogenes in food., Int.J. Food Microbiol., 1989, 8, 3, 285-291

170. Farber J.M. et al. Monoclonal antibodies directed against the flagellar antigens of Listeria species and their potential in a EIA-Based methods.//J. of Food Prot., 1987, v.50, N 6, p.479-484.

171. Farber J.M., Peterkin P.I. Incidence and behavior of Listeria monocytogenes in meat products. In E.T.Ryser and E.H.Marth, eds. Listeria, Listeriosis and Food Safety., New York, Marcel Dekker, Inc., 1999, p.505-542.

172. Farmer M.A., Asbury F.W., Hickman D.J. et al. Enterobacter sakazakii, new species of Enterobacteriaceae isolated from clinical specimens// Int. J. Syst.Bacteriol. 1980, N 30, pp.569-584.

173. FDA/CFSAN Isolation and Enumeration of Enterobacter sakazakii from Dehydrated Powdered Infant Formula. 2002, ijht. no http:// www.vm.cfsan.fda.gov/.

174. FDA/CFSAN Isolation and Enumeration of Enterobacter sakazakii from Dehydrated Powdered Infant Formula. 2002, accessed on Sept.2003, ijht. no http:// www, vm. cfsan. fda. gov/.

175. FDA/CFSAN Bad Bug Book. Foodborne Pathogenic Microorganisms and natural Toxins Handbook.//2002, http://www.cfsan.fda.gov.

176. Feng P. Escherichia coli Serotype 0157:H7: Novel Vehicles of Infection and Emergence of Phenotypic Variants.//CDC, Emerging Infectious Diseases, 1995, v.l, N 2, p.47-52

177. Feng P., Lum R., Chang G. Identification of uidA gene sequences in beta-D-glucuronidase (-) Escherichia coli .//Appl.Environ. Microbiol., 1991, v.57, p.320-323.

178. Final Report of FAO/WHO Pan-European Conference on Food Safety and Quality. Budapest, 25-28.02.02, PEC/REP. 1, FAO, Rome, 2002.

179. Fitter S., Heuzenroeder M., Thomas C. A combined PCR and selective enrichment method for rapid detection of Listeria monocytogenes.//.!. Appl. Bacteriol., 1992, v.13, p.53-59.

180. Fitts, R.M., M.Diamond, C.Hamilton, M.Neri. 1983, DNA-DNA hybridization assay for detection of salmonella spp. in food. Appl. Environm. Microbiol. 46:1146-1151.

181. Fleming D.W. et al. Pasteurized milk as a vehicle of infection in an outbreak of listeriosis. /New England J. of Medicine, 1985, v. 312, p.404-407.

182. Foley S.L., Lynne A.M., Nayak R. Salmonella challenges: Prevalence in swine and poultry and potential pathogenicity of such isolates.// J. Anim. Sei. 2008, v.86, p.149-162.

183. Food Chemical News. E.coli in salami possibly linked to illness outbreaks.//1994, 36,19.

184. Foodborne Listeriosis. Report of the WHO Informal Working Group on foodborne Listeriosis. WHO/EHE/FOS/88.5, Geneva, 1988.

185. Foodborne Pathogens: Microbiology and Molecular Biology.// Caister Academic Press, USA, 2005, Ed: P.M. Fratamico, A.K. Bhunia, J. L. Smith, ISBN: 1-904455-00-X, 454p.

186. Gasser C., E. Gautier, A. Steck, R.E. Siebenmann and R. Oechslin , Haemolytisch-uraemische syndrome: bilaterale nierenrindennekrosen bei akuten erworbenen haemolytischen anamien. Schweizerische Medizinische Wochenschrift 85 (1955), pp. 205-209.

187. Gibson A.M., Bratchell N., Roberts T.A. The effect of sodium chloride and temperature on the rate and extent of growth of Clostridium botulinum type A in pasteurized pork slurry.//J.Appl.Bacteriol., 1987, v.62, 479-490.

188. Gilbert R.J., Miller K.L., Poberts D. Listeria monocytogenes in Chilled foods./ Lancet, 1989, p.383-384.

189. Golsteyn-Thomas E., King R., Burchank G. et al. Sensitive and specific detection of Listeria monocytogenes in milk and ground beef with polymerase chain reaction.// Appl. Env. Microbiol., 1991, v.57, p.2576-2580.

190. Granum P.E. Bacillus cereus.// In: Foodborne Pathogens. Microbiology and Molecular Biology.2005, Caister Academic Press, p.409-419.

191. Gray M.L. and Killinger A.H. Listeria monocytogenes and listeric infections. Bacteriological Reviews, 1966, v.30, p.309-382.

192. Gray M.L. et al. A new technique for isolation listerellae from the bovine brain.//J.Bacteriol., 1948, N55, p.471-475.

193. Greenwood M.H. The occurrence of Listeria species in milk and dairy products at national survey in England and Wales.// Int Food Microbiol., 1991, v. 12, p. 197-206.

194. Griffin, P.M.,and R.V. Tauxe. The epidemiology of infections caused by Escherichia coli 0157:H7, other enterohaemorrhagic E.coli, and the associated hemolytic uremic syndrome. Epidemiolog. Rev., 1991, N13, p.60-98.

195. Grunstein M., Hogness D.S. Colony hybridization: method for the isolition of cloned DNAs that contain a specific gene. //Proc. Natl.Acad. Sci. USA, 1975, v.72, p.3961-3965.

196. Gunzer F., Hennig -Pauka I., Waldmann K.H. et al., Gnotobiotic piglets develop thrombotic microangiopathy after oral infection with enterohemorrhagic Escherichia coli .// Am. J. Clin. Pathol., 2002, v.l 18, p.364-375.

197. Gurtler J.B., J.L.Kornacki, L.R.Beuchat. Enterobacter sakazakii: A coliform of increased concern to infant health. Int.Journal of Food Microbiology, V.104, issue 1, 2005, pp.1-34.

198. Gurtler J.B., Kornacki J.L., Beuchat L.R. Enterobacter sakazakii: A coliform of increased concern to infant health.// Int.J. of Food Microbiology, Sept.2005, v.104, issue 1, p.1-34.

199. Haggblom M.M., Apetroaie C., Andersson M.A. et al. Quantitative analyses of cereulide, the emetic toxin of Bacillus cereus, produced under various conditions./Appl. Envir. Microbiol., 2002, v.68, p.2479

200. Hamilton J.V., Lehane M.G., Braig H.R. Isolation of Enterobacter sakazakii from midgut of Stomaxys clacitrans./ Emerg. Infect. Dis., 2003, v.9, p. 1355-1356.

201. Hammer P., Hahn G., Heeachen W. Yergleichende Untersuchungen zum Nachweis von Listeria monocytogenes in Weichkase.//Kiel.Michwirt.Forschung., 1989, N 41, s.175-210.

202. Hansen-Wester I., Hensel M. Salmonella pathogenicity islands encoding type III secretion systems. Microb. Infect. 2001, 3:549-559.

203. Hein I., Klein D., Lehner A. Et al. Detection and quantification of the iap gene of Listeria monocytogenes and Listeria innocua by a new real-time quantitative PCR assay.//Res. Microbiol., 2001, v.l 52, p.37-46.

204. Helms M., Ethelberg S., Molbak R. et al. International Salmonella typhimurium DT 104 Infections, 1992-2001. CDC. Emerging Infectious Diseases, 2005, v.l 1, N6.

205. Hentschel U., Hacker J. Pathogenicity islands: the tip of iceberg. Microb. Infect. 2001, 3:545-548.

206. Herman L.M.F., Yaerewijck M.J.M., Moermans R.J.B. et al. Identification and detection of Bacillus sporothermodurans Spores in 1, 10, and 100 milliliters of Raw milk by PCR. //Appl. Environ. Microbiol., 1997, v.63, N8, p.3139-3143.

207. Hicks S.J., Rowbury R.J. Resistance of attached Escherichia coli to acrylic acid and its significance for the survival of plasmid-bearing organisms in water.// Ann. Inst. Pasteur, 1987, v.138, p.359-369.

208. Hill W.E. The Polymerase Chain Reaction: Applications for the Detection of Foodborne Pathogens.// Critical Reviews in Food Science and Nutrition. 1996, v.36, p.123-173.

209. Hill W.E., Datta A.R., Feng P. et al. Identification of foodborne Bacterial Pathogens be Gene Probes. FDA/CFSAN Bacteriological Analytical Manual, 8thEdition, 2001, Chapter 24.

210. Hill W.E., Payne W.L., Zon G., Moseley S.L. Synthetic oligodeoxyribonucleotide probes for detecting heat-stable enterotoxin-producing Escherichia coli by DNA colony hybridization.// Appl. Environ. Microbiol., 1985, v.50, p.l 187-1191.

211. Huang J., Zhu Y., Wen H. et al. Quadruplex Real-time PCR Assay for Detection and identification of Vibrio cholerae Ol and 0139 strains and determination of their toxigenic potential.// Appl. and Environ. Microbiol., 2009, vol.75, N 22, p.6981-6985.

212. Humphrey T. Salmonella typhimurium Definitive Type (DT) 104. A multi-resistant Salmonella. Int. Journal of Food Microbiology. V67, N3, 2001, p.246-251

213. Humphrey T., O'Brien S., Madsen M. Campylobacters as Zoonotic Pathogens: A Food Production Perspective. / Int. J. of Food Microbiology, 2007, vol.117, Issue 03, p.23 7-257.

214. Humphrey T.J., Richardson N.P., Statton K.M., Rowbury R.J. Effects of temperature shifts on acid and heat tolerance in Salmonella enteritidis phage type 4.// Appl. Environ. Microbiol.,1993, v.59, p.3120-3122.

215. Humphrey T.J., Slater E., McAlpine K. et al. Salmonella enteritidiphage type 4 isolates more tolerant of heat, acid or hydrogen peroxide also survive longer on surfaces.// Appl. Environ. Microbiol., 1995, v.61, p.3161-3164.

216. Humphrey T.J., Williams A., McAlpine K. et al. Isolates of Salmonella enterica serovar Enteritidis PT 4 with enhanced heat and acid tolerance are more virulent in mice and more invasive in chickens.// Epidemiol. Infect., 1996, v.l 17, p.79-88.

217. Husu J.R. Contamination of raw milk by L. monocytogenes on dairy farms. J. of Vet. Medicine, 1990,37, 4,268-275.

218. Ismaili, A., D. J. Philpott, M. T. Dytoc, and P. M. Sherman. 1995. Signal transduction responses following adhesion of verocytotoxin-producing Escherichia coli. Infect. Immun. 63:3316-3326.

219. Israel H.A. Immunomagnetic separation: A tool microbiology. //Amer. Biotechnol. Lab.,1994.V.12, N 6, p.50-52.

220. Iversen C., Druggan P., Forsythe S. A selective differential medium for Enterobacter sakazakii, a preliminary study.// Int. J. Food Microbiol. 2004, v.96, p.133-139.

221. Iversen C., Druggan P., Schumacher S. et al. Development of a novel Screening method for the isolation of "Cronobacter" spp. (Enterobacter sakazakii). //Appl. and Environ.Microbiol., 2008, vol.74, N8, p.2550-2553.

222. Iversen C. and Forsythe S. Risk profile of Enterobacer sakazakii and emergent pathogen associated with infant milk formula./ Trends Food Sei. Technol., 2003, N 14, p. 443-454.

223. Iversen C., Lane M., Forsythe S. The growth profile, thermotolerance and biofilm formation of Enterobacter sakazakii grown in an infant formula milk./ Lett. Appl. Microbiol., 2004, N38, p.378-382.

224. Iversen C., Waddington M., On S.L.W., Forsythe S. Identification and phylogeny of Enterobacter sakazakii relative to Enterobacter and Citrobacter species ./J. Clin. Microbiol., 2004, v.42, p.5368-5370.

225. Jackson G.J., Landford C.F., Archer D.L. Control of salmonellosis and similar foodborne infections. Food Control. 1991, № 1, p.26-34.

226. Jarodat Z.W., Bhunia A.K. Adhesion, invasion and translocation characteristics of Listeria monocytogenes serotypes in Caco-2 cell and mouce models.//Appl. Environ. Microbiol., 2003, v.69, p.5736.

227. Jayarao, B.M., 2001. In: WHO Surveillance Program for Control of Food Borne Infections and Intoxications in Europe, Newsletter N 75.

228. Jeffers G.T., Bruce J.L., McDonough P.L. et al. Comparative genetic characterization of Listeria monocytogenes isolates from human and animal listeriosis cases.//Microbiology, 2001, v.147, p.1095-1104.

229. Jersek B., Gilot P., Gubina M. et al. Typing of Listeria monocytogenes strains by repetitive element sequence-based PCR.//J.Clin.Microbiol., 1999, v.37, p.103-109.

230. Jersek B., Teherneva E., Rijpens N., Herman L. Repetitive element sequence-based PCR for species and strain discrimination in the genus Listeria. //Lett. Appl. Microbiol., 1996, v.23, p.55-60.

231. Ji G., Beavis R.C., Novick R.P. Cell density control of staphylococcus virulence by an octapeptide pheromone.//Proc. Nat. Acad. Sci., USA, 1995, v.92, p. 12055-12059.

232. Jin Y.X., Dons L., Kristensson K., Rottenberg M.E. Neural route of cerebral Listeria monocytogenes murine infection: Role of immune response mechanisms in controlling bacterial neuroinvasion.// Infect.Immun. . 2001, v.69, p.1093-1100.

233. Johler S., Stephan R., Hartmann I. et al. Yellow pigmentation in Cronobacter sakazakii ES5: genes involved and influence on persistence and growth under environmental stresses.// Appl. and Environ.Microbiol., 2009.

234. John T., Prescott M., Munroe L. Campylobacter jejuni enterites in man and domestic animals. JAVMA, 1982, Vol.181, N12, pi524-1530.

235. Johnson R., McDonald L., S.Gray. Improved detection and isolation verotoxigenic Escherichia coli in mixed cultures.//3rd Int. Symp., 1997, p. 108.

236. Johnson W., Tyler S., Ewan S. et al. Detection of genes coding for listeriolysin and Listeria monocytogenes antigen A (LmaA) in Listeria spp. by the popymerase chain reaction.//Microbial Pathogenesis, 1992, N12, p.79-86.

237. Jones M.A., Totemeyer S., Maskell D.J., et al. Induction of proinflammatory responses in the human monocytic cell line THP-1 by Campylobacter jejuni.// Infect. Immun., 2003, v.71, p.2626-2633.

238. Kandhai M.C., Reij M.W., K.van Puyvelde et al. A new protocol for the detection of Enterobacter sakazakii applied to environmental samples. // J. Food Protection, 2004, N 67, p. 1207-1270.

239. Karlikanova N.R., Zakharova N.P., Kuvajeva I.B. Presence of Staphylococcus enterotoxins in processed cheeses.// 24th International Dairy Congress "Dairying in a new global environment", 1994, Melbourne, Australia, p.290.

240. Karmali M.A. Infection by verotoxin-producing Escherichia coli.// Clin. Microbiol. Rev., 1989, v.2, p.15-38.

241. Karpiskova R., Pejchalova M., Mokrosova J., Vytrasova J., Smuharova P., Ruprich J. Application of chromogenic medium and the PCR method for the rapid confirmation of L. monocytogenes in foodstuffs.// J. Microbiol. Methods, 41, 2000

242. Kaufmann S.H.E. Immunity to intracellular bacteria. 1993, Annu.Rev. Immunol. 11:129163.

243. Kayihura M. Staphylococcal enterotoxin A in raw and pasteurized milk./ DSA, 1990, v.52, N 10, p.818.

244. Kepler A.D., Kimberley A.M., Kenneth M.C., Alister et al. Multidrug-Resistant Acinetobacter extremely infections in soldiers. Emerging Infectious Diseases, 2005, Vol.11, N8.

245. Khambaty F.M., Bennett R.W., Shah D.B. Application of pulsed-field gel electrophoresis to the epidemiological characterization of Staphylococcus intermedius implicated in a food-related outbreak.//Epidemiol. Infect., 1994, v.l 13, p.75-81.

246. King W., Raposa J., Warshaw J. et al. A new colorimetric nucleic acid hybridization assay for Listeria in foods.// Int.J.Food Microbiol., 1989, N 8, p226-232.

247. Kitagawa M., Matsumara Y., Tsuchido N. Small heat shock proteins, IbpA and IbpB, are involved in rsistances to heat and 02" stress in Escherichia coli. //FEMS Microbiol. Letts.,2000, v.184, pl865-171

248. Knutsson R., Blixt Y., Grage H. et al. Evaluation of selective enrichment PCR procedures for Yersinia enterocolitica. // Int. J. Food Microbiol., 2002, v.73, p.35-46.

249. Kreft J., Vazquez-Boland J.A ., Goebel W. p. 219-232. In J.Kaper and J.Hacker: Pathogenicity islands and other mobile virulence elements. 1999. ASM Washington D.C.

250. Krodo K., Sorensen A.K., Jakobsen M. The occurance of mycotoxins in fermented maize products. /Food Chemistry, 1995, 56(2), p. 147-153.

251. Kuzina L.V., Peloquin J.J., Vacek D.C. et al. Isolation and identification of bacteria associated with adult laboratory Mexican fruit flies, Anastrepha ludens.l Curr. Microbiol.,2001, v.42, p.290-294.

252. Kwon Y.M., Ricke S.C. Induction of acid resistance of Salmonella typhimnrium by exposure to short chain fatty acids.// Appl. Environ. Microbiol., 1998, v.64, p.3458-3463.

253. Lai K.K. Enterobacter sakazakii infections among neonates, infants, children, and adults. Medicine 2001;80:113-2 2.

254. Langley-Danysz P. Sur aux Listeria.//Rev. Lait. Franc., 1989, v.491, p.71-72.

255. Lee L.A., Taylor J., Carter G.P. et al. Yersinia enterocolitica 03: an emerging cause of pediatric gastroenteritis in the United States. Journal of Infectious Diseases, 163, 1990, pp.660-663.

256. Leimeister-Wachter M., Domann E., Chakraborty T. The expression of virulence in Listeria monocytogenes is thermoregulated.1992. J. Bacteriol. 174:947-952.

257. Leuscher R.G.K., Baird F., Donald B., Cox L.J. A medium for the presumptive detection of Enterobacter sakazakiiin infant formula. //Food Microbiol., 2004, N 21, p.527-533.

258. Leutenegger C.M. The Real-time TaqMan PCR and applications in veterinary medicine. //Veterinary Sciences Tomorrow, 2001, issue 1, p.1-15.

259. Levin B. and R. Tauxe , Cholera: nice bacteria and bad viruses. Current Biology 6 (1996), pp. 1389-1391.

260. Li C., Tao Y.P., Simon L.D. Expression of different size transcripts from clpP-clpXoperon of Escherichia coli during carbon deprivation. //J/Bacteriol., 2000, v. 182, p.6630-6637.

261. Li Y.H., Hanna M.N., Svensater G. et al. Cell density modulates acid adaptation in Streptococcus mutans: implications for survival in biofilms.// J.Bacteriol., 2001, v. 183, p.6875-6884.

262. Liming S.H., Bhagwat A.A. Application of a molecular beacon real-time PCR technology to detect Salmonella species contaminating fruits and vegetables.//Int. J. Food Microbiol., 2004, v.95, issue 2, p.177-187.

263. Lin Y.L.,Chou C.C., Pan T.M. Screening procedure from cattle feces and the prevalence of Escherichia coli 0157:H7 in Taiwan dairy cattle.// J. Microbiol.Immunol. Infect., 2001, v.34, N1, p. 17-24.

264. Linnan M.J. et al. Epidemic listeriosis associated with mexican-style cheese./ New England J. of Medicine, 1998, v.319, p.823-828.

265. Listeriosis and pasteurized milk.//Food & Drug Administration, USA, Center for Disease Control, Morb. And Mort. Weekly Report, 1988, v.37 (49), p.764-766.

266. Liu K., Knabel S.J., and Dudley E.G. rhs Genes are potential markers for multilocus sequence typing of Escherichia coli 0157:H7 strains.// Appl. and Environ. Microbiol., 2009, vol.75, N 18, p.5853-5862.

267. Loessner M.J., Busse M. Bacteriophage typing of Listeria species.// Appl.Environm. Microbiol., 1990, v.54, p.1912-1918.

268. Loncarevic S. Listeria monocytogenes with Special Reference to Food Products and Human Listeriosis. Doctoral thesis. Sweden, 1998, 47 c.

269. Maas R. An improved colony hybridization method with significantly increased sensitivity for detection of single genes.//Plasmid, 1983, v. 10, p.296-298.

270. Mackay I.M. Real-time PCR in the microbiology laboratory .//Clin. Microbial. Infect., 2004, N10, p.190-212

271. Mackey B.M. et al. The heat resistance of L.monocytogenes.// Letters in Applied Microbiol., 1989, v.9(3), p.89-94.

272. Maidak B.L., Cole J.R., Parker C.T. et al. A new version of the RDP (Ribosomal Database Project.//Nucleic Acids Res., 1999, v.27,N 1, p.171-173.

273. Major P. Detection and identification of Staphylococcus aureus in food by specific inhibition of heat-stabile deoxyribonuclease (TDN-ase) activity.// Acta Alimentaria, 1986, v.15, p.329-335.

274. Maldonado Y., Fiser J.C., Nakatsu C.H., Bhunia A.K. Cytotoxicity potential and genotypic characterization of Escherichia coli isolates from environmental and food sources. //Appl. Environ. Microbiobiol., 2005, v.71, p.1890-1898.

275. Malorny B., Tassios P.T., Radstrom P. et al. Standartization of diagnostic PCR for the detection of foodborne pathogens.// Int. J. Food Microbiol., 2003, v.83, iss.l, p.39-48

276. Manafi M. New development in chromogenic and fluorogenic culture media.// Int. J. Food Microbiol. 60, 2000

277. Manoj Kumar Mohan Nair M.K.M. et al. Inactivation of Escherichia coli 0157:H7 and Listeria monocytogenes in milk by caprylic acid and monocaprylin.//Food Microbiol., 2004, v.21 (5), p.611-616.

278. Mariani-Kurkdijian P., Denamur E., Milon A. et al. Identification of Escherichia coli 0103:H2 as a potential agent of hemolytic-uremic syndrom in France.// J.Clin.Microbiol., 1993, v.31, p.296-301.

279. Martinez-Urtaza J., Simental L., Velasko D et al. Pandemic Vibrio parahaemolyticus 03:K6, Europe. Emerging Infectious Diseases, 2005, vol.11, N8.

280. Mattingli J. Rapid monoclonal antybody-based enzyme-linked immunosorbent assay for detection of Listeria in food products.//J. Assoc. Offlc. Anal. Chem., 1988, v.41, N3, p.679-681.

281. Mazzota A.S., Mintville T.J. Nisin induces changes in membrane fatty acid composition of Listeria monocytogenes nisin-resistant strains at 10°C and 30°C.// J. Appl. Microbiol., 1997, v.82, p.32-38.

282. McFeters G.A. and LeChevalier M.W. Chemocal disinfection and injury of bacteria in water. In: R.R.Colwell and D.G. Grimes, eds., Nonculturable Microorganisms in the Environment. // Amer. Soc. Microbiol. Press., Washington, D.C., 2000, p.255-275.

283. McKee, M. L., and A. D. O'Brien. 1995. Investigation of enterohemorrhagic Escherichia coli 0157:H7 adherence characteristics and invasion potential reveals a new attachment pattern shared by intestinal E. coli. Infect. Immun. 63:2070-2074.

284. McLauchlin J. The rapid demonstration and presumptive identification of Listeria monocytogenes in food using monoclonal antibodies in a direct immunofluorescence test (DIFT).// Letters in Applied Microbiology, 1989, v.8, N1, p.25-27.

285. McLauchlin J., Audurier A., Taylor A.G. The evaluation of a phage-typing system for L.monocytogenes for use in epidemiological studies.// J.Med.Microbiol., 1996, v.22, p.357-365.

286. Mead P.S., Slutsker L., Dietz V. et al. Food-related illness and death in the United States. CDC. Emerging Infectious Diseases. 1999, v.5, p.607-625.

287. Mead R.S., Slutsker L., Dietz V. et al. Food-related illness and death in the United States: Emerging Infectious Deseases, 5, 1999, pp.607-625.

288. Meinkoth J., Wahl G. Hybridization of nucleic acids immunobilized on solid supports. // Anal. Bioch., 1984, v. 13 8, p.267-284.

289. Mengaud J., Dramsi S., Gouin E., Vazquez-Boland J.A. et al. Pleiotropic control of Listeria monocytogenes virulence factors by a gene that is autoregulated. 1991. Mol. Microbiol. 5:2273-2283.

290. Miller V.L., Bliska J.B., Falcow S. Nucleotide sequence of the Yersinia enterocolitica ail gene and characterization of the ail protein product.//J. Bacteriol., 1990, v.172, p.1062-1069.

291. Moseley S.L., Hardy J.W., Huq M.I. et al. Isolation and nucleotide sequence determination of a gene encoding a heat-stable enterotoxin of Escherichia coli.//Infect. Immun., 1983, v.39, p.l 167-1174.

292. Mullane N.R., Drudy R., Whyte P. et al. Enterobacter sakazakii: biological properties and significance in dried infant milk formula (IMF) powder./ Int. J. Dairy Technol., 2006, v.59, p.102-111.

293. Mullane N.R., Iversen C., Healy B. et al. Enterobacter sakazakii an emerging bacterial pathogen with implications for infant healh./ Minerva Pediatr., 2007, v. 59, p.137-148.

294. Mullane N.R., O'Gaora P., Nally J.E. et al. Molecular Analysis of the Enterobacter sakazakii O-Antigen Gene Locus./ Appl. And Environm. Microbiol., 2008, v.74, N 12, p. 3783-3794.

295. Munson S.H., Tremaine M.T., Betley M.J. et al. Identification and characterization of staphylococcal enterotoxins types G and I from S.aureus. II Infect. Immun., 1998, v.66, p. 3337-3348.

296. Murrey E.G.D., Webb R.A., Swann H.B.R. A disease of rabbits characterized by a laarge mononuclear leucocytosis caused by a hitherto undescribed Bacillus Bacterium monocytogenes (n.sp.)./ J. Path. Bacterid., 1926, N29, p.407-439.

297. Muytjens H.L., Roelofs-Willemse H, Jaspar G.H.J. Quality of powdered substitutes for breast milk with regard to members of the family Enterobacteriacae. J ClinMicrobiol 1988;26:743-746.

298. Muytjens H.L., Zanen HJ., Sonerkamp L.A. et al. Analysis of eight cases meningitis and sepsis due to Enterobacter sakazakii // J. Clin Microbiol., 1983, N 18, p.l 15-120.

299. Nachamkin I., Guerry P. Campylobacter infections. In: Foodborne Pathogens: Microbiology and Molecular Biology.// Caister Academic Press, USA, 2005, p.285-293.

300. Nazarowec-White, M. and Farber, J.M. Enterobacter sakazakii: a review. 1997. Int. J. of Food Microbiol., v. 34, p.103-113.

301. Nesbakken T. Yersinia enterocolitica. In: Foodborne Pathogens: Microbiology and Molecular Biology.// Caister Academic Press, USA, 2005, p.227-249.

302. Nishibuchi M., Kaper J.B. Nucleotide sequence of the termostable direct hemolysin gene of Vibrio parahaemolyticus.//J. Bacteriol., 1985, v. 162, p.558-564.

303. Northholt M.D. et al. Listeria monocytogenes: heat resistance and behavior during storage of milk and whey and making of Dutch types of cheeses. // Netherlands Milk and Dairy J., 1988, v.2,207-219.

304. Norton D.M., Scarlett J.M., Horton K. et al. Characterization and Pathogenic potential of Listeria monocytogenes isolates from the smoked fish industry.// Appl. Environ. Microbiol., 2001, v.67, N2, p.646-653.

305. Notermans S., Heuvelman K.J., Wernars K. Synthetic enterotoxin B DNA probes for detection of enterotoxigenic Staphylococcus aureus strains.// Appl. Environ. Microbiol., 1988, v.54, p.531-533.

306. Notermans S., van Leewen W., Guinee P. The epidemiology of S.enteritidis in the Netherlands. WHO paper WPH/PES/WP/89.4, Geneva.

307. Nurmi E. Statistic over human and animal Salmonella infection in Finland, especially poultry associated. WHO paper WPH/PES/WP/89.114, Geneva.

308. Nwoguh C.E., Harwood C.R., Barer M.R. Detection of induced ß-galactosidase activity in individual non-culturable cells in pathogenic bacteria by quantitative cytological assay. // Mol. Microbiol., 1995, v. 17, p.545-554.

309. Oberst R.D., Hays M.P., Bohra L.K. et al. PCR-based DNA amplification and presumptive detection of Escherichia coli 0157:H7 with an internal fluorogenic probe and the 5' nuclease (TaqMan) assay.//Appl. Environ. Microbiol., 1998, v.64, N9, p.3389-3396.

310. Oelschlaeger, T. A., T. J. Barrett, and D. J. Kopecko. 1994. Some structures and processes of human epithelial cells involved in uptake of enterohemorrhagic Escherichia coli 0157:H7 strains. Infect. Immun. 62:5142-5150.

311. Oh S.W., Kang D.K. Fluorogenic selective and differential medium for isolation of Enterobacter sakazakii. // Appl.Environment. Microbiol., 2004, N 70, p.5692-5694.

312. Ojeda A., Prado V., Martinez J. et al.Sorbitol-negative phenotype among enterohemorragic Escherichia coli strains of different serotypes and from different sources. // J.Clin. Microbiol., 1995, v.33, p.2199-2201.

313. Olier M., Pierre F., Lemaitre J.P., et al. Assessment of the pathogenic potential of two Listeria monocytogenes human faecal carriage isolates.// Microbiology. 2002, v. 148, p. 18551862.

314. Oliver J.D. The public health significance of viable but nonculturable bacteria. In: R.R.Colwell and D.G. Grimes, eds., Nonculturable Microorganisms in the Environment. // Amer. Soc. Microbiol. Press., Washington, D.C., 2000, p.277-299.

315. Oliver J.D. Viable but Nonculturable Bacteria in Food. In: Foodborne Pathogens. Microbiology and Molecular Biology.2005, Caister Academic Press, p.99-112.

316. Paoli G.C., Bhunia A.K., Bayles D.O. Listeria monocytogenes. In: Foodborne Pathogens: Microbiology and Molecular Biology.// Caister Academic Press, USA, 2005, p.295-325.

317. Parente E., Mazzatura A. Growth and heat resistance of Staphylococcus aureus in goat milk./ Ital. J.Food Sei., 1991, v.3, N 1, p.27-37.

318. Parham N., Spencer J., Taylor D., et al. An adapted ImmunoMagnetic cell separation method for use in quantification of Escherichia coli 0157:H7 from bovine faeces.//J. Microbiol. Methods, 2003,v.53, p. 1-9

319. Park C.H., A. Jafir. Evaluation of the ELISA for detection of Shiga-like toxins of Escherichia coli. 1997, abstr.V38/VI, p.95. In 3td Int. Symposium and Workshop of Shiga-toxin (Verotoxin) producing Escherichia coli Infections, Melville, N.Y.

320. Paterson J.S. The antigenic structure of organisms of the genus Listeria. //J. Pathol. Bacteriol., 1940, v.51, p.427-436.

321. Patön J.C. & Paton A.W. Pathogenesis and Diagnosis of Shiga Toxin-Producing Escherichia coli Infections. //Clinical Microbiology Reveiws, July 1998, p.450-479

322. Pederson P.B., Bjornvad M.E., Rasmussen M.D., Petersen J.N. Cytotoxic potential of industrial strain of Bacillus spp.// Regul. Toxicol. Pharmacol., 2002, v.36, p. 155-161.

323. Petran L.L. et al. A study of factors affecting growth and recovery of L.monocytogenes Scott AM J. of Food Sei., 1989, v.54 (2), p.458-460.

324. Picard-Pasquier N., Picard B., Krishnamoorthy R., Goullet P. Characterization of Escherichia hermanii by ribosomal DNA restriction fragment length polymophism.// Res. Microbiol., 1993, v.144, p.485-488.

325. Pieters J. Evasion of host cell defense mechanisms by pathogenic bacteria. Curr.Opin. Immunol. 2001, 13:37-44

326. Polivka C. Identification of Listeria with a new chromogenic medium Rapid-L.mono. Arch. Lebensmittelhygiene 52, 2001.

327. Preliminary FoodNet data on the Incidence of infection with pathogens transmitted commonly through food 10 states, 2008.// JAMA, 2009, vol.301, N 20, p.2088-2090.

328. Prevention and control of Enterohaemorrhagic Escherichia coli (EHEC) Infections. Report of a WHO Consultation, Geneva, 1997.

329. Purdy D., Buswell C.M., Hodgson A.E., et al. Characterisation of cytolethal distending toxin (CDT) mutants of Campylobacter jejuni.// J. Med. Microbiol., 2000, v.49, p.473-479.

330. Raj H.D. and Bergdoll M.S. Effect of enterotoxin B on human volunteers. //J. Bacteriol., 1969, v.98, p.833-834.

331. Raja N., Goodson M., Smith D.G., Rowbury R.J. Decreased DNA damage and increased repair of acid-damaged DNA in acid-habitated Escherichia coli.// J.Appl. Bacteriol., 1991, v.70, p.507-511.

332. Rangel J.M., Sparling P.H., Crowe C. et al. Epidemiology of Escherichia coli 0157:H7 Outbreaks, United States, 1982-2002. CDC. Emerging Infectious Diseases. 2005, v.l 1, N 4.

333. Rashtchian A., Abbott M.A., Shaffer M. Cloning and characterization of genes coding for ribosomal RNA in Campylobacter jejuni. // Curr.Microbiol., 1987, v.14, p.311-317.

334. Recommendation for a National Surveillance Programme of Foodborne Diseases. FSAC. Report № 17. Ireland, 1994.

335. Report of 5th World Comgress "Foodborne infections and intoxications", 7-11 June 2004, Berlin, Germany.// Newsletter WHO Surveillance Programme for control of foodborne infections and intoxications in Europe N 81/82, Dec.2004., p3-6.

336. Report of the 2d WHO meeting on emerging infectious deseases. WH0/CDS/BVI/95, Geneva, 1995.

337. Report of the WHO Consultation on Veterinary Public Health Aspects of prevention and control of Campylobacter infections. Moscow, 1984, VPH/CDD/FOS/84.1.

338. Report of WHO Consultation on Epidemiopogical Emergency in Poultry and egg salmonellosis, WHO/CDS/VPH/89.2.

339. Report of WHO Working Group on Shiga-like toxin producing E.coli with special emphasis on zoonotic aspects. 1994, WHO/CDS/VPH/94.136.

340. Report on Trends and Sourses of Zoonotic agents in the European Union and in Norwey, 1999. p.103-108.

341. Ridley A., Threlfall E.J. 1998. Molecular epidemiology of antibiotic resistance genes in multiresistant epidemic Salmonella typhimurium DT 104. Microbial Drug Resistance. N4, p.113-118.

342. Rocourt J., Jacket C. Surveillance epidemiologique de la listeriose humanie en France: role du center national de reference. //Med.Mal. Infect., 1995, v.25, p. 177-183.

343. Rocourt J., Jacquet C., Bille J. Human Listeriosis. 1991-1992. WHO/Food Safety issues. 1997, 47 c.

344. Rodrigue A., Quentin Y., Lazdunski A. et al. Two component systems in Pseudomonas aeruginosa: why so many? Trends Microbiol., 2000. 8:498-504.

345. Rowbury R.J. Stress Responses of Foodborne Pathogens with Specific Reference to the Switching on of Such Responces. In: Foodborne Pathogens. Microbiology and Molecular Biology.2005, Caister Academic Press, p.77-97.

346. Rowbury R.J., Goodson M., Whiting G.C. Habitation of Escherichia coli to acid and alkaline pH and its relevance fot bacterial survival in chemically polluten natural waters.// Chem.Ind., 1989, p.685-686.

347. Salmond C.V., Kroll R.G., Booth I.R. The effect of food preservatives on pH homeostasis in Escherichia coli.// J.Gen. Microbiol., 1984, v. 130, p/2845-2850.

348. Salmonella in eggs. Report of Agricaltural Committee UK. PHLS Microbiol Digest, 1989, 6,l,p.l-10.

349. Salmonella typhimurium Definitive Type (DT) 104. A multi-resistant Salmonella. ILSI Europe Report Series, 2000, 24pp, ISBN 1-57881-094-9.

350. Sanderson M.W., Gay J.M., Hancock D.D. at al. Sensitivity of bacteriological Culture for Detection of Escherichia coli 0157:H7 in bovine faeces. Journal of Clinical Microbiology, 1995, vol.33, N 10, p.2616-2619.

351. Saux M.F.-L., Herbio-Heath D., Loaec S. et al. Detection of cytotoxin-hemolysin mRNA in nonculturable populations of environmental and clinical Vibrio vulnificus strains in artificial seawater.// Appl.Environ.Microbiol., 2002, v.68, p.5641-5646.

352. Schantz E.J., Roessler W.G., Wagman J. Purification of staphylococcal enterotoxin B.// J. Biochem., 1965, v.4, p. 1011-1016.

353. Schlievert P.M., Jablonski L.M., Roggiani M. et al. Pyrogenic toxin superantigen site specificity in toxic shock syndrome and food poisoning in animals.// Infect. Immun., 2000, v.68, p.3630-3634.

354. Schmidt K. ed. WHO Surveillance Programme for control of foodborne infections and intoxications in Europe./Sixth Report FAO/WHO Collaborating Centre for Research and Training in Food Hygiene and Zoonosis, 1995, Berlin.

355. Schneider A., Gronewald C., Fandke M. et al. Real-time detection of Listeria monocytogenes with the LightCycler System.// Biochemica, 2002, N4, p.21-23

356. Schwartz B. et al. Investigation of an Outbreak of Listeriosis: New Hypotheses for the Etiology of Epidemic Listeria monocytogenes infections./J.of Infect. Diseases, 1989, 159(4), p.680-685.

357. Seeliger H.P.R. Listeroisis history and actual development.//Infection, 1988, N16, p.80-84.

358. Seeliger H.P.R. Listeroisis. 1961, Karger, New York, NY

359. Seo K.H., Brackett R.E., Frank J.F., Hilliard S. Immunomagnetic separation and flow cytometry for rapid detection of Escherichia coli 0157:H7.// J.Food Prot., 1998, v.61, N7,p.812-816.

360. Shao-hua Jhao, Atin R. Datta, Sherry Ayers et al. Antimicrobial-resistant Salmonella serovars isolated from imported foods. Intern. J. of Food Microbiol., 2003, v.84, Issue 1, p.87-92.

361. Sherman, P., R. Soni, M. Petric, and M. Karmali. 1987. Surface properties of the Vero cytotoxin-producing Escherichia coli 0157:H7. Infect. Immun. 55:1824-1829.

362. Siegler R.L., Obrig T.G., Pysher T.J., et al. Response to Shiga toxin 1 and 2 in a baboon model of hemolytic uremic syndrome.// Pediatr. Nephrol., 2003, v. 18, p.92-96.

363. Simmons et al. Enterobacter sakazakii infections in neonates associated with intrinsic contamination of a powdered infant formula. Infect Control Hosp Epidemiol., 1989; 10:398401.

364. Skovgaard N. Listeria Listeriose - Levned- smidler. //Maelkeritidende, 1988, v.10, N2-4, 84-90.

365. Skovyaard N. et al. Detection of Listeria in faeces from animals, in feeds, and in raw foods of animal origin. J. of Food Microbiol., 1988, 6(3), p.229-242/

366. Slutsker L., M.C. Evans and A. Schuchat, Listeriosis. In: W.M. Scheid, W. Craig and J. Hughes, Editors, Emerging Infections vol. 4, American Society for Microbiology Press, Washington, DC (2000), pp. 83-106.

367. Son R., Shahilah A.M., Gulam R. et al. Detection of Escherichia coli 0157:H7 in the Beef Marketed in Malaysia. Appl. And Environmen. Microbiology, Mar. 1998, p. 1153-1156.

368. Spicer E.K., Noble J.A. Escherichia coli heat-labile enterotoxin: nucleotide sequence of the A subunit gene. //J. Biol. Chem., 1982, v.257, p.5716-5721

369. Steinert M., Emody L., Amann R., and Hacker J. Resuscitation of viable but nonculturable Legionella pneumophilia Philadelphia JR32 by Acanthamoeba castellani.// Appl. Environ. Microbiol. 1997, v.63, p. 2047-2053.

370. Stelma G.N., Bergdoll M.S. Inactivation of staphylococcal enterotoxin A by chemical modification. //Biochem. Biophys. Res. Commun., 1982, vol. 105, p. 121-126.

371. Stephan R., Van Trappen S., Cleenwerck I. et al. Enterobacter turicensis, sp.nov. and Enterobacter helveticus, sp.nov. isolated from fruit powder./Int. J. Syst. Evol. Microbiol., 2007, v.57, p.820-826.

372. Stewart G.C. Staphylococcus aureus. In: Foodborne Pathogens. Microbiology and Molecular Biology.2005, Caister Academic Press, p. 273-284.

373. Stringer S.C., George S.M., Peck M.W. Thermal inactivation of Escherichia coli 0157:H7.// J.Appl. Microbiol., 2000, v.88, p.79-89.

374. Tamplin M.L. Modeling Pathogen Behavior in Foods.// In: Foodborne Pathogens. Microbiology and Molecular Biology.2005, Caister Academic Press, p.l 13-120.

375. Tanaro J.D., Lound L.H., Ledri S.T. et al. Development and application of a method for isolating Escherichia coli 0157:H7 in the city of Gualeguychi. Rev. Argent. Microbiol. 2002, 34(4), 2005-12.

376. Tauxe R.V. Emerging Foodborne Diseases: An evolving public health challenge. Emerging Infectious Diseases. 1997, v.3, N 4.

377. Tauxe R.W. Emerging foodborne pathogens. Int.J. of Food Microbiol. Y.7, Issues 1-2, 2002, p.31-41.

378. Tauxe, R. Salmonella enteritidis and Salmonella typhimurium DT 104: successful subtypes in the modern world. In: W.M. Scheld, W.Craig and J.Hughes, Editors, Emerging Infections, v.3, ASM Press, Washington, DC (1999), pp/37-52.

379. Tenover F.C., Arbeit R.D., Goering R.V. et al. Interpriting chromosomal DNA restriction patterns produced by pulsed-field gel electrophoresis: criteria for bacterial strain typing // 1995. v.33, p.2233-2239.

380. Tredantel J. Listeriose: gare au fromage. //J. Int. Med., 1988, v.l 18, p.33-36.

381. Tuttle J., Kellerman S. and Tauxe R.W. The risks of raw shellfish: what every transplant patient should know. Journal of Transplant Coordination 4 (1994), pp. 60-63.

382. Urmenyi, A.M.C. and Franklin, A.W., 1961. Neonatal death from pigmented coliform infection. Lancet, 1, p.313-315

383. Vazquez-Boland J.A., Kuhn M., Berche P. et al. Listeria pathogenesisand molecular virulence determinants. 2001, Clin. Microbiol. Rev. 14:584-640.

384. Vazquez-Boland J.A., Kuhn M., Berche P., et al. Listeria pathogenesis and molecular virulence determinants.// Clin.Microbiol. Rev., 2001, v.14, p.584-640.

385. Vines A., Reeves M.W., Hunter S., Swaminathan B. Restriction fragment length polymophism in four virulence-associated genes of Listeria monocytogenes.//Res. Microbiol., 1992, v.143, N 3, p.281-294.

386. Vrabcheva, T., Usleber, E., Dietrich, R., and Martlbauer, E. 2000. Co-occurrence of ochratoxin A and citrinin in cereals from Bulgarian villages with a history of Balkan endemic nephropathy. J. Agric. Food Chem. 48: 2483-2488

387. Waldor M. and J. Mekalanos , Lysogenic conversion by a filamentous phage encoding cholera toxin. Science 272 (1996), pp. 1910-1914.

388. Walker G.C. Mutagenesis and inducible responses to deoxyribonucleic acid damage in Escherichia coli.// Microbiol. Rev., 1984, N 48, p. 60-93.

389. Wall P.G., Morgan D., Lamden K. et al. A case control study of infection within epidemic strain of multi-resistant Salmonella typhimurium DT 104 in England and Wales. Communicable Desease Report 4, 1994, R130-R140.

390. Wampler J.I., Kim K.P., Jarodat Z.W., Bhunia A.K. Heat shock protein acts as a receptor for the Listeria adhesion protein in Caco-2 cells.// Infect.Immun., 2004, v.72, p.931-936.

391. Weber M.H.W., Marahiel M.A. Bacterial cold shock responses. In: Temperature effects on Biological Systems. // Sei. Prog., 2003, v.86, p.9-75.

392. Weise E., Teufel P. Listerien in Lebensmitteln — ein ungelöstes Problem.//Arztl. Lab., 1989, v.9, 35, p.205-208.

393. Whitecombe D., Theaker J., Guy S.P. et al. Detection of PCR products using self-probing amplicons and fluorescence.//Nat. Biotechnol., 1999, v.17, p.804-807.

394. Whiting G.C., Rowbury R.J. Increased resistance of Escherichia coli to acrylic acid and to copper ions after cold-shock.// Letts. Appl. Microbiol., 1995, v.20, p.240-242.

395. Whyte P., K.Mc.Gill, J.D.Collins and E.Gormley. The prevalence and PCR detection of Salmonella contamination in raw poultry. Yeterin.microbiology, v.89, Issue 1, 2002, p.53-60.

396. Wiedmann M., Bruce J., Keating C. et al. Rybotypes and virulence gene polymorphisms suggest three distinct Listeria monocytogenes lineages with differences in pathogenic potencial.//Infect. Immun., 1997, v.65, p.2707-2716.

397. Wiedmann M., Bruce J.L., Knorr R. et al. Ribotype diversity of Listeria monocytogenes strains associated with outbreakes of listeriosis in ruminants.// Journal of Clinical Microbiology, 1996, vol.34, N5, p.1086-1090.

398. Wilson I.G. Occurrence of Listeria species in ready to eat foods. Epidemiology and Infection. 1995, 115:519-526.

399. Wilson S. The control of S.enteritidis in the USA. WHO paper WPH/PES/WP/89.15, Geneva.

400. Wittwer C.N., Ririe K.M., Andrew R.V. et al. The LightCycler: a microvolume multisample fluorimeter with rapid temperature control. //Biotechniques. 1997, v.22, p. 176181.

401. Wnorowski T. The prevalence of Listeria species in raw milk from the Transvaal region. Suid-Afrikaanse tydskrif vir suiwelkunde, 1990,22, 1, 15-21.

402. Wolffs P., Knutsson R., Sjoback R., Radstrom P. PNA-based light-up probes for real-time detection of sequence specific PCR products.//BioTechniques, 2001, v.31, p.766-771.

403. Zadik P.M, Chapman P.A., Siddons C.A. Use of tellurite for the selection of verocytotoxigenic Escherichia coli 0157. .//J. Med. Microbiol., 1993, v.39, p. 155-158.

404. Zhang S.P., Adams L.G., Nunes J., et al. Secreted effector proteins of Salmonella enterica serotype typhimurium elicit host-specific chemokine profiles in animal models of typhoid fever and enterocolitis.// Infect.Immun., 2003, v.71, p.4795-4803.

405. Zhang X., A.D. M cDaniel, L.E. Wolf, G.T. Keusch, M.K. Waldor and D.W.K. Acheson , Quinolone antibiotics induce Shiga toxin-encoding bacteriophages, toxin production, and death in mice, t'/Journal of Infectious Diseases 181 (2000), pp. 664-670.