Исследование популяции Staphylococcus aureus в объектах ветеринарно-санитарного контроля и разработка ускоренных методов его индикации тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 16.00.06, кандидат биологических наук Денисова, Елизавета Аркадьевна

• Денисова, Елизавета Аркадьевна
• кандидат биологических наук
• 2001

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Денисова, Елизавета Аркадьевна

ВВЕДЕНИЕ.

1. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР.

1.1. Staphylococcus aureus и формы его существования в объектах ветеринарно-санитарного контроля и окружающей среды

1.1.1. Факторы вызывающие образование L-форм.

1.2. Способы контроля различных форм бактерий.

1.2.1. Микробиологические методы.

1.2.2. Гибридизация нуклеиновых кислот.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Цель и задачи исследования.

2.2. Объекты и методы исследования.

2.2.1. Методы исследования популяций бактериальных клеток.

2.2.1.1. Метод определения чувствительности бактерий к действию антибиотиков.

2.2.1.2. Метод исследования популяции бактериальных клеток с использованием мембранных фильтров.

2.2.1.3. Метод выращивания бактерий в полужидком агаре на мембранных фильтрах.

2.2.1.4. Метод определения степени реверсии бактериальных клеток после воздействия антибиотиков.

2.2.1.5. Метод изучения температурного фактора на бактериальные клетки.

2.2.2. Приготовление препаратов для сканирующей электронной микроскопии.

2.2.3. Контаминация мясопродуктов и водных объектов микроорганизмами.

2.2.4. Микробиологические методы определения Staphylococcus aureus в пищевых продуктах.

2.2.5. Контроль Staphylococcus aureus на основе методов ДНК-гибридизации

2.2.5.1. Выделение и очистка ДНК из бактерий.

2.2.5.2. Выделение и очистка ДНК с использованием гуанидинтиоизоционата.

2.2.5.3. Включение трития в бактериальные ДНК методом ник-трансляции.

2.2.5.4. Включение биотина в бактериальные ДНК методом ник-трансляции.

2.2.5.5. Включение метки в ДНК методом «рассеяной» затравки.

2.2.5.6. Получение меченых ДНК-зондов с помощью полимеразной цепной реакции.

2.2.5.7. ДНК-гибридизация на мембранных нитроцеллюлозных фильтрах с реперными ДНК мечеными тритием.

2.2.5.8. Точечная ДНК-гибридизация на мембранных фильтрах с биотинилированной ДНК.

2.2.6. Статистическая обработка результатов.

2.3. Результаты исследования.

2.3.1. Изучение популяции Staphylococcus aureus после воздействия неблагоприятных факторов (антибиотики, температура) с использованием микробиологических и электронномикроскопических методов.

2.3.2. Разработка метода дифференциального определения вегетативных и L-форм бактерий в объектах ветеринарно-санитарного контроля с использованием ДНК-гибридизации на мембранных фильтрах.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Исследование популяции Staphylococcus aureus в объектах ветеринарно-санитарного контроля и разработка ускоренных методов его индикации»

В настоящее время одним из актуальных вопросов является изучение экологии патогенных бактерий, играющих большую роль в заболевания^ общих для человека и животных.

Недостаточная эффективность лечения многих инфекционных болезней объясняется биологической приспособляемостью бактериальных популяций, проявляющейся в их гетероморфизме с последующей Ь-трансформацией как во внешней среде, так и в организме животных и человека.

Выявление не только вегетативных форм бактерий, но и клеток, находящихся в стадии гетероморфизма и Ь-трансформации, часть из которых при благоприятных условиях может реверсировать в исходное состояние с восстановлением патогенных свойств, является важным вопросом при контроле качества объектов ветеринарно-санитарного контроля. Присутствие в исследуемых образцах измененных бактериальных клеток, не выявляемых общепринятыми микробиологическими методами, свидетельствует о ложноотрицательном результате (7, 17, 39, 53, 55, 122, 163, 176).

Обнаружение стафилококков играет большую роль при определении качественных показателей продуктов животного происхождения.

Классические способы идентификации бактерий микробиологическими методами основаны на применении элективных питательных сред, позволяющих разделять микроорганизмы по их культурально - биохимическим свойствам. Недостаток данного анализа заключается в его длительности и трудоемкости.

Для объективной оценки не выявляемых традиционными методами Ь-форм бактерий наиболее перспективным является метод ДНК-гибридизации, 6 с помощью которого можно проводить как индикацию, так и идентификацию бактерий (6, 32, 46, 144, 161, 175).

В этой связи, крайне актуальной является разработка и усовершенствование методов индикации и идентификации различных форм бактерий на основе ДНК-диагностики, и адаптация этих методов к конкретным объектам ветеринарно-санитарного и экологического контроля.

1. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР

Заключение диссертации по теме «Ветеринарная санитария, экология, зоогигиена и ветеринарно-санитарная экспертиза», Денисова, Елизавета Аркадьевна

выводы

1. Микробиологическими и электронномикроскопическими исследованиями показано, что при действии различных неблагоприятных факторов на культуру Staphylococcus aureus часть популяции переходит в гетероморфный рост. При этом образование L-форм и степень их реверсии зависят как от вида действующего фактора, так и от его количественных характеристик.

2. Показано, что антибиотики, действующие на синтез клеточной стенки и нарушающие метаболизм бактерий (ампициллин, гентамицин и кефзол) в высоких концентрациях, наряду с гибелью части популяции Staphylococcus aureus, вызывают L-транс формацию с последующей реверсией в исходное состояние, в то время как антибиотики, действующие на механизм репликации ДНК (актиномицин), в высоких концентрациях не вызывают реверсию L-форм бактерий.

3. Показано, что при температуре выявлен переход бактерий в гетероморфный рост и образованием L-форм с возможностью реверсии клеток в исходное состояние при благоприятных условиях.

4. Разработана методика дифференциации вегетативных и L-форм бактерий на основе двойных мембранных ацетатцеллюлозных фильтров с диаметром пор, помещенных на твердые питательные среды, позволяющая производить качественную оценку степени L-трансформации и реверсии бактериальных клеток в исходную форму на популяционном уровне.

5. На основе дифференциации бактерий с помощью двойных мембранных нитроцеллюлозных фильтров и последующей ДНК-гибридизации разработана ускоренная методика индикации и идентификации вегетативных и L-форм различных бактерий в объектах ветеринарно-санитарного контроля, позволяющая в 2-3 раза сократить время анализа, по сравнению с общепринятым микробиологическим методом.

85

6. С использованием ДНК-зонда на основе нуклеотидной последовательности Staphylococcus aureus: Sa442-1 (5Ч-ААТ СТТ TGT CGG TAC ACG ATA TTC TTC ACG-3\ позиция с 5 по 34; Sa442-2 (б'-ССТ GAG ATT TGA GAT AAT АСА ACA-3\ позиция с 83 по 112, разработана тест-система видоспецифической индикации Staphylococcus aureus, позволяющая проводить анализ в присутствии сопутствующей микрофлоры в течение 6-8 часов.

7. Разработаны модификации методов ускоренного определения Staphylococcus aureus в водных объектах и мясных продуктах в течение 6-8 часов с чувствительностью 103-104 клеток в пробе без предварительного обогащения, и с чувствительностью до единичных клеток с предварительным подращиванием.

8. На основе биотинилированного ДНК-зонда и модификации метода точечной гибридизации с визуальной оценкой конечного результата разработана тест-система индикации Staphylococcus aureus в полевых условиях.

86

ПРЕДЛОЖЕНИЯ ДЛЯ ПРАКТИКИ

Для использования в научных и производственных ветеринарных учреждениях и лабораториях могут быть рекомендованы разработанные нами «Методические рекомендации по дифференциальному определению вегетативных и L-форм бактерий в объектах ветеринарно-санитарного контроля с использованием ДНК-гибридизации на мембранных фильтрах» (Утверждены Отделением ветеринарной медицины РАСХН 28.02.2001 г.) и «Методические указания по индикации Staphylococcus aureus в мясопродуктах с использованием генных зондов» (Утверждены Департаментом ветеринарии Минсельхоза РФ 14.09.2000 г. № 13-5-2/194).

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Денисова, Елизавета Аркадьевна, 2001 год

1. Абаджиева А.Н. Генетическая и биохимическая характеристика детерминантной устойчивости грамположительных микроорганизмов к антибиотикам // М., 1987, с. 56-67.

2. Акатов А.К., Зуева B.C. Стафилококки // М., изд. «Медицина», 1983, с. 87-94.

3. Антонов A.C. Молекулярные основы геносистематики // Изд. МГУ, М., 1980, с. 24-31.

4. Асеев Н. В., Светличкин В.В., Астахова О.И. Тест-система для ускоренной индикации и идентификации сальмонелл и кишечной палочки в продуктах убоя с/х животных на основе генных зондов // Труды ВНИИВСГЭ, 1994, т. 94, с. 95-98.

5. Безбородов A.M. Биохимические основы микробиологического синтеза //М., 1984, с. 76-83.

6. Белоусова Р.В., Гончарова Т.М., Асеев Н.В. и др. Разработка способов и технических средств полевой индикации возбудителей инфекционных заболеваний животных на основе генных зондов // В кн.: Вопросы ветеринарной биологии, М., 1994, с. 68-70.

7. Билич Г.Л., Габрилович И.М. Морфология и физиология микроорганизмов//Грозный, 1991, с. 19-49.

8. Биология и биотехнология микроорганизмов. (Под ред. Халмурадова В.И.) //Ташкент, 1989, с. 12-57.

9. Блохина И.Н., Леванова Г.Ф. Геносистематика бактерий // М., 1976.

10. Ю.Вальехо-Роман К. М. Гибридизация ДНК В кн.: Молекулярные основыгеносистематики // Изд-во МГУ, М., 1980, с.86-105.

11. Ветеринарная микробиология. Под ред. Е.В. Козловского, П.А. Емельяненко//М., изд. «Колос», 1982, с. 138-141.

12. Гаршина И.А., Дагина A.M., Яковлев В.П. Влияние антибиотиков на адгезию микроорганизмов // Антибиотики и химиотерапия, 1990, том 35, № 3, с. 50-53.

13. Гинцбург А.Л. Современное состояние и перспективы молекулярно-генетических методов и решение задач медицинской микробиологии // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунологии, 1999, № 5, с. 2226.

14. Гончарова E.H., Свергузова C.B. Кинетические особенности микробной популяции в гетерогенной системе // Сб. статей Междунор. Конф.: Экология человека и природы, 1997, с. 196-197.

15. Горбовицкая М. Диагностика болезни Марека с использованием ДНК-зондов // Птицеводство, М., 1996., № 2, с. 27-28.

16. Госионов Р. Некультивируемые формы микроорганизмов // Ветеринарная газета, 2000, № 5.

17. ГОСТ 10444.2-94 Продукты пищевые. Методы выявления и определения количества Staphylococcus aureus, 1996.

18. Грабов И.И. Естественная индуцированная изменчивость микроорганизмов // Журнал микробиологии, эпизоотологии и иммунологии, 1988, т. 33, с. 18-23.

19. Громов Б.В., Павленко Г.В. Экология бактерий // Л., изд. ЛГУ. 1989.

20. Дерюшева С.Е. Биотйнилирование ДНК-зондов с помощью полимеразной цепной реакции // Труды ВНИИ генетики и разведения с/х животных, Санкт- Петербург, 1993, с.43-45.

21. Доронина Н.В., Говорухина Н.И., Лысенко A.M., Троценко Ю.А. Анализ ДНК-ДНК гомологий у облигатно-метилотрофных бактерий // Микробиология, 1988, т. 57, № 4, с. 629-633.

22. Друца В.Л. Радиоизотопное мечение ДНК // В. кн.: Молекулярные основы геносистематики // М., изд. МГУ, 1980, с. 35-50.

23. Дрыгин Ю.Ф., Бузмаков A.B., Тетерина Н.Л., Морозов С.Ю. Нерадиоактивная диагностика вирусных инфекций зондами "ДНК-пероксидаза" // Молекулярная биология, 1992. т. 26, с. 18-22.

24. Егоров Н.С. Основы учения об антибиотиках // М., изд. МГУ, 1994, с. 51-59.

25. Золотарев Ф.Н, Голубев Д.Б., Петров H.A. Метод точечной гибридизации в вирусологии // Успехи современной биологии, 1989, т. 108, с. 375-382.

26. Иванов Л.Г. Систематика, морфологическая характеристика и биологические свойства возбудителей токсикоинфекций // Автореф. на соискание ученой степени доктора биологических наук МГУ им. Ломоносова, 1992.

27. Коромыслов Г.Ф., Фомин Б. А., Артюшин С.К. и др. Диагностикумы инфекционных болезней сельскохозяйственных животных на основе генной инженерии // Труды ВИЭВ, 1994, т. 69, с. 8-14.

28. Костюкова Н.П. Начальный этап инфекционного процесса колонизация и пути ее предотвращения // Журнал микробиологии, эпизоотологии и иммунологии, 1989, № 9, с. 103-108.

29. Красько А.Г., Ркхадзе Г.Г., Сергеев В.А. и др. Диагностика ротавирусной инфекции человека методом точечной гибридизации // Вопросы вирусологии, 1987, т. 32, № 2, с. 208-212.

30. Кривононосов М.В. Организация защиты качества продуктов питания // Международный медицинский журнал (г. Харьков), 1998, 4, № 4, с. 104106.

31. Кудрявцев А.Б. Механические свойства микробных оболочек // М., Наука, 1988, с. 31-54.

32. Маккреди Б.Д., Чимера Д.А. Обнаружение и идентификация патогенных микроорганизмов молекулярными методами И В кн. Молекулярная клиническая диагностика, М., изд. «Мир», 1999, с.496-506.

33. Мальков И.Г. Нетрадиционные методы анализа в ускоренной диагностике патогенных бактерий // В кн.: Проблемы ветеринарной санитарии, 1992, с. 3-14.

34. Мамаев М.А. Разработка ускоренных способов ДНК-диагностики для определения бактерий в мясе и мясопродуктах // Автореферат диссертации на соискания ученой степени кандидата вет. наук, М., 2000.

35. Маниатис Т, Фритч Э., Сэмбрук Дж. Методы генетической инженерии.

36. Молекулярное клонирование//М., изд. «Мир»., 1994, с. 159-172.

37. Медников Б.Н. Дивергенция геномов и некоторые вопросы эволюционной теории // Автореф. на соискании ученой степени доктора биологических наук, М., 1978.

38. Медников Б.Н., Леванова Г.Ф. О возможных принципах построения естественной системы микроорганизмов. Физиология и биохимия микроорганизмов //Межвуз. Сб. №2, Горький, 1980, с. 32-38.

39. Методы общей бактериологии. (Под ред. Герхардта Ф. и др) // М., изд. «Мир», 1984, с. 89-96.

40. Механизм действия антибиотиков. (Под ред. Гаузе Л.) // М., изд. «Мир», 1975, с. 5-64.

41. Милько Е.С., Егоров Н.С. Геторогенность популяции бактерий в процессе диссоциации // М., изд. МГУ, 1991, с. 10-47.

42. Монахова Е.В., Власов В.П., Вуцан В.Н., Е.И.Седых, Н.К.Михась.// Видоспецифический ДНК-зонд для идентификации холерных вибрионов // Молекул, генетика микроб, вирусол, М., изд. «Медицина», 1993.-4, с.8-11.

43. Навашин С.М. Наука об антибиотиках: ретроспектива и взгляд в будущее. Антибиотики и химиотерапия // 1997, т. 42, № 5, с. 3-9.

44. Определитель бактерий Берджи, под ред. Г.А. Заварзина // М., изд. «Мир», 1997, с. 540-542.

45. Павлова И.Б. Закономерности развития популяций бактерий в окружающей среде (электронно-микроскопическое исследование) // Диссертация в виде научного доклада, М., 1999.

46. Павлова И.Б., Куликовский A.B., Джентемирова K.M. Экология бактерий в популяции // Вестник сельскохозяйственной науки, 1990, № 2, с. 75-78.

47. Павлова И.Б., Куликовский A.B. и др. Электронно-микроскопическое исследование развития бактерий в популяциях. Морфология колоний бактерий // Журнал микробиологии, эпизоотологии и иммунологии, 1990, № 9, с. 15-20.

48. Паников Н.С. Кинетика роста микроорганизмов. Общие закономерности и экологические положения // М., изд. «Наука», 1991, с. 4-72.

49. Панчини Д., Паретти Ф. Антибиотики. М., изд. «Мир», 1985, с. 41-58.

50. Печуркин Н.С. Популяционная микробиология // Новосибирск, "Наука", 1978, с. 39-46.

51. Петров Н.Б. Методы изучения реассоциации ДНК // В кн. Молекулярные основы геносистематики, М., изд. МГУ, 1980, с. 51-75.

52. Поляков A.A. Ветеринарная санитария // М., изд. "Колос"., 1989, с. 14-24.

53. Поставин В.А. Пищевые токсикоинфекции // M., изд. "Медицина", 1980, с. 6-49.

54. Правила ветеринарного осмотра убойных животных и ветеринарно-санитарной экспертизы мяса и мясопродуктов. Утв. Главным управлением ветеринарии Министерства сельского хозяйства СССР, 27 декабря 1983 г. М, ВО «Агропромиздат», 1988.

55. Прозоровский C.B., Кац JI.H., Каган Г.Я. L-форма бактерий // М., изд. «Медицина», 1981, с. 5-112.

56. Романова Л.В., Мишанкин Б.Н.Сучков И.Ю. Полимеразная цепная реакция: генотипический скрининг штаммов Fran, tularensis с использованием неспецифических праймеров // Биотехнология, 1993, № 6, с. 8-9.

57. Санитарные правила и нормы. СанПиН 2.3.2. 560-96. Гигиенические требования к качеству и безопасности продовольственного сырья и пищевых продуктов // М., 1997, п.6, с.22-50.

58. Сассон А. Биотехнология: свершения и надежды // М., изд. «Мир», 1987, с. 47-64.

59. Светличкин В.В., Лысенко A.M., Петров Н.Б. и др. Сравнение различных способов введения метки в ДНК микроорганизмов // Биологические науки, 1985, №6, с. 130-135.

60. Сидоров М.А., Билетова Н.В. Корпелаева Л.М. Микробиология мяса, мясопродуктов и птицепродуктов // М., Агропромиздат, 1996, с. 45-48.

61. Сидоров М.А., Скородумов Д.И., Федотов В.Б. Определитель зоопатогенных бактерий // М., изд. «Колос», 1985, с. 22-25.

62. Синагатуллина Э.М. Разработка тест-систем для выявления инфекционных агентов с использованием нерадиоактивных биотиниллированных ДНК-зондов // Автореферат диссертации на соискание учёной степени кандидата биологических наук, М., 1992.

63. Стафилококки и стафилококковые инфекции // Изд. Сарат. ун-та., 1980, с. 52-93.

64. Стент Г. Молекулярная генетика // М, изд. «Мир», 1974, с. 1-535.

65. Стикланд Ю.Е. Получение зондов и их мечение // В кн. Молекулярная клиническая диагностика. М, изд. «Мир», 1999, с. 329-372.

66. Тимаков В.Д., Каган Г.Я. L-формы бактерий и семейства Mycoplasmataceae в патологии // М., изд. «Медицина», 1973, с. 3-37

67. Турова Т.П. Определение таксономического положения микроорганизмов с помощью метода гибридизации ДНК // Биологические науки, 1989, № 2, с. 26-28.

68. Турова Т.П., Троицкий A.B., Игнашёв В.Г., Светличкин В.В. Применение метода ДНК-ДНК гибридизации для идентификации бактерий из смешанных культур // Лабораторное дело, 1981, с. 48-51.

69. Физиология роста микроорганизмов (Под ред. Глухова Н.В.) // Саратов, 1987, с. 6-87.

70. Франклин Т., Сноу Дж. Биохимия антимикробного действия // М., изд. «Мир», 1984, с. 15-49.

71. Фрумгарц Л.Ф., Киприянов С.М., Калачиков С.М. и др. Получение флуоресцентной меченой ДНК и использование ее в качестве зонда при молекулярной гибридизации // Биоорганическая химия, 1986, №11, с. 1508-1513.

72. Херрингтон С., Макги Дж. Молекулярная клиническая диагностика // М, изд. «Мир», 1999, с.558.

73. Чан Т.В.Т. Гибридизация нуклеиновых кислот // В кн. Молекулярная клиническая диагност, методы, М., 1998, изд. «Мир», с. 374-394.

74. Шапиро Джеймс А. Бактерии, как многоклеточный организмы // В мире науки, 1988, № 8, с. 46-54.

75. Шибата Д.К. Полимеразная цепная реакция и молекулярно-генетический анализ биотопов // В кн. Молекулярная клиническая диагностика. Методы. М., изд. «Мир», 1999, с. 395-425.

76. Шлегель Г. Общая микробиология // М., изд. «Мир», 1987, с. 20-34.

77. Шмидт E.H. Роль температуры в регуляции вирулентности бактерий // Сб. статей СП гос. мед. института, 1998, с. 74-77.

78. Экологическая биотехнология (Под ред. Форстера К.Ф., Вейза Д.А.) // Л., изд. «Химия», 1990, с. 21-39.

79. Экология и генетика микроорганизмов (Под ред. Иванова А.И.) // Свердловск, 1991, с. 5-41.

80. Agrowal S., Cristodoulou C., Gait M. Efficient methods for attaching nonradioactive labels to the 5 ends of syntheticaligodeoxy ribonucleotides // Nucl. Acid. Res., 1986., v. 14, p. 6227-6245.

81. Akerlund T. Growth and division of E. coli cells // Sei. and Technol, 1995, № 170, p. 1-47.

82. Andrew V., Sayler G. The use of gene probes in the rapid analysis of natural microbial communities // J. Ind. Microbiol., 1988, 3, №5, p. 281-292.

83. Andriman W., Gradoville L., Heston L. Use of cloned probes to detect Epstein Barr viral DNA in tissues of patients with neoplastic and lympho-proliferative diseases // Journal of infectious Disease. 1983, v.148, p. 967-977.

84. Arends M.J. Identification of HPV: in situ hybridization or polymerase chain reaction //J.Pathol., 1991, v. 164, № 3, p. 191-193.

85. Arrand J. Preparation of nucleic acid probes: Nucleic acid hybridization: a practical approach // ED. By BD Harnes, IRL Rpess, 1986, p. 40.

86. Ashall F., Miless M. Diagnosis of parasitic diseases using DNA to DNA hybridization // Trans Roy Soc trop. Med. Hyg, 1988, № 2, p. 235-236.

87. Baker R.F. Binding of DNA to cellulose nitrate filters under denaturing conditions // Anal. Biochem, 1977, v.78, p. 569-571.

88. Beard J. Gene probes Locate waterborne diseases // New Sei, 1987, № 1562, p. 237.

89. Berger C., Melchers F. In situ hybridization ofmRNA molecule in single cells // Annu rep, 1985, Basel Inst. Immunol, Basel, p. 1-10.

90. Bevan I.S, Daw R.A., Day P.J.R., Ala F.A., Walker M.R. Polymerase chain reaction for detection of human cytomegalovirus infection in a blood donor population // Brit. J. Haematol., 1991, v.78, № 1, p. 94-99.

91. Boom R, Sol C, Beld M., Weel J., Goudsmit J., Wertheim-van Dillen. Improved Silica-Guanidiniumthiocyanate DNA isolation Procedure Based on Selective Binding of Bovin Alpha-Casein to Silica Particles // J. Clin. Microbiol, 1999, v.37, №3, p.615-619.

92. Brenner D. Gene Probes in Detection and identification of Pathogenic Bacteria 11 Clinical Microbiol, 1986, № 7, p. 106-109.

93. Britten R.J., Kohe D.E. Repeated sequences in DNA // Science, 1986, v. 161, p. 529-540.

94. Brytting M, Sundgvist V.-A., Stahlhandske P., Linde A., Wahren B. Cytomegalovirus DNA detection of an immediate early protein gene with nested primer oligonucleotides // J. Virol. Meth., 1991, v. 32, № 2-3, p. 1127138.

95. Brun Buisson Ch. Staphylococcus aureus stable of resist methociclin. Evolution, epidemic, part in clinic // Pathol. Biol., 1998, v. 46, p. 227-234.

96. Cassiman I. Diagnosis of genetic diseases by probes // Acta clin. Belg, 1988, p. 181-184.

97. Chou S., Merigan T.C. Rapid detection and quantitation of human cytomegalovirus in urine through DNA hybridization // New England Journal of Medicine, 1985, v. 308, p. 921-925.

98. Chu B.C.F, Wahl G.M, Orgel L.E. Derivatization of unprotected polynucleotides//Nucl. Acid Res, 1983,v.ll,p. 6513-6529.

99. Coates P.J, Mak W.P, Slavin G, Ardenne A.J. Detection of singl copies of Epstein-Barr virus in paraffin wax sections by nonradioactive in situ hybridization // J. Clin. Pathol, 1991, v.44, № 6, p. 487-491.

100. Costa A.L, Valenti A, Veronese M. Study of the Morphogunetiohal Alterations Produced Fenticonazole on strains of Staphylococcus aureus, Using the Scaning Electron Microscope (S.E.M.)//Microbiology, 1984, v. 27, p. 29-35.

101. Сох К.Н., DeLeon D.V., Angerer L.M. Detection of mRNAs in sea unchin embryos by in situ hibridization using asymmetric RNA probes // Developmental Biology, 1987, v. 101, p.485-502.

102. Day P.J.R., Bevan I.S., Gurney S.J., Young L. S., Walker M.R. Synthesis in vitro and application of biotinylated DNA probes for human papiloma virus type 16 by utilizing the polimerase chain reaction // Biochm.I., 1990, v.267, №l,p.l 19-123.

103. De Ley I., Cattoir H., Reynaerts A. The quantitative measurement of DNA hybridization from renaturatiun rates // Europ. J. Biochem., 1970, v. 12, p.133-142.

104. Denhardt D.T. A membrane filter technique for the detection of complementery DNA // Biochem. Biophys. Res. Commun., 1966, v.23, p. 641646.

105. Dorin M., Bonecque C. Fast separation of plastid DNA using discontinuons gradients in the preparative ultracentrifuge // Bio Techiques, 1995,- 18, № l,p. 90-92.

106. Downing K., McAdam., Mizrahi V. Staphylococcus zureus nuclease is a useful secretion reporter for micobacteria//J. Gene, 1999, v. 23, p. 293-299.

107. Eng R.H., Smith S.M., Ogbaca T. et. al. Effect of Antibiotics on Endotoxin Releace from Gram-negative Bacteria // Diagn. Microbiol. Infect., 1993, Dis 35, p. 185-189.

108. Erlich H.A. PCR technology // Stockton Press, New York, 1989.

109. Eshraghi H. Staphylococcus aureus inflyence on atount from cinaza contained in milk // J. Vet. Parmacol. and Ther., 1997, v. 20, p. 179-180.

110. Falkow S., Moseley S. Application oftechique of DNA-DNA hybridization in diagnostic microbiology // Патент США№ 4187351, 03.04.1980, 435/5.

111. Falkow S., Moseley S. Specific DNA probes in diagnostic microbiology // Патент США № 4358535, 10.11.1982,435/15.

112. Ferenezy A. Latent papilomavirus and recurring genital warts // N. Engl. J. Mod., 1985, №14, p. 784.

113. Fine S.P., Reddy G.R., Marnett L.J. Mutagenicity in Escherichia coli of the mayor DNA adduct derived from the endogenous mutagen malondialdehyde // Proc. Natl. Acad. Sei., 1997, v.94, p. 8652-8657.

114. Flint S.H., Hartley N.J. Evaluation of the TECRA Escherichia coli 0157 visual immunoassay for tests on dairy products // Lett Appl Microbiol, 1995, v. 21(2), p.79-82.

115. Forster A., Modness J., Skingle D. Non-radioactive hybridization probes prepared by chemical labeling of DNA and RNA with novel reagent, photobiotin //Nuc. Acid Res., 1985, № 3, p.745.

116. Gannon V. P., King R.K., Kim J.Y., Thomas E.J. Rapid and sensitive metod for detection of Shiga-like toxin-produsing Escherichia coli in ground beef using the polimerase chain reaction // Appl. Environ Microbiol, 1992, v.58, p.3809-3815.

117. Garger S., Turpen T. Use of RNA probes to detect plant RNA viruses // «Eth Enzymol, v.118, Orlando, 1986, p. 717-722.

118. Gillespie D., Spiegelman S. A quantive assay for DNA-RNA hybrids with DNA-RNA immobilized on a membrane // J. Molecul. Biol., 1965, v. 12, p.829-842.

119. Gou D. F., Kubota H, Onuma N, Kodama H. Detection of salmonid heipes virus in fisli by Southern-blot technique // J. Vet. Mod. Sei., 1991, v. 53, NI.P 43-48.

120. Gramley W.A., Asghar A., Frierson H.F., Powell J.M., Powell S.M. Detection of Helicobacter pylori DNA in Fecal Samples from in fected individuals // J. Clin. Microbiol., 1999, v.37, p. 2236-2240.

121. Gudibande R., Kenten J. Electrochemiluminescen T-label for DNA probe assays // Biotechnol Adv, 1997, v. 15, № 3-4, p. 721.

122. Haase A. Analysis of infections and pothological condition by in situ hybridization // DNA Probes: Appli. Genet and Infic. Disease and Cancer: Conf, Cold Spring Harbor. Apr. 20-23, 1986, Cold Spring. Harbor. N. Y., 1986, p. 113-118.

123. Haase A., Brahic M., Blum H. Detection of viral nucleic acids by in situ hybridization // Meth. Virol. Vol., Orlando c. a., 1984, p. 189-226.

124. Halt C.,Ward M.E.,Clarke l.N. Analysis of the entire nucleotide sequence of the ciyptic plasrnid of Chlamidia trachomatis serovar L I .Evidence for involvement in DNA replication //Nucl. Acid. Res., 1988, v. 16, p. 4053-4067.

125. Hames B.D., Higgins S J. Nucleic acid hybridization: a practical approach // IRL Press, Oxford, 1985.

126. Harris S., Jonet D. Optimisation of the PCR // Brit. J. Biomid. Sci., 1997, v. 54, №3, p. 166-173.

127. Hashimoto Y., Itho Y., Fujinada Y., Khan A.Q., Sultana F., Miyake M., Hirose K., Yamamoto H., Ezaaki T. // Development of nested PCR based on the ViaB sequence to detect Salmonella thyphimurium // J. Clin. Microbiol., 1995, v.33, p.775-777.

128. Hayashi K. Manipulation of DNA by PCR. In. PCR the Polimerase chain reaction, Eds.: Mullis K.B., Ferre F. & Gibbs R.A., Birkhauser, 1994, p. 3-14.

129. Herrick J., Michalet X., Conti C., Schurra C., Bensimon A. Quantifying single gene copy number by measuring fluorescent probe lengths on combed genomic DNA // Proc. Natl. Acad. Sci., 2000, v. 97 (1), p 222-227.

130. Hill W, Madden J. Foodbore enterotoxigenis Escherichia coli: detection and enumeration by DNA hybridization // Appl. and Enviro. Microbiol, 1983, №4, p.1324-1330.

131. Hill W, Payne A. Detection and enumeration of virulent Yersinia enterocalitica in food by DNA colony hybridization // Appl. F Environmental Microbiology, 1984, №4, p. 801-807.

132. Hoekstra D., Van Der Laan J.M., Witholt B. et. al. Relaese of Outer Membrane Fragments from Normally Growing Escherichia coli // Biochimics, Biophysics, 1996, Acta 455, p. 885-889.

133. Hopmar A, Wiegant J., Tesser G. A no-radioactive in situ hybridization method based on mercurated nucleic acid probes and sulfhydryl-hapten ligands // Nucl. Acud. Res., 1986, v. 14, № 16, p. 6471-6488.

134. Huss H.H. Control of indigenous pathogenic bacteria in seafood // Food control, 1997, v.8, № 2, p.91-98.

135. Ikeda S, Yamamoto M, Nagao K., Zhang B, Watanabe S., Oda T. Nonradioactive hybridization probes prepared using M13 phage vector and the universal sequencing primer // Acta mod. Okajama., 1989, v.43, № 4, p. 11971202.

136. Ingraham J.L., Maalfe O, Neidhardt F.C. Growth of the Bacterial Cell// 1983, p. 26-37.

137. Innis M.A., Gelfand D.H, Sninsky J.J, White T.J. Optimization of PCRs. In: PCR protocols, a guide to methods and applications // Academic Press, San Diego, California, 1990, p. 16-21.

138. Ivanova T, Turova T, Antonov A. DNA-DNA and rRNA-DNA hybridization studies in the genus Ectothiorhodosrira and other purple sulfur bacreria // Arch. Microbiol, 1985, № 2, p. 154-156.

139. Joseph T., Navo P.E., Caron C.F. Molecula characterization of Chlamidia trachomatis and Chlamidia psitace; Plasmids // Infect. Innwn., 1986, v.51, p.699- 703.

140. Jremstein M. and Hognes D. Colony hybridization: A method for the isolation of cloned DNAs that contain a specific gene // Proc. Nail. Acad. Sei. USA, 1975, p. 3961-3965.

141. Kacian D., Lawrence T., Sanders M., Putnam J., Majlessi M., McDonough S., Ryder T. A rapid and sensitive chemiluminescent DNA probe system for detection of amplified fflV and HBV DNA // Fresenius J. Anal. Chem., 1990, v. 337, №1, p. 95.

142. Katros T., Robertson J., Waterbory H. A simple method to make better probes from stört DNA fragments // Mol. Biotehnol., 1994 2, № 1, p. 95-98.

143. Kim J., Nietfeldt J., Benson A.K. Octamer-based genome scanning distinguishes a unigue subpopulation of Escherichia coli 0157:H7 strains in cattle // Proc. Nail. Acad. Sei., USA, 1999, v. 96, Issue 23, p. 13288-13293.

144. Kimpton C.P., Morris D.J., Corbit G. Sensitive non-isotopic DNA hybridisation assay or immerdiate-early antigen detection for rapid identification of human cytomegalovirus in urin // J. Virol. Meth., 1991, v.32, №1, p.189-199.

145. Kirikae T., Nacano M., Morrison D.C. Antibiotic-Induced Endotoxin Relaece from Bacteria and Its // Clinical Significance. Microbiology and Immunology, 1997., vol. 41, № 4, p. 285-295.

146. Kohne D. Novel approach for rapid and sensitive detection ofmicroorganisms //' Clinicae Microbiol, 1987, № 6, p. 110-112.

147. Lakshmi D., James D. A solution hybridization assay for the quantitation of prodynorphin mRNA // Mol. Brain Res., 1987, № 2, p. 173-176.

148. Langer P. R., Waldrop A.A., Ward D.C. Enzymatic synthesis of biotimlabelled polynucleotides: novel nucleic acid affinity probes // Proc. Nat. Acad. Science., 1982, v.79, p. 4381-4385.

149. Leiser R., Schubert J. Nachweis phytopathogener Virren mit Hilfe der RNA-RNA-hydridisierung auf Filtern//Acta biotechnol, 1986, №1, p. 14-16.

150. Lim J.K., Gunther N. W., Zhao H., Johnson D.E., Keay S.K., Mobley H.L.T. // In Vivo Phase Variation of Escherichia coli Type 1 Fimbrial Genes in Women with Urinary Tract Infection // Infection and immunity, 1998, v. 66, №7, p.3303-3310.

151. Lockcnsgard J.R., Thawley D.G., Molitor T.W. Enzymatic amplification of latent Pseudorabies virus nucleic acids sequences // J.Virol.Meth., 1991, v.34, № 1, p. 45-55.

152. Longer P. Enzymatic synthesis of biotin-labelekl polynucleotides novel nucleic acid affinity probes // Proc. Natl. Acad. Sei USA, 1981, №11, p. 6633.

153. Luk J.M., Kongmuang U., Trans R.S., Lindberg A.A. An enzyme-linked immunosorbent assay to detect PCR products of the rfbS gene from serogroup D salmonellae: a rapid screening prototype // J. Clin. Microbiol., 1997, v.35, p.714-718.

154. Mann W. Two hour DNA hybridizations using a new transfer membrane // Nucl. acids. Res., 1989, №13, p. 5410.

155. Marmur J., Doty P. Thermal renaturation of deoxyribonucleic acid. // J. Molecul. Biol., 1961, v.3, p.585-594.

156. Martm R. H. Non-radioactive techiques for the labelling of nucleic acids // Biotech. Adv., 1991, v.9, p. 185-196.

157. Mauriello G., Moschetti G., Villani F., Coppola S. Antibiotic resistance of coagulase negative staphylococcal isolated from artisanal Naples-types salami // Int. J. Food Sci. and Nutr, 2000, -51, № 1, p. 19-24.

158. McCol K. A., Gould A. R. Detection and characterisation of bilietongue virus using the polymerase chain reaction // Virus. Res., 1991, v.21, № 1, p. 19-34.

159. Meyer R. F., Brown C.C., House C., House J. A., Monitor T. W. Rapid and sensitive detection of foot-and-mouth disease virus in tissues by en2ymatic RNAamplification of the polymerase gene // J. Virol. Meth., 1991. v.34, № 2, p. 161-172.

160. Metcalf T. G., Jiang X., Ester M. K., Melnick J. L. Nucleic acid probes and molecular hybridization for detection of viruses in environmental samples // Progr. Med.ViroL, 1988. v. 35, p. 186-214.

161. Miller G., Tare C. R. Mallmson E.T. Salmonella. Xylose-lysine-tergitol 4: an unproved selective agar medium for the isolation of Salmonella // Poultry Sci., 1991, № 12, p. 2429-2432.

162. Moseley S.L., Hyg J. Detection of enterotoxigen Esherichia coli by DNA colong hybridization // J. Infect., 1989, № 6, p. 892-898.

163. More Mardret J., Henricn James B. Quantitative cell lyses of indigenous microorganisms and rapid exstraction of microbial DNA from sediment // Appl. and Environ. Microbiol., 1994, 60, № 5, p. 1574-1580.

164. Murtanyh M.P., Lin G.F., Haggard D.L., Weber A.F., Meiske J.C. Detection of bovine leukemia virus in cattle by the polymerase chain reaction // J. Virol. Meth, 1991, v. 33, № 11-12, p. 73-85.

165. Neeelam S. A rabid method for the preparation of plastid DNA // Indian J. Exp. Biol., 1995, 33, № 5, p. 387-391.

166. Paul P.S. Application of nucleic acid probes in veterinary infectious diseases // Voter. Microbiol., 1990, v. 24, № 3/4, p. 409-417.

167. Peirce C. DNA technology provides new tools for identifycirung genetic causes of disease // Res. Resour. Report., 1988, №8, p. 1-4.

168. Persing D.H., Smith T.F., Tenover F.C., White T.J. Target selection and optimization of amplification reaction // In: Diagnostic molecular microbiology, ASM, 1993, p. 88-102.

169. Piparinen H., Vaheri A. Genotyping of herpes simplex virusesby polymerase chain reaction //Arch. Virol, 1991, v. 119 № 13-4, p. 275-283.

170. Pulco P R., Khatib R., Barientes S., Atmar R., Tony M.A. Detection of all 6 Coxsackieviral cerotype by polymerize chain reaction // J. Cell Biochem., 1991, Suppl. 15, p. 194.

171. Ranki M. Sandwich hybridization as a convinient method for detection of nucleic acids in crude samples // Gene 21, 1983, p. 77.

172. Renz M., Kiirz C. A colorirnetric method for DNA hybridization // Nlicleic Acids Res., 1984. v. 12, № 8, p. 13435-13444.

173. Rifai S., Barbancon V., Prevost G., Piemont Y. Staphylococcus aureus Synthetic exfoliative toxin A and B DNA probes for detecton of toxigenic Staphylococcus aureus strains // J. Clin. Microbiol., 1989, №3, p. 504-506.

174. Rowley A. H., Wolinsky S. M., Sambol S. P., Barkholt L, Elirnst A., Andersson J. P. Rapid detection of citomegalovirus DNA in blood of renal transplant patients by in vitro enzymatic amplification // Transplantation., 1991, v. 51, №5, p. 1028-1033.

175. Rusvai F., Belak S. Detection of bovine adenovirus nucleic acid sequences in nasal specimens by biotinylated DNA probes // J. Virol., 1992, № 4, p. 311316.

176. Salimans M.M., Holsappel S., Rigke F.M., Jima N.M. Rapid detection of hyman parvovivus B 19 DNA by dot- hibridization and the polimerase chain refction // J. Virol. Meth., 1989, № 1, p. 19-28.

177. Sausern J. Detection of specific sequences among DNA fragments separated by gel electroohoresis // J.Molec.Biolog., 1975, 98, p. 503.

178. Serhir B., Dugord D., Jacques M., Higgins R., Harel J. Cloning and characterization gene (dexS) from Streptococcus suis // GENE, 1997, № 190, p. 257-261.

179. Sonnleither B. Microorganisms dynamic packuption // J. Biotechnol, 1998, v. 65, № 1, p. 47-60.

180. Specter M., Bendinelli M., Friedman H. Quick indication of infectional agent// Immunol. Infect., 1999, v. 28, № 2-3, p. 203-204.

181. Tchen P., Ranki M. Time-resolved fluoromentri, a sensitive method to quantify DNA-hybrids //Nucl. Acid Res., 1986, № 2, p. 1017-1028.

182. Tenover F. Studies ofantimicrobiol resistance genes using DNA probes // Antimicrob Ag Chemother., 1986, №5, p.721-725.

183. Todd D., Creelan J. L., MeNulty M. S. Dot-hybridization assay for chicken anemia agent using a cloned DNA probe // J. Clin. Microbiol., 1991, v.29, № 5, p. 933-939.

184. Trainer G., Hobbs F. New methods for labeling nucleic acids with reporter groups // J. Cell. Biochem., 1989, suppl., №13, p. 289.

185. Vaneechoutte M., Van Eidere J. The possibilities and limitations of nucleus acid amplification technology in diagnostic microbiology // J. Med. Microbiol., 1997, v. 46, № 3, p. 188-194.

186. Verger J. M., Grimont F. Grimon PAD Gray on M Brucella, a monospicific genus as shocon by dioxyribonucleic acid hydridisation // Int J-Syst Bacteriol, 1985, p.292-295.107

187. Viscidi R.P., Yolken R.G. Molecular diagnosis of infection diseases by nucleic acid hybridization // Mol. and Cell. Probes., 1987, №1, p. 3-14.

188. Wetmur J. G., Davidson W. Kinetics ofrenaturation of DNA // J. Mol. Biol., 1968, №31, p. 349-370.

189. Wilde J., Yolken R., Willoughby R., Eiden J. Improved detection of rotavirus shedding by polymerase chain reaction // Lancet., 1991, v. 337, № 8737, p. 323-326.

190. Wilson A. et al., Biotechiques // 1992, v. 8, p. 652-668.108