Разработка технологии получения и исследование биологической активности меланинсодержащих препаратов тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.23, кандидат биологических наук Скорбина, Елена Александровна

• Скорбина, Елена Александровна
• кандидат биологических наук
• 2005

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Скорбина, Елена Александровна

ф Введение

Глава 1. Характеристика меланинсодержащих биологически активных веществ

1.1. Свойства природных меланинов

1.1.1. Источники природных меланинов

1.1.2. Характеристика физико-химических свойств меланинов

1.1.3. Методы выделения меланинов

1.2. Биологическое значение меланинов 22 1.2.1. Роль грибов в почвенных процессах гумусообразования

Глава 2. Методы и объекты исследований

2.1. Методы исследований

2.1.1. Биотехнологический метод получения чистых грибов

2.1.2. Микробиологические методы тестирования препаратов 43 на антифунгальную активность

2.1.3. Метод определения ростостимулирующей активности

2.1.4. Метод оценки биологической эффективности препаратов щ 2.2. Физико-химические методы исследований

2.2.1. Метод определения биоантиоксидантных свойств

2.3. Методика проведения полевых опытов

2.4. Характеристика объектов исследования

Глава 3. Теоретическое обоснование использования меланинов в качестве основного компонента для получения препаратов ^ ^ ^ с полифункциональными свойствами

Глава 4. Разработка технологии получения комплексных биопрепаратов с полифункциональным действием

4.1. Выделение и исследования свойств меланинов различной природы с^у

4.2. Разработка технологии получения биопрепаратов с полифункциональными свойствами на основе меланинов уд и пиразолинов

4.3. Физико-химические показатели выделенного меланина

Л грибного происхождения

Глава 5.Исследование биологической активности препарата из грибного меланина, пиразолина и комплексного препарата на их основе

5.1. Изучение ростостимулирующей активности комплексных препаратов на основе меланина и пиразолина

5.2. Изучение биоантиоксидантной активности препарата на основе меланина

5.3. Исследование влияния препаратов на мицелий и споры фитопатогенных грибов in vitro

5.4. Расчет эффективности производства комплексного препарата и его применения в растениеводстве

Выводы

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Разработка технологии получения и исследование биологической активности меланинсодержащих препаратов»

Актуальность темы. Важнейшим направлением современной биотехнологии является разработка технологии получения биологически активных веществ, в частности, меланинов, которые находят широкое применение в медицине, фармакологии, пищевой и других отраслях промышленности.

В природе распространены меланины животного и микробиологического происхождения, проявляющие высокую биологическую активность, отличающиеся широким разнообразием по химическому составу, физиологическим свойствам.

Актуальным представляется поиск наиболее перспективного сырьевого источника для выделения меланинов и разработка на его основе биотехнологии получения препарата, с полифункциональными свойствами и с максимальным сохранением комплекса природных соединений.

Анализ литературных источников за последние 20 лет, указывает на ограниченное число публикаций по применению меланинсодержащих препаратов в качестве активных регуляторов роста растений. В связи с этим возникает необходимость разработки препарата на основе меланинов, а также комплекса/ исследований данного препарата с оценкой экономической эффективности^его применения в растениеводстве.

Цель работы - разработка технологии получения комплексного препарата с полифункциональным действием на основе природного меланина и пиразолинов, изучение его биологической активности и проведения исследований по применению данного препарата в растениеводстве.

Задачи исследования: - изучить влияние сырьевого источника на выход меланина, и его биологическую активность, исследовать ростостимулирующую и фунгицидную активность синтетических препаратов на основе пиразолинов;

- провести исследования с целью установления оптимального сырьевого источника меланина, оптимальных концентраций компонентов препарата и их соотношение;

- разработать технологию получения комплексного препарата на основе меланина и пиразолина, изучить его состав и провести стандартизацию;

- исследовать ростостимулирующие и фунгицидные свойства комплексного препарата и его компонентов в лабораторных условиях, исследовать действие препарата на продуктивность агрокультуры и его влияние на качество продукции;

- оценить экономическую и энергетическую эффективность, экологическую безопасность разработанной технологии получения комплексного препарата и его применении в растениеводстве.

Научная новизна работы. Впервые установлен эффект ростостимулирующей активности природного меланина при действии на семена озимой пшеницы. Установлено, что меланин грибного происхождения рода Penicillium по ростостимулирующей активности значительно превосходит активность меланинов растительного происхождения и данный сырьевой источник обеспечивает значительный выход пигмента и его высокую биологическую активность.

Впервые исследованы ростостимулирующая и фунгицидная активности 22-х препаратов на основе пиразолинов, среди которых наибольшую антифунгальную активность проявляют 5 производных пиразолинов.

Впервые разработана технология получения комплексного препарата, включающая этапы микробиологического синтеза, дезинтеграции грибного мицелия, экстракции в щелочной среде меланинов с последующим осаждением продукта и смешиванием с производным пиразолина (4-(5-гидрокси-3-метил-1-фенил-4,5-дигидро-1Н-пиразол-4-илазо) бензолсульфокислота). Осуществлена стандартизация препарата по биологической эффективности, биоантиаксидантной активности, уровню оптической плотности, определены условия сохранения стабильности препарата в течение трех лет.

Установлен эффект синергизма в комплексном препарате на основе грибного меланина и пиразолина, который проявляется в увеличении всхожести семян озимой пшеницы до 100% и в способности подавлять прорастание спор фитопатогенных грибов в 2-2,5 раза интенсивнее контроля.

Выявлен положительный эффект действия комплексного препарата на основе меланина и пиразолина, проявляющейся в стимуляции роста и развития растений, повышении устойчивости растений к заболеваниям при предпосевной обработке семян озимой пшеницы.

Научно-практическая значимость. В ходе исследований были получены экспериментальные данные по оптимизации стадий биотехнологии получения комплексного препарата с полифункциональными свойствами. Препарат стандартизирован по биологической эффективности, установленной проявлением ростостимулирующей активности на семена агрокультур, уровню оптической плотности, биоантиоксидантным свойствам.

Проведенные производственные испытания препарата на основе меланина и 4-(5-гидрокси-3-метил-1-фенил-4,5-дигидро-1Н-пиразол-4-илазо) бензолсульфокислоты показали, что при обработке семян пшеницы препаратом при дозировке 2 л/т наблюдается эффект повышения на 12,3% продуктивности растений, установлено значительное улучшение качественных показателей продукции растениеводства, что подтверждено актом внедрения.

Основные положения диссертации использованы в учебном процессе по курсу «Основы биотехнологии» студентов агрономических специальностей в Ставропольском государственном аграрном университете.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Результаты сравнительных исследований по проявлению ростостимулирующей активности меланинов микробиологического и растительного происхождения.

2. Синтез препарата на основе пиразолина 4-(5-гидрокси-3-метил-1-фенил-4,5-дигидро-1Н-пиразол-4-илазо) бензолсульфокислота, с установлением его ростостимулирующей активности при действии на растение и фунгицидной активности при действии на споры фитопатогенных грибов.

3. Разработка технологии получения комплексного препарата на основе меланина и пиразолина, включающая этапы микробиологического синтеза, дезинтеграции грибного мицелия, экстракции меланинов в щелочной среде, с последующим осаждением пигмента и смешиванием с производным пиразолина.

4. Результаты исследований по выявлению в комплексном препарате на основе меланина и пиразолина, с усилением ростостимулирующей активности, фунгицидных и биоантиоксидантных свойств, обеспечивающих повышение продуктивности агрокультуры при использовании препарата для предпосевной обработки агрокультуры.

Апробация работы. Результаты работы были представлены на научно-практических конференциях Ставропольского Государственного Аграрного Университета в 2002, 2003, 2004, 2005 годах; Международной научной конференции «Повестка дня на XXI век: Программа действия - экологическая безопасность и устойчивость развития» (Ставрополь, 2003); Всероссийской научной конференции «Биотехнология 2003» (Сочи, 2003); научно-методической конференции «Университетская наука - региону» (Ставрополь, 2004); 68-й научно-практической конференции «Проблемы развития биологии и экологии на Северном Кавказе» (Ставрополь, 2004); Всероссийской научной практической конференции посвященной 40-летию факультета защиты растений (Ставрополь, 2004); 50-й научной конференции «Университетская наука - региону» (Ставрополь, 2005).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 11 работ.

Объем и структура работы. Диссертация состоит из введения, 5 глав, выводов, библиографического списка, примечаний. Работа изложена на 136 страницах, содержит 9 рисунков, 25 таблиц. Библиографический список состоит из 156 наименований.

Заключение диссертации по теме «Биотехнология», Скорбина, Елена Александровна

Выводы

1. Проведением системного скрининга природных объектов, осуществлен выбор сырья для выделения меланина. Установлено, что меланин грибного происхождения рода Penicillium по ростостимулирующей активности в 1,5 раза превосходит активность меланина растительного происхождения. Исследован элементный состав меланина, установлены его особенности строения по данным ИК- и УФ-спектроскопии.

2. Осуществлен синтез производных пиразолина и проведены сравнительные исследования их фунгицидной и ростостимулирующей активностей. Установлено, что наибольшую фунгицидную активность проявляет препарат (4-(5-гидрокси-3-метил-1 -фенил-4,5-дигидро-1 Н-пиразол-4-илазо) бензолсульфокислота). Исследован состав данного биологически активного вещества в сопоставлении с данными РЖ- и масс-спектроскопии.

3. Разработана технология получения комплексного препарата, включающая стадии выделения грибов рода Penicillium в чистую культуру, микробиологический синтез мицелия, дезинтеграцию сырья, получения экстрактов меланинов, смешивание с производным пиразола, стерилизующую фильтрацию, розлив и фасовку. Планированием и проведением многофакторного эксперимента, оптимизирована стадия экстракции меланинов с получением адекватных уравнений регрессии, указывающих на то, что факторы продолжительности экстракции и соотношение масс сырья и экстрагента, оказывают доминирующее влияние на биологическую активность препарата.

4. Установлен эффект синергизма в комплексном препарате на основе грибного меланина и пиразолина (4-(5-гидрокси-3-метил-1-фенил-4,5-дигидро-1Н-пиразол-4-илазо) бензолсульфокислота), который проявляется в увеличении всхожести семян озимой пшеницы до 100% и в способности подавлять прорастание спор фитопатогенных грибов в 2-2,5 раза интенсивнее контроля. Механизм физиологического действия меланинов в комплексном препарате на семена озимой пшеницы, возможно, определяется активизацией процессов окислительного и фотосинтетического фосфорилирования и усилением белок-синтезирующей системы.

5. Определены сравнительные биоантиоксидантные свойства грибного меланина, экстракта биогумуса и водной вытяжки из почвы в реакции торможения гидроксилирования анилина. Установлено, что противорадикальная активность меланина по реакции ингибирования гидроксильных радикалов, образующихся при реакции Фентона, в 1,4-1,9 раза выше активности экстрактов из биогумуса и чернозема. Биоантиоксидантная активность меланина определяется особенностями его строения, полифункциональностью органических групп.

6. По данным экспериментальных исследований выявлено, что комплексный препарат на основе меланина и производного пиразолина является активатором прорастания семян зерновой культуры, что обеспечивает повышение уровня продуктивности озимой пшеницы по сравнению с контролем на 12,3% в производственных условиях, а также снижение зараженности зерна инфекцией на 27% эффективнее по сравнению с контролем.

7. Выявлена экономическая и энергетическая эффективность применения разработанного препарата для предпосевной обработки семян озимой пшеницы с увеличением эффективности энергозатрат в 3,4 раза по сравнению с показателем контроля.

Практические рекомендации

В технологии получения меланинсодержащих препаратов, в качестве исходного сырья рекомендуем использовать мицелий гриба рода Penicillium после 14 дней роста, который предварительно дезинтегрируют ультразвуком и далее подвергают экстракции 5% раствором гидроксида натрия, при массовом соотношении 1:25-1:35 с последующим осаждением продукта раствором соляной кислоты, что позволяет получить выход меланина до 10%.

В технологии возделывания озимой пшеницы сорта Дон-95 рекомендуем предпосевную обработку комплексным препаратом на основе меланина и пиразолина, с нормой расхода 2 л/т, что позволяет получить прибавку биологического урожая озимой пшеницы 3,7-5,7 ц/га.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Скорбина, Елена Александровна, 2005 год

1. Аверьянов, А.А. Влияние меланина на цитотоксичность кислородных радикалов / А.А. Аверьянов, В.П, Лапикова, Г.Г, Петелина// Биохимия. -1987.-Т. 52.-№9.-С. 1539-1546.

2. Агаджанян, А.Е. Водорастворимый меланин микробного происхождения / А.Е. Агаджанян, А.А, Амбарцумян // Моск. межд. конгресс: Биотехнология: состояние и перспективы развития. Москва .- 2004. - С. 312.

3. Алиев, С.А. Парамагнетизм и физиологическая активность гумусовых кислот / С.А. Алиев // Тр. 8-го Всесоюз. О-ва почвовед. Новосибирск, 1989.

4. Алиев, С.А. Парамагнитные свойства и физиологическая активность гумусовых кислот / С.А. Алиев // Теория действия физиологически активных веществ: Тр. ДСХИ. Днепропетровск. - 1983. - Т. 8. - С. 7880.

5. Андреев, Л.Н. Активность и изоэнзимный состав пероксидазы листьев пшеницы, пораженных ржавчиной / Л.Н. Андреев, Т.В. Верзилова // Изв. АН СССР Сер. Биология. 1973. - № 4. - С. 481-487.

6. Безрукова, М.В. Гормональный уровень в защитном действии салициловой кислоты на рост проростков пшеницы при водном дефиците / М.В. Безрукова, А.Р. Сахабутдинова // Агрохимия. 2001. -№2.-С. 51-54.

7. Беляева, В.В. Технологические аспекты биологической защиты овощных культур от болезней в защищенном грунте /В.В. Беляева // Вестник с.-х. науки. 1990. - № 1.- С. 26-30.

8. Ю.Бондакенко, Н.В. Биометод в интегрированной защите растений от вредителей и болезней / Бондаренко Н.В. // Сельскохозяйственная биология. 1988. - № 3. - С. 122-136.

9. Воронин, A.M. Биологические препараты на основе псеудомонад / A.M. Воронин, В.В. Кочетков // Агро XXI. 2000. - № 13. - С. 3-5.

10. Борщевская, М.И, Развитие представлений о биохимии и фармакологии меланиновых пигментов / М.И. Борщевская, С.М. Васильева // Вопросы медицинской химии. 1999. - № 1. - С. 24-35.

11. Бриттон, Т. Биохимия природных пигментов / Т. Бриттон. М.: Мир. -1986.-422 с.

12. Брыкалов, А.В. Исследование влияния экстрактов сорных растений на семена зерновых культур / А.В. Брыкалов, Е.М. Головкина // Сб. науч. трудов: защита и карантин растений. Ставрополь. — 2003. — 148 с.

13. Брыкалов, А.В. Получение биопрепаратов на основе методов аффинной сорбции и иммобилизации: Дисс. . д-ра хим. наук / А.В. Брыкалов. С-Пб.-ЗЗОс.

14. Брыкалов, А.В. Получение и исследование биопрепаратов растительного происхождения /А.В. Брыкалов, Л.В. Мазницына // Современныедостижения в химии, биологии и экономике: Сб. науч. тр. Ставрополь, 2004.- С. 14-18.

15. Буга, С.Ф. Биологические средства защиты огурцов от паутинного клеща и мучнистой росы в закрытом грунте / С.ф. Буга, В.И. Сидляревич / Актуальные вопросы защиты растений в БССР. Минск: Урожай. -1974. - С.63-68.

16. Булл, Т.А. XI Междунар. конф. по микробиологии / Т.А. Булл / Тезисы докл. Москва. - 1966. С. 106.

17. Буров, В.Н. Биологически активные вещества в защите растений / В.Н. Буров, А.П. Сазонов // Тр. ВАСХНИЛ. М.: Агропромиздат, 1987. - 197 с.

18. Вакуленко, В.В. Регуляторы роста. Амбол / В.В. Вакуленко, В.М. Успилгов // Защита растений. 1995. - № 12. - С. 38-39.

19. Васецкая, М.Н. БАВ против болезней пшеницы / / М.Н. Васецкая // Защита и карантин растений. 20016. - № 11. - С. 23.

20. Васецкая, М.Н. Эффективный биопрепарат в защите зурновых культур от болезней / М.Н. Васецкая // Агро XXI. 2001а. - № 8. - С. 14-15.

21. Васильченко, В.Ф. Действие актиномицетов на некоторые биохимические процессы в растениях / В.Ф. Васильченко, С.И. Деревянко // Сельскохозяйственная биология. 1971. - вып. 6. - № 1.

22. Великанова, Л.Н. Органическое вещество почвы и процессы его трансформации / Л.Н. Великанова, Ю.П. Сидорова. Л.: Наука, 1980. -380 с.

23. Винаров, А. Ю. Биотехнология пигмента меланина / А. Ю. Винаров, З.Н. Робышева, Е.Н. Дирина // Моск. межд. конгресс: Биотехнология: состояние и перспективы развития. Москва .- 2004. - С. 96.

24. Винаров, А.Ю. Микробный меланин. Биотехнология получения и применения / А.Ю. Винаров, Т.Е. Сидоренко, З.Н. робышева // Моск. межд. конгресс: Биотехнология: состояние и перспективы развития. -Москва .-2005.-С. 185.

25. Горовая, А.И. Роль физиологически активных веществ гумусовой природы в повышении устойчивости растений к действию пестицидов / А.И. Горовая // НДВШ Биологические науки. 1988. - № 7. - С. 5-16.

26. Горовая, А.И. Роль физиологически активных гумусовых препаратов в регуляции процессов клеточного цикла / А.И. Горовая, А.Ф. Кулик // Регуляция клеточного цикла. Киев, 1985.- С. 101-109.

27. ГОСТ 10840-64. Зерно. Метод определения натуры. М.: Издательство стандартов, 1994. - 5 с.

28. ГОСТ 10842 76. Зерно. Метод определения массы 1000 зерен. - М.: Издательство стандартов, 1980. - 8 с.

29. ГОСТ 10968-88. Зерно. Метод определения энергии и способности прорастания. М.: Издательство стандартов, 1988. - 5 с.

30. ГОСТ 10987-76. Зерно. Метод определения стекловидности. М.: Издательство стандартов, 1992. - 17 с.

31. ГОСТ 12038 84. Семена сельскохозяйственных культур. Методы определения всхожести. - М.: Издательство стандартов, 1985. - 58 с.

32. ГОСТ 12044 93. Семена сельскохозяйственных культур. Метод определения зараженности болезнями. — Минск, Издательство стандартов, 1995. - 88 с.

33. ГОСТ 1230-01. Упаковка лекарственных препаратов. М.: Издательство стандартов, 1987. - 5 с.

34. ГОСТ 13586-83. Правила приемки и методы отбора проб. М.: Издательство стандартов, 1985. - 58 с.

35. ГОСТ 20290-74. Семена сельскохозяйственных культур. Определение посевных качеств семян. Термины и определения. - М.: Издательство стандартов, 1987. - 24 с.

36. ГОСТ 30405-83. Метод определения длины и массы проростков растений. М.: Издательство стандартов, 1991. - 5 с. ^

37. Гринько, Н.Н. Возможность использования Trichoderma harzianum Rafai в борьбе с патогенами томатов / Н.Н. Гринько, B.JI. Родигин // Биологический метод защиты растений. Минск. - 1990. - С. 203-204.

38. Гришечкина, С.Д. Фунгистатистическая активность различных подвидов Bacillus thuringiensis / С.Д. Гришечкина, О.В. Смирнов, Н.В. Кандыбин // Микология и фитопатология. 2002 - Т. 36. - вып. 1. - С. 58-62. ^

39. Гуминский, С.А. Механизм и условия физиологического действия гумусовых веществ на растительные организмы // С.А. Гуминский / Почвоведение. 1957. - № 12. - С. 72-78.

40. Доспехов, Б.А. Планирование полевого опыта и статистическая обработка его данных / Б.А. Доспехов. М.: Колос, 1972. - 207 с.

41. Дружинина, М.О. Фотозащитное действие меланина^ микробиологического происхождения /М.О. Дружинина, Г.Г. Пухова,

42. H.М. Жданова // Укр. Биохим. Журн. 1994. - № 3. - С. 271-273.

43. Евса, Т.В. противовоспалительная и антиоксидантная активность растительного меланина / Т.В. Евса // Мат. Межд. Пушкинской конф.: Биология наука XXI века. - Пушкино. - 2004. С. 21.

44. Жданова, Н.Н. Меланинсодержащие грибы в экспериментальных ^ условиях / Н.Н. Жданова, А.И. Василевская. Киев: Н.Д. - 1988.- 195 с.

45. Жданова, Н.Н., Походенко В.Д. Изв. АН СССР, серия биол. 1970. - №1.-С. 83.

46. Жданова, Н.Н., Походенко В.Д. Изв. АН СССР, серия биол. 1973. - № 3.-С. 324-333.

47. Зазимко, М.И. Новые препараты для защиты колосовых культур / М.И. Зазимко, Л.Д. Жалиева, Л.В. Маслиенко // Защита и карантин растений. -1999.-№2.-С. 27. 53.Зайцев, Г.Н. Математический анализ биологических данных / Г.Н. Зайцев. М.: Наука, 1991. - 184 с.

48. Запрометова, К.М. О пигментах микроскопических темноокрашенных грибов / К.М. Запрометова // Вест. Моск. ун-та. Сер. биол. почвоведение. 1971. -№З.-С. 61-67.

49. Запрометова, К.М. Пигменты теиноокрашенных грибов и их экологическая роль / К.М. Запрометова, Т.Г. Мирчинк / Микробные метаболиты. -М.: Наука.- 1979. 149 с.

50. Затула, Д.Г. Слабоспицка, А.Т., Свищу к, А. А. Микробиологигеский журнал. 1976. - № 1. - С. 29-32.

51. Звягинцев, Д.Г. Методы почвенной микологии и биохимии /Д.Г.

52. Звягинцев, И.В. Асеева. М.: Изд-во Моск. ун-та, 1980. - 224 с. 58.Звягинцев, Д.Г. О природе гуминовых кислот почв / Д.Г. Звягинцев, Т.Г.

53. Мирчинк // Почвоведение. 1986. - № 5. - С. 39-43. 59.3енков, Н.К. Окислительный стресс / Н.К. Зенков, В.Е. Ланкин, Интерпериодика. - 2001. - 343 с.

54. Иванов, Т.М. О каталитических функциях пероксидазы хлоропластов / Т.М. Иванов, В.А. Рубин // Доклады АН СССР Сер. Биология. 1970. -Т. 190. -№ 1-С. 114-117.

55. Иванова, Е.А. Активность гриба Trichoderma harzianum в отношении сумчатой стадии возбудителя парши яблони Venturia inaequalis (Cke)

56. Wint. в условиях агроценоза плодового сада / Е.А. Иванова // Конф. «Интродукция микроорганизмов в окружающую среду». М., 1994. - С. 46.

57. Карташова, И.А. Оценка антифунгального действия суммы тритерпеновых гликозидов, выделенной из двух видов сильфии / И.А. Карташова, Э.С. Давидянц // Защита и карантин растений: Сб. науч. тр. -Ставрополь, 1998.-С. 17-20.

58. Кефели, В.И. Фитогомоны и природные ингибиторы в процессах роста растений / В.И. Кефели, Биология развития растений. М.: Наука, 1975. -С. 89-110.

59. Кобраков, К.И. Синтез эффективных низкотоксичных фунгицидов, содержащих пиридиновые фрагменты / К.И. Кобраков, И.И. Рыбина / Проблемы экологической безопасности Северо-Кавказского региона: Мат. регион, конф. Ставрополь, 2000. - С. 58-59.

60. Кобылье кий, Г.Н. Регуляторы роста защищают зерновые культуры от болезней / Г.Н. Кобыльский, В.П. Кратенко, М.М. Васецкая // Агро XXI. 2001. - № 1.-С. 12-13.

61. Комисаренко, Н.Ф. Меланин из семян Aesculus hippocastanum / Н.Ф. Комисаренко, А.И. Деркач, А.А, Зинченко // Фармакол. 1995. - № 4. -С. 33-34.

62. Коновова, И.Д. Воздействие гумусовых веществ на рост и развитие растений / И.Д. Кононова, И.А. Панкова // Докл. АН СССР. 1950. - Т. 73.-№ 5.-С. 1069-1071.

63. Коржова, Л.П. Радиопротекторные свойства меланина / Л.П. Коржова, Е.В. Фролова // Биохимия.- 1989. № 6. - С. 992-998. /М.О. Дружинина, Г.Г. Пухова, Н.М. Жданова // Укр. Биохим. Журн. - 1994. - № 3. - С. 271273.

64. Красильников, Н. А. Лучистые грибки и родственные им организмы / Н.А. Красильников. М.-Л.: Изд-во АН СССР. - 1938.

65. Кузнецова, И.Ф. Альтернативы протравливанию нет! / И.Ф. Кузнецова // Защита растений. 1993. - № 7. - С. 44-47.

66. Кунижев, С.М. Катализируемые процессы в биосинтезе меланина / С.М. Кунижев, С.Ф. Аполохлва // Катализ в биотехнологии, химии и химических технологиях: Тез. докл. Всеросс. конф. Тверь, 2000. - С. 14-16.

67. Кутиков, Е.С. Тканевая терапия / Е.С. Кутиков / Тез. докл. науч. конф. -1983.-С. 202-204.

68. Панкин, В. 3. Метаболизм липоперексей в тканях млекопитающих / В.З. Ланкин // Биохимия липидов и роль в обмене веществ. М.: Наука. 1981. - С. 75-78.

69. Ларионов, Г.И. Применение реглятора роста на посевах яровой пшеницы / Г.И. Ларионов, О.Е. Тарасова // Агро XXI. 2001. - № 2. - С. 11.

70. Лебедев, В.Б. Регулятор роста на пшенице в Саратовской области / В.Б. Лебедев, Д.А. Юсупов, Л.М. Кудишова // Агро XXI. 2002. - № 5. - С. 11.

71. Либерсон, М.Н. К вопросу о тепловом повреждении пигментированных тканей лазерным излучением / М.Н. Либерсон / Тез. докл. Всесоюзн. науч. конф.: применение методов средств лазерной техники в биологии и медицыне. Киев. - 1981. - С. 207-211.

72. Лили, В. Физиология грибов / В. Лилли. М.: Изд-во иностр. лит-ры. -1957.-531 с.

73. Линник, Л.И. Сохранение антагонистической активности почвы в условиях многолетней культуры / Л.И. Линник // Тез. докл. науч.-производств. конф. Минск. - 1990. - С. 229-230.

74. Лобанкова, О.Ю. Экологические аспекты защиты ячменя от болезней в зоне неустойчивого увлажнения Ставропольского края / О.Ю. Лобанкова // Автореф. дисс. к.б.н. 2004.

75. Лях, С. П. Микробные меланины / С.П. Лях, Е.А. Рубан. М.: Наука. -1972.-321 с.

76. Лях, С.П. Микробный меланиногенез и его функции / С.П. Лях.- М.: Наука. 1981.-274 с.

77. Макаров, А.А. 40 лет на службе сельскому хозяйству страны / А.А. Макаров // Защита и карантин растений. 1999. - № 3. - С. 16-18.

78. Максимов, И.В. «Хитин-специфичные» пероксидазы в растениях / И.В. Максимов, Е.А. Черепанова // Биохимия. 2003. - Т. 68. - С. 131-136.

79. Максимов, И.В. О природе взаимодействия анионных пероксидаз с хитином \ И.В. Максимов, Е.А. Черепанова // Мат-лы 6-й междунар. конф. «Новые достижения в исследовании хитина и хитозана» М.: Изл-во ВНИИРО, 2001.-С. 88-91.

80. Максимов, И.В. Функциональная активность хитина и его олигомеров / И.И. Максимов, Л.Г. Яруллина // Агрохимия. 2004. - № 8. - С. 79-82.

81. Малама, А.А. Характеристика гриба Pullularia prototropha, получение из него меланина и полисахарида и влияние данных биополимеров на опухоль Эрлиха / А.А. Малама / Автореф. канд. дисс. Минск. - 1966.

82. Марфенина, Н.П. Фотохимическая деструкция гумусовых кислот / И.П. Марфенина, Т.Г. Мирчинк // Почвоведение. 1973. - № 1. - С. 41-45.

83. Методика оценки энергетической эффективности применения средств защиты растений /ВАСХНИЛ. М., 1991. - 50 с.

84. Методические рекомендации по биоэнергетической оценке севооборотов и технологии выращивания кормовых культур /ВАСХНИЛ. М, 1981 -50 с.

85. Методические рекомендации по оценке фитосанитарного состояния посевов пшеницы при интенсивных технологиях возделывания /ВНИИ ин-т защиты растений. Л., 1985. - 67с.

86. Методические рекомендации сортоиспытания сельскохозяйственных культур. М.: Колос, 1985. - 186 с.

87. Методические указания по определению зараженности семян и проростков злаковых культур грибными болезнями / Потлайчук В.И., Семенов А .Я., Таценко В.П. Л.: ВИЭР, 1976. - 59 с.

88. Методы учета вредных организмов // Защита и карантин растений, 2002 -№3.-С. 51-54.

89. Методы фитоэкспертизы семян и апробации посевов // Рекомендации ВНИИЗРМСХП РФ / Защита и карантин растений. 1999. - №2. - С. 1 -3.

90. Миньков, А.А. Меланин !? / А.А. Миньков // Вокруг пленеты. 2000. -№ 19.-С. 10-11.

91. Мирчинк, Т.Г. Почвенная микология / Т.Г. Мирчинк. М.: МГУ.- 1988. 220 с.

92. Наумова, Н.А, Анализ семян на грибную и бактериальную инфекцию. -М.: Колос, 19780.-208 с.

93. Неферов, К.В. К вопросу о значении гуминово-минеральных соединений как питательной среды для растений / К. В. Неферов // Сельское хозяйство и лесоводство. = 1987. № 1. - С 157-159.

94. Орлов, Д.С. Гумусовые кислоты почв и общая теория гумификации / Д.С. Орлов, Е.П. Осипова. М.: Наука, 1990. - 343 с.

95. Пантелеев, А.А. Изучение микробов антагонистов и их метаболитов для борьбы с болезнями растений / А.А. Пантелеев // Биологический метод защиты растений от болезней. - Кишинев, 1986. - С. 29-33.

96. Пивоворов, А.П. О природе физиологической активности гуминовых кислот в связи с их строением / А.П. Пивоваров // Гуминовые удобрения. Киев. - 1962. - Ч. 2. - С. 134-148.

97. Пидопличко, В.Н. Антагонистическое действие бактерий родов Pseudomonas и Bacillus на возбудителя корневой гнили озимой пшеницы / В.Н. Пидопличко, А.Д. Гарагуля // Микология и фитопатология. 1979. -Т. 13.-вып. 1.-С. 53-57.

98. Пидопличко, Н. М. Грибы паразиты культурных растений: Определитель / Н.М. Пидопличко / Т. 2. Грибы несовершенные. - Киев, Изд-во «Наукова Думка». - 1977. - 299 с.

99. Плотникова, С.И. Влияние меланина на мутационный процесс, индуцированный ионизирующей радиацией в половых клетках животных / С.И. Плотникова, И.Б. Моссе / Тез. докл. VI Всесоюзн. симп. По фенольным соединениям. Ташкент. - 1982. - С. 37-38. ^

100. Рубан, Е.А. Действие ультрафиолетовой радиации на клетку / Е.А. Рубан, С.П. Лях / Изв. АН СССР. 1969. - №3. - С. 401.

101. Сазанович, С.В. Силк не конкурент фунгицидам, а помощник / С.В. Сазанович, Н.Г. Власенко // Защита и карантин растений. 2003. - № 2. -С.31.

102. Самерсов, В.Ф. Эколого-экономическая оценка систем защиты^ растений / В.Ф. Самерсов, Л.И. Трепашко // Защита и карантин растений. -2000. № 10.-С. 20-21.

103. Свиридов, Д.А. Эффективный препарат / Д.А. Свиридов // Защита и карантин растений. 2002. - № 2. - С. 30-31.

104. Сидорикс, Е.П., Дружинина, М.О., Бурака, А.П., Данко, М.И. Доклад АН Украины. 1994. - № 9. - С. 174-178. *

105. Тарчевский, И.А. Сигнальные системы клеток растений / И.А. Тарчевский. М.: Наука. - 2002. - 294 с.

106. Третьяков, А.П. В поддержку биометода / А.П. Третьяков // Защита растений. 1995. - № 5. - С. 14.

107. Труфанова, А.Н. Влияние бактерий антагонистов на прорастание1. Щ>выживаемость конидий фитопатогенного гриба Helminthosporium sativum / А.Н. Труфанова // Бюл. ВНИИСХ. М. 1988. - № 49. - С. 13-18.

108. Фатхутдинова, Д.Р. Влияние салициловой кислоты на антиоксидантные ферменты в проростках пшеницы / Д.Р. Фатхутдинова, А.Р. Сахабутдинова, И.В. Максимов// Агрохимия. 2004. - № 8. - С. 27-31.

109. Федореева, Л.И. Влияние продуцента этрела и антиоксиданта (ВНТ) на протеолитический аппарат в колеоптилях проростков пшеницы при сопровождающем ранний онтогенез апоптазе / Л.И. Федореева // Биохимия. 2003. - Т. 68. - № 4. - С. 570-576.

110. Федоринчик, Н.С. Микробиологический метод борьбы с вредителями и болезнями / Н.С. Федоринчик // Биологические средства защиты растений. М., 1974. - С.65-68.

111. Физиология и биохимия покоя / под редакцией А. Кан. М.: Наука, 1981.-С. 75-78.

112. Фрайфельдер, Я. Физическая химия / Я. Фрайфельдер. М.: Мир, 1980. -418с.

113. Христева, Л. А. Роль гуминовой кислоты в питании растений / Л.А. Христева // Тр. Почв, ин-та им. В. В. Докучаева. 1951. - Т. 38. - С. 108184.

114. Христева, Л.А, Влияние гуминовых кислот на рост растений при различном соотношении питательных веществ в начале развития / Л.А. Христева // Докл. ВАСХНИЛ. 1947. - Вып. 10. - С. 23-29.

115. Христева, Л.А. Участие гуминовой кислоты и других органических соединений в питании растений / Л.А. Христева // Почвоведение.- 1953. -№ 10.-С. 54-57.

116. Чершова, Т.С. Обзор материалов симпозиума по вопросам исследования БАВ в защите растений / Т.С. Чертова // Защита и карантин растений. 2000. - № 6. - С. 58-62.

117. Чуков, С.Н. Физиологическая активность ростовых стимуляторов и гуминовых кислот почв / С.Н. Чуков, В. Д. Талашкина, М.А. Надпорожская // Почвоведение. 1995. - № 2. - С 169-174.

118. Чумаков, А.Е. Вредоносность болезней сельскохозяйственных культур / А.Е. Чумаков, Т.И. Захарова. М.: Агропромиздат, 1990. - 127 с.

119. Шакирова, Ф.М. Индукция салициловой кислотой устойчивости пшеницы к засолению среды / Ф.М. Шакирова, М.В. Безрукова // Изв. РАН Серия биология. 1997. - №2. - С. 149-153.

120. Шпаар, Д. Защита растений в экологически и экономически обоснованном сельскохозяйственном землеиспользовании / Д. Шпаар // Аграрная наука. 1993. - С. 21-24.

121. Шпаар, Д. Химическая защита растений и экология / Д. Шпаар // Сельскохозяйственная биология. 1997. - № 3. - С. 15-18.

122. Штейнберг, М.Е. Возбудители грибных болезней подсолнечника и грибы антагонисты некоторых из них / М.Е. Штейнберг, Л.И. Бондаренко. Кишинев, 1986. - С. 31-34.

123. Benitez, Н. Structure, chemistry and biosynthesis of the melanins / H. Benitez. 1976. - p. 521.

124. Blois, M.S. Melanins. In: Photochemistry and photobiology reviews / ed. K. C. Smith / Plenum.- New York. 1978. - p. 115.

125. Boicova, I. Peptdes from Streptomyces for plant protection / I. Boicova // Proc. Of 26thItem. Peptides Simp. Montpellier. 2000. - P. 135-137.

126. Bull, A.T. Arch. Biochem. And Biophys. 1970. - № 2. - P. 345.

127. Dekker, J. Agricultral use of antibiotic / J. Dekker / World Review of Pest Control. 1974. - V. 10. - P. 64-67.

128. Durner, J Salicylic acid is a modulator of tobacco and mammalian catalases / J. Durner // Biol. Chem. 1996. - V. 271. - № 45. - P. 28492-28501.

129. Feeney, L. Investigative Ophalmology and Visual Science. 1978. - № 7. -P. 583-600.

130. Felix, Z. Thermal and spectophotometric analysis of fungal melanins and humic compounds / Z. Felix, J. Semotan // Geoderma. 1979. - № 15.

131. Janda, T. Hydroponic treatment with salicylic acid decreases the effects of chilling injury in maize plants / T. Janda, G. Szalai, I. Tari // Planta/ 1999. -V. 208.-P. 175-180.

132. Lambert, C. Photochemical / C. Lambert, S.R. Sinclair, E. J. Land // Photobiology. 1984. - № 1. - P. 5-10.

133. McCormick, L. Melanins. In: Comparative biochemistry / L. McCormick. -Academic Press. New York and London. - 1970/ - p. 727.

134. Metraux, J.-P. Recent breakthroughs in the study of salicylic acid biosynthesis / J.-P. Metraux // Trends Plant Sci. 2002. - V. 7. - № 8. - P. 331-334.

135. Mishra, A. Effect of salicylic acid induct multiple stress tolerance in bean and tomato plants / A. Mishra // Biol. Plant. 1999. - V. 42 - № 3. - 14091415.

136. Nicolaus, R.A. Melanins / R.A. Nicolaus. Paris, Hermain. - 1968. - p. 241.

137. Novicova, I.I. Alirin В and alirin С new antifungal antibiotics from Bacillus subtilis and Streptomyces felleus / I.I. Novicova, Yu. D. Shenin // 1st Inter. Conf. on Chem. Of Antibiotics and related products. - 1998.

138. Paim, S. Characterization of fungal melanins and soil humic acids by chemical anality of soils/ 1990. - № 10. - P. 10.

139. Parhak, J. P. Phenolic polymers of Stachybotrys atra, Stachybotrys chatarum and Ericoccum nigrum in relation to humic acid formation // Soil Science. 1967. - № 10. - P. 107-109.

140. Pilas, J. T. Polimerization of humic substances in natural environments // Humic substances and their role in the environments. Chichester. - 1979. -p. 307.

141. Prota, G. Endeavour / G. Prota, R.H. Thomson. 1976. - № 124. - P. 32-32.

142. Reisinger, O. A comparison of the alkaline extract of Aspergillus niger with humic acids from three soil / O. Reisinger, G. Kilbertus // Sjil Sciense. 1974. - № 9. - P. 16-20.

143. Rowley, O. Chromatophores and color change: the comparative physiology of animal pigmentation / O. Rowley, P. Pirt. Prentice Hall. - New Jersey. -1972. -p/ 122.

144. Sarna, T. Folia histochemica at cytochemica. 1978. - № 4. - P. 275-286.

145. Sealy, R.C. Free Radical in Biology / R.C. Sealy, C.C. Felix, J. S. Hyde // Photobiol. 1980. - № 4. - P. 209-252.

146. Senaratra, T. Acetyl salicylic acid (Aspirin) and salicylic acid induce multiple stress tolerance in bean and tomato plants / T. Senaratra, E. Bunn, K. Dixon // Plant Growth Regul. 2000. - V. 30. - P. 157-161.

147. Slawinska, D. Physiology. Chemical. / D. Slawinska, J. Slawinski, L. Ciesla // Phys. And Mtd. NMR. 1983. - p. 168.

148. Stepien, K. Acta Polon Pharm. 1988. - № 5. - P. 435-440.

149. Webley, K. Studies on the chemical properties of P-type humic acid / K. Webley, O. Jones // International symposium: Humus et plantar VI. 1971