Изучение возможности использования компактина в качестве биопестицида против фитопатогенов и получение высокопродуктивных штаммов гриба Penicillium citrinum - продуцента компактина тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 06.01.11, кандидат биологических наук Украинцева, Светлана Николаевна

• Украинцева, Светлана Николаевна
• кандидат биологических наук
• 2008

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Украинцева, Светлана Николаевна

ВВЕДЕНИЕ.

Глава I ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Возможность использования компактина — природного 10 ингибитора биосинтеза холестерина, в качестве биопестицида против фитопатогенов

1.1.1. Открытие первых представителей класса статинов — компактина и ловастатина.

1.1.2. Физико-химические свойства компактина.

1.2. Биосинтез стеринов.

1.3. Биосинтетическая активность культур грибов и способы ее повышения.

1.3.1. Фазы роста грибов.

1.3.2. Питание и культивирование грибов.

1.4. Мутагенез - метод получения высокопродуктивных 29 штаммов.

1.4.1. Получение мутантов.

1.4.2. Методы отбора мутантов с повышенным уровнем 34 продукции.

Глава II МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

2.1. Материалы.

2.2. Методы.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.

Глава III ИЗУЧЕНИЕ ВЛИЯНИЯ КОМПАКТИНА НА

ФИТОПАТОГЕНЫ.

3.1. Влияние предпосадочной обработки клубней картофеля компактином на развитие фитофтороза.

3.2. Изучение фунгицидных свойств компактина.

3.3. Влияние компактина на прорастание спор гриба Stagonospora nodorum.

3.4. Изучение действия компактина на устойчивость пшеницы к возбудителю септориоза {St. nodorum).

Изучение действия компактина на устойчивость пшеницы

3.5. 61 к возбудителю ржавчины (Puccinia graminis).

3.6. Влияние компактина на устойчивость табака к вирусу табачной мозаики при искусственном заражении.

3.7. Изучение действия компактина на устойчивость к грибу Alternaria longipes.

3.8. Оценка действия компактина на устойчивость картофеля к Х-вирусу при искусственном заражении.

Глава IV ПОВЫШЕНИЕ АКТИВНОСТИ ГРИБА

PENICILLIUM CITRINUM - ПРОДУЦЕНТА КОМПАКТИНА МЕТОДОМ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОГО ИНДУЦИРОВАННОГО МУТАГЕНЕЗА И ОПТИМИЗАЦИЯ УСЛОВИЙ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ

4.1. Оптимизация ферментационной среды для мутанта 18-12.

4.2. Оптимизация условий культивирования мутанта 18-12.

4.3. Определение кривой выживаемости клеток мицелия гриба

P. citrinum в зависимости от дозы мутагена.

4.4. Влияние концентраций спор гриба в посевном материале на биосинтез компактина штаммом 20

4.5. Сравнение продуктивности штаммов 18-12, 20-01 и 21на исходной и оптимизированной средах.

4.6. Оптимизация агаризованной среды.

4.7. Сравнение методик экстракции с помощью этилацета и с использованием ацетона.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Изучение возможности использования компактина в качестве биопестицида против фитопатогенов и получение высокопродуктивных штаммов гриба Penicillium citrinum - продуцента компактина»

Современное сельское хозяйство характеризуется высокой степенью использования пестицидов. На сегодняшний день экологические нарушения, вызванные применением химических средств защиты растений, настолько велики, что все более острым становится вопрос о снижении количества используемых синтетических пестицидов. В качестве альтернативы или дополнения к химическим препаратам выступают биологические методы борьбы с фитопатогенными организмами (Груздев и др., 1980; Лутова и др. 1990).

Одним из направлений биологической защиты растений, является использование микроорганизмов или продуктов их жизнедеятельности в качестве биопестицидов.

Изучение роли растительных стеринов для насекомых и оомицетов открыло путь к получению новых препаратов для борьбы с фитопатогенами и вредителями, действие которых заключается в изменении уровня биосинтеза стеринов. Насекомые, нематоды и оомицеты неспособны к самостоятельному синтезу стеринов. Эти организмы извлекают стерины из тканей растения-хозяина (Svoboda, Feldlaufter, 1991; Инге-Вечтомов, 1997). Было показано, что снижение содержания стеринов в растительных тканях приводит к повышению устойчивости растений к этим фитостеринзависимым организмам (Лутова и др., 1998).

Обработка клубней картофеля компактином приводила к защитному эффекту против фитопаразитических нематод (Romanenko et al., 2002).

Насекомые-фитофаги способны конвертировать растительные стерины в холестерин и другие стероиды, включая гормон линыси экдизон и экдистероиды. Отдельные реакции этих превращений высокоспецифичны для разных видов насекомых. Было показано, что снижение стеринов в пище оказывало негативное воздействие на насекомых, чье развитие зависит от фитостеринов (Ходжайова и др., 2000).

Нормальный рост и развитие оомицетов зависит от типа стеринов, так, наиболее эффективным индуктором споруляции у Phytophthora является |3-ситостерин. Было показано, что снижение содержания стеринов в растениях картофеля увеличивает устойчивость растений к Ph. infestans, уменьшение содержания стеринов у растений снижает их питательную ценность для оомицетов (Ходжайова и др., 2000).

Тесная зависимость насекомых и оомицетов от содержания стеринов в растениях является для них "ахиллесовой пятой". Нарушив эту зависимость, по образцу, происходящему в природе, можно ограничить возможности насекомых к размножению, не вызывая тотальное уничтожение вида.

Из всех известных ингибиторов биосинтеза стеринов наиболее эффективными и специфическими являются соединения, относящиеся к классу статинов. Статины являются продуктами вторичного метаболизма микробиологического синтеза и успешно используются в медицине как ингибиторы биосинтеза холестерина в качестве профилактического средства для лечения пациентов с повышенным содержанием холестерина в крови. В результате действия статинов блокируется связывание фермента З-окси-З-метилглутарил-КоА-редуктазы (ОМГКоА-редуктазы), катализирующего превращение ОМГКоА в мевалоновую кислоту, которая является предшественником стеринов (Endo et al., 1976). Вещества, относящиеся к группе статинов, различаются по эффективности воздействия на биосинтез стеринов. Среди наиболее изученных такие, как компактен, ловастатин и правастатин. Компактен - это природный ингибитор биосинтеза стеринов, относящийся к классу статинов. Продуцентом компактина является несовершенный гриб Penicillium citrinum (Thom).

Перечисленные факты дают основания для начала исследований влияния компактина на фитопатогены и изучения возможности разработки на основе компактина новых средств защиты растений от болезней.

Актуальность выбранного направления исследований обусловлена необходимостью разработки новых биопестицидов и создания соответствующих новых технологий их производства. Известные до сих пор технологии производства компактина слишком дорогостоящие, поскольку они разработаны для производства фармакологических препаратов. Для производства же средств защиты растений необходимо разработать более простые и дешевые технологии. Одним из путей снижения себестоимости целевого продукта является увеличение продуктивности штаммов-продуцентов при сохранении общих производственных затрат. В этой связи было актуально повысить продуктивность штамма гриба P. citrinum путем генетических изменений и оптимизации процессов ферментации.

Цели и задачи исследований. Целью данной работы было изучение влияния компактина на различные фитопатогены. А так же была поставлена цель существенного повышения продуктивности штаммов гриба P. citrinum -продуцентов компактина и разработка оптимальной методики глубинного культивирования вновь полученных мутантов-суперпродуцентов.

Основные задачи:

1. Изучение защитных свойств компактина с целью оценки возможности использования его для защиты растений от фитопатогенов.

2. Получение новых высокопродуктивных штаммов гриба P. citrinum методом индуцированного мутагенеза.

3. Оптимизация условий культивирования полученных мутантных штаммов P. citrinum на агаризованной питательной среде и в жидкой культуре.

Научная новизна исследований.

1. Впервые показаны защитные свойства компактина против грибных фитопатогенов.

2. Впервые показана способность компактина ингибировать у грибов биосинтез меланина.

3. Впервые показана антивирусная активность компактина в системах табак - вирус табачной мозаики (ВТМ), картофель - Х-вирус картофеля.

4. Впервые получен высокопродуктивный спорообразующий штамм гриба Penicillium citrinum, продуцирующий около 15 г/л компактина при глубинном культивировании в колбах.

5. Подобрана оптимальная питательная среда для глубинного культивирования нового высокопродуктивного мутанта.

Практическая значимость работы.

1. Полученные в ходе работы результаты могут быть использованы при создании фунгицидных препаратов на основе компактина для защиты растений против Stagonospora nodorum, Magnaporthe grisea, Cladosporium cucumerinum, Puccinia graminis и Alternaria longipes, a также против оомицета Phytophthora infestans. Показанные меланинингибирующие свойства компактина позволяют предположить что, полученные на основе компактина препараты будут обладать помимо контактного фунгицидного действия способностью подавлять патогенность грибов путем ингибирования меланиногенеза. *

2. Впервые показанная антивирусная активность компактина открывает возможность разработки вирулицидов против фитовирусов.

3. Полученный высокопродуктивный спорулирующий штамм гриба Р. citrinum, оптимизация питательной среды и условий культивирования для этого штамма послужили основой для разработатки полупромышленной технологии производства компактина.

Апробация работы и публикация результатов исследований.

Материалы диссертации были представлены: на Всероссийском совещании: "Современные системы защиты растений от болезней и перспективы использования достижений биотехнологии и генной инженерии", 16-18 июля 2003 года, на II и III Московских международных конгрессах «Биотехнология: состояние и перспективы развития», 10-14 ноября 2003 г. и 14-18 марта 2005 г. соответственно; на международной конференции "Наука и бизнес", «Поиск и использование новых биомолекул: биоразнобразие, окружающая среда, биомедицина», Пущино, 10-12 марта, 2004; на Третьей международной конференции из серии "Наука и бизнес", «Международное сотрудничество в биотехнологии: ожидания и реальность», Пущино, 19-21 июня, 2006 г.

По материалам диссертации опубликовано 8 работ. Объем и структура диссертации.

Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы, экспериментальной части, включающей описание материалов, методов и результатов исследований, выводов, списка использованной литературы и

Заключение диссертации по теме «Защита растений», Украинцева, Светлана Николаевна

ВЫВОДЫ:

1. Впервые показаны фунгицидные свойства компактина по отношению к грибам Stagonospora nodorum, Magnaporthe grisea, Cladosporium cucumerinum, Puccinia graminis и Alternaria longipes, выраженные в подавлении роста мицелия этих грибов и прорастания спор.

2. Впервые показаны меланинингибирующие свойства компактина по отношению к Magnaporthe grisea и Alternaria longipes.

3. При обработке клубней картофеля было показано защитное действие компактина против оомицета Phytophthora infestans.

4. Впервые выявлена антивирусная активность компактина против ВТМ и ХВК.

5. Впервые получен высокопродуктивный спорообразующий штамм гриба Penicillium citrinum, способный синтезировать 15 г/л компактина при глубинном культивировании.

6. Подобраны условия его культивирования в качалочных колбах, способствующие увеличению уровня биосинтеза компактина:

• повышена концентрация сахарозы в питательной среде с 200 до

250 г/л;

• повышена концентрация нитратного азота с 2 до 5 г/л;

• добавлен дрожжевой экстракт в концентрации 1 г/л;

• подобрана оптимальная концентрация спор в посевном материале (106/мл).

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Украинцева С.Н., Воинова Т.М. Оптимизация условий культивирования Penicillium citrinum - продуцента компактина, обладающего защитным действием по отношению к фитопатогенам и вредителям растений. Современные системы защиты растений от болезней и перспективы использования достижений биотехнологии и генной инженерии. Материалы Всероссийского совещания, Голицыно, 2003, стр. 153- 157.

2. Украинцева С.Н., Воинова Т. М. Оптимизация условий культивирования мутанта 18-12 гриба Penicillium citrinum — продуцента компактина. Сборник тезисов участников II Московского международного Конгресса "Биотехнология: состояние и перспективы развития", ч. 1, Москва, 2003. С.272-273.

3. Джавахия В.В., Украинцева С.Н., Воинова Т.М. Технологии получения микробиологическим путем холестерин-ингибирующих реагентов-статинов. Сборник тезисов Международной Конференции "Наука и Бизнес: поиск и использование новых биомолекул: биоразнобразие, окружающая среда, биомедицина." Пущино, 10-12 марта, 2004, стр. 235.

4. Ukraintseva S.N., Voinova Т.М., Dzhavakhiya V.G. Penicillium citrinum strain improvement for Compactin production by induced-mutagenesis and optimisation of obtained mutant cultivation conditions. G.E. Zaikov et al. (Ed.). Biotechnology Titles from Nova Science Publishers, Inc. Biotechnology and Medicine. New York, 2004. P.71-78.

5. Украинцева C.H., Воинова T.M., Джавахия В.Г. Получение новых высокопродуктивных мутантов гриба Penicillium citrinum -продуцентов компактина и оптимизация условий их культивирования". Сборник тезисов участников III Московского международного конгресса "Биотехнология: состояние и перспективы развития", ч.1, Москва, 2005. С.83.

6. Ukraintseva S.N., Voinova Т.М., Dzhavakhiya V.G. Obtaining the highly productive mutants Penicillium citrinum producing compactin and optimization of fermentation process in shaken flasks. A.M. Egorov and Gennady Zaikov (Ed.). Biotechnology titles from Nova Science Publishers, Inc. Biotechnology in Biology and Medicine. New York, 2006. ISBN: 160021-092-9. P.233-241.

7. Украинцева C.H., Воинова T.M., Джавахия В.Г. Повышение активности гриба Penicillium citrinum — продуцента компактина, методом индуцированного мутагенеза и оптимизация условий культивирования высокопродуктивных штаммов. Материалы 3-ей международной конференции "Наука и бизнес", Пущино. 19-21 июня 2006, с.72-76.

8. Украинцева С.Н., Приданников М.В., Джавахия В.Г. Компактин -потенциальный биопестицид. Защита и карантин растений. № 2, 2008, с.64.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Представленные в данной работе исследования показывают, что обработка клубней картофеля компактином - природным ингибитором биосинтеза стеринов, в концентрации выше 0,1% позволяет существенно замедлить степень развития фитофтороза. Компактин обладает фунгицидными свойствами по отношению к грибам St. nodorum, М. grisea и С. cucumerinum in vitro, а именно в концентрации 0,1% полностью угнетает их рост. Впервые показаны меланинингибирующие свойства компактина для М. grisea и A. longipes. При инкубировании спор гриба St. nodorum в растворах компактина в концентрациях выше 0,01% наблюдалось полное ингибирование прорастания спор. Компактин в концентрации 0,01% обладал защитным эффектом при развитии септориоза и ржавчины у пшеницы, а в концентрации выше 0,1% - альтернариоза у табака.

Впервые показана антивирусная активность компактина в системах растение-хозяин: табак — вирус табачной мозаики, картофель — Х-вирус картофеля.

Данные факты являются достаточным обоснованием для продолжения изучения свойств компактина с целью создания на его основе препаратов против вирусов и фитопатогенов.

В результате ступенчатого мутагенеза с использованием УФ-облучений удалось получить мутанты гриба Penicillium citrinum, способные синтезировать компактин в повышенных концентрациях по сравнению с исходным аспорогенным штаммом. В результате оптимизации была подобрана среда с увеличенным содержанием источников азота и углерода, позволившая повысить уровень биосинтеза компактина. На оптимизированной среде впервые был выделен мутант 21-34 гриба Р. citrinum, образующий споры, что позволило стандартизировать содержание посевного материала, и способный синтезировать 15 г/л компактина при глубинном культивировании в колбах. Таким образом, удалось повысить уровень биосинтеза компактина грибом P. citrinum с 8 до 15 г/л.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Украинцева, Светлана Николаевна, 2008 год

1. Аркадьева 3. А., Безбородов А. М., Блохина И. Н. и др. Промышленная микробиология, 1989. 688 с.

2. Аронов Д.М. //Consilium-Medicum. 2001. - 10.

3. Безбородов A.M. Биохимические основы микробного синтеза. М.: Легкая и пищевая промышленность, 1984. - 304 с.

4. Беккер М.Е. Биотехнология микробиологического синтеза. Рига, 1980.

5. Беккер М.Е. Введение в биотехнологию. М.: Пищевая промышленность, 1978.-232 с.

6. Бидлингмейер Б. Препаративная жидкостная хроматография//Пер. с англ. М.: Мир, 1990. - 360 с.

7. Билай В.И. Биологически активные вещества микроскопическх грибов и их применение. К.: Наук. Думка, 1965. - 265 с.

8. Билай В.И. Основы общей микологии. К.: Выща шк. Головное изд-во, 1989.-392 с.

9. Бирюков В.В., Кантере В.М. Оптимизация периодических процессов микробиологического синтеза. — М.: Наука, 1985. — 292 с.

10. Васюкова Н.И., Давыдова М. А., Щербакова Л.А., Озерецковская О. Л., Фитостерины как фактор, предохраняющий возбудитель фитофтороза картофеля от действия фитоалексинов. //ДАН, т. 235, №1, 1977. С. 216-219.

11. Васюкова Н. И., Щербакова Л.А., Чаленко Г.И., Озерецковская О.Л., Метлицкий Л.В. Р-ситостерин фактор, необходимый для роста и развития возбудителя фитофтороза// Прикладная биохимия и микробиология. - 1979. - Т. XV. - Вып. 4. - С. 485-493.

12. Виестур У.Э., Кристапсонс М.Ж., Былинкина Е.С. Культивирование микроорганизмов. М.: Пищевая промышленность, 1980. — 232 с.

13. З.Грачева И.М. Технология ферментных препаратов. — М.: Пищевая промышленность, 1975. -392 с.

14. Груздев Г.С., Зинченко В.А., Калинин В.А., Словцов Р.И. Химическая защита растений. 2-е изд., перераб. и доп., 1980 - с.428-437.

15. Гуляев Г.В. Генетика. Изд.2-е, перераб. и доп. М.: Колос, 1977. -с.196-233.

16. Джанашия П.Х., Назаренко В.А., Николенко С. А. Дислипопротеидемии: клиника, диагностика, лечение //Учебное пособие. Российский государственный универитет. - М., 2000.

17. Дорофеев В. JL, Арзамасцев А. П., Садчикова Н. П. Проект общей фармакопейной • статьи «Высокоэффективная жидкостная хроматография». Вестник ВГУ. Серия: Химия. Биология. Фармация. 2004. стр. 166-172.

18. Дьяков Ю.Т., Шнырева А.В., Сергеев А.Ю. Введение в генетику грибов: Учеб. Пособие для студ. высш. учеб. заведений / М.: Издательский центр "Академия", 2005- 304 с.

19. Евтушенков А.Н., Фомичев Ю.К. Введение в биотехнологию: Курс лекций:/ Мн., БГУ, 2002. - 104.

20. Егоров Н.С., Баранова Н.А., Крейер В.Г. Антибиотики и химиотерапия. 1999. - №5. -С.38-44.

21. Ермаков А. И., Арасимович В. В., Ярош Н. П., Перуанский Ю. В., Луковникова Г. А., Иконникова М. И. Методы биохимического исследования растений, 1987. —430 с.

22. Жданова Н.И., Гусятинер М.М. Методы селекции и свойства штаммов микроорганизмов — продуцентов аминокислот. Обзор. М., 1985.

23. Инге-Вечмонтов С.Г. Метаболизм стеринов и защита растений. // Сороковский образовательный журнал. — 1997. № 11. - С. 16-21.

24. Кантере В.М. Теоретические основы технологии микробиологических производств, 1990. 271 с.

25. Квеситадзе Г. И., Безбородов А. М., Введение в биотехнологию, 2002. -284 с.

26. Лиепиньш Г.К., Дунце М. Э. Сырье и питательные субстраты для промышленной биотехнологии. Рига: Зинатне, 1986. - 156 с.

27. Лутова Л.А., Ходжайова Л.Т. Молекулярно-генетические аспекты устойчивости высших растений к вредителям сельского хозяйства// Генетика. 1998. Т. 34. - №6. С. 719-729.

28. Матвеев В. Е. Научные основы микробиологической технологии, 1985.- 224 с.

29. Метлицкий Л.В., Озерецковская О. Л., и др.// ДАН. Т. 227. - № 1, 1976.

30. Минкевич И.И., Захарова Т.И. Математические методы в фитопатологии, 1977.- С. 18-27.

31. Пасешниченко А.В. Биосинтез и биологическая активность растительных терпеноидов и стероидов // Итоги науки и техники. Сер. Биохимия. М., 1987. стр. 187-188.

32. Пересыпкин В.Ф. Сельскохозяйственная фитопатология. М.: Колос, 1974.-559 с.

33. Перт С.Дж. Основы культивирования микроорганизмов и клеток. М., 1978.

34. Платонова Т.А., Васюкова Н.И., Давыдова М.А. Влияние дефицита стеринов на спороношение Phytophthora infestans (Mont) de Вагу // Прикладная биохимия и микробиология. 1977. - Т. 13. - Вып. 6. - с. 907-913.

35. РАСХН ГНУ ВНИИ картофельного хозяйства им А. Г. Лорха//Инстркуция по применению иммуноферментного диагностического набора для определения вирусов картофеля. -Коренево, 2006.

36. Северина С. Е., Виноградова А. Д. Методы практической биохимии, 1978.-268 с.

37. Скрябин Г.К., Головлева Л.А. Использование микроорганизмов в биологическом синтезе. М., 1976.

38. Столетов Ю.В. Статины новый класс препаратов для лечения гиперлипидемий.//журнал Провизор. — 1998. - июнь. — 09.

39. Стыскин E.JI., Ициксон Л.Б., Брауде Е.В. Практическая Высокоэффективная Жидкостная хроматография, М. 1986.

40. Сулаберидзе К.В., Тушишвили Л.Ш., Пасешниченко В.А. Содержание и состав стеринов в листьях цитрусовых растений и их связь с морозоустойчивостью.// Физиология растений. — 1989. — Т. 36. — Вып.6.- Стр.1192-1198.

41. Сусеков А. В. Ингибиторы ГМГ-КоА-редуктазы при вторичной профилактике атеросклероза: 30 лет спустя. // Consilium medicum. — 2005.-N 11.-С. 896-903.

42. Сусеков А.В. Обоснование увеличения доз статинов в клинической практике. Терапевтический архив, 2001. №4. - С. 76-80.

43. Тарлаковский С.А. Стерины: их метаболизм, функции и роль во взаимоотношениях растений с вредными организмами // Биохимические аспекты проблем защиты растений от болезней, вредителей и сорняков: Тр. ВИЗРа. 1977. стр. 156-169.

44. Хефтман Э. Биохимия стероидов. М.: Мир, 1972. 175 стр.

45. Ходжайова Л.Т., Левашина Е.А., Усольцева М.Ю., Бондаренко Л.В., Лутова Л.А. Изменение содержания растительных стеринов как биологической борьбы с фитостерин-зависимыми организмами./ЛГенная инженерия и экология. 2000. - №1. - С. 124128.

46. Шевченко О.П., Шевченко А.О. Статины ингибиторы ГМГ-КоА-редуктазы. М.: Реафарм, 2003.

47. Ячевский А.А. Основы микологии. -М.: Изд-во колх.-совх. лит., 1933. 260 с.

48. Allard Н.А. The mosaic disease of tobacco // USDA Bull. 1914. - P. 40.

49. Abstract book of the 7th International Symposium on Drugs Affecting Lipid Metabolism. The Lorenzini Foundation, 1980. May 28-31.

50. Auerbach C. Mutagenesis by ultraviolet and visible light II and III. //In: Auerbach C., editor./ZMutation research, Problems, results and perspective. London: Chapman and Hall, 1976.- P. 173-217.

51. Bach Thomas J. Hydroxymethylglutaryl-CoA reductase, a key enzyme in phytosterol synthesis? //Lipids. 1986. - Vol. 21. - № 1. - P. 82-88.

52. Basson M.E., Thorsness M., Rine J. Saccharomyces cerevisiae contains two functional genes encoding 3-hydroxy-3-methylglutaryl-coenzyme A reductase. //Proc Natl Acad Sci USA. 1986. - 83. - P. 5563-5567.

53. Bolla, R. Developmental nutrition of nematodes: the biochemical role of sterols, heme compounds, and lysosomal enzymes. Journal of Nematology. 1979. 11:250-259.

54. Brown M.S., Goldstein J.L. A tribute to Akira Endo, discoverer of a "Penicillin" for cholesterol.// Athersclerosis. 2004. - 5(Suppl.). - P. 1316.

55. Brown A.G., Smale T.C., King R. et al. //J. Chem. Soc. Perkin I. 1976. P. 1165-1170.

56. Brown D.E., Zainudeen M.A. Effect of inoculum size on the aeration pattern of batch cultures of a fungal microorganism.// Biotecnol. Bioeng. 1978. -20. P.1045-1061.

57. Butler M.J., Day A.W., Henson J.M. and Money N.P. Pathogenic properties of fungal melanins. IIMycologia . 2001. - 93. - P. 1-8.

58. Calam С. Т. Secondary metabolism as an expression of microbial growth and development. Folia Microbiogy. 1979. V.24. P.276-85.

59. Chakravarti R. and Sahai V. Optimization of compactin production in chemically defined production medium by Penicillium citrinum using statistical methods.//Process Biochemistry. 2002. - Vol. 38. - Issue 4. P. 481-486.

60. Chappell J., Wolf F., Proulx J., Cuellar R., Saunders C. Is the reaction catalyzed by 3-hydroxy-3-methylgutaryl coenzyme A reductase a rate-limiting step for isoprenoid biosynthesis in plants? //Plant Physiol. 1995. -109. -P.1337-1343.

61. Chitwood, D. J. Biochemistry and Function of Nematode Steroids. Critical Reviews in Biochemistry and Molecular Biology. 1999. 34(4): 273-284.

62. Chung Кае-Jong. A new method for producing pravastatin precursor, ML-236B.// World Intellectual Property Organization: International Bureu; International Publication Number: WO 98/06867; International Publication Date: 19 February 1998.

63. Clark A.J. and Bloch Konard. The absence of sterol synthesis in insects. //Journal of Biological Chemistry. 1959. - Vol.234. - № 10. - P. 25782582.

64. Dhingra O.D., Sinclair J.B. Basic Plant Pathology Methods // CRC Press, Inc. Boca Raton, Florida 1986.

65. Elliott C.G., Knight В .A.// Journal Sci. Food and Agriculture. 1969. -P.406.

66. Elliott C.G. Sterols and the production of oospores by Phytophthora cactorum. //Journal of General Microbiology. 1972. - P. 321-327.

67. Endo A United States Patent No.3, 983,140; September, 28, 1976.

68. Endo A., Compactin (ML-236B) and related compounds as potential cholesterol-lowering agents that inhibit HMG-CoA reductase.// J. Med. Chem.- 1985.-28.-P. 1401-1425.

69. Endo A. Monacolin K, a new hypocholesterolemic agent that specifically inhibits 3-hydroxy-3-methylglutaryl coenzyme A reductase. //Journal of antibiotics. 1980. - V. 33. - No.3. - P. 334-336.

70. Endo A. The discovery and development of HMG-CoA reductase inhibitors.// Atherosclerosis Supplements. 2004. - 5. - P. 67-80.

71. Endo A. The discovery and development of HMG-CoA reductase inhibitors. //J. Lipid Res. 1992. - 33. P. 1569 - 1582.

72. Endo A., Discovery and development of the strains, in: Statins The HMG-CoA Reductase Inhibitors in Perspective.// Martin Dunitz, London. 2000. - P. 35-47.

73. Endo A., Kuroda M., Tanzawa K. Competitive inhibition of 3-hydroxy-3-methylglutaril coenzyme A reductase by ML-236A and ML-236B, fungal metabolites having hypocholesterolemic activity. //FEBS Lett. 1976. -72.-P. 323-326.

74. Endo A., Kuroda M., Tsujita Y. ML-236 A, ML-236B, and ML-236C, new inhibitors of cholesterogenesis produced by Penicillium citrinum. //J. Antibiot. (Japan).- 1976.-P. 1346-1348.

75. Endo A., Kuroda M., Terahara A., Tsujita Y., Tamura C. Physiologically active substances and fermentative process for the same.// United States Patent No. 4,049,495; September, 20, 1977.

76. Endo A., Kuroda M. and Tsujita Y. ML -236B, ML -236C, new inhibitors of cholesterogenesis produced by Penicillium citrinum.// J. Antiiot. — 1976. -29.-P. 1346-1348.

77. Goldstein J.L., Brown M.S. Regulation of the mevalonate pathway. //Nature.- 1990.- 341. -P.425-430.

78. Gaw A., Packard C.J., Shepherd J. Statins: The HMG-CoA reductase inhibitors in perspective. 2004. - Second editon. - P. 262.

79. Haskins R.H., Tulloch A.P. and Micetich R.G. Steroids and the stimulation of sexual reproduction of a species of Pythium. //Can. J. Microbiol. 1964.- 10.-P. 187-195.

80. Hata S., Takagishi H., Kouchi H. Variation in the content and composition of sreols in alfalfa seedings treated with compactin (ML-236B) and mevalonic acid. //Plant and Cell Physiol. 1987. - 28. - № 4. - P. 709714.

81. Hendrix J.W. Influence of sterols on growth and reproduction of Pythium and Phytophthora spp. // Phytopathology. 1965. - 55. - P. 790-797.

82. Henson J.M., Butler M.J., Day A.W. The dark side of the mycelium: melanins of phytopathogenic fungi, Annu. Rev. Phytopathol., 1999, 37: 447471.

83. Hosobuchi M., Kurosawa K. and Yoshikawa H. Applicatioin of computer to monitoring and control of fermentation process: nicrobial conversion of ML-23 6B Na to pravastatin. // Biotechnology and Bioengineering. 1993. - V. 42.- P. 815-820.

84. Hosobuchi M., Ogawa K., Yoshikawa H. Morphology study in production of ML-236B, a precursor of pravastatin sodium, by Penicillium citrinum. II J. Ferment. Bioeng. 1993. - Vol. 76. - P. 470-475.

85. Kaneko I., Hazama-Shimada Y., Endo A. Inhibitory effects on lipid metabolism in cultured cells of ML-236B, a potent inhibitor of 3-hydroxy-3methylglutaryl coenzyme A reductase.// Eur. J. Biochem. 1978. -87. -P.313-321.

86. Kato T. Sterol Biosynthesis in Fungi, a Target for Broad Spectrum Fungicides // Sterol Biosynthesis Inhibitors and Anti-Feeding Compounds. 1. Chemistry of Plant Protection Berlin, 1986. P. 288-312.

87. Koller W. Antifungal Agents with Target Sites in Ste-rols. Function and Biosynthesis //Target Sites of Fun-gicite Action/Ed. Koiler W. London: CRC Press, 1991. P. 70-82.

88. Kuroda M., Tsujita Y., Tanzawa K., Kitano N., Endo A. Hypolipidemic effects in monkeys of ML-236B, a competitive inhibitor of 3-hydroxy-3-methylglutaryl coenzyme A reductase. // Lipids. 1979. -Vol.14.-P. 585-589.

89. Manzoni M., Rollini N. Biosynthesis and biotechnological production of statins by filamentous fungi and application of these cholesterol-lowering drugs. // Appl. Microbiol. Biotechnol. 2002. - 58. - 5. - P. 555-564.

90. Merck and Co. (Rahway, NJ), The scientific search for an effective weapon against cholesterol.// Press Release. 1987. - November.

91. Metz В., Kossen N. W. F.: The growth of mold in the form of pellets. // Biotechnol. Bioeng. 1977. - Vol. 19. - P. 781-799.

92. Romanenko N.D., Popov I.O., Pridannikov M.V. and Dzhavakhia V.G. Study of spreading Potato Cyst Nematode Globodera rostohiensis and evalution of Lovastatin and Compactin nematicide activity. Conference:

93. Theory and Practice of Plant Parasitic Pathogens .Moscow, 2002. P.251-257.

94. Samuel G. Some experiments on inoculating methods with plant viruses, and on local lesions // Ann. Appl. Biol. 1931. - V. 18. - P. 494507.

95. Schlosser E., Gottlieb D. Microbiology, 1968. P.246.

96. Serizawa, N.; S. Serizawa, K. Nakagawa, K. Furava, T.Okazaki & A. Terahara: Microbial hydroxylation of ML-236B (compactin): Studies on microorganisms capable of 3B-hydroxylation of ML-236B. J. Antibiot.1983. V.36.P. 887-871.

97. Serizawa N., Nakagawa K., Hamano K., Tsujita Y., Terehara A. and Kuwano H.//Journal of antibiotics. 1983. - V.36. - No.5. - P.604-607.

98. Svoboda I., Feldlaufiter M. Neutral Sterol Metabolism in Insects//Lipids. 1991. 26: P. 614-618.

99. Tisdale W.B., Wadkins R.F. // Phytopathology. 1931. - V. 21. - P. 641660.

100. Tsujita Y., Kuroda M., Tanzawa K., Kitano N., Endo A. Hypolipidemic effects in dogs of ML-236B, a competitive inhibitor of 3-hydroxy-3-methylglutaryl coenzyme A reductase. // Atherosclerosis. 1979. - Vol.32. - P. 307-313.

101. Wang Y., Chen Y., Chang W., Lin C., all of Hsinchu. Mutant strain of Penicillium citrinum and use thereof for preparation of compactin. // United States Patent No. 6,323,021 Bl; November 27, 2001.

102. Weete J.D. Sterols of the fungi: distribution and biosynthesis. // Phytochemistry, 1973.- Vol.12.-P. 1843-1864.121. www.hplc.ru

103. Yamamoto A., Endo A., Kitano Y. Et al., Jpn. //J. Med. 1978. - 17. - P. 230-239.

104. Yamamoto A., Sudo H., Endo A. Therapeutic effects of ML-236B in primary hypercholesterolemia. // Atherosclerosis. 1980. - P. 259-266.