Разработка технологии и нормирование качества жидкого и сухого экстрактов травы стальника полевого тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 15.00.01, кандидат фармацевтических наук Давитавян, Наира Альбертовна

• Давитавян, Наира Альбертовна
• кандидат фармацевтических наук
• 2007

Оглавление диссертации кандидат фармацевтических наук Давитавян, Наира Альбертовна

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1 СОВРЕМЕННОЕ СОСТОЯНИЕ ИССЛЕДОВАНИЙ В ОБЛАСТИ ХИМИИ, ФАРМАКОЛОГИИ И ПРИМЕНЕНИЯ СТАЛЬНИКА

ПОЛЕВОГО (ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ).

1.1 Состояние изученности химического состава стальника полевого.

1.2 Применение стальника полевого в народной и научной медицине.

1.3 Состояние изученности фармакологии стальника полевого.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Разработка технологии и нормирование качества жидкого и сухого экстрактов травы стальника полевого»

Актуальность темы. В настоящее время по ассортиментному составу группа слабительных фитосредств в своем большинстве представлена лекарственными препаратами, содержащими антрагликозиды. Однако, использование последних ограничено по ряду причин, к числу которых относятся быстрое к ним привыкание, развитие кишечной непроходимости, кровотечения, циститы, геморрой в стадии обострения, беременность, а также раздражающее действие на слизистую кишечника. Более того, в некоторых странах гидроксипроизвод-ные антрахинона запрещены и/или не рекомендованы к применению в связи с их канцерогенными свойствами. В этой связи, становится очевидным, что актуальным является поиск новых сырьевых источников, не содержащих производные антрацена, но являющихся основой для создания лекарственных препаратов слабительного действия.

С этой точки зрения особое место занимает корень стальника и получаемая из него настойка, поскольку они не содержат антрагликозиды и лишены указанных выше противопоказаний. Важно отметить, что корень стальника и настойка из него обладают эффективным противогеморроидальным действием. По мнению ряда авторов, наибольший вклад в фармакологическую активность этих лекарственных препаратов стальника вносят две группы полифенолов -производные флавона и изофлавона. В народной медицине наряду с корнем используется и трава стальника. Химический состав надземной части растения практически не отличается от корня.

Исходя из этого, представляется целесообразным исследование травы стальника полевого как дополнительного источника для получения слабительных лекарственных средств. К тому же, такой подход очевиден с точки зрения комплексного использования лекарственного растительного сырья и разработки ресурсосберегающих технологий.

Все изложенное выше свидетельствует об актуальности исследований по фармакогностическому изучению травы стальника, разработке технологии фитопрепаратов на ее основе и обоснованию применения в медицинской практике.

Цель и задачи исследования. Целью настоящей работы являлась разработка технологии и нормирование качества жидкого и сухого экстрактов травы стальника полевого.

Для реализации поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

- провести фармакогностическое изучение и стандартизировать траву стальника;

- разработать технологию жидкого экстракта травы стальника с учетом фар-макохимических исследований;

- предложить нормы качества для разработанного жидкого экстракта, изучить условия и сроки его хранения;

- разработать технологию и предложить нормы качества для сухого экстракта травы стальника, изучить условия и сроки его хранения;

- обосновать состав, разработать технологию твердых капсул сухого экстракта травы стальника;

- провести стандартизацию разработанных твердых капсул сухого экстракта травы стальника, изучить условия и сроки их хранения.

Научная новизна. Впервые изучена динамика накопления флавоноидов, изофлавоноидов, фенолкарбоновых кислот по фазам вегетации травы стальника полевого и установлено, что максимальное содержание этих соединений наблюдалось в конце цветения — начале плодоношения. Для селективного количественного определения флавоноидов, изофлавоноидов и фенолкарбоновых кислот в траве стальника полевого использованы прямая и дифференциальная спектрофотометрия. Установлено, что в траве стальника полевого содержание водорастворимых полисахаридов составляет в среднем 6,6%, пектиновых веществ — 8,3%, гемицеллюлозы А - 2,1%, гемицеллюлозы В - 3,9%, органических кислот — 2,1%. Из макро- и микроэлементов преобладающими являются калий и железо. На основе анатомо-морфологических исследований травы стальника уточнены диагностические признаки сырья. Осуществлены исследования по стандартизации и предложены нормы качества травы стальника полевого.

С учетом проведенных химических и фармакологических исследований обоснован выбор экстрагента для получения жидкого и сухого экстрактов. Выявлена зависимость количественного содержания флавоноидов и изофлаво-ноидов в извлечениях из травы стальника полевого от способа экстракции. Установлено, что максимальное их содержание наблюдалось в первых двух сливах, получаемых вакуум-фильтрационным методом.

Фармакологический скрининг полученных извлечений выявил выраженное слабительное и желчегонное действие, превосходящее действие настойки из корня, а также наличие умеренного обезболивающего свойства. Наибольшая активность характерна для извлечения с использованием 70% спирта этилового.

Разработана технология, обоснованы и нормированы показатели качества жидкого и сухого экстрактов, определены условия и сроки хранения. Предложены состав и технология твердых капсул сухого экстракта травы стальника полевого, проведена их стандартизация, установлены условия и сроки хранения.

Практическая значимость результатов исследования. Полученные уточненные и расширенные сведения о фитохимическом составе травы стальника свидетельствуют о целесообразности ее использования в качестве дополнительного источника новых фитопрепаратов слабительного и желчегонного действия.

Разработанная методика количественной оценки присутствующих совместно в траве стальника и ее фитопрепаратах флавоноидов, изофлавоноидов и фенолкарбоновых кислот позволяет в одной пробе и раздельно определять содержание этих трех групп БАВ.

Установленные в ходе проведенного морфолого-анатомического исследования характерные диагностические признаки травы стальника позволяют идентифицировать это сырье в измельченном виде.

Установленное слабительное и желчегонное действие наряду с умеренным обезболивающим эффектом для извлечения из травы стальника является обоснованием для разработки на его основе суммарных фитопрепаратов.

Предложенная технология жидкого экстракта (1:2) с использованием вакуум-фильтрационного способа позволяет извлечь из травы стальника около 85% суммы БАВ, что гарантирует 2,5% концентрацию действующих веществ в целевом продукте. Разработанная технология имеет несомненные преимущества по сравнению с используемыми на фармацевтических фабриках ускоренной дробной мацерации и реперколяции, поскольку повышает выход БАВ в среднем на 40% и 37%.

Для переработки травы стальника в условиях крупносерийного фармацевтического производства в более прогрессивный вид суммарного фитопрепарата предложена технология сухого экстракта с 25% содержанием действующих веществ. Разработан состав и технология капсул с сухим экстрактом и предложена методика их стандартизации.

Степень внедрения. По результатам исследований разработано два проекта ФСП: «Трава стальника» (акт внедрения ООО «Кубаньлектравы» от 05.12.06 г; заключение по экспертизе проекта ФСП от КГУ «Центр по контролю качества и сертификации лекарственных средств Краснодарского края» от 01.02.2007 г); и «Жидкий экстракт стальника» (акт внедрения ЗАО «Роскар-фарм» от 18.12.06 г). Разработанная методика количественного определения фла-воноидов, изофлавоноидов и фенолкарбоновых кислот в траве стальника внедрена в НИР Северо-Кавказской ЗОС РАСХН (акт внедрения от 20.12.06 г). Методики оценки качества травы стальника полевого и жидкого экстракта апробированы в отделах контроля качества ООО «Кубаньлектравы» (акт от 22.11.06 г) и ЗАО «Роскарфарм» (акт от 11.12.06 г). Технология производства жидкого экстракта травы стальника апробирована в условиях ЗАО «Роскарфарм» (акт апробации 07.12.06 г).

Материалы диссертационного исследования внедрены в учебный процесс кафедры фармации ГОУ ВПО КГМУ Росздрава (акт внедрения от 28.09.06 г).

Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук. Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научно — исследовательских работ ГОУ ВПО КГМУ Росздрава (№ гос. регистрации 0120.0500289).

Основные положения, выносимые на защиту:

- результаты фитохимического, морфолого-анатомического исследования и стандартизации травы стальника полевого;

- данные по выбору оптимального экстрагента для получения фитопрепаратов из травы стальника полевого;

- итоги исследования по разработке технологии жидкого и сухого экстрактов, изучению их химического состава и установлению норм их качества;

- обоснование и результаты исследования по разработке состава, технологии и норм качества твердых капсул сухого экстракта травы стальника полевого.

Апробация работы и публикации. Материалы диссертационной работы доложены на II, IV региональной научно-практической конференции молодых ученых и студентов Краснодарского края «Медицинская наука и здравоохранение» (г. Анапа, 2004, 2006гг); на 60-й региональной научной конференции по фармации и фармакологии «Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции» (г. Пятигорск, 2005г); Всеукраинской научно-практической конференции с международным участием «Современные достижения фармацевтической науки и практики» (г. Запорожье, 2006г).

По теме диссертации опубликовано 7 научных статей.

Объём и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 173 страницах машинописного текста; содержит 51 таблицу, иллюстрирована 21 рисунком и изложена в пяти главах. Список литературы включает 200 библиографических источников, из них 35 иностранных авторов.

В первой главе (обзор литературы) приведены сведения, отражающие современное состояние исследований в области химии, фармакологии и применения стальника полевого. Дается информация об ассортименте слабительных средств растительного происхождения. Во второй главе охарактеризованы объекты, а также перечислены материалы и методики исследования. В третьей главе представлены результаты фармакогностического изучения травы стальника полевого. Четвертая глава посвящена разработке технологии и стандартизации жидкого экстракта травы стальника полевого. Пятая глава включает исследования по разработке технологии и стандартизации сухого экстракта и его капсу-лированной формы.

Выражаем искреннюю благодарность директору ГУП «Институт аллергии и астмы» профессору P.A. Ханферяну за организацию и проведение фармакологических и биологических исследований (отчет по их результатам приложен к диссертационной работе).

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Заключение диссертации по теме «Технология лекарств и организация фармацевтического дела», Давитавян, Наира Альбертовна

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ

1. Осуществлен химический анализ полисахаридов травы стальника, позволивший установить наличие водорастворимых полисахаридов до 6,6%, пектиновых веществ - 8,3%, гемицеллюлозы А - 2,1% и В - 3,9%, дубильных веществ - 5,1%, органических кислот - 2,1%, флавоноидов - 1,0%, изофлавоноидов - 1,9%, фенолкарбоновых кислот - 4,3%, сапонинов -1,8%, макро- и микроэлементов - 7,3%.

2. Разработана методика количественного определения изофлавоноидов, флавоноидов и фенолкарбоновых кислот в траве стальника полевого с использованием прямой и дифференциальной спектрофотометрии. С помощью этой методики изучена динамика накопления фенольных соединений и установлено, что их максимальное содержание соответствует фазе — конец цветения - начало плодоношения. На этой основе определены сроки сбора сырья.

3. На основании морфолого-анатомического исследования листьев и их черешков, цветков, стеблей травы стальника выявлены характерные признаки, позволяющие осуществлять диагностику сырья (извилистые клетки эпидермиса, наличие на всех частях растения многоклеточных простых волосков и многоклеточных железистых волосков, анизоцитный и аномоцитный тип устьичного аппарата), а также определены числовые показатели: содержание изофлавоноидов не менее 1,8%, флавоноидов не менее 0,9% и фенолкарбоновых кислот не менее 4,0%.

4. Установлен оптимальный экстрагент - 70% спирт этиловый для получения экстракционных препаратов из травы стальника полевого. Экстракция биологически активных веществ данным экстрагентом с использованием вакуум - фильтрационного метода обеспечивает максимальный переход изофлавоноидов и флавоноидов из сырья в первые два слива.

5. Разработана технология жидкого экстракта (1:2) с использованием вакуум - фильтрационного способа, позволяющая извлечь из травы стальника около 85% суммы биологически активных веществ, что значительно эффективнее по сравнению с используемыми методами на фармацевтических фабриках — ускоренной дробной мацерации или реперколяции.

6. Предложена технология сухого экстракта травы стальника и проведено нормирование его качества с учетом установленной общей суммы действующих веществ — изофлавоноидов, флавоноидов и фенолкарбоновых кислот в пределах 25%, органических кислот- 12%, дубильных веществ-17%, тритерпеновых сапонинов - 6%, макро — и микроэлементов - 8%.

7. Разработан состав, технология и нормы качества твердых капсул сухого экстракта из травы стальника полевого. Содержание флавоноидов в них должно быть не менее 0,015 г, изофлавоноидов не менее 0,034 г, фенолкарбоновых кислот не менее 0,068 г.

8. Фармакологическим скринингом доказано слабительное, желчегонное и обезболивающее действие экстрактов травы стальника полевого, что создает предпосылки для ее использования в качестве дополнительного сырьевого источника лекарственных средств.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ ПО ОБЗОРУ ЛИТЕРАТУРЫ

Анализ научных данных по исследованию стальника полевого показал, что основными действующими веществами этого растения являются изофлавоноиды, флавоноиды и фенолкарбоновые кислоты. Наряду с этим было выявлено, что качественный их состав достаточно и подробно изучен, чего нельзя сказать о количественном содержании и фазе их максимального накопления в траве стальника. Кроме того, не были исследованы присутствующие в траве стальника полевого полигликаны, органические кислоты, сапонины. Также не обнаружено полноценных данных о морфолого — анатомическом строении надземной части этого растения. При изучении ассортиментного состава слабительных средств установлено, что данная группа фитосредств представлена в подавляющем большинстве антрагликозидсодержащими препаратами. Однако, ограничивают использование последних быстрое к ним привыкание и ряд противопоказаний: кишечная непроходимость, геморрой в стадии обострения, беременность, а также серьезные побочные эффекты, в числе которых - раздражающее действие на слизистую кишечника, иногда приводящее к язвенному колиту, проктиту, тяжелым поражениям печени. Особое место в группе всех слабительных фитосредств занимает корень стальника и получаемая из него настойка, поскольку они не содержат антрагликозиды, лишены указанных выше противопоказаний и представляющих собой угрозу для здоровья побочных эффектов. Кроме того, они отличаются от аналогов по группе применением при геморрое и в этом качестве пока не имеют альтернативы. Вместе с тем, издревле в народной медицине наряду с корнем используется трава стальника. Состав ее биологически активных веществ (БАВ) ни чем не уступает, а в чем - то даже превосходит корень, в том числе - по составу фенольных соединений. Исходя из этого, представляется целесообразным исследование травы стальника полевого как источника слабительных лекарственных средств и очевидного аналога корня. Все изложенное выше позволяет считать актуальным исследование, посвященное фармакогностическому изучению травы стальника, разработке технологии ее фитопрепаратов, нормированию их качества и выявлению перспектив применения в медицинской практике.

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ

ЧАСТЬ

ГЛАВА 2 ОБЪЕКТЫ, МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДИКИ ИССЛЕДОВАНИЙ

2.1 Объекты и материалы исследований

Объектом исследования явилась трава стальника полевого, произрастающая в Краснодарском крае (ст. Васюринская, ст. Динская, пос. Чибий), Ставропольском крае (г. Пятигорск), Ростовской области (г. Ростов). Сырье заготавливалось в июне-августе 2002 - 2006 гг. в период бутонизации, цветения, цветения и плодоношения надземной части. Для отдельных сравнительных исследований использовался корень стальника полевого промышленной заготовки (ГФ СССР XI изд., стр.350), а также собранный в указанных выше местах произрастания осенью - с конца цветения до полного отмирания надземных частей и приведенный в стандартное состояние.

В экспериментальной работе использовали весы аналитические лабораторные 2 класса по ГОСТ 24108-80 с пределом взвешивания 200,0 г; термостат по ГОСТ 25336-82; сушильный шкаф, роторный испаритель ИР-1М2, валки лабораторные типа ПД 320-160/160, фильтрационные установки. Электронные спектры поглощения измеряли на спектрофотометре СФ-56 в кварцевых кюветах с толщиной рабочего слоя 1 см, атомно-адсорбционном-эмиссионном спектрофотометре; электрофореграммы снимали на приборе «Капель 105», минерализацию проводили в приборе СВЧ-минерализатор Минотавр -1, приготовленные микропрепараты изучали с помощью микроскопа серии LW 200 Т.

В данной работе использовали лекарственные и вспомогательные вещества, отвечающие требованиями нормативной документации (ФС, ГОСТ, ТУ).

2.2 Методы и методики исследований

2.2.1 Определение влажности сырья проводили по методике ГФ СССР XI изд., вып. 1, стр. 285

Определение экстрактивных веществ проводили по методике ГФ СССР XI изд., вып. 1, стр. 295

Определение общей золы и золы, нерастворимой в хлористоводородной кислоте проводили по методике ГФ СССР XI изд., вып. 2, стр. 24

Определение дубильных веществ проводили по методике ГФ СССР XI изд., вып. 1, стр. 286

Определение органических кислот проводили по методике ГФ СССР XI изд., вып. 2, стр. 296

Определение изофлавоноидов проводили по методике ГФ СССР XI изд., вып. 2, стр. 350

Микроскопический анализ лекарственного растительного сырья проводили по методике ГФ СССР XI изд., вып. 1, стр. 277

Статистическую обработку результатов проводили в соответствии с ГФ СССР XI изд. (далее по тексту ГФ XI изд.), вып. 1, стр. 199.

2.2.2 Определение сапонинов

Методика определения тритерпеноидов заключалась в следующем [124, 135,34,40]:

Около 1,0 г (точная навеска) измельченного до 1,0 мм сырья экстрагировали 70% спиртом в колбе с обратным холодильником на кипящей, водяной бане порциями по 20 мл и 2 раза по 15 мл в течение 1 часа в каждом случае. Полученные извлечения фильтровали в круглодонную колбу, фильтрат упаривали под вакуумом до 1/5 первоначального объема (10 мл). Концентрат обезжиривали в делительной воронке 75 мл хлороформа, используя для этой цели 5 ступеней экстракции. Водный слой переносили в ту же круглодонную колбу, аккуратно добавляли смесь, состоящую из 3 мл концентрированной серной кислоты и 12 мл ледяной уксусной кислоты. Содержимое колбы кипятили с обратным холодильником в течение 1,5 часов. После этого, остывший до комнатной температуры гидролизат количественно переносили в ранее использованную делительную воронку, для чего колбу ополаскивали 2 объемами воды по 10 мл. Олеаноловую кислоту из содержимого делительной воронки извлекали хлороформом четырехкратно по 10 мл, ополаскивая им круглодонную колбу. Гидрофильный слой в воронке отбрасывали, а хлороформный промывали водой до нейтрального значения рН (пятикратно по 25 мл). Извлечение фильтровали через плотный бумажный фильтр, предварительно смоченный хлороформом, в мерную колбу вместимостью 50 мл. Делительную воронку ополаскивали 5 мл хлороформа и также фильтровали в колбу. Содержимое в колбе доводили до метки тем же растворителем. Полученный раствор в объеме 1 мл вносили в колбу вместимостью 25 мл, отгоняли под вакуумом растворитель и добавляли 10 мл концентрированной серной кислоты. Раствор олеаноловой кислоты в серной кислоте термостатировали при 70°С в течение 1 часа. Параллельно проводили контрольный опыт. После охлаждения до комнатной температуры определяли оптическую плотность испытуемого раствора в сравнении с концентрированной серной кислотой на спектрофотометре при длине волны 315 нм (максимум поглощения, отмеченный на спектре испытуемого раствора и олеаноловой кислоты, наблюдался при этой длине волны) в кюветах с толщиной слоя 10 мм.

Содержание олеаноловой кислоты в траве стальника полевого рассчитывали по формуле (1):

Р-У1-У2-1М (!)

311-У3-т-(Ю0-\\0 где О —значение оптической плотности исследуемого раствора V] — общий объем хлороформного извлечения, мл Уг — объем концентрированной серной кислоты, мл У3 - объем хлороформного извлечения, взятый на анализ, мл 311 - удельный показатель поглощения олеаноловой кислоты в концентрированной серной кислоте ш — навеска сырья, г

- потеря в массе при высушивании сырья, %

2.2.3 Определение полисахаридов

Сумму водорастворимых полисахаридов, пектиновых веществ и гемицел-люлозу А и В из травы стальника выделяли по приведенной схеме в соответствии с рисунком 1.

Хлороформное извлечение

Спиртовое извлечение

Объединенное водное извлечение

Упаривание, осаждение 96% этанолом, фильтрование

1

Осадок

1 г

Промывка 96% этанолом, сушка г

Сумма водорастворимых полисахаридов

Прибавление ледяной уксус ной кислоты

Осаждение 96% этанолом, промывка осадка 96% этанолом, сушка

Гемицеллю лоза В

Осадок

Исчерпывающая экстракция хлороформом, сушка

Исчерпывающая экстракция 70% спиртом этиловым, сушка

Экстракция горячей водой

Экстракция смесью щавелевой кислоты и окса-лата аммония ние у Упаривание, осаждение 96% этанолом, г фильтрование

Промывка 96% этанолом, сушка

1 г

Рисунок 1- Схема выделения фракций полисахаридов из травы стальника

Измельченное сырье исчерпывающе экстрагировали сначала хлороформом для обезжиривания, а затем 70 % спиртом этиловым с целью удаления пигментных, фенольных и легкоокисляющихся веществ. Шрот высушивали до удаления запаха растворителей и подвергали трехкратной экстракции водой при температуре 90-95°С в течение 1 часа при постоянном перемешивании (соотношение сырья и экстрагента при первой и второй экстракции 1:20, при третьей — 1:10). Объединенное и отфильтрованное извлечение упаривали под вакуумом с помощью роторного испарителя до 1/5 первоначального объема при температуре 45-50°С [138, 139].

Сумму водорастворимых полисахаридов получали осаждением путем добавления четырехкратного по отношению к объему упаренного извлечения 96% спирта этилового; осадок отфильтровывали, многократно промывали спиртом этиловым, затем высушивали при комнатной температуре и взвешивали.

Сумму пектиновых веществ выделяли из шрота сырья. После выделения водорастворимых полисахаридов трехкратно экстрагировали смесью 0,5% растворов щавелевой кислоты и оксалата аммония (1:1) при температуре 90°С в течение 3-х часов (соотношение шрота и экстрагента при первом контакте 1:20, при втором и третьем 1:10). Полученное извлечение концентрировали до 1/5 первоначального объема при температуре 45-50°С с помощью роторного испарителя; к сгущенному извлечению прибавляли трехкратное количество 96% этилового спирта, осадок отделяли фильтрованием, промывали спиртом этиловым, высушивали при комнатной температуре и взвешивали.

Далее проводили выделение гемицеллюлозы А и В. Остаток сырья после выделения пектиновых веществ экстрагировали пятикратным объемом 10% раствора натрия гидроксида при температуре 20°С, перемешивая на магнитной мешалке в течение 12 часов, добавляли к щелочному фильтрату двукратный объем (по отношению к сырью) ледяной уксусной кислоты для осаждения гемицеллюлозы А. В фильтрате (после отделения гемицеллюлозы А) двукратным объемом 96% спирта этилового осаждали гемицеллюлозу В. Раствор декантировали, осадок несколько раз промывали порциями 96% спирта этилового, высушивали в вакуум-сушильном шкафу до постоянной массы и взвешивали.

Для определения мономерного состава полисахаридных комплексов проводили их гидролиз серной кислотой [24]. Навески полисахаридных комплексов (0,05 г) помещали в ампулы емкостью 5-10 мл, прибавляли 2,5 мл раствора серной кислоты (1 моль/л), запаивали ампулы и проводили гидролиз при температуре 100-105°С в течение 6 часов для водорастворимых полисахаридов, в течение 24 часов для пектиновых веществ, 48 часов для гемицеллюлозы А и В. Содержимое ампул переносили в стаканчики, промывали ампулы 5 мл воды, нейтрализовали бария карбонатом по универсальному индикатору до нейтральной реакции. Растворы фильтровали, фильтры промывали водой до объема фильтратов 10 мл. К полученным растворам прибавляли 3 объема 96% этилового спирта, тщательно перемешивали и образовавшиеся осадки отфильтровывали через 1-2 часа. Фильтраты упаривали на кипящей водянойбане до получения объема около 0,5 мл (раствор А). Осадки бариевых солей уроновых кислот снимали с фильтров, растворяли в 2,5 мл воды, прибавляли катионит КУ-2 (1-Г) до рН 3-4 по универсальному индикатору. Растворы фильтровали, упаривали до получения около 0,5 мл раствора (раствор Б).

Растворы А, содержащие нейтральные моносахариды, хроматогра-фировали нисходящим способом в системе: н-бутанол-пиридин-вода (6:4:3) в течение 17-18 часов с образцами нейтральных моносахаридов, а растворы Б, содержащие кислые моносахариды — восходящим способом в системе: этилацетат-уксусная кислота-муравьиная кислота-вода (18:3:1:4) в течение 5-6 часов с образцами гексауроновых кислот на бумаге Хроматограммы высушивали на воздухе 1 час, обрабатывали раствором анилингидрофталата и нагревали в сушильном шкафу при температуре 100-105°С. Через 10-15 минут наблюдали наличие красноватых и красновато-коричневых пятен. По величине и интенсивности окраски проводили сравнительную оценку содержания моносахаров в исследуемых фракциях.

Для количественного определения восстанавливающих Сахаров в составе полисахаридных фракций был использован метод, основанный на их реакции с пикриновой кислотой в щелочной среде [103].

0,05 г (точная навеска) полисахаридного комплекса помещали в ампулу, прибавляли 2,5 мл разведенной соляной кислоты, ампулу запаивали и нагревали при температуре 100±5°С в течение 2 часов, по окончании гидролиза содержимое ампулы переносили в стакан и нейтрализовали по бумаге Конго: сначала 30% раствором гидроксида натрия, затем раствором разведенной соляной кислоты, и наконец 10% раствором гидроксида натрия.

Раствор фильтровали через плотный фильтр, переносили количественно в мерную колбу вместимостью 10 мл и доводили объем раствора водой до метки (раствор А). В колбу вместимостью 50 мл помещали 1,0 мл 1% раствора пикриновой кислоты, 3,0 мл 20% раствора карбоната натрия и 1 мл раствора А.

Колбу с содержимым погружали в кипящую водяную баню на 10 минут, затем охлаждали до комнатной температуры. Содержимое количественно переносили в мерную колбу вместимостью 25 мл и доводили водой до метки. Измеряли оптическую плотность раствора на спектрофотометре при длине волны 460 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм. В качестве раствора сравнения использовали смесь, состоящую из 1,0 мл 1% раствора пикриновой кислоты, 3,0 мл 20% раствора карбоната натрия и 1,0 мл воды, которую нагревали на кипящей водяной бане в течение 10 минут и доводили объем раствора водой до 25 мл. Параллельно проводили определение оптической плотности 1 мл раствора стандартного образца глюкозы.

Содержание восстанавливающих Сахаров в полисахаридном комплексе в % в пересчете на глюкозу вычисляли по формуле (2):

Д-0,0056-10-100

X —--(—)

П0-т-\ где Э] - оптическая плотность испытуемого раствора

- оптическая плотность стандартного раствора глюкозы 0,0056 -концентрация глюкозы в 1 мл раствора стандартного образца, г ш - навеска полисахарида, г

2.2.4 Определение фенольных соединений

Для предварительного обнаружения фенольных соединений в траве стальника полевого использовали следующие качественные реакции: цианиди-новю пробу; реакцию реакция со щелочью; реакция с алюминия хлоридом; реакция с железа (III) хлоридом; реакция Вильсона; реакция с ванилином в кислоте хлороводородной концентрированной.

Пробоподготовку сырья проводили по следующей методике: 3-5 г измельченной травы стальника заливали 30-50 мл 70% спирта этилового в колбе с обратным холодильником и проводили экстракцию на водяной бане в течение 20-30 мин. Извлечение охлаждали, фильтровали через фильтровальную бумагу. Полученный фильтрат наносили на колонку диаметром 1 см, заполненную 1,0 г полиамидного сорбента, промывали 50 мл воды и элюировали фенольные соединения с колонки 70% сиртом этиловым, отбирая фракцию, окрашенную в желтый цвет. Полученный элюат упаривали до Уг объема и использовали для проведения выше указанный качественный реакций [103].

2.2.5 Определение макро- и микроэлементов

Навеску предварительно истолченного исследуемого материала массой 250 мг, помещали в кварцевую колбу, заливали 5 мл концентрированной азотной кислоты, устанавливали на умеренно нагретую плитку, помешивали, не допуская интенсивного вскипания. Для предотвращения разбрызгивания минерали-зационной массы в качестве пробки использовали каплеуловитель от колб Къельдаля. При появлении коричневой окраски минерализата нагревание прекращали, добавляли 1-3 мл азотной кислоты и продолжали нагревание при боле низкой температуре. Минерализация считается законченной, когда жидкость становится прозрачной или с легким желтоватым оттенком. Выпариванием минерализата доводили объем до 0,1-0,2 мл. При этом наблюдали интенсивное образование тяжелых белых паров хлорной кислоты. Остатки минеральных солей смывали в мерные колбы водой очищенной. Объем жидкости доводили до 15 мл [131].

Приготовление стандартных растворов металлов, калибровка: стандартные растворы ионов металлов готовили из ГСО путем его разбавления в воде очищенной или в равной смеси 10% растворов хлорной и азотной кислот. Концентрация ГСО - 1000 мг/л. Максимальная концентрация стандарта - 500 мг/л, минимальная - 0,24 мг/л. Концентрации стандартных растворов приведены в таблице 2.

Список литературы диссертационного исследования кандидат фармацевтических наук Давитавян, Наира Альбертовна, 2007 год

1. Азарян, P.A. Опыт по совершенствованию получения настоек и экстрактов /P.A. Азарян // Фармация.- 1980.-№1.-С.24-26.

2. Азарян, P.A. Способ расчета расходных и загрузочных норм на растительное сырье и экстрагент при производстве суммарных экстракционных препаратов / P.A. Азарян, И.А. Муравьев // Фармация.-1985.-№2.-С.44-46.

3. Акопов, М.Э. Кровоостанавливающие растения / М.Э. Акопов. Ташкент, 1977.-С.128.

4. Аксельруд, Г.А. Экстрагирование. Система твердое тело-жидкость / Г.А. Аксельруд, Г.А. Лысянский JL: Химия, 1974.-254с.

5. Алешкина, Я.А. Препараты стальника пашенного / В.В. Бережинская, М.Б. Волынская // Мед. пром-сть.- 1958.- № 10.-С.50-51.

6. Амосов, A.C. Фенольные соединения родов Glycyrrhiza L. u Meristotropis Fisch. Et Mey. / A.C. Амосов, В.И. Литвиненко // Фармаком.-2003.-№2.-С.34-80.

7. Ан, В.К. Геморрой: возможности консервативного лечения / В.К. Ан // Consilium provisorum.-2004.-№3.-C.25-27.

8. Анаболическая, антиоксидантная, гепатозащитная и противовоспалительная активности некоторых природных кумаринов и хромонов / Н.Ф. Комиссаренко и др. // Раст. ресурсы.- 1993.- Т. 29, № 3 С. 1-6.

9. Арзамасцев, А.П. Валидация методики количественного определения бензонала в таблетированных лекарственных формах / А.П. Арзамасцев, Н.П. Садчикова, Т.Ю. Лутцева // Вопросы биол. мед. и фармац. химии.-2001 .-№4.-С.29-31.

10. Бандюкова, В.А. Антибактериальная активность некоторых видов цветковых растений / В.А. Бандюкова, B.C. Череватый, И.И. Озимина // Раст. ресурсы.- 1987.- Т. 28, № 4.- С.607-611.

11. Бандюкова, В.А. Качественный анализ флавоноидов в растительном материале при помощи хроматографии на бумаге: метод, указания / В.А. Бандюкова, A.JI. Шинкаренко.- Пятигорск, 1972.-23с.

12. Бандюкова, В.А. Тонкослойная хроматография флавоноидов: метод, указания / В.А. Бандюкова, A.JI. Шинкаренко. Пятигорск, 1973.-15с.

13. Бандюкова, В.А. О вероятности обнаружения флавонов, флавононов и изофлавоноидов в некоторых семействах высших растений / В.А. Бандюкова, Э.Т. Аванесов // Раст. ресурсы.- 1973.-Т. 9, № 4.-С.508-515.

14. Бандюкова, В.А. О вероятности обнаружения некоторых агликонов в семействах высших растений / В.А. Бандюкова, Э.Т. Аванесов // Раст. ресурсы.- 1975.-Т.11, № 3.-С.334-342.

15. Бандюкова, В.А. Распространение флавоноидов в некоторых семействах высших растений / В.А. Бандюкова // Раст. ресурсы.- 1968.-Т.4, -№1.-С.97-112.

16. Бандюкова, В.А. Фенолокислоты растений и их эфиры и гликозиды / В.А. Бандюкова//Химия природ, соединений.- 1983.- № 3. -С.263-273.

17. Безчаснюк, Е.М. Математическая модель процесса экстрагирования из растительного сырья / Е.М Безчаснюк и др. // Фармаком.- 2003.-№1.-С.54-57.

18. Беликов, В.Г. Валидационная оценка методики количественного определения триазопирима / В.Г. Беликов, A.B. Бережная // Фармация.-2005.- № 5. -С.10-12.

19. Беликов, В.В. Методы анализа флавоноидных соединений / В.В. Беликов, М.С. Шрайбер // Фармация.-1970.- № 1. С.66-71.

20. Биологически активные вещества растительного происхождения / Б.Н. Головкин и др..- М.: Наука, 2001.-Т. 1.- 350с.

21. Биологически активные вещества растительного происхождения / Б.Н. Головкин и др..-М.: Наука, 2001.-Т.2.-764с.

22. Бойко, В.Д. Экстракция растительного сырья с применением электрического разряда в жидкости / В.Д. Бойко, И.В. Мизиненко // Хим.-фармац. журн.-1970.- №9.-С.38-40.

23. Бойченко, Э.С. Эффективность микроудобрений в повышении урожая и качества мяты перечной и стальника полевого / Э.С. Бойченко, Н.И. Ко-ломиец // Лекарственные растения. М.: Колос, 1968.-Т. 13 - С.142-150.

24. Вахрушев, В.И. Производство дубильных экстрактов: учеб. пособие для кадров массовых профессий / В.И. Вахрушев. М.: Легпромбытиздат, 1990.-320с.

25. Гаммерман, А.Ф. Лекарственные растения (растения-целители): справ, пособие / А.Ф. Гаммерман, Г.Н. Кадаев, A.A. Яценко-Хмелевский.-З-е изд., перераб. и доп. М.: Высш. шк., 1983.-С. 203-302.

26. Георгиевский, В.П. Биологически активные вещества лекарственных растений / В.П.Георгиевский, Н.Ф. Комиссаренко, С.Е. Дмитрук.- Новосибирск: Наука. Сиб. отд-ние, 1990.-С. 226-229.

27. Гончарова, Т.А. Энциклопедия лекарственных растений: (лечение травами): в 2-х т. / Т.А. Гончарова.- М.: Изд. Дом МСП, 1997.- Т.2.-С.36-38.

28. Горбанъ, А.Т. Новые сорта стальника полевого и бессмертника песчан-ного источник увеличения сырья / А.Т. Горбанъ, Н.И. Марченко, Н.И. Куценко // Перспективы создания и производства лекарственных средств в Украине: тез. докл. - Харьков, 1993 .-С. 16-17.

29. Гордиенко, А.Д. Гепатопротекторный механизм действия флавоноидов / А.Д. Гордиенко // Фармация.- 1990.- № 3. С.75-78.

30. Государственный реестр лекарственных средств. Официальное издание. -М.: Минздрав России, Фонд фармацевтической информации, 2000.-2001с.

31. Государственная фармакопея СССР: Вып. 1. Общие методы анализа / МЗ СССР.- 11-е изд. М.: Медицина, 1987. -336с.

32. Государственная фармакопея СССР: Вып. 2. Общие методы анализа. Лекарственное растительное сырье / МЗ ССР 11-е изд., доп. - М.: Медицина, 1989. -400с.

33. Гребнева, Н.Ю. Оценка качества корневищ с корнями Polemonium сае-ruleum L. по содержанию сапонинов / Н.Ю. Гребнева, Н.П. Харитонова, М.П. Блинова//Раст. ресурсы.-1995.-Т.31, №3.-C.l 11-115.

34. Гриневич, М.А. Информационный поиск перспективных лекарственных растений / М.А. Гриневич. Л.: Наука, 1990.-141с.

35. Гром, И.И. Дары природы / И.И. Гром, М.Д. Шупинская. М.: Медицина, 1968.-С.60.

36. Дикорастущие полезные растения России / под ред. А.Л. Буданцева, Е.Е. Лесиовской. СПб.: СПХФА, 2001. - С. 283-284.

37. Дмитриев, А.Б. Спектрофотометрическое определение флавонолов и изофлавонов при совместном присутствии / А.Б. Дмитриев, А.Л. Казаков //Хим.-фармац. журн.- 1981.-№ 12.-С.90-93.

38. Запесочная, Г.Г. О флавоноидах некоторых лекарственных растений / Г.Г. Запесочная, А.И. Баньковский // Лекарственные растения. Химия.-М.: Колос, 1969.- Т. 15. С.629-639.

39. Зинкевич, Э.П. Тритерпеновые гликозиды (сапонины) / Э.П. Зинкевич, Л.П. Вечерко // Лекарственные растения. Химия. М.: Колос.- 1969.-Т. 15. - С.640-691.

40. Исследование противогриппозной активности тритерпеноидов / В.Г. Платонов и др. // Хим.-фармац. журн.-1995.-Т.29, №2.-С.42-46.

41. Казаков, А.Л. Ононин и формононетин из представителей рода Trifolium / А.Л. Казаков, А.Л. Шинкаренко, Э.Т. Оганесян // Химия природ, соединений.- 1972,- № 6.-С.804-805.

42. Казаков, А.Л. Перспективы использования растений семейства бобовых флоры Северного Кавказа / А.Л. Казаков, В.А. Бандюкова, М.А. Галкин //

43. Изв. Сев.-Кав. науч. центра высш. шк. Естеств. науки.- 1979. №3 (27).-С.77-81.

44. Казаков, A.JI. Флавоноиды TRIFOLIUM MONTANUM / A.JI. Казаков // Химия природ, соединений.- 1977.- № 3. С 415-416.

45. Карпович, В.Н. Фармакогнозия / В.Н. Карпович, Е.И. Беспалова. М.: Медицина, 1976.-С.252-255.

46. Клышев, JI.K. Флавоноиды растений / JI.K. Клышев, В.А. Бандюкова, JI.C. Алюкина. Алма-Ата: Наука, 1978.- 220с.

47. Кобахидзе, К.Б. Флавоноиды GERANIUM PUSILLUM / К.Б. Кобахидзе, М.Д. Алания // Химия природ, соединений.- 2002.- № 2.- С.62.

48. Ковалев, В.Н. 'Флавоноуды травы вовчуга польового / В.Н. Ковалев // Фармац. журн.- 1975.- №2.-С.93

49. Ковалев, В.Н. Фармакогностическое изучение некоторых видов стальника: автореф. дис. . канд. фармац. наук: 15.00.02 / Ковалев Владимир Николаевич. Харьков, 1979. - 25с.

50. Ковалев, В.Н. Химическое изучение изофлавоноидов, содержащихся в настойке стальника / В.Н. Ковалев // Современные методы исследования лекарственных растений: сб. науч. тр. -М., 1988.-С.96-103.

51. Ковалев, В.Н. Некоторые результаты изучения растений семейства бобовые / В.Н. Ковалев // Перспективы создания и производства лекарственных средств в Украине: тез. докл. научно практич. конф. - Харьков, 1993.-С.36-37.

52. Ковалев, В.Н. Анатомическая диагностика цветущей травы стальника полевого / В.Н. Ковалев, JI.C. Картмазова, Н.М. Ткаченко //. Актуальные вопросы поиска и технологии лекарств: тез. докл. респуб. научная конф -Харьков, 1981.-С. 229-230.

53. Ковалев, В.Н. Фенольные соединения Ononis arvensis L. / В.Н. Ковалев, М.И. Борисов, В.Н. Спиридонов // Химия природ, соединений.- 1974.- № 6.-С.795-796.

54. Ковалев, В.Н. Химическое изучение растений рода стальник / В.Н. Ковалев, М.И. Борисов, В.Н. Спиридонов // Всесоюз. съезд фармацевтов (3; 1980; Кишинев): тез. докл.- Кишинев, 1980. С. 189-190.

55. Коломиец, Н.И. Биологические основы введения в культуру Ononis аг-vensis L / Н.И. Коломиец//Раст. ресурсы.- 1969. -Т. 5,№ 1. -С. 100-108.

56. Коренман, И.М. Фотометрический анализ. Методы определения органических соединений / И.М. Коренман.-2-еизд., перераб. и доп.-М.: Химия, 1975.-С.248-249.

57. Костинская, Н.Е. Детская зеленая аптека / Н.Е. Костинская.- Минск.: Ушверсггэц., Междунар. центр культуры книги, 1999.-С. 146-176.

58. Крицкая, Л.И. Категоризация лекарственных растений правобережного Причерноморья по отношению к результатам заготовки фитосырья / Л.И. Крицкая //Респуб. конф. по медицинской ботанике (2; 1988; Киев): тез. докл. -Киев, 1988.-С.66.

59. Кугач, В.В., Лекарственные формы флавоноидов / В.В. Кугач, Н.И. Ни-кулышина, В.И. Ищенко // Хим.-фармац. журн.- 1988.- № 8.-С.1018-1025.

60. Кузнецова, М.А. Фармакогнозия: учебник / М.А. Кузнецова, И.З. Рыба-чук. -2-е изд., перераб. и доп.- М.: Медицина, 1993.-С.334-336.

61. Куликов, В.В. Лекарственные растения Алтайского края / В.В. Куликов.-Барнаул: Алт. кн. изд-во, 1975.-С.142-143.

62. Кьосев, П.А. Полный справочник лекарственных растений / П.А. Кьосев. М.: Эксмо-Пресс, 2000.-992с.

63. Левитина, Т.П. Справочник по органической химии: учеб. пособие / Т.П. Левитина. -СПб.: Паритет, 2002.-448с.

64. Лекарственное растительное сырье. Фармакогнозия: учеб; пособие / под ред. Г.П. Яковлева и К.Ф. Блиновой. -СПб.: СпецЛит, 2004.-С.439-442.

65. Лекарственные растения Азербайджана / И.А. Дамиров и др..- Баку: Маариф, 1983. С.236-237.

66. Лекарственные растения в гастроэнтерологии / Т.В. Зинченко и др..-Киев: Наук, думка, 1989. С. 119-120.

67. Лесиовская, Е.Е. Фармакотерапия с основами фитотерапии: учеб. пособие / Е.Е. Лесиовская, Л.В. Пастушенков.-2-е изд.-М.: ГЭОТАР-МЕД, 2003.-С.297-333.

68. Литвиненко, В.И. Природные флавоноиды / В.И. Литвиненко.- Харьков, 1995.-С.29-41.

69. Литвиненко, В.И. Состояние и перспективы создания флавоноидных препаратов / В.И. Литвиненко // Состояние и перспективы современного лекарствоведения: тез. докл. Ярославль, 1997.-С.174.

70. Литвиненко, В.И. Спектральное исследование флавоноидов обнаружение свободных фенольных оксигрупп в различных положениях / В.И. Литвиненко, Н.П. Максютина // Химия природ, соединений. —1965.-№ 6. -С.420-424.

71. Лобанова, A.A. Исследование биологически активных флавоноидов в экстрактах из растительного сырья / A.A. Лобанова, В.В. Будаева, Г.В. Сакович // Химия раст. сырья.- 2004.- №1.-С.47-52. . .

72. Луцык, Р.В. Определение теплофизических характеристик лекарственных растений (корней девясила и стальника) / Р.В. Луцык, В.Л. Ломазов,

73. B.Г. Громов // Хим.-фармац. журн.- 1984.-Т. 18, № 2. С.71-73.

74. Мазнев, Н.И. Травник / Н.И. Мазнев.- М.: ООО Гамма Пресс 2000, 2001.1. C.357-358.

75. Макарова М.Н. Антирадикальная активность флавоноидов и их комбинаций с другими антиоксидантами / М.Н. Макарова, В.Г. Макаров, И.Г. Зенкевич // Фармация.- 2004.- № 2.- С. 30-32.

76. Машковский, М.Д. Лекарственные средства: в 2 т. / М.Д. Машковский.-14-е изд., перераб. и доп. М.: Новая волна, 1997.-1т.-С.338.

77. Минина, С.А. Химия и технология фитопрепаратов / С.А. Минина, И.Е. Каухова.- М.: ГЕОТАР Мед, 2004.-560с.

78. Молчанов, Г.И. Съедобные целебные растения Кавказа: справочник / Г.И. Молчанов, Л.П. Молчанова.- Ростов: Ростовский ун-т. 1989. С. 272273.

79. Морзунова Т.Г. Капиллярный электрофорез в фармацевтическом анализе (обзор) / Т.Г. Морзунова// Хим.-фармац. журн.- 2006.- № 3.-С.39-50.

80. Настойки, экстракты, эликсиры и их стандартизация / под ред. В.Л. Баги-ровой, В.А. Северцева. -СПб.: Спец. лит, 2001.-223с.

81. Некоторые аспекты технологии получения биологически активных веществ из лекарственного растительного сырья / В.И. Литвиненко и др. // Фармаком,- 2003.-№4.- С.27-32.

82. Никитюк, В.Г. Некоторые особенности технологии получения капсул, подбора композиций желатиновых масс и наполнителей / В.Г. Никитюк, H.A. Шемет // Провизор.-1999.-№4.-С.22-24.

83. Никитюк, В.Г. Современное состояние и перспективы развития в Украине производства препаратов в форме желатиновых капсул / В.Г. Никитюк, H.A. Шемет // Фармаком.- 1999.-№5.-С.6-9.

84. Никитюк, В.Г. Наполнители для капсул, их разнообразие и особенности / В.Г. Никитюк, H.A. Шемет // Фармаком.- 2001.-№1.-С.11-15.

85. Новые природные и полусинтетические биологически активные соединения ГНЦЛС / Георгиевский В.П. и др..- Харьков: Основа, 1995. -С.443-444.

86. Номенклатурные лекарственные виды некоторых регионов Карачаево — Черкессии / A.C. Койчуева и др. // Регион, конф. по фармации, фармакологии и подготовке кадров (53, 1998, Пятигорск): материалы—- Пятигорск, 1998. С. 18-20.

87. Озимина, И.И. О хроматографическом разделении изофлавонов / И.И. Озимина, А.Б. Бандюков // Химия природ, соединений. -1983.- № 6. -С.712-716.

88. О стандартизации жидких экстрактов пастушьей сумки, пустырника, крушины и левзеи / Ю.Г. Пшуков и др. // Проблема стандартизации и контроля качества лекарственных средств: тез. докл. М., 1991.- Т.2, ч.2.~ С.39-41.

89. Пасешниченко, В.А. Растения-продуценты биологически активных веществ / В.А. Пасешниченко // Соровский образовательный журн.- 2001.Т. 7, №8.-С.13-19.

90. Пастушенков, JI.B. Лекарственные растения: Использование в народной медицине и быту: метод, пособие / Л.В. Пастушенков, А.Л. Пастушенков В.Л. Пастушенков. СПб.: ДЕАН, 1998.-С.249-250.

91. Перепченко, Н.П. Новое лекарственное растение — стальник пашенный / Н.П. Перепченко // Бот. журн. -1964.- Т. 49, № 4. С.592-594.

92. Перспективы создания сухих экстрактов / И.А. Самылина и др. // Фар-мация.-2006.-№2.-С.43-46.

93. Пилат, Т.Л. Биологически активные добавки к пище (теория, производство, применение) / Т.Л. Пилат, A.A. Иванов.- М.: Аваллон, 2002.-С.418-674.

94. Племенков, В.В. Введение в химию природных соединений / В.В. Пле-менков.- Казань, 2001.-376с.

95. Понаморев, В.Д. Исследование процесса экстрагирования и технологиипрепаратов корней солодки: автореф. дис.кан. фарм. наук: 15.00.01 /

96. Понаморев Вениамин Данилович. Тбилиси, 1972.-40с.

97. Понаморев, В.Д. Экстрагирование лекарственного сырья / В.Д. Понаморев. М.: Медицина, 1976.-С.138-140.

98. Попова, Т.П. Некоторые общие закономерности извлечения действующих веществ из лекарственного сырья. Сообщение 1 / Т.П. Попова, В.И. Литвиненко// Фармаком.- 1993.-№1.- С. 13-16.

99. Попова, Т.П. Некоторые общие закономерности извлечения действующих веществ из лекарственного сырья. Сообщение 2 / Т.П. Попова, В.И.

100. Литвиненко // Фармаком.- 1993 .-№2.- С.9-12.

101. Попова, Т.П. Некоторые общие закономерности извлечения действующих веществ из лекарственного .сырья. Сообщение 3 / Т.П. Попова, В.И. Литвиненко// Фармаком.- 1993.-№3.-С.13-16.

102. Практикум по фармакогнозии: учеб. пособие для студ. вузов/ под общ. ред. В.Н. Ковалева. Харьков: НФаУ: Золотые страницы; МТК-Книга, 2004.-С.129-132.

103. Природные и модифицированные изофлавоноиды / А.Л. Казаков и др.. -Ростов-н/Д: РГУ, 1985.- С.44-175.

104. Промышленная технология лекарств / В.И. Чуешов и др..-Х.: МТК-Книга; изд. НФАУ, 2002.-С. 393-415.

105. Пшуков, Ю.Г. Разработка метода нормирования качества жидких экстрактов и настоек / Ю.Г. Пшуков // Всерос. съезд фармацевтов (5; 1987; Ярославль): тез. докл. Ярославль, 1987.-С.226-227.

106. Пшуков, Ю.Г. Разработка ресурсосберегающей технологии и принципов нормирования качества жидких экстрактов и настоек: автореф. дис. .д-ра. фармац. наук: 15.00.01 / Пшуков Юрий Георгиевич. Пятигорск, 1988.-330с.

107. Пшуков, Ю.Г. Методика одновременного определения коэффициента поглощения, коэффициента образования внутреннего сока и коэффициента увеличения объема при растворении экстрактивных веществ / Ю.Г. Пшуков // Фармация.- 1990.- №4.- С.24-28.

108. Пшуков, Ю.Г. Метод нормирования качества жидких экстрактов и настоек / Ю.Г. Пшуков // Проблема стандартизации и контроля качества лекарственных средств: тез. докл. -М., 1991.-С.63-64.

109. Рандушка, Д. Цветовой атлас растений / Д. Рандушка, JL Шомшак, И. Габерова. Братислава: Обзор, 1990.-С.262.

110. Растения для нас / под ред. Г.П. Яковлева и К.Ф. Блиновой. — СПб.: Учеб. кн., 1996. С.395-399.

111. Растительные ресурсы СССР: цветковые растения, их хим. состав, использование; семейства Hydrangaceae —Haloragaceae.- Л.: Наука, 1987.-С.166-168.

112. Растительные ресурсы России и сопредельных государств:: часть I- семейства Lycopodiaceae — Ephedraceae, часть II -дополнения к 1-7 -му томам.- СПб: Мир: Мир и семья. -95, 1996. С.226-227.

113. Регистр лекарственных средств России. РЛС Энциклопедия лекарств.-11-й вып. / гл. ред. Г.Л. Вышковский. -М.: РЛС-2004.-1503с.

114. Реднюк, Т.Д. Лекарственные сборы для лечения заболеваний почек и мочевого пузыря / Т.Д. Реднюк // Фармация.- 1992. -Т. 41, №4.-С.87-89.

115. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ / под ред. В.П. Фисенко. М.: Медицина, 2000. - 398с.

116. Румянцева, Ж.Н. Поиски гепатопротекторов среди препаратов растительного происхождения / Ж.Н. Румянцева, Я.С. Гудивок // Раст. ресурсы.-1993.-Т. 29, №1.-С.88-97.

117. Рыбанченко, А.И. Изучение основности природных изофлавоноидов / А. И. Рыбанченко и др. // Съезд фармацевтов Молдавии (2; 1985; Кишинев): тез. докл. Кишинев; 1985. - С. 105-106.

118. Сампиев, A.M. Оптимизация технологии и совершенствование нормирования качества настойки календулы / A.M. Сампиев; М.М. Дзаурова, М.Р. Хочава // Кубанский научн. мед. вест.- 2005.-№3-4.-С.50-53.

119. Сараф, A.C. Флавоноиды как противоаллергическиехоединения / A.C. Сараф, Э.Т. Оганесян//Хим.-фармац. журн.- 1991.-№ 2.-С.4-8.

120. Середин, P.M. Био географический анализ порядка бобоцветных флоры Северного Кавказа / P.M. Середин // Актуальные вопросы фармации.- Ставрополь, 1974.- Вып. 2.-С.322-326.

121. Сернов, JI.H. Элементы экспериментальной фармакологии / Сернов Л.Н., Гацура В.В. М., 2000. - 351с.

122. Сидоров, К.К. О гармонизации отечественных и международных классификаций острой токсичности химических соединений / К.К. Сидоров // Токсикол. вестн.- 2004.-№ 6.-С. 2-3.

123. Синтез а арилокси-2-гидроксиацетофенон-4-0-(3-0-глюкопиранозидов и их превращение в 3-арилоксихромон -7-О-глюкозиды / В.Г. Пивова-ренко и др. // Химия природ, соединений,- 1988.- № 6. - С.519-524.

124. Система капиллярного электрофореза. Основы метода. Аппаратура. Примеры использования систем капиллярного электрофореза «Капель -103, -104, -105».-СПб.: Петрополис, 2001.-65с.

125. Скурихин, И.М. Руководство по методам анализа качества и безопасности пищевых продуктов / И.М. Скурихин, В.А. Тутельян. М.: Брандес; Медицина, 1998.-С.183-195.

126. Современное состояние и пути повышения уровня фитохимических производств / А.П. Прокопенко и др. // Фармаком.- 1993.-№6-7-С.16-25.

127. Современная фитотерапия / под ред. В. Петкова. София: Медицина и физкультура, 1988. - С.272-273.

128. Соколов, С.Я. Справочник по лекарственным растениям. Фитотерапия / С.Я. Соколов, Л.П. Замотаев М.: Недра, 1985.-С. 144-145.

129. Спектрофотометрия гликозидов олеаноловой кислоты и хедерагенина в концентрированной серной кислоте / Г.Л. Генкина и др. // Химия природ. соединений.-1977.-№2.-С.220-227.

130. Справочник Видаль. Лекарственные препараты в России. М.: Астра-ФармСервис, 2003 .-1488с.

131. Справочник по лекарственным растениям / A.M. Задорожный и др.. -М.: Экология, 1992.-С.323-325.

132. Степаненко, Б.Н. Химия и биохимия углеводов (Моносахариды) / Б.Н. Степаненко.- М.: Высш. шк., 1977.- 222 с.

133. Степаненко, Б.Н. Химия и биохимия углеводов (Полисахариды) / Б.Н. Степаненко.-М.: Высш. шк., 1978.- 256 с.

134. Терентьева, C.B. Кумарины и флавоноиды надземной части CARDUUS CRISPUS L. и NUTANS L. / C.B. Терентьева, Е.А. Краснов // Раст. ресурсы.- 2003. -Т. 39, № 1.-С.55-63.

135. Технология и стандартизация лекарств: сб. науч. тр. / под ред. В.П. Георгиевского и Ф.А. Конева.- Харьков: ООО РИРЕГ, 1996. С. 150-151.

136. Технология и стандартизация лекарств: сб. науч. тр. / под ред. В.П. Георгиевского и Ф.А. Конева. Т.2.- Харьков: ИГ РИРЕГ, 2000. С.445-474.

137. Ткачев, C.B. Современное состояние теории и практики интенсификации процессов экстракции из лекарственного растительного сырья под влиянием ультразвука / C.B. Ткачев // Тр. Пермского фармац. ин-та.-1973. -4.2. С.56-61.

138. Тулайкин, А.И. Изучение полифенольного комплекса из надземной части стальника полевого / А.И. Тулайкин // Человек и лекарство: тез. докл. 11 Рос. нац. конгр.19-23 апр. 2004:- М., 2004.- С.898-899.

139. Тулайкин, А.И. Углеводы из надземной части Ononis arvensis (Fabaceae): выделение и анализ / А.И. Тулайкин, B.C. Березина, М.Ю. Гончаров // Раст. ресурсы.- 2004.- № 4 С.73-79.

140. Турецкова, В.Ф. Валидационная оценка методик определения серотони-на в препарате «Экосорб» / В.Ф. Турецкова, Н.В. Сухотерина, А.Ю. Жариков // Фармация.- 2006.- № 6. С. 13-14.

141. Тюнникова, Н.В. Основные биологически активные вещества видов рода GALEOPSIS L./ Н.В. Тюнникова, A.JI. Буданцев, A.JI. Шаварда // Раст. ресурсы. -2004.- № 3.-С. 154-171.

142. Уткин, Л.М. Об изофлавонгликозиде PIPTANTHUS NANUS М. POP./ Л.М. Уткин, А.П. Серебрякова // Химия природ, соединений.- 1965. №6. -С.70-72.

143. Фелсберг, A.A. Фитохимическое исследование Ononis arvensis / A.A. Фелсберг, П.Э. Розенцвейг // Аптечное дело. -1965.- Т. 14, № 3. -С.25-27.

144. Фелсберг, A.A. Сравнительное фитохимическое изучение корней стальника пашенного и колючего / A.A. Фелсберг, П.Э. Розенцвейг // Аптечное дело. -1965.- № 6. -С.26-32.

145. Фенольные соединения Ononis arvensis L. Строение оногенина / В.Н. Ковалев и др.. // Химия природ, соединений.- 1975, № 3.-С.354-357.

146. Фенольные соединения Ononis arvensis L. / В.Н. Ковалев и др.. // Химия природ, соединений.- 1976.-№ 1.-С.104-105.

147. Фурса Н.С. Определение фенольных соединений мази «Ледум» / Н.С. Фурса, М.С. Коротаева // Фармация.- 2006.-№2.-С.7-9.

148. Харакоз, М.Ф. Лекарственные растения Краснодарского края / М.Ф. Ха-ракоз— 3-е изд., перераб. и доп. Краснодар: Сов. Кубань, 1997.-С.239-242.

149. Хелая, Н.Я. Лекарственные растения грузинской рукописи XVI-XVII вв. «Карабадин полезный» / Н.Я. Хелая // Раст. ресурсы.- 1987. -Т.23, № 4. -С.501-513.

150. Храмов, В.А. Хлорогеновая кислота в листьях и лиофилизированных экстрактах стевии / В.А. Храмов, Н.В. Дмитриенко // Хим.-фармац. журн. -2000.-Т.34, № 11.- С.34-35.

151. Чирва, В.Я. Тритерпеновые гликозиды видов порядка Fabales / В.Я. Чирва, Т.В. Сергиенко //Раст. ресурсы.-1988.-Т.24, №2.-С.211-298.

152. Чистохин, Ю.Г. Совершенствование процесса экстрагирования из лекарственного растительного сырья: автореф. дис.канд. фарм. наук:1500.01 / Чистохин Юрий Георгиевич. Харьков, 1990.-25с.

153. Шинкаренко, A.JI. Методы исследования природных флавоноидов: метод. рекомендации / АЛ. Шинкаренко, В.А. Бандюкова, A.JI. Казаков.-Пятигорск, 1977.-70с.

154. Шретер, А.И. Лекарственная флора Кавказа / А.И. Шретер, Д.А. Муравьева. -1979. С.269-271.

155. Энциклопедический словарь лекарственных растений'и продуктов животного происхождения: учеб. пособие / под ред. Г.П. Яковлева, К.Ф. Блиновой.- СПб.: Спец. лит., 1999.-С.263.

156. Юлдашев, М.П. Флавоноиды надземной части TR1GONELLA GRANDIFLORA / М.П. Юлдашев // Химия природ, соединений. -2002.- № 3.-С.243-244.

157. Approaches to flavonoid production in plant tissue cultures / A. Jedinák et al. // Biología.- Bratislava.- 2004.-№59.- P.697—710.

158. Берестова, C.I. Фенольш сполуки листя хмелю звичайного / C.I. Берестова, В.М. Ковальов, C.B. Ковальов // Актуальш питания фармацевтично'1 та медичноУ науки та практики: зб. наук. ст. -Запор1жжя Видавництво ЗДМУ, 2006.- Вип. 15.-С.167-172.

159. Casero, Madel Carmen Vidal. El desarrollo de la legislación sobre plantas medicinales en la comunidad europea y su incorporación en el ordenamiento jurídico español / Madel Carmen Vidal Casero // Su problemática.- 2003.-Vol. 11, № 1.- P.85-108.

160. Chayóte mosaic virus, a new tymovirus infecting Cucurbitaceae / J. J. Bernai et al. // Phytopathology.- 2000.-№90.- P.-1098-1104.

161. Справочник биохимика: пер. с англ. / Досон Р., Эллиот Д., Эллиот У., Джонс К. -М.:Мр, 1991.- 544с.

162. Flavanone 3-hydroxylase (F3H) expression and flavonoid localization in nodules of three legume plants reveal distinct tissue specificities / Benedicte Charrier et al. // Molecular Plant-Microbe Interactions.- 1998.-Vol. 11, No. 9.- P. 924—932.

163. Видшення та вивчення флавоноццв деяких рослин родин Бобов)" та Селеров1 та Тх лшазотропна активнють / П.С. Янченко и др. // Фарма-ком.-2004.-№4.-С.-1-11.

164. Jeri, R. The use of an isoflavone supplement to relieve hot flushes / R. Jeri // The Female Patient.- 2002.-Vol. 27.-P.35-37.

165. Вивчення анатом1чноУ будови кореня вовчуга польового / В.М. Коваль-ов и др.. // Фармац. журн.- 1973.- № 5.- С. 68-71.

166. Досягнення та перспективи дослщжень бюлопчно активних речовин рослинного походження / В.М. Ковальов и др. //. Актуальт питания фармацевтичноТ та медично\' науки та практики: зб. наук. ст. — Запор1жжя, 2006.- Вип. 15.-С. 155-160.

167. Krowczynski, L. Wpliw postaci leku na dzialanie lecznicze / L. Krowczynsk // Farm. pol. 1979.-Vol. 35, №11.-S.665.

168. Литвиненко, B.I. Вивчення фенольного складу листюв бадану товстоли-стого / B.I. Литвиненко, Н.В. Попова, I.O. Кожух // Фармаком.- 2003.-№3.- С.20-23.

169. Литвиненко, В.И. Фитохимическое изучение флавон-содержащего растительного сырья / В.И. Литвиненко, Н.В. Попова, И.Л. Оккерт // Актуальш питания фармацевтично'1 та медичноУ науки та практики: зб. наук. ст. Запор1жжя, 2006.-Вип. 15.- С.97-101.

170. Lonner, J. Darashkevich I. Herbal Medicine in Belarus / J. Lonner, I. Darash-kevich // Herbal Gram.- 2006.-№ 69.- P.36-38.

171. Leved, E. Qualité des matieres premieres et mise on occurve galenique / E. Leved // Sci. Techn. Pract. Pharm.-1988.-Vol.4, №4.- P.327-329.

172. Liu, J. Oleanolic acid and ursolic acid: Research perspectives / J. Liu // Eth-nopharmacology.-2005.- Vol. 100.- P.92-94.

173. Liquid Filled and Sealed Hard Gelatin Capsules / D. Cade et al. // Drug Dev. And Ind. Pharm.-1986.-Vol. 12, N-l 1-13.-P.2289-2300.

174. Витяжки у виробнищтн фгкш.шчних препарате / Т.П. Попова и др.] // Фармац. журн.-1995.-№2.-С.30-31.

175. Попова, Т.П. Деяю загальш законом1рност5 екстрагування д1ючих речо-вин з лшарсь^ сировини / Т.П. Попова, B.I. Литвиненко // Фармац. журн,- 1995,- №5.- С.98-100.

176. Фшьтрацшна екстракц1я YY апаратурне оснащения / Т.П. Попова и др. // Фармац. журн.- 1995.-№6.- С.91-93.

177. Production of sinorhizobium meliloti nod gene activator and repressor fla-vonoids from medicago sativa roots / José Angelo Silveira Zuanazzi et al. // Molecular Plant-Microbe Interactions.- 1998.-Vol. 11, No. 8.-P. 784-794.

178. Raskin, I. Can an apple a day keep the doctor away? / I. Raskin, C. Ripol,l // Current Pharmaceutical Design.- 2004.-№10.-P.l -12.

179. Spilkova, J. Ononis arvensis in vitro—abiotic elicitation / J. Spilkova, P. Bednar, R. Stroblikova // Pharmazie. -2001.- Vol. 56, №5.- P.424-5.

180. Torek, M. Rerus de phytochimic les flavonoides des légumineuses / M. Torek // Fitoterapia.- 1976 -Vol. 47, № 5.- P.218.

181. Tumova, L. Effect of jasminic acid on production of flavonoids in a culture of Ononis arvensis L. in vitro/ L. Tumova, L. Zapalkova // Ceska Slov Farm. -2002 Mar.-51(2).- P.96-8.

182. Tumova, L. Effect of CrC13 on the in vitro production of flavonoids in a culture of Ononis arvensis L. / L. Tumova, R. Blazkova // Ceska Slov Farm.-2002- Vol. 51, №1.- P.44-6.

183. Tumova, L. Ononis arvensis in vitro—abiotic elicitation / L. Tumova, P. Os-trozlik // Ceska Slov Farm. -2002 -Vol. 51, №4.- P. 173-6.

184. Tumova, L. Iodoacetic acid as a potential elicitor of increased production of flavonoids in a culture of Ononis arvensis L. in vitro / L. Tumova, M. Bar-takova, J. Zabloudilova // Ceska Slov Farm. -2003- Vol. 52, №4.-P. 189-92.

185. The tymobox, a sequence shared by most tymoviruses: its use in molecular studies of tymoviruses / Ding SW et ol. // Nucleic Acids Res. -1990 -Vol. 18, №5.-P. 1181-1187. I

186. Ueda, H. A Hydroxyl group of flavonoids affects oral anti-inflammatory activity and inhibition of systemic tumor necrosis factor-a production / H. Ue-da, C. Yamazaki, M. Yamazaki // Biosci. Biotechnol. Biochem.- 2004.- Vol. 68, №1.- P.119-125.

187. Woitke, M.D. Fortschritte in der Erforschung der Triterpensaponine / M.D. Woitke, J. P. Kayser, K. Hiller // Pharmazie.-1970.-№25.- P.133-241.

188. Российский сводный каталог no HTJI Электронный ресурс.-Электрон, Dr. Duke's. Phytochemical and Ethnobotanical Database. 2004,-Режим доступа: http: // www.ars-grin.gov / duke /. — Загл. с экрана.т