Разработка технологии белково-аминокислотных корректоров кормов и биологически активных добавок на основе направленной ферментативной конверсии полимеров дрожжевой биомассы тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.01.06, кандидат наук Рачков, Кирилл Викторович

• Рачков, Кирилл Викторович
• кандидат наук
• 2014

Оглавление диссертации кандидат наук Рачков, Кирилл Викторович

ОГЛАВЛЕНИЕ

Стр.

Введение

Глава 1 Обзор литературы

1.1 Состояние проблемы и задачи исследований

1.2 Получение биологически активных добавок на основе микроорганизмов

1.3 Структура и биохимический состав дрожжевой клетки

1.4Методы трансформации дрожжевой клетки

1.4.1 Физические методы дезинтеграция микробных клеток

1.4.2 Химические методы дезинтеграции микробных клеток

1.4.3 Биологические методы деструкции полимеров дрожжевой биомассы

1.4.3.1 Автолиз дрожжевых клеток

1.4.3.2 Ферментативный гидролиз

1.5 Методы получения биологически активных препаратов из микробной

биомассы и исследования их структурно-спектральных свойств

1.5.1 Электрофоретические методы разделения белка

1.5.1.1 Изоэлектрическое фокусирование белков

1.5.2 Хроматографическое разделение белков

1.5.2.1 Гель-хроматография (гель-фильтрация)

1.5.2.2 Аффинная хроматография

1.5.2.3 Распределительная хроматография

1.5.3 Масс-спектрометрический анализ белков и пептидов

Заключение по обзору литературы

Глава 2 Объекты и методы исследований

2.1 Объекты исследования

2.2 Методы исследований

2.2.1 Исследование влияния физико-механических способов предобработки дрожжевой биомассы

2.2.2 Исследование биохимического состава ферментолизатов

2.2.3 Методы математического планирования эксперимента и обработка экспериментальных данных

2.3 Структура проведенных исследований

Глава 3 Результаты экспериментов и их обсуждение

3.1 Исследование различных способов деструкции клеточных стенок для подготовки дрожжевой биомассы к ферментативному воядейстрию ,

3.1.1 Изучение влияния ультразвукового излучения на интенсификацию процесса ферментолиза клеточной стенки дрожжей

3.1.2 Влияние баротермического воздействия на степень подготовки дрожжевой биомассы к ферментативной деструкции. Исследование влияния баротермического воздействия на степень деструкции клеточных стенок дрожжей (КС) в технологии получения белковых препаратов

3.1.3 Влияние баротермического воздействия на эффективность процесса ферментативной деструкции внутриклеточных структур дрожжей

3.2 Изучение степени деструкции клеточных структур дрожжей ЗассИаготусеБ сегеу1з1ае под действием ферментативных систем

3.2.1 Влияние длительности процесса ферментолиза на степень деструкции клеточных стенок и внутриклеточных структур дрожжевой биомассы

3.2.2 Влияние ферментативных систем с различной субстратной специфичностью на степень деструкции дрожжевой биомассы

3.3Изучение степени деструкции клеточных структур с применением электронной и сканирующей микроскопии

3.4Научное и экспериментальное обоснование получения функциональных продуктов пищевого и кормового назначения с использованием ферментолизата дрожжевой биомассы

Заключение и основные выводы

Список сокращений...,

Список литературы

Приложения

Приложение 1 Технические условия и технологические инструкции на

разработанные продукты

Приложение 2 Акт испытаний и наработки опытных партий ферментолизатов

Приложение 3 Акт выработки и испытаний в производстве косметических кремов, протокол испытаний их эффективности

Приложение 4 Акт выработки и испытаний в производстве шампуней и протокол испытаний их эффективности

Приложение 5 Акт испытаний в составе стартового комбикорма для личинок осетровых рыб

Приложение 6 Диплом за «Ферментолизат с антиканцерогенными свойствами и специфической цитотоксичностью по отношению к онкоклеткам»

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Разработка технологии белково-аминокислотных корректоров кормов и биологически активных добавок на основе направленной ферментативной конверсии полимеров дрожжевой биомассы»

Введение

В современном мире с быстро растущим населением и недостаточно развитым сельским хозяйством, чрезвычайно важным становится поиск альтернативных источников пищевого белка. Большая часть населения Земли голодает из-за нерационального распределения продовольствия и отсутствия сбалансированного питания. Ученых волнует вопрос, сможет ли уровень развития производства продуктов питания и кормов идти в ногу с темпом роста населения. Данная проблема обусловлена ограниченными сырьевыми ресурсами и сельскохозяйственными угодьями, необходимыми для глобального

продовольственного снабжения и производства.

В последнее время с подобной проблемой столкнулись и в России. Анализ структуры питания населения России свидетельствует о дефиците пищевого белка, который по прогнозам экспертов, сохранится и в ближайшем будущем. В структуре питания россиян стала преобладать углеводная пища, что повлекло за собой острый дефицит таких биологически важных нутриентов, как белки, незаменимые аминокислоты, витамины и минералы. Белки в живых организмах играют очень важную роль, выполняя регуляторные, структурные, каталитические, транспортные, защитные и другие функции. Они обеспечивают обмен веществ организма, в котором участвуют как структурные белки клеток и тканей, так и ферментные и гормональные системы. Белки в организме человека находятся в постоянном обновлении, при котором распад компенсируется ресинтезом из фонда свободных аминокислот, полученных при переваривании пищи.

Эффективность белкового обмена в значительно степени зависит от количественного и качественного состава пищи. Минимально необходимая норма потребления белка - 49г/сутки. При поступлении белков с пищей ниже рекомендуемых норм в организме начинают распадаться белки тканей, а полученные после их распада аминокислоты расходуются на синтез ферментов, гормонов и других жизненно необходимых компонентов. В то же время, клетки

организма человека не могут синтезировать необходимые белки, если в составе пищи будет отсутствовать, хотя бы одна незаменимая аминокислота. В итоге в результате неправильного питания понижается сопротивляемость населения неблагоприятным факторам, развиваются хронические заболевания, снижается продолжительность жизни.

Одними из самых перспективных продуцентов белка, аминокислотный скор которого приближается к животному, являются микроорганизмы, особенно таких таксономических групп как: дрожжи, микроскопические грибы, актиномицеты, одноклеточные водоросли, бактерии. Однако питательная ценность микробной биомассы ограничена малой доступностью содержимого клетки для действия пищеварительных ферментов. Для повышения усвояемости внутриклеточных биологически ценных компонентов разрабатываются различные способы обработки дрожжей, из которых наиболее перспективным является процесс направленной ферментативной деструкции полимеров микробной клетки с целью выделением белковых веществ и получения белково-аминокислотных обогатителей пищи [24, 57, 66, 86].

В связи с вышесказанным следует, что в условиях высокого дефицита пищевого белка, несбалансированности питания основной задачей является поиск перспективных микроорганизмов - источников белковых веществ и разработка эффективного способа конверсии микробной биомассы на основе регулируемого процесса деструкции субклеточных структур для получения

конкурентоспособных биологически полноценных корректоров пищи и кормов с заданными структурно-функциональными свойствами.

Цель и задачи исследования. Основная цель диссертационной работы состояла в совершенствовании биотехнологии белково-аминокислотных корректоров пищи, кормов и биологически активных добавок (БАД), получаемых на основе направленной ферментативной конверсии высокомолекулярных полимеров микробной биомассы, для повышения эффективности производства и получения пищевых добавок с заданными структурно-функциональными

свойствами, обеспечивающих повышение качества питания и создание социально значимых функциональных продуктов.

Для достижения поставленной цели решались следующие задачи:

- проведение мониторинга и сравнительного анализа существующих методов подготовки микробной биомассы к ферментативной деструкции субклеточных структур;

- изучение степени баротермического воздействия на клеточные стенки дрожжей ЗассИагошусез сегеу1з1ае для выделения белковых веществ;

- исследование влияния баротермического воздействия на эффективность процесса ферментативной деструкции внутриклеточных структур дрожжей;

- проведение спектрального анализа ферментолизатов микробной биомассы в процессе деструкции белковых веществ протоплазмы дрожжевой клетки;

- электронно-микроскопические исследования ферментолизатов дрожжевых клеток БассЬаготусез сегеу1з!ае;

- исследование взаимосвязи спектрального состава белковых веществ и функциональных свойств ферментолизатов дрожжевой биомассы;

- проведение испытаний и наработка опытной партии биокорректора пищи;

- научное и экспериментальное обоснование получения функциональных продуктов пищевого и кормового назначения с использованием ферментолизата дрожжевой биомассы.

Научная новизна работы. Получены и научно обоснованы экспериментальные данные в области биокаталитической деструкции полимеров дрожжевой биомассы:

- изучено влияние баротермической обработки дрожжевой биомассы на степень конверсии белково-полисахаридных полимеров клеточных стенок дрожжей;

- установлена зависимость глубины гидролиза субклеточных структур дрожжевой биомассы от параметров предобработки дрожжевой биомассы (давления, температуры, длительности воздействия);

- исследован спектральный состав белковых веществ ферментолизатов дрожжевой биомассы;

- установлено влияние ферментативных систем на степень деструкции белковых веществ дрожжевой клетки;

определены параметры процесса направленной биокаталитической конверсии субклеточных полимеров дрожжей с получением ферментолизатов с заданным структурно-фракционным составом; :

- установлена взаимосвязь спектрального состава дрожжевых гидролизатов с функциональными свойствами получаемых продуктов.

Практическая значимость. На основе установленных закономерностей баротермической и ферментативной конверсии полимеров микробной клетки усовершенствована технология получения белково-аминокислотных обогатителей пищи и кормов. Разработанная технология позволяет повысить степень деструкции внутриклеточных структур дрожжей и получать добавки целевого назначения с заданными структурно-функциональными свойствами аппаратурно-технологическая схема. На целевые продукты разработана нормативная документация (ТУ 9182-056-00334586-2012 «Белково-аминокислотный биокорректор пищи»; ТИ по производству белково-аминокислотного биокорректора пищи; ТУ 9182-114-00334586-2013 «Кормовая белково-аминокислотная добавка Протамин»; ТИ по производству кормовой белково-аминокислотной добавки Протамин; ТУ 9182-115-003345862013 «БАД Суперпротамин»). Проведена наработка опытных партий белково-аминокислотных обогатителей пищи и кормов на ЗАО «Биопрогресс» ВНИТИБП (Московская область, Щелковский район).

Показана перспективность использования продуктов конверсии дрожжевой биомассы, в качестве эффективных добавок повышающих биологическую ценность пищи и кормов. Проведены испытания по использованию ферментолизатов дрожжей для обогащения ферментированных молочных продуктов, косметических изделий и стартовых комбикормов для личинок осетровых рыб, подтвердившие их высокую биологическую эффективность.

Положения, выносимые на защиту:

1. Результаты исследований по влиянию баротермической предобработки дрожжевой биомассы на повышение степени биокаталитического воздействия ферментативных систем на высокомолекулярные полимеры клеточных стенок и протоплазмы клетки.

2. Закономерности направленной ферментативной деструкции дрожжевой биомассы с получением ферментолизатов с заданным фракционным составом белковых веществ.

3. Усовершенствованная технология получения биологически активных добавок (БАД), белково-аминокислотных корректоров пищи и кормов.

4. Спектральный состав целевых добавок и перспектива их применения для повышения биологической ценности продуктов питания и кормов.

Апробация работы. Основные положения работы были представлены на следующих конференциях: Международная конференции «Биология — наука XXI века». Москва, 2012 г; 46-ая Международная научная конференция молодых ученых, докторантов, аспирантов и соискателей ученых степеней доктора и кандидата наук «Эффективность применения средств химизации в современных технологиях возделывания сельскохозяйственных культур. ГНУ ВНИИ агрохимии им. Д.Н. Прянишникова, Москва, 2012 г; Международная конференции «Современные перспективы в исследовании хитина и хитозана», Мурманск, 2012 г; Всероссийская научно-практическая конференция «Научно-инновационные аспекты при создании продуктов здорового питания», Углич, 2012 г; VII Международный Конгресс «Биотехнология: состояние и перспективы

развития», Москва, 2013 г; Всероссийская научно-практическая конференция «Пищевые ингредиенты и инновационные технологии в производстве продуктов питания» С.-Петербург, 2013.

Глава 1 Обзор литературы 1.1. Состояние проблемы и задачи исследований

В современном мире с быстро растущим населением и недостаточно развитым сельским хозяйством, чрезвычайно важным становится поиск альтернативных источников пищевого белка. Большая часть населения Земли голодает из-за нерационального распределения продовольствия и отсутствия сбалансированного питания. Ученых волнует вопрос, сможет ли уровень развития производства продуктов питания и кормов идти в ногу с темпом роста населения. Данная проблема обусловлена ограниченными сырьевыми ресурсами и сельскохозяйственными угодьями, необходимыми для глобального

продовольственного снабжения и производства [102, 119, 120, 129].

В последнее время с подобной проблемой столкнулись развитые страны и Россия. Анализ структуры питания населения России свидетельствует о дефиците пищевого белка, который по прогнозам экспертов, сохранится и в ближайшем будущем [31]. В структуре питания россиян стала преобладать углеводная пища, что повлекло за собой острый дефицит таких биологически важных веществ, как белки, незаменимые аминокислоты, витамины и минералы. Белки в живых организмах играют очень важную роль, выполняя регуляторные, структурные, каталитические, транспортные, защитные и другие функции. Они обеспечивают обмен веществ между организмом и окружающей внешней средой, в котором участвуют как структурные белки клеток и тканей, так и ферментные и гормональные системы. Белки играют ключевую роль в жизни любой клетки, регулируя все многообразие процессов протекающих в ней, и обеспечивая функционирование организма как единого целого. Белки в организме человека находятся в постоянном обновлении, при котором распад компенсируется ресинтезом из фонда свободных аминокислот, полученных при переваривании пищи.

Эффективность белкового обмена в значительно степени зависит от количественного и качественного состава пищи. Минимально необходимая норма потребления белка - 49г/сутки [52]. При поступлении белков с пищей ниже рекомендуемых норм в организме человека и животных начинают распадаться белки тканей (печени, плазмы крови и др.), а полученные после их распада аминокислоты расходуются на синтез ферментов, гормонов и других жизненно необходимых компонентов. В то же время, клетки организма человека не могут синтезировать необходимые белки, если в составе пищи будет отсутствовать, хотя бы одна незаменимая аминокислота. В итоге в результате неправильного питания понижается сопротивляемость населения неблагоприятным факторам, развиваются хронические заболевания и снижается продолжительность жизни.

Одними из самых перспективных продуцентов белка, аминокислотный скор которого приближается к животному, являются микроорганизмы, особенно таких таксономических групп как: дрожжи, микроскопические грибы, актиномицеты, одноклеточные водоросли, бактерии [17, 40, 41, 61, 66, 80]. Однако питательная ценность микробной биомассы ограничена малой доступностью содержимого клетки для действия пищеварительных ферментов. Для повышения усвояемости внутриклеточных биологически ценных компонентов разрабатываются различные способы обработки дрожжей, из которых наиболее перспективным является процесс направленной ферментативной деструкции полимеров микробной клетки с целью выделением белковых веществ и получения белково-аминокислотных обогатителей пищи [24, 66, 86].

Одним из актуальных и перспективных направлений в решении проблемы белкового питания является поиск новых источников биологически полноценного белка для поддержания адаптивно-компенсаторных механизмов человеческого организма.

Аминокислотный показатель биологической ценности (скор) микробного белка наиболее близок к животному белку, особенно по содержанию такой

важной аминокислоты, как лизина. Микроорганизмы стоит рассматривать не только как перспективный субстрат для получения белковых веществ, но и как субстрат для получения витаминов, минералов и ценных полисахаридов. По качеству, содержанию витаминов и микроэлементов белки микроорганизмов значительно превосходят растительные.

Основное преимущество использования микроорганизмов заключается в том, что скорость накопления биомассы микроорганизмов на несколько порядков выше, чем у растений и животных: микроорганизмы растут в 500 раз быстрее, чем самые урожайные сельскохозяйственные культуры, и в 1000-5000 раз быстрее, чем самые быстрорастущие породы сельскохозяйственных животных [66].

Дрожжи как источник высококачественного- микробного "белка- занимают особое место в биотехнологических производствах мира и используются как в качестве кормовых добавок при изготовлении комбинированных кормов, так и в пище человека. Биомасса дрожжей наполовину состоит из белка, который усваивается организмом человека на 85 - 88%, занимая по этому показателю промежуточное положение между белками растительного и животного происхождения [25].

Экспертная группа ФАО/ВОЗ постановила, что белковые добавки должны содержать все аминокислоты, как заменимые, так и не заменимые. В таблице 1 приведены сравнительные данные по содержанию незаменимых аминокислот относительно шкалы ФАО/ВОЗ в белках различного происхождения [28, 48, 62].

Аминокислотный состав дрожжевого белка не уступает белкам мяса и наиболее близок к показателям шкалы ФАО/ВОЗ, особенно по содержанию незаменимых аминокислот, за исключением метионина и цистеина.

Таблица 1 - Содержание незаменимых аминокислот в белках различного происхождения

Источник белка Незаменимые аминокислоты, г/ 100 г белка

ИЗО ЛЕИ ЛИЗ МЕТ+ЦИС ФАЛ+ТИР ТРЕ ТРФ ВАЛ

Шкала ФАО/ВОЗ 4,0 7,0 5,5 3,5 6,0 4,0 1,0 5,0

S.cerevisiae 4,5 7,1 7,8 2,2 8,1 5,0 1,3 5,5

S. carlsbergensis 4,5 7,5 10,6 1,3 7,5 4,8 1,1 5,9

Candida 5,2 8,0 10,0 2,6 9,2 5,0 1,0 5,5

Говядина 4,4 7,5 8,1 4,2 7,8 4,1 1,3 5,3

Яичный белок 6,6 8,8 6,4 5,5 10,0 5Д 1,6 7,3

Соевый изолят 4,4 7,8 5,6 2,1 8,6 3,5 1,1 4,4

Кроме того, питательная ценность дрожжевой биомассы определяется и ее богатым витаминным комплексом, особенно по витаминам группы В. Данные по витаминному составу дрожжей приведены в таблице 2 [48, 66].

Таблица 2 - Содержание витаминов в биомассе дрожжей рода Candida и Saccharomyces

Витамины, мг % с.в. Candida tropicalis Saccharomyces carlsbergensis cerevisiae

Тиамин (В1) 0,26 10,0 - 34,0 10,0 - 60,0

Рибофлавин (В2) 8,31 3,6 - 6,0 4,0-15,0

Пантотеновая к-та (ВЗ) - - 5,0-10,0

Холин (В4) - - 250,0 - 600,0

Пирид оксин(В 6) 0,74 2,0 - 5,0 0,8-1,8

Никотиновая к-та (РР) 46,0 80,0 - 95,0 30,0 - 80,0

Биотин (Н) - 0,007 0,06 - 0,23

Ниацин - 56,5 -

Фолиевая кислота - 3,9 2,0 - 3,5

Несмотря на все плюсы, питательная ценность дрожжевой биомассы ограничена низкой доступностью содержимого клетки для действия пищеварительных ферментов. Для полноценного усвоения дрожжевого белка необходимо провести деструкцию клеточных стенок и перевести содержащиеся внутри биологически ценные компоненты в свободное состояние.

Специалисты Института питания РАМН РФ считают наиболее применимыми для массового неконтролируемого питания высокоочищенные препараты, такие как белковые концентраты и изоляты. При этом по химическому составу белковые концентраты должны содержать не менее 60% белка, не более 1% липидов и не более 2% нуклеиновых кислот, углеводы - не нормируются. Белковые изоляты должны содержать не менее 80% белка, не более 1% липидов, не более 2% нуклеиновых кислот и не более 5% углеводов [25].

В связи с вышесказанным следует, что в условиях высокого дефицита пищевого белка, несбалансированности питания основной задачей является поиск перспективных микроорганизмов - источников белковых веществ и разработка эффективного способа подготовки микробной биомассы и регулируемого процесса деструкции субклеточных структур для получения конкурентоспособных биологически активных добавок (БАД) и биологически полноценных корректоров пищи и кормов.

1.2 Получение биологически активных добавок на основе

микроорганизмов

Таким образом, производство микробной биомассы для употребления в пищу является основной задачей для промышленности и научного сообщества. Интерес к этой проблеме подтверждается многими работами последних лет.

Вопрос использования микробного белка в пищу в настоящее время нельзя считать решенным, так как в некоторых случаях белок не удовлетворяет полностью санитарно-гигиеническим требованиям, предъявляемым к пищевым продуктам. В связи с этим проводятся исследования по подбору непатогенных продуцентов белковых веществ, способов получения ферментализатов микробной биомассы и по их взаимосвязи со структурным и биохимическим составом [54]. Рационально подобранные мультиэнзимная система, условия биокатализа и микроорганизм, как исходный субстрат позволят проводить направленный гидролиз высокомолекулярных полимеров микробной биомассы для получения биологически активных добавок с заданными функциональными свойствами.

Так специалистами ГНУ ВНИИ пищевой биотехнологии проведено сравнительное исследование более 100 штаммов дрожжей 5. сег^ушае, на перспективность использования их в качестве продуцента белка и аминокислот. Критериями отбора являлись накопление биомассы в процессе роста дрожжей, а так же удельная скорость роста дрожжей, так называемая генеративная

активность дрожжей. Удалось отобрать штаммы дрожжей с содержанием общего белка от 37,9 до 58,1% [51].

Позже в продолжение этой тематики были проведены исследования, направленные на изучение биохимического и фракционного состава ферметализатов дрожжевой биомассы, полученных на разных этапах процесса биокатализа внутриклеточных полимеров для выявления их функционального значения. В работе использовали ферментный препарат протеолитического и глюканолитического действия глюканопротооризин Г18Х (продуцент Asp. oryzae POM 156), активность которого по общей протеолитической способности (ПС) составила 150 ед/см , по р-глюканазе ф-ГКС) - 140 ед/см [49, 56, 69]. Объектом исследования служили сухие пекарские • дрожжи * S. cerevisiae, aj лаб&ратдрные4 исследования выполнялись с использованием современных физико-химических, спектрофотометрических методов анализа. С помощью подобранного ферментного комплекса и условий проведения биокатализа был осуществлен направленный ферментативный гидролиз и наработаны экспериментальные образцы ферментализатов с различной степенью деструкции внутриклеточных биополимеров. Результаты исследований показали, что при 12-ти часовом гидролизе происходит наиболее полная и глубокая деструкция белковых полимеров клетки, содержание аминного азота при этом достигает 5,1% а.с.в., свободных аминокислот - 89% от общего количества белковых веществ. При 4-х часовом гидролизе высокомолекулярные полимеры дрожжевой биомассы переходят в растворимое состояние, концентрация аминного азота составляет 2,8% а.с.в. и 30% аминокислот в свободной форме. Полученные результаты указывают на возможность проведения регулируемого процесса ферментативного гидролиза дрожжевой биомассы с получением ферментализатов (белково-аминокислотных смесей) заданного состава. [58].

В работах Римаревой JI.B. с соавторами был разработан регулируемый биокаталитический процесс направленной трансформации белково-полисахаридных матриксов микробной клетки для получения пищевых белково-

аминокислотных биокорректоров с заданным структурно-фракционным составом. Для деструкции биополимеров в подготовленную дрожжевую суспензию вносили комплексную ферментную систему (КФС) в подобранной дозировке. Процесс ферментативного гидролиза проводили в течение 4, 8 и 16 часов. Результаты исследований показали, что при 4-х часовом гидролизе высокомолекулярные полимеры дрожжевой биомассы переходят в растворимое состояние. Концентрация аминного азота в готовом препарате составляет 2,8% на абсолютно сухое вещество, при 8-ми часовом гидролизе - 4,3% на а.с.в., а при 16 часовом -5,8%.; содержание свободных аминокислот - 15,4%, 36,5% и 65,4% от общего количества белковых веществ соответственно. Увеличение продолжительности гидролиза ведет к увеличению содержания низкомолекулярных соединений и свободных аминокислот. Работой показана возможность регулировать процессом гидролиза дрожжевой биомассы, варьируя дозировкой ферментов и длительностью катализа. Однако не выявлен спектральный состав белковых веществ при получении продуктов ферментолиза, не установлена глубина гидролиза дрожжевого белка и качественный и количественный состав низкомолекулярных пептидов и аминокислот [59].

Ферментализаты дрожжевой биомассы помимо своей пищевой ценности проявляют еще и медико-биологическую активность. В работе Орловой Е.В. с соавторами описан эффект селективного апоптоза, вызываемый ферментализатами дрожжевой биомассы сегеугягае с различной степенью деструкции субклеточных структур, на клетках перевиваемых опухолей. Результаты исследований показали, что цитотоксический эффект полностью отсутствовал для нормальных лейкоцитов человека, а проявлялся только на линиях перевиваемых опухолей. [44].

Проводимые во ВНИИПБТ исследования [72] показали возможность использования ферментов микробного происхождения, преимущественно из микромицетов, для гидролиза дрожжевой биомассы 5". сегеугягае. Полученный на основе регулируемого ферментативного биокатализа высокомолекулярных

полимеров клетки ферментализат дрожжей (Суперпротамин) представляет собой препарат, содержащий полный набор свободных аминокислот, в том числе незаменимых, биологически активные пептиды, витамины, особенно группы В, а так же микро- и макроэлементы. Медико-биологические испытания этого препарата показали его высокую иммуностимулирующую способность[53]. Неблагоприятная экологическая обстановка, вызванная нарушением озонового слоя Земли и, как следствие, увеличением интенсивности ионизирующего бета-излучения, ослабляет защитные функции человека, что приводит к негативным последствиям, которые выражаются в снижении иммунологической толерантности при патологических состояниях.

В настоящее время известен- широкий спектр природных » синтетических ~ экзогенных антиоксидантов, поступающих в организм с пищей. При этом природные антиоксиданты обладают рядом преимуществ по сравнению с синтетическими, включающим отсутствие побочных и кумулятивных эффектов, а также более низкую токсичность. Основными классами природных антиоксидантов являются каротиноиды, тиолы, фенольные соединения и пептиды. В литературе описаны последовательности более 100 антиоксидантных пептидов, выделенных из различных источников, а также полученных при конверсии белков с использованием ферментов и / или микроорганизмов [122]. Однако механизмы их антиоксидантного действия остаются недостаточно изученными. В последнее время было установлено, что БАД Суперпротамин, полученный из дрожжевой биомассы на основе ферментативной деструкции внутриклеточных полимеров, является эффективным антиоксидантом, действие которого проявляется в нормализации уровня активности глутатион-зависимого звена. По-видимому, содержащиеся в препарате растворимые биологически-активные вещества, достаточно легко преодалевают гематоэнцефалический барьер и всасываются в кровь, а затем, вступают в биохимические процессы в организме, нормализуя систему клеточного и гуморального иммунитета, и проявляют антиоксидантные свойства [43].

В работе Ибрагимовой С.И. показано, что при глубинном культивировании пищевые базидальные грибы Р1еигоШ озЬгеаЫз (вешенка) и ЬепНпт ейойеэ (шиитаке) образуют ферменты, гидролизующие клеточную стенку хлебопекарных дрожжей - & сегеушае. Максимальный выход белка из клеток & сегеушяе при их обработке КЖ базидальных грибов составлял 84,3% и 86,9%, соответственно, что существенно превышает соответсвтвующую характеристику коммерческих ферментных препаратов. Совместное культивирование одного из двух видов аскомицетных дрожжей (Я. сегеУ1я1ае и С. /атШа) и Р. оъМеаШз показало, что последний полностью подавлял рост & сегеушде и, напротив рост Р. ОзКеаШ ингибировался при совместном росте с С. /атШа, что свидетельствует о видоспецефических антагонистических взаимоотношениях у высших грибов. Образование гидролитических ферментов у Р. оз^еМт значительно увеличивалось при совместном культивировании с сегеушяе, а также при росте на барде, содержащей мертвые клетки дрожжей этого вида [23].

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Рачков, Кирилл Викторович, 2014 год

Список литературы

1. Александров, M.JI. Прямая стыковка микроколоночного жидкостного хроматографа с массспектрометром / M.JI. Александров, Л.Н. Галль, Н.В. Краснов, В.И. Николаев, В.А. Павленко, В.А. Шкуров, Г.И. Барам, М.А. Грачев, В.Д. Кнорре, Ю.С. Куснер // Биоорганическая химия 198410, С.710-712

2. Артеменко, К.А. Масс-спектрометрическое de novo секвенирование пептидов / К.А. Артеменко, Т.Ю. Самгина, А.Т. Лебедев // Масс-спектрометрия.- 2006.- №3.- С. 225-255

3. Бабаян, Т.Л. Выделение физиологически активного маннана и других полисахаридов из автолизатов пекарских дрожжей./ Т.Л. Бабаян, В.К. ЛатФв4" ä //Биотехнология.- 1992.- №2.- С.23-26

4. Базлов, Г.В. Совершенствование технологии получения экстракта автолизата пекарских дрожжей. / Г.В. Базлов, A.B. Комиссаров, Е.К. Никифоров, М.В. Антонычева, А.Д. Белоусов // Вестник Саратовского госагроуниверситета им. H.H. Вавилова. Саратов, 2012.- №1.- С.11-14

5. Безрукова, М.Г. Использование биомассы микроорганизмов для пищевых целей./ М.Г. Безрукова, Н.Б. Градова // Сб. науч. Трудов Институт биохимии и физиологии микроорганизмов АНСССР.- Пущино.- 1985.- С.119

6. Беликов, В.М. Пластеины, их получение, свойства и применение в питании / В.М. Беликов, М.Ю. Гололобов // Die Nahrung. 1986. V. 26. № 3-4.- Р.427-433.

7. Беликов, В.М. Аминокислотный состав препаратов из автолизатов пекарских дрожжей./ В.М. Беликов, C.B. Гордиенко, В.К. Латов, В.А. Цыряпкин, В.В. Андрианов, Г.И. Бернова, А.Д. Неклюдов //Прикладная биохимия и микробиология, 1978.- 14.- №1.- С.60.

8. Беликов, В.М.. Биомасса дрожжей как источник аминокислот./ В.М. Беликов, В.К. Латов, В.А. Цыряпкин, В.А. Сергеев // Микробиол. пр-сть.-1976.- т.З (134).- С.6.

9. Белозерский, А.Н. Практическое руководство по биохимии растений / А.Н. Белозерский, Н.И. Проскуряков // Москва: Сов. наука, 1951.- 388с.

10. Белоусова, Н.И. Получение смесей аминокислот на основе автолизатов дрожжей Saccharomyces, выращенных на этаноле или сахарах / Н.И. Белоусова, C.B. Гордиенко, В.К. Ерошин, В.Я. Ильченко // Биотехнология. 1990, №3, С.6

11. Гаврилова, H.H. Исследование возможности получения аминокислотных смесей на основе спиртовых дрожжей./ H.H. Гаврилова, И.М. Грачева // Тезисы доклада III Всероссийское совещание по аминокислотам. Ереван.-1984.- С.44.

12. Галецкий Д.Н. Анализ фотодинамики белковых комплексов тилакоидных мембран при помощи масс-спектрометрии высокого разрешения: дис. ... канд. хим. наук: 02.00.04 / Галецкий Дмитрий Николаевич.- М., 2011.- 136 с.

13. Гарманова, E.JI. Влияние стимулятора роста органического происхождения на генеративную активность и качество дрожжей / E.JI. Гарманова, О.В. Заварзина // Материалы 35-ой отч. науч. конф., Воронеж, ВГТА. - 1996. -С.37.

14. Гиндуллина, Т.М. Хроматографические методы анализа: учебно-методическое пособие / Т.М. Гиндуллина, Н.М. Дубова // Томск: Изд-во Томского политехнического университета, 2010. - 80 с.

15. ГОСТ Р 53973-2010 Ферментные препараты для пищевой промышленности. Методы определения Бета-глюканазной активности.

16. ГОСТ Р 53974-2010 Ферментные препараты для пищевой промышленности. Методы определения протеолитической активности.

17. Грачева, И.М. Технология микробных белковых препаратов, аминокислот и биоэнергия/ И.М. Грачева, Л.А. Иванова, В.М. Кантере. // М.: Колос.- 1992.384 с.

18. Грачева, И.М. Технология ферментных препаратов. / И.М. Грачева, А.Ю. Кривова // М.: Изд-во «Элевар». - 2000.- 512с.

19. Гуреева, М.П. Получение дрожжелитических ферментных препаратов из Streptomyces rugersensis №88 и их применение для гидролиза кормовых дрожжей: автореф. дис. ... канд. биол. наук: Гуреева М.П. Минск, 1983, С.23.

20. Дарбре, А Практическая химия белка/ А. Дарбре // Москва: Мир, 1989. — 623 с.

21. Дэвени, Т. Аминокислоты, пептиды и белки / Т. Дэвени, Я. Гергей // Москва: Мир, 1976 г.- 368с.

22. Жеребцов, H.A. Биохимия / H.A. Жеребцов, Т.Н. Попова, В.Г. Артюхов // Воронеж: Изд. Воронежского государственного университета, 2002.- 693 с.

23. Ибрагимова, С.И. Гидролиз клеточной стенки Saccharomyces cerevisiae ферментными комплексами базидиальных грибов / С.И. Ибрагимова, О.В. Тихонова, Т.Е. Толстихина, Б.Ф. Васильева, А.П. Синицын, Н.В. Цурикова, И.Н. Зоров, О.В. Ефременкова// Биотехнология, 2012.- №6.- С. 53-60.

24. Иванова И.С. Разработка технологии биологически активной добавки к пище в виде белково-углеводного концентрата из биомассы хлебопекарных дрожжей: дис. ... канд.техн.наук: 05.18.10 / Иванова Ирина Сергеевна. - М. -2003.- 197 с.

25. Иванова, JI.A. Применение БАД полученных из дрожжевой биомассы в х/п пром-ти / JI.A. Иванова, И.С. Иванова, Н.В. Лабутина // Хранение и переработка с/х сырья.- 2003,- № 2.- С.38-40.

26. Иванова, Н.Г. Осветленный экстракт автолизированных дрожжей -высококачественный препарат для приготовления питательных сред / Н.Г. Иванова, O.A. Сухих, Э.А. Шишкова //Актуальные вопросы разработки и производства диагностических питательных сред и тест-систем: сб. материалов 3-й Междунар. науч.практ. конф.- Махачкала, 2001.-С.12-13

27. Инструкция по технологическому и микробиологическому контролю спиртового производства. Москва: ДеЛи принт, 2007.- 439 с.

28. Иоффе, М.Л. Биологическая ценность изолятов белков микробного синтеза / М.Л. Иоффе, М.Г. Безруков // Биотехнология, 1986.- № 5.- С. 73.

29. Калебина, Т.С. Роль белков в формировании молекулярной структуры в формировании клеточной стенки дрожжей / Т.С. Калебина, И.С. Кулаев // Успехи биологической химии,, 2001.- т. 41.- С. 105-130

30. Кислухина, О.В. Ферменты в производстве пищи и кормов./ О.В. Кислухина // Москва: ДеЛи принт, 2002.- 336 с.

31. Княжев, В.А. / В.А. Княжев, Г.Г. Онищенко, О.В. Большаков, А.К. Батурин,

B.А. Тутельян // Вопросы питания, 1998.- №1.- С.3-10

32. Коновалов, С.А. Биохимия дрожжей / С.А. Коновалов // Москва: Пищевая промышленность, 1980. - 271с.

33. Котык, А. Мембранный транспорт/ А. Котык, К. Яначек // Москва: Мир, ' 1980.-342 с.

34. Кунце, В. Технология солода и пива / В. Кунце // Санкт Петербуг.: Профессия, 2003.- 911с.

35. Латов, В.К. Комплексная переработка дрожжевой биомассы / В.К. Латов, Т.Л. Кабаян, C.B. Гордиенко, A.C. Коган, В.А. Цыряпкин, В.М. Беликов // Биотехнология, 1990.- №3.- с.14-18

36. Лебедев, А.Т. Масс-спектрометрия в органической химии / А.Т. Лебедев // Москва: БИНОМ,2003.- 501с.

37. Максимова, Г.Н. Интенсификация биотехнологических процессов получения дрожжевой биомассы повышенного качества: дис. ... д-ра. биол. наук: 03.00.23 / Максимова Галина Николаевна.- М., 1994.- 523 с.

38. Матвеева, И.В. Биотехнологические основы приготовления хлеба / И.В. Матвеева, И.Г. Белявская // М.: ДеЛи принт, 2001.- 150 с.

39. Неклюдов, А.Д. Прикладная биохимия и микробиология / А.Д. Неклюдов,

C.М. Навашин 1985, т. 21.- №1.- С. 3-17.

40. Неклюдов, А.Д. Получение и очистка белковых гидролизатов (обзор) / А.Д. Неклюдов, А.Н. Иванкин, A.B. Бердутина // Прикладная биохимия и микробиология, 2000.- т.36.- №4.- С.371-379.

41. Неклюдов, А.Д. Свойства и применение белковых гидролизатов (обзор) /

A.Д. Неклюдов, А.Н. Иванкин, A.B. Бердутина // Прикладная биохимия и микробиология.- 2000.- т.36.- №5.- С.525-534.

42. Новаковская, С.С. Производство хлебопекарных дрожжей / С.С. Новаковская, Ю.И. Шишицкий // Москва: Агропромиздат. 1990.- 336 с.

43. Орлова, Е.В. Биологически активный препарат - антиоксидант, полученный ферментативным гидролизом внутриклеточных полимеров дрожжевой клетки / Е.В. Орлова, JI.B. Римарева // Микробные биокатализаторы и их роль в нано- и биотехнологиях. Москва: Пищепромиздат.- 2008.- 267с.

44. Орлова, Е.В. Эффект селективного апоптоза, вызываемый ферментализатами дрожжевой биомассы с различной степенью деструкции субклеточных структур / Е.В. Орлова, JI.B. Римарева, М.Б. Оверченко, Е.М. Серба, Н.С. Погоржельская // Микробные биокатализаторы и их роль в нано- и биотехнологиях. М.: Пищепромиздат,- 2008.- 267 с.

45. Остерман, JI.A. Хроматография белков и нуклеиновых кислот / JI.A. Остерман // М.: Наука.- 1985.- 536 с.

46. Петрова, Н.Т. Разработка технологии получения препарата литических ферментов, расщепляющих клеточные стенки дрожжей и микроскопических грибов, с использованием мутантного штамма Streptomyces griseinus 11-84: дис. ... канд. техн. наук: 03.00.23 Москва, 2005. - 212 с.

47. Пивненко, Т.Н. Вопросы питания / Т.Н. Пивненко, JI.M. Эпштейн, Ю.Н. Позднякова, В.В. Давидович // 1997.- № 5.- С.34-38.

48. Поздняковский, В.М. Использование микроорганизмов в качестве источника белка и витаминов при производстве пищевых продуктов / В.М. Поздняковский, О.С. Габинская, JI.H. Чеботарев //Производство и применение продуктов микробиологических производств: Обзор информ., М. ВНИИСЭНТИ.- 1989.- № 2.- С.36.

49. Полыгалина, Г.В. Определение активности ферментов. / Г.В. Полыгалина,

B.C. Чередниченко, JT.B. Римарева // Справочник. М. - «ДеЛи принт», 2003.- 275 с.

50. Поляков В.А. Белковые обогатители пищи на основе ферментативной деструкции белково-полисахаридного комплекса клеточных стенок дрожжей / В.А. Поляков, JI.B. Римарева, Е.И. Курбатова, E.H. Соколова, Ю.А. Борщева, A.B. Тесля // Пищевая промышленность. 2012.- № 11.- С. 4244

51. Поляков, В.А. Скрининг микроорганизмов-продуцентов биологически активных веществ для создания биотехнологии обогащенных натуральных биокорректоров пищи на основе микробной биомассы. / В.А. Поляков, JI.B. Римарева, Е.И. Курбатова, H.A. Фурсова, Е.Н.Соколова, A.B. Макарова // Перспективные биокатализаторы для перерабатывающих отраслей АПК. М.: ВНИИПБТ, 2010.- 387 с.

52. Прянишников, В.В. Функциональные добавки направленного действия для пищевой пром-ти. / В.В. Прянишников, П. Микляшевски // Пищевая промышленность 1999.-№1.

53. Римарева, JI.B. Влияние ферментативного комплекса гриба Aspergillus oryzae на степень гидролиза полимеров дрожжевой биомассы / JI.B. Римарева, М.Б. Оверченко, К.А. Морозова, Е.М. Серба // Хранение и переработка сельхозсырья. - 2006.-№4,- С.39-42.

54. Римарева, JI.B. Биотехнологические аспекты создания пищевых добавок биокорректирующего действия на основе микробной биомассы / JI.B. Римарева, Е.И. Курбатова, Н.А.Фурсова, E.H. Соколова, A.B. Макарова // Хранение и переработка сельхозсырья.-2011. -№2. - С. 45-47

55. Римарева, JI.B. Влияние баротермического воздействия на степень подготовки дрожжевой биомассы к ферментативной деструкции / JI.B. Римарева, Е.М. Серба, М.Б. Оверченко, К.В. Рачков, Е.И. Курбатова, E.H. Соколова, Ю.А. Борщева // Хранение и переработка сельхозсырья. 2013.- № 6.- С. 31-35.

56. Римарева, JI.B. Влияние детергентов на секрецию внутриклеточных ферментов из биомассы гриба Asp. oryzae / JI.B. Римарева Е.М.Серба, М.Б.

Оверченко, Ю.А. Борщева // Хранение и переработка сельхозсырья. - 2011. -№12.-С. 39-40.

57. Римарева, Л.В. Использование комплексного ферментного препарата Амилопротооризина для гидролиза дрожжевого белка / Л.В. Римарева // Хранение и перераб. с/х сырья. - 1996. - № 2. - С. 39-40

58. Римарева, Л.В. Исследование биохимического, спектрального и фракционного состава ферментализатов микробной биомассы / Л.В. Римарева, М.Б. Оверченко, Е.М. Серба, Н.С. Погоржельская, К.В. Рачков, Н.И. Игнатова //М.: ВНИИПБТ, 2012. - 433с.

59. Римарева, Л.В. Направленный биокатализ белковых полимеров протоплазмы и полисахаридов клеточных стенок дрожжей для получения ферментолизатов с заданным фракционным составом / Л.В. Римарева, М.Б. Оверченко, Н.И. Игнатова, Е.М. Серба, Е.И. Курбатова // Микробные биокатализаторы и их роль в нано- и биотехнологиях. М.: Пищепромиздат, 2008.- 267 с.

60. Римарева, Л.В. Перспективы использования протеолитических ферментных препаратов / Л.В. Римарева // Пищевая промышленность. 1996. № 3. - С. 44-45.

61. Римарева, Л.В. Получение пищевых добавок лечебно-профилактического действия / Л.В. Римарева, М.Б. Оверченко, В.И. Трифонова, В.А. Устинников // Сб.: «Пища. Экология. Человек». Межд. науч.-техн. конф. М., 1995.- С.25.

62. Римарева, Л.В. Теоретические и практические основы биотехнологии дрожжей / Л.В. Римарева // М.: ДеЛи принт, 2010.- 252с.

63. Росляков, В.Я. / В.Я. Росляков, И.С. Тарасенко, Н.П. Балабанов, П.С. Васильев //Гематология и трансфузиология. 1984. № 3. С. 50-52.

64. Рухлядева, А.П. Инструкция по технологическому и микробиологическому контролю спиртового производства./ Рухлядева, А.П. // -Москва: Агропромиздат, 1986. — 399с.

65. Семихатова, Н.М. Хлебопекарные дрожжи. / Н.М. Семихатова // М.: Пищевая промышленность, 1980.- 199 с.

66. Серба Е.М. Разработка биотехнологического процесса ферментативного гидролиза дрожжевой биомассы с целью получения биологически активных добавок: дис. ... канд. техн. наук: 05.18.07 / Серба Елена Михайловна.- М., 2005.- 175 с.

67. Серба, Е.М. Исследование фракционного состава биокорректоров пищи из дрожжевой биомассы для создания на их основе функциональных продуктов целевого назначения / Е.М. Серба, К.В. Рачков, Е.В. Орлова, М.Б. Оверченко, JI.B. Римарева, В.А. Поляков /7 Хранение и переработка сельхозсырья. 2013, № 11.- С. 18-21

68. Серба, Е.М. Создание натуральных биокорректоров пищи для фукциональных продуктов / Е.М. Серба, К.В. Рачков, Н.И. Игнатова, JI.B. Римарева, В.А. Поляков // Пищевая промышленность. 2013. № 9. С. 18-20

69. Серба, Е.М. Универсальный метод определения протеолитической активности ферментных препаратов для пищевой промышленности / Е.М. Серба, М.Б. Оверченко, K.JI. Агашичева, JI.B. Римарева // Хранение и переработка сельхозсырья. - 2010. - №6.- С. 33-35

70. Сова, В.В. Методическое пособие к практическим занятиям по очистке белков /В.В. Сова, М.И. Кусайкин // Владивосток: Изд-во Дальневост. унта, 2006. - 42 с.

71. Способ автолиза дрожжевой биомассы: Патент 2065275 Россия, Бравова Г.Б., Эль-Регистан Г.И., Иванова Н.Г., Козлова А.Н., Конобрий В.Н., Бравова O.K., Белорусов И.П., Протасов А.Н., Касьянова H.H., 5042667/13, опубл. 20.08.1996.

72. Способ получения белкового гидролизата дрожжевой биомассы: Патент № 2104300 Россия, Римарева JI.B., Оверченко М.Б., Трифонова В.В. № 96101956/13, опубл. 10.02.1998

73. Способ получения белкового гидролизата из биомассы дрожжей. Авт.свид. СССР №947988, Шлокене А.П., Гуреева М.П., Ужкуренас А.П., Гричишкис СЛ., Валиляускас Ю.Ф., Малей С.М., Хагендорф A.A. 1982, №28, 255 с.

74. Способ получения осветленного экстракта автолизированных дрожжей: Патент 2084171 Россия, Бравова Г.Б., Иванова Н.Г., Шишкова Э.А., Эль-Регистан Г.И., Сухих O.A., Иншутина Н.Б., Фокина С.С., Козлова А.Н., № 94011521/13, опубл. 20.07.1997.

75. Способ экстракции компонентов из культуры дрожжевых клеток: Патент 2445355 Россия, Калум JL, Нильсен П.М., Эрнст С. опубл. 20.03.2012

76. Стручкова, И.В. Теоретические и практические основы проведения электрофореза белков в полиакриламидном геле / И.В. Стручкова, Е.А Кальясова // Электронное учебно-методическое пособие. - Нижний Новгород: Нижегородский госуниверситет, 2012. - 60 с.

77. Ступин, А.Ю. Суспензии природных смол и смолоподобных веществ. / А.Ю. Ступин //М. ФГНУ «Росинформагротех». 2010.- 67 с.

78. Суханов, В.П.Об эффективности использования комплексов аминокислот для повышения биологической ценности пищевых продуктов. / В.П. Суханов, М.Г. Керимова, А.Д. Игнатьев // Тезисы докл. III Всероссийского совещания по аминокислотам. Ереван. 1984, 187 с.

79. Тимербаева, Р.Х. Биотехнологические аспекты автолиза дрожжей хлебопеканых. I. Изучение влияния pH автолизируемой биомассы на степень конверсии дрожжевого сырья / Р.Х. Тимербаева, Е.В. Бобкова, М.М. Туйгунов // Актуальные вопросы разработки производства и применения иммунобиологических и фармацевтических препаратов.: сб. материалов.-Уфа, 2000.- С.188-190.

80. Фараджаева, Е.Д.Получение и применение БАД на основе вторичных ресурсов пивоварения / Е.Д. Фараджаева, Р.В. Кораблин // Пища. Экология. Качество.: Сб. матер. 2 Межд. науч.-практ. конфер. - Новосибирск: Издательство СО РАСХН, 2002.- С.38-39.

81. Хорунжина, С.И. Биохимические и физико-химические основы технологии солода и пива. / С.И. Хорунжина // М.: Колос, 1999.- 312с.

82. Шапхаев, Э.Г. Основы биотехнологии. Дезинтеграция микробных клеток / Э.Г. Шапхаев, В.Ж. Цыренов, Е.И. Чебунина // Улан-Удэ, ВГСТУ. - 2005.96 с.

83. Шимилин, JI. Химия и обеспечение человечества пищей / JI. Шимилин // М. Мир. 1986.- 616 с.

84. Шкляр, Б.Х. Ферментативный лизис дрожжей / Б.Х. Шкляр // Минск. 1977, 147 с.

85. Шугалей, И.В. Химия белка : учебное пособие / И.В. Шугалей, А.В. Гарабаджиу, И.В. Целинский // Санкт Петербург.: Проспект Науки, 2010.200 с.

86. Юскина О.Н. Разработка биотехнологического способа получения препарата белка из биомассы дрожжей Saccharomyces cerevisiae на основе направленного ферментативного гидролиза клеточных стенок: дис. ... канд. биол. наук: 03.00.23 / Юскина Ольга Николаевна.- М., 2008.- 190 с.

87. Abeer A1 Bsoul Effectiveness of ultrasound for the destruction of Mycobacterium sp. strain (6PY1) / Abeer A1 Bsoul, , Jean-Pierre Magnin, Nadine Commenges-Bernole, Nicolas Gondrexon, John Willison, Christian Petrier // Ultrasonics Sonochemistry.- 2010.- v. 17.- P. 106-110.

88. Achstetter, T. Proteolysis in eucariotyc cell: aminopeptidases and dipeptidylaminopeptidases of yeast revisited. / T. Achstetter, O. Emter, C. Ehmann, D.H. Wolf // Arch. Biochem Biophys., 1983.- v.226.- № 1.- P.292-305.

89. Andren, P.E. Microelectrospray: zeptomole/attomole per microliter sensitivity for peptides / P.E. Andren, M.R. Emmett, R.M. Caprioli // J. Am. Soc. Mass Spectrom.- 1994.- 5.- P.867-869.

90. Ballou, C.E. Isolation, characterization, and properties of Saccharomyces cerevisiae mnn mutants with non-conditional protein glycosylation defects / C.E. Ballou // Meth. Enzymol.-1990.- 185.- P. 440-470.

91. Barber, M. Fast atom bombardment of solids (F.A.B.): A new ion source for mass spectrometry / M. Barber, R.S. Bordoli, R.D. Sedgwick, A.N. Tyler // J. Chem. Soc., Chem. Commun.-1981.- 7,- P.325-327.

92. Bohni, P.C. Import of protein into mitohondria / P.C. Bohni, G. Daum, G. Schatz // J.Biol. Chem..- 1983.- v.258.- №8.- P.4937-4943.

93. Bradley, C.V. Peptide sequencing using the combination of Edman degradation, carboxypeptidase digestion and fast atom bombardment mass spectrometry / C.V. Bradley, D.H. Williams, M.R. Hanley // Biochem. Biophys. Res. Commun.-1982.- 104.-P.1223.

94. Chang, W.T. Mechanistic studies of carboxypeptidase Y from Saccharomyces cerrevisiae / W.T. Chang, K.T. Douglas // Biochem. J. - 1980.- V. 187.- №3.- P. 843-849

95. Chemova, N.M. Autolysis der H-hefe Saccharomyces cerevisiae induziert durch metallkationen / N.M. Chernova, M.G. Bezrukov, A.S. Kogan, W.A. Sergeev // Nahrung.- 1981.- V.25.-P.837-844

96. Conway, J. et al. The effect of the addition of proteases and glucanases during yeast autolysis on the production and properties of yeast extracts / J. Conway et al. //Can. J. Microbiol. - 2001. - 47. - P. 18-24.

97. Dan Liu Disruption and protein release by ultrasonication of yeast cells/ Dan Liu, Xin-An Zeng , Da-Wen Sun, Zhong Han // Innovative Food Science and Emerging Technologies.-2013.- 18.- P. 132-137.

98. Duran, A. Solubilization and partial purificato of yeat synthethase/ A. Duran, E. Cabib //J.Biol Chem.- 1978.- v. 253.- №12.- P.4419-4425

99. Emter, O. Vacuoles are not the role compartments of proteolytic enzymes in yeast / O. Emter, D.H. Wolf// FEBS Lett.- 1984.- 166. P.21-325.

100. Fleet, G. Microbial cell Wall Synthesis and Autolysis / G. Fleet // Elsevier, Amsterdam.- 1984.-P.227.

101. Garsia, A.N. Purification and Characterization of a thermosensitive X- prolyl-dipeptidil aminopeptidase (dipeptidyl aminopeptidase ysc V) from

Saccharomycec cerevisiae. / A.N. Garsia, C. Bordallo, S. Garson, R.R.Suares // Biochim. Biophys. Acta.- 1985.- v.832.- №1 P.l 19-125.

102. Gilland, B. World population and food supply: Can food production keep pace with population growth in the next half-century / B. Gilland // Food Policy.-2002.- 27.- P.47-63.

103. Hemmings, B.A. Mutant defective in processing of an enzyme located in the lysosome-like vacuole of Saccharomyces cerrevisiae / B.A. Hemmings, G.S. Zubenko, A. Halsilik, E.W. Jones // Proc. Natl. Acad. Sci USA..- 1981.- V.78.-№1.- P. 435-439

104. Hetz, G. Interaction of chloride with yeast aminopeptidase I. Equilibrium binding studies / G. Hetz, K.H. Rohm // Biol. Chem.- 1987.- V.363.- P.63

105. Hilt. W, Stress-induced proteolysis in .yeast / W. Hilt, D.H Wolf I J Mol. Microbiol..- 1992.- v.6.- №17.- P.2437-2442.

106. Hunt, D.F.Sequence analysis of polypeptides by collision activated dissociation on a triple quadrupole mass spectrometer / D.F. Hunt, A.M. Buko, J.M. Ballard, J. Shabanowitz, A.B. Giordani // Biomed. Mass Spectrom.-1981.-8.- P.397.

107. Karas, M. Matrix assisted ultraviolet laser desorption of non-volatile compounds / M. Karas, D. Bachmann, U. Bahr, F. Hillenkamp // Int. J. Mass Spectrom. Ion Proc.-1987.- 78.- P.53-68.

108. Klis, F.M. Review: Cell Wall Assembly in Yeast / F.M. Klis // Yeast.-1994.- V. 10.- P.851-869.

109. Kovacs Zsuzsanna Effect of cell wall integrity stress and RlmA transcription factor on asexual development and autolysis in Aspergillus nidulans./ Zsuzsanna Kovacs, Mate Szarka, Szilvia Kovacs, Imre Boczonadi, Tamas Emri, Keietsu Abe,Istvan Pocsi, Tunde Pusztahelyi // Fungal Genetics and Biology.- 2013.- 54.-P.l-14.

110. Lahl, W.J. Enzymatic production of protein hydrolysates for food use. / W.J. Lahl, S.D. Braun // Food Technol.- 1994.- V.48.- №10.- P.68-71.

111. Magni, G.Reexamination of activation of yeast proteinase B on pH 5: loss of inhibition effect of proteinase B inhibitors / G. Magni, M.Drewniak, Huang

C.Santarelli // Biochem Int.- 1986.-V.12.-№4.-P.557-565

112. Mahmoud, M.I. Enzymatic hydrolysis of casein: effect of degree of hydrolysis antigenicity and physical properties / M.I. Mahmoud, W.T. Malone, C.T. Cordle // J. Food Science.- 1992.- V.57.- №5.- P.1223-1229.

113. Mallick, P. Anaerobic digestion of distillery spent wash: Influence of enzymatic pre-treatment of intact yeast cells. / P. Mallick, J.C. Akunna, G.M. Walker // Bioresource Technology -2010,- 101.- P.1681-1685.

114. Molloy, C. Identification of envelope proteins of Candida albicans by vectorial iodination. /''C. Molloy, M. G. Shepherd, P. A. Sullivan If MICROBIOS.- 1989.. 57.- P.73-84.

115.Nombela, C. Microbiol Cell Wall Synthesis and Autolysis / C. Nombela // Elsivier, Amsterdam.- 1984.- P.327.

116. Orlean, P. Synthesis of an 0-glycosylated cell surface protein induced in yeast by alpha-factor / P. Orlean, A. Ammer, M. Watzele, W. Tanner // Proc. Natl. Acad. Sci., USA .- 1986.- 83.- P.6263-6266.

117. Palomero, F. Conventional and enzyme-assisted autolysis during ageing over lees in red wines: Influence on the release of polysaccharides from yeast cell walls and on wine monomeric anthocyanin content./ F.Palomero, A. Morata, S. Benito, M.C. Gonzalez, J.A. Suarez-Lepe // Food Chemistry.-2007.- 105.- P. 838-846

118. Peng, J. Proteomics: the move to mixtures / J. Peng, S.P. Gygi // J. Mass Spectrom.-2001.- 3.- P. 1083-1091.

119. Pimentel, D. Natural resources and an optimum human population / D. Pimentel, R. Harman, M. Pacenza, J. Pecarsky, M. Pimentel // Popul. Environ. 1994.- 15.-P.347-369.

120. Pimentel, D.Malnutrition, disease, and the developing world / D. Pimentel, J. Morse// Science.-2003.- 300.-P.251.

121. Polce, M.J. Dissociation of the peptide bond in protonated peptides / M.J. Polce,

D. Ren, C. Wesdemiotis // J. Mass Spectrom.-2000.- 35.-P. 1391-1398.

122. Sarmadi, B.H. Antioxidative peptides from food proteins: A review. / B.H. Sarmadi, A. Ismail II Peptides.-2010.-№31.- P. 1949-1956.

123. Suares, R.M.P. A new X- propyl-dipeptidyl aminopeptidase from yeast associated with a particulate fraction / R.M.P. Suares, J. Schwencke, A.N. Garcia, S. Garcon // FEBS Lett.- 1981.- v.131.- № 2.- P.296-300.

124. Trivedi, A. The effect of the phospholipase A on the structure and function of yeast / Trivedi, A. et al. //Can. J. Microbiol. - 2001. - 47. - P.28-34.

125. Valentin, E. Solubilization and analysis of mannoprotein molecules from the cell wall of Saccharomyces cerevisiae / E. Valentin, W. Herrero, , J.F. Pastor, R. Sentandreu //J. Gen. Microbiol.-1984.- 130.- P.1419-1428.

126. Villa, T.G. Occurrence of an endo-1,3- p-glycanase in culture fluids of the yeast C.utilis / T.G. Villa, V. Notario, J.R. Villanueva // Biochem.J.- 1979.- v. 177.-P.107-114.

127. Wagner, J.C. Some characteristics of hormone tpheromone) processing enzymes in yeast / J.C. Wagner, C. Escher, D.H. Wolf//FEBS Lett.- 1987.- v.218.- P.31.

128. Wilm, M. Analytical properties of the nanoelectrospray ion source / M. Wilm, M. Mann //Anal. Chem.-1996.-68.- P.l-8.

129. Wolf, J. Exploratory study on the land area required for global food supply and the potential global production of bioenergy / J. Wolf, P.S. Bindraban, J.C. Luijten, L.M. Vleeshouwers, //Agr. Syst.-2003.- 76.- P.841-861.

130. Wysocki, V.H. Mobile and localized protons: a framework for understanding peptide dissociation / V.H. Wysocki, G. Tsaprailis, L.L. Smith, L.S. Breci // J. Mass Spectrom.-2000.- 35.-P. 1399-1406.

131. Yamashita, M. Electrospray ion source: another variation on the free-jet theme / M. Yamashita, J.B. Fenn // J. Phys. Chem.-1984.- 88.- P.4451-4459.

132. Yates, J.R. Mass spectrometry and the age of the proteome / J.R. Yates //J. Mass Spectrom.- 1998.- 33.-P.1-19

133. Yumi, Y. Characteristics of baker's yeast destruction by means of homogenizator working with high pressure./ Y. Yumi, Dao Thi D. Xing., M. Kanji // J. Soc. Pwder Technol. -1999.- vol.36. -№7- P.534-541.