Разработка биотехнологического способа получения препаратов белка из биомассы дрожжей Saccharomyces cerevisiae на основе направленного ферментативного гидролиза клеточных стенок тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.23, кандидат биологических наук Юскина, Ольга Николаевна

• Юскина, Ольга Николаевна
• кандидат биологических наук
• 2008

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Юскина, Ольга Николаевна

ВВЕДЕНИЕ

Глава I ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ И ПАТЕНТОВ

1.1 Мониторинг перспективности выбранного направления исследований

1.2 Микроорганизмы как продуценты белка

1.2.1 Рост и развитие микробных культур

1.2.2 Фазы роста микроорганизмов при периодическом 27 культивировании

1.2.3 Двухфазность развития популяций в условиях процесса 29 брожения

1.3 Структура клеточной стенки и биохимический состав 30 дрожжевой клетки

1.4 Перспективные способы деструкции клеточной стенки 40 дрожжей

1.5 Основы ферментативного гидролиза клеточной стенки 46 дрожжей

1.6 Применение белковых препаратов, полученных на 51 основе микробной биомассы в пищевой промышленности

1.6.1 Использование цельной биомассы

1.6.2 Использование частично облагороженной биомассы 52 микроорганизмов

1.6.3 Белковые изоляты

1.6.4 Использование аминокислотных смесей в качестве 54 пищевых и биологически активных добавок

Глава П ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

2.1 ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.2.1 Методы определения биохимических показателей

2.2.2 Методы определения каталитической 62 способности ферментных препаратов

2.2.3 Методы определения функциональных 66 характеристик получаемых продуктов

2.2.4 Методика математической обработки 68 экспериментальных данных

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Глава Ш СКРИНИНГ ДРОЖЖЕЙ вассЬаготусев сегеушае

НАИБОЛЕЕ ПЕРСПЕКТИВНОГО ПРОДУЦЕНТА БЕЛКА

3.1 Изучение продуктивности штаммов хлебопекарных дрожжей

3.1.1 Отбор штаммов дрожжей, отличающихся 70 высокой скоростью роста

3.1.2 Влияние начальной концентрации растворимых 73 углеводов в сусле на скорость роста и накопление биомассы дрожжей

3.1.3 Исследование влияния рН пшеничного сусла на 85 скорость роста и накопление биомассы дрожжей ЗассИаготусеБ сегеу1з1ае

3.1.3.1 Влияние различных значений рН на скорость роста дрожжей в разных точках кривой роста

3.1.3.2 Влияние исходных значений рН пшеничного 89 сусла на скорость роста и накопление биомассы дрожжей БассИаготусез сегеу!з1ае

3.1.4 Исследование влияния различных солей, 90 внесенных в пшеничное сусло, на скорость роста и накопление биомассы дрожжей

Глава IV ИЗУЧЕНИЕ БИОКАТАЛИТИЧЕСКОЙ СПОСОБНОСТИ 97 ФЕРМЕНТНЫХ ПРЕПАРАТОВ РАЗЛИЧНОГО СПЕКТРА ДЕЙСТВИЯ МИКРОБНОГО ПРОИСХОЖДЕНИЯ

4.2.1.1 Модельные опыты по биокатализу полисахаридов 106 клеточных стенок

4.2.1.2 Модельные опыты по биокатализу полимеров 108 клеточной стенки дрожжей под действием различных ферментативных систем

Определение состава ферментного комплекса 100 ферментных препаратов микробного происхождения

Изучение механизма гидролиза клеточной стенки 105 дрожжей с применением ферментных препаратов Модельные опыты по биокатализу 105 индивидуальных субстратов — структурных полимеров клеточной стенки дрожжей

4.2.1.

Модельные опыты, направленные на подбор оптимальной мультиэнзимной композиции для эффективного катализа полимеров клеточных стенок дрожжей

4.2.2 Исследование процессов ферментативной деструкции клеточных стенок дрожжей при получении препарата белка (I стадия)

4.2.2.1 Исследование процессов деструкции ß-глюканов 116 и белковых полимеров клеточных стенок дрожжей (I стадия)

4.2.2.2 Изучение динамики деструктивных воздействий 124 ферментных препаратов на клеточную стенку дрожжей на I стадии ферментолиза

4.2.2.3 Исследование процессов деструкции 128 полисахаридов клеточных стенок дрожжей (II стадия)

4.2.2.4 Изучение возможности повышения 134 проницаемости клеточной стенки дрожжей поверхностно-активными веществами

4.3 Результаты электронно-микроскопического исследования дрожжевых клеток после воздействия ферментных препаратов

Глава V ВЫДЕЛЕНИЕ БЕЛКОВЫХ ВЕЩЕСТВ ИЗ БИОМАССЫ 139 ДРОЖЖЕЙ ПОСЛЕ ПРОВЕДЕНИЯ ФЕРМЕНТАТИВНОГО

ГИДРОЛИЗА КЛЕТОЧНЫХ СТЕНОК

5.1 Подбор эффективного осадителя для извлечения белковых фракций из супернатанта

5.2 Фракционирование белковых веществ дрожжей

Глава VI ИССЛЕДОВАНИЕ ФУНКЦИОНАЛЬНО

ТЕХНОЛОГИЧЕСКИХ СВОЙСТВ БЕЛКОВОГО ПРЕПАРАТА ИЗ БИОМАССЫ ДРОЖЖЕЙ

Глава VII ТЕХНОЛОГИЧЕСКАЯ ЧАСТЬ

ВЫВОДЫ

СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Разработка биотехнологического способа получения препаратов белка из биомассы дрожжей Saccharomyces cerevisiae на основе направленного ферментативного гидролиза клеточных стенок»

Актуальность. Актуальность выбранного направления исследований обусловлена сложившимся дефицитом белка в структуре питания населения России. Продовольственная проблема, связанная с недостатком биологически полноценных продуктов, со временем не только не теряет своей остроты, но и становится одной из актуальнейших. Эффективность решения этой проблемы определяется использованием качественно новых методов производства пищи, а также привлечением новых сбалансированных источников пищевого белка, одним из которых является белок микроорганизмов. Работы многих ученых посвящены вопросам изучения возможности использования микроорганизмов как источников белковых веществ (Коновалов В.А., 1975; Беликов В.М. 1977; Шкляр Б.Х.,1977; Латов В.К., 1990; Римарева Л.В., 1993; Иванова Л.А., 1998; Неклюдов А.Д., 2000; и

ДР-)

Наиболее перспективным источником пищевого белка является дрожжевая биомасса, что объясняется полноценностью белковых веществ, аминокислотный^ скор которых приближается к животному белку, а также безопасностью» и абсолютным отсутствием токсичности дрожжей. Кроме того, наличие витаминов, ценных полисахаридов и микроэлементов позволяет рассматривать дрожжи как перспективные субстраты для получения биологически активных добавок. Более того, к настоящему времени разработано много способов производства белковых концентратов и изолятов микробного происхождения. Однако, до сих пор не созданы эффективные методы выделения белка из дрожжевой клетки, которые обеспечивали бы его полноценное усвоение. Существующие физические и химические методы биотрансформации клеточной стенки дрожжей имеют ряд недостатков технического и технологического характера и не обеспечивают получение качественного белкового продукта с высокой биологической ценностью. Поэтому перспективным направлением является использование ферментативных процессов, которые позволяют в «мягких» условиях получать пищевые белковые добавки с функциональными свойствами для решения проблемы коррекции питания населения и получения сбалансированных биологически полноценных продуктов.

Цель и* задачи исследования. Цель настоящих исследований состояла в разработке научно обоснованного способа получения белкового препарата на основе направленного ферментативного катализа полимеров клеточных стенок дрожжей. Для достижения поставленной цели исследований предусмотрено решение ряда задач:

- на основе анализа структуры строения клеточной стенки дрожжей и возможных способов, ее деградации научно обосновать состав ферментативной системы, необходимой для деструкции дрожжевой клетки и экспериментально исследовать степень воздействиям индивидуальных ферментов на структурообразующие биополимеры клеточной стенки;

- провести сравнительные исследования ферментных препаратов отечественного и импортного производства по составу основных и минорных ферментов комплекса; уровню их активностей и осуществить скрининг наиболее перспективных;

- разработать эффективную мультиэнзимную композицию (МЭК) с научно-обоснованным соотношением ферментов в составе выбранного комплекса для трансформации биополимеров клеточной стенки дрожжей;

- исследовать процессы выделения белковых веществ протоплазмы клеток и разработать принципиальную схему получения белковых продуктов с использованием энзиматической деструкции дрожжевой биомассы с максимально возможным выделением белковых веществ из исследуемого сырья;

- охарактеризовать полученный белковый препарат по биохимическим и функционально-технологическим показателям;

- разработать научно-техническую документацию для производства белкового препарата.

Научная новизна- работы. Получен новый экспериментальный материал, позволивший выявить закономерности биокатализа структурообразующих полимеров клеточной стенки дрожжей. Теоретически обоснованы и экспериментально подтверждены состав МЭК и условия ферментативной деструкции полимеров клеточной стенки. Выявлен синергизм действия ферментов

МЭК, повышающий степень деградации биополимеров. На основе установленной зависимости выхода белка от состава МЭК и уровня в нем ферментативных активностей (протеазы, Р-глюканазы, маннаназы и хитиназы) разработан принципиально новый способ направленного ферментативного гидролиза клеточной стенок, дрожжей с выделением белковых веществ протоплазмы. Практическая значимость. Осуществлен скрининг продуктивного по белку штамма дрожжей и разработаны оптимальные МЭКи и условия ферментативной деструкции клеточных стенок.

Разработана технологическая схема получения, белковых препаратов из биомассы дрожжей БассЬагошусез сегеу1з1ае, позволяющая:

- исключить применение химических реагентов (кислот и щелочей) в результате использования подобранного МЭК для деструкции клеточных стенок; повысить выход белковых веществ в сравнении с технологией без применения ферментативной обработки; улучшить качество целевого продукта за счет сохранения полимерности » структуры белка и повышения его биологической полноценности; получать белковый препарат (67% белка), обладающий влагоудерживающей. (1:2,5) и жироудерживающей (1:0,7) способностью.

Разработана нормативная документация на технологический процесс и получаемую продукцию (Технологическая инструкция по производству белкового препарата на основе биомассы дрожжей, Технические условия на препарат белковый дрожжевой). Проведены производственные испытания и наработаны опытные партии белкового препарата на Мичуринском экспериментальном заводе и во ВНИТИБП- ЗАО «Биопрогресс».

Апробация работы. Основные положения работы были представлены* на следующих конференциях:

- XII Всероссийской научно-практической конференции «Проблемы создания продуктов здорового питания. Наука и технологии», Углич, 2006 г;

-V Юбилейной школе - конференции «Высокоэффективные пищевые технологии, методы и средства для их реализации» Московский Государственный университет пищевых производств, 2007г;

- Научно-практической конференции «Интеграция фундаментальных и прикладных исследований - основа развития современных аграрно-пищевых технологий», Углич, 2007г;

- X Международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы мясной промышленности: инновации, качество, управление», ВНИИ мясной промышленности им. В.М. Горбатова, Москва, 2007г.

Международной научно-практической конференции «Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов», ВНИТИБП, Щелково, 2007г.

4-м Международном научно-практическом симпозиуме «Микробные биокатализаторы и их роль в нано- и биотехнологиях», Москва, 2008г. Публикации. По теме диссертационной работы подготовлено и опубликовано 7 печатных работ.

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы и патентов, экспериментальной части, состоящей из 7 глав, выводов, списка литературы, включающего 140 наименования работ отечественных и иностранных авторов и приложения. Диссертация изложена на 171 страницах машинописного текста, содержит 22 таблицы, 34 рисунков.

Заключение диссертации по теме «Биотехнология», Юскина, Ольга Николаевна

157 ВЫВОДЫ

1. Осуществлен скрининг дрожжей, обладающих высокой скоростью роста (0,17-0,18 час"1) и белоксинтезирующей способностью (содержание белка 39-48%).

2. Проведены сравнительные исследования гидролитической способности ФП различного спектра действия по отношению к структурным полимерам клеточных стенок дрожжей и осуществлен выбор наиболее перспективных, содержащих в составе комплекса ферменты протеолитического, [3-глюканазного, маннанолитического и хитинолитического действия, необходимых для катализа белково-полисахаридных полимеров клеточной оболочки.

3. Разработаны условия проведения ферментативного гидролиза клеточных стенок, включающие две стадии и использование двух МЭК:

- для I стадии ферментолиза: МЭК-1- 0,2 ед ПС+ 80 ед (3-ГкС при 50°С, длительность ферментолиза 1 час;

- для II стадии ферментолиза: МЭК- II- 300 ед р-глюканазы+ 6,2 ед маннаназы+0,44 ед хитиназы при 50°С, в течение 2 часов.

4. Разработана принципиальная схема производства препарата белка, апробированная в промышленных условиях МЭЗ и ВНИТИБП -ЗАО «Биопрогресс». Наработаны экспериментальные образцы белкового препарата, содержащего 63-67% белковых веществ и изучены его аминокислотный состав, а также функционально-технологическая характеристика (ВУС=2,58 г воды/г препарата, ЖУС= 0,72 г масла/г препарата).

5. Научно обоснована целесообразность использования белкового препарата для повышения качества и биологической полноценности пищевой продукции

Заключение

Таким образом, дрожжи являются не только перспективным объектом для получения белково-аминокислотных добавок пищевого назначения, но и препаратов медико-биологического назначения — источников биологически активных веществ, свободных аминокислот, нуклеотидов, витаминов, ценных полисахаридов и др. Многокомпонентная структура дрожжевой клетки предполагает использование комплексных методов деструкции и подбор мультиэнзимных систем целевого назначения.

Глава П ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

2.1 ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ

Цель настоящих исследований состояла в разработке научно-обоснованного способа получения белковых препаратов на основе направленного ферментативного катализа полимеров клеточных стенок дрожжей. Для* достижения« поставленной цели исследований'предусмотрено решение ряда задач: на основе1 анализа» структуры строения клеточной стенки дрожжей и возможных способов ее деградации научно* обосновать состав ферментативной системы, необходимой для деструкции дрожжевой клетки и-экспериментально исследовать степень воздействия индивидуальных ферментов на структурообразующие биополимеры, клеточной стенки; провести сравнительные исследования-ферментных препаратов-отечественного и импортного производства' по составу основных и минорных ферментов комплекса, уровню их активностей и осуществить скрининг наиболее перспективных; разработать эффективную мультиэнзимную композицию (МЭК) с научно-обоснованным соотношением ферментов! в составе выбранного комплекса для трансформации биополимеров клеточной стенки дрожжей; исследовать процессы, выделения белковых веществ протоплазмы клеток и разработать принципиальную схему получения белковых продуктов с использованием энзиматической деструкции дрожжевой биомассы с максимально возможным выделением белковых веществ из исследуемого сырья; охарактеризовать полученный белковый препарат по биохимическим и функционально-технологическим показателям; разработать научно-техническую документацию для производства белкового препарата.

Принимая во внимание характер задач сформулированных нами, была разработана следующая схема постановки эксперимента (рис.4).

Рисунок 4 - Схема постановки эксперимента

2.2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

В качестве объектов исследования рассматривали дрожжи рода БассЬагошусез сегеУ1з1ае из музея ГНУ ВНИИ пищевой биотехнологии Россельхозакадемии для отбора высокопродуктивного штамма в отношении белоксинтезирующей способности. На разных этапах работы объектами исследования являлись ферментные препараты различной направленности действия и с различных составом ферментативного комплекса.

2.2.1 МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ БИОХИМИЧЕСКИХ ПОКАЗАТЕЛЕЙ

Определение влажности

Содержание влаги в дрожжах определяли высушиванием, после предварительной гомогенизации. Определение вели с помощью прибора Чижовой или высушиванием до постоянного веса при 100-105 °С [ГОСТ 171-81, Грачева И.М., Смирнова Т.А. Общая технология микробиологических производств. Приложения к лабораторному практикуму для студентов технологического факультета. //М., 1971. - 170 е.].

Содержание общего экстракта

Содержание сухих растворимых веществ в дрожжах определяли^ рефрактометрическим методом. Для этого экстрагирование ведут в течении 5 часов для сухого сырья и 2 часа для влажного при температуре 80° С при предварительном разрушении клеточной стенки [Грачева И.М., Смирнова Т.А. Общая технология микробиологических производств. Приложения к лабораторному практикуму для студентов технологического факультета. // М., 1971. - 170 е.].

Определение растворимых сухих веществ

Концентрацию сухих веществ на различных этапах работы измеряли с помощью лабораторного рефрактометра марки РЛ, действие которого основано на зависимости показателя преломления раствора от его концентрации.

61

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Юскина, Ольга Николаевна, 2008 год

1. Абрамов Ш.А., Эфендиева Д.А., Котенко С.И. «Влияние среды на содержание белка в дрожжах Sacch. cerevisiae». Прикладная биохимия и микробиология, 1994, т.ЗО, в.2, с.275-278.

2. Авторское свидетельство СССР №1416100, класс A23J 1/18, 15.08.1988 г

3. Айнулов А.Б., Джафаров А.Ф., Коршунов Б.А. и др. «Способ извлечения внутриклеточного вещества из дрожжевых клеток», С 12 N 9/00 №2038379, 27.06.95 г. Бюл. №18. Внедренческая фирма «Инсад».

4. Акцептованная заявка Японии №48-15-621, 73-2 (4) 24, опубликована 15.05.1973 г.

5. Байрамов Р.Б. Перспективы использования микроводорослей.//Ашгабат: Издательство Туркмен НИИНТИ, 1992, с. 19.

6. Безруков М.Г. «Принципы выделения и регулирования свойств белка из биомассы одноклеточных.» Автореферат дисс. на соискание уч. степени доктора хим. наук. Москва, 1989 г

7. Безрукова М.Г., Градова Н.Б. Использование биомассы микроорганизмов для пищевых целей // Сб. науч. трудов/ Институт биохимии и физиологии микроорганизмов АНСССР. Пущино, 1985, с. 119.

8. Беликов В.М., Латов В.К., Цыряпкин В.А., Сергеев В.А. Биомасса дрожжей как источник аминокислот.// Микробиол. пр-сть, 1976, т.З (134), с. 6.

9. Беликов В.М., Гордиенко C.B., Патов В.К., Цыряпкин В.А. и др. Аминокислотный состав препаратов из автолизатов пекарских дрожжей. Прикл. Биохим. Микробиол., 1978, т.4,с.60-66

10. Беликов В.М., Бабаян Т.Л., Латов В.К., Князькова A.B. Способ автолиза дрожжевой биомассы. Авт. свид. СССР № 667194 // Б.И. 1979, №22, с.7.

11. Беликов В.М., Бабаян Т.Л., Харатьян С.Г., Латов В.К., Князькова A.B. Способ автолиза дрожжевой биомассы. Авт. свид. СССР № 554854 // Б.И. 1977, №15, с.12.

12. Беликов В.М., Гордиенко С.В., Латов В.К., Харатьян С.Г., Сергеев В.А., Коган A.C., Андрианов В.В. Способ получения аминокислот из низших пептидов. Авт. свид. СССР № 602543 // Б.И. 1978, №14, с.92.

13. Бравова Г.Б., Иванова Н.Г., Шишкова Э.А. и др. «Способ получения осветленного экстракта автолизированных дрожжей». АО «Биотехнология», А 23 J1/18 №2084171, от 20.07.97 г.

14. Доценко О.Н., Садова В.В. Функционально-технологические характеристики белкового продукта дрожжевой биомассы.// Изв. вузов. Пищ. технол. 2002,№ 2-3, с.25.

15. Безруков М.Г., Солошенко В.М., Ковалев А.П., Иоффе М.Л., Токаев Э.С., Бобренева И.В. «Способ получения дрожжевых экстрактов», патент А23 J 1/18, № 2007928, 28.02.94 г, Московский государственный Университет прикладной биотехнологии.

16. Берри Д. Биология дрожжей. //М.: Мир. 1985, с.95

17. Грачева И.М., Смирнова Т.А. Общая технология микробиологических производств. Приложения к лабораторному практикуму для студентов технологического факультета. //М., 1971. 170 с.

18. Грачева И.М., Кривова А.Ю. Технология ферментных препаратов.-Москва, Элевар, 2000.-512с.

19. Грачева И.М., Иванова Л.А., Кантере В.М. Технология микробных белковых препаратов, аминокислот и биоэнергия.// М.: Колос, 1992, с.384.

20. Долгов В.А. Повышение биологической ценности кормовой микробной биомассы методами деструкции. //Автореф. (канд. биол. наук) Львов. 1981, с.26.

21. Доценко О.Н., Садова В.В. Функционально-технологические характеристики белкового продукта дрожжевой биомассы.// Изв. вузов. Пищ. технол. 2002,№ 2-3, с.25.

22. Ермаков А.И., Арасимович В.В. и др. Методы биохимического исследования растений // Ленинград: Колос, 1972. 456 е.,

23. Иванова Л.А., Иванова И.С., Лабутина Н.В. Применение БАД полученных из дрожжевой биомассы в х/п пром-ти.// Хранение и переработка с/х сырья. 2003 ,№ 2, с.38-40.

24. Иванова Е.П., Романенко Л.А., Плисова Е.Ю., Федосов Ю.В., Михайлов В.В., Горшкова Н.М., Ивайловский В.В., Рассказов В.А. Распространение рибонуклеаз микроорганизмов. // Прикл. биохимия и микробиол. 1994. Т 30. С. 384-388.

25. Иванова Г.С., Сравнительное исследование внутриклеточных и внеклеточных рибонуклеаз грибов Aspergilius clavatus и Pénicillium claviforme. Диссретация на соискание ученой степени доктораv sбиологических наук. Пущино, 1990.

26. Иванова Н.И., Индуцированный автолиз дрожжей.//Диссертация. М.-1998, с.142.

27. Иванова Л.А., Войно Л.И. // Сб. научных трудов 4-го Международного научно-практического симпозиума «Микробные биокатализаторы и их роль в нано- и биотехнологиях», Москва, 2008г

28. Иерусалимский Н.Д. «Основы физиологии микробов», 1963, Ан СССР, Москва.

29. Иоффе М.Л., Безруков М.Г. Биологическая ценность изолятов белков микробного синтеза // Биотехнология. 1986, № 5, с.73.

30. Калашников Е.Я., Николаева Н.М. //Сб.: Вопросы биохимии и технологии пищевого производства. Харьков. 1967, №5, с.29.

31. Кислухина О.В., Кузнецова Т.А., Бандоян А.К. Гидролизаты казеина как регуляторы автолиза микроорганизмов.// В кн. Получение и применение регуляторов роста. — Л. 1986, с.83-86.

32. Кислухина О.В., Калунянц К.А., Аленова Д.Ж. Ферментативный лизис микроорганизмов.// Алма-Ата: Рауан. 1990, с.200.

33. Коновалов С.А. Биохимия дрожжей. //М.: Пищевая промышленность. 1980, с.271.

34. Коновалов С. А., Воротило С.П., Соколова JI. Б. Ферментативный метод разрушения клеточных стенок дрожжей. // Прикл. биохимия и микробиология. 1975. Т. 11. № 4. С. 620-622.

35. Латов В.К., Бабаян Т.Л., Гордиенко C.B., Коган A.C., Цыряпкин В.А., Беликов В.М. Комплексная переработка дрожжевой биомассы.// Биотехнология. 1990, №3, с. 14-18.

36. Ларионов В.Л. Сахаромицеты как объект биотехнологии. Биотехнология, 1985, №2, с. 29-34.

37. Лукин Н.И., Никитенко С.И. «Способ получения пищевого биологически активного продукта переработки дрожжей», патент A23J 1/18, № 2 244 438, 21.03.2003 г.; ООО «Балтком»,

38. Малый практикум по биохимии под ред. Юркевича В.В., МГУ им. Ломоносова, // М.: Издательство Московского университета, 125 е..

39. Матвеева И.В., Белявская И.Г. Биотехнологические основы приготовления хлеба.// М.: ДеЛи принт. 2001, с.150.

40. Микеладзе Г.Г. Нетрадиционные пути получения пищевых белков.// Пищевая и перерабатывающая промышленность. 1987, №10, с.42

41. Московский В.Д., Коптелов М.М., Тюменцев В.В. «Витаминно-аминокислотный концентрат «Дрожжелизин», патент А 23 Л/18 № 210 94 59.

42. Науменко Н.И., с соавт.,1985

43. Неклюдов А.Д., Иванкин А.Н., Бердутина A.B. Получение и очистка белковых гидролизатов (обзор).// Прикладная биохимия и микробиология. 2000, т.36, №4, с.371-379.

44. Неклюдов А.Д., Иванкин А.Н., Бердутина A.B. Свойства и применение белковых гидролизатов (обзор).// Прикладная биохимия и микробиология. 2000, т.36, №5, с.525-534.

45. Нечаев А.П, Траубенберг С.Е., Кочеткова А.А, Колпакова В.В., Витол И.С, Кобелева И.Б. Пищевая химия, учебник, Спб, Гиорд, 2001-592с.

46. Новаковская С.С., Шишацкий Ю.И. Производство хлебопекарных дрожжей.//М.: Агропромиздат. 1990, с.336.

47. Орлова Е.В., Орлова B.C., Римарева JI.B. Получение нуклеотидного препарата из дрожжей Saccharomyces cerevisiae и его биологическая эффективность. Хранение и переработка сельхозсырья, 2006, т. 12, с. 4549;

48. Патент РФ № 2070400 от 15.03.96 г., МПК: A23L 2/52, A 23J 1/18, C12N 1/18

49. Патент США №3.833.552, класс A23J 1/18, опубликован 03.09.1974 г., Патент Великобритании №1.513.836, класс A23J 1/18, 1978,

50. Патент Швейцарии № 643296, кл. С 12N 1/06, 1984

51. Перт Дж. «Основы культивирования микроорганизмов и клеток», 1978, Мир, Москва.

52. Полыгалина Г.В., Чередниченко B.C., Римарева JI.B. Определение активности ферментов. Справочник. М.: Изд. ДеЛи принт, 2003-372с.

53. Ракитин В.Ю. Технологические аспекты дезинтеграции микроорганизмов.// Обзор. -М.: НИИТЭХИМ 1980, Вып. 15 (100), с.36.

54. Римарева Л.В., Оверченко М.Б., Трифонова В.И., Устинников В.А. Получение пищевых добавок лечебно-профилактического действия.// Сб.: «Пища. Экология. Человек». Межд. науч.-техн. конф. М., 1995, с.25.

55. Римарева JI.B., Оверченко M. Б., Серба Е.М., Трифонова В. В. Сравнительная характеристика микробных протеаз по степени гидролиза белковых субстратов // Прикл. биохимия и микробиология. 1997, Т. 33, № 1, с. 43-48.

56. Римарева JI.B. Биотехнология комплексных препаратов кислых протеаз и их роль в интенсификации технологических процессов в отраслях АПК / Монография. М. Издательский комплекс МГУ1111, 1997 г. - 51 с.

57. Rimareva L.V., Overchenko М.В., Serba Е.М. Comparative Characterization of Microbial Proteases by the Extent of Hydrolysis of Protein Substrates // Applied Biochemystry and Microbiology. 1997,- V.33, N 1. P. 36-41

58. Римарева JI.B., Оверченко М.Б.,Трифонова B.B. Способ производства сухих пищевых продуктов. Патент РФ № 2110934. -Б.И., 1998. № 14.

59. Римарева JI.B., Оверченко М. Б., Трифонова В. В. Способ получения белкового гидролизата дрожжевой биомассы: Патент РФ № 2104300 // Б. И. 1998, №4, с. 151

60. Rimareva L.V. Comparative characterzation of microbial proteases by the extent of hydrolysis of protein substrates. Ninth congress of the Bulgarian mic robiologists with forein participation (15-17 October 1998, Sofia, Bulgaria.) -1998.-P. 11.

61. Римарева JI.B., Оверченко М.Б., Серба E.M., Игнатова Н.И.,Тулякова Т.В. Использование комплексного препарата амилопротооризин (КФПА) для энзиматического гидролиза дрожжевой биомассы. Хранение и переработка с/х сырья. 2002. - № 10. - С. 39-41.

62. Римарева JI.B. Биотехнологические и медико-биологические аспекты получения амино-кислотных добавок на основе энзиматического гидролиза микробной биомассы // Хранение и переработка сельхозсырья. -2003.-№5.-С. 95-96.

63. Римарева JI.B., Оверченко М.Б. Трифонова В.В. Способ получения белкового гидролизата дрожжевой биомассы. Патент РФ № 2104300. Б.И., 1998. № 4

64. Римарева Л.В., Оверченко М.Б., Морозова К.А., Серба Е.М. //Влияние ферментативного комплекса гриба Aspergillus oryzae на степень гидролиза полимеров дрожжевой биомассы// Хранение и переработка сельхозсырья. 2006. - № 4. - С. 39-42

65. Римарева Л.В, Ибрагимова С.И. Отбор физиологически активного штамма Saccharomyces cerevisiae продуцента пищевого белка. Сб. докладов. Научно-практическая конференция. - Углич, 2004. - Ч.П. - С. 72-75.

66. Rimareva L.V., Ibragimova S.I. Practicing in getting yeast biomass on alcohol waste products for food protein obtaining. VI Intern. Forum "Biotechnology and the present" Abstracts of repots. St.Petrsburg, June, 2005. - P. 27.

67. Римарева Л.В., Ибрагимова С.И.,Курбатова Е.И. Рост дрожжей ЗассЬагошусез сегеу1э1ае при культивировании на пшеничном сусле // Хранение и переработка сельхозсырья. 2006. - № 7. - С. 45-49.

68. Рошкова 3. Получение и применение дрожжевых белковых продуктов пищевого назначения //Хранительная промышленность. 1986, №1, с.25

69. Руденко А.Н., Конев С.В. О влиянии моно- и дивалентных катионов на термоустойчивость дрожжевых клеток. //В сб. Микроорганизмы -продуценты биологически активных веществ. Минск. Наука и техника. 1973,с.168-172.

70. Рухлядева А.П. Инструкция по техно-химическому и микробиологическому контролю спиртового производства.// М.: Агропромиздат. 1986, с.397.

71. Садкова Н.П. «Некоторые физико-химические свойства глютелиновых фракций дрожжевых белков», автореферат диссертации на соискание кандидата химических наук, Москва, 1975

72. Фараджаева Е.Д., Кораблин Р.В. Получение и применение БАД на основе вторичных ресурсов пивоварения.// Пища. Экология. Качество.: Сб.матер. 2 Межд. науч.-практ. конфер. Новосибирск: Издательство СО РАСХН, 2002, с.38-39.

73. Фихте Б.А. Дезинтеграция микроорганизмов.//Задачи и перспективы. Пущино-на-Оке. 1972, с.5-14.

74. Химический состав пищевых продуктов. //М.: Легкая и пищевая промышленность. 1984, с.305

75. Baldwin С., Robinson С. Increased disruption resistence of Candida utilis grown for survivors of enzymatic lysis combined with high pressure homogenization.// Letters in Applied Microbiology. 1992, vol.15, p.59-62.

76. Kollar R., Sturdir E. Indukovana autolyza kvasinick. // Biologia, 1989, v.44, №12, p.1211-1223.87. Pellet P.L.,et al., 1980

77. Shetty K.I., Kinsella J.E. " Preparation of yeast protein isolate with low nucleic acid by succinylation" J. Food science, 1979, v.44, p.633-638

78. Alemohammad M.M., Knowless C.J. Osmotically induced volume and turbidity changes of E. coli due salts, sucrose and glycerol, with particularreference to the rapid permeation of glycerolin to the cell.// J. Gen. Microbiol.,*1974, v.№l,p.l25-142. '

79. Alvarez R., Enriquez A. Nucleic acid reduction in yest. //Appl. Microbiol. Biotechnol. 1988, v.29, № 2-36 p. 208-210.

80. Adams, J. M., and S. Cory. The Bcl-2 protein family: arbiters of cell survival. Science, 1998, v. 281, p.1322-1326.

81. Baldwin C., Robinson C. Increased disruption resistence of Candida utilis grown for survivors of enzymatic lysis combined with high pressure homogenization.// Letters in Applied Microbiology. 1992, vol.15, p.59-62.

82. Bomar M.T.,Yakubick V., Schmidt S. Autosysis of yeast induced by elevated temperature, ultraviolet and electron radiation. // Alimenta. 1977, v. 16, p.53-57.

83. Babayan T.L., Bezrukov M.G., Latov V. K., Belikov B.M., Belatseva E.M., TitovaE.F. Curr. Microbiol. 1981, v.5, p.161.

84. Behalova В., Sillinger V.,Machek F. Баланс эргостерина при получении дрожжевого экстракта из клеток S. cerevisiae и C.utilis. // Kvasny Prüm., 1996, v.32, №11, р.279-280.

85. Briones С, Ballesta JP Conformational changes induced in the Saccharomyces cerevisiae GTPase-associated rRNA by ribosomal stalk components and a translocation inhibitor. //Nucleic Acids Res. 2000; 28(22):4497-505.

86. Chrenova N.M., Bezrukov M.G., Kogan A.S., Sergeev W.A. Autolysis der H-hefe Saccharomyces cerevisiae induziert durch metallkationen. // Nahrung,1981, В. 25, S. 837-844.

87. Deshpande RA, Shankar V. Ribonucleases from T2 family// Crit Rev Microbiol. 2002;v 28(2), p:79-122.

88. Elango N., Correa J.U., Cabib E. Secretory of yeast chitinase.// J.Biol.Chem.,1982, v.257,№3, p. 1398-1400. bei treatment with enzymes.// J. Gen. Microbiol., 1980, v.l 17, p.383-391.

89. Gale E.F., Ingram J., Kerridge D., Notario V., Waymann F. Reduction of amphotericin resistance in stationary phase cultures of Candida albicans

90. Hien N.H., Fleet G.H. Separation und characterization of six (l-3)-ß-glucanases from S.cerevisae.// J. Bacteriol., 1983,v.l56, №3, p.1204-1213.

91. Hilt W., Wolf D.H. Stress-induced proteolysis in yeast.// Mol. Microbiol., 1992, v.6, №17, p. 2437-2442.

92. Holzer H., Heinrich P.C. -Ann.Rev.Biochem., 1980, v.49, №63.

93. Gonzalez E.E., Vernon E.J.C., Moctezuma A.R.Ch., In: J. «Ind.and Enuiron.», 1985, 8, №4, p.19-20.

94. Johnson J.C. Food Additives. // Recent Developments, Noyes Data Corp., Park Ridge, 1983,s.526.

95. Jeong HS, Backlund PS, Chen HC, Karavanov AA, Crouch RJ. RNase H2 of Saccharomyces cerevisiae is a complex of three proteins. Nucleic Acids Res. 2004 v.32, p.407-14

96. Kihlberg J. Ann. Rev. Of Microbiol., 1972, v.26, p.427-431.

97. Kollar R., Sturdir E. Indukovana autolyza kvasinick. // Biologia, 1989, v.44, №12, p.1211-1223.

98. Kovach B., Deak P., Haidu D., Vealand A.// Szeszipar. Januar - Vfrcius. 1988, p.36.

99. Langedijk JP, Olijhoek T, Schut D, Autar R, Meloen RH. New transport peptides broaden the horizon of applications for peptidic pharmaceuticals //Mol Divers. 2004;v 8(2); p.101-11

100. Leduc M., van Heijenoort J. Autolysis of E.coli. J. Bacterid., 1980,v. 142,№ 16 p.52-59.

101. Lowry H.O., Rosenbrough N.I., Randall R.I.J., J. Biol. Chem. 1951, 193, 265.

102. U3. Markhame E., Eyrne W.J., In: «Continuous cultivation of microorganisms» ed. Malek I. et al., p.l 17, Academia Prague, 1969.

103. Masters P.M., Friedmon M. //J. Agr. Food Chem. 1979 27, 3, p.507.

104. Muller-Wecker H, Kofranyi E. Z. Phisiol. Chem., 1973, v.354, p. 1034-1042.

105. De Mendoza C, Gallego O, Soriano V. Mechanisms of Resistance to Antiviral Drugs Clinical Implications. AIDS Rev 2002, v.4, p. 64-82.

106. Niks M., Otto M. Towards an optimized MTT assay. J. Immunol. Meth., 1990, v 130, № l,p. 149-151.

107. Niks M., Otto M. Towards an optimized MTT assay. // J. Immunol. Meth., 1990, v 130, № l,p. 149-151

108. Notario V. (3-glucanases from Candida albicans: purification, characterization and the nature of their attachment to cell wall components.// J. Gen. Mikrobiol., 1982, v. 128, №4, p. 747-759.

109. Otero M.A., Wagner J.R. Thermal behaviour and hydration properties of yeast proteins from Saccharomyces cerevisiae and Kluyveromyces fragilis. //Food Chemistry. -2000.№69. pp. 161-165.

110. PAG. Revised PAG Guidelines. PAG/UNU Guideline № 6; Preclinical testing of novel sources of food // Food and Nutr. Bull. 1983, 5, №1, p.60

111. Parente A.M., Silva M.T. Ultrastruktural aspects of autolysis of Ps. Fluorescens induced by osmotic shock. // J. Gen. Microbiol., 1984, v.130, №6, p.1459-1470.

112. Patching J.W., Rose A.N., Cold osmotic shock in S. serevisiae.//j. Bacteriol., 1971, v. 108, p. 451-458.

113. Pentremoli S., Melloni E., Salamino F., Sparatore В., Michetti M., Horecker B.L.// Endogenous inhibitors of lysosomal proteinases.//Proc.Natl. Acad. Sei. USA, 1983, v.80,№5,p. 1261-1264.

114. Reyea F., Lahoz R., val Moreno A. J. Gen. Microbiol. // 1980, v.26, p.1120.

115. Riemay K.-H., Troger R. Autolyse bei Pilzen: Autolytischer Abbau von Kohlenhydraten, Proteinen, und Nucleinsaueren.// Z. Allg. Mikrobiol., 1978(8), В. 18,S.617-625.

116. Refae A.H. et al., «Оптимизация микробиологического синтеза белка из свекловичной мелассы с использованием Sacch. uvarum »., Chem. Mickrobiol. Technologie der lebensmittel.,1985, Bd. 9, № 4, s. 105 -112.

117. Rosales F. H. Yeast as protein source for human nutrition (a review).//Acta Microbiol. Hung., 1984, v.31, p. 159-172.

118. Roth F. Mikroorganismen als Proteinquelle in der Tierernaeehrung.// Kraftlutter, 1979, b.62, № 3, s. 122-128.

119. Ruggieri S., Magni G. // Phys.Chem.Phys., 1982, v.14, p.315.

120. Saheki Т., Holzer H. Proteolytic activities in yeast. // Biochim. Biophys. Acta 1975, v.384, №1, p. 203- 214.

121. Saheki Т., Holzen H. Comparisons of the tryptophan synthase inactivating enzymes with proteinases from yeast. // Eur. J. Biochem., 1974, v. 42, p.621-626.

122. Sergeev V.A., Solosenko U.M., Berzucov M.G.// Acta Biotechnol. 1984, №4,1. 105.

123. Sommer R., Yeast autolysates — production, properties and applications// Product information "Only", 1989.

124. Sajbidor J., Certic M., Grego J. Lypid analysis of baker's yeasts. J. Chromatogr., 1994, v.665, p.191-195.

125. Tempest D.W. In: Microbiol Growth, 19th Symposium Soc. Gen. Microbiol., p.87, Cambridge University Press, Cambridge, 1969.

126. Villan G. J., Enriquez M.A., Lopez S.P. Reina C.R., Permeabilization cellular de C. utillis.// Rev. cienc.biol. 1983, v. 14, №1, p.35-47

127. Wetter C., Poeppinghaus K., Morais H., Dias M., Mendes B., Santana F., Oliveira J.F.S., «Water Sci. andtechnol», 1989, 21, №12, p.1853-1856.

128. Yeast protein en hances flavour and nutrition. //Food Process. 1986 55, №10, p.13.

129. Yumi Y.,Dao Thi D., Xing X., Kanji M., Characteristics of baker's yeast destruction by means of homogenezator working with high pressure.//.!.Soc.Pwder Technol. -1999.-vol. 36.№7. -pp.534-541.