Разработка методов анализа флавонов как индикаторных компонентов лекарственного растительного сырья тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 15.00.02, кандидат фармацевтических наук Кошечкина, Анна Сергеевна

• Кошечкина, Анна Сергеевна
• кандидат фармацевтических наук
• 2007

Оглавление диссертации кандидат фармацевтических наук Кошечкина, Анна Сергеевна

анализа флавоноидных соединений.

1.1 Общий биосинтез флавоноидов.

1.2 Распространение флавоноидов.

1.3 Основные классификации флавоноидных соединений.

1.41 Фармакогностическая и фармакологическая характеристика прополиса.

1.4.1 Общие сведения о прополисе.

1:4.2 Химический состав и свойства прополиса.

1.4.3 Фармакологическая характеристика флавоноидов прополиса.

1.5 Фармакогностическая и фармакологическая характеристика растения шлемник байкальский Scutellaria baicalensis Georgi.

1.5.1. Морфологические характеристики шлемника байкальского.

1.5.2. Химический состав шлемника байкальского.

1.5.3. Фармакологическая характеристика флавоноидов шлемника байкальского

1.6 Фармакогностическая и фармакологическая характеристика растения петрушка кудрявая Petroselinum crispum (Mill.) A. W. Hill.

1.6.1. Ботаническая и фармакогностическая характеристика петрушки кудрявой.

1.6.2. Химический состав петрушки кудрявой.

1.6.3. Фармакологические свойства биологически активных веществ петрушки кудрявой.

Выводы по главе I:.

Глава II. Методы анализа флавоноидных соединений в растительных объектах и продуктах на их основе.

2.1. Физические свойства флавоноидных соединений.

2.2. Химические свойства флавоноидных соединений.

2.3. Выделение растительных флавоноидов.

2.4. Качественные реакции флавоноидных соединений.

2.5 Спектральные методы анализа флавоноидных соединений.

2.6. Хроматографические методы анализа флавоноидных соединений.

2.7.Фармакопейные методики анализа препаратов, содержащих прополис.

2.8. Методики анализа препаратов, содержащих шлемник байкальский.

Выводы по главе II.

Глава III. Материалы и методы исследования.

3.1. Оборудование и реактивы.

3.2: Стандартные образцы.

3.3. Объекты исследован.

Выводы из главы III.

Глава IV. Разработка химических критериев подлинности комплексных растительных препаратов на основе прополиса, шлемника байкальского, петрушки кудрявой и методов их контроля

4.1. Анализ производиых флавоиа в лекарственном сырье и фитопрепаратах на основе прополиса.

4.1.1. Подготовка проб для хроматографического анализа.

4.1.2. Подтверждения флавоноидного состава прополиса с помощью химической модификации.

4.1.2. Выбор оптимальных условий для разделения флавоноидов прополиса.

4.1.3 Выбор оптимальных условий детектирования.

4.2.4 Параметры количественного определения и метрологические характеристики методики.

4.1.5. Результаты анализа флавоноидов в опытных образцах.

4.2. Анализ флавонов в лекарственном сырье и фитопрепаратах на основе шлемника байкальского.

4.2.1. Подготовка проб для хроматографического анализа.

4.2.3. Оптимизация условий ВЭЖХ.

4.2.4 Количественное определение байкалина методом ВЭЖХ в фитопрепаратах и растительном сырье шлемника байкальского.

4.2.5 Параметры количественного определения и метрологические характеристики методики.

4.2.6. Результаты анализа байкалина в опытных образцах содержащих компоненты растения шлемника байкальского.

4.3. Анализ флавонов в сырье и фитопрепаратах на основе петрушки кудрявой Petroselinum crispum (Mill.) A. W. Hill.

4.3.1 Подготовка проб для хроматографического анализа.

4.3.3. Оптимизация условий ВЭЖХ.

4.2.3. Количественное определение апиина методом ВЭЖХ в фитопрепаратах и растительном сырье.

4.2.5. Результаты анализа апиина в опытных образцах содержащих компоненты растения петрушки кудрявой.

Выводы из главы IV.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Разработка методов анализа флавонов как индикаторных компонентов лекарственного растительного сырья»

Актуальность темы

Флавоноидами называется группа природных полифенольных биологически активных соединений - производных бенз-у-пирона, в основе которых лежит фенилпропановый скелет, состоящий из С6-СЗ-С6 углеродных единиц. К основным классам флавоноидов относятся флавоны, флаваноны, дигидрохалконы, халконы, антоцианидины, флаванонолы (дигидрофлавонолы), флавонолы, и изофлавоноиды. Разнообразие флавоноидов обуславливается наличием большого числа гидроксилированных, метилированных, ацилированых, О- и С-гликозилированных производных в ароматических ядрах А и В, а также асимметрических атомов углерода в пирановом гетероцикле. К классу флавонов (выделено около 20 агликонов) относятся окисленные флавоноиды, не имеющие гидроксила в 3-м положении (кольцо В).

Интерес к природным флавонам связан с их выраженными антиоксидантными свойствами, для ряда флавонов показаны их антиаллергенные, противоспалительные, антивирусные, антибактериальные свойства и другие типы биологической активности.

Наиболее ценными источниками флавонов являются прополис, трава петрушки кудрявой и корни шлемника, содержание флавонов в этих объектах превышает 2-2,5 %.

На основе прополиса разработан целый ряд препаратов, среди которых широко известны «Прополиса настойка», мазь «Пропоцеум», аэрозоль «Пропосол» и др. Шлемник байкальский используется как сырье для приготовления настойки гипотензивного и седативного действия. Петрушка кудрявая является традиционным пищевым растением. Также прополис, шлемник байкальский и петрушка кудрявая входят в состав зарегистрированных биологически активных добавок (БАД) к пище.

В настоящее время становится все более актуальной проблема безопасности и подлинности сборов лекарственных трав и биологически активных добавок, а также разработки достоверных критериев их идентификации.

Необходимость определения незначительных концентраций действующих веществ на фоне сложного матрикса БАД предъявляет высокие требования к селективности и чувствительности методов анализа.

Решение этих задач тормозится отсутствием в большинстве случаев достоверных методов контроля действующих начал в составе комплексных БАД. Большинство существующих нехроматографических методов определения индикаторных компонентов растительных БАД неселективны, трудоёмки и могут в отдельных случаях приводить к получению, как ложноположительных результатов, так и к искажению количественных данных.

Одними из наиболее перспективных методов для решения этих задач являются хроматографические методы, сочетающие высокую эффективность разделения компонентов БАД с избирательностью и чувствительностью детектирования.

Цель и задачи исследования

Цель: разработать методики анализа флавонов в наиболее ценных источниках этих веществ: прополисе, корнях шлемника и траве петрушки. Для достижения этой цели были поставлены следующие задачи.

• Изучить физико-химические свойства флавонов;

• Разработать методики пробоподготовки сырья и продуктов на его основе, обеспечивающие наибольшую эффективность экстракции, характеризующиеся невысокой трудоемкостью;

• Подобрать оптимальные хроматографические условия для определения флавонов на фоне сложного матрикса;

• Оценить параметры пригодности хроматографических систем;

• Разработать методики количественного определения флавонов;

• Оценить метрологические характеристики разработанных методик;

• Апробировать разработанные методики на образцах растительного сырья, экстрактов растительного сырья, лекарственных препаратов, БАД и обогащенных продуктов на его основе.

Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук

Диссертационная работа выполнена в рамках НИР кафедры фармацевтической химии ММА им. И.М. Сеченова «Совершенствование контроля качества лекарственных средств», № госрегистрации 01.200.110545.

Научная новизна результатов исследования

Разработаны оригинальные методики идентификации и количественного определения индикаторных флавонов в лекарственных препаратах, БАДах и пищевых продуктах: определение апигенина, акацетина и хризина в прополисе, определение байкалина в шлемнике байкальском, определение апиина и малонилапиина в петрушке кудрявой.

Практическое значение работы

Разработанные методики использовались при гигиенической экспертизе более 80 БАД и сырья для БАД к пище в ГУ НИИ Питания РАМН. Методики определения апигенина, акацетина и хризина в прополисе, определение байкалина в шлемнике байкальском, определение апиина и малонилапиина в петрушке кудрявой включены в «Руководство по методам контроля качества и безопасности биологически активных добавок к пище» (дополнение к Р4.1.1672-03, Минздрав РФ).

Публикации

По материалам диссертации опубликовано 5 печатных работ.

Апробация работы

Результаты исследований доложены на межрегиональной научно-практической конференции «Питание здорового и больного человека» (май 2007 г., г. Рязань); на научных конференциях кафедры фармацевтической химии с курсом токсикологической химии ММА им. И.М.Сеченова (2005 - 2007 гг.); на Международной научно-практической конференции Apimondia (июль

2005 г., г. Дублин); на семинаре «Аналитическая химия в контроле безопасности, качества и подлинности пищевых продуктов и биологически активных добавок к пище» AnalyticaExpo-2006 (апрель 2006 г., Москва), конгрессе «Фитофарм 2006» (июнь 2006 г., Санкт-Петербург)

Объем и структура работы

Диссертация изложена на 106 стр. машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследований, результатов исследования и их обсуждения, выводов и библиографического указателя, включающего 115 источников. Работа иллюстрирована 19 рисунками и 23 таблицами.

Заключение диссертации по теме «Фармацевтическая химия и фармакогнозия», Кошечкина, Анна Сергеевна

Общие выводы

1) Изучены физико-химические свойства (растворимость, хроматографическая подвижность, уф- и видимые спектры, масс-спектры) флавонов, входящих в состав прополиса, шлемника байкальского и петрушки кудрявой.

2) Разработаны универсальные методики пробоподготовки для сырья, лекарственных препаратов, БАД и пищевых продуктов. Изучено влияние растворителя и условий экстракции на степень извлечения флавонов из сырья лекарственных препаратов, БАД и обогащенных продуктов. Подобраны оптимальные и доступные растворители для извлечения флавонов. Определено оптимальное время экстрагирования образцов.

3) Подобранны оптимальные хроматографические условия для определения флавоноидов прополиса: кемпферола, изорамнетина, апигенина, хризина, акацетина, кемпферида, гал ангина и пиноцембрина; флавона байкалеина в шлемнике байкальском и производных апигенина (апиина и малонилапиина) в петрушке кудрявой.

4) При оценке пригодности хроматографических систем, все разработанные методики показали хорошую эффективность (3000-20000 теоретических тарелок), высокую степень разделения и селективность (R= 1,019,6; (#1,0)

5) Разработаны, методики количественного определения флавонов: апигенина, хризина, акацетина, байкалина апиина и малонилапиина в сырье и лекарственных препаратах, а также в сложных матриксах БАД и обогащенных продуктов.

6) Предел обнаружения методик составил около 1,5 мг/л. Предел количественного определения составил около 4,5 мг/л. Относительная погрешность составила от 1,1 % и не более 5,5 %.

7) С помощью разработанных методик было проанализировано около 90 образцов растительного сырья, экстрактов, лекарственных препаратов, БАД к пище и обогащенных продуктов, проходящих экспертизу в ГУ НИИ питания РАМН. Обнаруженное содержание позволило стандартизовать продукт, оценить его качества и уровень потребления биологически активных веществ. Использование разработанных методик позволили установить, что около 10 % проанализированных образцов либо не содержали предполагаемых индикаторных компонентов, либо содержали следовые количества, что указывает на фальсификацию или низкое качество продукта. Была показана целесообразность использования разработанных методик для включения в нормативную документацию на сырье, экстракты, лекарственные препараты, БАД к пище, содержащие прополис, шлемник байкальский и петрушку кудрявую.

Список литературы диссертационного исследования кандидат фармацевтических наук Кошечкина, Анна Сергеевна, 2007 год

1. Алексеева М.А., Эллер К.И., Арзамасцев А.П. Определение пренилированных флавоноидов хмеля и фитопрепаратов на его основе с помощью обращенно-фазной ВЭЖХ // Вопросы биологической медицинской и фармацевтической химии.- М.: 2004.- №3. С. 45-48,

2. Аналитическая химия. Проблемы и подходы // В 2-х томах. Пер. с англ. под ред. Р. Кельнера. М.: Мир, ООО «Издательство ACT», 2004

3. Барсков А. А. Лекарственные формы прополиса и методы их контроля // Традиции институтата. Казанский вететеренарный институт. 1980. - Т. 136. -С.5 2-55.

4. Вахонина Т. В., Душкова Е. С. Качество прополиса // Пчеловодство. -1975.-№ 1.-ИТ С. 42-43.

5. Власов A.M., Чукарина Е.В., Эллер К.И., Родионова Г.М. Определение флаволигнанов расторопши и фитопрепаратов на их основе с помощью обращенно-фазовой ВЭЖХ. // Материалы 9-го Международного конгресса Phytopharm. СПб., 2005. - С. 203-204.

6. ВФС 42- 25700-95 Мазь «Прополис» гомеопатическая- М.: МЗ РФ.-1995. -8 с.

7. ВФС 42-3485-99 Суппозитории ректальные «Апроксид» М.: МЗ РФ, 1999. - 6 с.

8. ВФС 42-1084-81. Прополис М.: МЗ РФ, 1981. - 6 с.

9. ВФС 42-1870-88 Фенольный гидрофильный препарат прополиса- М.: МЗ РФ, 1983.-7 с.

10. ВФС 42-2024-90 Фенольный гидрофобный препарат прополиса- М.: МЗ РФ, 1990. 7 с.

11. ВФС 42-2832-96 «Прополисное молочко» М.: МЗРФ, 1996. - 10 с.

12. Н.Галимов Ш:Н., Громенко Д.С. Влияние препарата «ПропоФлан» на фертильность эякулята при идиопатическом бесплодии// Новости фармации'и медицины. 1999, -№3, -С. 12-18

13. Галимов Ш.Н., Мухаметзянов Р.М. Коррекция биоэнергетических процессов: ключ к здоровью и долголетию//М.-2002. -42с.

14. Георгиевский В.П., Комисаренко Н.Ф., Дмитрук С.Е. Биологически активные вещества лекарственных растений. Новосибирск: Наука. Сиб. Отд-ние, 1990. -333 стр.

15. Гладышева В.А. Лечение прополисом. Серия «Панацея». Ростов-на-Дону: «Феникс» -2005. -32с.

16. ГОСТ СССР (РФ) 28886-90. Прополис. Технические условия М.: Изд-во стандартов.- 1991. 13 с.

17. Государственнаяь Фармакопея СССР XL издания; в. 1, 2. -М. Медицина. — 1987, 1990:

18. Государственная фармакопея» СССР: Вып. 2. Общие методы* анализа. Лекарственное растительное сырье / МЗ СССР1 11-е изд., - М-:: Медицина; 1989:-400с

19. Грилевски Р.Е. Участие свободных радикалов в преображениях эндотелиального простациклина и оксида азота// Ж. Новости фармации и медицины. 1997, -№1-2, -С.2-8-.

20. Ильин Н. И. К вопросу о прополисе // Пчеловодное дело. -1928.-№ 4.-С. 183-186.23 .Карабанов И.А. Флавоноиды в мире растений. Минск: «Ураджай». -1981. -80 с.

21. Кошечкина А.С., Эллер К.И., Власов A.M., Коваленко Д,Н. Оценка биологической ценности и подлинности прополиса как сырья, используемого в пищевых продуктах и биологически активных добавках к пище \\ Вопросы питания. Том 76, №2, 2007- С. 53-56.

22. Лавренова Г.В. Прополис целительные рецепты// СПб.: Издательский дом «Нева».- 2004. - 96 с.

23. Лекарственные растения (Растения-целители) /А.Ф. Гаммерман, Г.Н: Кадаев, М.Д. Шупинская, А.А. Яценко-Хмелевский. М'.: «Высшая школа». - 2-ое издание, 1975.

24. Лекарственные растения Государственной Фармакопеи. Фармакогнозия / Под редакцией проф. И.А. Самылиной, проф. В.А Северцева. М.: АНМИ; 2003. -534 с.

25. Лекарственные растения, содержащие фенольные соединения, (флавоноиды, антраценпроизводные, дубильные вещества)// Пермская государственная фармацевтическая-академия . -2004,- 140с.

26. ЗО.Лункер, М. Вторичный метаболизм у микроорганизмов, растений и животных.- М.: Мир, 1979.- 548с.

27. Методические указания» МУ 2.3.1.1915-04 «Рекомендуемые уровни потребления пищевых и- биологически активных веществ». -М:: Роспотребнадзор. -2004.321НД 42- 11338-00 Настойка прополиса- М.: МЗ РФ.- 2000: 6 с.

28. НД 42- 9327-98 Настойка прополиса- М:: МЗ'РФ.- 1998: 6 с

29. Орлов В.И., Аратсков А.А. Жидкостная*хроматография. Теоретические основы.// Дзержинск. 1997.-41 с.35е. Рудаков О.Б., Федоров С.В., Востров В.А., Спутник хроматографиста. Методы жидкостной хроматографии. Воронеж.: «Водолей». - 2004.-528с.

30. Руководство по методам контроля качества и безопасности биологически активных добавок к пище. Руководство Р 4.1.1672-03. Минздрав России. М'.: - 2004.

31. СанПиН 2.3.2.1078-01 "Гигиенические требования безопасности и пищевой ценности пищевых продуктов"

32. Современные аспекты изучения лекарственных растений / Куркин В.А.,

33. Запесочная Г.Г., Авдеева Е.В., Браславский^ В.Б., Сенцов М.Ф., Смольянова И.Б. М. - 1995. 151-157с.

34. Солдатенков. А.Т. и др. Основы органической химии лекарственных веществ. М.: Химия, 2001.- 188с.

35. Стыскин Е.Л., Ициксон-Л1Б., Брауде Е.В. Практическая высокоэффективная жидкостная хроматография. -М.:Химия, 1986. 312 с.

36. Стыскин E.JL, Ициксон Л.Б., Брауде Е.В. Практическая^ высокоэффективная жидкостная хроматография. М.:Химия, 1986.-312 с.

37. Суханов Б.П., Васильев А.В., Эллер К.И. и др. Состояние и перспективы развития1 законодательной- базы оборота биологически активных'добавок к пище в некоторых странах мира // Вопросы питания. -2005.-№6.

38. ФС 42- 2335-85 Экстракт прополиса густой- М.: МЗ РФ.- 1985.

39. ФС 42- 3736-99 Настойка прополиса- М.: МЗ РФ.- 1999. 6 с.

40. ФС 42-453191'Коршмдлемника байкальского- М.: МЗ РФ:- 1999. 5 с.

41. ФСП 42- 0367210301 Прополис мазь для наружного применения- М.: МЗ РФ.- 2001.-8 с.

42. ФСП 42-0068050900 Прополис мазь гомеопатическая- М.: МЗ РФ.-2000. -8 с.

43. ФСП 42-0082115900 Прополис ДНсуппозитории ректальные гомеопатические М.: МЗ РФ.- 2000. - 6 с.

44. Эллер К.И. Хроматография высокого разрешения.- М.: Микотоксины.-1989- С.93-110

45. Эллер К.И., Балусова А.С. Идентификация и количественное определение индикаторных полифенольных соединений прополиса // Материалы III межрегиональной научно-практической конференции «Питание здорового и больного человека».- С-Пб.: 2005.- С. 221-222

46. Эллер К.И., Балусова А.С., Власов A.M., Комарова E.JL Оценка подлинности растительных экстрактов как сырья для БАД Scutellaria baicalensis Georgi Шлемник байкальский. // «Рынок БАД». - 2006. -№1(27) февраль. - С 38-39.

47. Abdel-Wahhab A., Abbes S., Abbes J. Parsley oil protects against Zearalenone-induced alteration in reproductive function in male mice // Toxicology Letters, Vol. 164,, -2006, P.211-266

48. Roger W., Lucy F., Andrew D. Analytical methods for food additives// Woodhead Publishing Ltd and CRC Press LLC. 2004.-322p.

49. Bankova V., Popova M., Bogdanov S., Sabatini A.G. Chemical composition of European propolis: expected and unexpected results// Z. Naturforsch. -2002-. Vol. 123. P. 530-533

50. Baranowska I., Dominika R. Application of derivative spectrophotometry to determination of flavonoid mixtures //Talanta. 2001. - № 55. - p. 209-212.

51. Benkovic V., Horvat A., Brozovic G. Enhanced antitumor activity of irinotecan combined with propolis and its polyphenolic compounds on Ehrlich ascites tumor in mice // Biomedicine & Pharmacotherapy, Vol. 61, Issue 5, -2007, P. 292-297

52. Bonvehi J. S., Coll F. V. Phenolic composition of propolis from China and from South America// Z. Naturforsch. -1994. Vol. 193, P. 712 - 718.

53. Bonvehi J.S, Coll F. V., Jorda R. E. The composition, active components and bacteriostatic activity of propolis in dietetics.// J. A. Oil Chem. Soc.-1994. -Vol. 71, P. 529 532.

54. British Pharmacopoeia 2004

55. Burdock G. A. (1998). Review of the biological properties and toxicity of bee propolis// Food&Chem. Toxicol. -1998. -Vol. 36,-P. 347 363.

56. Chia-Chi C., Ming-Hua Y., Hwei-Mey W. Estimation of Total Flavonoid Content in Propolis by Two Complementary Colorimetric Methods// Journal of Food and Drug Analysis, -2002.-Vol.l0,-No. 3. -P. 178-182

57. Covey T.R., Lee E.D., Bruins A.P. and Henion J.D.: Liquid chromatography and mass spectrometry // Anal. Chem. -1986. № 58.- P. 1451-1461.

58. Ermer J., Miller В., Method Validation in Pharmaceutical Analysis: WILEY-VCH Verlag GmbH<& Co. KGaA, Weinheim. 2005.

59. Fourth Edition of the European Pharmacopoeia (2001)

60. Gao Z, Huang K, Yang X, Xu H. Free radical scavenging and antioxidant activities of flavonoids extracted from the radix of Scutellaria baicalensis Georgi// Biochim Biophys Acta. -1999. -Nov 16;-1472(3)- P.643-50.

61. Gornicki K.and Kaleta A. Modelling convection drying of blanched parsley root slices // Biosystems Engineering, -Vol. 97, -Iss. 1, -2007, P. 51-59

62. Greenaway W., Scaysbrook Т., Whatley F. R. The composition and plant origin of propolis // Report of work at Oxford. Bee world. -1990. -№71, -P. 107-118.

63. Guney M., Oral В., Karahan N. Protective effect of caffeic acid phenethyl ester (CAPE) on fluoride-induced oxidative stress and apoptosis in rat endometrium // Environmental Toxicology and Pharmacology, -2007.-Vol. 24, -Issue 2, P. 86-91

64. Ivan Kosalec, Marina Bakmaz, Stejepan Pepeljnjak, Acta Pharm, Analysis of propolis from the continental and Adreatic regions of Croatia// Journal of Ethnopharmacology. -2003.-No.53.- P. 275-285

65. Kim HM, Moon EJ, Li E, Kim KM, Nam SY, Chung CK. The nitric oxide-producing activities of Scutellaria baicalensis Georgi// Toxicology. -1999. -№ 15. -P.109-15.

66. Koru O., Toksoy F. In vitro antimicrobial activity of propolis samples from different geographical origins against certain oral pathogens // Anaerobe, -June-August 2007. -Vol. 13, -Issues 3-4. P. 140-145

67. Kubo M, Matsuda H, Tani T, Arichi S, Kimura Y, Okuda H. Anti-thrombic actions of various flavonoids from Scutellariae radix.// Chem Pharm Bull (Tokyo). -1985 Jun- 33(6) P.2411-5.

68. Leo M.L. Nollet. Food analysis by HPLC: Marcell decer Inc. // New york. -second edition, -2000. 1049 p.

69. Li Z. Progress in pharmacologic research on Scutellaria baicalensis Georgi //Chung Hsi I Chieh Ho Tsa Chih. -1989 -9(11) -p.698-700.

70. Liang, H.-R., Siren, H. Characterization of flavonoids in extracts from four species of Epimedium by micellar electrokinetic capillary chromatography with diode-array detection // J. Chromatogr. Sci. 1997. -№ 35(3). - p. 117125.

71. Luthria, D.L.; Mukhopadhyay, S.; Kwansa, A. A systematic approach for extraction of phenolic compounds using parsley (Petroselinum crispum) flakes // J. Chromatogr. Sci. 1987. -№ 25(2). - p. 108-115.

72. Marcucci M. C. Propolis: chemical composition, biological properties and therapeutical activity//Apidologie. -1995. -26, p.83 99.86.

73. Markham, K. R., Mitchell, K. A., Wilkins, A. L., Daldy, J. A. and Lu, Y. HPLC and GC-MS identification of the major organic constituents in New Zealand propolis //Phytochemistry -1996.-42 -p.205-211.

74. Martos, I., Cossentini, M., Ferreres, F. and Tomas-Barberan, F. A. Flavonoid composition of Tunisian honeys and propolis.// J. Agric. Food.Chem. -1997. 45: P.2824-2829.

75. Mira L., Fernandez M.T., Santos M., Rocha R., Florencio M.N., Jennings K.R. Interaction of flavonoids with iron andcooper ions: a mechanism for their antioxidant activiti// Free Radic. Res. -2002 Nov; 36 (11) -p.l 199-208

76. Nagy M., Grancai D. Colorimetric determination of flavanones in propolis.// Pharmazie -1996. -51, P. 100-101.

77. Niessen W.M.A. Advances in instrumentation in liquid chromatography-mass spectrometry and related liquid introduction techniques // J. Chromatogr. A. -1998.-№794(1-2).-p. 407-435

78. Pert C., Lee Y., Wu S. Protective effect of baicalein against endotoxic shock in rats in vivo and in vitro // Biochemical Pharmacology, Volume 73, Issue 6, 15 March 2007, P. 793-804

79. Park HJ, Lee YW, Park HH, Lee YS, Kwon IB, Yu JH. Induction of quinone reductase by a methanol extract of Scutellaria baicalensis Georgi and its flavonoids in murine Hepa lclc7 cells // Eur J Cancer Prev. -1998. Dec;7(6) -p.465-71.

80. Park Young Kun, Ikegaki Masaharu Preparation of water and ethanolic extracts of Propolis and evaluation of the preparations // 2nd Intrnetional Electronic Conference on Synthetic Organic Chemistry, 1998

81. Park, Y. К., Koo, M. H., Ikegaki, M. and Contado, J. L. 1997. Comparison of the flavonoid aglycone contents of Apis mellifera propolis from various regions of Brazil //. Arq. Biol. Tecnol. -1997.- 40 P.97-106.

82. Petry R.D., Gonzalez Ortega G., Silva W. B. Flavonoid content assay: influence of the reagent concentration and reaction time on spectrophotometric behavior of the aluminium chloride-flavonoid complex.// Pharmazie -2001. -56, p.465 470

83. Phytochemical dictionary. A handbook of bioactive compaunds from plants./ Jeffrey B. Harborn, Herbert В., Gerard P. Philadelphia, USA. -1999.- 1380 p.

84. Popravko S.A. Chemical composition of propolis, its origin and s A Remarkable Hive Product// PROPOLIS, Apimondia Publ. House. Bucharest -1975- P.13-23

85. Rosa C., Sapata M., Guerra M.M. Chemical and sensory characteristics and microbiological safety of fresh finely chopped parsley packed in modified atmosphere//Food Control, Volume 18, Issue 8, August 2007, P. 1008-1012

86. Seitz, U., Bonn, G., Oefner P. Isotachophoretic analysis of flavonoids and phenolcarboxylic acids of relevance to phytopharmaceutical industry// J. Chromatogr. 1991. -№ 559(1-2). - p. 499-504.

87. Serra Bonvehi, J., Ventura Coll, R and Escola Jorda, R. 1994. The composition, active components and bacterio-static activity of propolis in dietetics. // J. Am. Oil Chem. Soc. 71- 2005. №12(2) -P.529-532.

88. Sforcin J.M. Propolis and the immune system: a review//Joumal of Ethnopharmacology, Volume 113, Issue 1,15 August 2007, P. 1-14

89. Shao ZH, Li CQ, Vanden Hoek TL, Becker LB, Schumacker PT, Wu J A, Attele AS, Yuan CS. Extract from Scutellaria baicalensis Georgi Georgi attenuates oxidant stress in cardiomyocytes. // J Mol Cell Cardiol. -1999*Oct;-31(10)-P. 89-95.

90. Sokol-L^towska A., Oszmianski J., Wojdylo A. Antioxidant activity of the phenolic compounds of hawthorn, pine and skullcap // Food Chemistry, Volume 103, Issue 3, 2007, P.853-859

91. The Japanese Pharmacopoeia,Fourteenth Edition

92. United States Parmacopoea 29

93. Van Sumere C.F., P.J. Lea The Biochemistry of plant phenolics // Annual proceedings of the phytochemical society of Europe. 1985. - Volum 25 - p.212-131

94. Vennat, В., Argouet-Grand, A., Gross, D. and Pourrat, A. Qualitative and quantitative analysis of flavonoids and identification of phenolic acids from a propolis extract. // J. Pharmacie Belgique -1995. -50 P.438-444.

95. Wang S., Fu M., Wang M. Separation mechanism and determination of flavanones with capillary electrophoresis and high-performance liquid chromatography // Journal of Chromatography A, -Vol. 1164, Issues 1-2, 14 September 2007, P. 306-312

96. Waterman P.G., Mole S. Analysis of Phenolic Plant Metabolites I I Blackwell Scientific Publications, Cambridge, MA. -1994, -347p.

97. Woisky, R. and Salatino, A. Analysis of propolis: some parameters and procedures for chemical quality control // J. Apic. -1998. -Res. 37, P.99-105.

98. Xiao-tian, Liang Wei-shuo Fang Medicinal chemistry of bioactive natural products // Chinese Academy of Medical Sciences Beijing. China -2006. -P. 112-123

99. Zawiyah S., Che Man Y.B., Nazimah S. Determination of organochlorine and pyrethroid pesticides in fruit and vegetables using SAX/PSA clean-up column //Food Chemistry, -Vol. 102, -Issue 1, -2007, -P. 98-103