Разработка и применение гибридизационных и ПЦР технологий для молекулярного анализа геномов микроорганизмов тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.15, доктор биологических наук Щербо, Сергей Николаевич

• Щербо, Сергей Николаевич
• доктор биологических наук
• 2005

Оглавление диссертации доктор биологических наук Щербо, Сергей Николаевич

Список сокращений.

ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Методы гибридизационного анализа нуклеиновых кислот.

1.2. Способы модификации ДНК различными гаптенами для проведения нерадиоизотопного гибридизационного анализа нуклеиновых кислот.

1.2.1 ДНК-зонды меченные биотином и дигоксигенином.

1.2.2. Фотомодифицирующие реагенты в гибридизационном анализе нуклеиновых кислот.

1.2.3. Люминесцентные метки для введения в нуклеиновые кислоты.

1.3. Применение нерадиоиозтопного гибридизационного анализа для обнаружения и идентификации патогенных микроорганизмов и вирусов.

1.4. Способы пробоподготовки и условия проведения ПЦР реакции.

1.4.1. Пробоподготовка.

1.4.2. Оптимизация условий проведения ПЦР-реакции.

1.4.3. Подбор праймеров.

1.4.4.Термостабильная полимераза, дезоксинуклеотидтрифосфаты, компоненты ПЦР буфера.

1.5. Разработка наборов реагентов для молекулярного анализа

Щ генома методом ПЦР.

1.5.1. Хламидия трахоматис.

1.5.2. Микоплазма гоминис и микоплазма гениталиум.

1.5.3. Уреаплазма уреалитикум.

1.5.4. Одновременное выявление некоторых микроорганизмов и вирусов методом ПЦР с использованием мультипраймерных наборов реагентов.

1.6. Возможности метода ПЦР и других диагностических подходов к анализу клиниических образцов.

1.6.1. Анализ герпесвирусов.

1.6.2. Гарднерелла вагиналис.

1.6.3 Трихомонада вагиналис.

1.6.4 Грибы рода кандида и трихофитон.

1.7. Разнообразие методов и актуальность унификации подходов молекулярного анализа геномов.

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

2.1. Методы нерадиоизотопного гибридизационного анализа

2.2. Метод полимеразной цепной реакции. 128 2.2.1. Пробоподготовка клинических образцов. 128 2.2.1.1. Лизис клинических образцов.

2.2.1.2. Ускореная пробоподготовка.

2.2.1.3. Муколитический реагент.

2.2.1.4. Культивирование и выделение грибов.

2.2.2. Получение положительных контрольных образцов для набора реагентов для выявления кандида альбиканс.

2.2.3. Определение нуклеотидных последовательностей ПЦР-проду-ктов, полученных на клинических образцах М. genitalium, Т. vaginalis.

2.2.4. Инструкция по применению набора реагентов для обнаружения ДНК микроорганизмов, вирусов и грибов методом ПНР. 140 2.3. Клинико-лабораторные методы обследования на присутствие

G. vaginalis и Lactobacillus spp.

Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ.

3.1. Разработка и оптимизация способов модификации ДНК биотином, производными платины, красителями, для проведения множественного гибридизационного анализа нуклеиновых кислот. 149 3.1.1 Модификация ДНК дигидразидом янтарной кислоты для получения гибридизационных зондов.

3.1.2. Получение полимерного фотобиотинилирующего реагента (фотобиотина) и его использование в гибридизационном анализе нуклеиновых кислот.

3.1.3. Модификация ДНК комплексными соединениями платины для получения гибридизационных зондов.

3.1.3.1 .ТДДП-новая метка для ДНК-зондов.

3.1.3.2,ЦДДП и диенП - новые гаптены в нерадиоизотопном гибридизационном анализе нуклеиновых кислот.

3.1.4. Множественный гибридизационный анализ с одновременным использованием нескольких ДНК-зондов, несущих различные нерадиоизотопные метки.

3.1.5. Разработка эффективных и чувствительных методов детекции нерадиоизотопных гибридизационных ДНК-зондов с использованием коллоидных частиц и полимерных маркеров.

3.1.6. Оптимизация свойств полиакролеиновых латексов для гибридизационного анализа.

3.1.6.1. Получение окрашенных полиакролеиновых латексов для нерадиоизотопного гибридизационного анализа.

3.1.6.2. Оптимизация спектрально-люминесцентных характеристик окрашенных полиакролеиновых латексов.

3.1.6.3. Получение конъюгата полиакролеиновых латексов со стрептавидином.

3.1.6.4. Выбор биотинилированных полинуклеотидных зондов для латексного гибридизационного анализа.

3.1.7. Нерадиоизотопный гибридизационный анализ нуклеиновых кислот с использованием окрашенных латексов. 201 Выводы раздела 3.1. 210 3.2. Разработка и совершенствование способов пробоподготовки, условий проведения ПЦР и мультипраймерной ПЦР,

3.2.1. Пробоподготовка.

3.2.1.1. Лизис клинических образцов и ускоренная пробоподготовка.

3.2.1.2. Лиофилизованный набор для пробоподготовки.

3.2.1.3. Пробоподготовка при работе с мокротой

3.2.1.4. Разработка системы внутреннего контроля для оценки возможности ингибирования полимеразной цепной реакции.

3.2.2. Разработка на основе анализа геномов наборов реагентов для выявления возбудителей некоторых инфекций передаваемых половым путем.

3.2.2.1 .Хламидия трахоматис.

3.2.2.2. Микоплазма гоминис и микоплазма гениталиум.

3.2.2.3. Уреаплазма уреалитикум.

3.2.3. Особенности подбора оптимальных условий для мультипраймерной ПЦР.

3.2.4. Разработка на основе анализа геномов мультипраймерных наборов реагентов для анализа некоторых урогенитальных инфекций.

3.2.4.1. Типирование вируса папилломы человека.

3.2.4.2. Герпесвирусы.

3.2.4.3. Хламидия трахоматис,микоплазмы и уреаплазмы. 252 Выводы раздела 3.2.

3.3. Сравнительное изучение метода ПЦР и других диагностических подходов к анализу различных биологических образцов.

3.3.1. Оценка и сравнение эффективности методов гибридизационного и ПЦР-анализа для выявления в клинических образцах некоторых возбудителей ИППП.

3.3.2. Молекулярный анализ геномов некоторых герпесвирусов.

3.3.2.1. Вирус простого герпеса.

3.3.2.2.Цитомегаловирус.

3.3.3. Разработка оптимальных схем применения молекулярно-генетических методов в клинической лабораторной диагностике.

3.3.3.1. Гарднерелла вагиналис, лактобациллы.

3.3.3.2. Трихомонас вагиналис.

3.3.4. Разработка на основе анализа геномов наборов реагентов для анализа ДНК некоторых видов грибов методом ПЦР.

3.3.4.1. Кандида альбиканс.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Разработка и применение гибридизационных и ПЦР технологий для молекулярного анализа геномов микроорганизмов»

В ряду современных генетических технологий особое место занимают методы генодиагностики, среди которых выделяются гибридизационный анализ (ГА) нуклеиновых кислот (НК) и амплификационные методы, в частности метод полимеразной цепной реакции (ПЦР) [1-13]. Фундаментальные принципы молекулярной биологии: существование комплементарных взаимодействий между молекулами НК создают основу для разработки гибридизационных и ПЦР-технологий (в том числе множественного ГА и мультипраймерной ПЦР) для молекулярного анализа геномов (МАГ). Выяснение закономерностей геномной организации микроорганизмов ф необходимо, как для понимания природы и течения инфекционных процессов, так и создания лекарств нового поколения, действия которых направлено на специфические, определяющие патогенность мишени. В мире отмечается не только рост урогенитальных [хламидиоза, мико- и уреаплазмозов, трихомониаза, вируса папилломы человека (ВПЧ)] и герпесвирусных инфекций, микозов, и других, но и возникновение новых, ранее не известных (например, атипичная пневмония), что требует совершенствования подходов для быстрой разработки наборов реактивов для МАГ, прямого выявления возбудителя и правильной постановки диагноза.

Широко применяемые в настоящее время диагностические системы основаны, как правило на антигенных свойствах инфекционных агентов. ф Вместе с тем имеются различные виды, серотипы, а также некультивируемые формы микроорганизмов, возбудителей инфекционных заболеваний челове-Ф ка, быстро и качественно разработать диагностические подходы для которых, основываясь на антигенных свойствах затруднительно или невозможно. Высокоэффективные современные генетические технологии, используя методы МАГ, позволяют решать указанные задачи. Так, безопасные в работе нерадиоизотопные молекулярно-генетические методы детекции вытесняют все в большем числе случаев в медицинской практике радиоизотопные. В различных модификациях генодиагностики, связанных с применением биочипов, используются нерадиоизотопномеченные ДНК-зонды.

В связи с развитием методов ГА и амплификации НК актуальным ^ является разработка и оптимизация способов модификации ДНК различными гаптенами (биотином, производными платины, красителями и др.), используя химические и фотохимические реакции и эффективных методов детекции ги-бридизационных ДНК-зондов, сравнимых по чувствительности с радиоизотопными, исследование спектрально-люминесцентных свойств и механизмов образования межмолекулярных ассоциатов коллоидных частиц красителей, с целью наиболее эффективного применения в нерадиоизотопном гибридизационном анализе (НГА) нуклеиновых кислот.

Для успешного применения и правильной интерпретации результатов молекулярно-генетических методов в клинической лабораторной диагностике решающее значение имеет разработка оптимальных схем анализа • клинического материала. В частности сравнительная оценка эффективности использования молекулярно-генетических (НГА, ПЦР) и традиционных ме-^ тодов анализа (бактериологического анализа - БА, иммуноферментного анализа - ИФА и др.), изучение наиболее рациональных подходов к пробопод-готовке для различных клинических образцов, содержащих разнообразные микроорганизмы и вирусы, а также разработка наборов реактивов имеющих клинически значимую чувствительность при высокой специфичности. Одним из перспективных подходов могут стать сухие (лиофилизированные) наборы реагентов для выделения, амплификации и детекции НК.

Данные об эффективности и области использования методов, возможностях получения с их помощью взаимодополняющей информации ^ для каждого микроорганизма весьма разноречивы. В связи с этим важной задачей является выяснение места и роли молекулярно-генетических технологий в общей системе клинической лабораторной диагностики. Чрезвычайно важно определить в каждом конкретном случае клинически значимый уровень чувствительности обнаружения того или иного микроорганизма: в одних случаях высокая чувствительность метода ПЦР крайне важна, а в других в ней нет необходимости (условно-патогенные микроорганизмы). Необходимо учитывать возможные диагностические ошибки связанные с ложноположительными и ложноотрицательными результатами, что можно избежать применением внутреннего и внешнего контроля.

Существенным преимуществом молекулярно-генетических методов # анализа является возможность одновременной и независимой детекции различных нерадиоизотопных гибридизационных меток или проведение мультипраймерной ПЦР, при которой используется одновременно несколько пар праймеров. В случае анализа образцов биологического материала содержащих несколько возбудителей инфекционных заболеваний человека или решения других задач, в частности, скрининга геномных банков, применение таких подходов позволило бы значительно ускорить получение результатов.

Большие возможности открывает применение в молекулярной клинической диагностике амплификационных методов и прежде всего различных модификаций ПЦР, которая поднимает генодиагностику на принципиально иной уровень - уровень высокочувствительного и высокоспецифичного определения ДНК или РНК, что позволяет провести прямое обнаружение инфекционного агента или генетической мутации. Разнообразны применения метода в различных областях человеческой деятельности: в научных исследованиях [1, 2, 13], медицине [3-9], ветеринарии [10], контроле за качеством объектов окружающей среды [11] и продуктов питания (в частности генетически модифицированных продуктов) [12], криминалистике (идентификация личности и установление отцовства). Особенно эффективным оказалось применение метода в медицине и в частности клинической лабораторной диагностике, медико-генетических исследованиях, гинекологии, дерматовенерологии, микологии. [3-9].

Разнообразие амплификационных подходов в генодиагностике [6, 1318] делает актуальным задачу исследования оптимального состава компонентов наборов реагентов для МАГ микроорганизмов, условий проведения ПЦР реакции и разработки унифицированного подхода к способу формирования набора для МАГ с целью обеспечения возможности сопоставления различных молекулярно-генетических методов для повышения доказательности принятия решения о морфофункциональном состоянии генома, определения места получаемых данных во всей совокупности информации о клеточном, органном, организменном уровнях организации и принятия клиницистом адекватного решения по диагностике и терапии.

Перечисленные проблемы обуславливают цели и задачи настоящего исследования.

Целью исследования явилась разработка, создание, внедрение и повышение информативности методов множественного нерадиоизотопного гибридизационного анализа и мультипраймерной ПЦР для молекулярного анализа геномов микроорганизмов.

1. Создание способов модификации ДНК различными гаптенами, используя химические и фотохимические реакции, исследование спектрально-люминесцентных и фотохимических свойств предложенных биотинилирующих агентов, с целью повышения чувствительности ДНК-зондов в нерадиоизотопном гибридизационном анализе.

2. Разработка эффективных нерадиоизотопных методов детекции гибридизационных ДНК-зондов не уступающих: : по чувствительности радиоизотопным, исследование механизмов образования межмолекулярных ассоциатов и коллоидных частиц красителей, с целью внедрения указанных подходов в диагностическую практику.

3. Создание новых теоретических и практических подходов в использовании методов множественного нерадиоизотопного гибридизационного анализа и мультипраймерной ПЦР для молекулярного анализа геномов микроорганизмов.

4. Внедрение оптимальных схем применения молекулярно-генети-ческих методов на основе сравнительной оценки эффективности нерадиоизотопного гибридизационного анализа, ПЦР и других методов в клинической лабораторной диагностике. Разработка новых приемов пробоподготовки различных клинических образцов, содержащих грибы, микроорганизмы, бактерии, вирусы.

5. Исследование оптимального состава компонентов, унификация и стандартизация подхода к способу формирования наборов для оценки структурно-функционального состояния геномов микроорганизмов.

Заключение диссертации по теме «Генетика», Щербо, Сергей Николаевич

ВЫВОДЫ ДИССЕРТАЦИИ.

1. Созданы новые способы модификации ДНК дигидразидом янтарной кислоты и синтезирован новый биотинилирующий реагент - полифотобиотин для эффективного использования в нерадиоизотопном гибридизационном анализе нуклеиновых кислот.

2. Впервые разработан новый, быстрый и простой в исполнении способ нерадиоизотопного гибридизационного анализа нуклеиновых кислот, основанный на применении флуоресцентных латексных частиц для детекции гибридизационного сигнала. Метод сопоставим по чувствительности широко применяющимся методам гибридизационного анализа, использующим ферментные конъюгаты.

3. На основании теоретических и экспериментальных разработок созданы основы для практического использования методов множественного нерадиоизотопного гибридизационного анализа нуклеиновых кислот и мультипраймерной ПЦР. Разработаны и клинически апробированы ряд молекулярно-генетических систем для диагностики нескольких микроорганизмов, грибов и вирусов одновременно.

4. На примере нерадиоизотопного гибридизационного, ПЦР и других видов анализов показано место молекулярно-генетических методов в системе клинической лабораторной диагностики, проведено сравнение преимуществ, ограничений и перспективность разработанных подходов к анализу геномов микроорганизмов. Разработаны новые приемы подготовки проб биологического материала и на основе анализа геномов созданы наборы реактивов для выявления ДНК различных микроорганизмов, вирусов, грибов.

5. На основе анализа нуклеотидных последовательностей исследован оптимальный состав и реализован модульный принцип проектирования и создания наборов для молекулярного анализа геномов, как совокупности компонент конструктора, допускающих их относительно независимую разработку и унификацию.

6. Впервые разработана и внедрена новая информационная технология молекулярного анализа геномов на основе построения биотехнологической структуры, повышающая надежность и доказательность принимаемых решений о морфофункциональном состоянии генома.

342

Список литературы диссертационного исследования доктор биологических наук Щербо, Сергей Николаевич, 2005 год

1. Саики Р., Гиленстен У., Эрлих Г. Полимеразная цепная реакция. В кн. Анализ генома. Методы. Под ред. К.Дейвис. М. Мир. 1990. 176-190.

2. Льюин Б. Гены. Под ред. Георгиева Г.П. 1987. М. Мир. 544 с.

3. Введение в молекулярную медицину. Под ред. Пальцева М.А. 2004. М, Медицина, 496 с.

4. Иткес А.В. Полимерзная цепная реакция. 1999. М. Альтекс. 22 с.

5. Горбунова В.Н., Баранов B.C. Введение в молекулярную диагностику и генотерапию наследственных заболеваний. 1997, СПб., Специальная литература. 287 с.

6. Дмитриев Г.А. Лабораторная диагностика бактериальных урогенитальных инфекций, 2003. М., Медицинская книга, Н. Новгород: Издательство НГМА, 336 с.

7. Адаскевич В.П. Заболевания, передаваемые половым путем. 1997. Витебск. Издательство витебского медицинского института, 310 с.

8. Lo А. С., Feldman S.R. Polymerase chain reaction: basic concepts and ф clinical applications in dermatology//J. Am. Acad. Dermatol.-1994.-30.-2.-l.p.250.260. Review.

9. Carnegie P. R. Quality control in the food industries with DNA ® technologies//Australas Biotechnol.-l994.-4.-3.-p.46-149. Review.

10. Патрушев Л.И. Искусственные генетические системы.т.1 Генная и белковая инженерия. Под ред. Мирошникова А.И.-2004.- М. Наука. 2004. 526 с.

11. De Vega М., Blanco L., Salas M. Processive proofreading and the spatial relationship between polymerase and exonuclease active sites of bacteriophage phi29 DNA polymerase// J. Mol. Biol.-1999.-292.-1.p. 39-51.

12. Little M.C., Andrews J., Moore R. et. al. Strand displacement amplification and homogeneous real-time detection incorporated in a second-generation DNA probe system, BDProbeTecET//Clin. Chem.-1999.-45.-6.-Pt.l, p. 777-784.

13. Dean F.B., Neison J.R., Giesier T.L., Lasken R.S. Rapid amplification of plasmid and phage DNA using Phi 29 DNA polymerase and multiplyprimed rolling circle amplification//Genome Res.- 2001.-11.- 6.-p. 1095-1099.

14. Notomi Т., Okayama H., Masubuchi H. et. al. Loop-mediated isothemal amplification of DNA//Nucleic Acids Res.-2000.-28.-12.-e63-7p.

15. Малеев Г.А. Лигазная цепная реакция. Теория, практическое применение, перспективы//Вестник РАМН.-2005.-2.-С.40-44.

16. Kessler С. Non-radioactive analysis of biomolecules//J. Biotechnol. -1994.- 30.-35. 2-3.- p.165-189. Review.

17. Matthews J.A., Batki A., Hynds L., Kricka L. J. Enhanced chemiluminescent method for the detection of DNA dot-hybridization assay. //Anal. Biochem.-1985.- p.205-209.

18. Dahlen P. Detection of biotinylated DNA probes by using Eu 3+- labeled streptavidin and time-resolved fluorometry//Anal. Biochem.-1987.-164.-p. 78-83.

19. Syvanen A-C., Tchen P., Ranki M., Soderlund M. Time-resolved fluorimetry: a sensitive method to quantitation of DNA-hybrids//Nucl. Acids. Rrs.-1986.-14.-p.1017-1028.

20. Forster A. C., Mclnnes I. L., Scingle D. C., Symons R. H. Nonradioactive hybidization probe prepared by chemical labeling of DNA and RNA with a novel reagent, photobiotin//Nucl. Acids Res.-1985.-V. 13.-№ 2.-p. 745-761.

21. Золотарев Ф. H. Голубев Д.В., Петров H.A. Метод дот-гибридизации в вирусологии//Успехи биологии.-1989.-108.-с. 375-285.

22. Barron С. An assay for quantitative nucleic acid hybridization on membrane filtrs//Anal. Biochem.-1989.-182-p.280-283.

23. Gerhard D. S., Kawasaki E.S., Barncroft F.C., Szabo P. Localization of unique gene by direct hybridization in situ//Proc. Natl. Acad. Sci. USA.-1981.-78.-6.-p. 3755-3759.

24. Musiani M., Zerbini M., Gibellini D., Venturoli S., Gentilomi G., Gallinella G., La Placa M. Viral diagnosis using hybridization assays with digoxigenin labeled probes//Clin. Chim. Acta.-1994.-226.- 2.- p. 237-245.

25. Hopman A. H. N., Wiegant J., Tesser G. I., Van Duijn P. A nonradioactive in situ hybridization method based on mercurated nucleic acid probes and sulfhydryl-haptenligands//Nucleic Acids Res.-1986.-14.-p. 6471 6488.

26. Landegent J.E., Jansen W. N., Baan R.A., Hoeijmakers J. H. J., Van der Plorg M. 2-Acetylaminofluorene-modified probes for the indirect hybridocytochemical detection of specific nucleic acid sequences//Exp. Cell Res.-1984.-153.-p.61-72.

27. Matthews J. A., Kricka L.J. Analytical strategies for the use of DNA probes//Anal. Biochem.-1988.-169.-p. 1-25.

28. Singer R. H., Lawrence J. В., Rashtchian R. In: In situ hybridization. Applications to neurobiology (ed. K.L. Valentino, J.H. Eberwine, J.D. Barchas) 1987.pp. 71-96, Oxford University Press, Oxford.

29. Rando R.F. Nucleic acid hybridization as a diagnostic tool for the detection of human papillomaviruses//Adv. Exp. Med. Biol.-1990.-V. 263.- p. 89-109.

30. Nakagami S., Matsunaga H., Miyoshy K., Yamane A. Nonradioactive detection of nucleic acid by the universal probe system//Analyt. Biochem.-1991.-v.192. p. 11-16.

31. Турчинский M. Ф., Айнбиндер E. И., Свердлов E. Д. Множественная гибридизация в анализе геномов. 1. Реакция диаминов и бисульфита с цитозином для введения в ДНК нерадиоактивных меток//Молекулярная биология.-1988.-т. 22.-№ б.-c.l545-1553.

32. Shapiro R., DiFate V., Welcher М. J. Deamination of cytosine derivatives by bisulfite, mechanism of reaction//.!. Amer. Chem. Soc.-1974.-v. 96.-№ 3.-p. 906-912.

33. Rothenberg J.M. Wilchek M. p-diazobenzoyl-biocitin: a new biotinilating reagent for DNA//Nucl. Acids Res.-1988.-v. 16.-№4.-p. 3450-3456.

34. Takahashi Т., Arakawa H. A new biotinilating system for DNA using biotin aminocaproyl hydraside and glutaraldehyde//Nucl. Acids Res.-1989.-v. 17.-№12.-p. 50-65.

35. Vincent Ch. Tehen P., Cochen-Solal M., Kourilsky Ph. Synthesis of 8-SS-4-dinitrophenyl-2-6-aminoadenosine 5 triphosphate: biological properties and potential uses// Nucl. Acids Res.-1982.-v. 177.-p. 392-395.

36. Fuchs A., Lefevre J.F., Pouyet J., Daune M.P. Comparative orientati-on of the fluoren residue in native DNA modified by N-acetoxy-N-2-acetylami-nofluorene and two halogenoderivatives//Biochem.-1976.-v.l5,-p. 3347-3351.

37. Урываев JI.B., Русавская E.A., Сигнатулина H.M., и др. Выявление РНК вируса гриппа А методом молекулярной гибридизации нуклеиновых кислот с использованием биотинилированных зондов// Вопросы вирусологии.-1990.-№6.-с. 454-465.

38. Вейко Н.Н., Карпухин А.В., Салимов А.Г., Немцова М.В., Спитковский Д.М. Биотинилирование ДНК с использованием фотоактивиру-емого реагента 1Ч-(4-азидо-2-нитробензоил)-1,7-диаминогептана //Биотехнология." 1989.-5.- 4.-С.414-419.

39. Dattagupta N., Rae Р.М.М., Huguenel Е. D., Carlson E., Lyga A., Shapiro J. A., Albarella J. P. Rapid identification of microorganisms by nucleic acid hybridization after labeling the test sample//Anal. Biochem.-1989.- 177.-p. 85-89.

40. Levenson C, Watson R, Sheldon E.L. Biotinylated psoralen derivative for labeling nucleic acid hybridization probes//Methods Enzymol.-1990.-184.-p.577' 583.

41. Weeks I., Campbell A.K., Woodhead J.S. Two-site immunochemilu-minometric assay for humanfetoerotein//Clin. Chem.-1983.-№ 29.- p. 1480-1483.

42. Tan Т.Н. A nonradioactive screening method for cloning genes encoding ^ sequence-specific DNA binding proteins//Analyt. Biochem.-1991.- 192.-p. 17-22.

43. Creasey A., Anigo L.D., Dunne T.S., Kissenger C. Application of novel chemiluminescence-based DNA detection method to single-vector and multiplex DNAsequencing//Biotechniques.-1991.-v.ll.-№ l.-p. 102-109.

44. Киселев М.Ф., Щербо C.H., Леонов O.H., Крюков Л.Н. Использование галоидопроизводных дикетонов в люминесцентном иммуноанализе с временным разрешением//Журнал прикладной спектроскопии.-1991.-т. 54.-№ 5.-е.784-787.

45. Hurskainen P., Dahlen P., Ylikoski J., Kwiatkowski М., Siitari Н., # Lovgren Т. Preparation of europium-labelled DNA probes and their properties//

46. Nucl. Acid. Res.-1991.-v. 19.-№ 5.-p. 1057-1061.

47. Балакин К. В. Новые флуоресцентные ДНК-зонды: синтез и использование для детекции гибридизации в растворе. 1998. Дисс. к.х.н. М.

48. Прудников Д. Ю. Химические методы флуоресцентного мечения ДНК и РНК. Гибридизация флуоресцентных проб на микроматрице. 1997. Дисс. k.x.h.JM.

49. Островерхова Н.В., Назаренко С.А., Черемных А.Д. Сравнительная геномная гибридизация как метод оценки геномного дисбалансаУ/Генетика.-2002.-Т. 38.-№ 2.-С.149-160.

50. Kallioniemi A., Kallioniemi O.-P., Sudar D. at al. Comperative genomic hybridization for molecular cytogenetic analysis of solid tumors// Science.-1992.-v.258.-p. 818-821.

51. Thiry M., Thritu-Blaise L. In situ hybridization at the electron microscope level: an improved method for precise localization of ribosomal DNA and RNA//Eur. J. Cell. Biol.-1989.-v. 50.-p. 235-243.

52. Rosenthal A., Jones D.S.C. Genomic walking and sequencing by oligo-cassette mediated polymerase chain reaction//Nucl. Acids Res.-1990.-v. 78.-p. 1890-1893.

53. Syvanen A.-C., Bergstrom M., Tenhunen J., Soderlund H. Quantitation of polymerase chain reaction products by affinity-based hybrid collection//Nucl. Acids Res.-1988.-v. 16.-p. 1327-1338.

54. Jungell-Nortamo A., Syvanen A-C., Luoma P., Soderlund H. Nucleic acid sandwich hybridization: enhanced reaction rate with magnetic microparticles as carriers//Mol. Cell. Probes.-1988.-v. 2.-p.281-288.

55. Wolf S.F., Haines L., Fisch J., Kremsky J.N., Dogherty J.P., Jacobo K. Rapid hybridization kinetics of DNA attached to submicron latex particles// Nucl. Acids Res.-1987.-v. 15.-p. 2911-2926.

56. Лукин Ю.В., Трифонов В.Д., Туркин С.И., Зубов В.П. Полиакролеиновые латексы в качестве иммунореагентов//Труды МХТИ.-1985,-вып. 35.- с.88-92.

57. Туркин С.И., Марквичева Е.А., Лукин Ю.В., Зубов В.П.,

58. Подойницин С.Н. Магнитные носители в биотехнологии и медицине// Труды МХТИ.- 1985.- вып. 35.- с.41-51.

59. Kuhnert P., Boerlin P., Fray J. Target genes for virulence assessment of Escherichia coli isolates from water, food and the environment//FEMS Microbiol. Rev.-2000.-24.-p. 107-117.

60. Злобин В.И., Погодин B.B., Дрокин Д.А. и др., Специфическое определение флавивирусов методом молекулярной гибридизации с синтетическими дезоксиолигонуклеотидными зондами//Вопросы вирусологии.-2003.-6.- с.23-27.

61. Орлова Т.Н. Создание нерадиоактивного высокочувствительного гибридизационного метода детекции вируса клещевого энцефалита. Дисс. к. хим. наук. Новосибирск, 1996.

62. Использование молекулярных (ДНК) зондов для диагностики гриппозной инфекции генотипирования вирусов гриппа. Методические рекомендации. Ленинградский институт вакцин и сывороток, ВНИИ гриппа. 1990.

63. Cuyck-Gandre H.V, Job A, Burckhart M.F., Girond S., Crance J.M. Use of digoxigenin-labeled RNA probe to test hepatitis A virus antiviral drugs// Pathol Biol (Paris).-1995.-43.-5.-p.411-415.

64. Chantratita W, Henchal E.A, Yoosook C. Rapid detection of herpes simplex virus DNA by in situ hybridization with photobiotin-labelled double-stranded DNA probes//Mol. Cell. Probes.-1989.-3.-4.-p.363-373.

65. Сигнатулина Н.М. Разработка диагностических тест-систем для выявления инфекционных агентов с использованием нарадиоактивных ДНК-зондов.-1992. Дисс. канд. хим. наук. М.

66. Souza I.E, Nicholson D, Matthey S, Alden B, Haugen Т.Н. Detection of human cytomegalovirus in peripheral blood leukocytes by the polymerase chain reaction and a nonradioactive probe//Diagn. Microbiol. Infect. Dis.-1994.-20.-1.-p.13-19.

67. Levy R, Najioullah F, Thouvenot D, Bosshard S, Aymard M, Lina B. Evaluation and comparison of PCR and hybridization methods for rapid detection of cytomegalovirus in clinical samples//Virol. Methods.-1996.-62.-2.-p. 103-111.

68. Chen Y, Chen Y, Lii H, Lu Z. Chemiluminescence detection of epstein-barr virus DNA with an oligonucleotide probe//Clin. Chim. Acta.-2000.-298.l-2.-p. 45-53.

69. Forslund O, Hansson BG, Bjerre B. Typing of human papillomaviruses by consensus polymerase chain reaction and a non-radioactive reverse dot blot hybridization//.!. Virol. Methods.-1994.-49.-2.-p.l29-139.

70. Marrero M, Valdes O, Alvarez M, Penate G, Morales E, Roges G, Otero A, Cutie E. Detection of human papillomavirus by nonradioactive hybridization//Diagn. Microbiol. Infect. Dis.-1994.-18.-2.-p.95-100.

71. Astori G, Pipan C, Muffato G, Botta G.A. Detection of HPV-DNA in semen, urine and urethral samples by dot blot and PCR//New Microbiol.-1995.-18.-2.-p. 143-149.

72. Poonnaniti A, Bhattarakosol P. Improvement of PCR detection of HPV-DNA using enhanced chemiluminescence system and dot hybridization//Med. Assoc. Thai.-1996.-79.-1 .-p.96-103.

73. Cubie H.A, Grzybowski J, da Silva C, Duncan L, Brown T, Smith N.M. Synthetic oligonucleotide cocktails as probes for detection of human parvovirus B19//J. Virol. Methods.-1995.-53.-1 .-p.91 -102.

74. Hicks K.E., Beard S., Cohen B.J., Clewley J.P. A simple and sensitive DNA hybridization assay used for the routine diagnosis of human parvovirus B19 infection//J. Clin. Microbiol.-1995.-33.-9.-p.2473-2475.

75. Rotbart H.A. DNA probes for viral diagnosis//Adv. Exp. Med. Biol. -1992.-312.-p.201-209.

76. Маныкин A.A., Франк Г.А., Завалишина Л.Э., Андреева Ю.Ю., Лисицын Ф.В. Выявление ДНК вируса папилломы человека в шейке матки и гортани методом гибридизации in situy/Российский онкологический журнал.-1999.-№5.-с.25-28.

77. Лисицын Ф.В. Индикация ДНК вируса папилломы человека при кондиломатозе гениталий, папилломатозе гортани и мочевого пузыря, а также в опухолях этих органов. 2002. Дисс. к. б. н., М.

78. Жданов А. В. Диагностика Chlamydia trachomatis методом полимеразной цепной реакции и оценка параметров иммунного и интерферонового статуса у пациентов с различными формами урогенитального хламидиоза. 1996. Дисс. к. б. н. М.

79. Rychlik W., Spencer W. J., Rhoads R. E. Optimization of the Ш annealingtemperature for DNA amplification in vitro//Nucleic Acids Research1990.-18.-21 .-p.6409-6412.

80. Innis M.A. Gelfand D.H. Optimization of PCRs. pp. 3-12 in: PCR Protocols. Eds. Innis, Gelfand, Sninsky and White. 1990. Academic Press. New York.

81. Кабоев O.K. Горячий старт ПЦР при помощи ДНК-геликаз// Биоорганическая химия.-1999.-№ 3.- том. 25.-С.398-400.

82. Kemp D.J., Smith D.B., Foote S.J., Samaras N., Peterson M.G. Colorimetric detection of specific DNA segments amplified by polymerase chain reactions//PNAS USA.-1989.- v. 86.-7.-p.2423-2427.

83. Winship P.R. An improved method for directly sequencing PCR amplified material using dimethyl sulphoxide//Nucleic Acids Res.-1989.-v.17.-3.-p.1266.

84. Sarkar G, Kapeiner S. and Sommer S.S. Formamide can drrastically increase the specificity of PCR//Nucleic Acids Research.-1990.-18.-24.-p.7465.

85. Henke W., Herdel K., Jung K., Schnorr D., Loening S.A. Betaine improves the PCR amplification of GC-rich DNA sequences//Nucleic Acids Research.-1997.- v.25.-9.-p.3957-3958.

86. Kwok S., Kellogg D.E., McKinney N., Spasic D., Goda L., Levenson C., Sninsky J.J., Effects of primer-template mismatches on the polymerase chain reaction: human immunodeficiency virus type 1 model studies//Nucleic Acids Res.-1990.-18.-4.-p.999 1005.

87. Ehlen Т., Dubeau L. Detection of RAS point mutations by polymerase chain reaction using mutation-specific, inosine-containing oligonucleotide primers//Biophys. Res. Commun.-l 989.-160.-p.441-447.

88. Manos M. M., Ting Y., Wright D.K., Lewis A.J., Broker T.R., Wolinsky S.M. Molecular Diagnostics of Human Cancer.- 1989.-7.-p. 209-214, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NY.

89. Gelfand D.H. and White T.J. Thermostable DNA polymerases, pp. 129141 in: PCR Protocols. Eds. Innis, Gelfand, Sninsky and White. Academic Press. 1990. New York.

90. Чалов C.E., Ворошина О.П., Сергиенко O.B., Лунин В.Г. Термостабильная ДНК-полимераза из термофильного микроорганизма ARCHAEON Archaeoglobus fulgiclus VC16 и ее свойства//Биохимия.-2003.-т.68.-вып. 3.-с.366-374.

91. Глухов А.И. Использование термостабильных ДНК-полимераз для анализа возбудителей вирусных и бактериальных инфекций методом полимеразной цепной реакции. 1998. Дисс. д.б.н. М.

92. Ishino Y., Takahashi-Fujii A., Uemori Т., Imamura М., Kato I., Doi H. The amino acid sequence required for 5 3 exonuclease activity of Bacilus caldotenax DNA polymerase//Protein Eng.-1995.- 8.- 11.- p. 1171-1175.

93. Polz M.F., Cavanaugh C.M. Bias in template-to-product ratios in multitemplate PCR//Appl. Environ. Microbiol.-1998.-64.-p.3724-3730,

94. Brownie J., Shawcross S., Theaker J., Whitcombe D., Ferrie R. Newton C., Little S. The elimination of primer-dimer accumulation in PCR// Nucleic Acids Res.-1997.-25.-p.3235-3241.

95. Петухова И.И. Возможности полимеразной цепной реакции в детекции бледной трепонемы у больных сифилисом. 2002. Дисс. к.м.н. М.

96. Вишневская Е. Б. Разработка и применение молекулярно-генетических методов для идентификации микобактерий возбудителей заболеваний человека. 2000. М., Дисс. д. б. н.

97. Cole S. Т., Brosch R., Parkhill J., Gamier Т., Churcher С., D. at al. Deciphering tlic biology of Mycobuctcrium tuberculosis from the complete genome sequence//Nature.-1998.-393 (6685).-p.537-544.

98. Kalman. S., Mitchell. W., Marathe,R. at al. Comparative Genomes of C. pneumoniae and C. trachomatis, unpublished Program in Infectious Diseases, University of California, 235 Earl Warren Hall, Berkeley, CA 94720, USA.

99. Fraser C.M., Gocayne J.D., White O., Adams M.D., at al. The minimal gene complement of M. genitalium//Science.-1995.-270.-p.397-403.

100. Шаткин A.A., Мавров И.И. Урогенитальные хламидиозы. 1983. Киев. Здоровье. 200 с.

101. Брагина Е.Е., Орлова О.Е., Дмитриев Г.А. Некоторые особенности жизненного цикла хламидий. Атипичные формы существования//Инфекции, передаваемые половым путем.-1998.-№1.-с.2-9.

102. Ориел Дж. Д., Риджуэй Д.А. Хламидиоз/Пер. с англ. 1984. М. Мир.286 с.

103. Lovett М., Kuo С.-С., Holmes К., Falkow S. Plasmids of the genus Chlamydia. In book: Current chemotherapy and infectious disease. Ed. Nelson J.D., Grassi C. 1980. p. 1250-1252.

104. Comanducci M., Ricci S., Cevenini R., Ratti G. Diversity of the Chlamydia trachomatis common plasmid in biovars with different pathogenisity//Plasmid.-1990.-v. 23.-p. 149-154.

105. Palmer L., Falkow S. A common plasmid of Chlamydia trachomatis// Plasmid.-1986.- v. 16.- p. 51-61.

106. Comanducci M., Ricci S., Ratti G. The structure of plasmid of Chlamydia trachomatis belived to be required for growth within mammalian cells//Mol. Microbiol.-1988.- v. 2.- p. 531-538.

107. An Q., Olive D.M. Molecular cloning and nucleic acid sequencing of Chlamydia trachomatis 16S rRNA genes from patient samples lacking the cryptic plasmid//Mol. Cell Probes.-1994,-v. 8.- p. 429-435.

108. Зимин А.Л. Разработка метода специфической детекции и видовой дифференциации возбудителей хламидиозов на основе структурного полиморфизма гена отр 2. 2003.Дисс. к.б.н., М.

109. Можеренков В.П., Прокофьева Г. Л. Хламидиоз глаз// Медицинская помощь.-1999.-1 .-с.17-19.

110. Морисенкова Н.В. Распространенность и клинико-иммунологиче-ские особенности инфекций, вызванных Chlamydia trachomatis и Mycoplasma hominis при герпесиндуцированных формах недостаточности иммунитета. 2003. М. Дисс. к.м.н.

111. Сидорович С.Ю. Культура клеток как инструмент для определения хламидийной инфекции//Вестн. дермат. и венер.-2001.-№6.-с. 20-25.

112. Mahony J. et al. Effect of swab type and storage temperature on the isolation of Chlamydia trachomatis from clinical specimens//J. Clin. Microbiol.-1985.-v. 22.-p.865-867.

113. Методические материалы по диагностике и лечению наиболее распространенных инфекций, передаваемых половым путем (ИППП), и заболеваний кожи. Протоколы ведения больных, лекарственные средства. 2003. Под ред. А.А. Кубановой. М. ГЭОТАР-МЕД. 448 с.

114. Киселев В.И., Латыпова М.Ф., Дмитриев Г.А., Бакалова Л.А., Бурцева О.А., Абудуев Н.К. ПЦР-анализ в качестве критерия излеченностиурогенитального хламидиоза//Вестник дерматологии и венерологии.-2001.-№4.-с.4-5.

115. Thomas D.L., Quinn Т.С. Serologic testing for sexually transmitted diseases//Inf. Dis. Clin. NA.-1993.-v.7.-p. 793-824.

116. Шалепо K.B. Валидация методов лабораторной диагностики инфекций, вызываемых Chlamydia trachomatis. 2003. Дисс. к.б.н., С.-Петербург.

117. Шалепо К.В., Савичева A.M., Шипицина Е.В., Домейка М.М. Обнаружение Chlamydia trachomatis в различных клинических материалах урогенитального тракта//Журнал акушерства и женских болезней.-2002.-1.-51.-С.95-100.

118. Федина Е.Д. Комплексная лабораторная диагностика хламидиоза и ассоциированной с ним инфекций при эндоцервицитах. 2003. Дисс. к.м.н., М.

119. Бурова А.А. Сравнительная характеристика методов лабораторной диагностики разных форм хламидийной инфекции. 2002. Дисс. к.м.н., М.

120. An Q., Liu J., О, Brien W. Comparision of characteristics of Q beta replicase-amplified assay with competitive PCR assay for Chlamydia trachomatis//!. Clin. Microbiol.-1995.- v. 33.-p. 58-63.

121. Krul K.G. Closing in on Chlamydia//CAP Today.-1995.-№9.-p.l-20.

122. Латыпова М.Ф. Полимеразная цепная реакция в диагностике урогенитального хламидиоза. 2001. Дисс. к. б. н., М.

123. Stary A. European Guideline for management of chlamydial infection//Int. J. STD AIDS.-200l.-l2.-3.-p.31-33.

124. Мисюрина О.Ю. Молекулярно-генетические особенности клинических изолятов С. trachomatis, in vitro устойчивых к фторхинолонам или макролидам. 2002. Дисс. к.б.н. М.

125. Шипицына Е.В. Микробиологические аспекты устойчивости Chlamydia trachomatis к антибиотикам. 2003. С-Петербург. Дисс к.б.н.

126. Прозоровский С.В., Раковская И.В., Вульфович Ю.В. Медицинская микоплазмология. 1995. Медицина. М. 288 с.

127. Ladefoged S. A. ct al. A 135-Kilodalton Surface Antigen of Mycoplasma hominis Pg21 Contains Multiple Directly Repeated Sequences// Journal of Bacteriology.-1995 .-63 .-p.212-223.

128. Ladefoged S. A. ct al. Analysis of 0.5-Kilobase-Pair Repeats in the Mycoplasma hominis Lmp Gene System and Identification of Gene Products// Journal of Bacteriology.-1996.-178.-p.2775-2784.

129. Ladefoged S.A., Christiansen G. Mycoplasma hominis exspresses two variants of a sell-surface protain, one lipoprotain, and one not// Microbiology.-1998.-144.-p.761-770.

130. Olson L.D., Shane S.W., Kapras A.A. et al. Monoclonal antibodeies to Ф surface antigens of pathogenic Mycoplasma hominis strain/TInfect. Immun. -1991.59.-p. 1683-1689.

131. Момыналиев K.T., Говорун B.M. Механизмы генетической нестабильности молликут (микоплазм)//Генетика.-2001.-т.37.-9.-с.1173-1187.

132. Ladefoged, S. A., and G. Christiansen. Sequencing analysis reveals a unique gene organization in the gyrB region of Mycoplasma hominis// Bacteriol. -1994.-176.-p. 5835-5842.

133. Christiansen G., Mathiensen S.L., Nyvold C., Birkelund S. Analysis of a Mycoplasma hominis membrane protein, P 120//FEMS Microbiol. Lett.-1994.• 79.-p. 133-140.

134. Jensen L.T., ladefoged S., Birkelund S. Christiansen G. Selection of Mycoplasma hominis PG21 deletion mutants by cultivation in the presence of monoclonal antibody 552//Infect. Immun.-1995.- 63.-p. 3336-3347.

135. Kupsch E.M., Knepper В., Kuroki Т., Heuer I., Meyer T.F. Variable opacity (Opa) outer membrane protains account for the cell tropisms displayed by Neisseria gonorrhoeae for human leukocytes and epithelial cells//EMBO J. -1993.-12.-2.-p.641-650.

136. Boyle M.D., Hawlitzky J., Raeder R., Podbielsky A. Characterization of gene encoding two unique type Ila immunoglobulin G-binding proteins expressed by a single group A streptococcal isolate/Anfect. Immun.-1995.-62.-4.-p.1336-1347.

137. Razin S., Yogev DF., Naot Y. Molecular biology and pathogenicity of mycoplasmas//Microb. Mol. Biol. Rew.-1998.-64.-p.l094-1156.

138. Roberts M.C., Kenny G.E. Conjugal transfer of transposon Tn916 from Streptococcus faecalis to Mycoplasma hominis//J. Bacteriol.-1987.-v. 169.-p.3836-3839.

139. Александрова H.M., Бевова M.P., Говорун B.M. Трансформация Mycoplasma hominis плазмидой рАМ120 с помощью электропорации //Генетика. -2000.-36.-3.-С.309-313.

140. Jansen J.S., Blom J. Lind К. Intracellular location of Mycoplasma genitalium in cultured Vero cells as demonstrated by eletron microscopy//Int. J. Exp. Pathl.-l 994.-75.-p.91-98.

141. Mushegian A. R., Koonin E.V. A minimal gene set for cellular life derived by comparison of complete bacterial genomes//Proc.Nat.Acad. Sci. USA.-1996,-v. 93.-p.l0268-10273.

142. Himmelreich R.H., Hilbert H., Plagens H., Pirkl E., Li D.-C., Herrmann R. Complete sequence analysis of the genome of the bacterium M. pneumoniae//Nucleic Acids Res.-1996.-24.-p.4420-4449.

143. Himmelreich R.H., Plagens H., Hilbert H., Reiner В., Herrmann R. Complete analysis of the genome of the bacterium Mycoplasma pneumoniae and Mycoplasma genitalium//Nucleic Acids Res.-1997.-25.-p.701-712.

144. Раковская И.В., Горина Л.Г. Лабораторная диагностика микоплазмозов человека//Клиническая лабораторная диагностика.-2000.-8.-с. 50-53.

145. Зангирова Н.А. Персистенция патогенных микоплазм и ее молекулярно-генетические механизмы, 2001. Дисс. докт. биол. н. М.

146. Вонский М.С. Белки теплового шока микоплазм. 2001. Дисс. канд. биол. наук, С. Петербург.

147. Taylor-Robinson D. The history and role Mycoplasma genitalium in sexually transmitted diseases//Genitourin. Med.-1995.-71.-p. 1-8.

148. Белоусова E. В. Сравнительная оценка эффективности методов выявления возбудителей урогенитальных микоплазмозов//Русский журнал ВИЧ/СПИД и родственные проблемы,-1998.-т.2.-№2, с.41.

149. Taylor-Robinson D., Giroy C.B., Thomas B.J., Hay P.E. Mycoplasma genitalium in chronic non-gonococcal urethritis// Int. J. STD AIDS.-200415.-1.-p.21-25.

150. Bjornelius E., Jensen J.S., Lidbrink P. Conjunctivitis associated with Mycoplasma genitalium infection//Clin. Infect. Dis.-2004.-39.-7.-p.67-69.

151. Razin S., Yogev D.F., Naot Y. Molecular biology and pathogenicity of mycoplasmas//Microb. Mol. Biol. Rew.-1998.-64.-p. 1094-1156.

152. Kong, F., James G., Ma Z., Gordon S., Wang В., Gilbert G. L. Phylo-genetic analysis of Ureaplasma urealyticum- support for the establishment of a new species, Ureaplasma parvum//Int. J. Syst. Bacteriol.-1999.-49.-4.- p.l879-1889.

153. Kong F., Ma Z., James G., Gordon S., Gilbert G.L. Species identification and subtyping of Ureaplasma parvum and Ureaplasma urealyticum using PCR-based assays//J. Clin. Microbiol.-2000.-38.-3.-p.l 175-1179.

154. Ruifu Y., Minli Z., Guo Z., Wang X. Biovar diversity is reflected by variations of genes encoding urease of Ureaplasma urealyticum//Microbiol Immunol.-1997.-41.-8.-p.625-627.

155. Harasawa R, Kanamoto Y. Differentiation of two biovars of Ureaplasma urealyticum based on the 16S-23S rRNA intergenic spacer region// J. Clin. Microbiol1999.-37.-12.-p.413 5-413 8.

156. Jacobs E., Vonski M., Stemke G.W., Robertson J.A. Identification of Ureaplasma urealiticum//Med. Microbiol. Lett.-1994.- 3.-p. 31-35.

157. Robertson J.A., Vekris A., Bebear C., Stemke G.W. Polymerase chain reaction using 16S rRNA gene sequences distinguishes the two biovars of Ureaplasma urealyticum//J. Clin. Microbiol.-1993.-31.-4.-p.824-830.

158. Ollikainen, J., T. Heiskanen-Kosma, M. Korppi, M. L. Katila, and K. Heinonen. Clinical relevance of Ureaplasma urealyticum colonization in preterm infants// Acta Pediatr.-1998.-87.-p. 1075-1078.

159. Zheng, X., H. L. Watson, К. B. Waites, and G. H. Cassell. Serotype diversity and antigen variation among invasive isolates of Ureaplasma urealyticum from neonates//Infect. Immun.-1992.-60.-p.3472-3474.

160. Безруков В. M., Назаренко Е. Г. и др. Полимеразная цепная реакция в диагностике и контроле лечения инфекционных заболеваний: Материалы 2-й Всероссийской практ. конф. 1998. - М. - с. 31-34.

161. Екимов А. Н., Загребина О. С., Кисина В. И., Говорун В. М. Метод генотипирования клинических изолятов Ureaplasma urealiticum биовара Раг-vo//Moлeкyляpнaя генетика, микробиология и вирусология.-2001.- 1.-е. 28-32.

162. Knox С. L., Timms P. Comparison of PCR, nested PCR, and Random amplified polymorphic DNA PCR for detection and typing of Ureaplasmaurealiticum in specimens from pregnant women//J. Clin. Microbiol.-1998.- vol. 36.-10.-p. 3032-3039.

163. Kong F. Zhu X., Wang W. et al. Comparative Analysis and Serovar-Specific Identification of Multiple-Banded Antigen Genes of Ureaplasma urealyticum Biovar 1//J. Clin. Microbiol.-1999.-37.-p. 538-543.

164. Wang E.E., Matlow A.G., Olilsson A, Nelson S.C. Ureaplasma urealyticum infections in the perinatal period//Clin. Perinatol.-1997.-24.-l.- p. 91-105.

165. Tully, J. G., and S. Razin (ed.). Molecular and diagnostic procedures in mycoplasmology, vol. II. Diagnostic procedures. 1996. Academic Press, Inc., San Diego, Calif.

166. Минкина Г.Н., Манухин И.В., Франк Г.А. Предрак шейки матки. 2001. Аэрограф-медиа. М. 122 с.

167. Киселев В.И. Вирусы папилломы человека в развитии рака шейки матки. Димитрейд График Групп. 2004. М. 184 с.

168. Молочков В.А., Киселев В.И., Рудых И. В., Щербо С.Н. Папилломавирусная инфекеция. Клиника, диагностика, лечение. Пособие для врачей. 2004. М. Русский врач. 44 с.

169. Киселев Ф. JL, Мазуренко Н.Н., Волгарева Г.М., Киселева Н. П. Взаимодействие вирусных и клеточных генов в опухолях шейки матки//С)нкогенетика.-2004.-38.-2.- с. 224-232.

170. Nidi I., Greinke С., Zahm D.M., Stockfleth Е., Hoyer Н., Schneider А. Human papillomavirus distribution in cervical tissues of different morphology as determined by capture assay and PCR//Int. J. Gynecol. Pathol.- 1997.-16.- 3.-p. 197-204.

171. Подистов Ю.И., Лактионов К.П., Петровичев H.H. Современные диагностические возможности в определении предрака и рака шейки матки (обзор литературы)//Клиническая лабораторная диагностика.-2003.-3.-с.15-24.

172. Кузнецова Ю.Н. Латентная папилломавирусная инфекция уро-генитального тракта женщин, обусловленная ВПЧ 16-го и 18-го типов. Варианты течения, тактика ведения. 2003. Дисс. канд. мед. наук. Екатеринбург.

173. Orle К.A., Gales С.A., Martin D.H. et al. Simultaneous PCR Detection щ of Hamophilus ducrey, Treponema pallidum and Herpes Simplex Virus Types 1and 2 from Genital Ulcers//J. Clin. Microbiol.-1996.-V. 34.-p. 49-54.

174. Polz M.F., Cavanaugh C.M. Bias in template-to-product ratios in multitemplate PCR//Appl. Environ. Microbiol.-1998.-64.-p.3724-3730.

175. Brownie J., Shawcross S., Theaker J., Whitcombe D., Feme R., • Newton C., Little S. The elimination of primer-dimer accumulation in PCR//

176. Nucleic Acids Res.-1997.-25.-p.3235-3241.

177. Henegariu O, Heerema N.A., Dlouhy S.R., Vance G.H., Vogt P.H. Multiplex PCR: critical parameters and step-by-step protocol//BioTechniques.-1997.-23 .-p.504-511.

178. Гранитов B.M. Герпесвирусная инфекция. Москва. Медицинская книга. 2001. Н. Новгород. Издательство НГМА. 88 с.

179. Исаков В.А., Борисова В.В., Исаков Д.В. Герпес: патогенез и лабораторная диагностика. Руководство для врачей. 1999. С-Петербург. Издательство «Лань», 192 с.

180. Львов Н.Д. Вирусы герпеса человека 6,7 и 8 типов-новые патогены семейства Herpesviridae//Bonpocbi вирусологии.-1999.-3.-с. 105-109.

181. Власова М.А. Влияние бессимптомной генитальной герпетической инфекции на исход беременности и состояние здоровья новорожденного. 2000. Дисс. к.м.н. Владивосток.

182. Баринский И.Ф., Шубладзе А.К., Каспаров А.А., Гребенюк В.Н. Герпес (этиология, диагностика, лечение). 1986. М. Медицина. 272 с.

183. Roizman В. Herpesviruses. In: The Molecular Biology of Tumor Viruses. Ed. By Tooze J. 1973. p.470-501.

184. Daiminger A., Schalasta G., Betzt D., Enders G. Detection of Human Cytomegalovirus in Urine Samples by Cell Culture, Early Antigen Assay and Polymerase Chain Reaction//Infection.-1994.-22.-l.-p.24-28.

185. Collandre H., Aubin J-Th., Agut H., Bechet J-M., Montagnier L. Detection of HHV-6 by the polymerase chain reaction//.!. Virol. Methods.- 1991.-31.-p. 171-180.

186. Букринская А.Г., Жданов B.M. Молекулярные основы патогенности вирусов. 1991. М., Медицина. 255 с.

187. Delius Н., Clements J.B. A partial denaturation map of herpes simplex virus type 1 DNA: Evidence for inversions of the unique DNA regions// J. Gen. Virol.-1976.-33 .-p. 125-133.

188. Sterz H., ludwig H., Rott R. Immunologic and genetic relationship between herpes simplex virus and bovine herpes mammilitis virus// Intervirology.-1974.-2.-p. 1-13.

189. Buchman T.G., Simpson Т., Nosal С., Roisman В,. Nahmias A.J. The ф structure of herpes simplex virus DNA and its application to molecularepidemiology//Ann. NY Acad. Sci.-1980.-354.-p.270-290.

190. Little S.P., Jofie J.T., Courtney R.J., Schaffer P.A. A vision associated glycoprotein essential for infectivity of herpes simplex virus type 1// Virology.-1981.-115.-p. 149-160.

191. Марченко JI.А. Генитальный герпес. Новые клинические аспекты. Проблемы репродукции.-1996.- 4.- с. 29-33.

192. Mindel A. Genital herpes "the forggotten epidemic"// J. Internat. Herpes Management Forum.-1994.-1 (2).-p.39-48.

193. Павлюк A.C. Методы лабораторной диагностики заболеваний,вызванных вирусом простого герпеса//Заболевания передаваемые половым путем.- 1994.-3.- с. 3-7.

194. Kudashov N.I., Ozerova О.Е., Voroshilova G.P., Lvov N.D., Ivanova N.V. The role of herpes simplex virus in the pathogenesis of cerebral lesions and visceral disorders in newborn infants//Akush. Ginekol.- 1990- 1.- p. 24-28.

195. Safrin S., Shaw H., Bolan G., Cuan J., Chiang C.S. Comparison of virus culture and the polymerase chain reaction for diagnosis of mucocutaneous herpes simplex virus infection//Sex. Transm. Dis. 1997.-24.-3.- p. 176-180.

196. Kudo E., Shiota H., Kinouchi Y., Mimura Y., Itakura M. Detection of herpes simplex virus DNA in tear fluid of stromal herpetic keratitis patients by nested polymerase chain reaction//Jpn. J. Ophthalmol. -1996.-40.-3 p. 390-396.

197. Коршунов B.M., Володин H.H., Ефимов Б.А., Саркисов С.Э. и др. Микроэкология влагалища. Коррекция микрофлоры при вагинальных дисбактериозах. 1999.Учебное пособие. МЗ РФ. М.

198. Кира Е.Ф. Бактериальный вагиноз. 2001.С-Петербург. ООО «Нева-Люкс». 364 с.

199. Тэйлор-Робинсон Д., Хэй П. Патогенез бактериального вагиноза и возможные причины возникновения заболевания//Заболевания, передаваемые половым путем.-1998.-№3.- с.3-5.

200. Полищук Н.А. Клинико-лабораторная характеристика бактериального вагиноза в сочетании с другими инфекциями. 2001. Дисс., к.м.н., М.

201. Larsen В., Galask R.P. Vaginal microbial flora: composition and influences of host physiology//Anil. Iffteru. Med.- 1982.-96.- p. 926-930.

202. Giorgi A., Torriani S., Dellaglio F., Bog., Stola E., Bernuzzi L. Identification of vaginal lactobacilli from asymptomatic women// Microbiological Rev.-1987.-p.3 77-384.

203. Забирова T.M. Биологические свойства лактобацилл биотопов человека в норме и при дисбиозах, 2001. Дисс.к. м. н. Оренбург.

204. Цвелев Ю.В., Кочеровец В.И., Кира Е.Ф. Анаэробная инфекция в акушерско-гинекологической практике//Питер-пресс.-1995 .-С-Петербург. 320 с.