Получение и исследование комплексов хитозана и его производных с белками и меланинами тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.01.06, кандидат технических наук Бакулин, Александр Валерьевич

• Бакулин, Александр Валерьевич
• кандидат технических наук
• 2011

Оглавление диссертации кандидат технических наук Бакулин, Александр Валерьевич

Оглавление.

Введение.

Глава 1. Обзор литературы.

1.1 Природные полисахариды хитин и хитозан.

1.1.1 Хитин.

1.1.2 Хитозан.

• 1.1.3 Области применения хитозана.

1.2 Взаимодействие хитозана с другими биополимерами.

1.2.1 Взаимодействие хитозана с белками.

1.2.1.1 Взаимодействие хитозана с белками сыворотки молока.

1.2.1.1 а Совместное использование хитозана и белков молочной сыворотки для стабилизации эмульсий.

1.2.2 Взаимодействие хитозана с нуклеиновыми кислотами.

1.2.3 Взаимодействие хитозана с полисахаридами.

1.2.3.1. Взаимодействие хитозана с альгинатами.

1.2.3.2. Взаимодействие хитозана с каррагинаном.

1.2.3.3 Взаимодействие хитозана с пектином.

1.2.3.4 Взаимодействие хитозана с целлюлозой.

1.2.3.5 Взаимодействие хитозана с гликозаминогликанами.

1.2.4 Взаимодействие хитозана с лигнином.

1.2.5 Биоинкапсулирование и нанобиокомпозиты на основе хитозана.

1.3 Меланин.

1.3.1 Структура меланина.

1.3.2 Свойства меланина.

1.3.3 Биологическая роль меланина.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Получение и исследование комплексов хитозана и его производных с белками и меланинами»

Биополимеры - высокомолекулярные природные соединения - являются структурной основой всех живых организмов и выполняют ключевые функции в процессах их жизнедеятельности. В настоящее время исследование и применение биополимеров, в том числе полисахаридов является одним из наиболее актуальных направлений фундаментальной и прикладной науки.

Особое место среди, природных полимеров занимают хитин и его дезацетилированное производное - хитозан благодаря наличию уникальных физико-химических характеристик и биологических свойств. Полисахаридная природа хитозана и присутствие реакционноспособных функциональных групп обеспечивает возможность разнообразных- химических модификаций, позволяющих усиливать присущие им свойства или придавать новые- в соответствии с предъявляемыми требованиями. Получение комплексов хитозана1 с другими биополимерами (белками, нуклеиновыми кислотами, полисахаридами и др:) также расширяет спектр его применения.

Известно, что5 в организмах членистоногих и базидальных грибов хитин, находится в комплексе с другими биополимерами, такими как белки, гликаны, меланины. Это придает биоматериалу определенные структурно-функциональные свойства, необходимые организму для адаптации к условиям окружающей среды. Одним из малоизученных биополимеров является меланин. Характерной особенностью меланина является наличие высокостабильных парамагнитных центров, разнообразных функциональных групп, а также системы сопряженных связей в их молекулах. Эти особенности структуры определяют их фото-, радиопротекторные, антиоксидантные и другие свойства. В этой-связи представляется интересным конструирование комплексов, на- основе хитозана- и меланина, которые будут обладать свойствами, отличными от исходных биополимеров, что позволит использовать их в биотехнологии, медицине, для защиты окружающей среды и других областях.

Способность хитозана взаимодействовать с другими биополимерами с образованием комплексов может быть' использована в различных областях науки и производства, например, для фракционирования белковых смесей.

В частности, в сфере производства молочных существует проблема переработки и утилизации молочной сыворотки, в виду большого содержания белка (20 % от всех белков молока) и других ценных соединений. Сывороточные белки по содержанию незаменимых аминокислот являются наиболее ценной частью белков молока, поэтому их использование для пищевых целей имеет большое практическое значение, в том числе в качестве белкового компонента детских питательных смесей. Однако белки сыворотки молока способны вызывать аллергические реакции, что особенно опасно для детей первых лет жизни. При этом наибольшими сенсибилизирующими свойствами обладает [3-лактоглобулин. Особенностью данного белка является его высокая протеолитическая устойчивость и способность попадать в кровеносное русло в практически неизменном виде. Кроме того, при создании смесей для детского питания необходимо максимально приблизить состав продукта к составу женского молока, в котором р-лактоглобулин практически отсутствует.

Таким образом, выделение |3-лактоглобулина из молочной сыворотки представляется важной и актуальной задачей. Удаление р-лактоглобулина из состава молочной сыворотки позволит осуществлять процесс производства профилктических и лечебно-профилактических смесей для детского питания в более мягких условиях, обеспечивающих сохранность пищевой ценности компонентов молочной сыворотки.

В настоящее время с целью выделения и очистки белков используют разнообразные хроматографические методы и методы1 ультрафильтрации, что позволяет получить белковые препараты с высокой степенью чистоты. Однако такие методы, как правило, требуют больших временных затрат и наличия дорогостоящего специального оборудования. Альтернативным методом является селективное осаждение индивидуальных белков с использованием специфических реагентов, одним из которых может являться малотоксичный и способный к биоразложению хитозан.

Целью работы являлось получение и исследование свойств комплексов хитозана и его производных с меланинами, а также разработка подхода, I позволяющего избирательно удалять р-лактоглобулин из состава молочной сыворотки с помощью хитозана.

Для достижения поставленной цели были определены следующие задачи:

1. Исследовать особенности взаимодействия хитозана и его производных с меланинами;

2. Изучить физико-химические характеристики полученных хитозан-меланиновых комплексов;

3. Исследовать свойства хитозан-меланиновых комплексов;

4. Установить особенности взаимодействия хитозана и р-лактоглобулина и выбрать условия, обеспечивающие селективное извлечение Р-ЛГ из смеси белков молочной сыворотки;

5. Разработать технологическую схему процесса переработки молочной сыворотки с использованием хитозана.

Заключение диссертации по теме «Биотехнология (в том числе бионанотехнологии)», Бакулин, Александр Валерьевич

выводы

1. Исследован процесс взаимодействия хитозана с меланинами, приводящий к образованию стабильных комплексов.

2. Обнаружено увеличение концентрации парамагнитных центров на 90% в структуре хитозан-меланиновых комплексов в течение трех месяцев.

3. Показано, что хитозан-меланиновые комплексы способны связывать 233и на 98% и 908г на 70% из водных растворов.

4. Изучены антиоксидантные, генопротекторные и антигипоксические свойства водорастворимых хитозан-меланиновых комплексов.

5. Показана селективность извлечения (З-лактоглобулина на 90% из раствора сывороточных белков с помощью хитозана.

6. Разработана и апробирована технологическая схема переработки молочной сыворотки (КСБ) с использованием хитозана.

Список работ, опубликованных по теме диссертации Публикации в изданиях, рекомендованных ВАК:

1. Бакулин A.B., Гавриленко Н.В., Червяковский Е.М., Курченко В.П., Варламов В.П. Использование хитозана для выделения ß-лактоглобулина из смеси белков молочной сыворотки // Биотехнология. 2011. №1. С. 34-41.

2. Бакулин A.B., Гавриленко Н.В., Червяковский Е.М., Курченко В.П., Варламов В.П. Использование хитозана ракообразных в технологии переработки молочной сыворотки // Рыбпром. 2010. № 4. С. 64-67.

3. Бакулин A.B., Велешко И.Е., Румянцева Е.В., Левов А.Н., Бурмистрова Л.А., Хисматуллин Р.Г., Курченко В.П., Варламов В.П., Кривцов Н.И. Получение хитин-меланиновых комплексов из Apis mellifera и изучение возможности их использования в качестве сорбентов радионуклидов // Доклады РАСХН. 2011. №5. с. 48-51.

Публикации в других изданиях и материалах конференций:

1. Bakulin A., Kurchenko V., Gavrilenko N., Halavach Т.,

Cherviakovsky E. Interaction of chitosan with whey proteins // New aspects on th chemistry and application of chitin and its derivaties: Proc. 15 Workshop. Torun, Poland, 2009. P.l.

2. Бакулин А. В., Гавриленко H.B., Червяковский E. M., Курченко В.П. Эффективность связывания белков молочной сыворотки с хитозаном // Труды Белорусского государственного университета. 2009. Т. 4, Ч. 2. С. 283-289.

3. Бакулин А. В., Курченко В.П., Сушинская Н.В., Азарко И.И., Варламов В.П. Физико-химические характеристики хитозан-меланиновых комплексов // Труды Белорусского государственного университета. 2009. Т. 4, Ч. 2. С. 290-297.

4. Azarko I.I., Bakulin A.V., Kozlova E.I., Kurchenko V.P., Ajayeva L.V. Paramagnetic properties of melanin pigments and their compounds with chitozan // Proc. 6 Int. conf. NEET. Zakopane, Poland, 2009. P. 101.

5. Гавриленко H.B., Бакулин A.B., Хамашкеева M.T., Курченко В.П., Варламов В.П. Некоторые особенности получения хитозан-меланиновых комплексов // Современные перспективы в исследовании хитина и хитозана: Мат. X Международной конф. Нижний Новгород, 2010. С. 90-94.

6. Бакулин А.В;, Гавриленко Н.В:, Курченко В.П., Варламов В.П. Взаимодействие хитозана с белками сыворотки молока. // Пищевые технологии и биотехнологии: Мат. XI Международной конф. молодых ученых. Казань, 2010. С.155

7. Azarko-LI., Bakulin A.V., Kozlova-E.I., Kurchenko Y.P., Ajayeva L.Y. Melanin complexes as a radiation bioprotector // Proc. YIII Int. conf. ION. Kazimierz Dolny, Poland, 2010. P. 118.

8. Велешко И.Е., Румянцева E.B., Велешко A.H., Гальбрайх Л.С., Бакулин А.В. Роль меланина в процессах взаимодействия с радионуклеидами в растворах // Современные перспективы в исследовании хитина и хитозана: Мат. X Международной конф. Нижний Новгород, 2010: С. 86-90.

9. Алиева Л.Р., Бакулин А.В., Варламов В.П., Гавриленко Н.В:, Червяковский Е.М., Курченко В.П. Особенности взаимодействия хитозанов с белками молочной сыворотки // Инновационные технологии и оборудование в молочной промышленности: Мат. научно-практической конф. Воронеж, 2010. С. 145.

10. Bakulin А. V., Kurchenko V.P., Veleshko I.E., Rumyantseva E.V., Varlamov V.P. Construction of chitosan-melanin complexes and investigation of their properties// Proc. 10th Int. Conf. of the European Chitin Society EUCHIS'l 1. St-Peterburg, 2011. P. 19.

11. Khismatoullin R. G. , Bakulin А. V., Levov A.N. , Veleshko I.E., Rumyantseva E.V., Krivtsov N. I., Varlamov V.P. Apis mellifera as a perspective source of chitin and chitin-melanin complexe // Proc. 10л Int. Conf. of the European Chitin Society EUCHIS' 11. St-Peterburg, 2011. P. 86.

12. Бакулин A.B., Велешко И.Е., Румянцева E.B., Курченко В.П., Варламов В.П. Изучение взаимодействия хитин-меланиновых комплексов с радионуклидами в растворе // Экология-2011: Мат. IV Международной молодежной научной конф. Архангельск, 2011. С. 84.

13. Бакулин A.B., Гавриленко Н.В., Червяковский Е.М., Курченко В.П., Варламов В.П. Использование хитозана для выделения ß-лактоглобулина из смеси белков сыворотки молока // Белки и пептиды: Мат. V Российского симпозиума. Петрозаводск, 2011. С. 267.

Благодарности

Автор выражает искреннюю благодарность научному руководителю д.х.н., профессору Варламову Валерию Петровичу.

Особую благодарность автор выражает за помощь в проведении исследований и ценные советы заведующему лабораторией прикладных проблем биохимии БГУ к.б.н. Курченко Владимиру Петровичу.

Автор выражает искреннюю признательность за поддержку и оказанное внимание сотрудникам лаборатории инженерии ферментов Центра «Биоинженерия» РАН к.х.н. Ильиной A.B., к.х.н. Лопатину С.А, к.х.н. Левову А.Н., к.х.н. Курек Д.В., к.т.н. Львовой A.A., Зубаревой A.A.

Благодарности сотрудникам других институтов:

Автор благодарит сотрудников ФГУ «Курчатовский институт» к.х.н. Ирину Евгеньевну Велешко и к.х.н. Екатерину Александровну Румянцеву за помощь в проведении совместных исследований.

Автор выражает благодарность сотруднику ИМБ РАН к.б.н. В. А. Миткевичу за неоценимую помощь в проведении совместных работ.

Авотор благодарит к.б.н. Иванову Татьяну Геннадьевну за помощь и содействие в проведении совместных исследований.

Также автор выражает искреннюю признательность к.ф-м.н. И.И. Азарко, Н.В. Гавриленко и всем сотрудникам Белорусского государственного университета, способствовавших выполнению данной работы.

Список литературы диссертационного исследования кандидат технических наук Бакулин, Александр Валерьевич, 2011 год

1. Muzarelli R.A.A. Chitin. Oxford: Pergamon Press, 1977. P. 309.

2. Хитин и хитозан. Получение, свойства и применение / под ред. К.Г. Скрябина, Г.А. Вихоревой, В.П. Варламова. М.: Наука, 2002. 368 с.

3. Cauchie Н.М. Chitin production by arthropodsin in the hydrosphere // Hidrobiologia. 2002. V.470. №1/3. P.63-95.

4. Majeti N.V., Kumar R. A review of chitin and chitosan applications // Reactive & Functional Polymers. 2000. V. 46. №1. P. 1-27.

5. Tolaimate A., Desbrieres J., Rhazi M., Alagui A., Vincendon M., Votteron P. On the influence of deacetilation process on the physicochemical characteristics of chitosan from squid chitin // Polymers. 2001. Y.41. №7. P. 2463-2469.

6. Zhang M., Haga A., Seriguchi H., Hirano S. Structure of insect chitin isolated from beetle larva cuticle and silkworm (Bomyx mori) pupa exuvia // Biological Macromolecules. 2000. V.27. №1. P.99-105.

7. Boot R.G., Renkema G.H., Strijland A., Zonneveld A.J. , Aerts J.M.F.G. Purification and characterization of human chitotriosidase, a novel member of the chitinase family of proteins // J. Biol. Chem. 1995. V. 270. P. 26252-26256.

8. Zhu Z., Zheng T., Homer R.J., Kim Y.K., Chen N.Y., Cohn L., Hamid Q., Elias J.A. Acidic mammalian chitinase in asthmatic Th2 inflammation and IL-13 pathway activation // Science. 2004. V. 304. P. 1678-1682.

9. Muzzarelli R. A.A. The discovery of chitin a>570 Megayear old polimer // Chitosan in pharmacy and chemistry / Ed. R. A.A. Muzzarelli, C. Muzzarelli. Italy: Atec, 2002. P. 1-8.

10. Ильина A.B., Зуева О.Ю., Лопатин C.A., Варламов В.П. Ферментный гидролиз а-хитина // Прикладная биохимия и микробиология. 2004. №1". С.42-45.

11. No Н.К., Meyers S.P., Muzzarelly R.A.A., Peter M.M.G. Preparation of chitin and chitosan // Chitin handbook. Italy: Atec, 1997. P.475 489.

12. Ежова E.A. Модификация «холодного способа» дезацетилирования хитина // Современные перспективы в исследовании хитина и хитозана: Мат. VTI междунар. конференции. Москва, 2003. С 17-19.

13. Chang К. L.B., Tsai G., Lee J., Fu W.R. Heterogeneous N deacetylation of chitin in alkaline solution // Carbohydrate Research. V. 303. №3. P. 327 - 332.

14. Rege P.R., Blok L. H. Chitosan processing: influense of process parameters durig acidic and alkaline hydrolysis and effect of the processing sequence on the resultant chitosans properties // Carbohydrate-Research. 1999. Vol. 321. №3-4. P.235-245.

15. Tolaimate A., Desbrieres J., Rhazi M., Alagui A. Contribution to the preparation of chitins and chitosans with controlled physic-chemical properties // Polimer. 2003. V.44. №26. P.7939-7952.

16. Tsigos I., Martinou A., Varum K. Enzymatic deacetylation of chitinos substrates employing chitin deacetylases //Advan. Chitin. 1995. V.100. P.59-69.

17. Tsai G.J., Su W.H., Chen H.C. Antimicrobal activity of shrimp chitin and chitosan from different treatment and applications of fish preservation // Fisheries science. 2002. V. 68. №1. P170-177.

18. Гальбрайх JI.С. Хитин и хитозан: строение, свойства, применение // Соросовский образовательный журнал. 2001. №1. С. 51-56.

19. Хитин и хитозан: природа, получение и применение / Пер. с испанского; под ред. В.П.Варламова, С.В. Немцева, В.Е. Тихонова. М.:РХО. 2010. 292 с.

20. Немцев С.В., Ильина А.В., Шинкарев С.М., Албулов А.И., Варламов

21. B.П. Получение низкомолекулярного водорастворимого хитозана // Биотехнология. 2001. №6. С37-42.

22. Черкасова Е. И., Алексеева М. Ф., Пастухов М.О. Деструкция хитозана ферментным комплексом из Carica papaya // Биотехнология. 2005. №2. С.73-81.

23. Ильина А.В., Ткачева Ю. В., Варламов В.П. Деполимеризация высокомолекулярного хитозана ферментным препаратом Целловеридин Г20х // Прикладная биохимия и микробиология. 2002. Т.38. №2. С132-135.

24. Pettersen Н., Sannes A., Holme Н. К., Kristensen А.Н., Dornish М. Thermal depolimerization of chitosan salts // Advantage Chitin Science/ Ed M.G. Peter, A.Domard, R.A.A. Muzzarelli. Postdam: Germany, 1999. V.4. P.422-428.

25. Hai L., Deip Т., Nagasawa N., Yoshii F., Kume T. Radiation depolimerization of chitosan to prepare oligomers // Nuclear instruments and methods in physics research B. 2003. V.208. P.466-470.

26. Chen R.H., Chang J.R., Shyur J.S. Effect of ultrasonic conditions and storage in solutions on changes in molecular weight polydispersity of treated chitosan // Carbohydrate Research. 1997. V.299. №4. P.287-294.

27. Kasaai M.R., Chin S.L., Arul J. Kinetic aspects of chitosan fragmentation by femtosecond laser // Journal of photochemistry and photobiology A: Chemistry. 2003. V. 159. ЖЗ.Р.207-211.

28. Роговина C.3., Акопова T.A. Модификация полисахаридов в условиях сдвиговых деформаций // Высокомолекулярные соединения. 1994. Т.36. №4.1. C.593-600.

29. Kurita К. Chitin and Chitosan: Functional Biopolymers from Marine Crustaceans // Mar. Biotechnol. 2006. V. 8. P. 203-226.

30. Rhoades J., Roller S. Antymicrobal actions of degraded and native chitosan against spoilage organisms in laboratory media and foods // Applied and environmental microbiology. 2000. V.66. №1. P.80-86.

31. Mukhopadhyay R., Talukdar D., Chatterjee B. P., Guha A. K. Whey processing with chitosan and isolation of lactose // Process Biochemistry. 2003. V.39. P.381-385.

32. Speiciene V., Guilmineau F., Kulozik U., Leskauskaite D. The effect of chitosan on the properties of emulsions stabilized by whey proteins // Food Chemistry. 2007. V.102. P. 1048-1054.

33. Ильин Л.А., Андреева И.Е., Глушков B.A. Изучение зависимости радиационной активности хитозана от его молекулярной массы // Радиационная биология. Радиоэкология. 2004. Т. 44. №2. С. 176-178.

34. Muzzarelli R. A.A. Chitins and chitosans for the repair of wounded skin, nerve, cartilage and bone // Carbohydrate Polymers. 2009. V.76. P. 167-182.

35. Варламов В.П. Зарождение и развитие российской хитинологии // Рыбпром. 2010. №2. С.4-8.

36. Kato A. Industrial application of Maillard-Type conjugates // Food Science Technology Resech. 2002. V.8. P. 193-199.

37. Travel M.N., Domard A. Relation between the physic-chemical characteristics of collagen-and its interaction with chitosan. Part I // Biomaterials. 1993. V.14. №12. P.930-938.

38. Travel M.N., Domard A. Collagen and its interaction with chitosan. II. Influence of the physicochemical characteristics of collagen // Biomaterials. 1995. V.16. №11. P.865-871.

39. Yakovlev G.I., Mitkevich V.A., Struminskaya N.K., Varlamov V.P., Makarov A.A. Low molecular wheat chitosan is an efficient inhibitor of ribonucleases // Biochemical and biophysical research communications. 2007. V.357. P.584-588.

40. Chen L., Tianqing L. Interaction behaviors between chitosan and hemoglobin // International Journal of Biological Macromolecules. 2008. V.42. P.441-446.

41. Богатова O.B., Догарева Н.Г. Химия и физика молока: учебное пособие. Оренбург: ГОУ ОГУ, 2004. 137 с.

42. Madureira A. R., Pereira С. I., Gomes А.М.Р., Pintado М. Е., Malcata F.X. Bovine whey proteins Overview on their main biological properties // Food Res. Int. 2007. V.40. P. 1197-1211.

43. Ha E., Zemel M. B. Functional properties of whey, whey components, and essential amino acids: Mechanisms underlying health benefits for active people (review) // J. Nut. Biochem. 2003. Vol. 14. P. 251-258.

44. Mounsey J.S., O'Kennedy В. Т., Fenelon M. A., Brodkorb A. The effect of heating on P-lactoglobulin-chitosan mixtures as influenced by pH and ionic strength // Food Hydrocolloids. 2008. V.22. P.65-73.

45. Souza H. K.S., Bai G., Alves M. P.G., Bastos M. Whey protein isolate-chitosan interactions: A calorimetric and spectroscopy study // Thermochimica Acta. 2009. V.495. P.108-114.

46. Claesson P. M., Ninham B. W. pH-Dependent interactions between adsorbed chitosan layers // Langmuir. 1992. V. 8. P. 1406-1412.

47. Sawyer L., Kontopidis G. The core lipocalin, bovine P-lactoglobulin // Biochim. Biophys. Acta. 2000. V. 1482. P. 136-148.

48. Permyakova E. A., Berliner L. J. a-Laetalbumin: structure and function // FEBS Lett. 2000. V. 473. P. 269-274.

49. Wallevik K. Isoelectric focusing of bovine serum albumin: Influence of binding of carrier ampholytes // Biochimica et Biophysica Acta (BBA) Protein Structure. 1973. V. 322.1.1. P.75-87.

50. Farrell H. M., Bede M. J., Enyeart J. A. Binding of p-nitrophenyl phosphate and other aromatic compounds by b-LG // J. Dairy Sci. 1987. V.70. P.252-258.

51. Selo I. Clément G., Bernard H., Chatel J., Créminon C., Peltre G., Wal J. Allergy to bovine beta-lactoglobulin: specificity of human IgE to tryptic peptides // Clin. Exp. Allergy. 1999. V.29. N.8. P.1055-1063.

52. Laursen I., Briand P., Lykkesfeldt A. E. Serum albumin as a modulator of the human breast cancer cell line MCF-7 // Anticanc. Res. 1990. V.10. P.343-352.

53. Tong L. M., Sasaki S., Mc Clements D.J., Decker E.A. Mechanisms of the antioxidant activity of a high» molecular weight fraction of whey // J. Agric. Food Chem. 2000. V. 48. P. 1473-1478.

54. Lee A.C., Hong Y.H. Coacervate formation of a-lactalbumin-chitosan and b-lactoglobulin-chitosan complexes // Food Research International. 2009. V.42. P.733-738.

55. Aoki T., Iskandar S., Yoshida T., Takahashi K., Hattori M. Reduced immunogenicity of P-lactoglobulin by conjugating with chitosan // Biosci. Biotechnol. Biochem. 2006. V.70(10). P.2349-2356.

56. Guzey D., Mc Clements D. J. Characterization of b-Lactoglobulin-chitosan interactions in aqueous solutions: A calorimetry, light scattering, electrophoretic mobility and solubility study // Food Hydrocolloids. 2006. V.20. P. 124-131.

57. Левицкий Д.И. Применение метода дифференциальной сканирующей калориметрии для структурно-функциональных исследований мышечных белков // Успехи биологической химии. 2004. Т.44. С.133-170.

58. Montilla A., Casal Е., Moreno F. J., Belloque J., Olano A., Corso N. Isolation of P-lactoglobulin from complex with chitosan // International Dairy Journal. 2007. V.17P. 459-464.

59. Miralles В., Marti'nez-Rodri'guez A., Santiago A., Lagemaat J., I-Ieras A. The occurrence of a Maillard-type protein-polysaccharide reaction between b-lactoglobulin and chitosan // Food Chemistry. 2007. Y.100. P.1071-1075.

60. Dalgeish D. G. Conformations and structures of milk proteins adsorbed to oil-water interfaces // Food Research International. 1996. V.29. P.541-547.

61. Dickinson E. Emulsion stabilization by polysaccharide and polysaccharide-protein complexes / In Food Polysaccharides and Their Applications Ed. A. M. Stephen. New York: Marcel Dekker, 1995. P.501-515.

62. Dickinson E. Hydrocolloids at interfaces and the influence on the properties of dispersed systems // Food Hydrocolloids. 2003. V.17. P.25-39.

63. Laplante S., Turgeon S. L., Paquin P. Emulsion-stabilizing properties of chitosan in the presence of whey protein isolate: Effect of the mixture ratio, ionic strength and pH // Carbohydrate Polymers. 2006. V.65. P.479-487.

64. Laplante S., Turgeon S. L., Paquin P. Effect of pH, ionic strength, and composition on emulsion stabilising properties of chitosan in a model system containing whey protein isolate // Food Hydrocolloids. 2005. V.19. P.721-729.

65. Генная терапия медицине будущего / Под ред. А.В. Зеленина. М.: ВИНИТИ, 2000. 135с.

66. Morille M., Passirani С., Vonarbourg A., Clavreul A., Benoit J.P. Progress in developing cationic vectors for non-viral systemic gene therapy against cancer // Biomaterials. 2008. V.29. P.3477-96.

67. Kim Т.Н., Jiang H.L., Jere D., Park I.K., Cho M.H., Nah J.W., et al Chemical modification of chitosan as a gene carrier in vitro and in vivo // Prog. Polym. Sci. 2007. V.32. P.726-53.

68. Lee M.K., Chun S.K., Choi W.J., Kim J.K., Choi S.H., Kim A., et al. The use of chitosan as a condensing agent to enhance emulsion-mediated gene transfer // Biomaterials. 2005. V.26. P.2147-56.

69. Masotti A., Bordi F., Ortaggi G., Marino F., Palocci C. A novel method to obtain chitosan/DNA nanospheres and a study of their release properties // Nanotechnology. 2008. V.19. 55302. P. 1-6.

70. Mao H. Q., Roy K., Troung-Le V. L., Janes K. A., Lin K. Y., Wang Y., et al. Chitosan-DNA nanoparticles as gene carriers: Synthesis, characterization and transfection efficacy // Journal of Controlled Release. 2001. V.70. P.399-421.

71. Ishii Т., Okahata Y., Sato T. Mechanism of cell transfection with plasmid/chitosan complexes // Biochimica et Biophysica Acta. 2001. V.15. P.51-64.

72. Саянов В.И., Ильина A.B., Варламов В.П., Евдокимов Ю.М. Влияние интеркаляторов на свойства жидкокристаллических дисперсий комплекса НК-' хитозан // Молекулярная биология. 2002. Т.36. №4. С.699-705.

73. Евдокимов М.Ю., Саянов В.И., Скуридин С.Г., Дембо А.Т. Некоторые рентгенографические параметры жидкокристаллических дисперсий комплексов НК-хитозан // Молекулярная биология. 2002. Т.36. №4. С.706-714.

74. Evdokimov Y., Salyanov V.I. Liquid-crystalline dispersions of complex formed of chitosan with double-stranded nucleic acids // Liq. Crystals. 2003. V.30. P.1057-1074.

75. Евдокимов Ю.М., Салянов В.И., Скурдин С.Г. Наноструктуры и наноконструкции на основе ДНК / Под ред. Ю.М. Евдокимова. М.: САЙНС-ПРЕСС, 2010. 256 с.

76. Hayatsu H., Kubo T., Tanaka Y., et al. Polinueleotide-chitosan complex, an insoluble but reactive from of polinucleotides // Chem. Pharm. Bull. 1997. V.45. P.1363-1368.

77. Кочетков H.K., Бочков А.Ф., Дмитриев В.A. и др. Химия углеводов. М.: Химия, 1967. 671 с.

78. Saether H.V., Holme H. К., Maurstad G., Smidsrod О., Stokke В. T. Polyelectrolyte complex formation using alginate and chitosan // Carbohydrate Polymers. 2008. V.74. P.813-821.

79. Li X., Xie H., Lin J., Xie W., Ma X. Characterization and biodégradation of chitosan-alginate polyelectrolyte Complexes // Polymer Degradation and Stability. 2009. V.94. P. 1-6.

80. Huguet M.L., Neufeld R.J., Dellacherie E. Calcium-alginate beads coated with polycationic polymers: comparison of chitosan and DEAE-dextran // Process Biochem. 1996. V.31. P.347-353.

81. George M., Abraham T. E. Polyionic hydrocolloids for the intestinal delivery of protein drugs:Alginate and chitosan — a review // Journal of Controlled Release. 2006. V.114. P.1—14.

82. Yan X. Khor E., Lim L.Y. Chitosan -alginate films prepared with chitosans of different molecular weights // Journal Biomedicine Material Research (Appl. Biomater.). 2001. V.58. №4. P.358-365.

83. Давыдова В.Н., Володько А.В., Ермак И.М. Изучение процесса формирования комплексов хитозан-каррагенан в разбавленных растворах // Современные перспективы в исследовании хитина и хитозана: Мат. X Междунар. Конф. Н.Новгород, 2010. С.95-97.

84. Hugerth A., Caramletham N., Sundelof L.O. The effect of charge density and conformation on the polyelectrolyte complex formation between carrageenan and chitosan // Carbohydrate Polymer. 1997. V.34. №3. P. 149-156.

85. Mitsumata Т., Suemitsu Y, Fujii K., Fujii T.,Taniguchi Т., Koyam K. pH-Response of chitosan, k-karragenan, carboxymethil cellulose sodium salt complex hydrogels // Polimer. 2003. V.44. №23. P.7103-7111.

86. Шумилова E.B., Щипунов Ю.А. Гели хитозана с каррагинанами // Коллойдный журнал. 2002. Т.64. №3. С.413-420.

87. Братская С.Ю., Маринин Д.В., Simon F. и др. Антиадгезивные биомедицинские покрытия, содержащие хитозан и его производные // Современные перспективы в исследовании хитина и хитозана: Мат. X Межд. Конф. Н.Новгород, 2010. С. 169-173.

88. Офицеров E.H., Лисин C.A., Завахина Ю.А. Пектин-хитозановые комплексы и некоторые их свойства// Современные перспективы в исследовании хитина и хитозана: Мат. VII. Межд. Конф. Санкт-Петербург-Репино, 2003. С.428-430.

89. Рашидова С.Ш., Милушева Р.Ю., Семенова Л.Н. и др. К изучению взаимодействия двух природных полисахаридов // Современные перспективыв исследовании хитина и хитозана: Мат. VII. Межд. Конф. Санкт-Петербург-Репино, 2003. С.347-350.

90. Hiorth М., Kjoniksen A.L., Knudsen К. D., Sande S. A., Nystrom В. Structural and dynamical properties of aqueous mixtures of pectin and chitosan // European Polymer Journal. 2005. V.41.1.8. P.1718-1728.

91. Chen P.H., Kuo T. Y., Kuo J. Y., Tseng Y. P., Wang D. M., Lai J. Y., Hsieh H. J. Novel chitosan-pectin composite membranes with enhanced strength, hydrophilicity and controllable disintegration // Carbohydrate Polymers. 2010. V.82. P. 1236-1242.

92. Yao K.D., Liu J., Cheg G.X., Lu X.D., Tu H.L., Silvia J.A.L. Swelling behavior of pectin/chitosan complex films // Journal of Applay Polimer Science. 1996. V.60.№2. P.279-283.

93. Fernandez-Hervas M.J., Fell J.T. Pectin/chitosan mixtures as coatings for colon-specific drug delivery: an in vitro evaluation // Int. J. Pharm. 1998. V.169. P.115-119.

94. Рашидова С.Ш., Милушева Р.Ю., Воропаева H.JI., Никонович Г.В и др. Формирование наночастиц в системах на основе хитозана // Современные перспективы в исследовании хитина и хитозана: Мат. XIII Межд. Конф. 2006. С.124-126.

95. Rosea С., Рора М. I., Lisa G., Chitanu G. С. Interaction of chitosan with natural or synthetic anionic polyelectrolytes.l. The chitosan-carboxymethylcellulose complex// Carbohydrate Polymers. 2005. V.62. P.35-41.

96. Arguelles-Monal W., Garciga M., Peniche-Covas C. Study of the stechiometric polyelectrolyte complex between chitosan and carboxymethil cellulose // Polimer Bull. 1990. V.23. №3. P.307-313.

97. Chitin, Chitosan, Oligosacharides and their Derivatives: Biological Activities and Applications / Ed. S.K. Kim. London, N.Y.: CRC Press. 633 p.

98. Ильина A.B., Варламов В.П. Полиэлектролитные комплексы на основе хитозана (обзор) //Прикладная биохимия и микробиология. 2005. Т.41. №1. С. 9-16.

99. Denuziere A., Ferrier D., Domard A. Interaction between chitosan and glycosaminoglycans (chondroitin sulfate and hyaluronic acid): physicochemical and biological studies // Ann Pharm Fr. 2000. V.58. №1. P.47-53.

100. Shinoda K., Nakajiama A. Complex formation of the hyaluronic acid' or chondroitin sulfate with glycol chitosan // Bull: Chem. Res. 1975. V.53. P.400-408.

101. Shinoda K., Nakajiama A. Complex formation of the heparin or sulfate cellulose with glycol chitosan // Bull. Chem. Res. 1975. V.53. P.392-399.

102. Kweon DK, Song SB, Park YY; Preparation of water-soluble chitosan/heparin complex and its application as wound healing accelerator // Biomaterials. 2003. V. 24(9). P. 1595-601.

103. Способ обнаружения комплексов между гепаринами и поликатионами: пат. 2370271 Рос. Федерация. №2006141290/15; заявка 22.11.2006; опубл. 20.10.2009.

104. Lin: W.C., Liu Т.С., Yang М.С. Hemocompatibility of polyacrylonitrile dialysis membrane immobilized with chitosan and heparin conjugate // Biomaterials.2004. V.25; №10. P.1947-1957.

105. Агафонов В.Е., Ильинцева Н.Е., Гервазиева В.Б. Особенности секреторного иммунитета желудочно-кишечного тракта // Российский аллергологический журнал. 2011. №1. С.14-24.

106. Qaqish В., Amiji М.М. Synthesis of a fluorescent chitosan derivative and its application for the study of chitosan-mucin interactions // Carbohydrate Polymers. 1999. V.38.1.2. P.99-107.

107. Лигнины (структура, свойства и реакции) / Под ред. К.В. Сарканена, К.Х. Людвига. М.: Лесная промышленность, 1975. 629 с.

108. Закис Г.Ф. Функциональный анализ лигнинов и их производных. Рига: Знание, 1987. 228 с.

109. Паламарчук И.А., Макаревич Н.А., Бровко О.С., Бойцова Т.А., Афанасьев Н.И. Кооперативные взаимодействия в системе лигносульфонат-хитозан//растительного сырья. 2008. №4. С.29-34.

110. Макаревич Н.А., Паламарчук И.А. Полиэлектролитные комплексы на основе лигносульфанатов и хитозана в системе очистки сточных вод целлюлозно-бумажных предприятий //Вода:химия и экология. 2009. №7. С.23-29.

111. Макаревич Н.А., Бойцова Т.А. Динамика изменения сорбционных свойств лигносульфонатов, хитозана, полиэтиленполиамина, и поликомплексов на их основе в зависимости от степени их набухания в парах воды // Вода: химия и экология. 2010. №6. С.22-28.

112. Ganjidoust Н., Tatsumi К., Yamagishi Т., Gholian R.N. Effect of synthetic and natural coagulant on lignin removal from pulp and paper wastewater // Water Science and Technology. 1997. V.35.1. 2-3. P.291-296.

113. Марквичева E.A. Биомедицинское применение хитозана для биоинкапсулирования белков, пептидов и животных клеток // Современные перспективы в исследовании хитина и хитозана: Мат. VII Межд. Конф. Санкт-Петербург-Репино, 2003. С. 405-408.

114. Jayakumar R., Menon D., Manzoor K., Nair S.V., Tamura H. Biomedical applications of chitin and chitosan based nanomaterials-—A short review // Carbohydrate Polymers. 2010. V.82. P.227-232.

115. Hoagland P.D., Parris N. Chitosan/Pectin Laminated Films // Journal Agriculture Food Chemistry. 1996. V.44. №7. P.1915-1919.

116. Нудьга JI.A., Петрова B.A., Бочек A.M. и др. Пленочные матрицы для культивирования клеток кожи человека на основе природных полисахаридов // Современные перспективы в исследовании хитина и хитозана: Мат. XII Межд. конф. Казань, 2006. С. 230-233.

117. Ильина А.В., Габайдуллина А.А., Мелентьев А.И., Варламов В.П. Получение микроастиц на основе хитозана и исследование их взаимодействия с интерфероном // Прикладная биохимия и микробиология. 2008. Т.44. №2. С.1-5.

118. Ильина А.В. Формирование наночастиц один из способов модификации хитозана//Рыбпром. 2010. №2. С.70-75.

119. Agnihotri S. A., Mallikarjuna N. N., Aminabhavi T. M. Recent advances on chitosan-based micro- and nanoparticles in drug delivery // Journal of Controlled Release. 2004. V.100. P.5 -28.

120. Балабушевич Н.Г., Печенкин M.A., Вихорева Г.А., Ларионова Н.И. Хитозан-содержащие наноструктурированные микрочастицы с инсулином // Современные перспективы в исследовании хитина и хитозана: Мат. X Межд. Конф. Н.Новгород, 2010. С. 162-165.

121. Britgton G. The biochemistry of natural pigments. Cambridge: Cambridge Univ. Press, 1983. 366p.

122. Riley P.A. Melanin.-Molecules in focus // J. Biochem.Cell Biol. 1997. V.29. №11. P.1235-1239.

123. Лопатина B.A., Донцов A.E., Островский M.A. Генерация супероксида при взаимодействии меланина с кислородом // Биохимия. 1984. Т.49. №10. С.1712-1718.

124. Ligonzo Т., Ambrico М., Augelli V. et. al Electrical and optical properties of natural and synthetic melanin biopolymer // Journal of Non-crystalline Solids. 2009. V.355. P.1221-1226.

125. Барабой В.А. Структура, биосинтез меланинов, их биологическая роль и перспективы применения // Успехи современной биологии. 2001. Т. 121. №1. С.36-46.

126. Аверьянов А.А. Гужова Н.В., Мочалов В.В. Влияние меланина на цитотоксичность кислородных радикалов //Биохимия. 1987. Т.52. №9. С. 15391546.

127. Fogarty R. V., Tobin J.M. Fungal melanins and their interactions with metals //Enzyme and Microbial Technology. 1996. V.19. P.311-317.

128. Howell R.C., Schweitzer A.D., Casadevall A., Dadachova E. Chemosorption of radiometals of interest to nuclear medicine by synthetic melanins // Nuclear Medicine and Biology. 2008. V.35. P.353-357.

129. Carsberg C.J., Warenius H.M., Friedmann P.S. Ultraviolet radiation-induced melanogenesismin human melanocytes. Effects ofmodulating protein kinase С // J. Cell. Sci. 1994. V.107. №9. P.2591-2597.

130. Gilchrest B.A., Park H.Y., Eller M.S., Yaar M. Mechanisms of ultraviolet light-induced pigmentation //Photochem. Photobiol. 1996. V.63. №1. P.1-10.

131. Борщевская М.И., Васильева C.M. Развитие представлений о биохимии и фармокологии меланиновых пигментов (обзор) // Вопросы мед. химии. 1999. Т.45. №1. С.13-23.

132. Johanson M.W., Soderhall К. Relevance of drug-melanin interactions to ocular pharmacology and toxicology // Parasitology Today. 1989. Vol.5. P.171.

133. Щерба B.B., Бабицкая В.Г., Курченко В.П. и др. Антиоксидантные свойства меланиновых пигментов грибного происхождения // Прикладная биохимия и микробиология. 2000. Т.36. №5. С. 596-597.

134. Хрулева И.М., Берлин А.А. Противоопухолевая активность синтетических, биосинтетических и природных меланинов // Изв. АНСССР. Серия биол. науки. 1973. №3. С.438-442.

135. Жеребин Ю.А., Сава М.К., Колесник А.А., Богодский А.В. Исследование окислительных свойств эномеланина // Доклады АН СССР. 1982. Т.263. №1. С.112-115.

136. Dadachova Е., Brayan R., Huang X. et. al Ionizing radiation changes the electronic properties of melanin and enhances the growth of melanized fungi // Plos one. 2007.1.5. P.l-13.

137. Твердохлебова И.И. Конформация макромолекул (вискозиметрический метод оценки). М.: Химия, 1981. 284 с.

138. Бабицкая В.Г., Щерба В.В., Иконникова Н.В. Меланиновый комплекс гриба Inonotus obliquus // Прикладная биохимия и микробиология. 2000. Т. 36. №4. С. 439-444.

139. Керрингтон А., Маклечлан Э. Магнитный резонанс и его применение в химии. М.: Мир, 1970. 448 с.

140. Павлоцкая Ф.И. Основные принципы радиохимического анализа объектов природной среды и методы определения радионуклидов стронция и трансурановых элементов. Обзор // Жур. аналитической химии. 1997. Т.52. № 2. С. 126-143.

141. Щекатихина А.С., Курченко В.П. Генопротекторные свойства флаволигнанов из семян расторопши пятнистой (Si I bum marianum I) // Труды БГУ. 2009. Т.4. 4.1. С.141-148.

142. Лукьянова Л. Д., Романова В.Е., Чернобаева Г.Н. и др. Особенности антигипоксического действия мексидола, связанные с его специфическим влиянием на энергетический обмен // Химико-фармацевтический журнал. 1990. №8. С. 9-11.

143. Laemmli U.K. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4 / U.K. Laemmli // Nature. 1970. Vol.227. №7. P.680-685.

144. ТЕХНОЛОГИЧЕСКАЯ ИНСТРУКЦИЯ на производство белкового продукта со сниженными аллергенными свойствами из смеси белков молочной сыворотки с помощью хитозана1. Разработано

145. Центр «Бионнженерня» РАН м.н.с. Лаборатории инже^е^ииг-ферментов1. Бакулин A.B.1. ТУ1. Согласовано

146. Центр «Биоипженерия» РАН Заведующий лабораторией ^ии фермедош,/) проф. Д.Х.Н. Варламов В.П.

147. ЗАО «Био1 рогресс» Главигд^т^х н о логк.б.н. Фролова М.А.на фасовку

148. Обозначение 9.19 Нутч-фильтр1.5,6 Емкость 10,18 Резербуар премныи

149. Насос центробежный 11 Насос вакуумный

150. IТасщшщионно-охткпепьнт усптВка % Вакуум-выпарная установка

151. Сепаратор 15 Сушилка распылительная

152. Злектродиализная установка 16 Циклоншш Смеситель 20 Центрифуга

153. Аппаратурная схема переработкимолочной сы&оротки с использованием хитозона1. Лист Листай 1